CN104292340A - 长效多肽及其生产和施用方法 - Google Patents

长效多肽及其生产和施用方法 Download PDF

Info

Publication number
CN104292340A
CN104292340A CN201410213485.2A CN201410213485A CN104292340A CN 104292340 A CN104292340 A CN 104292340A CN 201410213485 A CN201410213485 A CN 201410213485A CN 104292340 A CN104292340 A CN 104292340A
Authority
CN
China
Prior art keywords
peptide
ctp
terminal
another embodiment
additionally
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201410213485.2A
Other languages
English (en)
Inventor
F·法里斯
U·E·菲马
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Opko Biologics Ltd
Original Assignee
Opko Biologics Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Opko Biologics Ltd filed Critical Opko Biologics Ltd
Publication of CN104292340A publication Critical patent/CN104292340A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/475—Growth factors; Growth regulators
    • C07K14/505—Erythropoietin [EPO]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K19/00—Hybrid peptides, i.e. peptides covalently bound to nucleic acids, or non-covalently bound protein-protein complexes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
    • A61K38/1816—Erythropoietin [EPO]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/20—Interleukins [IL]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/22—Hormones
    • A61K38/24—Follicle-stimulating hormone [FSH]; Chorionic gonadotropins, e.g. HCG; Luteinising hormone [LH]; Thyroid-stimulating hormone [TSH]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/22—Hormones
    • A61K38/27—Growth hormone [GH] (Somatotropin)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/06—Drugs for disorders of the endocrine system of the anterior pituitary hormones, e.g. TSH, ACTH, FSH, LH, PRL, GH
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/06—Antianaemics
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C07K14/555—Interferons [IFN]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/575—Hormones
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/575—Hormones
    • C07K14/59—Follicle-stimulating hormone [FSH]; Chorionic gonadotropins, e.g. HCG; Luteinising hormone [LH]; Thyroid-stimulating hormone [TSH]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/575—Hormones
    • C07K14/61—Growth hormones [GH] (Somatotropin)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/31—Fusion polypeptide fusions, other than Fc, for prolonged plasma life, e.g. albumin

Abstract

本发明提供包括至少两个与感兴趣的肽连接的绒毛膜促性腺激素的羧基末端肽(CPT)的多肽以及编码所述多肽的多核苷酸。也提供包括本发明的多肽和多核苷酸的药物组合物及其使用方法。

Description

长效多肽及其生产和施用方法
本发明是申请日为2007年2月5日，申请号为200780012026.6，标题为“长效多肽及其生产和施用方法”的专利申请的分案申请。
技术领域
本发明提供包括至少两个与感兴趣的肽连接的绒毛膜促性腺激素的羧基末端肽(CPT)的多肽以及编码所述多肽的多核苷酸。也提供包括本发明的多肽和多核苷酸的药物组合物及其使用方法。
背景技术
多肽在血液、肝脏或肾脏中都容易被变性或酶降解。因此，多肽一般都具有短的循环半衰期，通常是数个小时。由于它们的低稳定性，通常需要按持续的频率来转运肽药物，以便保持活性肽的有效的血浆浓度。此外，因为通常需要通过输注来施用肽药物，因此频繁的注射肽药物会给对象带来相当多的不适。因此，需要延长药物性多肽的半衰期同时保持其高药物疗效的技术。这种期待中的肽药物也应当满足增强血清稳定性、高活性以及当被注射到对象体内时诱导不必要的免疫应答的低可能性的要求。
不利的药物动力学例如短半衰期可以妨碍许多其他有希望的药物候选物的药物开发。血清半衰期是分子的一种经验特征，必须要通过实验地测定出每种新的潜在药物的半衰期。例如，对于低分子量多肽药物而言，生理清除机制例如肾脏滤过可以使得保持药物的治疗水平变为难以实现，主要是因为所需给药方案的价格或频率。相反地，长的血清半衰期也是不利的，因为这样的药物或其代谢物具有毒性副作用。
发明内容
在一个实施方式中，本发明提供了包括至少两个与感兴趣的多肽序列相连接的绒毛膜促性腺激素羧基末端肽（CTP）氨基酸序列的多肽。
在另一个实施方式中，本发明提供了包括与感兴趣的多肽序列的氨基末端连接的第一个绒毛膜促性腺激素CTP氨基酸（AA）序列以及与感兴趣的多肽序列的羧基末端连接的第二个CTP氨基酸序列的多肽。
在另一个实施方式中，本发明提供了包括两个与感兴趣的多肽序列的羧基末端连接的绒毛膜促性腺激素CTP序列的多肽。
在另一个实施方式中，本发明提供了包括与感兴趣的多肽序列的氨基末端连接的第一个绒毛膜促性腺激素CTP AA序列以及与感兴趣的多肽序列的羧基末端连接的第二个和第三个CTP AA序列的多肽。
在另一个实施方式中，本发明提供了包括至少三个与感兴趣的多肽序列相连接的绒毛膜促性腺激素CTP AA序列的多肽。
在另一个实施方式中，本发明提供了包括编码多肽的序列的多核苷酸，所述多肽包括至少两个与感兴趣的多肽序列相连接的绒毛膜促性腺激素CTP AA序列。
在另一个实施方式中，本发明提供了包括编码与感兴趣的多肽序列的氨基末端连接的第一个绒毛膜促性腺激素CTP AA序列以及与感兴趣的多肽序列的羧基末端连接的第二个CTP AA序列的核苷酸序列的多核苷酸。
在另一个实施方式中，本发明提供了包括编码两个与感兴趣的多肽序列的羧基末端连接的绒毛膜促性腺激素CTP AA序列的序列的多核苷酸。
在另一个实施方式中，本发明提供了包括编码与感兴趣的多肽序列的氨基末端连接的第一个绒毛膜促性腺激素CTP AA序列以及与感兴趣的多肽序列的羧基末端连接的第二个和第三个CTP AA序列的序列的多核苷酸。
在另一个实施方式中，本发明提供了包括编码至少三个与感兴趣的多肽序列相连接的绒毛膜促性腺激素CTP AA序列的序列的多核苷酸。
在另一个实施方式中，本发明提供了治疗对象的生长、体重相关性病变或代谢性病变的方法，所述方法包括给对象施用治疗有效量的CTP-hGH的步骤，据此治疗患有生长或体重相关性病变的对象。hGH一般是用于治疗生长疾病，特别是生长激素缺乏相关性疾病。在我们的实施例中，我们证实了垂体切除小鼠（不再分泌生长激素）在注射CTP-hGH之后重新得到了生长。
在另一个实施方式中，本发明提供了提高感兴趣的多肽序列的生物半衰期的方法，包括将至少两个绒毛膜促性腺激素CTP AA序列连接于感兴趣的多肽序列的步骤。
在另一个实施方式中，本发明提供了给所需治疗的对象施用感兴趣的多肽序列的方法，包括将至少两个绒毛膜促性腺激素CTP AA序列连接于感兴趣的肽系列的步骤。
在另一个实施方式中，本发明提供了包括至少两个与EPO肽相连接的绒毛膜促性腺激素CTP AA序列的多肽。
在另一个实施方式中，本发明提供了包括与EPO肽的氨基末端连接的第一个绒毛膜促性腺激素CTP AA序列以及与EPO肽的羧基末端连接的第二个CTP AA序列的多肽。
在另一个实施方式中，本发明提供了包括两个与EPO肽的羧基末端相连接的绒毛膜促性腺激素CTP AA序列的多肽。
在另一个实施方式中，本发明提供了包括与EPO肽的氨基末端连接的第一个绒毛膜促性腺激素CTP AA序列以及与EPO肽的羧基末端连接的第二个和第三个CTP AA序列的多肽。
在另一个实施方式中，本发明提供了包括至少三个与EPO肽相连接的绒毛膜促性腺激素CTP AA序列的多肽。
在另一个实施方式中，本发明提供了包括编码至少两个与EPO肽相连接的绒毛膜促性腺激素CTP AA序列的核苷酸序列的多核苷酸。
在另一个实施方式中，本发明提供了包括编码与EPO肽的氨基末端连接的第一个绒毛膜促性腺激素CTP AA序列以及与EPO肽的羧基末端连接的第二个CTP AA序列的核苷酸序列的多核苷酸。
在另一个实施方式中，本发明提供了包括编码两个与感兴趣的多肽序列的羧基末端连接的绒毛膜促性腺激素CTP AA序列的核苷酸序列的多核苷酸。
在另一个实施方式中，本发明提供了包括编码与感兴趣的多肽序列的氨基末端连接的第一个绒毛膜促性腺激素CTP AA序列以及与感兴趣的多肽序列的羧基末端连接的第二个和第三个CTP AA序列的核苷酸序列的多核苷酸。
在另一个实施方式中，本发明提供了包括编码至少三个与感兴趣的多肽序列相连接的绒毛膜促性腺激素CTP AA序列多肽的核苷酸序列的多核苷酸。
在另一个实施方式中，本发明提供了治疗或降低对象的贫血发生率的方法，包括给对象施用治疗有效量的EPO-CTP的步骤，据此治疗患有贫血的对象。
附图说明
图1A-1F是显示六个EPO-CTP构建体的图。
图1A是多肽SEQ ID NO:1的图。
图1B是多肽SEQ ID NO:2的图。
图1C是多肽SEQ ID NO:3的图。
图1D是多肽SEQ ID NO:4的图。
图1E是多肽SEQ ID NO:5的图。
图1F是多肽SEQ ID NO:6的图。
图2是显示经转染的DG44细胞表达EPO-CTP变体的照片。如在“样品制备”中所述的制备出来自转染细胞的最终测试样品，并在SDS-PAGE上跑胶。用免疫印迹检测蛋白。
图3是显示重组hEPO衍生物和EPO-3（SEQ ID NO:3）的体内生物学活性的图表。ICR小鼠（每组7只）接受每周单次IV注射（15μg/kg）EPO-3、rhEPO-WT（SEQ ID NO:16）、Recormon（商品化EPO）或每周3次Recormon（5μg/kg）共3周。对照动物IV注射PBS。每周收集血样3次，检测出红细胞压积水平。每个点都代表红细胞压积的组内平均值(%)±SE。
图4是显示重组hEPO衍生物和EPO-1（SEQ ID NO:1）的体内生物学活性的图表。ICR小鼠（每组7只）接受每周单次IV注射（15μg/kg）EPO-1、rhEPO-WT（SEQ ID NO:16）、Recormon（商品化EPO）或每周3次Recormon（5μg/kg）共3周。对照动物IV注射PBS。每周收集血样3次，检测出红细胞压积水平。每个点都代表红细胞压积的组内平均值(%)±SE。
图5是显示重组hEPO衍生物和EPO-2（SEQ ID NO:2）的体内生物学活性的图表。ICR小鼠（每组7只）接受每周单次IV注射（15μg/kg）EPO-2、rhEPO-WT（SEQ ID NO:16）、Recormon（商品化EPO）或每周3次Recormon（5μg/kg）共3周。对照动物IV注射PBS。每周收集血样3次，检测出红细胞压积水平。每个点都代表红细胞压积的组内平均值(%)±SE。
图6是显示在单次推注剂量EPO-0（SEQ ID NO:16）、EPO-3（SEQID NO:3）和Aranesp之后的网织红细胞水平变化的时距图。
图7是显示在单次推注剂量EPO-0（SEQ ID NO:16）、EPO-3（SEQID NO:3）和Aranesp之后的血红蛋白水平变化（表示为相对于基线水平的变化）的时距图。
图8是显示在单次推注剂量EPO-0（SEQ ID NO:16）、EPO-3（SEQID NO:3）和Aranesp之后的红细胞压积水平变化（表示为相对于基线水平的变化）的时距图。
图9是显示IV注射后的EPO-0（SEQ ID NO:16）、EPO-3（SEQ IDNO:3）和Aranesp的血清浓度的图。
图10是显示MOD-4020（SEQ ID NO:36）、MOD-4021（SEQ ID NO:37）、MOD-4022（SEQ ID NO:38）、MOD-4023（SEQ ID NO:39）和MOD-4024（SEQ ID NO:40）的分子量和身份的免疫印迹。照片表明与商品化和野生型的hGH一样，抗hGH抗体可以识别出MOD-7020-4变体。
图11是显示垂体切除小鼠在施用本发明的GH-CTP多肽之后的体重增长的条线图。
具体实施方式
在一个实施方式中，本发明描述了长效多肽以及生产和使用所述多肽的方法。在一个实施方式中，长效多肽包括人绒毛膜促性腺激素（hCG）的羧基末端肽（CTP）。在一个实施方式中，CTP作为保护剂起到抗蛋白降解或抗源自所述蛋白的肽降解的作用。在一个实施方式中，CTP延长了蛋白或源自所述蛋白的肽的循环半衰期。在一个实施方式中，CTP增强了蛋白或源自蛋白的肽的效力。
在另一个实施方式中，“CTP肽”、“羧基末端肽”和“CTP序列”在此可以互换使用。在另一个实施方式中，羧基末端肽是全长CTP。在另一个实施方式中，羧基末端肽是截短的CTP。每种可能性都代表着本发明的独立的实施方式。
在另一个实施方式中，“EPO肽”和“EPO序列”在此可以互换使用。在另一个实施方式中，EPO肽是EPO蛋白。在另一个实施方式中，羧基末端肽是截短的EPO蛋白。每种可能性都代表着本发明的独立的实施方式。
在另一个实施方式中，“信号序列”和“信号肽”在此可以互换使用。在另一个实施方式中，当涉及多核苷酸时，“序列”可以指的是编码部分。每种可能性都代表着本发明的独立的实施方式。
在另一个实施方式中，“感兴趣的肽”和“感兴趣的多肽序列”在此可以互换使用。在另一个实施方式中，感兴趣的肽是全长蛋白。在另一个实施方式中，感兴趣的肽是蛋白片段。每种可能性都代表着本发明的独立的实施方式。
在一个实施方式中，提供了包括至少两个与感兴趣的多肽序列相连接的绒毛膜促性腺激素的羧基末端肽（CTP）序列的多肽，其中至少两个CTP序列中的第一个CTP序列与感兴趣的多肽序列的氨基末端连接以及至少两个CTP序列中的第二个序列与感兴趣的多肽序列的羧基末端连接。在另一个实施方式中，羧基末端肽（CTP）序列是人绒毛膜促性腺激素的CTP序列。
在另一个实施方式中，羧基末端肽（CTP）经连接物与感兴趣的多肽序列相连接。在另一个实施方式中，连接CTP序列和感兴趣的多肽序列的连接物是共价键。在另一个实施方式中，连接CTP序列和感兴趣的多肽序列的连接物是肽键。在另一个实施方式中，连接CTP序列和感兴趣的多肽序列的连接物是取代肽键。
在另一个实施方式中，术语“感兴趣的多肽序列”指的是任一多肽序列，例如具有生物学活性的多肽序列。在另一个实施方式中，肽是糖基化的肽。在另一个实施方式中，肽是非糖基化的肽。从延长其循环半衰期中获益的多肽实例包括但不限于促红细胞生成素（EPO）、干扰素、人生长激素（hGH）和胰高血糖素样肽-1（GLP-1）。
在另一个实施方式中，人绒毛膜促性腺激素（hCG）的羧基末端肽（CTP）与蛋白融合。在另一个实施方式中，人绒毛膜促性腺激素（hCG）的羧基末端肽（CTP）与糖蛋白融合。在另一个实施方式中，人绒毛膜促性腺激素（hCG）的羧基末端肽（CTP）与糖蛋白激素融合。在另一个实施方式中，人绒毛膜促性腺激素（hCG）的羧基末端肽（CTP）与源自糖蛋白激素的肽融合。在一些实施方式中，糖蛋白激素包括EPO、FSH、或TSH以及源自上述激素的肽。
在一些实施方式中，多肽的氨基末端以及多肽的羧基末端的CTP序列提供了增强的抗蛋白降解的保护性。在一些实施方式中，多肽的氨基末端以及多肽的羧基末端的CTP序列为所连接的蛋白提供了延长的半衰期。
在一些实施方式中，多肽的氨基末端的CTP、多肽的羧基末端的CTP序列、以及至少一个额外的与羧基末端的CTP序列串联连接的CTP序列提供了增强的抗蛋白降解的保护性。在一些实施方式中，多肽的氨基末端的CTP、多肽的羧基末端的CTP序列、以及至少一个额外的与羧基末端的CTP序列串联连接的CTP序列为所连接的蛋白提供了延长的半衰期。多肽的氨基末端的CTP、多肽的羧基末端的CTP序列、以及至少一个额外的与羧基末端的CTP序列串联连接的CTP序列为所连接的蛋白提供了增强的活性。
在一些实施方式中，多肽的氨基末端的CTP、多肽的羧基末端的CTP序列、以及至少一个额外的与氨基末端的CTP序列串联连接的CTP序列提供了增强的抗蛋白降解的保护性。在一些实施方式中，多肽的氨基末端的CTP、多肽的羧基末端的CTP序列、以及至少一个额外的与氨基末端的CTP序列串联连接的CTP序列为所连接的蛋白提供了延长的半衰期。多肽的氨基末端的CTP、多肽的羧基末端的CTP序列、以及至少一个额外的与氨基末端的CTP序列串联连接的CTP序列为所连接的蛋白提供了增强的活性。
在另一个实施方式中，本发明的羧基末端肽（CTP）包括如SEQ IDNO:17所示的来自人绒毛膜促性腺激素第112到145位氨基酸（AA）的AA序列。在另一个实施方式中，本发明的羧基末端肽（CTP）包括如SEQ ID NO:18所示的来自人绒毛膜促性腺激素的第118到145位AA的AA序列。在另一个实施方式中，CTP序列也可以开始于人绒毛膜促性腺激素的第112到118位之间的任一位点以及终止于第145位。在一些实施方式中，CTP序列肽是28、29、30、31、32、33、或34AA长度并开始于CTP AA序列的第112、113、114、115、116、117或118位。
在另一个实施方式中，CTP肽是绒毛膜促性腺激素CTP的变体，其与天然CTP有着1到5个保守AA取代的不同，如美国专利5,712,122所述。在另一个实施方式中，CTP肽是绒毛膜促性腺激素CTP的变体，其与天然CTP有着1个保守AA取代的不同。在另一个实施方式中，CTP肽是绒毛膜促性腺激素CTP的变体，其与天然CTP有着2个保守AA取代的不同。在另一个实施方式中，CTP肽是绒毛膜促性腺激素CTP的变体，其与天然CTP有着3个保守AA取代的不同。在另一个实施方式中，CTP肽是人绒毛膜促性腺激素CTP的变体，其与天然CTP有着4个保守AA取代的不同。在另一个实施方式中，CTP肽是绒毛膜促性腺激素CTP的变体，其与天然CTP有着5个保守AA取代的不同。在另一个实施方式中，本发明的CTP肽氨基酸序列与天然CTP AA序列或其肽至少70%同源。在另一个实施方式中，本发明的CTP肽氨基酸序列与天然CTP AA序列或其肽至少80%同源。在另一个实施方式中，本发明的CTP肽氨基酸序列与天然CTPAA序列或其肽至少90%同源。在另一个实施方式中，本发明的CTP肽氨基酸序列与天然CTP AA序列或其肽至少95%同源。
在另一个实施方式中，本发明的CTP肽DNA序列与天然CTP DNA序列或其肽至少70%同源。在另一个实施方式中，本发明的CTP肽DNA序列与天然CTP DNA序列或其肽至少80%同源。在另一个实施方式中，本发明的CTP肽DNA序列与天然CTP DNA序列或其肽至少90%同源。在另一个实施方式中，本发明的CTP肽DNA序列与天然CTP DNA序列或其肽至少95%同源。
在另一个实施方式中，至少其中一个绒毛膜促性腺激素CTP AA序列是被截短的。在另一个实施方式中，两个绒毛膜促性腺激素CTP AA序列都是被截短的。在另一个实施方式中，其中两个绒毛膜促性腺激素CTPAA序列是被截短的。在另一个实施方式中，其中两个或多个绒毛膜促性腺激素CTP AA序列是被截短的。在另一个实施方式中，所有绒毛膜促性腺激素CTP AA序列都是被截短的。在另一个实施方式中，截短的CTP包括SEQ ID NO:43的前10个AA。在另一个实施方式中，截短的CTP包括SEQ ID NO:43的前11个AA。在另一个实施方式中，截短的CTP包括SEQ ID NO:43的前12个AA。在另一个实施方式中，截短的CTP包括SEQ ID NO:43的前13个AA。在另一个实施方式中，截短的CTP包括SEQ ID NO:43的前14个AA。在另一个实施方式中，截短的CTP包括SEQ ID NO:43的前15个AA。在另一个实施方式中，截短的CTP包括SEQ ID NO:43的前16个AA。在另一个实施方式中，截短的CTP包括SEQ ID NO:43的最后14个AA。每种可能性都代表着本发明的独立的实施方式。
在另一个实施方式中，至少其中一个绒毛膜促性腺激素CTP AA序列是被糖基化的。在另一个实施方式中，两个绒毛膜促性腺激素CTP AA序列都是被糖基化的。在另一个实施方式中，其中两个绒毛膜促性腺激素CTP AA序列是被糖基化的。在另一个实施方式中，其中两个或多个绒毛膜促性腺激素CTP AA序列是被糖基化的。在另一个实施方式中，所有绒毛膜促性腺激素CTP AA序列都是被糖基化的。在另一个实施方式中，本发明的CTP序列包括至少一个糖基化位点。在另一个实施方式中，本发明的CTP序列包括2个糖基化位点。在另一个实施方式中，本发明的CTP序列包括3个糖基化位点。在另一个实施方式中，本发明的CTP序列包括4个糖基化位点。
在一些实施方式中，根据本发明的教导利用促红细胞生成素（EPO）。在一些实施方式中，任何EPO编码AA序列都是EPO序列。在一些实施方式中，任何EPO编码核酸序列都是EPO序列。在一些实施方式中，与重组EPO以及EPO和CTP的其他组合相比较，CTP序列与EPO蛋白的氨基和羧基末端的连接造成了EPO刺激促红细胞生成能力的增强（图3到5和实施例4的表6）。在一些实施方式中，如实施例3的表4所证实的那样，与三个CTP序列相连接的EPO没有削弱结合其受体的结合力，这表明与三个CTP序列相连接的EPO在刺激TF-1细胞增殖方面与野生型EPO同等有效。在一些实施方式中，本发明的EPO-CPT多肽如SEQID NO:3和SEQ ID NO:6所示。
在一个实施方式中，“促红细胞生成素”指的是哺乳动物的促红细胞生成素。在一个实施方式中，“促红细胞生成素”指的是人促红细胞生成素，例如GenBank编号AAA52400。
在一个实施方式中，本发明的促红细胞生成素或EPO序列也指的是同源物。在一个实施方式中，如用国立生物技术信息中心（NCBI）的BlastP软件（默认参数）确定的那样，本发明的促红细胞生成素AA序列与GenBank编号AAA52400所示促红细胞生成素至少50%同源。在一个实施方式中，如用国立生物技术信息中心（NCBI）的BlastP软件（默认参数）确定的那样，本发明的促红细胞生成素AA序列与GenBank编号AAA52400所示的促红细胞生成素至少60%同源。在一个实施方式中，如用国立生物技术信息中心（NCBI）的BlastP软件（默认参数）确定的那样，本发明的促红细胞生成素AA序列与GenBank编号AAA52400所示的促红细胞生成素至少70%同源。在一个实施方式中，如用国立生物技术信息中心（NCBI）的BlastP软件（默认参数）确定的那样，本发明的促红细胞生成素AA序列与GenBank编号AAA52400所示的促红细胞生成素至少80%同源。在一个实施方式中，如用国立生物技术信息中心（NCBI）的BlastP软件（默认参数）确定的那样，本发明的促红细胞生成素AA序列与GenBank编号AAA52400所示的促红细胞生成素至少90%同源。在一个实施方式中，如用国立生物技术信息中心（NCBI）的BlastP软件（默认参数）确定的那样，本发明的促红细胞生成素AA序列与GenBank编号AAA52400所示的促红细胞生成素至少95%同源。
在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗贫血的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗贫血的在N末端额外具有一个CTP AA肽以及在C末端额外具有两个CTP AA肽的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗贫血的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:1所示的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗贫血的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端具有至少一个额外的CTP AA肽的如SEQ ID NO:1所示的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗贫血的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:2所示的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗贫血的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:3所示的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗贫血的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:4所示的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗贫血的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:5所示的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗贫血的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTPAA肽的如SEQ ID NO:6所示的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗贫血的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:16所示的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗贫血的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:22所示的EPO肽。
在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于治疗贫血的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTPAA肽的EPO肽的核酸序列。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于治疗贫血的在N末端额外具有一个CTP AA肽以及在C末端额外具有两个CTP AA肽的EPO肽的核酸序列。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于治疗贫血的EPO肽以及N末端的一个CTP AA肽和C末端的至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:20所示的核酸。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于治疗贫血的EPO肽以及N末端的一个CTP AA肽和C末端的两个CTP AA肽的如SEQ ID NO:21所示的核酸。
在另一个实施方式中，本发明的方法还提供了用于抑制贫血的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法还提供了用于抑制贫血的在N末端额外具有一个CTP AA肽以及在C末端额外具有两个CTP AA肽的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于抑制贫血的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:1所示的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于抑制贫血的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端具有至少一个额外的CTP AA肽的如SEQ ID NO:1所示的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于抑制贫血的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:2所示的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于抑制贫血的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:3所示的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于抑制贫血的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:4所示的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于抑制贫血的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:5所示的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于抑制贫血的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:6所示的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于抑制贫血的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:16所示的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于抑制贫血的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTPAA肽的如SEQ ID NO:22所示的EPO肽。
在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于抑制贫血的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTPAA肽的EPO肽的核酸序列。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于抑制贫血的在N末端额外具有一个CTP AA肽以及在C末端额外具有两个CTP AA肽的EPO肽的核酸序列。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于抑制贫血的EPO肽以及N末端的一个CTP AA肽和C末端的至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:20所示的核酸。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于抑制贫血的EPO肽以及N末端的一个CTP AA肽和C末端的两个CTP AA肽的如SEQ ID NO:21所示的核酸。
在另一个实施方式中，本发明的方法还提供了用于治疗肿瘤相关性贫血的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法还提供了用于治疗肿瘤相关性贫血的在N末端额外具有一个CTP AA肽以及在C末端额外具有两个CTP AA肽的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗肿瘤相关性贫血的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:1所示的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗肿瘤相关性贫血的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端具有至少一个额外的CTP AA肽的如SEQ ID NO:1所示的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗肿瘤相关性贫血的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:2所示的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗肿瘤相关性贫血的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQID NO:3所示的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗肿瘤相关性贫血的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:4所示的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗肿瘤相关性贫血的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:5所示的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗肿瘤相关性贫血的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:6所示的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗肿瘤相关性贫血的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:16所示的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗肿瘤相关性贫血的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQID NO:22所示的EPO肽。
在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于治疗肿瘤相关性贫血的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的EPO肽的核酸序列。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于治疗肿瘤相关性贫血的在N末端额外具有一个CTP AA肽以及在C末端额外具有两个CTP AA肽的EPO肽的核酸序列。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于治疗肿瘤相关性贫血的在N末端额外具有一个CTP AA肽和在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的EPO肽的如SEQ ID NO:20所示的核酸。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于治疗肿瘤相关性贫血的在N末端额外具有一个CTPAA肽和在C末端额外具有两个CTP AA肽的EPO肽的如SEQ ID NO:21所示的核酸。
在另一个实施方式中，本发明的方法还提供了用于抑制肿瘤相关性贫血的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法还提供了用于抑制肿瘤相关性贫血的在N末端额外具有一个CTP AA肽以及在C末端额外具有两个CTP AA肽的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于抑制肿瘤相关性贫血的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:1所示的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于抑制肿瘤相关性贫血的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端具有至少一个额外的CTP AA肽的如SEQ ID NO:1所示的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于抑制肿瘤相关性贫血的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:2所示的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于抑制肿瘤相关性贫血的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQID NO:3所示的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于抑制肿瘤相关性贫血的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:4所示的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于抑制肿瘤相关性贫血的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:5所示的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于抑制肿瘤相关性贫血的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:6所示的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于抑制肿瘤相关性贫血的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:16所示的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于抑制肿瘤相关性贫血的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQID NO:22所示的EPO肽。
在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于抑制肿瘤相关性贫血的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的EPO肽的核酸序列。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于抑制肿瘤相关性贫血的在N末端额外具有一个CTP AA肽以及在C末端额外具有两个CTP AA肽的EPO肽的核酸序列。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于抑制肿瘤相关性贫血的EPO肽以及N末端的一个CTP AA肽和C末端的至少一个CTP AA肽的如SEQID NO:20所示的核酸。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于抑制肿瘤相关性贫血的EPO肽以及N末端的一个CTP AA肽和C末端的两个CTP AA肽的如SEQ ID NO:21所示的核酸。
在另一个实施方式中，本发明的方法还提供了用于治疗肿瘤缺氧的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTPAA肽的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法还提供了用于治疗肿瘤缺氧的在N末端额外具有一个CTP AA肽以及在C末端额外具有两个CTP AA肽的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗肿瘤缺氧的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:1所示的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗肿瘤缺氧的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端具有至少一个额外的CTP AA肽的如SEQ ID NO:1所示的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗肿瘤缺氧的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:2所示的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗肿瘤缺氧的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:3所示的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗肿瘤缺氧的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:4所示的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗肿瘤缺氧的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:5所示的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗肿瘤缺氧的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:6所示的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗肿瘤缺氧的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:16所示的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗肿瘤缺氧的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:22所示的EPO肽。
在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于治疗肿瘤缺氧的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的EPO肽的核酸序列。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于治疗肿瘤缺氧的在N末端额外具有一个CTP AA肽以及在C末端额外具有两个CTP AA肽的EPO肽的核酸序列。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于治疗肿瘤缺氧的EPO肽以及N末端的一个CTP AA肽和C末端的至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:20所示的核酸。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于治疗肿瘤缺氧的在N末端额外具有一个CTP AA肽和在C末端额外具有两个CTP AA肽的EPO肽的如SEQ ID NO:21所示的核酸。
在另一个实施方式中，本发明的方法还提供了用于治疗慢性感染例如HIV、炎性肠病、或脓毒症发作的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法还提供了用于治疗慢性感染例如HIV、炎性肠病、或脓毒症发作的在N末端额外具有一个CTP AA肽以及在C末端额外具有两个CTP AA肽的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗慢性感染例如HIV、炎性肠病、或脓毒症发作的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:1所示的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗慢性感染例如HIV、炎性肠病、或脓毒症发作的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端具有至少一个额外的CTP AA肽的如SEQ ID NO:1所示的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗慢性感染例如HIV、炎性肠病、或脓毒症发作的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:2所示的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗慢性感染例如HIV、炎性肠病、或脓毒症发作的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:3所示的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗慢性感染例如HIV、炎性肠病、或脓毒症发作的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:4所示的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗慢性感染例如HIV、炎性肠病、或脓毒症发作的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:5所示的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗慢性感染例如HIV、炎性肠病、或脓毒症发作的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:6所示的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗慢性感染例如HIV、炎性肠病、或脓毒症发作的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:16所示的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗慢性感染例如HIV、炎性肠病、或脓毒症发作的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:22所示的EPO肽。
在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于治疗慢性感染例如HIV、炎性肠病、或脓毒症发作的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的EPO肽的核酸序列。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于治疗慢性感染例如HIV、炎性肠病、或脓毒症发作的在N末端额外具有一个CTP AA肽以及在C末端额外具有两个CTP AA肽的EPO肽的核酸序列。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于治疗慢性感染例如HIV、炎性肠病、或脓毒症发作的EPO肽以及N末端的一个CTP AA肽和C末端的至少一个CTPAA肽的如SEQ ID NO:20所示的核酸。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于治疗慢性感染例如HIV、炎性肠病、或脓毒症发作的在N末端额外具有一个CTP AA肽和在C末端额外具有两个CTP AA肽的EPO肽的如SEQ ID NO:21所示的核酸。
在另一个实施方式中，本发明的方法还提供了用于抑制慢性感染例如HIV、炎性肠病、或脓毒症发作的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法还提供了用于抑制慢性感染例如HIV、炎性肠病、或脓毒症发作的在N末端额外具有一个CTP AA肽以及在C末端额外具有两个CTP AA肽的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于抑制慢性感染例如HIV、炎性肠病、或脓毒症发作的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:1所示的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于抑制慢性感染例如HIV、炎性肠病、或脓毒症发作的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端具有至少一个额外的CTP AA肽的如SEQ ID NO:1所示的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于抑制慢性感染例如HIV、炎性肠病、或脓毒症发作的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:2所示的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于抑制慢性感染例如HIV、炎性肠病、或脓毒症发作的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:3所示的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于抑制慢性感染例如HIV、炎性肠病、或脓毒症发作的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:4所示的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于抑制慢性感染例如HIV、炎性肠病、或脓毒症发作的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:5所示的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于抑制慢性感染例如HIV、炎性肠病、或脓毒症发作的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:6所示的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于抑制慢性感染例如HIV、炎性肠病、或脓毒症发作的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:16所示的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于抑制慢性感染例如HIV、炎性肠病、或脓毒症发作的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:22所示的EPO肽。
在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于抑制慢性感染例如HIV、炎性肠病、或脓毒症发作的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的EPO肽的核酸序列。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于抑制慢性感染例如HIV、炎性肠病、或脓毒症发作的在N末端额外具有一个CTP AA肽以及在C末端额外具有两个CTP AA肽的EPO肽的核酸序列。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于抑制慢性感染例如HIV、炎性肠病、或脓毒症发作的EPO肽以及N末端的一个CTP AA肽和C末端的至少一个CTPAA肽的如SEQ ID NO:20所示的核酸。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于抑制慢性感染例如HIV、炎性肠病、或脓毒症发作的EPO肽以及N末端的一个CTP AA肽和C末端的两个CTP AA肽的如SEQID NO:21所示的核酸。
在另一个实施方式中，本发明的方法还提供了用于治疗肿瘤化疗后的疲劳综合征的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法还提供了用于治疗肿瘤化疗后的疲劳综合征的在N末端额外具有一个CTPAA肽以及在C末端额外具有两个CTP AA肽的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗肿瘤化疗后的疲劳综合征的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:1所示的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗肿瘤化疗后的疲劳综合征的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端具有至少一个额外的CTP AA肽的如SEQ ID NO:1所示的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗肿瘤化疗后的疲劳综合征的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQID NO:2所示的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗肿瘤化疗后的疲劳综合征的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:3所示的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗肿瘤化疗后的疲劳综合征的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:4所示的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗肿瘤化疗后的疲劳综合征的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:5所示的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗肿瘤化疗后的疲劳综合征的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:6所示的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗肿瘤化疗后的疲劳综合征的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:16所示的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗肿瘤化疗后的疲劳综合征的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:22所示的EPO肽。
在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于治疗肿瘤化疗后的疲劳综合征的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的EPO肽的核酸序列。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于治疗肿瘤化疗后的疲劳综合征的在N末端额外具有一个CTP AA肽以及在C末端额外具有两个CTP AA肽的EPO肽的核酸序列。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于治疗肿瘤化疗后的疲劳综合征的EPO肽以及N末端的一个CTP AA肽和C末端的至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:20所示的核酸。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于治疗肿瘤化疗后的疲劳综合征的EPO肽以及N末端的一个CTP AA肽和C末端的两个CTP AA肽的如SEQ ID NO:21所示的核酸。
在另一个实施方式中，本发明的方法还提供了用于提高干细胞植入的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法还提供了用于提高干细胞植入的在N末端额外具有一个CTP AA肽以及在C末端额外具有两个CTP AA肽的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于提高干细胞植入的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQID NO:1所示的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于提高干细胞植入的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端具有至少一个额外的CTP AA肽的如SEQ ID NO:1所示的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于提高干细胞植入的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:2所示的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于提高干细胞植入的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:3所示的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于提高干细胞植入的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:4所示的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于提高干细胞植入的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:5所示的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于提高干细胞植入的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:6所示的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于提高干细胞植入的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:16所示的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于提高干细胞植入的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTPAA肽的如SEQ ID NO:22所示的EPO肽。
在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于提高干细胞植入的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的EPO肽的核酸序列。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于提高干细胞植入的在N末端额外具有一个CTP AA肽以及在C末端额外具有两个CTP AA肽的EPO肽的核酸序列。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于提高干细胞植入的EPO肽以及N末端的一个CTP AA肽和C末端的至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:20所示的核酸。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于提高干细胞植入的EPO肽以及N末端的一个CTP AA肽和C末端的两个CTP AA肽的如SEQ ID NO:21所示的核酸。
在另一个实施方式中，本发明的方法还提供了用于增加再生障碍性贫血或骨髓异常增生综合征患者的存活率的在N末端额外具有至少一个CTPAA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法还提供了用于增加再生障碍性贫血或骨髓异常增生综合征患者的存活率的在N末端额外具有一个CTP AA肽以及在C末端额外具有两个CTP AA肽的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于增加再生障碍性贫血或骨髓异常增生综合征患者的存活率的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:1所示的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于增加再生障碍性贫血或骨髓异常增生综合征患者的存活率的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端具有至少一个额外的CTP AA肽的如SEQ ID NO:1所示的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于增加再生障碍性贫血或骨髓异常增生综合征患者的存活率的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:2所示的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于增加再生障碍性贫血或骨髓异常增生综合征患者的存活率的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ IDNO:3所示的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于增加再生障碍性贫血或骨髓异常增生综合征患者的存活率的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:4所示的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于增加再生障碍性贫血或骨髓异常增生综合征患者的存活率的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:5所示的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于增加再生障碍性贫血或骨髓异常增生综合征患者的存活率的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTPAA肽的如SEQ ID NO:6所示的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于增加再生障碍性贫血或骨髓异常增生综合征患者的存活率的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:16所示的EPO肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于增加再生障碍性贫血或骨髓异常增生综合征患者的存活率的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:22所示的EPO肽。
在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于增加再生障碍性贫血或骨髓异常增生综合征患者的存活率的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的EPO肽的核酸序列。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于增加再生障碍性贫血或骨髓异常增生综合征患者的存活率的在N末端额外具有一个CTPAA肽以及在C末端额外具有两个CTP AA肽的EPO肽的核酸序列。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于增加再生障碍性贫血或骨髓异常增生综合征患者的存活率的EPO肽以及N末端的一个CTP AA肽和C末端的至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:20所示的核酸。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于增加再生障碍性贫血或骨髓异常增生综合征患者的存活率的EPO肽以及N末端的一个CTP AA肽和C末端的两个CTP AA肽的如SEQ ID NO:21所示的核酸。
在一些实施方式中，本发明的同源性也包括缺失、插入或取代变体，包括其AA取代以及其生物学活性的多肽片段。在一个实施方式中，取代变体包括用丝氨酸取代促红细胞生成素AA序列104位的甘氨酸（SEQ IDNO:22）。
在一些实施方式中，根据本发明的教导利用了人生长激素（hGH）。在一些实施方式中，CTP序列与hGH蛋白的氨基末端和羧基末端的连接造成了效力的增加（图11）。在一些实施方式中，CTP序列与hGH蛋白的氨基末端和羧基末端的连接造成了体内活性的延长。在一个实施方式中，本发明的CTP-hGH多肽如SEQ ID NO:39-41所示。
在一个实施方式中，术语“人生长激素”（hGH）指的是表现出hGH活性（即刺激生长）的多肽，例如GenBank编号P01241所示的多肽（SEQID NO:47）。
在一个实施方式中，“人生长激素”（hGH）指的是表现出hGH活性（即刺激生长）的多肽，例如GenBank编号P01241所示的多肽。在一个实施方式中，本发明的hGH也指的是同源物。在一个实施方式中，如用国立生物技术信息中心（NCBI）的BlastP软件（默认参数）确定出的那样，本发明的hGH AA序列与GenBank编号P01241所示的hGH序列至少50%同源。在一个实施方式中，如用国立生物技术信息中心（NCBI）的BlastP软件（默认参数）确定出的那样，本发明的hGH AA序列与GenBank编号P01241所示的hGH序列至少60%同源。在一个实施方式中，如用国立生物技术信息中心（NCBI）的BlastP软件（默认参数）确定出的那样，本发明的hGH AA序列与GenBank编号P01241所示的hGH序列至少70%同源。在一个实施方式中，如用国立生物技术信息中心（NCBI）的BlastP软件（默认参数）确定出的那样，本发明的hGH AA序列与GenBank编号P01241所示的hGH序列至少80%同源。在一个实施方式中，如用国立生物技术信息中心（NCBI）的BlastP软件（默认参数）确定出的那样，本发明的hGH AA序列与GenBank编号P01241所示的hGH序列至少90%同源。在一个实施方式中，如用国立生物技术信息中心（NCBI）的BlastP软件（默认参数）确定出的那样，本发明的hGH AA序列与GenBank编号P01241所示的hGH序列至少95%同源。
示例性的本发明的CTP-hGH多肽是SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:40和SEQ ID NO:41所示的多肽。
在另一个实施方式中，本发明提供了用于刺激肌肉生长的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于刺激肌肉生长的在N末端额外具有一个CTP AA肽以及在C末端额外具有两个CTP AA肽的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于刺激肌肉生长的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:23所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于刺激肌肉生长的在N末端额外具有至少一个CTPAA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:36所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于刺激肌肉生长的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:37所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于刺激肌肉生长的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:38所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于刺激肌肉生长的如SEQ ID NO:39所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于刺激肌肉生长的如SEQ ID NO:40所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于刺激肌肉生长的如SEQ ID NO:41所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于刺激肌肉生长的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:42所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于刺激肌肉生长的如SEQ ID NO:44所示的hGH肽。
在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于刺激肌肉生长的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的hGH肽的核酸序列。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于刺激肌肉生长的在N末端额外具有一个CTP AA肽以及在C末端额外具有两个CTP AA肽的hGH肽的核酸序列。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于刺激肌肉生长的包括N末端的一个CTPAA肽以及C末端的两个CTP AA肽的hGH肽的核酸序列SEQ ID NO:45。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于刺激肌肉生长的hGH肽以及N末端的一个CTP AA肽和C末端的两个CTP AA肽的核酸序列SEQ ID NO:46。
在另一个实施方式中，本发明提供了用于刺激骨骼生长的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于刺激骨骼生长的在N末端额外具有一个CTP AA肽以及在C末端额外具有两个CTP AA肽的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于刺激骨骼生长的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:23所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于刺激骨骼生长的在N末端额外具有至少一个CTPAA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:36所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于刺激骨骼生长的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:37所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于刺激骨骼生长的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:38所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于刺激骨骼生长的如SEQ ID NO:39所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于刺激骨骼生长的如SEQ ID NO:40所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于刺激骨骼生长的如SEQ ID NO:41所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于刺激骨骼生长的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:42所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于刺激骨骼生长的如SEQ ID NO:44所示的hGH肽。
在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于刺激骨骼生长的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的hGH肽的核酸序列。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于刺激骨骼生长的在N末端额外具有一个CTP AA肽以及在C末端额外具有两个CTP AA肽的hGH肽的核酸序列。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于刺激骨骼生长的包括N末端的一个CTPAA肽以及C末端的两个CTP AA肽的hGH肽的核酸序列SEQ ID NO:45。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于刺激骨骼生长的hGH肽以及N末端的一个CTP AA肽和C末端的两个CTP AA肽的核酸序列SEQ ID NO:46。
在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于保持肌肉质量的本发明的hGH肽。
在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于保持骨骼质量的本发明的hGH肽。
在另一个实施方式中，本发明提供了用于保持骨骼质量的本发明的hGH-CTP核酸序列。
在另一个实施方式中，本发明提供了用于治疗消耗性疾病的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗消耗性疾病的在N末端额外具有一个CTP AA肽以及在C末端额外具有两个CTPAA肽的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗消耗性疾病的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:23所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗消耗性疾病的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ IDNO:36所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗消耗性疾病的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:37所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗消耗性疾病的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:38所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗消耗性疾病的如SEQ ID NO:39所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗消耗性疾病的如SEQ ID NO:40所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗消耗性疾病的如SEQ IDNO:41所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗消耗性疾病的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:42所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗消耗性疾病的如SEQ ID NO:44所示的hGH肽。
在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于治疗消耗性疾病的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的hGH肽的核酸序列。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于治疗消耗性疾病的在N末端额外具有一个CTP AA肽以及在C末端额外具有两个CTP AA肽的hGH肽的核酸序列。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于治疗消耗性疾病的包括N末端的一个CTP AA肽以及C末端的两个CTP AA肽的hGH肽的核酸序列SEQ ID NO:45。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于治疗消耗性疾病的hGH肽以及N末端的一个CTP AA肽和C末端的两个CTP AA肽的核酸序列SEQ ID NO:46。
在另一个实施方式中，本发明提供了用于增强心脏功能的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于增强心脏功能的在N末端额外具有一个CTP AA肽以及在C末端额外具有两个CTP AA肽的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于增强心脏功能的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:23所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于增强心脏功能的在N末端额外具有至少一个CTPAA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:36所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于增强心脏功能的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:37所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于增强心脏功能的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:38所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于增强心脏功能的如SEQ ID NO:39所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于增强心脏功能的如SEQ ID NO:40所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于增强心脏功能的如SEQ ID NO:41所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于增强心脏功能的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:42所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于增强心脏功能的如SEQ ID NO:44所示的hGH肽。
在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于增强心脏功能的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的hGH肽的核酸序列。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于增强心脏功能的在N末端额外具有一个CTP AA肽以及在C末端额外具有两个CTP AA肽的hGH肽的核酸序列。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于增强心脏功能的包括N末端的一个CTPAA肽以及C末端的两个CTP AA肽的hGH肽的核酸序列SEQ ID NO:45。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于增强心脏功能的hGH肽以及N末端的一个CTP AA肽和C末端的两个CTP AA肽的核酸序列SEQ ID NO:46。
在另一个实施方式中，本发明提供了用于增加脂解作用的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于增加脂解作用的在N末端额外具有一个CTP AA肽以及在C末端额外具有两个CTP AA肽的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于增加脂解作用的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:23所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于增加脂解作用的在N末端额外具有至少一个CTPAA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:36所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于增加脂解作用的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:37所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于增加脂解作用的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:38所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于增加脂解作用的如SEQ ID NO:39所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于增加脂解作用的如SEQ ID NO:40所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于增加脂解作用的如SEQ ID NO:41所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于增加脂解作用的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:42所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于增加脂解作用的如SEQ ID NO:44所示的hGH肽。
在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于增加脂解作用的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的hGH肽的核酸序列。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于增加脂解作用的在N末端额外具有一个CTP AA肽以及在C末端额外具有两个CTP AA肽的hGH肽的核酸序列。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于增加脂解作用的包括N末端的一个CTPAA肽以及C末端的两个CTP AA肽的hGH肽的核酸序列SEQ ID NO:45。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于增加脂解作用的hGH肽以及N末端的一个CTP AA肽和C末端的两个CTP AA肽的核酸序列SEQ ID NO:46。
在另一个实施方式中，本发明提供了用于改善液体平衡的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于改善液体平衡的在N末端额外具有一个CTP AA肽以及在C末端额外具有两个CTP AA肽的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于改善液体平衡的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:23所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于改善液体平衡的在N末端额外具有至少一个CTPAA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:36所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于改善液体平衡的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:37所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于改善液体平衡的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:38所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于改善液体平衡的如SEQ ID NO:39所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于改善液体平衡的如SEQ ID NO:40所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于改善液体平衡的如SEQ ID NO:41所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于改善液体平衡的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:42所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于改善液体平衡的如SEQ ID NO:44所示的hGH肽。
在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于改善液体平衡的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的hGH肽的核酸序列。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于改善液体平衡的在N末端额外具有一个CTP AA肽以及在C末端额外具有两个CTP AA肽的hGH肽的核酸序列。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于改善液体平衡的包括N末端的一个CTPAA肽以及C末端的两个CTP AA肽的hGH肽的核酸序列SEQ ID NO:45。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于改善液体平衡的hGH肽以及N末端的一个CTP AA肽和C末端的两个CTP AA肽的核酸序列SEQ ID NO:46。
在另一个实施方式中，本发明提供了用于治疗骨质疏松的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗骨质疏松的在N末端额外具有一个CTP AA肽以及在C末端额外具有两个CTP AA肽的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗骨质疏松的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:23所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗骨质疏松的在N末端额外具有至少一个CTPAA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:36所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗骨质疏松的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:37所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗骨质疏松的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:38所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗骨质疏松的如SEQ ID NO:39所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗骨质疏松的如SEQ ID NO:40所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗骨质疏松的如SEQ ID NO:41所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗骨质疏松的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:42所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗骨质疏松的如SEQ ID NO:44所示的hGH肽。
在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于治疗骨质疏松的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的hGH肽的核酸序列。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于治疗骨质疏松的在N末端额外具有一个CTP AA肽以及在C末端额外具有两个CTP AA肽的hGH肽的核酸序列。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于治疗骨质疏松的包括N末端的一个CTPAA肽以及C末端的两个CTP AA肽的hGH肽的核酸序列SEQ ID NO:45。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于治疗骨质疏松的hGH肽以及N末端的一个CTP AA肽和C末端的两个CTP AA肽的核酸序列SEQ ID NO:46。
在另一个实施方式中，本发明提供了用于抑制骨质疏松的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于抑制骨质疏松的在N末端额外具有一个CTP AA肽以及在C末端额外具有两个CTP AA肽的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于抑制骨质疏松的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:23所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于抑制骨质疏松的在N末端额外具有至少一个CTPAA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:36所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于抑制骨质疏松的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:37所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于抑制骨质疏松的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:38所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于抑制骨质疏松的如SEQ ID NO:39所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于抑制骨质疏松的如SEQ ID NO:40所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于抑制骨质疏松的如SEQ ID NO:41所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于抑制骨质疏松的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:42所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于抑制骨质疏松的如SEQ ID NO:44所示的hGH肽。
在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于抑制骨质疏松的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的hGH肽的核酸序列。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于抑制骨质疏松的在N末端额外具有一个CTP AA肽以及在C末端额外具有两个CTP AA肽的hGH肽的核酸序列。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于抑制骨质疏松的包括N末端的一个CTPAA肽以及C末端的两个CTP AA肽的hGH肽的核酸序列SEQ ID NO:45。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于抑制骨质疏松的hGH肽以及N末端的一个CTP AA肽和C末端的两个CTP AA肽的核酸序列SEQ ID NO:46。
在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于提高运动能力的本发明的hGH肽。
在另一个实施方式中，本发明提供了用于提高肺功能的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于提高肺功能的在N末端额外具有一个CTP AA肽以及在C末端额外具有两个CTP AA肽的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于提高肺功能的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTPAA肽的如SEQ ID NO:23所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于提高肺功能的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:36所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于提高肺功能的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:37所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于提高肺功能的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:38所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于提高肺功能的如SEQ ID NO:39所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于提高肺功能的如SEQ ID NO:40所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于提高肺功能的如SEQ ID NO:41所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于提高肺功能的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:42所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于提高肺功能的如SEQ ID NO:44所示的hGH肽。
在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于提高肺功能的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTPAA肽的hGH肽的核酸序列。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于提高肺功能的在N末端额外具有一个CTP AA肽以及在C末端额外具有两个CTP AA肽的hGH肽的核酸序列。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于提高肺功能的包括N末端的一个CTP AA肽以及C末端的两个CTP AA肽的hGH肽的核酸序列SEQ ID NO:45。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于提高肺功能的hGH肽以及N末端的一个CTP AA肽和C末端的两个CTP AA肽的核酸序列SEQ ID NO:46。
在另一个实施方式中，本发明提供了用于提高免疫力的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于提高免疫力的在N末端额外具有一个CTP AA肽以及在C末端额外具有两个CTP AA肽的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于提高免疫力的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTPAA肽的如SEQ ID NO:23所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于提高免疫力的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:36所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于提高免疫力的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:37所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于提高免疫力的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:38所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于提高免疫力的如SEQ ID NO:39所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于提高免疫力的如SEQ ID NO:40所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于提高免疫力的如SEQ ID NO:41所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于提高免疫力的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:42所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于提高免疫力的如SEQ ID NO:44所示的hGH肽。
在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于提高免疫力的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTPAA肽的hGH肽的核酸序列。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于提高免疫力的在N末端额外具有一个CTP AA肽以及在C末端额外具有两个CTP AA肽的hGH肽的核酸序列。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于提高免疫力的包括N末端的一个CTP AA肽以及C末端的两个CTP AA肽的hGH肽的核酸序列SEQ ID NO:45。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于提高免疫力的hGH肽以及N末端的一个CTP AA肽和C末端的两个CTP AA肽的核酸序列SEQ ID NO:46。
在另一个实施方式中，本发明提供了用于再生重要器官的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于再生重要器官的在N末端额外具有一个CTP AA肽以及在C末端额外具有两个CTP AA肽的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于再生重要器官的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:23所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于再生重要器官的在N末端额外具有至少一个CTPAA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:36所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于再生重要器官的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:37所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于再生重要器官的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:38所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于再生重要器官的如SEQ ID NO:39所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于再生重要器官的如SEQ ID NO:40所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于再生重要器官的如SEQ ID NO:41所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于再生重要器官的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:42所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于再生重要器官的如SEQ ID NO:44所示的hGH肽。
在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于再生重要器官的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的hGH肽的核酸序列。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于再生重要器官的在N末端额外具有一个CTP AA肽以及在C末端额外具有两个CTP AA肽的hGH肽的核酸序列。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于再生重要器官的包括N末端的一个CTPAA肽以及C末端的两个CTP AA肽的hGH肽的核酸序列SEQ ID NO:45。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于再生重要器官的hGH肽以及N末端的一个CTP AA肽和C末端的两个CTP AA肽的核酸序列SEQ ID NO:46。
在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于增加健康感的本发明的hGH肽。
在另一个实施方式中，本发明提供了用于恢复REM睡眠的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于恢复REM睡眠的在N末端额外具有一个CTP AA肽以及在C末端额外具有两个CTPAA肽的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于恢复REM睡眠的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:23所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于恢复REM睡眠的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQID NO:36所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于恢复REM睡眠的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ IDNO:37所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于恢复REM睡眠的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQ ID NO:38所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于恢复REM睡眠的如SEQ ID NO:39所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于恢复REM睡眠的如SEQ ID NO:40所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于恢复REM睡眠的如SEQ ID NO:41所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于恢复REM睡眠的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽的如SEQID NO:42所示的hGH肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于恢复REM睡眠的如SEQ ID NO:44所示的hGH肽。
在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于恢复REM睡眠的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的hGH肽的核酸序列。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于恢复REM睡眠的在N末端额外具有一个CTP AA肽以及在C末端额外具有两个CTP AA肽的hGH肽的核酸序列。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于恢复REM睡眠的包括N末端的一个CTP AA肽以及C末端的两个CTP AA肽的hGH肽的核酸序列SEQ ID NO:45。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了编码用于恢复REM睡眠的hGH肽以及N末端的一个CTP AA肽和C末端的两个CTP AA肽的核酸序列SEQ ID NO:46。
在一些实施方式中，本发明的同源性也包括缺失、插入或取代变体，包括其AA取代以及其生物学活性的多肽片段。在一个实施方式中，取代变体是用缬氨酸取代hGH的65位的谷氨酰胺的变体（SEQ ID NO:23）（Gellerfors et al.,J Pharm Biomed Anal1989,7:173-83）。
在一些实施方式中，根据本发明的教导利用了干扰素。在一些实施方式中，CTP序列与干扰素蛋白的氨基末端和羧基末端的连接造成了效力的增加。在一些实施方式中，CTP序列与干扰素蛋白的氨基末端和羧基末端的连接造成了体内活性的延长。
在一个实施方式中，“干扰素”指的是哺乳动物I型干扰素多肽。在一个实施方式中，“干扰素”指的是哺乳动物II型干扰素多肽。在一些实施方式中，利用了本领域一般熟练人员已知的额外的合适的干扰素多肽。在一些实施方式中，干扰素是α干扰素。在一些实施方式中，干扰素是β干扰素。在一些实施方式中，干扰素是γ干扰素。在一些实施方式中，干扰素是ω干扰素。在一些实施方式中，干扰素是亚种干扰素。在一个实施方式中，亚种干扰素是IFN-α2a。在一个实施方式中，亚种干扰素是IFN-α2b。在一个实施方式中，亚种干扰素是IFN-β1a。在一个实施方式中，亚种干扰素是IFN-β1b。
在一些实施方式中，本发明的干扰素表现出干扰素活性例如抗病毒或抗增殖活性。在一些实施方式中，下面的表1列出了干扰素的非受限实例的GenBank编号。
在一个实施方式中，本发明的干扰素也指的是同源物。在一个实施方式中，如用国立生物技术信息中心（NCBI）的BlastP软件（默认参数）确定出的那样，本发明的干扰素AA序列与表1所列的干扰素序列至少50%同源。在一个实施方式中，如用国立生物技术信息中心（NCBI）的BlastP软件（默认参数）确定出的那样，本发明的干扰素AA序列与表1所列的干扰素序列至少60%同源。在一个实施方式中，如用国立生物技术信息中心（NCBI）的BlastP软件（默认参数）确定出的那样，本发明的干扰素AA序列与表1所列的干扰素序列至少70%同源。在一个实施方式中，如用国立生物技术信息中心（NCBI）的BlastP软件（默认参数）确定出的那样，本发明的干扰素AA序列与表1所列的干扰素序列至少80%同源。在一个实施方式中，如用国立生物技术信息中心（NCBI）的BlastP软件（默认参数）确定出的那样，本发明的干扰素AA序列与表1所列的干扰素序列至少90%同源。在一个实施方式中，如用国立生物技术信息中心（NCBI）的BlastP软件（默认参数）确定出的那样，本发明的干扰素AA序列与表1所列的干扰素序列至少95%同源。在一些实施方式中，本发明的同源性也包括缺失、插入或取代变体，包括其AA取代以及其生物学活性的多肽片段。在一个实施方式中，取代变体包括用丝氨酸取代干扰素β的17位的半胱氨酸（SEQ ID NO:24）。
下面的表1列出了干扰素实例以及它们相应的NCBI序列号。
表1
干扰素名称 NCBI序列号
干扰素α1 NP_076918.1
干扰素α10 NP_002162.1
干扰素α13 NP_008831.2
干扰素α14 NP_002163.1
干扰素α16 NP_002164.1
干扰素α17 NP_067091.1
干扰素α2 NP_000596.2
干扰素α21 NP_002166.1
干扰素α4 NP_066546.1
干扰素α5 NP_002160.1
干扰素α6 NP_066282.1
干扰素α7 NP_066401.2
干扰素α8 NP_002161.2
干扰素β1 NP_002167.1
干扰素ε1 NP_795372.1
干扰素γ NP_000610.2
干扰素ε NP_064509.1
干扰素Ω1 NP_002168.1
在另一个实施方式中，本发明提供了用于治疗或抑制多发性硬化的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTPAA肽的干扰素β1肽。在另一个实施方式中，本发明提供了用于治疗或抑制多发性硬化的在N末端额外具有一个CTP AA肽以及在C末端额外具有两个CTP AA肽的干扰素β1肽。在另一个实施方式中，本发明提供了用于治疗或抑制多发性硬化的如SEQ ID NO:24所示的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有一个CTP AA肽的干扰素β1肽。在另一个实施方式中，本发明提供了用于治疗或抑制多发性硬化的如SEQ IDNO:24所示的干扰素β1肽，其在N末端额外具有SEQ ID NO:26的信号肽以及在SEQ ID NO:26的N末端具有至少一个CTP AA肽，而在SEQ IDNO:24的C末端额外具有至少一个CTP AA肽。
在一些实施方式中，根据本发明的教导利用了胰高血糖素样肽-1。在一些实施方式中，CTP序列与“胰高血糖素样肽-1”的氨基末端和羧基末端的连接造成了效力的增加。在一些实施方式中，CTP序列与肽的氨基末端和羧基末端的连接造成了体内活性的延长。在一些实施方式中，CTP序列与胰高血糖素样肽的氨基末端和羧基末端的连接造成了体内活性的延长。
在一个实施方式中，“胰高血糖素样肽”（GLP-1）指的是哺乳动物多肽。在一个实施方式中，“胰高血糖素样肽”（GLP-1）指的是人多肽。在一些实施方式中，从胰高血糖素前蛋白原（Genbank号为NP002045）解离出GLP-1，其具有结合GLP-1受体并启动信号传导途径造成促胰岛素活性的能力。在一个实施方式中，“促胰岛素活性”指的是应答于升高的葡萄糖水平刺激胰岛素分泌的能力，据此引起细胞摄取葡萄糖以及降低血浆葡萄糖水平。在一些实施方式中，GLP-1多肽包括但不限于美国专利5,118,666所述的那些专利，在此通过引用将其并入本申请。
在一个实施方式中，“GLP-1”指的是多肽，例如用国立生物技术信息中心（NCBI）的BlastP软件（默认参数）确定出的如SEQ ID NO:25所示的序列。在一个实施方式中，本发明的GLP-1也指的是GLP-1同源物。在一个实施方式中，如用国立生物技术信息中心（NCBI）的BlastP软件（默认参数）确定出的那样，本发明的GLP-1AA序列与SEQ ID NO:25所示的GLP-1序列至少50%同源。在一个实施方式中，如用国立生物技术信息中心（NCBI）的BlastP软件（默认参数）确定出的那样，本发明的GLP-1AA序列与SEQ ID NO:25所示的GLP-1序列至少60%同源。在一个实施方式中，如用国立生物技术信息中心（NCBI）的BlastP软件（默认参数）确定出的那样，本发明的GLP-1AA序列与SEQ ID NO:25所示的GLP-1序列至少70%同源。在一个实施方式中，如用国立生物技术信息中心（NCBI）的BlastP软件（默认参数）确定出的那样，本发明的GLP-1AA序列与SEQ ID NO:25所示的GLP-1序列至少80%同源。在一个实施方式中，如用国立生物技术信息中心（NCBI）的BlastP软件（默认参数）确定出的那样，本发明的GLP-1AA序列与SEQ ID NO:25所示的GLP-1序列至少90%同源。在一个实施方式中，如用国立生物技术信息中心（NCBI）的BlastP软件（默认参数）确定出的那样，本发明的GLP-1AA序列与SEQ ID NO:25所示的GLP-1序列至少95%同源。
在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗或抑制II型糖尿病的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的GLP-1肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗或抑制II型糖尿病的在N末端额外具有一个CTP AA肽以及在C末端额外具有两个CTP AA肽的GLP-1肽。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗或抑制II型糖尿病的在N末端额外具有至少一个CTPAA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的GLP-1肽。
在一个实施方式中，同源性也指的是缺失、插入或取代变体，包括其AA取代及其生物学活性多肽片段。
在一个实施方式中，感兴趣的多肽序列是EPO。在一个实施方式中，感兴趣的多肽序列是干扰素。在另一个实施方式中，感兴趣的多肽序列是hGH。在另一个实施方式中，感兴趣的多肽序列是GLP-1。在另一个实施方式中，感兴趣的多肽序列是胰岛素。在另一个实施方式中，感兴趣的多肽序列是脑啡肽。在另一个实施方式中，感兴趣的多肽序列是ACTH。在另一个实施方式中，感兴趣的多肽序列是胰高血糖素。在另一个实施方式中，感兴趣的多肽序列是胰岛素样生长因子。在另一个实施方式中，感兴趣的多肽序列是表皮生长因子。在另一个实施方式中，感兴趣的多肽序列是酸性或碱性成纤维细胞生长因子。在另一个实施方式中，感兴趣的多肽序列是血小板衍生生长因子。在另一个实施方式中，感兴趣的多肽序列是粒细胞-CSF。在另一个实施方式中，感兴趣的多肽序列是巨噬细胞-CSF。在另一个实施方式中，感兴趣的多肽序列是IL-2。在另一个实施方式中，感兴趣的多肽序列是IL-3。在另一个实施方式中，感兴趣的多肽序列是肿瘤坏死因子。在另一个实施方式中，感兴趣的多肽序列是LHRH。在另一个实施方式中，感兴趣的多肽序列是LHRH类似物。在另一个实施方式中，感兴趣的多肽序列是生长抑素。在另一个实施方式中，感兴趣的多肽序列是生长激素释放因子。在另一个实施方式中，感兴趣的多肽序列是内啡肽。在另一个实施方式中，感兴趣的多肽序列是肺泡表面活性剂蛋白。在另一个实施方式中，感兴趣的多肽序列是利钠因子。在另一个实施方式中，感兴趣的多肽序列是粘附素。在另一个实施方式中，感兴趣的多肽序列是血管生成抑制素。在另一个实施方式中，感兴趣的多肽序列是内皮他汀。在另一个实施方式中，感兴趣的多肽序列是受体肽。在另一个实施方式中，感兴趣的多肽序列是受体结合配体。在另一个实施方式中，感兴趣的多肽序列是抗体。在另一个实施方式中，感兴趣的多肽序列是抗体片段。在另一个实施方式中，感兴趣的多肽序列是包括任何修饰形式的肽或蛋白。
在另一个实施方式中，本发明的肽包括在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有一个CTP AA肽的感兴趣的肽。在另一个实施方式中，在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有一个CTP AA肽的感兴趣的肽包括选自下面列表中的蛋白：胰岛素、人血白蛋白/白蛋白、Activase altiplase/tPA、腺苷脱氨酶、免疫球蛋白、葡糖脑苷酯酶、Leukine-sargramostim/GM-CSF、CSF、Venoglobulin-S/IgG、Proleukin aldesleukin、DNA酶、VIII因子、Helixate、L-天冬酰胺酶、WinRho SDF Rh I、Retavase retaplase/tPA、IX因子、FSH、球蛋白、纤维蛋白、白介素-11、becaplermin/PDGF、水蛭素/herudin、TNF、胸腺球蛋白、VIIa因子、干扰素α-2a、干扰素αn-1、干扰素α-N3、干扰素β-1b、干扰素γ-1b、白介素-2、HGH或单克隆抗体。
在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗糖尿病的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有一个CTP AA肽的胰岛素。
在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗低血容量性休克、血液透析或心肺搭桥的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有一个CTP AA肽的白蛋白。
在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗急性心肌梗死、急性大面积肺栓塞、或缺血性中风（的整个变化（change throughout））的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有一个CTPAA肽的Activase-altiplase/tPA。
在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗重度联合免疫缺陷病的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有一个CTP AA肽的腺苷脱氨酶。
在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗移植受体的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有一个CTP AA肽的免疫球蛋白。
在另一个实施方式中，本发明的方法提供的免疫球蛋白是CMV免疫球蛋白。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗戈谢病的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有一个CTP AA肽的葡糖脑苷酯酶。
在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于刺激造血祖细胞的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有一个CTP AA肽的Leukine-sargramostim/GM-CSF。
在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗粒细胞减少症的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有一个CTPAA肽的G-CSF。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗免疫缺陷病的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有一个CTP AA肽的Venoglobulin-S/IgG。
在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗肾癌或转移性黑色素瘤的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有一个CTP AA肽的Proleukin-aldesleukin。
在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗囊性纤维化的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有一个CTP AA肽的DNA酶。
在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗血友病A的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有一个CTP AA肽的VIII因子。
在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗血友病A的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有一个CTP AA肽的Helixate。
在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗急性淋巴细胞白血病的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有一个CTP AA肽的L-天冬酰胺酶。
在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗Rh同种免疫和免疫性血小板减少性紫癜的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有一个CTP AA肽的WinRho SDF Rh IgG。
在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗急性心肌梗死的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有一个CTPAA肽的Retavase retaplase/tPA。
在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗血友病B的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTPAA肽的IX因子。
在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗血友病B的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTPAA肽的IX因子。
在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于在辅助生殖中刺激排卵的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的FSH。
在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于预防呼吸道合胞病毒的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的球蛋白。
在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于外伤处理和止血的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTPAA肽的纤维蛋白。在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于化疗诱导的血小板减少症的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的白介素11。
在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗糖尿病足溃疡的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的becaplermin/PDGF。
在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于肝素诱导的血小板减少症的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的lepirudin/herudin。
在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗类风湿关节炎的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的可溶性TNF。
在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗器官移植排异病的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的胸腺球蛋白。
在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗血友病的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的VIIa因子。
在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗艾滋病相关性卡波丝肉瘤的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的干扰素α-2a。
在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗毛细胞白血病、生殖器疣、艾滋病相关性卡波丝肉瘤、丙型肝炎、乙型肝炎、恶性黑色素瘤和滤泡性淋巴瘤的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的干扰素α-2b。
在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗生殖器疣的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTPAA肽的干扰素α-N3。
在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗慢性肉芽肿病的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的干扰素γ-1b。
在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗丙型肝炎感染的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的干扰素αn-1。
在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗肾癌和转移性黑色素瘤的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的白介素2。
在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗多发性硬化的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTPAA肽的干扰素β-1b。
在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗消耗性疾病、AIDS、恶液质或hGH缺乏症的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的hGH。
在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于器官移植的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的OKT3单克隆抗体。
在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于预防冠状动脉介入和血管成形术的并发症的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTP AA肽的Reo单克隆抗体。
在另一个实施方式中，本发明的方法提供了用于治疗结直肠癌、非霍奇金淋巴瘤、肾脏移植排异、转移性乳腺癌或预防呼吸道合胞病毒病的在N末端额外具有至少一个CTP AA肽以及在C末端额外具有至少一个CTPAA肽的单克隆抗体。
在一个实施方式中，本发明被应用于兽医医学。在一个实施方式中，本发明提供家养哺乳动物的治疗方法，所述哺乳动物被保持为人类伴侣（例如狗、猫、马）、具有显著的商业价值（例如奶牛、肉牛、运动用动物）、具有显著的科学价值（例如濒危物种的圈养或自由的样本）或者具有其他的价值。
在一个实施方式中，本发明的多肽、抗体或多核苷酸被施用给动物（例如鼠、大鼠、兔、仓鼠、豚鼠、猪、小型猪、鸡、骆驼、山羊、马、牛、绵羊、狗、猫、非人类灵长类动物和人）。在一个实施方式中，所引用的应用具有在多种宿主中的用途。在一些实施方式中，这些宿主包括但不限于人、鼠、兔、山羊、豚鼠、骆驼、马、小鼠、大鼠、仓鼠、猪、小型猪、鸡、山羊、牛、绵羊、狗、猫或非人类灵长类动物。
在一个实施方式中，用本发明的方法治疗农场动物。在一个实施方式中，农场动物包括猪、牛、奶牛、马、山羊、绵羊、鸡、火鸡、鹅、鸭和相关物种。在一个实施方式中，用本发明的方法治疗实验用动物。在一个实施方式中，实验用动物包括大鼠、小鼠、豚鼠、兔、山羊、猴、狗、猫等。在一个实施方式中，用本发明的方法治疗动物园动物。在一个实施方式中，动物园动物包括动物园中的所有脊椎动物。在一个实施方式中，用本发明的方法治疗水生动物。在一个实施方式中，水生动物包括鱼、鳗鱼、龟、海豹、企鹅、鲨鱼、鲸鱼和相关物种。在一个实施方式中，用本发明的方法治疗家养动物。在一个实施方式中，家养动物包括任何宠物例如猫和狗或者人类喂养的动物例如马、骆驼、猪、山羊、兔、鸡、火鸡、鹅、鸭等。
在本发明中，术语猪包括猪(pig)、小猪(piglet)、猪(hog)、小母猪(gilt)、barrow、公猪(boar)和母猪(sow)。在另一个实施方式中，“牛”指的是幼仔、母牛、奶牛、小母牛、阉牛(steer)和公牛。
在一个实施方式中，本发明的方法利用牛生长激素。在一个实施方式中，本发明的方法利用人工牛生长激素。在一个实施方式中，人工牛生长激素具有NCBI序列编号AAA72262所示的序列。在另一个实施方式中，人工牛生长激素是本领域已知的任一其他的人工牛生长激素。每种可能性都代表本发明的独立的实施方式。
在一个实施方式中，本发明的方法利用绵羊生长激素。在一个实施方式中，绵羊生长激素具有NCBI序列编号NP_001009315所示的序列。在另一个实施方式中，绵羊生长激素是本领域已知的任一其他的绵羊生长激素。每种可能性都代表本发明的独立的实施方式。
在一个实施方式中，本发明的方法利用马生长激素。在一个实施方式中，马生长激素具有NCBI序列编号AAA21027所示的序列。在另一个实施方式中，马生长激素是本领域已知的任一其他的马生长激素。每种可能性都代表本发明的独立的实施方式。
在一个实施方式中，本发明的方法利用鸡生长激素。在一个实施方式中，鸡生长激素具有NCBI序列编号CAA3561所示的序列。在另一个实施方式中，鸡生长激素是本领域已知的任一其他的鸡生长激素。每种可能性都代表本发明的独立的实施方式。
在一个实施方式中，本发明的方法利用小鼠生长激素。在一个实施方式中，小鼠生长激素具有NCBI序列编号NP_032143所示的序列。在另一个实施方式中，小鼠生长激素是本领域已知的任一其他的小鼠生长激素。每种可能性都代表本发明的独立的实施方式。
在一个实施方式中，本发明的方法利用罗非鱼生长激素。在一个实施方式中，罗非鱼生长激素具有NCBI序列编号CAA00818所示的序列。在另一个实施方式中，罗非鱼生长激素是本领域已知的任一其他的罗非鱼生长激素。每种可能性都代表本发明的独立的实施方式。
在一个实施方式中，本发明的方法利用牛EPO。在一个实施方式中，本发明的方法利用人工牛EPO。在一个实施方式中，人工牛EPO具有NCBI序列编号NP_776334所示的序列。在另一个实施方式中，人工牛EPO是本领域已知的任一其他的人工牛EPO。每种可能性都代表本发明的独立的实施方式。
在一个实施方式中，本发明的方法利用猪EPO。在一个实施方式中，猪EPO具有NCBI序列编号NP_999299所示的序列。在另一个实施方式中，猪EPO是本领域已知的任一其他的猪EPO。每种可能性都代表本发明的独立的实施方式。
在一个实施方式中，本发明的方法利用绵羊EPO。在一个实施方式中，绵羊EPO具有NCBI序列编号NP_001019908所示的序列。在另一个实施方式中，绵羊EPO是本领域已知的任一其他的绵羊EPO。每种可能性都代表本发明的独立的实施方式。
在一个实施方式中，本发明的方法利用小鼠EPO。在一个实施方式中，小鼠EPO具有NCBI序列编号CAA72707所示的序列。在另一个实施方式中，小鼠EPO是本领域已知的任一其他的小鼠EPO。每种可能性都代表本发明的独立的实施方式。
在一个实施方式中，本发明的方法利用牛GLP-1。在一个实施方式中，牛GLP-1具有NCBI序列编号P01272所示的序列。在另一个实施方式中，牛GLP-1是本领域已知的任一其他的牛GLP-1。每种可能性都代表本发明的独立的实施方式。
在一个实施方式中，本发明的方法利用绵羊GLP-1。在一个实施方式中，绵羊GLP-1具有NCBI序列编号Q8MJ25所示的序列。在另一个实施方式中，绵羊GLP-1是本领域已知的任一其他的绵羊GLP-1。每种可能性都代表本发明的独立的实施方式。
在一个实施方式中，本发明的方法利用猪GLP-1。在一个实施方式中，鸡GLP-1具有NCBI序列编号P01274所示的序列。在另一个实施方式中，鸡GLP-1是本领域已知的任一其他的鸡GLP-1。每种可能性都代表本发明的独立的实施方式。
在一个实施方式中，本发明的方法利用小鼠GLP-1。在一个实施方式中，小鼠GLP-1具有NCBI序列编号NP_032127所示的序列。在另一个实施方式中，小鼠GLP-1是本领域已知的任一其他的小鼠GLP-1。每种可能性都代表本发明的独立的实施方式。
在一个实施方式中，本发明的方法利用牛干扰素α。在一个实施方式中，牛干扰素α具有NCBI序列编号ABD57311所示的序列。在另一个实施方式中，牛干扰素α是本领域已知的任一其他的牛干扰素α。每种可能性都代表本发明的独立的实施方式。
在一个实施方式中，本发明的方法利用绵羊干扰素α。在一个实施方式中，绵羊干扰素α具有NCBI序列编号CAA41790所示的序列。在另一个实施方式中，绵羊干扰素α是本领域已知的任一其他的绵羊干扰素α。每种可能性都代表本发明的独立的实施方式。
在一个实施方式中，本发明的方法利用猪干扰素α。在一个实施方式中，猪干扰素α具有NCBI序列编号AAP92118所示的序列。在另一个实施方式中，猪干扰素α是本领域已知的任一其他的猪干扰素α。每种可能性都代表本发明的独立的实施方式。
在一个实施方式中，本发明的方法利用小鼠干扰素α。在一个实施方式中，小鼠干扰素α具有NCBI序列编号AAA37886所示的序列。在另一个实施方式中，小鼠干扰素α是本领域已知的任一其他的小鼠干扰素α。每种可能性都代表本发明的独立的实施方式。
在一些实施方式中，CTP序列修饰在容许使用更低剂量方面是有利的。
在一些实施方式中，“多肽”在此包括天然多肽（降解产物、合成方法合成的多肽或重组多肽）以及肽模拟物（一般是合成方法合成的多肽）以及类肽和半类肽，其是多肽的类似物，在一些实施方式中，其具有使得多肽在机体内更为稳定或者更能够穿透到细胞内的修饰。
在一些实施方式中，修饰包括但不限于N末端修饰、C末端修饰、多肽键修饰包括但不限于CH2-NH、CH2-S、CH2-S=O、O=C-NH、CH2-O、CH2-CH2、S=C-NH、CH=CH或CF=CH、骨架修饰以及残基修饰。用于制备肽模拟化合物的方法是本领域公知道，并在Quantitative Drug Design,C.A.Ramsden Gd.,Chapter17.2,F.Choplin Pergamon Press(1992)中有所说明，在此通过引用将其全部内容并入本申请。下面提供了这方面的更多的细节。
在一些实施方式中，取代了多肽内的多肽键（-CO-NH-）。在一些实施方式中，用N-甲基键（-N(CH3)-CO-）取代多肽键。在一些实施方式中，用酯键（-C(R)H-C-O-O-C(R)-N-）取代多肽键。在一些实施方式中，用酮甲基键（-CO-CH2-）取代多肽键。在一些实施方式中，用α氮杂键（-NH-N(R)-CO-）取代多肽键，其中R是任何烷基例如甲基、卡巴键(carbabonds)(-CH2-NH-)。在一些实施方式中，用羟乙烯键（-CH(OH)-CH2-）取代多肽键。在一些实施方式中，用硫代酰胺键（-CS-NH-）取代多肽键。在一些实施方式中，用烯双键（-CH=CH-）取代多肽键。在一些实施方式中，用逆酰胺键(retro amide bonds)(-NH-CO-)取代多肽键。在一些实施方式中，用多肽衍生物（-N(R)-CH2-CO-）取代多肽键，其中R是天然存在于碳原子上的“正常”侧链。在一些实施方式中，这些修饰发生于沿着多肽链的任一键上，甚至同时发生在多个肽键上（2到3个键）。
在一些实施方式中，多肽的天然芳香族AA例如Trp、Tyr和Phe可以被合成地非天然酸例如苯胺乙酸、TIC、Naphthylelanine（Nol）、Phe的环甲基衍生物、Phe的卤素衍生物或o-甲基-Tyr所取代。在一些实施方式中，本发明的多肽包括一个或多个修饰AA或者一个或多个非AA单体（例如脂肪酸、复合糖等）。
在一个实施方式中，“AA”被理解为包括20种天然存在的AA；那些常常在体内翻译后被修饰的AA包括例如羟脯氨酸、磷酸丝氨酸和磷酸苏氨酸；和其他少见AA包括但不限于2-氨基己二酸、羟赖氨酸、异锁链赖氨酸、正缬氨酸、正亮氨酸和鸟氨酸。在一个实施方式中，“AA”包括D-AA和L-AA。
在一些实施方式中，在需要可溶形式的多肽的治疗方法中利用了本发明的多肽。在一些实施方式中，本发明的多肽包括一种或多种非天然的或天然的极性AA，包括但不限于丝氨酸和苏氨酸，由于它们含羟基的侧链使得它们能够增加多肽的溶解度。
在一些实施方式中，利用了线性形式的本发明的多肽，尽管本领域人员都认为环状结构不会严重的干扰多肽的特征，因此也可以利用环形的多肽。
在一些实施方式中，本发明的多肽是生物化学合成的，例如通过使用固相技术。在一些实施方式中，这些生物化学方法包括专用固相合成、部分固相合成、片段缩合或经典的溶液合成。在一些实施方式中，当多肽是相当短的（约5到15kDa）和/或当不能通过重组技术生成（即不能由核酸序列编码）以及因此涉及到不同的化学作用时，才使用这些方法。
在一些实施方式中，固相多肽合成方法是本领域人员公知的，在J ohnMorrow Stewart and Janis Dillaha Young,Solid Phase Polypeptide Syntheses(2nd Ed.,Pierce Chemical Company,1984)中有所描述。在一些实施方式中，用预备队高效液相色谱法纯化出合成多肽（Creighton T.(1983)Proteins,structures and molecular principles.WH Freeman and Co.N.Y.）并且可以用本领域人员已知的方法经AA测序确定出所述多肽的组成。
在一些实施方式中，用重组蛋白技术产生本发明的多肽。在一些实施方式中，重组蛋白技术被用于产生相对长的多肽（例如大于18到25个AA）。在一些实施方式中，重组蛋白技术被用于产生大量的本发明的多肽。在一些实施方式中，Bitter et al.,(1987)Methods in Enzymol.153:516-544；Studier et al.(1990)Methods in Enzymol.185:60-89；Brisson et al.(1984)Nature310:511-514；Takamatsu et al.(1987)EMBO J.6:307-311；Coruzzi et al.(1984)EMBO J.3:1671-1680和Brogli et al.,(1984)Science224:838-843；Gurley et al.(1986)Mol.Cell.Biol.6:559-565和Weissbach&Weissbach,1988,Methods for Plant Molecular Biology,Academic Press,NY,Section VIII,pp421-463都描述了重组蛋白技术。
在一个实施方式中，用编码本发明的多肽的多核苷酸合成本发明的多肽。在一些实施方式中，编码本发明的多肽的多核苷酸被连接到表达载体内，所述载体包括对顺式调节序列（例如启动子序列）的转录控制。在一些实施方式中，顺式调节序列适用于指导组成型表达本发明的多肽。在一些实施方式中，本发明的顺式调节序列适用于指导组织特异性表达本发明的多肽。在一些实施方式中，顺式调节序列适用于指导诱导型表达本发明的多肽。
在一些实施方式中，SEQ ID NOs:20、21、44、45和46给出了表达本发明的多肽的多核苷酸。
在一些实施方式中，适用于本发明的组织特异性启动子包括在特殊细胞群中发挥功能的序列，实例包括但不限于启动子例如肝脏特异的白蛋白启动子（Pinkert et al.,(1987)Genes Dev.1:268-277）、淋巴组织特异性启动子（Calame et al.,(1988)Adv.Immunol.43:235-275），特别是T细胞受体（Winoto et al.,(1989)EMBO J.8:729-733）和免疫球蛋白（Banerji et al.(1983)Cell33729-740）的启动子、神经元特异性启动子例如神经纤维启动子（Byrne et al.(1989)Proc.Natl.Acad.Sci.USA86:5473-5477）、胰腺特异性启动子（Edlunch et al.(1985)Science230:912-916）或乳腺特异性启动子例如乳清启动子（美国专利4,873,316和欧洲申请文献264,166）。适用于本发明的诱导型启动子包括例如四环素诱导型启动子（Srour,M.A.,et al.,2003.Thromb.Haemost.90:398-405）。
在一个实施方式中，术语“多核苷酸”指的是单链或双链的核酸序列，其可以是孤立的或者按RNA序列、互补的多核苷酸序列（cDNA）、基因组多核苷酸序列和/或复合的多核苷酸序列（例如上述的组合）的形式提供的。
在一个实施方式中，“互补多核苷酸序列”指的是利用逆转录酶或任何其他的RNA依赖性DNA聚合酶逆转录信使RNA产生的序列。在一个实施方式中，序列可以是利用DNA聚合酶在体内或体外扩增到的序列。
在一个实施方式中，“基因组多核苷酸序列”指的是源自（分离自）染色体的序列，因此其代表着染色体的连续部分。
在一个实施方式中，“复合多核苷酸序列”指的是序列，其是至少部分互补的以及至少部分基因组的。在一个实施方式中，复合序列可以包括一些编码本发明的多肽所需的外显子序列以及一些插入所述外显子之间的内含子序列。在一个实施方式中，内含子序列可以是任一来源的，包括其他基因的内含子，通常包括保守剪切信号序列。在一个实施方式中，内含子序列包括顺式作用的表达调节元件。
在一个实施方式中，本发明的多核苷酸还包括编码用于分泌本发明的多肽的信号肽的信号序列。在一些实施方式中，信号序列包括但不限于如SEQ ID NO:19所示的EPO的内源信号序列或如SEQ ID NO:26所示的IFN-1的内源信号序列。在另一个实施方式中，信号序列位于CTP序列的N末端，CTP序列依次位于感兴趣的肽的N末端；例如序列是（a）信号序列-（b）CTP-（c）相关序列-（d）任选的1个或多个额外的CTP序列。在另一个实施方式中，在感兴趣的肽的信号序列以及感兴趣的多肽序列本身之间被插入了一个或多个CTP序列，因此阻断了相关的野生型序列。每种可能性都代表本发明的独立的实施方式。
在一个实施方式中，在表达和分泌之后，从前体蛋白中解离出信号肽，产生成熟蛋白。
在一些实施方式中，利用实施例1所述的PCR技术或者本领域人员已知的任何其他的方法或操作制备出本发明的多核苷酸。在一些实施方式中，操作涉及连接两个不同的DNA（见例如“Current Protocols in MolecularBiology”,eds.Ausubel et al.,John Wiley&Sons,1992）。
在一个实施方式中，本发明的多核苷酸被插入到了表达载体（例如核酸构建体）内，使得能够表达重组多肽。在一个实施方式中，本发明的表达载体包括使得所述载体适合于原核细胞内的复制和整合的附加序列。在一个实施方式中，本发明的表达载体包括使得所述载体适合于真核细胞内的复制和整合的附加序列。在一个实施方式中，本发明的表达载体包括穿梭载体，其使得所述载体适合于原核细胞和真核细胞内的复制和整合。在一些实施方式中，克隆载体包括转录和翻译启动序列（例如启动子、增强子）以及转录和翻译终止子（例如多腺苷化信号）。
在一个实施方式中，多种原核或真核细胞都可以被用作表达本发明的多肽的宿主表达系统。在一些实施方式中，这些宿主表达系统包括但不限于微生物例如经含多肽编码序列的重组噬菌体DNA、质粒DNA或粘粒DNA表达载体转化的细菌；经含多肽编码序列的重组酵母菌表达载体转化的酵母菌；经含多肽编码序列的重组病毒表达载体（例如花椰菜花叶病毒CaMV、番茄花叶病毒TMV）感染或经含多肽编码序列的重组质粒表达载体例如Ti质粒转化的植物细胞系统。
在一些实施方式中，使用非细菌的表达系统（例如哺乳动物表达系统例如CHO细胞）表达本发明的多肽。在一个实施方式中，被用于在哺乳动物细胞中表达本发明的多核苷酸的表达载体是包括CMV启动子和新霉素耐药基因的pCI-DHFR载体。在实施例1的一个实施方式中描述了pCI-dhfr载体的构建。
在一些实施方式中，在本发明的细菌系统中，根据所表达多肽的目标用途可以有利地选择出多种表达载体。在一个实施方式中，需要大量的多肽。在一个实施方式中，需要指导表达高水平蛋白产物的载体，所述载体可能是与疏水性信号序列的融合物，所述疏水性信号序列指导所表达的产物进入到细菌的细胞浆内或者其中容易纯化出蛋白产物的培养基内。在一个实施方式中，用特殊的解离位点遗传加工特定的融合蛋白，这有助于回收多肽。在一个实施方式中，适用于这些加工处理的载体包括但不限于大肠杆菌表达载体的pET系列（Studier et al.,Methods in Enzymol.185:60-89(1990)）。
在一个实施方式中，使用酵母菌表达系统。在一个实施方式中，可以在酵母菌中使用多种含有组成型或诱导型启动子的载体，如美国专利申请5,932,447所述。在另一个实施方式中，可以使用促进外来DNA序列整合到酵母菌染色体内的载体。
在一个实施方式中，本发明的表达载体还可以包括例如容许从单一mRNA例如内核糖体进入位点（IRES）翻译出一些蛋白的额外的多核苷酸序列以及用于启动子嵌合多肽的基因组整合的序列。
在一些实施方式中，哺乳动物表达载体包括但不限于购自Invitrogen的pcDNA3、pcDNA3.1(+/-)、pGL3、pZeoSV2(+/-)、pSecTag2、pDisplay、pEF/myc/cyto、pCMV/myc/cyto、pCR3.1、pSinRep5、DH26S、DHBB、pNMT1、pNMT41、pNMT81、购自Promega的pCI、购自Strategene的pMbac、pPbac、pBK-RSV及pBK-CMV、和购自Clontech的pTRES、以及它们的衍生物。
在一些实施方式中，本发明使用含有来自真核病毒例如逆转录病毒的调节元件的表达载体。SV40载体包括pSVT7和pMT2。在一些实施方式中，源自牛乳头状瘤病毒的载体包括pBV-1MTHA，以及源自Epstein Bar病毒包括pHEBO、和p2O5。其他示例载体包括pMSG、pAV009/A+、pMTO10/A+、pMAMneo-5、杆状病毒pDSVE、和容许在SV-40早期启动子、SV-40晚期启动子、金属硫蛋白启动子、小鼠乳腺肿瘤病毒启动子、Rous肉瘤病毒启动子、多角体蛋白启动子、或其在真核细胞中显示为有效的启动子的指导下表达蛋白的任何其他的载体。
在一些实施方式中，重组病毒载体可以用于体内表达本发明的多肽，因为它们提供了优点例如横向感染和靶向特异性。在一个实施方式中，横向感染在例如逆转录病毒的生命周期内是固有的，并且它是其中单个受感染细胞产生多个出芽脱落并感染邻近细胞的子代病毒粒的过程。在一个实施方式中，结果是大片面积被快速感染的，大部分区域都不是被初始病毒颗粒最初感染的地方。在一个实施方式中，产生了不能横向传播的病毒载体。在一个实施方式中，这个特征是有用的，只要所需的目的是将特殊基因引入到有限数目的靶向细胞内。
在一个实施方式中，可以用不同的方法将本发明的表达载体引入到细胞内。在Sambrook et al.,Molecular Cloning:A Laboratory Manual,ColdSprings Harbor Laboratory,New York(1989,1992)；Ausubel et al.,CurrentProtocols in Molecular Biology,John Wiley and Sons,Baltimore,Md.(1989)；Chang et al.,Somatic Gene Therapy,CRC Press,Ann Arbor,Mich.(1995)；Vega et al.,Gene Targeting,CRC Press,Ann Arbor Mich.(1995),Vectors:ASurvey of Molecular Cloning Vectors and Their Uses,Butterworths,BostonMass.(1988)和Gilboa et al.Biotechniques4(6):504-512,1986中普遍地描述了这些方法，包括稳定或临时转染、脂染、电穿孔和重组病毒载体感染。另外，美国专利5,464,764和5,487,992面熟了正负选择法。
在一些实施方式中，经病毒感染引入核酸比其他方法例如脂染和电穿孔有着一些优点，因为病毒的感染性质使得可以获得更高的转染效率。
在一个实施方式中，要知道也可以从通过采用任何合适的上面所述的施用模式被施用给个体的核酸构建体中表达出本发明的多肽（即体内基因治疗）。在一个实施方式中，通过适当的基因转运载体/方法（转染、转导、同源重组等）以及所需的表达系统可以将核酸构建体引入到合适的细胞内，然后培养扩增出修饰细胞并将其返回到个体内（即体外基因治疗）。
在一个实施方式中，已经在动物模型例如啮齿类动物（Bohl et al.,Blood.2000;95:2793-2798）、灵长类动物（Gao et al.,Blood,2004,Volume103,Number9）中尝试了EPO的体内基因治疗，并且已经证实了其在慢性肾功能衰竭患者的人体临床试验中的成功性（Lippin et al Blood2005,106,Number7）。
在一个实施方式中，使用植物表达载体。在一个实施方式中，多肽编码序列的表达是受多种启动子的驱动的。在一些实施方式中，使用病毒启动子例如CaMV的35S RNA和19S RNA启动子（Brisson et al.,Nature310:511-514(1984)）、或TMV的包被蛋白启动子（Takamatsu et al.,EMBO J.6:307-311(1987)）。在另一个实施方式中，使用植物启动子例如RUBISCO的小亚基（Coruzzi et al.,EMBO J.3:1671-1680(1984)；和Brogliet al.,Science224:838-843(1984)）或热休克蛋白启动子例如大豆hsp17.5-E或hsp17.3-B（Gurley et al.,Mol.Cell.Biol.6:559-565(1986)）。在一个实施方式中，利用Ti质粒、Ri质粒、植物病毒载体、直接DNA转化、微注射、电穿孔和其他本领域人员公知的技术将构建体引入到植物细胞内。见例如Weissbach&Weissbach的Methods for Plant Molecular Biology,Academic Press,NY,Section VIII,pp421-463(1988)。本发明也可以使用本领域公知的其他表达系统例如昆虫和哺乳动物宿主细胞系统。
要明白除了包含转录和翻译所插入的编码序列（编码多肽）所必需的元件外，本发明的表达构建体也可以包括被遗传加工成优化所表达的多肽的稳定性、生产、纯化、产率或活动性的序列。
在一些实施方式中，可以用不同的方法将本发明的表达载体引入到宿主细胞系统内。在一些实施方式中，在Sambrook et al.,Molecular Cloning:A Laboratory Manual,Cold Springs Harbor Laboratory,New York(1989,1992)；Ausubel et al.,Current Protocols in Molecular Biology,John Wiley andSons,Baltimore,Md.(1989)；Chang et al.,Somatic Gene Therapy,CRC Press,Ann Arbor,Mich.(1995)；Vega et al.,Gene Targeting,CRC Press,Ann ArborMich.(1995),Vectors:A Survey of Molecular Cloning Vectors and Their Uses,Butterworths,Boston Mass.(1988)和Gilboa et al.Biotechniques4(6):504-512,1986中普遍地描述了这些方法，包括稳定或临时转染、脂染、电穿孔和重组病毒载体感染。另外，美国专利5,464,764和5,487,992面熟了正负选择法。
在一些实施方式中，在有效的条件下培养转化细胞，所述条件容许表达大量的重组多肽。在一些实施方式中，有效的培养条件包括但不限于容许蛋白产生的有效的培养基、生物反应器、温度、pH和氧条件。在一个实施方式中，有效的培养基指的是其中细胞被培养产生本发明的重组多肽的任何培养基。在一些实施方式中，培养基通常包括具有可同化的碳源、氮源和磷源以及合适的盐、矿物质、金属和其他养分例如微生物的水溶液。在一些实施方式中，可以在传统发酵生物反应器、摇晃瓶、试管、微滴定皿和Petri板中培养本发明的细胞。在一些实施方式中，在适合于重组细胞的温度、pH和氧含量中实施培养。在一些实施方式中，培养条件是在本领域一般熟练人员的专业知识之内。
在一些实施方式中，取决于生产所用的载体和宿主细胞，所形成的本发明的多肽仍在重组细胞内、被分泌到发酵培养基中、被分泌到两个细胞膜之间的空间内例如大肠杆菌的周质空间、或者保留在细胞的外表面或病毒膜上。
在一个实施方式中，在预定的培养时间之后，完成重组多肽的回收。
在一个实施方式中，术语“回收重组多肽”在此指的是收集含有多肽的发酵培养基以及不必暗示分离或纯化的附加步骤。
在一个实施方式中，利用多种标准的蛋白纯化技术纯化出本发明的多肽，所述技术例如但不限于亲和层析、离子交换层析、过滤、电泳、疏水作用层析、凝胶过滤层析、反相层析、伴刀豆球蛋白A层析、层析聚焦和差异溶解。
在一个实施方式中，为了促进回收，可以将所表达的编码序列遗传加工成编码本发明的多肽并融合可裂解的基序。在一个实施方式中，可以设计融合蛋白，使得可以通过亲和层析；例如通过在特异于可裂解基序的柱上的固定可以容易地分离出多肽。在一个实施方式中，裂解位点被遗传加工在多肽和可裂解基序之间，以及通过用在该位点上特异地裂解所述融合蛋白的适当的酶或试剂的处理可以从层析柱上释放出多肽（见例如Boothet al.,Immunol.Lett.19:65-70(1988)；和Gardella et al.,J.Biol.Chem.265:15854-15859(1990)）。
在一个实施方式中，本发明的多肽可以恢复到“基本上纯的”形式。
在一个实施方式中，术语“基本上纯度”指的是容许在此所述的应用中有效应用所述蛋白的纯度。
在一个实施方式中，也可以用体外表达系统合成本发明的多肽。在一个实施方式中，体外合成方法是本领域公知的，以及系统的组件是可商品化获得的。
在一个实施方式中，实施例1举例说明了利用重组DNA技术产生CTP-EPO-CTP多肽。
在一些实施方式中，合成并纯化出重组多肽；在体内或体外检测出它们的治疗疗效。在一个实施方式中，利用实施例2到6和8到9所述的各种检测法可以验证本发明的重组EPO肽的结合活性。在一个实施方式中，通过测定多肽刺激TF-1细胞增殖的能力可以验证体外结合活性。在一个实施方式中，通过分析红细胞压积水平（图3到5）和/或网织红细胞百分比可以推算出体内活性。
●在一个实施方式中，可以用本发明的EPO肽治疗患有各种促红细胞生成素相关性病变的对象。在一些实施方式中，对象是人类对象。
●在一些实施方式中，术语“促红细胞生成素相关性病变”指的是与促红细胞生成素的低于正常的、异常的或不适当的调控相关的任何病变。在一些实施方式中，用本领域人员可接受并利用的任何测量方法确定出与这些病变相关的促红细胞生成素的水平。在一些实施方式中，促红细胞生成素相关性病变通常包括贫血性病变。
在一些实施方式中，“贫血性病变”指的是与贫血相关的任何病变、疾病或病态。在一些实施方式中，贫血性病变包括但不限于再生障碍性贫血、自身免疫性溶血性贫血、骨髓移植、Churg-Strauss综合征、Diamond-Blackfan贫血、范可尼贫血、Felty综合征、移植物抗宿主病、造血干细胞移植、溶血尿毒症综合征、骨髓异常增生综合征、夜间阵发性血红蛋白尿、骨髓纤维化、全血细胞减少症、纯红细胞再生障碍性贫血、过敏性紫癜、铁粒幼细胞性贫血、难治性贫血伴原始细胞增多、类风湿关节炎、Shwachman综合征、镰刀细胞病、重度地中海贫血、轻度地中海贫血、血小板减少性紫癜等。
在一个实施方式中，本发明包括CTP-hGH-CTP多肽。在一个实施方式中，如实施例7所示，用重组DNA技术方法产生CTP-hGH-CTP多肽。在一个实施方式中，在体内检测本发明的CTP-hGH-CTP多肽的治疗疗效。在一个实施方式中，在体外检测出本发明的CTP-hGH-CTP多肽的治疗疗效。在一个实施方式中，用先前经人生长激素受体转染过的Nb2（催乳素依赖性鼠淋巴瘤细胞株（ECACC细胞库））或FCD-P1小鼠细胞株测定出本发明的重组hGH多肽的结合活性。在一个实施方式中，hGH与这些受体的结合诱导了细胞增殖，其中在一个实施方式中，通过MTT细胞染色测定出作为hGH活性的函数的细胞增殖。在一个实施方式中，通过测定经治疗后的生长激素缺陷动物在一定时间内的体重增加推算出体内活性。
在一些实施方式中，本发明的人生长激素多肽可以被用于治疗患有生长和体重相关性病变的对象，所述病变例如是生长缺陷疾病、HIV感染患者的AIDS消耗的、衰老的和受损的免疫功能、代谢性疾病、手术恢复、充血性心肌病、肝移植、肝切除术后的肝脏再生、慢性肾功能衰竭、肾性骨营养不良、骨质疏松、软骨发育不良/软骨发育不全、骨骼发育不良、慢性炎性或营养性疾病例如克隆病、短肠综合征、幼年型慢性关节炎、囊性纤维化、男性不育、X-连锁低血磷性佝偻病、唐氏综合征、脊柱裂、Noonan综合征、肥胖、肌肉强度受损和纤维肌痛。
在一些实施方式中，本发明的干扰素多肽被用于治疗患有各种病变的对象，例如毛细胞白血病（HCL）、卡波丝肉瘤（KS）、慢性髓细胞白血病（CML）、慢性丙型肝炎（CHC）、尖锐湿疣（CA）、慢性乙型肝炎、恶性黑色素瘤、滤泡性非霍奇金淋巴瘤、多发性硬化、慢性肉芽肿疾病、鸟型复合分支杆菌（MAC）、肺纤维化和骨质疏松。
在一些实施方式中，本发明的胰高血糖素样肽-1（GLP-1）被用于治疗患有非胰岛素依赖性糖尿病、肥胖、中风、心肌梗死、中风、应激性高糖血症、或肠易激综合征的对象。
在一个实施方式中，可以给个体提供本发明的多肽本身。在一个实施方式中，可以作为药物组合物的一部分给个体提供本发明的多肽，其中所述多肽与可药用载体混合。
在一个实施方式中，“药物组合物”指的是一种或多种在此所述的活性组分与其他化学组分例如生理上适宜的载体和赋形剂的制剂。药物组合物的目的是为了有助于给有机体施用化合物。
在一个实施方式中，“活性组分”指的是感兴趣的多肽序列，其具有生物学作用。
在一些实施方式中，本发明的任一组合物都包括至少两个以任何形式与相关蛋白结合的CTP序列。在一个实施方式中，本发明提供了组合制剂。在一个实施方式中，“组合制剂”特别定义为“部件试剂盒”，其中可以单独地或者通过使用不同的固定组合以及不同量的组合物伴侣即同时、同步、分开或依次地剂量上述的组合伴侣。在一些实施方式中，然后例如可以同时地或按时间交错地施用部件试剂盒的部件，即在不同的时间点以及相同的或不同的时间间隔内施用部件试剂盒的任何部件。在一些实施方式中，可以施用组合制剂中的一定比例的组合伴侣的总量。在一个实施方式中，组合制剂可以有所不同，例如为了满足所治疗的患者亚群的需要或者单个患者的需要，其中不同的需要可能是因为特殊的疾病、疾病的严重度、年龄、性别或体重造成的，本领域人员容易确定出这一点。
在一个实施方式中，短句“生理可用载体”和“可药用载体”可以互换使用，其指的是不会对有机体引起严重刺激并且不会消除所施用的化合物的生物学活性以及性能的载体或稀释剂。佐剂包含于这些短句的含义中。在一个实施方式中，其中一种可药用载体所含的组分可以是例如聚乙二醇（PEG），这是一种在有机和水介质中有着较大溶解度范围的生物兼容的聚合物（Mutter et al.(1979)）。
在一个实施方式中，“赋形剂”指的是被加入到药物组合物中以便进一步有助于活性组分的施用的惰性物质。在一个实施方式中，赋形剂包括碳酸钙、磷酸钙、各种糖和各种类型的淀粉、纤维素衍生物、明胶、蔬菜油和聚乙二醇。
在“Remington’s Pharmaceutical Sciences”Mack Publishing Co.,Easton,PA（最后一版）中可以找到用于制剂和施用药物的技术，在此通过引用将其并入本申请。
在一个实施方式中，合适的施用途径例如包括口服、经直肠、经粘膜、经鼻、肠道或肠外转运包括肌肉内、皮下和髓内注射以及鞘内、直接脑室内、静脉内、腹腔内、鼻内、或眶内注射。
在一个实施方式中，以局部而不是全身的方式施用制剂，例如通过将制剂直接注射到患者机体的特殊区域内。
本发明涉及各种剂量范围的实施方式。在一个实施方式中，本发明的多肽的剂量是在0.05到80mg/天的范围内。在一个实施方式中，剂量是在0.05到50mg/天的范围内。在另一个实施方式中，剂量是在0.1到20mg/天的范围内。在另一个实施方式中，剂量是在0.1到10mg/天的范围内。在另一个实施方式中，剂量是在0.1到5mg/天的范围内。在另一个实施方式中，剂量是在0.5到5mg/天的范围内。在另一个实施方式中，剂量是在0.5到50mg/天的范围内。在另一个实施方式中，剂量是在5到80mg/天的范围内。在另一个实施方式中，剂量是在35到65mg/天的范围内。在另一个实施方式中，剂量是在35到65mg/天的范围内。在另一个实施方式中，剂量是在20到60mg/天的范围内。在另一个实施方式中，剂量是在40到60mg/天的范围内。在另一个实施方式中，剂量是在45到60mg/天的范围内。在另一个实施方式中，剂量是在40到60mg/天的范围内。在另一个实施方式中，剂量是在60到120mg/天的范围内。在另一个实施方式中，剂量是在120到240mg/天的范围内。在另一个实施方式中，剂量是在40到60mg/天的范围内。在另一个实施方式中，剂量是在240到400mg/天的范围内。在另一个实施方式中，剂量是在45到60mg/天的范围内。在另一个实施方式中，剂量是在15到25mg/天的范围内。在另一个实施方式中，剂量是在5到10mg/天的范围内。在另一个实施方式中，剂量是在55到65mg/天的范围内。
在一个实施方式中，剂量为20mg/天。在另一个实施方式中，剂量为30mg/天。在另一个实施方式中，剂量为40mg/天。在另一个实施方式中，剂量为50mg/天。在另一个实施方式中，剂量为60mg/天。在另一个实施方式中，剂量为70mg/天。在另一个实施方式中，剂量为80mg/天。在另一个实施方式中，剂量为90mg/天。在另一个实施方式中，剂量为100mg/天。
在一个实施方式中，口服施用包括单位药物剂型包括片剂、胶囊、锭剂、咀嚼片、悬浮液、乳剂等。这些单位药物剂量包括安全和有效量的所需化合物，在一个实施方式中，每种化合物的剂量是从约0.7或3.5mg到约280mg/70kg，或者在另一个实施方式中，是从约0.5或10mg到约210mg/70kg。适用于制备用于口服施用的单位药物剂型的可药用载体是本领域公知的。在一些实施方式中，片剂通常包括传统的药物兼容的佐剂作为惰性稀释剂例如碳酸钙、碳酸钠、甘露醇、乳糖和纤维素；结合剂例如淀粉、明胶和蔗糖；崩解剂例如淀粉、海藻酸和交联羧甲基纤维素(croscarmelose)；润滑剂例如硬脂酸镁、硬脂酸和滑石粉。在一个实施方式中，助流剂例如二氧化硅可以被用于提高粉末混合物的流动性。在一个实施方式中，可以添加色素例如FD&C染料来改善外观。甜味剂和调味剂例如阿司帕坦(aspartame)、糖精、薄荷脑、薄荷油、和水果香料是咀嚼片的有用佐剂。胶囊通常包括一种或多种在此所述的固体稀释剂。在一些实施方式中，载体组分的选择取决于此要考虑例如味道、费用和储藏稳定性，这对于本发明的目的都不是重要的，本领域人员可以容易地进行选择。
在一个实施方式中，口服药物剂型包括预定的释放谱。在一个实施方式中，本发明的口服药物剂型包括延长释放的片剂、胶囊、锭剂或咀嚼片。在一个实施方式中，本发明的口服药物剂型包括缓慢释放的片剂、胶囊、锭剂或咀嚼片。在一个实施方式中，本发明的口服药物剂型包括速释片剂、胶囊、锭剂或咀嚼片。在一个实施方式中，根据本领域人员已知的药物活性组分的所需释放谱制剂出口服药物剂型。
在一些实施方式中，口服组合物包括液态溶液、乳液、悬浮液等。在一些实施方式中，适用于制备这些组合物的可药用载体是本领域公知的。在一些实施方式中，液态口服组合物包括从约0.012%到约0.933%所需组合物，或者在另一个实施方式中，从约0.033%到约0.7%。
在一些实施方式中，用于本发明方法中的组合物包括溶液或乳液，在一些实施方式中，其为水性溶液或乳液，包括安全和有效量的本发明的化合物以及任选地包括其他用于局部鼻内施用的化合物。在一些实施方式中，组合物包括从约0.01%到约10.0%w/v的对象化合物，更优选的从约0.1%到约2.0，其被用于经鼻内途径全身转运化合物。
在另一个实施方式中，通过静脉内、动脉内、或肌肉内注射液体制剂来施用药物组合物。在一些实施方式中，液体制剂包括溶液、悬浮液、分散剂、乳液、油等。在一个实施方式中，静脉内施用药物组合物，药物组合物因此被制剂成适合于静脉内施用的形式。在另一个实施方式中，动脉内施用药物组合物，药物组合物因此被制剂成适合于动脉内施用的形式。在另一个实施方式中，肌肉内施用药物组合物，药物组合物因此被制剂成适合于肌肉内施用的形式。
此外，在另一个实施方式中，将药物组合物局部施用到体表，药物组合物因此被制剂成合适于局部施用的形式。合适的局部用制剂包括凝胶、软膏、乳膏、洗剂、滴剂等。对于局部施用而言，本发明的化合物与额外的合适的治疗性药物组合，在有或没有药物载体的生理可用稀释剂中被制备并应用为溶液、悬浮液或乳剂。
在一个实施方式中，用本领域公知的方法例如传统的混合、溶解、颗粒化、制锭、磨细、乳化、包囊化、包埋（entrapping）或冻干方法生产本发明的药物组合物。
在一个实施方式中，利用一种或多种包括赋形剂和辅佐剂的生理可用载体按传统方式制剂出用于本发明的药物组合物，所述辅佐剂有助于将活性组分加工到可药用的制剂中。在一个实施方式中，制剂取决于所选的施用途径。
在一个实施方式中，在水溶液中制剂出本发明的注射液。在一个实施方式中，在生理兼容的缓冲液例如Hank溶液、Ringer溶液或生理缓冲液中制剂出本发明的注射液。在一些实施方式中，对于经粘膜施用而言，所述制剂可以使用适合于所穿透屏障的穿透剂。这些穿透剂通常是本领域已知的。
在一个实施方式中，在此所述的制剂被制剂成肠外施用例如经推注注射或连续输注。在一些实施方式中，用于注射的制剂为单位药物剂型例如安瓿或者与任选的所添加的防腐剂一起存在于多剂量容器内。在一些实施方式中，组合物是悬浮液、溶液或油性或水性载体中的乳剂，以及含有制剂物例如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂。
在一些实施方式中，组合物也包括防腐剂例如苯扎氯胺和硫柳汞等；螯合剂例如依地酸钠等；缓冲剂例如磷酸、柠檬酸和乙酸；张力剂例如氯化钠、氯化钾、凝胶、甘露醇等；抗氧化剂例如抗坏血酸、乙酰半胱氨酸、焦亚硫酸钠(sodium metabisulfote)等；芳香剂；粘度调节剂例如聚合物包括纤维素及其衍生物；聚乙烯醇以及按需调节这些水性组合物的pH值得酸和碱。在一些实施方式中，组合物也包括局麻药或其他活性物。组合物也可以被用作喷雾剂、雾化剂、滴剂等。
在一些实施方式中，用于肠外施用的药物组合物包括水溶性的活性制剂的水溶液。另外，在一些实施方式中，活性组分的悬浮液被制备成合适的基于油或水的注射悬浮液。在一些实施方式中，合适的亲脂溶剂或载体包括脂肪油例如芝麻油、或合成脂肪酸酯例如油酸乙酯、甘油三酯或脂质体。在一些实施方式中，水性注射悬浮液含有增加悬浮液粘度的物质例如羧甲基纤维素钠、山梨醇或葡聚糖。在一些实施方式中，悬浮液也含有增加活性组分的溶解度以便容许制备出高浓缩溶液的合适的稳定剂或物质。
在另一个实施方式中，可以在载体中转运活性化合物，特别是脂质体（见Langer,Science249:1527-1533(1990)；Treat et al.,in Liposomes in theTherapy of Infectious Disease and Cancer,Lopez-Berestein and Fidler(eds.),Liss,New York,pp.353-365(1989)；Lopez-Berestein,同上，pp.317-327）。
在另一个实施方式中，经可控释放系统转运的药物组合物被制剂成用于静脉输注、可植入渗透泵、经皮贴片、脂质体或其他施用模式。在一个实施方式中，使用泵（见Langer，同上；Sefton,CRC Crit.Ref.Biomed.Eng.14:201(1987)；Buchwald et al.,Surgery88:507(1980)；Saudek et al.,N.Engl.J.Med.321:574(1989)）。在另一个实施方式中，使用聚合材料。仍在另一个实施方式中，可控释放系统可以被置于治疗靶点例如脑的近段，因此只要求一部分全身剂量（见例如Goodson,in Medical Applications ofControlled Release,supra,vol.2,pp.115-138(1984)）。Langer的综述（Science249:1527-1533(1990)）中讨论了其他可控的释放系统。
在一些实施方式中，活性组分是粉末形式，在使用之前用合适的载体例如无菌的、无热源的水溶液进行重建。在一些实施方式中，组合物被制剂成用于雾化和吸入施用。在另一个实施方式中，组合物被包装于带有雾化工具的容器内。
在一个实施方式中，利用例如传统栓剂基质例如可可脂或其他甘油脂将本发明的制剂制剂成直肠内用的组合物例如栓剂或保留灌肠。
在一些实施方式中，适用于本发明的药物组合物包括其中含有获得目标目的的有效量的活性组分的组合物。在一些实施方式中，治疗有效量表示活性组分有效地预防、缓解或消除疾病的症状或延长所治疗患者的生存期的量。
在一个实施方式中，确定出治疗有效量是在本领域人员的能力范围之内。
组合物也包括防腐剂例如苯扎氯胺和硫柳汞等；螯合剂例如依地酸钠等；缓冲剂例如磷酸、柠檬酸和乙酸；张力剂例如氯化钠、氯化钾、凝胶、甘露醇等；抗氧化剂例如抗坏血酸、乙酰半胱氨酸、焦亚硫酸钠(sodium metabisulfote)等；芳香剂；粘度调节剂例如聚合物包括纤维素及其衍生物；聚乙烯醇以及按需调节这些水性组合物的pH值得酸和碱。在一些实施方式中，组合物也包括局麻药或其他活性物。组合物也可以被用作喷雾剂、雾化剂、滴剂等。
可以作为可药用载体或其组分的物质的一些实例是糖例如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉例如玉米淀粉和马铃薯淀粉；纤维素及其衍生物例如羧甲基纤维素、乙基纤维素和甲基纤维素；西黄蓍胶粉；麦芽；明胶；滑石粉；固体润滑剂例如硬脂酸和硬脂酸镁；硫酸钙；蔬菜油例如花生油、棉籽油、芝麻油、橄榄油、玉米油和可可油；多元醇例如丙二醇、甘油山梨醇、甘露醇和聚乙二醇；海藻酸；乳化剂例如TweenTM牌乳化剂；湿润剂例如十二烷基硫酸钠；色素；芳香剂；压片剂；稳定剂；抗氧化剂；防腐剂；无致热源水；等张盐；和磷酸缓冲液。对与化合物联合使用的可药用载体的选择基本取决于化合物的施用方式。在一个实施方式中，如果对象化合物是注射用的，那么可药用载体是无菌生理盐水以及血液兼容的悬浮剂，pH值被调整到约7.4。
另外，组合物还包括结合剂（例如阿拉伯胶、玉米淀粉、明胶、卡波姆、乙基纤维素、古尔胶、羟丙基纤维素、羟丙甲基纤维素、聚维酮）、崩解剂（例如玉米淀粉、马铃薯淀粉、海藻酸、二氧化硅、交联羧甲基纤维素钠、交聚维酮、古尔胶、淀粉羟乙酸钠）、各种pH值和离子强度的缓冲剂（例如Tris-HCl、乙酸、磷酸）、预防表面吸收的添加剂例如白蛋白或凝胶、去污剂（例如Tween20、Tween80、Pluronic F68、胆酸盐）、蛋白酶抑制剂、表面活性剂（例如十二烷基硫酸钠）、渗透增强剂、增溶剂（例如甘油、聚乙二醇）、抗氧化剂（例如抗坏血酸、焦亚硫酸钠、丁羟茴醚）、稳定剂（例如羟丙基纤维素、羟丙甲基纤维素）、增粘剂（例如卡波姆、二氧化硅胶体、乙基纤维素、古尔胶）、甜味剂（例如阿斯帕坦、柠檬酸）、防腐剂（例如硫柳汞、苯甲醇、对羟基苯甲酸）、润滑剂（例如硬脂酸、硬脂酸镁、聚乙二醇、十二烷基硫酸钠）、助流剂（例如二氧化硅胶体）、成形剂（例如邻苯二甲酸二乙酯、柠檬酸三乙酯）、乳化剂（例如卡波姆、羟丙基纤维素、十二烷基硫酸钠）、聚合物涂层（例如泊洛沙姆(poloxamers)或poloxamines）、和成膜剂（例如乙基纤维素、丙烯酸、聚甲基丙烯酸酯）和/或佐剂。
用于糖浆、酏剂、乳剂和悬浮液的常用载体组分包括乙醇、甘油、聚丙二醇、聚乙二醇、液体蔗糖、山梨醇和水。对于悬浮液而言，常用的悬浮剂包括甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、纤维素（例如AvicelTM、RC-591）、黄蓍胶、和海藻酸钠；常用湿润剂包括卵磷脂和聚氧化乙烯山梨聚糖（例如聚山梨醇80）。常用防腐剂包括对羟基苯甲酸甲酯和苯甲酸钠。在另一个实施方式中，口服液体组合物也含有一种或多种组分例如在此所述的甜味剂、芳香剂和色素。组合物也包括活性物质整合到多聚体化合物例如聚乳酸、聚羟乙酸、水凝胶等的颗粒制剂内或者整合到脂质体、微乳剂、微粒、单层或多层载体、红细胞血影或球形体内。这些组合物将影响着物理状态、溶剂度、稳定性、体内释放率和体内清除率。
本发明也涉及经聚合物（例如泊洛沙姆或poloxamines）及与针对组织特异性受体、配体或抗原的抗体偶合的或者与组织特异性受体的配体偶合的化合物涂层的颗粒组合物。
在一些实施方式中，通过与水溶性聚合物例如聚乙二醇、聚乙二醇和聚丙二醇的共聚体、羧甲基纤维素、葡聚糖、聚乙烯醇、聚维酮或聚脯氨酸的共价连接修饰化合物。在另一个实施方式中，经修饰的化合物比相应的未修饰化合物在静脉注射后表现出显著更长的血液半衰期。在一个实施方式中，修饰也增加了化合物在水溶液中的溶解度、消除了聚集、增强了化合物的物理和化学的稳定性，以及极大地降低了化合物的免疫原性和反应性。在另一个实施方式中，通过施用比未修饰化合物更少频率或更低剂量的这种聚合物-化合物加合物(abduct)可以获得所需的体内生物学活性。
在一些实施方式中，最初可以从体外检测法估计出需要准备的有效量或剂量。在一个实施方式中，可以在动物模型中配置剂量，这些信息可以被用于更准确地测定出人体中的有用剂量。
在一个实施方式中，用体外、细胞培养物或试验动物的标准药物方法可以确定出在此所述的活性组分的毒性和治疗疗效。在一个实施方式中，从这些体外和细胞培养检测法及动物研究中获得的数据可以被用于制定出用于人体的剂量范围。在一个实施方式中，每个医生可以根据患者的病变选择准确的制剂、施用途径和剂量（见例如Fingl,et al.,(1975)"ThePharmacological Basis of Therapeutics",Ch.1p.1）。
在一个实施方式中，根据所治疗的病变的严重度和应答性，剂量可以是单次或多次施用，治疗疗程持续数天到数周或者直到达到治愈或者实现了疾病状态的减轻。
在一个实施方式中，所施用的组合物的量显然要取决于所治疗的对象、痛苦的严重度、施用方式和处方医生的判断等。
在一个实施方式中，也可以制备出包括被制剂于兼容的药物载体中的本发明的制剂的组合物，所述组合物被放置于合适的载体内，并标记出用于治疗所标出的病变。
在一个实施方式中，本发明的组合物被放入包装或分注装置例如FDA认证的试剂盒内，其含有一个或多个含有活性组分的单位药物剂型。在一个实施方式中，包装例如包括金属箔或塑料箔例如透明包装。在一个实施方式中，包装或分注装置附带有施用说明书。在一个实施方式中，包装或分注装置提供有与容器相连的管理药品的生产、使用或销售的政府部门认可形式的通知，所述通知是政府部分对组合物形式或人体或兽医施用的认证的反映，在一个实施方式中，这种通知是经美国食品药品管理局认证的标注用于处方药物的通知或者是所认证的产品插页。
在一个实施方式中，要明白可以给个体提供本发明的多肽以及额外的活性剂，以便获得比单独药物治疗本身更高的治疗作用。在另一个实施方式中，对与组合治疗相关的不良副作用采取措施（例如互补药物的剂量和选择）。
在了解下面的实施例之后，本发明的其他的目的、优点和新特点对于本领域一般熟练人员是显而易见的，这些实施例不是限制性的。另外，在上面所述的以及在下面章节的权利要求书中的权利要求的本发明的各种实施方式和部分中的每个实施方式和部分都可以在下面的实施例中找到试验支持。
实施例
在此所用的名词以及本发明所用的实验室方法一般都包括分子技术、生物化学技术、微生物学技术和重组DNA技术。这些技术在文献中有着充分的解释说明。见例如"Molecular Cloning:A laboratory Manual"Sambrook et al.,(1989)；"Current Protocols in Molecular Biology"Volumes I-III Ausubel,R.M.,ed.(1994)；Ausubel et al.,"Current Protocols in MolecularBiology",John Wiley and Sons,Baltimore,Maryland(1989)；Perbal,"APractical Guide to Molecular Cloning",John Wiley&Sons,New York(1988)；Watson et al.,"Recombinant DNA",Scientific American Books,New York；Birren et al.(eds)"Genome Analysis:A Laboratory Manual Series",Vols.1-4,Cold Spring Harbor Laboratory Press,New York(1998)；美国专利4,666,828、4,683,202、4,801,531、5,192,659和5,272,057给出的方法学；"Cell Biology:A Laboratory Handbook",Volumes I-III Cellis,J.E.,ed.(1994)；"Culture of Animal Cells-A Manual of Basic Technique"by Freshney,Wiley-Liss,N.Y.(1994),Third Edition；"Current Protocols in Immunology"Volumes I-III Coligan J.E.,ed.(1994)；Stites et al.(eds),"Basic and ClinicalImmunology"(8th Edition),Appleton&Lange,Norwalk,CT(1994)；Mishelland Shiigi(eds),"Selected Methods in Cellular Immunology",W.H.Freemanand Co.,New York(1980)；在专利和科学文献中广泛的描述了可获得的免疫检测法，见例如美国专利3,791,932、3,839,153、3,850,752、3,850,578、3,853,987、3,867,517、3,879,262、3,901,654、3,935,074、3,984,533、3,996,345、4,034,074、4,098,876、4,879,219、5,011,771和5,281,521；"Oligonucleotide Synthesis"Gait,M.J.,ed.(1984)；“Nucleic AcidHybridization"Hames,B.D.,and Higgins S.J.,eds.(1985)；"Transcription andTranslation"Hames,B.D.,and Higgins S.J.,eds.(1984)；"Animal CellCulture"Freshney,R.I.,ed.(1986)；"Immobilized Cells and Enzymes"IRLPress,(1986)；"A Practical Guide to Molecular Cloning"Perbal,B.,(1984)和"Methods in Enzymology"Vol.1-317,Academic Press;"PCR Protocols:AGuide To Methods And Applications",Academic Press,San Diego,CA(1990)；Marshak et al.,"Strategies for Protein Purification and Characterization-A Laboratory Course Manual"CSHL Press(1996)；在此通过引用将全部内容并入本申请。在本说明书的全文中都提供了其他常用的参考文献。
实施例1：EPO构建体的产生
材料和方法：
表达载体pCI-dhfr的构建：pCI-neo哺乳动物表达载体购自Promega（编号E1841）。载体含有CMV IE增强子/启动子和新霉素磷酸转移酶基因。pSV2-dhfr克隆购自ATCC（编号37146）。质粒含有小鼠dhfr基因。如下进行pCI-dhfr载体的构建：
a.用限制性内切酶BglII消化pSV2-dhfr质粒（dhfr基因的3’末端）。用DNA聚合酶I大（Klenow）片段填充5’突出端，形成平端。然后用限制性内切酶AvrII消化DNA（dhfr基因的5’末端）。分离出dhfr基因（AvrII平端）片段。
b.用限制性内切酶BstXI消化pCI-neo载体（neo基因的3’末端）。用DNA聚合酶I大（Klenow）片段去除3’突出端，形成平端。然后用限制性内切酶AvrII消化DNA（neo基因的5’末端）。分离出表达载体（AvrII平端）。
c.将dhfr基因连接到pCI载体内，形成含有dhfr基因的表达载体（pCI-dhfr）。
hEPO-CTP变体的构建：在不同位置上融合含有hCGβ亚基的C末端肽（CTP）的盒基因和人EPO（NP_000790.2）的编码序列。如图1A-D所示，构建出4个EPO-CTP变体。将proEPO信号肽用于构建分泌性EPO-CTP变体。将含XbaI-NotI片段的Epo序列连接到本发明的pCI-dhfr表达载体内。
下面的表2总结了用于构建本发明的含CTP多肽的引物序列。
表2
EPO-1701-1-p17-6（Epo-1–SEQ ID NO:1）：用利用上面引物（SEQID NOs:7-16）的PCR构建出702bp的XbaI–NotI片段。然后将含XbaI–NotI PCR片段的Epo-ctp序列连接到pCI-dhfr表达载体内。
EPO-2701-2-p24-2(Epo-2-SEQ ID NO:2):用701-1-p17-6的XbaI/ApaI片段取代pCI-dhfr-401-2-p21-2（hGH-ctpx2）的XbaI/ApaI片段（hGH-ctp），产生Epo-ctpx2。
EPO-4-701-4-p42-1(Epo-4–SEQ ID NO:4):首先，在XbaI/SspI消化之后，用利用引物1和17的PCR构建出来自pCI-dhfr-EPO-ctp（701-1-p17-6）的片段。形成含有EPO和部分5’CTP的片段。其次，通过以pGT123-hEpo作为模板以及利用引物10和引物11的重叠PCR构建出新片段。SspI/NotI消化形成含有3’部分CTP和Epo的片段。将两个片段都连接到pCI-dhfr内，构建出p701-4-p42-1克隆。
EPO-3-p56-6(Epo-3SEQ ID NO:3):引物购自Sigma-Genosys。利用引物15（SEQ ID NO:12）和引物2R（SEQ ID NO:13）以及pCI-dhfr-EPO-ctp x2（701-2-p24-2）的质粒DNA作为模板进行PCR反应。作为PCR扩增的结果，形成了486bp产物，并将其连接到TA克隆载体（Invitrogen，编号K2000-01）内。分离出含StuI–NotI片段的*Epo-ctp x2序列（209bp）。
进行3个序贯的PCR反应。利用引物1（SEQ ID NO:7）和引物23R（SEQ ID NO:14）以及pGT123-epo-ctp的质粒DNA作为模板进行第一个PCR反应；作为PCR扩增的结果，形成了80bp产物（信号肽）。
利用引物24（SEQ ID NO:15）和引物11R（SEQ ID NO:11）以及701-4-p42-1的质粒DNA作为模板进行第二个PCR反应；作为PCR扩增的结果，形成了610bp产物。
利用引物1（SEQ ID NO:7）和引物11R（SEQ ID NO:11）以及先前两个反应产物的混合物作为模板进行第三个PCR反应；作为PCR扩增的结果，形成了700bp产物并分离出XbaI-StuI片段。将两个片段（XbaI-StuI和StuI–NotI）插入到表达载体pCI-dhfr的真核细胞表达载体内（三次连接），产生701-3-p56-6克隆。
EPO-5-p91-4(Epo-5SEQ ID NO:5-(ctp-Epo):从Sigma-Genosys定制引物。利用引物1（SEQ ID NO:7）和引物11R（SEQ ID NO:11）以及pCI-dhfr-ctp-EPO-ctp x2（701-3-p56-6）的质粒DNA作为模板进行PCR反应；作为PCR扩增的结果，形成了670bp产物，并将其连接到TA克隆载体（Invitrogen，编号K2000-01）内。将含XbaI–NotI片段的ctp-Epo序列连接到我们的表达载体pCI-dhfr内，产生701-5-p91-4克隆。
EPO-6-p90-1(Epo-6SEQ ID NO:6-(ctp-Epo-ctp):进行三个PCR反应。利用引物1（SEQ ID NO:7）和引物38R（SEQ ID NO:16）以及701-3-p56-6的质粒DNA作为模板进行第一个PCR反应；作为PCR扩增的结果，形成了400bp产物。
利用引物15（SEQ ID NO:12）和引物2R（SEQ ID NO:13）以及701-1-p17-6的质粒DNA作为模板进行第二个PCR反应；作为PCR扩增的结果，形成了390bp产物。
利用引物1（SEQ ID NO:7）和引物2R（SEQ ID NO:13）以及先前两个反应产物的混合物作为模板进行最后一个PCR反应；作为PCR扩增的结果，形成了787bp产物并将其连接到TA克隆载体（Invitrogen，编号K2000-01）内。将含XbaI–NotI片段的ctp-Epo-ctp序列连接到真核细胞表达载体pCI-dhfr内，产生701-6-p90-1克隆。
实施例2：EPO-CTP多肽的表达和分离
材料和方法
DNA转染和克隆选择：利用FuGENE6试剂（FuGENE转染剂-Roche编号815091001）用含有EPO-CTP变体的pCI-DHFR表达载体转让DG44细胞。在转染后48个小时时，稀释细胞并将其按每孔50到200个细胞种植在选择培养基（CD DG44培养基w/o HT（Gibco:Scotland part:#07990111A）Sku num.:ME060027加有8mM L-谷氨酰胺（BiologicalIndustries；编号03-020-1A）以及18mL/L10%Pluronic F-68溶液（Gibco：编号40040-032)）中。利用商品化ELISA筛选出具有最高蛋白产量的选择克隆。将每种变体的3到5个生产克隆冷冻作为备用细胞库。所选的每种变体的克隆适合于在更大规模培养物中生长，最大到定轨摇晃平台上的1L烧瓶内培养。收集上清液，并用ELISA、SDS-PAGE和免疫印迹分析。在倒掉一部分后，将含蛋白的上清液冷冻，直到进一步使用。
细胞培养：将DG44细胞保持在37℃、湿化8%CO2孵育器的具有HT（Gibco编号12610-010）以及加有8mM L-谷氨酰胺（BiologicalIndustries编号03-020-1A）和18mL/L的10%Pluronic F-68溶液（Gibco编号240040-032）的DG44培养基中。将转染克隆保持在没有HT、次黄嘌呤和胸腺嘧啶以及有Pluronic酸和L-谷氨酰胺的DG44基础培养基中。
样品制备：收集、过滤并用ELISA分析样品，以便确定出蛋白浓度。用SDS-PAGE和免疫印迹确定出纯度和身份。在ELISA之后，确定出样品浓度，并用PBS对溶液进行透析。在倒掉一部分液体之后，将含蛋白的上清液保存在-20℃直到进一步使用。
免疫印迹：将样品在非变性的15%SDS-聚丙烯酰胺凝胶上电泳。容许凝胶在25mM Tris和192mM甘氨酸的20%（体积/体积）甲醇溶液中平衡10分钟。利用Mini Trans-Blot电泳槽（Biorad Laboratories,Richmond,CA）（250mA，3h）将蛋白转移到0.2μm孔径的硝酸纤维素膜（Sigma,Saint Louis,MO）上。将硝酸纤维素膜在室温下5%脱脂奶粉中孵育2个小时。将膜与EPO抗血清（1:1000滴度）在4℃孵育过夜，随后在含0.1%Tween的PBS中连续洗涤3次（每次洗涤10分钟）。将膜与和辣根过氧化物酶（HRP）缀合的二抗（Zymed,San Francisco,CA）在室温下孵育2个小时，随后洗涤3次。最后，将硝酸纤维素膜与增强化学发光底物（ECL）（Pierce,Rockford,IL）反应5分钟，用华特纸片干燥，并暴露于X线胶片。
结果
下面的表3显示了从5种所选克隆中获得的各种CTP修饰的EPO形式的浓度以及它们的用于进一步测试的制剂。
表3
1.用ELISA（Quantikine IVD Epo ELISA,DEP00,R&D Systems）测定出EPO变体的母液浓度。
2.样品EPO-0、2和4被假上清液稀释成105IU/ml（调整为Epo3滴度），EPO0=在与CTP修饰EPO相同的系统中所表达的野生型EPO。
3.所有样品被浓缩并经PBS超滤透析到终浓度为180IU/ml。
用如图2所示的免疫印迹检测所有蛋白。
实施例3：本发明的EPO-CTP多肽的生物学活性
TF-1生物学活性测试表示EPO-CTP变体结合其受体然后刺激造成细胞增殖的活性的能力。因此，该测试被作为评价本发明的EPO-CTP多肽的生物学效力的第一个步骤。
材料和方法
细胞增殖分析：用细胞株TF-1进行增殖分析，测定出作为EPO功能的MTT细胞株水平（Kitamura et al.,Kitamura,T.et al.(1989)Establishmentand characterization of a unique human cell line that proliferates；HammerlingU.et al.In vitro bioassay for human erythropoietin based on proliferativestimulation of an erythroid cell line and analysis of carbohydrate-dependentmicroheterogeneity.Journal of Pharm.Biomed.Analysis14(11):1455-1469(1996)）。洗涤指数生长的TF-1细胞两次，并按约104细胞/孔铺板到微滴定板上，在具有滴定稀释系列的EPO（Recormon）、EPO标准物（NIBSC标准物）、rhEPO（MOD-7010）、MOD-701变体（EPO-1、EPO-2、EPO-3和EPO-4）的基础培养基中孵育48个小时。在检测细胞增殖前4个小时，向孔内加入MTT试剂，并用ELISA阅读器测定出吸光度。从Eprex（人体激素的Epoetin（EPO）人造形式）剂量效应标准曲线中得到每个变体蛋白的计算出的蛋白浓度。
结果
用Epo依赖性细胞株人红白血病TF-1（DSMZ细胞库）确定出EPO肽的体外生物学活性（Dong et al.,Biochemical and Biophysical ResearchCommunications,Volume339,Issue1,6January2006,Pages380-385）。进行MTT检测（Hammerling U.et al.In vitro bioassay for human erythropoietinbased on proliferative stimulation of an erythroid cell line and analysis ofcarbohydrate-dependent microheterogeneity.Journal of Pharm.Biomed.Analysis14(11):1455-1469(1996)），并用国际标准物（NIBSC的Epoampoule code87/684）校准用于产生标准曲线的EPO实验室标准物。
下面的表4总结了结果。结果说明用2和0.5IU/ml浓度的EPO3和EPO0获得了最高的效力。
表4
结论
如上面的表4所示，EPO-CTP多肽得到了不同水平的效力，说明了受体结合方面的差异。EPO-CTP多肽在CTP盒的数目以及其所融合的位置方面都有所不同。EPO-1和EPO-2在EPO的C末端含有一个CTP序列或者2个CTP序列，而EPO-3在其N末端含有1个CTP以及在C末端含有2个CTP序列。EPO-4是经CTP序列连接的两个EPO分子的二聚体。EPO-3表现出与WT-EPO相当相似的效力水平，而EPO-1和EPO-4只有约50%的WT-EPO水平，EPO-2效力甚至不到50%。
实施例4：在小鼠模型中评价本发明的EPO-CTP多肽
进行下面的实施例，以便比较本发明的EPO-CTP多肽和商品化EPO的生物学活性。
材料和方法
动物：
研究试验设计：如下面表5所列的设计试验。
表5
动物处理：通过静脉推注给所有动物都施用对照或本发明的测试EPO肽。注射体积不超过10ml/kg。试验时间为22天。每天都进行发病率和死亡率的检查。
网织红细胞计数和红细胞压积（hct）检测：在第1次相应的载体或治疗物注射之后的第2天和14个小时时，对所有测试动物进行网织红细胞计数。在开始最初的处理（“0”基线对照）以及在第1次载体或治疗物注射后的24个小时对所有动物各进行1次hct检测，此后每周检测两次，直到研究结束（第22天）。
结果
图3到5所列的红细胞压积结果显示与EPO1、EPO2、Recormon1、Recormon3、rhEPO和载体相比较，EPO3具有最高的相对于基线的红细胞压积变化。下面的表6总结了经EPO-CTP多肽处理小鼠的网织红细胞百分比的结果。这些结果说明EPO-3是最强大促红细胞产生的刺激物。
表6
结论
设计了体内试验测定出两个参数：第一个是测定促红细胞产生参数例如网织红细胞百分百和血红蛋白、RBC和红细胞压积水平的增加。第二个是测定经每周注射1次的每种变体的生物学活性的持久性。
在正常小鼠中观察到了EPO在其刺激促红细胞产生的能力方面的优越性能。
实施例5：本发明的多肽与Aranesp的生物学活性的比较
进行下面的试验，以比较单次推注剂量的一些本发明的EPO-CTP多肽、商品化EPO和Aranesp的生物学活性。Aranesp是商品化的长效重组促红细胞生成素，其中引入了两个位点突变，形成了两个额外的N糖基化位点以及所整合的唾液酸残基数目的增加。
材料和方法
动物
种类/株：约20到25g的雌性CD-1小鼠
每组动物数：n=3
研究的试验设计：下面的表7总结了试验设计。
表7
动物处理：通过静脉推注给所有动物都施用对照或本发明的测试EPO肽。注射体积不超过10ml/kg。试验时间为14天。每天都进行发病率和死亡率的检查。
网织红细胞计数和红细胞压积（hct）检测：如上所述的进行网织红细胞计数红细胞压积检测。
结果
图6到9给出了结果。在单次静脉注射15μg/kg EPO3之后，促红细胞生成素相关的所有三个血液参数即网织红细胞数、血红蛋白水平和红细胞压积相对于同样注射剂量的rhEPO或Aranesp所得到的数值都有所提高。
实施例6：本发明的EPO-CTP多肽与Aranesp的药代动力学的比较
进行下面的试验，以便比较本发明的EPO-CTP多肽、商品化EPO和Aranesp的药代动力学。
材料和方法
分析血清样本，以便测定出每种样品的特异浓度水平。用WinNonLin非代谢区分析处理浓度和时间点数据。所测定的参数包括AUC、CL、Ke、t1/2、Cmax、Tmax、和Vdz。
用两个ELISA试剂盒平行测定血清浓度。用StemCell ELISA试剂盒测定EPO-3血清浓度，同时用R&D system ELISA试剂盒测定出EPO-0和Aranesp血清浓度。
结果
表8总结了药代动力学分析的结果。这些结果显示EPO3表现出了良好的所示的药代动力学性能测定值例如AUC测定值、t1/2和Cmax。EPO-0、EPO-3和Aranesp的Tmax测定值相等。
表8
参数 单位 EPO-0 EPO-3 Aranesp
AUClast hr*mIU/mL 31739 306072 178661
CL^ mL/hr/kg 1.1152 0.2188 0.1207
Ke 1/hr 0.157 0.0529 0.0639
t1/2 hr 4.4139 13.1141 10.84
Cmax mIU/mL 10766 16466 13266
Tmax Hr 0.25 0.25 0.25
Vdz mL/kg 7.1017 4.1394 1.8877
图9图解说明了血清浓度分析的结果。这些结果表明血清中的EPO-3在约190个小时之后仍是可测的。血清中的EPO-0和Aranesp分别在约140个小时和50个小时之后是不可测的。
结论
从CD-1小鼠血液中清除EPO-3（MOD-7013）的速度要明显比rhEPO或Aranesp的清楚速度更慢。相应的计算出的半衰期时间是：rhEPO-4.41h；Aranesp-0.84h；和MOD-7013-13.11h。
实施例7：hGH构建体的产生
材料和方法
合成了四种hGH克隆（20kD蛋白的变体）。将来自四种变体的含hGH序列的XbaI-NotI片段连接到先前经XbaI-NotI消化过的真核表达载体pCI-dhfr内。制备出4种克隆（401-0、1、2、3和4）的DNA。也合成了来自22KD蛋白的另一种部分hGH克隆（1到242bp）（0606114）。从Sigma-Genosys订购引物。下面的表9给出了用于产生本发明的hGH-CTP多肽的引物序列。
表9
402-0-p69-1(hGH)SEQ ID NO:36的构建：MOD-4020是野生型重组人生长激素（没有CTP），其被制备作为下面所述试验中的对照。
进行三个PCR反应。用引物25和引物32R以及0606114（hGH1-242bp的部分克隆）的质粒DNA作为模板实施第一个反应；作为PCR扩增的结果形成了245bp产物。
用引物33和引物4R以及401-0-p57-2的质粒DNA作为模板实施第二个反应；作为PCR扩增的结果形成了542bp产物。
用引物25和引物4R以及先前两个反应产物的混合物作为模板实施最后一个反应；作为PCR扩增的结果形成了705bp产物，并将其连接到TA克隆载体（Invitrogen，编号K2000-01）内。将含hGH-0序列的XbaI-NotI片段连接到真核表达载体pCI-dhfr内。将该载体转染到DG-44CHO细胞内。细胞生长在无蛋白培养基中。
402-1-p83-5(hGH-CTP)-SEQ ID NO:37and402-2-p72-3(hGH-CTPx2)–SEQ ID NO:38的构建：MOD-4021是重组人生长激素，其与1个拷贝的人绒毛膜促性腺激素β链的C末端肽（CTP）融合。MOD-4021的CTP盒被连接到C末端（1个盒）。MOD-4022是重组人生长激素，其与2个拷贝的人绒毛膜促性腺激素β链的C末端肽（CTP）融合。MOD-4021的2个CTP盒都被连接到C末端（2个盒）。
用与构建Hgh-0的相同方式进行hGH-CTP和hGH-CTP-CTP的构建。pCI-dhfr-401-1-p20-1（hGH*-ctp）和pCI-dhfr-401-2-p21-2（hGH*-ctp x2）都被用作第二个PCR反应中的模板。
在DG-44CHO细胞中表达MOD-4021和MOD-4022。细胞在无蛋白的培养基中生长。MOD-4021的分子量是30.5Kd，因为hGH的分子量为～22Kd，而每个“CTP盒”为总分子量贡献了8.5Kd（见图10）。MOD-4022的分子量为～39Kd（见图10）。
402-3-p81-4(CTP-hGH-CTP-CTP)-SEQ ID NO:39和402-4-p82-9(CTP*hGH-CTP-CTP)–SEQ ID NO:40的构建：MOD-4023是重组人生长激素，其与3个拷贝的人绒毛膜促性腺激素β链的C末端肽（CTP）融合。MOD-4021的3个CTP盒被连接到N末端（1个盒）和C末端（2个盒）。MOD-4024是重组人生长激素，其与1个截短拷贝以及2个完整拷贝的人绒毛膜促性腺激素β链的C末端肽（CTP）融合。MOD-4021的截短的CTP盒被连接到N末端以及2个CTP盒被连接到C末端（2个盒）。
进行三个PCR反应。用引物25和引物35R以及p401-3-p12-5或401-4-p22-1的质粒DNA作为模板实施第一个反应；作为PCR扩增的结果形成了265或220bp产物。用引物34和引物37R以及TA-hGH-2-q65-1的质粒DNA作为模板实施第二个反应；作为PCR扩增的结果形成了695bp产物。用引物25和引物37R以及先前两个反应产物的混合物作为模板实施最后一个反应；作为PCR扩增的结果形成了938或891bp产物，并将其连接到TA克隆载体（Invitrogen，编号K2000-01）内。将含hGH-0序列的XbaI-NotI片段连接到我们的真核表达载体pCI-dhfr内。
在DG-44CHO细胞中表达MOD-4023和MOD-4024。细胞在无蛋白的培养基中生长。MOD-4023的分子量是～47.5Kd（见图10）。MOD-4024的分子量为～43.25Kd（见图10）。
402-6-p95a-8(CTP-hGH-CTP)-SEQ ID NO:41的构建：用与构建hGH-3相同的方式进行hGH-6的构建。pCI-dhfr-402-1-p83-5（hGH-ctp）被用作第二个PCR反应的模板。
402-5-p96-4(CTP-hGH)-SEQ ID NO:42的构建：用引物25和引物39R以及pCI-dhfr-ctp-EPO-ctp(402-6-p95a-8)的质粒DNA作为模板进行PCR反应，作为PCR扩增的结果形成了763bp产物，并将其连接到TA克隆载体（Invitrogen，编号K2000-01）内。将含cpt-hGH序列的XbaI-NotI片段连接到我们的真核表达载体pCI-dhfr内。以产生402-5-p96-4克隆。
实施例8：本发明的hGH-CTP多肽的体内生物学活性测试
进行下面的试验，以便测试hGH-CTP多肽潜在的长效生物学活性，并与商品化的重组人GH和MOD-4020进行比较。
材料和方法
雌性垂体切除大鼠（60到100g）接受每周一次皮下注射21.7μg hGH-CTP多肽或者每日皮下注射一次5μg对照的商品化rhGH。
在治疗前、第一次注射后24个小时、然后每隔一日直到第21天试验结束时都给所有动物测量体重。每个点都表示组的平均体重增加百分比（（d0天体重-最后1天体重）/d0天体重）。依据每日注射一次商品化hGH标准化平均体重增加。表10给出了治疗方案。
表10
结果
图11给出了结果。这些结果显示与商品化rhGH诱导100%体重增加相比较，MOD-4023（SEQ ID NO:39）和MOD-4024（SEQ ID NO:40）诱导出了超过120%体重增加。
结论
3个每周一次剂量（注射日：1、7和13天）的21.7μg MOD-4023（SEQ ID NO:39）和MOD-4024（SEQ ID NO:40）诱导垂体切除大鼠的体重增加比注射相同累计剂量的商品化rhGH（每日施用一次5μg剂量共13天）所诱导的体重增加多30%。

Claims (25)

1.一种包含感兴趣的肽的多肽，其中第一个绒毛膜促性腺激素羧基末端肽与所述感兴趣的肽的氨基末端连接，且第二个和第三个绒毛膜促性腺激素羧基末端肽与所述感兴趣的肽的羧基末端连接，其中所述绒毛膜促性腺激素羧基末端肽包含氨基酸序列SSSSKAPPPS，并且其中所述感兴趣的肽是干扰素。
2.权利要求1的多肽，其中所述干扰素是干扰素-β(INF-β)。
3.权利要求1的多肽，其中所述感兴趣的肽是糖基化的。
4.权利要求1的多肽，其中所述感兴趣的肽是非糖基化的。
5.权利要求1-4任一项的多肽，其中所述干扰素的序列包含选自表1所示序列的氨基酸序列。
6.权利要求1-4任一项的多肽，其中所述干扰素的序列是SEQ ID NO:24。
7.权利要求1-6任一项的多肽，其中至少一个绒毛膜促性腺激素羧基末端肽是截短的，且其中所述截短的绒毛膜促性腺激素羧基末端肽包含至少一个糖基化位点。
8.权利要求1-7任一项的多肽，其中至少一个绒毛膜促性腺激素羧基末端肽是糖基化的。
9.权利要求1-8任一项的多肽，其进一步包含信号肽。
10.权利要求9的多肽，其中所述信号肽包含选自SEQ ID NO:19或SEQ ID NO:26所示序列的氨基酸序列。
11.权利要求1-10任一项的多肽，其中至少一个绒毛膜促性腺激素羧基末端肽通过连接物与所述干扰素连接。
12.权利要求11的多肽，其中所述连接物是肽键。
13.一种多核苷酸，其编码权利要求1的多肽。
14.权利要求13的多核苷酸，其中所述多肽进一步包含信号肽。
15.权利要求14的多核苷酸，其中所述信号肽包含选自SEQ ID NO:19或SEQ ID NO:26所示序列的氨基酸序列。
16.一种表达载体，其包含权利要求13-15任一项的多核苷酸。
17.一种细胞，其包含权利要求16的表达载体。
18.一种药物组合物，其包含权利要求1-12任一项的多肽、13-15任一项的多核苷酸、权利要求16的表达载体、权利要求17的细胞，或其组合。
19.权利要求1-12任一项的多肽或13-15任一项的多核苷酸在制备用于治疗对象中病毒性或增殖性病变的药物组合物中的用途。
20.权利要求19的用途，其中至少一个绒毛膜促性腺激素羧基末端肽包含选自SEQ ID NO:17-18所示序列的氨基酸序列。
21.一种提高感兴趣的肽的生物学半衰期并保持其生物学活性的方法，其包括将第一个绒毛膜促性腺激素羧基末端肽与感兴趣的肽的氨基末端连接以及将第二个和第三个绒毛膜促性腺激素羧基末端肽与感兴趣的肽的羧基末端连接的步骤，从而提高所述感兴趣的肽的生物学半衰期，其中所述绒毛膜促性腺激素羧基末端肽包含氨基酸序列SSSSKAPPPS，并且其中所述感兴趣的肽是干扰素。
22.权利要求21的方法，其中至少一个绒毛膜促性腺激素羧基末端肽包含选自SEQ ID NO:17-18所示序列的氨基酸序列。
23.一种在分离的细胞中产生干扰素的方法，其包括以包含编码多肽的编码部分的表达载体转染所述细胞的步骤，所述多肽由干扰素、两个与所述干扰素羧基末端连接的绒毛膜促性腺激素羧基末端肽和一个与所述干扰素氨基末端连接的绒毛膜促性腺激素羧基末端肽组成，其中所述绒毛膜促性腺激素羧基末端肽包含氨基酸序列SSSSKAPPPS，从而在分离的细胞中产生干扰素。
24.权利要求23的方法，其中所述多肽进一步包含信号肽。
25.权利要求24的方法，其中所述信号肽包含选自SEQ ID NO:19或SEQ ID NO:26所示序列的氨基酸序列。
CN201410213485.2A 2006-02-03 2007-02-05 长效多肽及其生产和施用方法 Pending CN104292340A (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US76476106P 2006-02-03 2006-02-03
US60/764,761 2006-02-03

Related Parent Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN200780012026.6A Division CN101595122B (zh) 2006-02-03 2007-02-05 长效多肽及其生产和施用方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN104292340A true CN104292340A (zh) 2015-01-21

Family

ID=38345655

Family Applications (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201410213485.2A Pending CN104292340A (zh) 2006-02-03 2007-02-05 长效多肽及其生产和施用方法
CN201410214401.7A Active CN104804096B (zh) 2006-02-03 2007-02-05 长效多肽及其生产和施用方法
CN200780012026.6A Expired - Fee Related CN101595122B (zh) 2006-02-03 2007-02-05 长效多肽及其生产和施用方法

Family Applications After (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201410214401.7A Active CN104804096B (zh) 2006-02-03 2007-02-05 长效多肽及其生产和施用方法
CN200780012026.6A Expired - Fee Related CN101595122B (zh) 2006-02-03 2007-02-05 长效多肽及其生产和施用方法

Country Status (16)

Country Link
US (7) US7553940B2 (zh)
EP (8) EP3663312A1 (zh)
JP (5) JP5905185B2 (zh)
KR (5) KR101651977B1 (zh)
CN (3) CN104292340A (zh)
AU (1) AU2007215466C1 (zh)
CA (2) CA2874280A1 (zh)
DK (3) DK2471807T3 (zh)
ES (5) ES2663365T3 (zh)
HK (3) HK1138854A1 (zh)
HU (1) HUE048307T2 (zh)
IL (5) IL193198A (zh)
PL (2) PL2471807T3 (zh)
PT (2) PT3202779T (zh)
SI (3) SI3202779T1 (zh)
WO (2) WO2007092252A2 (zh)

Families Citing this family (36)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9453251B2 (en) 2002-10-08 2016-09-27 Pfenex Inc. Expression of mammalian proteins in Pseudomonas fluorescens
KR20130019457A (ko) 2004-07-26 2013-02-26 다우 글로벌 테크놀로지스 엘엘씨 균주 조작에 의한 개선된 단백질 발현 방법
US20150038413A1 (en) 2006-02-03 2015-02-05 Opko Biologics Ltd. Long-acting polypeptides and methods of producing and administering same
US8759292B2 (en) 2006-02-03 2014-06-24 Prolor Biotech, Llc Long-acting coagulation factors and methods of producing same
US7553940B2 (en) * 2006-02-03 2009-06-30 Modigene Inc Long-acting EPO polypeptides and derivatives thereof and methods thereof
US8304386B2 (en) * 2006-02-03 2012-11-06 Prolor Biotech, Inc. Long-acting growth hormone and methods of producing same
US9249407B2 (en) 2006-02-03 2016-02-02 Opko Biologics Ltd. Long-acting coagulation factors and methods of producing same
US10221228B2 (en) 2006-02-03 2019-03-05 Opko Biologics Ltd. Long-acting polypeptides and methods of producing and administering same
US8048849B2 (en) 2006-02-03 2011-11-01 Modigene, Inc. Long-acting polypeptides and methods of producing same
US8946155B2 (en) 2006-02-03 2015-02-03 Opko Biologics Ltd. Long-acting polypeptides and methods of producing and administering same
US8476234B2 (en) * 2006-02-03 2013-07-02 Prolor Biotech Inc. Long-acting coagulation factors and methods of producing same
US9458444B2 (en) 2006-02-03 2016-10-04 Opko Biologics Ltd. Long-acting coagulation factors and methods of producing same
US8450269B2 (en) * 2006-02-03 2013-05-28 Prolor Biotech Ltd. Long-acting growth hormone and methods of producing same
US10351615B2 (en) 2006-02-03 2019-07-16 Opko Biologics Ltd. Methods of treatment with long-acting growth hormone
US20140113860A1 (en) 2006-02-03 2014-04-24 Prolor Biotech Ltd. Long-acting polypeptides and methods of producing and administering same
US8048848B2 (en) * 2006-02-03 2011-11-01 Prolor Biotech Ltd. Long-acting interferons and derivatives thereof and methods thereof
JP2010510794A (ja) 2006-11-28 2010-04-08 ハナル ファーマシューティカル カンパニー リミテッド 修飾型エリスロポエチンポリペプチド及びこの治療用用途
CN101688213A (zh) 2007-04-27 2010-03-31 陶氏环球技术公司 用于快速筛选微生物宿主以鉴定某些在表达异源蛋白质方面具有改善的产量和/或质量的菌株的方法
US9580719B2 (en) 2007-04-27 2017-02-28 Pfenex, Inc. Method for rapidly screening microbial hosts to identify certain strains with improved yield and/or quality in the expression of heterologous proteins
US9663778B2 (en) 2009-07-09 2017-05-30 OPKO Biologies Ltd. Long-acting coagulation factors and methods of producing same
AU2015201906B2 (en) * 2009-07-09 2017-07-13 Opko Biologics Ltd. Long-acting coagulation factors and methods of producing same
ES2855133T3 (es) * 2012-02-14 2021-09-23 Opko Biologics Ltd Factores de coagulación de acción prolongada y usos de los mismos
MY167814A (en) * 2012-04-19 2018-09-26 Opko Biologics Ltd Long-acting oxyntomodulin variants and methods of producing same
CA2891393A1 (en) * 2012-11-20 2014-05-30 Opko Biologics Ltd. Method of increasing the hydrodynamic volume of polypeptides by attaching to gonadotrophin carboxy terminal peptides
CN103864913A (zh) * 2012-12-18 2014-06-18 联亚生技开发股份有限公司 重组蛋白
US20160024181A1 (en) 2013-03-13 2016-01-28 Moderna Therapeutics, Inc. Long-lived polynucleotide molecules
EP3060239B1 (en) * 2013-10-21 2020-05-13 OPKO Biologics Ltd. Long-acting polypeptides and methods of producing and administering same
US20150158926A1 (en) * 2013-10-21 2015-06-11 Opko Biologics, Ltd. Long-acting polypeptides and methods of producing and administering same
US20150126444A1 (en) * 2013-10-21 2015-05-07 Opko Biologics, Ltd. Long-acting polypeptides and methods of producing and administering same
US10287336B2 (en) * 2014-09-18 2019-05-14 AskGene Pharma, Inc. Feline erythropoietin receptor agonists
CN105440138A (zh) * 2014-09-30 2016-03-30 复旦大学 一种长效内皮抑素融合蛋白的制备方法和用途
AR102969A1 (es) 2014-12-10 2017-04-05 Opko Biologics Ltd Métodos para producir polipéptidos modificados por ctp (péptido carboxilo terminal) de acción prolongada
US20180111974A1 (en) 2014-12-10 2018-04-26 Opko Biologics Ltd. Methods of producing long acting ctp-modified growth hormone polypeptides
CN108289851B (zh) 2015-06-19 2021-06-01 Opko生物科学有限公司 长效凝固因子及其产生方法
US20180236031A1 (en) * 2017-02-10 2018-08-23 Vivibaba, Inc Compositions and methods for recombinant nerve growth factor
WO2023081494A2 (en) * 2021-11-08 2023-05-11 Boston Medical Center Corporation Nucleoside modified mrna and uses thereof

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5759818A (en) * 1991-10-04 1998-06-02 Washington University N-terminal CTP extended pharmaceutical peptides and proteins
WO2002085311A2 (en) * 2001-04-25 2002-10-31 Acevedo Hernan F Hcg formulation
CN1507357A (zh) * 2000-10-31 2004-06-23 PRҩƷ���޹�˾ 提高生物活性分子传递的方法和组合物
CN1578838A (zh) * 2001-10-29 2005-02-09 克鲁塞尔荷兰公司 生产具有预定的翻译后修饰的蛋白质的方法和手段

Family Cites Families (84)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US571212A (en) 1896-11-10 Hose-coupling
NL154600B (nl) * 1971-02-10 1977-09-15 Organon Nv Werkwijze voor het aantonen en bepalen van specifiek bindende eiwitten en hun corresponderende bindbare stoffen.
NL154598B (nl) * 1970-11-10 1977-09-15 Organon Nv Werkwijze voor het aantonen en bepalen van laagmoleculire verbindingen en van eiwitten die deze verbindingen specifiek kunnen binden, alsmede testverpakking.
NL154599B (nl) * 1970-12-28 1977-09-15 Organon Nv Werkwijze voor het aantonen en bepalen van specifiek bindende eiwitten en hun corresponderende bindbare stoffen, alsmede testverpakking.
US3901654A (en) 1971-06-21 1975-08-26 Biological Developments Receptor assays of biologically active compounds employing biologically specific receptors
US3853987A (en) * 1971-09-01 1974-12-10 W Dreyer Immunological reagent and radioimmuno assay
US3867517A (en) 1971-12-21 1975-02-18 Abbott Lab Direct radioimmunoassay for antigens and their antibodies
NL171930C (nl) 1972-05-11 1983-06-01 Akzo Nv Werkwijze voor het aantonen en bepalen van haptenen, alsmede testverpakkingen.
US3850578A (en) * 1973-03-12 1974-11-26 H Mcconnell Process for assaying for biologically active molecules
US3935074A (en) * 1973-12-17 1976-01-27 Syva Company Antibody steric hindrance immunoassay with two antibodies
US3996345A (en) 1974-08-12 1976-12-07 Syva Company Fluorescence quenching with immunological pairs in immunoassays
US4034074A (en) 1974-09-19 1977-07-05 The Board Of Trustees Of Leland Stanford Junior University Universal reagent 2-site immunoradiometric assay using labelled anti (IgG)
US3984533A (en) * 1975-11-13 1976-10-05 General Electric Company Electrophoretic method of detecting antigen-antibody reaction
US4098876A (en) 1976-10-26 1978-07-04 Corning Glass Works Reverse sandwich immunoassay
US4879219A (en) * 1980-09-19 1989-11-07 General Hospital Corporation Immunoassay utilizing monoclonal high affinity IgM antibodies
JPS5781447A (en) 1980-11-11 1982-05-21 Toyo Jozo Co Ltd Human chorionic gonadotropic hormone c-terminal fragment
US4853332A (en) * 1982-10-19 1989-08-01 Cetus Corporation Structural genes, plasmids and transformed cells for producing cysteine depleted muteins of biologically active proteins
US5011771A (en) * 1984-04-12 1991-04-30 The General Hospital Corporation Multiepitopic immunometric assay
DE3421468A1 (de) 1984-06-08 1985-12-19 Dr. Rentschler Arzneimittel Gmbh & Co, 7958 Laupheim Lipidnanopellets als traegersystem fuer arzneimittel zur peroralen anwendung
US4666828A (en) * 1984-08-15 1987-05-19 The General Hospital Corporation Test for Huntington's disease
US4683202A (en) * 1985-03-28 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying nucleic acid sequences
US4801531A (en) * 1985-04-17 1989-01-31 Biotechnology Research Partners, Ltd. Apo AI/CIII genomic polymorphisms predictive of atherosclerosis
DE122007000007I1 (de) 1986-04-09 2007-05-16 Genzyme Corp Genetisch transformierte Tiere, die ein gewünschtes Protein in Milch absondern
US5118666A (en) 1986-05-05 1992-06-02 The General Hospital Corporation Insulinotropic hormone
US4873316A (en) * 1987-06-23 1989-10-10 Biogen, Inc. Isolation of exogenous recombinant proteins from the milk of transgenic mammals
US5272057A (en) * 1988-10-14 1993-12-21 Georgetown University Method of detecting a predisposition to cancer by the use of restriction fragment length polymorphism of the gene for human poly (ADP-ribose) polymerase
US5338835A (en) 1989-02-21 1994-08-16 Washington University CTP-extended form of FSH
WO1990009800A1 (en) 1989-02-21 1990-09-07 Washington University Modified forms of reproductive hormones
US5705478A (en) 1989-02-21 1998-01-06 Washington University Covalently linked β subunits of the glycoprotein hormones as antagonists
US5792460A (en) * 1989-02-21 1998-08-11 Washington University Modified glycoprotein hormones having a CTP at the amino terminus
US5464764A (en) * 1989-08-22 1995-11-07 University Of Utah Research Foundation Positive-negative selection methods and vectors
US5192659A (en) * 1989-08-25 1993-03-09 Genetype Ag Intron sequence analysis method for detection of adjacent and remote locus alleles as haplotypes
US7217689B1 (en) 1989-10-13 2007-05-15 Amgen Inc. Glycosylation analogs of erythropoietin
US5126324A (en) 1990-06-07 1992-06-30 Genentech, Inc. Method of enhancing growth in patients using combination therapy
US5238890A (en) * 1990-10-31 1993-08-24 Idemitsu Kosan Company Limited Exhaust gas purifying catalyst and an exhaust gas purifying method using the catalyst
US6028177A (en) 1991-10-04 2000-02-22 Washington University Methods of detecting single-chain forms of the glycoprotein hormone quartet
US5281521A (en) 1992-07-20 1994-01-25 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Modified avidin-biotin technique
DE69422169D1 (de) * 1993-04-20 2000-01-20 Univ St Louis Modifizierte proteine und peptide enthaltende pharmazeutische mittel
US6737515B2 (en) 1993-11-19 2004-05-18 Washington University Follicle stimulating hormone-glycosylation analogs
US6238890B1 (en) 1994-02-18 2001-05-29 Washington University Single chain forms of the glycoprotein hormone quartet
US5935924A (en) 1994-04-15 1999-08-10 Genentech, Inc. Treatment of congestive heart failure
US5541110A (en) * 1994-05-17 1996-07-30 Bristol-Myers Squibb Cloning and expression of a gene encoding bryodin 1 from Bryonia dioica
BR9506313A (pt) 1994-08-12 1997-08-05 Univ Washington Formas de cadeia simples do quarteto de hormônio de glicoproteína
US6083725A (en) 1996-09-13 2000-07-04 Transkaryotic Therapies, Inc. Tranfected human cells expressing human α-galactosidase A protein
US20050032211A1 (en) 1996-09-26 2005-02-10 Metabogal Ltd. Cell/tissue culturing device, system and method
US6310183B1 (en) 1997-09-10 2001-10-30 Novo Nordisk A/S Coagulation factor VIIa composition
US6103501A (en) * 1997-11-17 2000-08-15 Washington University Single chain glycoprotein hormones comprising two β and one α subunits and recombinant production thereof
ES2265693T3 (es) * 1998-10-16 2007-02-16 Biogen Idec Ma Inc. Proteinas de fusion con interferon-beta y usos.
US6514729B1 (en) 1999-05-12 2003-02-04 Xencor, Inc. Recombinant interferon-beta muteins
JO2291B1 (en) 1999-07-02 2005-09-12 اف . هوفمان لاروش ايه جي Erythropoietin derivatives
US20020127652A1 (en) 2000-02-11 2002-09-12 Schambye Hans Thalsgard Follicle stimulating hormones
US7094566B2 (en) * 2000-03-16 2006-08-22 Amgen Inc., IL-17 receptor like molecules and uses thereof
EP2062593A3 (en) 2000-12-01 2011-08-17 Takeda Pharmaceutical Company Limited Method for producing preparation containing bioactive peptide
JP4409135B2 (ja) * 2000-12-01 2010-02-03 武田薬品工業株式会社 生理活性物質含有製剤の製造法
SI1724284T1 (sl) * 2000-12-07 2009-12-31 Lilly Co Eli Glp-1 fuzijski proteini
ATE320449T1 (de) * 2000-12-11 2006-04-15 Cheil Jedang Corp Fusionsprotein mit verbesserter in vivo erythropoietinwirkung
KR101229995B1 (ko) 2000-12-11 2013-02-06 씨제이 주식회사 생체내 에리스로포이에틴 활성이 증진된 융합단백질
WO2002053136A1 (fr) 2000-12-28 2002-07-11 Takeda Chemical Industries, Ltd. Preparations a liberation soutenue
JP5160005B2 (ja) * 2000-12-28 2013-03-13 武田薬品工業株式会社 徐放性製剤
US6887462B2 (en) 2001-04-09 2005-05-03 Chiron Corporation HSA-free formulations of interferon-beta
US6824769B2 (en) 2001-08-28 2004-11-30 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Optimal compositions and methods thereof for treating HCV infections
GB0121709D0 (en) 2001-09-07 2001-10-31 Imp College Innovations Ltd Food inhibition agent
KR100511749B1 (ko) * 2001-11-06 2005-09-02 선바이오(주) 변형된 인터페론-베타, 및 이의 화학적으로 변형된 배합체
KR100467750B1 (ko) * 2001-11-29 2005-01-24 씨제이 주식회사 생체내 에리스로포이에틴 활성이 증진된 융합단백질
KR100467751B1 (ko) * 2001-12-03 2005-01-24 씨제이 주식회사 생체내 에리스로포이에틴 활성이 증진된 융합단백질
EP2277889B1 (en) * 2001-12-21 2014-07-09 Human Genome Sciences, Inc. Fusion proteins of albumin and interferon beta
US7081446B2 (en) 2002-01-31 2006-07-25 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Long-acting follicle stimulating hormone analogues and uses thereof
US7173113B2 (en) 2002-01-31 2007-02-06 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Long-acting hormone and growth factor compositions and uses thereof
MXPA05000658A (es) * 2002-07-17 2005-08-19 Biogen Idec Inc Terapias para la insuficiencia renal utilizando interferon-beta.
US7459435B2 (en) 2002-08-29 2008-12-02 Hoffmann-La Roche Inc. Treatment of disturbances of iron distribution
US7459436B2 (en) 2002-11-22 2008-12-02 Hoffmann-La Roche Inc. Treatment of disturbances of iron distribution
EP1595549A4 (en) 2003-02-19 2010-09-22 Takeda Pharmaceutical DISPERSING AGENT FOR SUSTAINED RELEASE PREPARATIONS
JP4683319B2 (ja) * 2003-02-19 2011-05-18 武田薬品工業株式会社 徐放性製剤用の分散剤
WO2005047319A2 (en) 2003-11-12 2005-05-26 The University Of Georgia Research Foundation, Inc. Dna sequence and expressed recombinant glycoproteins related to feline thyrotropin
EP1696947B1 (en) 2003-12-19 2014-02-26 F.Hoffmann-La Roche Ag Use of erythropoietin in the treatment of disturbances of iron distribution in chronic inflammatory intestinal diseases
US7425539B2 (en) 2004-03-19 2008-09-16 Baxter International Inc. Factor IXa for the treatment of bleeding disorders
ES2346072T3 (es) 2004-08-17 2010-10-08 Csl Behring Gmbh Polipeptidos modificados dependientes de la vitamina k.
EP1728798A1 (en) 2005-06-01 2006-12-06 ZLB Behring GmbH Coagulation factor X polypeptides with modified activation properties
US8048849B2 (en) 2006-02-03 2011-11-01 Modigene, Inc. Long-acting polypeptides and methods of producing same
US7553940B2 (en) 2006-02-03 2009-06-30 Modigene Inc Long-acting EPO polypeptides and derivatives thereof and methods thereof
US8450269B2 (en) 2006-02-03 2013-05-28 Prolor Biotech Ltd. Long-acting growth hormone and methods of producing same
US8476234B2 (en) 2006-02-03 2013-07-02 Prolor Biotech Inc. Long-acting coagulation factors and methods of producing same
US8304386B2 (en) 2006-02-03 2012-11-06 Prolor Biotech, Inc. Long-acting growth hormone and methods of producing same
US8048848B2 (en) 2006-02-03 2011-11-01 Prolor Biotech Ltd. Long-acting interferons and derivatives thereof and methods thereof

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5759818A (en) * 1991-10-04 1998-06-02 Washington University N-terminal CTP extended pharmaceutical peptides and proteins
CN1507357A (zh) * 2000-10-31 2004-06-23 PRҩƷ���޹�˾ 提高生物活性分子传递的方法和组合物
WO2002085311A2 (en) * 2001-04-25 2002-10-31 Acevedo Hernan F Hcg formulation
CN1578838A (zh) * 2001-10-29 2005-02-09 克鲁塞尔荷兰公司 生产具有预定的翻译后修饰的蛋白质的方法和手段

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
GOEDDEL, D. V.等: "Accession No：NP_002167.1, interferon, beta 1, fibroblast [Homo sapiens]", 《GENBANK》 *

Also Published As

Publication number Publication date
DK3202779T3 (da) 2020-03-09
KR101636790B1 (ko) 2016-07-07
EP3202779A3 (en) 2017-09-06
KR20160103176A (ko) 2016-08-31
US7553940B2 (en) 2009-06-30
US20090275084A1 (en) 2009-11-05
EP2532674A1 (en) 2012-12-12
ES2477390T3 (es) 2014-07-16
IL232248A0 (en) 2014-06-30
US20070184530A1 (en) 2007-08-09
EP3663312A1 (en) 2020-06-10
JP2015147800A (ja) 2015-08-20
PL2471807T3 (pl) 2014-12-31
CN101595122A (zh) 2009-12-02
JP6182200B2 (ja) 2017-08-16
CN104804096B (zh) 2018-04-13
US20070190610A1 (en) 2007-08-16
WO2007094985A2 (en) 2007-08-23
AU2007215466C1 (en) 2013-08-29
KR101708730B1 (ko) 2017-02-21
EP3202779B1 (en) 2019-12-04
IL232248A (en) 2017-03-30
PT2471807E (pt) 2014-09-03
CA2874280A1 (en) 2007-08-23
SI3202779T1 (sl) 2020-06-30
KR20150014962A (ko) 2015-02-09
JP2016053084A (ja) 2016-04-14
SI2471807T1 (sl) 2014-11-28
KR20160052787A (ko) 2016-05-12
JP2009525052A (ja) 2009-07-09
AU2007215466A1 (en) 2007-08-23
EP2471807B1 (en) 2014-06-25
US8110376B2 (en) 2012-02-07
KR101651977B1 (ko) 2016-08-29
PL3202779T3 (pl) 2020-06-29
IL250745A0 (en) 2017-04-30
JP6188741B2 (ja) 2017-08-30
EP2853541A1 (en) 2015-04-01
EP2471807A1 (en) 2012-07-04
KR20140094656A (ko) 2014-07-30
CN104804096A (zh) 2015-07-29
EP2532675A1 (en) 2012-12-12
EP2853536A1 (en) 2015-04-01
EP2853541B1 (en) 2017-12-13
WO2007092252A3 (en) 2008-04-10
SI2001903T1 (sl) 2014-09-30
ES2494792T3 (es) 2014-09-16
EP2853536B1 (en) 2017-05-03
US8465948B2 (en) 2013-06-18
CA2641342A1 (en) 2007-08-23
CN101595122B (zh) 2014-06-25
US8097435B2 (en) 2012-01-17
ES2779650T3 (es) 2020-08-18
HK1212715A1 (zh) 2016-06-17
JP5905185B2 (ja) 2016-04-20
US20070190611A1 (en) 2007-08-16
PT3202779T (pt) 2020-05-04
HK1138854A1 (zh) 2010-09-03
IL245954A0 (en) 2016-07-31
HUE048307T2 (hu) 2020-07-28
KR20080093148A (ko) 2008-10-20
IL193198A0 (en) 2011-08-01
DK2001903T3 (da) 2014-05-05
WO2007094985A3 (en) 2009-04-16
ES2663365T3 (es) 2018-04-12
EP2532674B1 (en) 2015-09-09
JP2015155458A (ja) 2015-08-27
KR101651978B1 (ko) 2016-08-29
HK1205945A1 (zh) 2015-12-31
IL264957B (en) 2021-05-31
EP2001903A4 (en) 2009-11-11
EP2001903A2 (en) 2008-12-17
JP2015178512A (ja) 2015-10-08
US20090270489A1 (en) 2009-10-29
DK2471807T3 (da) 2014-09-01
US20090286733A1 (en) 2009-11-19
EP3202779A2 (en) 2017-08-09
EP2532675B1 (en) 2015-09-02
IL250745B (en) 2019-02-28
CA2641342C (en) 2018-06-05
ES2636668T3 (es) 2017-10-06
JP6333214B2 (ja) 2018-05-30
KR101483723B1 (ko) 2015-01-26
US7553941B2 (en) 2009-06-30
WO2007092252A2 (en) 2007-08-16
EP2001903B1 (en) 2014-01-29
IL193198A (en) 2014-05-28
US20120004286A1 (en) 2012-01-05
US8114836B2 (en) 2012-02-14

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101595122B (zh) 长效多肽及其生产和施用方法
AU2007215466B2 (en) Long-acting polypeptides and methods of producing and administering same
US9908924B2 (en) Long-acting polypeptides and methods of producing and administering same
US8426166B2 (en) Long-acting polypeptides and methods of producing same
US9884901B2 (en) Long-acting polypeptides and methods of producing and administering same

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: DE

Ref document number: 1205945

Country of ref document: HK

CB02 Change of applicant information

Address after: Israel Buffalo

Applicant after: OPKO BIOLOGICS LTD.

Address before: Israel: Ciaona

Applicant before: OPKO BIOLOGICS LTD.

COR Change of bibliographic data
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20150121

REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: WD

Ref document number: 1205945

Country of ref document: HK