CN104288189A - 一种从蒙药蓝盆花中制备总黄酮的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种从蒙药蓝盆花中提取和纯化总黄酮的方法，70％乙醇16倍量回流提取3次，每次2.5h；样品液中生药量与干树脂重量比为1∶2.1，色谱柱径高比为1∶25，流速控制在4BV/h，吸附完全后，用去离子水洗脱至洗脱液无色用，再用90％乙醇7BV洗脱，控制流速为4BV/h，收集洗脱液，减压浓缩至干，得到的总黄酮纯度28％以上。本发明提取纯化工艺方法简便、易行，可为蓝盆花有效部位的进一步研究奠定基础。

Description

一种从蒙药蓝盆花中制备总黄酮的方法
技术领域
本发明属于制药工程技术领域，涉及一种从蒙药蓝盆花中制备总黄酮的方法。
背景技术
蒙药蓝盆花来源于川续断科植物窄叶蓝盆花Scabiosa comosa Fisch.Ex Roem.et Schult和华北蓝盆花Scabiosa tschilliensis Grunning的干燥花序，蒙药名为陶森-陶日莫，属于蒙医专用、常用药材。主产于内蒙古、黑龙江、吉林、辽宁、河北等省区。味甘、涩，性钝、燥、腻、重、凉，具清热、清“协日”之功效，蒙医临床用于肺热、肝热、咽喉热等病，主治肝火头痛、发烧、肺热咳嗽、黄疸等病，蒙医临床治疗肝炎的方剂多有蓝盆花，如给旺-9、额力根-7等，且具有良好的疗效。现代药理研究显示蓝盆花总黄酮具有抗炎、解热、抗氧化、降血压、抑制血小板聚集、镇静，保护肾缺血再灌注损伤、提高机体免疫功能等多种作用；芹菜素具有抑制ADP诱导的血小板聚集作用，从中分离鉴定的三萜皂苷具抑制胰脂肪酶的作用。同属植物的药理活性研究报道极少，仅报道从该属植物S.hymettia中分离得到的部分黄酮类、环烯醚萜类、香豆素类显示不同程度的抗菌活性。
目前，国内学者曾对蓝盆花总黄酮的提取工艺进行了研究报道，尚未检索到有关蒙药蓝盆花有效部位研究方面的报道和专利，更无有效部位纯化工艺研究报道，现有的制剂均为生药粉直接入药，工艺简单，标准提取物的制备是目前解决这一问题的有效途径之一。
发明内容
本发明的目的在于克服上述蒙药蓝盆花现有制备工艺中存在的技术缺陷，提供一种从蒙药蓝盆花中制备总黄酮的方法。本发明采用乙醇回流提取法提取蓝盆花中总黄酮，采用大孔吸附树脂富集纯化蓝盆花总黄酮，方法简单方便、工艺稳定、重现性良好，适于工业化推广，对有效利用蒙药蓝盆花药材、推动药材的现代研究和应用方面具有重要意义。其具体技术方案为：
在蒙药蓝盆花现有药效物质基础研究结果的基础上，结合临床实践，研究出一种从蒙药蓝盆花中制备总黄酮的方法。本方法特点：采用乙醇回流法提取总黄酮，依次通过单因素实验和正交实验，以出膏率和总黄酮的浸出率为考察指标，运用统计学方法分析实验结果，确定最佳提取工艺；采用大孔吸附树脂纯化富集蓝盆花总黄酮，通过静态-动态吸附解吸实验确定最优纯化树脂和最佳纯化工艺；方法简单方便、工艺稳定、重现性良好，适于工业化推广。
一种从蒙药蓝盆花中提取总黄酮的方法，包括以下步骤：
(a)蒙药蓝盆花总黄酮的提取：蓝盆花药材，以6～16倍量50％～90％乙醇回流提取1～4次，每次1～3h，合并提取液，回收乙醇，使制成生药浓度为0.08gmL～0.2g/ml的提取液，备用；
(b)蒙药蓝盆花总黄酮的纯化：选取S-8、D101、AB-8、HPD100、HPD400、X-5、D4020、D3520、NKA-9型等常用大孔吸附树脂，按常规方法预处理后，以去离子水为溶媒湿法装柱，径高比为1∶10～1∶25；将提取液按样品液中生药量与干树脂重量比为1∶15～1∶1.5上样，流速控制在1-4BV/h，吸附完全后，用去离子水洗脱至洗脱液无色，再用10-70BV的60％～90％乙醇洗脱，控制流速为1～4BV/h，收集洗脱液，回收溶剂至干，产物中总黄酮纯度为16.56％～31.95％。
进一步优选，步骤(a)中：蓝盆花药材适量，以16倍量70％乙醇回流提取3次，每次2.5h，合并提取液，回收乙醇，制成生药浓度为0.2g/ml的提取液，备用。
步骤(b)中：选取S-8型大孔吸附树脂，按常规方法预处理后，以去离子水为溶媒湿法装柱，径高比为1∶25；将提取液按样品液中生药量与干树脂重量比为1∶2.1上样，流速控制在4BV/h，吸附完全后，用去离子水洗脱至洗脱液无色，再用7BV的90％乙醇洗脱，控制流速为4BV/h，收集洗脱液，回收溶剂至干，产物中总黄酮纯度在28％以上，可有效去除杂质。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：本发明采用乙醇提取法结合大孔吸附树脂纯化法富集了药材中的黄酮类有效成分，得到了蒙药蓝盆花的标准提取物，提取纯化工艺简便稳定，适于工业化，可促进蒙药蓝盆的有效利用和现代研究，并可减少临床服用剂量、提高临床疗效和顺应性。
附图说明
图1是总黄酮标准曲线；
图2是乙醇浓度对出膏率的影响；
图3是乙醇浓度对总黄酮浸出率的影响；
图4是乙醇用量对出膏率的影响；
图5是乙醇用量对总黄酮浸出率的影响；
图6是提取时间对出膏率的影响；
图7是提取时间对总黄酮浸出率的影响；
图8是提取次数对出膏率的影响；
图9是提取次数对总黄酮浸出率的影响；
图10是上样浓度对回收率的影响；
图11是上样速度对回收率的影响；
图12是径高比对回收率的影响；
图13是蓝盆花总黄酮泄漏曲线；
图14是洗脱浓度对回收率的影响；
图15是洗脱体积对总黄酮量的影响；
图16是不同洗脱速度对回收率的影响。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例对本发明的技术方案作进一步详细地说明。
实施例1蒙药蓝盆花总黄酮的提取工艺研究
1材料、仪器及试剂
1.1材料
蓝盆花药材于2009年3月购于内蒙古药材公司(产地：锡林郭勒)，经内蒙古医学院药学院乔俊缠老师鉴定为川续断科植物华北蓝盆花Scabiosa tschilliensis Grunning的干燥花序。
1.2仪器
DZF-6050型真空干燥箱(上海精宏实验设备有限公司)；ES-J200-4电子天平(沈阳龙腾电子有限公司)；AB135-S电子天平(METTLERTOLEDO)；永光明恒温水浴锅(北京市永光明医疗仪器厂)；TC-15恒温电热套(海宁市华星仪器厂)；RE-52CS-1旋转蒸发器(上海雅荣生化仪器设备有限公司)；TV-1901双光束紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器)。
1.3试剂
95％乙醇(天津市科密欧化学试剂有限公司)分析纯；蒸馏水。
2主要参数
2.2出膏率
3总黄酮测定方法
3.1对照品溶液的制备
取芦丁对照品约10mg，精密称定，置50mL量瓶中，用适量的70％乙醇溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得(每1mL中含芦丁0.20mg)。
3.2供试品溶液的制备
称取药材约20g，加入10倍量70％乙醇，提取2次，每次2h，滤过，合并滤液，定容至500mL，摇匀，精密吸取25mL置恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，恒重。
3.3测定法
取恒重的总黄酮浸膏粉末约适量，精密称定，置25mL量瓶中，加适量70％乙醇溶液溶解，分别加5％亚硝酸钠1mL，摇匀，静置6min，再加10％硝酸铝1mL，摇匀，静置6min，再加10％氢氧化钠试液4.0mL，用70％乙醇稀释至刻度，摇匀，静置15分钟后，在510nm波长处测定吸光度。
3.4标准曲线的制备
精密吸取对照品溶液2.0，3.0，4.0，5.0，6.0，7.0mL置25mL量瓶中，制成一系列标准溶液。按测定方法项下测定吸光度。以吸光度(X)和溶液浓度(Y)进行回归分析，回归方程为Y＝83.17x-0.067，(r＝0.9994)。结果表明，芦丁在16.03-56.11μg·mL-1范围内与吸光度呈良好线性关系。
结果见表1、图1。
表1  线性关系考察
4提取方法单因素考察
4.1乙醇浓度对提取效率的影响
称取药材20g，共10份，分为5组，分别加入10倍量50％、60％、70％、80％、90％乙醇，回流提取2次，每次2h，滤过，合并滤液，定容至500mL，摇匀，精密吸取25mL置恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，恒重，计算出膏率。
取恒重的总黄酮浸膏粉末约6mg，精密称定，按“3.3”项下方法测定吸光度，计算总黄酮浸出率，实验数据见表2、图2及图3。试验结果表明以70％乙醇提取效果最佳。
表2  乙醇浓度对提取效率的影响试验数据
4.2乙醇用量对提取效率的影响
称取药材20g，共12份，分为6组，分别加入6倍量、8倍量、10倍量、12倍量、14倍量、16倍量70％乙醇，回流提取2次，每次2h，滤过，合并滤液，定容至500mL，摇匀，精密吸取25mL置恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，恒重，计算出膏率
取恒重的总黄酮浸膏粉末约6mg，精密称定，按“3.3”项下方法测定吸光度，计算总黄酮浸出率，实验数据见表3、图4及图5，试验结果表明，提高溶剂用量，提取效果随之提高。当溶剂量：原料＞14时，总黄酮含量基本不变。
表3  乙醇用量对提取效率的影响试验数据
4.3提取时间对提取效率的影响
称取药材20g，共10份，分为5组，加14倍量70％乙醇，每组分别提取1h、1.5h、2h、2.5h、3h，回流提取2次，滤过，合并滤液，定容至500mL，摇匀，精密吸取25mL置恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，恒重，计算出膏率。
取恒重的总黄酮浸膏粉末约6mg，精密称定，按“3.3”项下方法测定吸光度，计算总黄酮浸出率，实验数据见表4、图6及图7，试验结果表明，提取时间达到2.5h提取效果较高。
表4  提取时间对提取效率的影响试验数据
4.4提取次数对提取效率的影响
称取药材20g，共8份，加14倍量70％乙醇，回流提取2.5h，每组分别提取1次、2次、3次、4次，滤过，合并滤液，定容至500mL，摇匀，精密吸取25mL置恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，恒重，计算出膏率。
取恒重的总黄酮浸膏粉末约6mg，精密称定，按“3.3”项下方法测定吸光度，计算总黄酮浸出率，实验数据见表5、图8及图9，试验结果表明，3次基本提取完全。
表5  提取次数对提取效率的影响试验数据
5正交试验优化方法
为了全面考察各因素对蓝盆花总黄酮含量的影响，以出膏率和总黄酮浸出率作为考察指标，对乙醇浓度(A)、乙醇用量(B)、提取时间(C)和提取次数(D)进行四因素三水平的正交试验，探讨最佳提取工艺条件。
称取18份药材各约20g，按L9(34)正交表设计方案进行试验，每个实验平行做2份，见表6、7、8。
表6  正交因素水平
表7  L9(34)正交表
表8  方差分析表
F0.05(2，2)＝19
*P＜0.05
统计分析结果表明A2B3C2D3为最优提取工艺，即16倍量70％的乙醇，回流2.5h，共3次。D因素对出膏率有显著性影响，B、D因素对总黄酮含量有显著性影响。正交实验与单因素的结果有差异，可能是多因素交互作用的影响。
6工艺验证试验
为考察该总黄酮提取工艺的稳定性，称取药材约20g，共3份，分别按照统计出的最佳工艺提取，并按上述测定方法测定，计算出膏率、总黄酮浸出率。实验数据见表9，结果表明该工艺稳定可行。
表9  工艺重现性试验数据
7工艺放大试验
称取药材约500g，共3份，分别按上述最佳工艺提取，并按上述方法测定，计算出膏率、总黄酮浸出率。实验数据见表10，结果表明该工艺稳定可行。
表10  工艺放大试验数据
8不同来源药材的工艺提取
取不同来源的蓝盆花药材各约20g，分别按上述最佳工艺提取，并按上述方法测定，计算出膏率、总黄酮浸出率。实验数据见表11、12，结果表明该工艺稳定可行。
表11  药材来源
表12  不同来源药材的试验数据
实施例2蒙药蓝盆花总黄酮的纯化工艺研究
1材料、仪器及试剂
1.1材料
蓝盆花药材于2009年3月购于内蒙古药材公司，经内蒙古医学院药学院乔俊缠老师鉴定为川续断科植物华北蓝盆花Scabiosa tschilliensis Grunning的干燥花序；芦丁对照品，批号100080-200506(中国药品生物制品鉴定所)；
S-8、D101、AB-8、HPD100、HPD400、X-5、D4020、D3520、NKA-9型大孔树脂(沧州宝恩吸附材料有限公司)。
1.2试剂
氢氧化钠(分析纯)，盐酸(分析纯)。
1.3仪器
DZF-6050型真空干燥箱(上海精宏实验设备有限公司)；ES-J200-4电子天平(沈阳龙腾电子有限公司)；永光明恒温水浴锅(北京市永光明医疗仪器厂)；TC-15恒温电热套(海宁市华星仪器厂)；SHZ-88台式水浴恒温振荡器(广州正仪生物技术有限公司)；RE-52CS-1旋转蒸发器(上海雅荣生化仪器设备有限公司)；TU-1901双光束紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器)。
2实验方法
2.1样品溶液的制备
称取蓝盆花100g，按最佳提取工艺提取，即：70％乙醇16倍量，热回流3次，每次2.5h进行提取，滤过，合并提取液，回收乙醇至无醇味，转移到500mL量瓶中，用水稀释至刻度，即得，备用(按生药量计C＝0.2g/mL)。
2.2大孔吸附树脂预处理
大孔树脂用95％乙醇浸泡24h，充分溶胀后，用乙醇洗至洗出液加适量水无白色浑浊，再用去离子水洗尽乙醇，用5％HCI溶液浸泡8h，再用去离子水洗至中性，接着用5％NaOH溶液浸泡8h，再用去离子水洗至中性，浸泡于蒸馏水中备用。
2.3大孔树脂的强化再生
树脂使用一定周期后，吸附能力降低或受污染严重时需要进行再生处理，首先用水除去机械杂质，至水清澈为止。用2BV的5％盐酸溶液以4～6BV/h的流速通过树脂层，并浸泡2～4h，然后用水以同样的流速洗至PH值呈中性。用2BV的2％的NaOH溶液以4～6BV/h的流速通过树脂层，并浸泡2～4h，然后用水以同样的流速洗至PH值呈中性。
2.4树脂的筛选
2.4.1静态饱和吸附量的测定
选取处理好的S-8、D101、AB-8、HPD100、HPD400、X-5、D4020、D3520、NKA-9型大孔树脂进行静态饱和吸附量的试验。取湿树脂2g于100mL三角瓶中，并加入样液20mL，于恒温振荡器中振荡24h，滤过，测定滤液中剩余的总黄酮浓度。
按下式计算饱和吸附量：
Co-样液的初始浓度(mg/mL)
Cv-样液的剩余浓度(mg/mL)
V-样液体积(mL)
W-树脂质量(g)
2.4.2树脂解吸率的测定
将已经饱和吸附蓝盆花总黄酮的树脂，用滤纸吸干表面水分，置于100mL三角瓶中，加入20mL95％的乙醇溶液，放置摇床上振荡解吸24h后过滤，测定解吸液中总黄酮的浓度。
Q-树脂的饱和吸附量(mg)
CK-解吸液浓度(mg/mL)
V-解吸液体积(mL)
2.5动态吸附-解吸工艺条件的确定
2.5.1上样浓度的确定
将经过预处理的S-8型大孔吸附树脂15g采用去离子水湿法装柱，玻璃层析柱规格为(1.0cm×40cm)，装柱径高比为1∶25，即1个BV(柱床体积)在10mL左右。取生药浓度为0.08gmL、0.12g/mL、0.16g/mL、0.2g/mL的样液各5mL，以2BV/h的流速上样，吸附完全后，用去离子水冲洗至流出液无色，再用4BV80％乙醇洗脱，测定回收率，选择最佳上样浓度。
2.5.2上样速度的确定
取生药量为0.2g/mL样品溶液8份，分为4组，每份5mL，分别以1BV/h、2BV/h、3BV/h、4BV/h的流速上样，吸附完全后，用去离子水冲洗至流出液无色，再用4BV80％乙醇洗脱，测定其回收率，选择最佳上样速率。
2.5.3玻璃柱径高比的选择
取生药量为0.2g/mL样品溶液8份，分为4组，每份5mL，分别加入径高比为1∶10、1∶15、1∶20、1∶25的玻璃柱中，控制4BV/h的流速上样，吸附完全后，用去离子水冲洗至流出液无色，再用4BV80％乙醇洗脱，测定其回收率，选择最佳径高比。
2.5.3最佳上样量考察
生药浓度为0.2g/mL的样液，以4BV/h的速度上样，每5mL为一个收集段，检测该段收集液中总黄酮浓度，以测定蓝盆花总黄酮含量为考察指标，绘制泄漏曲线，以确定最佳上样量。
2.5.4洗脱剂浓度的选择
称取处理好的HP-20型树脂8份，分为4组，分别装入相同规格的玻璃柱，吸取样品液上柱，控制流速。吸附完全后，用去离子水冲洗至流出液无色，分别用60％乙醇、70％乙醇、80％乙醇、90％乙醇洗脱，洗脱速率为4BV/h，乙醇用量为4BV，测定其洗脱率，选择洗脱浓度。
2.5.5洗脱体积的选择
称取处理好的树脂一份，装入玻璃柱，吸取35mL样品溶液上柱，控制流速。吸附完全后，用去离子水冲洗至流出液无色，用90％的乙醇溶液洗脱，每10mL为一个收集段，以测定蓝盆花总黄酮含量为考察指标，绘制洗脱曲线，确定最佳洗脱体积。
2.5.6洗脱速度的确定
称取处理好的HP-20型树脂8份，分别装入相同规格的玻璃柱，吸取样品液上柱，控制流速。吸附完全后，用去离子水冲洗至流出液无色，再用90％乙醇洗脱，洗脱速率分别为1BV/h、2BV/h、3BV/h、4BV/h，乙醇用量为7BV，测定其洗脱率，确定最佳洗脱速度。
2.5.7梯度洗脱对总黄酮纯度的影响
称取处理好的s-8型树脂6份，分别装入相同规格的玻璃柱，吸取样品液上柱，控制流速。吸附完全后，用去离子水冲洗至流出液无色，分别用10％、20％、30％的乙醇70mL洗脱，弃去洗脱液，再90％7醇洗脱，洗脱速率为4BV/h，洗脱体积为7BV，测定其洗脱率。
3结果与分析
3.1不同型号树脂对蓝盆花总黄酮的静态饱和吸附量及解吸率
从表13中可以看出，饱和吸附量最大的树脂是NKA-9，但是其解析率较低，S-8型大孔树脂在饱和吸附量和解吸率方面，都较高。因此，我们选择S-8型大孔吸附树脂进行纯化试验。
表13  不同型号大孔树脂饱和吸附量和解吸率
3.2S-8型大孔树脂动态吸附-解析工艺条件的确定
3.2.1上样浓度的确定
从图10中可以看出，在生药浓度为0.08-0.2g/mL范围内，上样浓度为0.2g/mL时的回收率最高。如果再增加样品浓度，样品液中出现较多不溶性成分，影响树脂的纯化效果，因此上样浓度选择0.2g/mL。
3.2.2上样速度的确定
从图11中可以看出，不同的上样速度对总黄酮回收率影响较小，考虑到4BV/h的上样速度可以提高实验效率。因此，我们选取4BV/h为上样速率。
3.2.3玻璃柱径高比的选择
从图12中可以看出，径高比为1∶15和1∶25时回收率较高，考虑到上样浓度和速度时所用径高比为1∶25，所以选择径高比为1∶25。
3.2.4最佳上样量考察
由图13泄漏曲线及测定结果可知，蓝盆花总黄酮从第8份开始明显泄漏，故确定蓝盆花样品上样体积为35mL，即生药量∶树脂量＝1∶2.1。
3.2.5洗脱剂浓度的选择
从图14中可以看出，随着乙醇浓度的增加，总黄酮的回收率也随之增加。乙醇浓度为90％时回收率最高，所以选择洗脱剂的浓度为90％的乙醇。
3.2.6洗脱体积的选择
从图15中可以看出，当洗脱剂体积到70mL时，总黄酮基本洗脱完全，再增加洗脱剂的用量，收集到的总黄酮量很低，所以确定洗脱体积为7BV(柱床体积)，即70mL
3.2.8洗脱速度的确定
从图16中可以看出，当洗脱速度为4BV/h时，回收率最高，同时，可以极大地提高实验效率，所以确定洗脱速度为4BV/h。
3.2.9梯度洗脱对产物中总黄酮纯度的影响
从表14中可以看出梯度洗脱对总黄酮的纯度没有明显的提高，反而梯度洗脱后总黄酮的回收率明显降低，所以不进行梯度洗脱。
表14  梯度洗脱对总黄酮纯度和回收率的影响
对不同型号的树脂进行筛选，结果显示：S-8型树脂为蓝盆花总黄酮提取纯化工艺用树脂。S-8型树脂对蓝盆花总黄酮的最佳分离纯化工艺为：样品液中生药量与干树脂重量比为1∶2.1，色谱柱径高比为1∶25，流速控制在4BV/h，吸附完全后，用蒸馏水洗至流出液无色，再用7BV量90％乙醇洗脱，流速为4BV/h，减压浓缩至干，得到的总黄酮纯度在28％以上，可有效去除杂质。
4最佳纯化工艺验证实验
精密称取处理好的S-8型树脂(约相当于湿树脂15.0g)，精密吸取样品液35mL(0.2g生药/mL)上柱，流速控制在4BV/h，吸附完全后，用蒸馏水洗至流出液无色，再用7BV量90％乙醇洗脱，流速控制在4BV/h，收集洗脱液，减压回收溶剂至适量，转移置干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，恒重，测定浸膏的重量，计算总黄酮得率及纯度，结果见表15。
表15  工艺验证实验结果
5最佳纯化工艺的放大验证
称取蓝盆花药材3份，每份100g，加入16倍量的70％的乙醇，提取3次，每次2.5h，滤过，合并滤液，定容至500mL，备用。
称取S-8型大孔树脂三份，每份150g，装入规格为2.3cm×60cm的玻璃层析柱，柱体积在100mL左右。将浓度为0.2g生药量/mL的蓝盆花药液350mL，以4BV/h的速度上样，吸附完全后，用蒸馏水洗至流出液无色，再用7BV量90％乙醇洗脱，洗脱液浓缩定容到500mL的量瓶中，精密吸取50mL样品至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，恒重，测定浸膏的重量，计算总黄酮得率及纯度，结果见表16。
表16  纯化工艺放大实验结果
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，本发明的保护范围不限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明披露的技术范围内，可显而易见地得到的技术方案的简单变化或等效替换均落入本发明的保护范围内。

Claims (2)

1.一种从蒙药蓝盆花中提取总黄酮的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(a)蒙药蓝盆花总黄酮的提取：蓝盆花药材20g，以6～16倍量50％～90％乙醇回流提取1～4次，每次1～3h，合并提取液，回收乙醇，使制成生药浓度为008gmL～0.2g/ml的提取液，备用；
(b)蒙药蓝盆花总黄酮的纯化：选取S-8、D101、AB-8、HPD100、HPD400、X-5、D4020、D3520、NKA-9型等常用大孔吸附树脂，按常规方法预处理后，以去离子水为溶媒湿法装柱，径高比为1∶10～1∶25；将提取液按样品液中生药量与干树脂重量比为1∶15～1∶1.5上样，流速控制在1～4BV/h，吸附完全后，用去离子水洗脱至洗脱液无色，再用10-70BV的60％～90％乙醇洗脱，控制流速为1～4BV/h，收集洗脱液，回收溶剂至干，产物中总黄酮纯度为16.56％～31.95％。
2.根据权利要求1所述的从蒙药蓝盆花中提取总黄酮的方法，其特征在于，
步骤(a)中：蓝盆花药材，以16倍量70％乙醇回流提取3次，每次2.5h，合并提取液，回收乙醇，制成生药浓度为0.2g/ml的提取液，备用；
步骤(b)中：选取S-8型大孔吸附树脂，按常规方法预处理后，以去离子水为溶媒湿法装柱，径高比为1∶25；将提取液按样品液中生药量与干树脂重量比为1∶2.1上样，流速控制在4BV/h，吸附完全后，用去离子水洗脱至洗脱液无色，再用7BV的90％乙醇洗脱，控制流速为4BV/h，收集洗脱液，回收溶剂至干，产物中总黄酮纯度在28％以上。
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