CN104250250A - 4-芳香胺基嘧啶类化合物及其抗肿瘤用途 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种4-芳香胺基嘧啶类化合物的制备方法和抗肿瘤用途，为具有通式I的化合物。本发明具有通式I的4-芳香胺基嘧啶类化合物及其药学上可接受的盐或溶剂合物对人肺癌细胞、人胃癌细胞、人前列腺癌细胞和人骨髓瘤细胞等有抑制作用，可用于制备治疗包含但不限于人肺癌、人胃癌、人前列腺癌和人骨髓瘤的药物。

Description

4-芳香胺基嘧啶类化合物及其抗肿瘤用途

技术领域

本发明涉及4-芳香胺基嘧啶类化合物及其用途，属于医药制备技术领域。

背景技术

嘧啶类化合物广泛应用于生物医药领域，如能预防和治疗过敏性疾病、关节炎和癌症(CN101611035)，也能预防和治疗自身免疫性疾病和破坏性骨障碍(CN101039945)，也能治疗人类呼吸道合胞体病毒感染(CN102958933)，还可用于治疗心血管疾病(CN102939289)和皮肤病症(CN103002875)。

随着肿瘤生物学及相关学科的飞速发展，人们逐渐认识到细胞癌变的本质是细胞信号转导通路的失调导致的细胞无限增殖，随之而来的是抗肿瘤药物研发理念的重大转变。研发的焦点正在从传统细胞毒药物转移到针对肿瘤细胞内异常信号系统靶点的特异性新一代抗肿瘤药物。不同于传统细胞毒药物选择性差、毒副作用强、易产生耐药性等特点，靶点特异性抗肿瘤药达到了高选择性、低毒性的治疗效果。

通过在嘧啶环的4位上引入芳香胺类基团，合成了新型的4-芳香胺基嘧啶类化合物，该类化合物具有良好的生物利用途和抗肿瘤活性，有望成为高效和低毒的抗肿瘤药物。

发明内容

本发明目的是寻找一类新型、高效、低毒具有靶向抗肿瘤活性的4-芳香胺基嘧啶类化合物。

本发明的4-芳香胺基嘧啶类化合物，为具有通式I的化合物：

通式I中，R1包含但不限于以下基团：

氢、甲基、乙基、丙基、异丙基、环丙基、环丁基、丁基、环戊基、

R2是一种芳香基团，包含但不限于以下芳香基团：

本发明具有通式I的4-芳香胺基嘧啶类化合物及其药学上可接受的盐或溶剂合物可用于制备治疗包含但不限于人肺癌、人胃癌、人前列腺癌和人骨髓瘤的药物。

具有通式I的4-芳香胺基嘧啶类化合物的制备路线如下：

化合物2合成用的试剂是3-溴-4-氯吡唑并嘧啶和芳香胺(R₂-NH₂)，用的溶剂包含但不限于二氧六环、乙醇、丙醇、异丙醇、乙腈、正丁醇和DMF等，用的碱包含但不限于三乙胺、二异丙基乙胺、二乙胺、吡啶、碳酸钾和碳酸钠等。

化合物3合成用的试剂是溴代物(R₁-Br)或碘代物(R₁-I)或R₁的甲磺酸酯(R₁-OMs)或R₁的对甲苯磺酸酯(R₁-OTs)，用的溶剂包含但不限于DMF、二氧六环、异丙醇、正丁醇、四氢呋喃和乙腈等，用的碱包含但不限于碳酸钾、碳酸钠、氢化钠、碳酸铯、叔丁醇钾和叔丁醇钠等。

化合物4合成用的偶联试剂包含但不限于2-胺基-苯并噁唑-5-硼酸、2-胺基-苯并噁唑-5-硼酸盐酸盐和2-胺基-苯并噁唑-5-硼酸酯，用的催化剂包含但不限于四三苯基磷钯、叔丁基磷钯、PdCl₂(dppf)、醋酸钯等，用的碱包含但不限于碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠等，反应溶剂包含但不限于二氧六环-水、DMF-水、乙醇-水和甲苯-水等。

具有通式I的4-芳香胺基嘧啶类化合物可以成为药学上可接受的盐，成的盐包含但不限于盐酸盐、硫酸盐、草酸盐、乙酸盐、富马酸盐、酒石酸盐、马来酸盐、柠檬酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐、乳酸盐、扁桃酸盐、琥珀酸盐、延胡索酸盐和苹果酸盐等。成盐时反应溶剂包含但不限于乙醇、异丙醇、乙腈和乙酸乙酯等。

具有通式I的4-芳香胺基嘧啶类化合物可以成为药学上可接受的溶剂合物，所述溶剂合物为有机溶剂或水合物，优选醇合物或水合物。

具有通式I的4-芳香胺基嘧啶类化合物可给药于人和动物，可以口服、直肠、肠胃外(静脉内、肌肉内或皮下)、局部给药(粉剂、软膏剂或滴剂)。所述化合物可以单独给药，或者与其它药学上可接受的化合物联合给药。用于口服给药的固体剂型包括胶囊剂、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂。固体剂型如片剂、胶囊剂、丸剂和颗粒剂可采用包衣和壳材制备，如肠衣和其它本领域公知的材料。

用于口服给药的液体剂型包括药学上可接受的乳液、溶液、悬浮液、糖浆或酊剂。

用于肠胃外注射的组合物可包含生理上可接受的无菌水或无水溶液、分散剂、悬浮液或乳液，和用于重新溶解成无菌的可注射溶液或分散液的无菌粉末。

用于局部给药的剂型包括软膏剂、散剂、喷射剂和吸入剂。

本发明具有如下的有益效果：

1、本发明的4-芳香胺基嘧啶类化合物通过在嘧啶环的4位上引入芳香胺类基团，对肿瘤细胞有明显的抑制作用，是一类新型、高效的激酶抑制剂。

2、本发明的4-芳香胺基嘧啶类化合物由于具有靶向性，大大降低了毒副作用，对人体正常细胞的伤害较少，同时具有良好的体内生物利用度。

具体实施方式

实施例1：合成3-溴-4-(对-苄氧基苯胺基)吡唑并嘧啶(化合物2a)

3-溴-4-氯吡唑并嘧啶(150mg，0.64mmol)、4-苄氧基苯胺(192mg，0.96mmol)、二异丙基乙胺(0.2mL)和二氧六环(5mL)加热回流3小时，冷至室温，浓缩至干，加入水(5mL)，振摇，抽滤，用少量水和异丙醇洗涤，干燥得淡黄色固体3-溴-4-(对-苄氧基苯胺基)吡唑并嘧啶186mg，产率：73.5％。EI-MS MS(m/z)：396.0(M⁺)

实施例2：合成1-异丙基-3-溴-4-(对-苄氧基苯胺基)吡唑并嘧啶(化合物3a)

化合物2a(160mg，0.40mmol)、无水碳酸钾(110mg，0.80mmol)和DMF(3mL)加热至55℃，搅拌半小时，加入溴代异丙烷(98.4mg，0.80mmol)，在此温度反应3小时，冷却，加入水(10mL)，振摇，抽滤，水洗，干燥得灰色固体1-异丙基-3-溴-4-(对-苄氧基苯胺基)吡唑并嘧啶150mg，产率：85.7％。EI-MS MS(m/z)：438.1(M⁺)

实施例3：合成化合物4a

化合物3a(120mg，0.27mmol)、2-胺基-苯并噁唑-5-硼酸盐酸盐(75mg，0.35mmol)、四三苯基磷钯(25mg，0.022mmol)、碳酸钠(143mg，1.35mmol)和二氧六环-水(10mL-3mL)，氩气保护下回流3小时，冷却，抽滤，乙酸乙酯(100mL)萃取，饱和食盐(30mL)水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩至干，快速柱层析得类白色粉末固体化合物(4a)116mg，产率：87.4％。

EI-MS MS(m/z)：492.2(M⁺)

¹H-NMR(CDCl₃，400MHz)：δ8.48(s，1H)，7.69(d，1H)，7.43～7.37(m，9H)，6.91(d，2H)，5.36(br，2H)，5.23～5.20(m，1H)，5.02(s，2H)，1.63(d，6H).

实施例4：化合物4a成盐

反应瓶中加入化合物(4a)(100mg，0.20mmol)和2.8MHCl/EtOH(2mL，5.6mmol)，室温搅拌过夜，抽滤，乙酸乙酯(5mL)洗涤，干燥得类白色固体(4a)盐酸盐86mg，产率：81.4％。

按照实施例1-4中相似的合成步骤，通过改变试剂和反应条件合成出具有通式I的化合物4a-4l，结构式如表1所示。

表1

实施例5：抑制肿瘤活性评估试验

供试靶标：

人肺癌细胞株A549、人胃癌细胞株SGC7901、人前列腺癌细胞PC-3、和人骨髓瘤细胞株RPMI8226。

细胞培养及药物处理：

将冻存细胞复苏后，加入适量RPMI-1640培养液(含10％胎牛血清、100U/mL青霉素、100U/mL链霉素)接种于培养瓶，放培养箱(37℃，5％CO₂)中培养，每隔2～3天传代1次。将细胞接种于96孔培养板中，细胞密度为5000个/孔，加入不同浓度的化合物溶液(化合物用DMSO溶解，再用培养液稀释)，每种剂量设四个重复。

试验方法：

1.贴壁细胞采用MTT法(人肺癌细胞、人胃癌细胞、人前列腺癌细胞)：药物处理48h后，每孔加入0.25mg/mL MTT(噻唑兰)试剂10uL，放入37℃，5％CO₂培养箱中继续培养4h，吸除培养液，每孔加入100uLDMSO溶解颗粒，然后用酶标仪测570nm下的吸光度(OD)值，实验重复三次。测出抑制率，计算抑制50％细胞生长所需浓度IC₅₀。

2.悬浮细胞采用CCK-8法(人骨髓瘤细胞)：

药物处理48h后，每孔加入CCK-8(含MTS0.19mg/ml)试剂20uL，放入37℃，5％CO₂培养箱中继续培养2h，用酶标仪测450nm下的OD值，

实验重复三次。测出抑制率，计算抑制50％细胞生长所需浓度IC₅₀。

其中：

IC₅₀＜1uM，抗肿瘤活性强，以“++++”表示；

IC₅₀＝1-10uM，抗肿瘤活性较强，以“+++”表示；

IC₅₀＝10-50uM，抗肿瘤活性一般，以“++”表示；

IC₅₀＞50uM，抗肿瘤活性弱，以“+”表示。

表2(化合物与抑制肿瘤活性表)

如表2所述，具有通式I的4-芳香胺基嘧啶类化合物对人肺癌细胞、人胃癌细胞、人前列腺癌细胞和人骨髓瘤细胞有抑制作用，可用于制备治疗包含但不限于人肺癌、人胃癌、人前列腺癌和人骨髓瘤的药物。

Claims (6)

1.4-芳香胺基嘧啶类化合物，其特征在于，为具有通式I的化合物：

其中，R1包含但不限于以下基团：

氢、甲基、乙基、丙基、异丙基、环丙基、环丁基、丁基、环戊基、

R2是一种芳香基团，包含但不限于以下芳香基团：

2.如权利要求1所述具有通式I的4-芳香胺基嘧啶类化合物及其药学上可接受的盐或溶剂合物可用于制备治疗包含但不限于人肺癌、人胃癌、人前列腺癌和人骨髓瘤的药物。

3.具有通式I的4-芳香胺基嘧啶类化合物的合成路线：

(a)化合物2合成用的试剂是3-溴-4-氯吡唑并嘧啶和芳香胺(R₂-NH₂)，用的溶剂包含但不限于二氧六环、乙醇、丙醇、异丙醇、乙腈、正丁醇和DMF等，用的碱包含但不限于三乙胺、二异丙基乙胺、二乙胺、吡啶、碳酸钾和碳酸钠等。

(b)化合物3合成用的试剂是溴代物(R₁-Br)或碘代物(R₁-I)或R₁的甲磺酸酯(R₁-OMs)或R₁的对甲苯磺酸酯(R₁-OTs)，用的溶剂包含但不限于DMF、二氧六环、异丙醇、正丁醇、四氢呋喃和乙腈等，用的碱包含但不限于碳酸钾、碳酸钠、氢化钠、碳酸铯、叔丁醇钾和叔丁醇钠等。

(c)化合物4合成用的偶联试剂包含但不限于2-胺基-苯并噁唑-5-硼酸、2-胺基-苯并噁唑-5-硼酸盐酸盐和2-胺基-苯并噁唑-5-硼酸酯，用的催化剂包含但不限于四三苯基磷钯、叔丁基磷钯、PdCl₂(dppf)、醋酸钯等，用的碱包含但不限于碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠等，反应溶剂包含但不限于二氧六环-水、DMF-水、乙醇-水和甲苯-水等，反应温度在80-120℃。

4.具有通式I的4-芳香胺基嘧啶类化合物可以成为药学上可接受的盐，成的盐包含但不限于盐酸盐、硫酸盐、草酸盐、乙酸盐、富马酸盐、酒石酸盐、马来酸盐、柠檬酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐、乳酸盐、扁桃酸盐、琥珀酸盐、延胡索酸盐和苹果酸盐等。

5.具有通式I的4-芳香胺基嘧啶类化合物可以成为药学上可接受的溶剂合物，所述溶剂合物为有机溶剂或水合物，优选醇合物或水合物。

6.本发明具有通式I的4-芳香胺基嘧啶类化合物可给药于人和动物，可以口服、直肠、肠胃外、局部给药(粉剂、软膏剂或滴剂)。所述化合物可以单独给药，或者与其它药学上可接受的化合物联合给药。用于口服给药的固体剂型包括胶囊剂、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂。固体剂型如片剂、胶囊剂、丸剂和颗粒剂可采用包衣和壳材制备，如肠衣和其它本领域公知的材料。

用于口服给药的液体剂型包括药学上可接受的乳液、溶液、悬浮液、糖浆或酊剂。

用于肠胃外注射的组合物可包含生理上可接受的无菌水或无水溶液、分散剂、悬浮液或乳液，和用于重新溶解成无菌的可注射溶液或分散液的无菌粉末。

用于局部给药的剂型包括软膏剂、散剂、喷射剂和吸入剂。