CN104244951A - 肽脱甲酰化酶抑制剂 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及式(I)的{2-(烷基)-3-[2-(5-氟-4-嘧啶基)肼基]-3-氧代丙基}羟基甲酰胺化合物、或其药学上可接受的盐、相应的药物组合物、制备方法，以及该化合物在抑制细菌的肽脱甲酰化酶(PDF)活性中的用途，以及在治疗细菌感染的方法中的用途。

Description

肽脱甲酰化酶抑制剂
发明领域
总体上，本发明涉及式(I)的{2-(烷基)-3-[2-(5-氟-4-嘧啶基)肼基]-3-氧代丙基}羟基甲酰胺化合物、或其药学上可接受的盐、相应的药物组合物、制备方法，以及该化合物在抑制细菌的肽脱甲酰化酶(PDF)活性中的用途，以及在治疗细菌感染的方法中的用途。
发明背景
细菌蛋白合成从N-甲酰基-甲硫氨酰-tRNA(f-Met-tRNAi)开始，因此，所有新近合成的多肽含有N-甲酰基-甲硫氨酸末端(f-Met-pp)(方案I)。肽脱甲酰化酶(PDF)是含金属酶，其除去多肽的N-甲酰基，当在延长过程中所述多肽从核糖体中生成[Adams，J.M.(1968)J.Mol.Biol.33，571-589；Livingston，D.M.and Leder，P.(1969)Biochemistry 8，435-443；Ball，L.A.and Kaesberg，P.(1973)J.Mol.Biol.79，531-537]。取决于它们的第二氨基酸的性质，多肽进一步由甲硫氨酸氨肽酶(MAP)处理，得到成熟蛋白。脱甲酰化作用在蛋白质成熟中起了必不可少的作用，因为细菌生长的必需酶MAP不能水解N-端肽。
方案I.在蛋白合成中PDF的作用
迄今为止，PDF普遍存在于细菌中，其在所有已测序的细菌基因组中存在至少一个pdf基因。
PDF在真核胞质蛋白合成中不起作用，在该合成中不涉及N-甲酰化作用，但是在寄生虫、植物和动物包括人中已识别出含有叶绿体/线粒体定位信号的核编码的PDF蛋白。PDF在植物和寄生虫细胞器中是必需的，因为它们的基因组编码大量的蛋白，所述蛋白需要脱甲酰化作用产生活性，但有证据表明在动物中并不是这种情况。事实上，人的线粒体PDF的特征鉴定已表明其具有比其细菌的对应部分小得多的活性。而且，在体外对人的PDF酶有活性的PDF抑制剂在正常的人细胞系的生长中没有作用[Nguyen，K.T.，Hu，X.，Colton，C.，Chakrabarti，R.，Zhu，M.X.and Pei，D.(2003)Biochemistry 42，9952-9958]。
因此，PDF抑制剂代表一类对广谱病原体具有新的作用模式的有希望的新的抗细菌剂。
现有技术中已经描述了PDF抑制剂。已经提交了有关下式的肼-3-氧代丙基羟基甲酰胺衍生物的专利申请，参见WO 03/101442和WO2006/055663。
WO09/061879(即相应于U.S.专利号7,893,056，Qin等人，Issued：February 22，2011)还公开了[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺或其药学上可接受的盐，其是如下所示结构的化合物：
因此，现有技术中已经公开了制备抑制PDF活性的化合物以及大量的该化合物。然而，对可用于治疗细菌感染的PDF抑制剂仍存在继续的需求。
根据上述具有更大的水溶性、化学稳定性等的[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺的药学上可接受的盐，和/或新的晶型将对药物产品的供应，特别是对于细菌的肽脱甲酰化酶(PDF)活性的抑制，以及治疗细菌感染的方法方面提供许多有利的益处。
出人意料地，现已显示[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺的新的药学上可接受的盐可以以纯的结晶固体的形式分离，其比相应的游离碱显示出更大的水溶性。该新晶型改善了水溶性和在[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺或其药学上可接受的盐的溶液中，在各自的盐形式中或在药物组合物或制剂中的稳定性。
还需要开发抑制细菌的肽脱甲酰化酶(PDF)活性和细菌感染的方法，所述方法包括给药[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺或其药学上可接受的盐或相应的药物组合物或制剂。
本发明克服了这些问题和本领域遇到的其它问题。
发明概述
总体上，本发明涉及式(I)的{2-(烷基)-3-[2-(5-氟-4-嘧啶基)肼基]-3-氧代丙基}羟基甲酰胺化合物的药学上可接受的盐、相应的药物组合物、制备方法，以及该化合物在抑制细菌的肽脱甲酰化酶(PDF)活性中的用途，以及在治疗细菌感染的方法中的用途。
具体地，本发明涉及新的式(I)化合物的盐，其可包括但不限于：
-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐晶型1和2；
-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺二甲磺酸盐(dimethanesuphonate)(或者，即也认为是[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺二甲磺酸盐(dimesylate))；和
-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺樟脑磺酸盐，和
相应的药物组合物或制剂。
本发明还涉及制备式(I)化合物的药学上可接受的盐的方法。
本发明还涉及治疗细菌感染的方法，所述方法包括给药需要该治疗的患者有效量的式(I)化合物的盐或相应的药物组合物.
附图简述
图1涉及[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐晶型1在DMSO-d6中的1H NMR谱图。
图2涉及[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐晶型1在DMSO-d6中的13C NMR谱图。
图3涉及[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐晶型1的X-射线粉末衍射图。
图4涉及[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1h)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐晶型1的ATR-IR谱图。
图5涉及[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1h)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐晶型1的差示扫描量热法。
图6涉及[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1h)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐晶型1的热重分析。
图7涉及[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺二甲磺酸盐的X-射线粉末衍射图。
图8涉及[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺二甲磺酸盐的差示扫描量热法(DSC)。
图9涉及[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺二甲磺酸盐的热重分析(TGA)。
图10涉及1∶1的[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺樟脑磺酸盐的X-射线粉末衍射图。
图11：[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1h)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺樟脑磺酸盐的差示扫描量热法。
图12：[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐多晶型1的无水晶体的13C固态NMR(13C SSNMR)谱图。
图13：[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐多晶型1的无水晶体的19F固态NMR(19F SSNMR)谱图。
图14：[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1h)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐多晶型2的ATR-IR谱图。
图15：[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐多晶型2的X-射线粉末衍射图。
图16：[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐多晶型2在DMSO-d6中在25℃下的1H核磁共振溶液态谱图(1H NMR)。
图17：[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐无水多晶型2的13C固态NMR(SSNMR)谱图。
图18：[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐无水多晶型2的19F固态NMR(SSNMR)谱图。
图19：[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺樟脑磺酸盐在DMSO-d6中在25℃下的1H核磁共振溶液态谱图(1H NMR)。
图20：[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐多晶型2的X-射线粉末衍射图。
发明的详细说明
总体上，本发明涉及式(I)的{2-(烷基)-3-[2-(5-氟-4-嘧啶基)肼基]-3-氧代丙基}羟基甲酰胺化合物的药学上可接受的盐、相应的药物组合物、制备方法，以及该化合物在抑制细菌的肽脱甲酰化酶(PDF)活性中的用途，以及在治疗细菌感染的方法中的用途。
具体地，本发明涉及新的式(I)化合物的盐，其可包括但不限于：
-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐晶型1和2；
-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺二甲磺酸盐(dimethanesuphonate)(或者，即也认为是[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺二甲磺酸盐(dimesylate))；和
-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺樟脑磺酸盐；和
相应的药物组合物或制剂。
本发明还涉及制备式(I)化合物的盐的方法。
本发明还涉及治疗细菌感染的方法，所述方法包括给药需要该治疗的患者有效量的式(I)化合物的盐或相应的药物组合物。
化合物
总体上，本发明涉及式(I)的{2-(烷基)-3-[2-(5-氟-4-嘧啶基)肼基]-3-氧代丙基}羟基甲酰胺化合物或其药学上可接受的盐。
WO09/061879(相应于U.S.专利号7,893,056，Qin等人，Issued：February 22，2011)公开了[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺或其药学上可接受的盐，其是如下所示结构的化合物：
根据上述，一方面本发明涉及式(I)化合物或其药学上可接受的盐：
其中：
R1选自C2-C7烷基和-(CH2)n-C3-C6环烷基；
R2选自C1-C3烷基；环丙基；C1-C3烷氧基；C1-C3卤代烷基；C1-C3烷硫基(sulfanyl)；5-元杂芳基；5-元杂环烃基；卤素；羟基甲基；和-NRaRb；
R3选自-NR4R5；卤素；苯基，其任选被一至三个R6基团所取代；和杂芳基，其任选被一至三个R6基团所取代；
R4选自H；C1-C6烷基，其任选被一或两个R7基团所取代；C1-C6烷氧基；C3-C6环烷基，其任选被一至三个R6基团所取代；杂环烃基，其任选被一至三个R6基团所取代；杂芳基，其任选被一至三个R6基团所取代；和苯基，其任选被一至三个R6基团所取代；
R5选自H；C1-C6烷基，其任选被一或两个R7基团所取代；C1-C6烷氧基；C3-C6环烷基，其任选被一至三个R6基团所取代；杂环烃基，其任选被一至三个R6基团所取代；杂芳基，其任选被一至三个R6基团所取代；和苯基，其任选被一至三个R6基团所取代；或者
R4和R5与同它们相连的N-原子一起形成任选被一至三个R6基团取代的杂环烃基；
其中：
每个R6独立地选自：C1-C6烷基，其任选被一至三个R7基团所取代；羟基；C1-C3烷氧基；-C(O)NRaRb；-C(O)Rc；-C(O)ORc；杂环烃基；任选被一个-NRaRb或吡咯烷基取代的C3-C6环烷基；氧代基；氰基；-NRaRb；苯基；杂芳基；和卤素；
每个R7独立地选自：羟基；C1-C3烷氧基；卤素；苯基；氰基；-NRaRb；-C(O)NRaRb；-C(O)Rc；C3-C6环烷基，其任选被一个羟基、杂环烃基或-NRaRb基团所取代；杂环烃基；和任选被一个甲基、-NRaRb或羟基取代的杂芳基；
如上所定义的每个Ra独立地选自：H和任选被一个羟基、甲氧基或二甲胺取代的C1-C3烷基；
如上所定义的每个Rb独立地选自：H和C1-C3烷基；
如上所定义的每个Rc独立地选自：任选被一个甲氧基取代的C1-C3烷基；苯基；杂环烃基；和杂芳基；和
n为0-2的整数。
在本发明的一个方面中，R1为-(CH2)n-C3-C6环烷基。合适地，R1为-(CH2)n-C3-C6环烷基，其中n为1。合适地，R1为-CH2-环戊基。
在本发明的另一个实施方案中，R2为C1-C3烷基；C1-C3烷氧基；C1-C3卤代烷基；C1-C3烷硫基；或者卤素。合适地，R2为甲基；乙基；甲硫基；乙硫基；氟代甲基；二氟甲基；1-氟甲基；氯；环丙基；或甲氧基。合适地，R2为甲基；乙基；甲硫基；或者氯。
在本发明的另一方面中，R3为-NR4R5；C1-C6烷氧基；或杂芳基，其任选被一至三个R6基团所取代。合适地，R3为-NR4R5，其中R4为C1-C6烷基，其任选被一或两个R7基团所取代；或者C3-C6环烷基，其任选被一至三个R6基团所取代；和R5为H、C1-C6烷基或C1-C6烷氧基。
在本发明的另一方面中，R4为环丙基；环丁基；环戊基；四氢-2H-吡喃基；2-氧代-六氢-1H-氮杂基；2-氧代-2，3，4，7-四氢-1H-氮杂基；5-氟-吡啶基；或者C1-C6烷基，其任选被一个选自下列的R7基团所取代：羟基；甲氧基；氰基；-C(O)NRaRb；-C(O)Rc；吗啉基；吡啶基；1，3-噻唑基；2-氨基-1，3-噻唑基；噻吩基；呋喃基；苯基；和1-羟基-1H-咪唑基；和R5为H；C1-C3烷基；环丙基；或者哌嗪基，其任选被一个R6基团所取代。
在另一方面，R4为甲基；乙基，其任选被一个选自下列的取代基所取代：羟基、甲氧基和-NRaRb；丙基；异丙基；环丙基；环丁基；和环戊基。
在本发明的另一方面中，R5选自H；C1-C6烷基；C1-C6烷氧基；和C3-C6环烷基。合适地，R5为H；甲基；或甲氧基。合适地，R5为H；C1-C3烷基；环丙基；或者任选被一个R6基团取代的哌嗪基。
在本发明的另一方面中，R3为-NR4R5，其中R4和R5与同它们相连的N-原子一起形成任选被一至三个R6基团取代的杂环烃基，其中该杂环烃基可包括但不限于单环体系或稠合、螺环或桥连双环体系。
合适地，R3为-NR4R5，其中R4和R5与同它们相连的N-原子一起形成氮杂环丁烷基；吡咯烷基；哌嗪基；吗啉基；2，5-二氢-1H-吡咯基；六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-(1H)-基；异唑烷基；六氢吡咯并[1，2-a]吡嗪-(1H)-基；或者2，5-二氮杂双环[2.2.1]庚基，其每个可任选被一至三个R6基团所取代。
在本发明的另一方面中，R3为-NR4R5，其中R4和R5与同它们相连的N-原子一起形成1-哌啶基；4-硫吗啉基；1-吡唑烷基；四氢-5H-[1，3]二氧杂环戊烯并[4，5-c]吡咯基；四氢-1H-呋喃并[3，4-c]吡咯-(3H)-基；六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-(1H)-基；六氢吡咯并[1，2-a]吡嗪-(1H)-基；六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-(1H)-基；六氢呋喃并[3，4-b]吡嗪-(2H)-基；八氢-2H-吡啶并[1，2-a]吡嗪基；八氢吡嗪并[1，2-a]氮杂-(1H)-基；八氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪基；八氢-1H-环戊二烯并[b]吡嗪基；八氢-1(2H)-喹喔啉基；八氢-6H-吡咯并[3，4-b]吡啶基；3-氮杂双环并[3.1.0]己基；2，5-二氮杂双环[2.2.1]庚基；4，7-二氮杂螺[2.5]辛基；5-氮杂螺[2.4]庚基；或者10-氧杂-4-氮杂三环并[5.2.1.02，6]癸基。
合适地，R3为-NR4R5，其中R4和R5与同它们相连的N-原子一起形成氮杂环丁烷基，其任选被一或两个R6基团所取代，每个R6基团独立地选自：甲基；乙基；氟；甲氧基；羟基；羟基甲基；环丙基；二甲基氨基；乙基甲基氨基；-CH2-二甲基氨基；吗啉基；吡咯烷基；-CH2-吡咯烷基；和吡啶基。
合适地，R3为-NR4R5，其中R4和R5与同它们相连的N-原子一起形成吡咯烷基，其任选被一至三个R6基团所取代，每个R6基团独立地选自：甲基；甲氧基；-CH2-甲氧基；羟基；羟基甲基；羟基乙基；二甲基氨基；乙基甲基氨基；-CH2-二甲基氨基；-CH2-吡咯烷基；-CH2-吗啉基；吡啶基；2-(二甲基氨基)-1，1-二甲基乙基；氟代甲基；-CH2-2-羟基乙基甲基氨基；-CH2-2-甲氧基乙基氨基；氰基；-C(O)N(CH3)2；1-(二甲基氨基)环丙基；-CH2-乙基甲基氨基；-CH2-二乙基氨基；-C(O)N(CH2CH3)2；-CH2-哌啶基；-CH2-异丙基甲基氨基；-CH2-丙基甲基氨基；-NHCOOCH3；-CH2-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基；和(顺)-10-氧杂-4-氮杂三环并[5.2.1.02，6]癸-4-基。
合适地，R3为-NR4R5，其中R4和R5与同它们相连的N-原子一起形成哌嗪基，其任选被一至三个R6基团所取代，每个R6基团独立地选自：甲基；乙基；异丙基；羟基甲基；羟基乙基；-CH2-O-CH3；和-COOCH3。
合适地，R3为-NR4R5，其中R4和R5与同它们相连的N-原子一起形成(9aS)-八氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪基。
在本发明的另一方面中，R6为C1-C3烷基，其任选被一至三个R7基团所取代；羟基；C1-C3烷氧基；-C(O)NRaRb；或者-NRaRb。合适地，R6为甲基；乙基；异丙基；甲氧基；羟基；二乙基氨基；或者N，N-二甲基乙酰氨基。
在本发明的另一方面中，R6为杂芳基。合适地，R6为6-元杂芳基。合适地，R6为吡啶基。
在本发明的另一方面中，R7为C1-C3烷氧基；羟基；或者-NRaRb。合适地，R7为甲氧基。
在本发明的另一方面中，R7为杂环烃基。合适地，R7为6-元杂环烃基。合适地，R7为吗啉基。
在本发明的另一方面中，R7为杂芳基。合适地，R7为吡啶基；1，3-噻唑基；噻吩基；呋喃基；咪唑基；1H-苯并咪唑基；3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基；或者3H-[1，2，3]三唑并[4，5-b]吡啶-3-基。
在本发明的另一方面中，Ra和Rb都为甲基。
在本发明的另一方面中，Rc为杂环烃基。合适地，Rc为吡咯烷基。
本发明的另一方面为式(I)化合物或其药学上可接受的盐：
其中：
R1选自C2-C7烷基和-(CH2)n-C3-C6环烷基；
R2选自C1-C3烷基；环丙基；C1-C3烷氧基；C1-C3卤代烷基；C1-C3烷硫基；5-元杂芳基；5-元杂环烃基；卤素；羟基甲基；和-NRaRb；
R3选自-NR4R5；卤素；苯基，其任选被一至三个R6基团所取代；和杂芳基，其任选被一至三个R6基团所取代；
R4选自H；C1-C6烷基，其任选被一或两个R7基团所取代；C1-C6烷氧基；C3-C6环烷基，其任选被一至三个R6基团所取代；杂环烃基，其任选被一至三个R6基团所取代；杂芳基，其任选被一至三个R6基团所取代；和苯基，其任选被一至三个R6基团所取代；
R5选自H；C1-C6烷基，其任选被一或两个R7基团所取代；C1-C6烷氧基；C3-C6环烷基，其任选被一至三个R6基团所取代；杂环烃基，其任选被一至三个R6基团所取代；杂芳基，其任选被一至三个R6基团所取代；和苯基，其任选被一至三个R6基团所取代；或
R4和R5与同它们相连的N-原子一起形成任选被一至三个R6基团取代的杂环烃基；
其中：
每个R6独立地选自：C1-C6烷基，其任选被一至三个R7基团所取代；羟基；C1-C3烷氧基；-C(O)NRaRb；-C(O)Rc；杂环烃基；C3-C6环烷基；氧代基；氰基；-NRaRb；苯基；杂芳基；和卤素；
每个R7独立地选自：羟基；C1-C3烷氧基；卤素；苯基；氰基；-NRaRb；-C(O)NRaRb；-C(O)Rc；C3-C6环烷基，其任选被一个羟基、杂环烃基或-NRaRb基团所取代；杂环烃基；和杂芳基；
如上所定义的每个Ra独立地选自：H和C1-C3烷基；
如上所定义的每个Rb独立地选自：H和C1-C3烷基；
如上所定义的每个Rc独立地选自：C1-C3烷基；苯基；杂环烃基；和杂芳基；和
n为0-2的整数。
本发明的另一方面为式(I)化合物或其药学上可接受的盐：
其中：
R1为-CH2-环戊基；
R2选自甲基；乙基；甲硫基；乙硫基；氟代甲基；二氟甲基；1-氟甲基；氯；环丙基；或甲氧基；
R3为-NR4R5；
R4选自H；C1-C3烷基；环丙基；和任选被一个R6基团所取代的哌嗪基；
R5选自H；C1-C6烷基，其任选被一或两个R7基团所取代；C1-C6烷氧基；C3-C6环烷基，其任选被一至三个R6基团所取代；杂环烃基，其任选被一至三个R6基团所取代；杂芳基，其任选被一至三个R6基团所取代；和苯基，其任选被一至三个R6基团所取代；或者
R4和R5与同它们相连的N-原子一起形成任选被一至三个R6基团取代的杂环烃基；
其中：
每个R6独立地选自：C1-C6烷基，其任选被一至三个R7基团所取代；羟基；C1-C3烷氧基；-C(O)NRaRb；-C(O)Rc；C(O)ORc；杂环烃基；C3-C6环烷基，其任选被一个-NRaRb或吡咯烷基所取代；氧代基；氰基；-NRaRb；苯基；杂芳基；和卤素；
每个R7独立地选自：羟基；C1-C3烷氧基；卤素；苯基；氰基；-NRaRb；-C(O)NRaRb；-C(O)Rc；C3-C6环烷基，其任选被一个羟基、杂环烃基或-NRaRb基团所取代；杂环烃基；和任选被一个甲基、-NRaRb或羟基取代的杂芳基；
每个Ra独立地选自H和任选被一个羟基、甲氧基或二甲胺取代的C1-C3烷基；
每个Rb独立地选自H和C1-C3烷基；和
每个Rc独立地选自任选被一个甲氧基取代的C1-C3烷基；苯基；杂环烃基；和杂芳基。
一方面本发明涉及[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺或其药学上可接受的盐。
一方面本发明涉及[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐。
一方面本发明涉及[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺二甲磺酸盐(dimethanesuphonate)(或者即也称为[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺二甲磺酸盐(dimesylate))。
一方面本发明涉及[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺樟脑磺酸盐。
术语和定义
″烷基″是指具有指定成员碳原子数目的单价的饱和烃链。例如，C1-C7烷基是指具有1-7个成员碳原子的烷基。烷基可以任选被在此所定义的一个或多个取代基取代。烷基可以是直链的或支链的。代表性的支链烷基具有一个、两个或三个支链。烷基包括甲基、乙基、丙基(正丙基和异丙基)、丁基(正丁基、异丁基和叔丁基)、戊基(正戊基、异戊基和新戊基)和己基。
″链烯基″是指具有指定成员碳原子数目并且在链中具有一个或多个碳-碳双键的不饱和烃链。例如，C2-C6链烯基是指具有2-6个成员碳原子的链烯基。在某些实施方案中，链烯基在链中具有一个碳-碳双键。在其它实施方案中，链烯基在链中具有不止一个碳-碳双键。链烯基可以任选被如在此所定义的一个或多个取代基取代。链烯基可以是直链的或支链的。代表性的支链烯基具有一个、两个或三个支链。链烯基包括乙烯基、丙烯基、丁烯基、戊烯基和己烯基。
″烷氧基″是指通过氧桥连接的烷基部分(即，-O-C1-C6烷基，其中C1-C6如文中所定义)。这种基团的实例包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、戊氧基和己氧基。
″炔基″是指具有指定成员碳原子数目并且在链中具有一个或多个碳-碳三键的不饱和烃链。例如，C2-C6炔基是指具有2-6个成员原子的炔基。在某些实施方案中，炔基在链中具有一个碳-碳三键。在其它实施方案中，炔基在链中具有不止一个碳-碳三键。为了清楚，在链中具有一个或多个碳-碳三键以及在链中具有一个或多个碳-碳双键的不饱和的烃链也称为炔基。炔基可以任选被如在此所定义的一个或多个取代基取代。代表性的支链炔基具有一个、两个或三个支链。炔基包括乙炔基、丙炔基、丁炔基、戊炔基和己炔基。
″芳基″是指芳香族烃环体系。芳基是单环体系或双环体系。单环芳环是指苯基。双环芳环是指萘基以及其中苯基与具有5、6或7个成员碳原子的环烷基或环烯基环稠合的环。芳基可以任选被在此所定义的一个或多个取代基取代。
″环烷基″是指具有指定成员碳原子数目的饱和烃环。环烷基是单环体系。例如，C3-C6环烷基是指具有3-6个成员原子的环烷基。环烷基可以任选被在此所定义的一个或多个取代基取代。环烷基包括环丙基、环丁基、环戊基和环己基。
″环烯基″是指具有指定成员碳原子数目并且在环中具有碳-碳双键的不饱和烃环。例如，C3-C6环烯基是指具有3-6个成员碳原子的环烯基。在某些实施方案中，环烯基在环内具有一个碳-碳双键。在其它实施方案中，环烯基在环中具有不止一个碳-碳双键。环烯基环不是芳香性的。环烯基是单环体系。环烯基可以任选被如在此所定义的一个或多个取代基取代。环烯基包括环丙烯基、环丁烯基、环戊烯基、环己烯基和环己二烯基。
″对映异构体过量″或″ee″是一种对映异构体相对于另一种对映异构体的过量，以百分比表示。因此，由于两种对映异构体在外消旋混合物中以等量存在，因此，外消旋混合物的对映异构体过量为0(0％ee)。然而，如果将一种对映异构体富集使得它占产物的95％，那么所述的对映异构体过量将为90％ee(富集对映异构体的数量，95％，减去另一种对映异构体的数量，5％)。
″对映异构体富集的″是指对映异构体过量大于0的产物。例如，对映异构体富集的是指对映异构体过量大于50％ee，大于75％ee或大于90％ee的产物。
″对映异构体纯的″是指对映异构体过量为99％ee或更大的产物。
″卤素″是指选自氟、氯、溴和碘的卤素基团。
″卤代烷基″是指烷基，其中烷基中的连接于成员原子上的至少一个氢原子用卤素代替。卤素取代基的数目包括但不限于1、2、3、4、5或6个取代基。卤代烷基包括单氟甲基、二氟乙基和三氟甲基。
″杂芳基″是指在环中含有1-5个，合适地含有1-4个，更合适地含有1或2个杂原子作为成员原子的芳环。含有不止一个杂原子的杂芳基可以含有不同的杂原子。杂芳基可以任选被如在此所定义的一个或多个取代基取代。杂芳基是单环体系或是稠合的双环体系。单环杂芳基环具有5-6个成员原子。双环杂芳基环具有8-10个成员原子。双环杂芳基环包括那些环，其中主要的杂芳基和次要的单环环烷基、环烯基、杂环烃基、芳基或杂芳基环连接形成稠合的双环体系。杂芳基包括吡咯基、吡唑基、咪唑基、唑基、异唑基、二唑基、噻唑基、异噻唑基、噻二唑基、呋喃基、呋咱基、噻吩基、三唑基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、吡嗪基、三嗪基、四嗪基、四唑基、吲哚基、异吲哚基、中氮茚基、吲唑基、嘌呤基、喹啉基、异喹啉基、喹喔啉基、喹唑啉基、蝶啶基、噌啉基、苯并咪唑基、苯并吡喃基、苯并唑基、苯并异唑基、苯并呋喃基、异苯并呋喃基、苯并噻唑基、苯并异噻唑基、苯并噻吩基、呋喃并吡啶基、萘啶基、吡唑并吡啶基、吡唑并嘧啶基、3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶基和3H-[1，2，3]三唑并[4，5-b]吡啶基。
″杂原子″是指氮、硫或氧原子。
″杂环烃基″是指在环中含有1-4个杂原子作为成员原子的饱和或不饱和环。杂环烃基环不是芳香性的。含有不止一个杂原子的杂环烃基可以含有不同的杂原子。杂环烃基可以任选被在此所定义的一个或多个取代基取代。杂环烃基是单环体系或稠合、螺环或桥连双环体系。单环杂环烃基环具有4-7个成员原子。双环杂环烃基环具有7-11个成员原子。在某些实施方案中，杂环烃基是饱和的。在其它实施方案中，杂环烃基是不饱和的但不是芳香性的。杂环烃基包括吡咯烷基、四氢呋喃基、二氢呋喃基、吡喃基、四氢吡喃基、二氢吡喃基、四氢噻吩基、吡唑烷基、唑烷基、噻唑烷基、哌啶基、高哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、1-吡唑烷基、氮杂基、1，3-二烷基、1，4-二烷基、1，3-氧硫杂环戊烷基(oxathiolanyl)、1，3-二噻烷基(dithianyl)、氮杂环丁烷基、异唑烷基、3-氮杂二环[3.1.0]己基、氮杂二环[3.2.1]辛基、氮杂二环[3.3.1]壬基、氮杂二环[4.3.0]壬基、2，5-二氮杂二环[2.2.1]庚基、八氢吡咯并[1，2-a]吡嗪基、八氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪基、氧杂二环[2.2.1]庚基、六氢-1H-氮杂基、2，3，4，7-四氢-1H-氮杂基、四氢-5H-[1，3]二氧杂环戊烯并[4，5-c]吡咯基、四氢-1H-呋喃并[3，4-c]吡咯-(3H)-基、六氢吡咯并[1，2-a]吡嗪-(1H)-基、八氢吡嗪并[1，2-a]氮杂-(1H)-基、六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-(1H)-基、六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-(1H)-基、10-氧杂-4-氮杂三环[5.2.1.02，6]癸基、八氢-1(2H)-喹喔啉基；八氢-1H-环戊二烯并[b]吡嗪基、六氢呋喃并[3，4-b]吡嗪-(2H)-基、八氢-6H-吡咯并[3，4-b]吡啶基、4，7-二氮杂螺[2.5]辛基和5-氮杂螺[2.4]庚基。
“成员原子”是指构成链或环的一个或多个原子。如果在链和环中存在多于一个成员原子，那么在该链或环中每个成员原子与相邻的成员原子共价结合。在链或环上构成取代基的原子不是链或环中的成员原子。
“任选取代的”表示基团，例如烷基、烯基、炔基、芳基、环烷基、环烯基、杂环烃基或杂芳基，可以是未取代的或被一个或多个如在此所定义的取代基取代。
“药学上可接受的”是指那些化合物、物质、组合物和剂型，其在合理医学判断的范围内，适合与人和动物组织接触使用，而没有过度的毒性、刺激性或其它问题或并发症，具有相称的合理受益/风险比。
涉及基团的“取代的”表示其中连接于成员原子的一个或多个氢原子被所限定的取代基代替。应当理解，术语“取代的”包括隐含的规定，即这种取代遵照取代原子和取代基的允许化合价，并且该取代生成一种稳定化合物(即不会例如通过水解、重排、环化或消除反应而自发地进行转化的化合物，并且该化合物足够稳定可从反应混合物中分离出来)。当说明一个基团可含有一个或多个取代基时，该基团中的一个或多个(若合适)成员原子可被取代。此外，其中单个成员原子可以被多于一个取代基取代，只要这种取代符合该原子允许的化合价。对于每个取代的或任选取代的基团，合适的取代基在此所定义。
“烷硫基(sulfanyl)”是指通过硫桥连接的烷基部分(即，-S-C1-C6烷基，其中C1-C6如文中所定义)。烷硫基的实例包括甲硫基和乙硫基。
为了避免歧义，下列术语通常可在文中互换、同义使用，或者以其任何变体使用：本发明化合物盐的多晶型1或2，化合物盐多晶型1或2，化合物盐晶型1或2，等等。例如，用于描述本发明具体化合物的下列术语可在文中互换、同义使用，或者以其任何变体使用：
关于：
-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐的晶型1；
-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐晶型1；
-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐的多晶型1；或
-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐多晶型1；等等；和/或
关于：
-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐的晶型2；
-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐晶型2；
-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐的多晶型2；或
-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐多晶型2；等等。
对映异构体、非对映异构体和多晶型
式(I)的化合物或其药学上可接受的盐可以含有一个或多个不对称中心(也称为手性中心)，因此，其可以以单独的对映异构体、非对映异构体或其它立体异构形式或其混合物的形式存在。
手性中心如手性碳原子还可以存在于取代基如烷基中。当手性中心的立体化学存在于式(I)或在此所示的任何化学结构中时，虽然没有特定指出，但是所述的结构应该包括任何立体异构体以及其所有的混合物。
因此，含有一个或多个手性中心的式(I)化合物或其药学上可接受的盐可以以外消旋混合物、非对映异构体的混合物、对映异构体富集的混合物、非对映异构体富集的混合物或对映异构体和非对映异构体纯的各个立体异构体的形式使用。
含有一个或多个不对称中心的式(I)化合物或其药学上可接受的盐的各个立体异构体可以通过本领域熟练技术人员已知的方法拆分。例如，这种拆分可以如下方式进行：(1)通过形成非对映异构体盐、复合物或其它衍生物；(2)通过与立体异构体专一性试剂选择性反应，例如通过酶氧化或还原反应；或(3)通过在手性环境下的气-液色谱或液相色谱，例如，在手性载体如二氧化硅上与结合的手性配体或在手性溶剂存在下。本领域熟练技术人员将会理解，当所需的立体异构体转化为非对映异构体的盐、复合物或衍生物时，需要另外的步骤以释放所需的形式。或者，特定的立体异构体可以通过使用旋光的试剂、底物、催化剂或溶剂通过不对称合成来合成，或通过不对称转化将一种对映异构体转化为另一种对映异构体。
当所公开的化合物或其盐以结构命名或描述时，应当理解该化合物或盐，包括其溶剂合物(特别是水合物)可以以晶体或非晶体的形式存在，或以它们的混合物的形式存在。该化合物或盐，或其溶剂合物(特别是水合物)也可以表现出多晶型现象(即出现不同晶体结构的性能)。这些不同的晶体形式典型地被称为″多晶型物″。
根据这个，本发明化合物的盐形式(即其可包括不同的多晶型、其无水形式、溶剂化物或水合物)可显示出特有的多晶型。如本领域常规理解的那样，多晶型现象是指化合物结晶为不止一种不同结晶或“多晶型”物质的能力。多晶型物是指具有至少两种不同排列的化合物的固体结晶相或者处于固态的化合物分子的多晶型形式。
任何一种指定化合物(包括本发明的那些化合物)的多晶型形式是通过相同的化学式或组成定义的，但是作为两种不同化合物结晶结构的化学结构并不相同。这类化合物区别可以在于各自晶格的堆积、几何排列等。
根据上述，化学和/或物理属性或特性可能因各自不同的多晶型形式而有所不同，这些不同可以包括溶解性、熔点、密度、硬度、晶相、旋光和电特性、蒸汽压、稳定性等的不同。
当在结晶过程溶剂分子结合到化合物分子的晶格结构中时，也可以形成本发明的结晶盐的溶剂合物和/或水合物。例如，本发明的溶剂合物形式可以包含下文中所述的非水溶剂例如甲醇等。水合物形式为水作为结合到晶格中的溶剂的溶剂合物形式。
对于固态多晶型的无水合物是指在晶格中不含有重复的、结晶溶剂。然而，该晶体物质可为多孔的，并可显示出能可逆的表面吸附水。
例如：
-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐晶型1是无水的[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐的晶型。
上述[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐多晶型1可吸收多达0.4％(wt/wt)的可变的水，可逆地获得高达70％的相对湿度，在该湿度下其发生潮解；和
-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐晶型2是无水的[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐的晶型。
上述[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐晶型2可吸收多达2％(wt/wt)的可变的水，可逆地获得高达90％的相对湿度。
鉴于此，本发明的新的化合物盐可以结晶无水形式或无水晶体或水合物形式(即，水合物形式为其中水作为溶剂结合到晶格中的溶剂合物形式)或它们的混合物的形式存在。
一方面，该化合物(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐晶型1可以无水晶体或晶体的无水形式、晶体的水合物或它们的混合物形式存在。
另一方面，该化合物(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐晶型2可以无水晶体或晶体的无水形式、晶体的水合物或它们的混合物形式存在。
因此，多晶型物可以具有不同的物理性质如形状、密度、硬度、可变形性、稳定性和溶解性能。多晶型物典型地表现出不同的熔点、IR光谱和X-射线粉末衍射图，其可以被用来进行鉴定。本领域熟练技术人员将会理解，不同的多晶型物例如可以通过改变或调节在化合物结晶/重结晶中所使用的反应条件进行制备。
式(I)化合物或其药学上可接受的盐还可以含有双键或其它几何不对称中心。当式I或在此所示的任何化学结构中存在的几何不对称的立体化学中心没有指出时，所述的结构应该包括反式(E)几何异构体，顺式(Z)几何异构体以及其所有的混合物。同样，所有互变异构体也将包括在式I内，不管这些互变异构体以平衡形式存在还是以主要一种形式存在。
本领域技术人员还应当进一步理解以结晶形式存在的本发明的某些化合物(包括其不同的溶剂合物)可以表现出多晶型现象(即出现不同晶体结构的性能)。这些不同的晶体形式典型地被称为″多晶型物″。本发明包括所有这些多晶型物。
多晶型物具有相同的化学组成，但是在晶体固态的堆积、几何排列以及其它所述性能方面有所不同。因此，多晶型物可以具有不同的物理性质如形状、密度、硬度、可变形性、稳定性和溶解性能。
根据本发明，[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺(即包括其盐和/或溶剂化物)的不同形式(即可包括但不限于多晶型、盐、溶剂化物、无水合物、水合物、结晶、晶型等)彼此可以使用不同的识别或鉴别方法加以区分。该技术包括固态13C核磁共振(NMR)、31P核磁共振(NMR)、红外光谱法(IR)、拉曼光谱法、X-射线粉末衍射等和/或其他技术，例如差示扫描量热法(DSC)(即测定当样品被加热、冷却或在恒温下放置时，该样品所吸收或释放的能量(热量)的量)。例如，多晶型物典型地表现出不同的熔点、IR光谱和X-射线粉末衍射图，其可以被用来进行鉴定。
本领域熟练技术人员将会理解，不同的多晶型物例如可以通过改变或调节在制备化合物中所使用的反应条件或试剂，或通过使用不同的分离或纯化步骤进行制备。例如，改变温度、压力或溶剂可以产生多晶型物。此外，在某些条件下，一种多晶型物可以自发地转变成另一种多晶型物。
众所周知，化合物的晶体状态可通过多种结晶学参数描述：晶胞大小、空间群和相对于其晶胞的原点位置的化合物中原子的原子位置。这些参数是通过晶体x-射线分析实验确定的。有可能化合物形成不止一种类型的晶体。这些不同的晶型被称为多晶型。
多晶型的粉末X-射线衍射图的特征峰位置以角位置(2θ)记录，并具有通常约0.1+/-°2-θ或0.1+/-°3-θ的容许偏差。由于校正、设置的差异和其它仪器之间的变化以及不同操作者之间的操作，整个图形峰或大多数图形峰也可移位约0.1+/-°。
特别地，[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺或其药学上可接受的盐的下列药学上可接受的形式的数据基本上示于图1至20中：
-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐晶型1和2；
-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺二甲磺酸盐(dimethanesuphonate)(或也称为[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺二甲磺酸盐(dimesylate))；和
-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺樟脑磺酸盐。
例如，晶体[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐晶型1通过下面确定：
-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐晶型1在DMSO-d6中各自的1H NMR和13C NMR谱图(分别参见图1和2，以及分别参见表1和2)；
-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐晶型1的X-射线粉末衍射图(参见表3和图3)；
基本上如图3所示的X-射线衍射图在0°2-θ(2θ)至55°2-θ(2θ)范围显示出下列特征峰：约5.3±0.3(2θ)、9.7±0.3(2θ)、10.8±0.3(2θ)、11.4±0.3(2θ)、13.5±0.3(2θ)、14.9±0.3(2θ)、17.8±0.3(2θ)、18.9±0.3(2θ)、21.2±0.3(2θ)和22.1±0.3(2θ)(参见实施例6：晶型1)；
-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1h)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐晶型1的ATR-IR光谱(参见图4和表4)；
-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1h)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐晶型1的差示扫描量热法(参见图5)；
-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1h)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐晶型1的热重分析(参见图6)；和
-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐晶型1的13C NMR和19F固态核磁共振谱(参见图12和13)。
例如，晶体[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐晶型2通过下面的谱图识别：
-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1h)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐晶型2的ATR-IR光谱(参见图14和表7)；
-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐晶型2的X-射线粉末衍射图(参见图15和表8)；
基本上如图15所示的X-射线衍射图，其描述了下列从0°2-θ(2θ)至55°2-θ(2θ)范围内的特征峰：5.5±0.3(2θ)、9.3±0.3(2θ)、9.7±0.3(2θ)、10.8±0.3(2θ)、13.6±0.3(2θ)、14.5±0.3(2θ)、15.0±0.3(2θ)、16.2±0.3(2θ)、17.8±0.3(2θ)和19.6±0.3(2θ)(参见实施例11：晶型2)；
-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐晶型2的1H NMR谱图(参见图16)；
-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐晶型2各自的13C NMR谱图和19F固态谱图(参见图17和18)；和
-图20：[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐多晶型2的X-射线粉末衍射图。
例如，晶体[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺二甲磺酸盐通过下面的谱图识别：
-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺二甲磺酸盐的X-射线粉末衍射图(参见图7)；
-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺二甲磺酸盐的差示扫描量热法(DSC)(参见图8)；和
-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺二甲磺酸盐的热重分析(TGA)(参见图9)。
例如，晶体[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺樟脑磺酸盐通过下面的谱图识别：
-1∶1的[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺樟脑磺酸盐的X-射线粉末衍射图(参见图10)；和
-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1h)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺樟脑磺酸盐的差示扫描量热法(参见图11)。
盐
在某些实施方案中，式I化合物或其药学上可接受的盐可以含有酸性官能团。在其他一些实施方案中，式I化合物可以含有碱性官能团。因此，本领域熟练技术人员将会理解，式I化合物的盐是可以制备的。实际上，在本发明的某些实施方案中，式I化合物的盐可能优选于各自的游离碱或游离酸，因为例如这些盐给予分子更大的稳定性或溶解度，由此有助于配制成剂型。
由于它们在药物中的用途，式(I)化合物的盐为适当的药学上可接受的盐。合适的药学上可接受的盐包括Berge，Bighley and MonkhouseJ.Pharm.Sci(1977)66，pp 1-19中描述的那些。
当本发明化合物为碱(含有碱性部分)时，所需的盐形式可以通过本领域已知的任何合适方法制备，所述方法包括用无机酸或用有机酸处理游离碱，所述无机酸例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等，所述有机酸例如乙酸、三氟乙酸、马来酸、琥珀酸、扁桃酸、富马酸、丙二酸、丙酮酸、草酸、羟基乙酸、水杨酸、吡喃糖苷酸(pyranosidyl acid)例如葡糖醛酸或半乳糖醛酸，α-羟基酸例如柠檬酸或酒石酸，氨基酸例如天冬氨酸或谷氨酸，芳香酸例如苯甲酸或肉桂酸，磺酸例如对-甲苯磺酸、甲磺酸、乙磺酸等。药学上可接受的盐的实例包括硫酸盐、焦硫酸盐、硫酸氢盐、亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、磷酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、乙酸盐、丙酸盐、癸酸盐、辛酸盐、丙烯酸盐、甲酸盐、异丁酸盐、己酸盐、庚酸盐、丙酸盐(propiolates)、草酸盐、丙二酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、癸二酸盐、富马酸盐、马来酸盐、丁炔-1，4-二酸盐、己炔-1，6-二酸盐、苯甲酸盐、氯苯甲酸盐、甲基苯甲酸盐、二硝基苯甲酸盐、羟基苯甲酸盐、甲氧基苯甲酸盐、邻苯二甲酸盐、苯基乙酸盐、苯基丙酸盐、苯基丁酸盐(phenylbutrates)、柠檬酸盐、乳酸盐、γ-羟基丁酸盐、羟基乙酸盐、酒石酸盐、扁桃酸盐和磺酸盐、例如二甲苯磺酸盐、甲磺酸盐、丙磺酸盐、萘-1-磺酸盐和萘-2-磺酸盐。
碱加成盐(Base salts)：药学上可接受的碱加成盐包括铵盐、碱金属盐如那些钠盐和钾盐，碱土金属盐如那些钙盐和镁盐，以及与有机碱形成的盐，包括伯、仲和叔胺如异丙胺、二乙胺、乙醇胺、三甲胺、二环己基胺和N-甲基-D-葡萄糖胺的盐。
如果本发明的碱性化合物以盐分离，则该化合物的相应的游离碱形式可以通过本领域已知的任何合适的方法制备，包括用无机碱或有机碱处理所述盐，合适地，无机碱或有机碱具有比所述化合物的游离碱形式更高的pKa。
酸加成盐(Acid salts)：合适的加成盐是由形成无毒盐的酸形成的，并且该加成盐的实例为盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、硝酸盐、磷酸盐、磷酸氢盐、乙酸盐、马来酸盐、苹果酸盐、富马酸盐、丙二酸盐、乳酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、甲酸盐、葡糖酸盐、琥珀酸盐、丙酮酸盐(piruvate)、草酸盐、草酰乙酸盐、三氟乙酸盐、蔗糖盐、苯甲酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐、甲磺酸基(methanesulphonic)、乙磺酸基(ethanesulphonic)、对甲苯磺酸基(p-toluenesulphonic)和羟乙基磺酸盐。
一些本发明化合物可以与一或多当量的酸(如果所述化合物含有碱性部分)或碱(如果所述化合物含有酸性部分)形成盐。本发明在其范围内包括所有可能的化学计量和非-化学计量的盐形式。
当本发明化合物为酸(含有酸性部分)时，所需盐可以通过本领域已知的任何合适的方法制备，包括用无机碱或有机碱处理游离酸，所述碱例如胺(伯胺、仲胺或叔胺)、碱金属或碱土金属氢氧化物等。合适的盐的示例性实例包括衍生自以下的有机盐：氨基酸(例如甘氨酸和精氨酸)、氨、伯胺、仲胺和叔胺，以及环状胺，例如乙二胺、二环己基胺、乙醇胺、哌啶、吗啉和哌嗪，以及衍生自钠、钙、钾、镁、锰、铁、铜、锌、铝和锂的无机盐。
由于本发明的化合物可含有酸和碱基团，该药学上可接受的盐可通过将这些化合物分别用碱试剂或酸试剂处理来制备。因此，本发明还提供将本发明化合物的一种药学上可接受的盐(例如盐酸盐)转化为本发明化合物的另一种药学上可接受的盐(例如钠盐)。
在此所使用的术语“药学上可接受的盐”是指保留主题化合物所需生物学活性并且显示出极低不希望毒理学作用的盐。这些药学上可接受的盐可以在化合物的最后分离和提纯期间在原位制备，或通过使提纯后的以其游离酸或游离碱形式存在的化合物单独地与合适的碱或酸分别反应进行制备。
如在此所使用的，术语“本发明化合物”表示式I化合物及其盐，包括药学上可接受的盐。术语“一种本发明的化合物”也在此使用，并指式I化合物及其盐，包括药学上可接受的盐。
本发明化合物可以固态或液态形式存在。在固态中，本发明化合物可以以结晶或非结晶的形式或以它们的混合物的形式存在。对于结晶形式的本发明化合物，本领域技术人员将会理解，可以形成药学上可接受的溶剂合物，其中在结晶期间溶剂分子结合到晶格中。溶剂合物可以包括非水溶剂如乙醇、异丙醇、DMSO、乙酸、乙醇胺和乙酸乙酯，或者它们可以包括水作为结合到晶格中的溶剂。其中水是结合到晶格中的溶剂的溶剂合物被典型地称为″水合物″。水合物包括化学计量的水合物和含有可变量水的组合物。本发明包括所有这些溶剂合物。
溶剂合物
对于以晶型存在的本发明化合物或其盐的溶剂合物，本领域技术人员将理解，可以形成药学上可接受的溶剂合物，其中溶剂分子在结晶过程中掺入至晶格中。溶剂合物可以包括非水溶剂(例如乙醇、异丙醇、DMSO、乙酸、乙醇胺和乙酸乙酯)，或它们可以包括水作为掺入晶格中的溶剂。其中水为掺入晶格中的溶剂的溶剂合物通常称为″水合物″。水合物包括化学计量的水合物以及含有可变量的水的组合物。本发明包括所有这些溶剂合物。
氘代化合物
本发明还包括多种氘代形式的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。各个可用的连接至碳原子上的氢原子可以独立地被氘原子替换。本领域技术人员将知晓如何合成氘代形式的本发明的式(I)至(II)化合物。例如，氘代的物质，如氘代的烷基基团可以通过常规技术制备(参见例如：甲基-d3-胺，获自Aldrich Chemical Co.，Milwaukee，WI，目录号489，689-2)。
同位素
本发明还包括同位素-标记的化合物，其与那些式(I)和(II)的结构相同，但是一个或多个原子被具有原子量或质量数不同于天然最常见的原子量或质量数的原子替换。可以包括在本发明化合物中的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、氟、碘和氯的同位素，例如3H、11C、14C、18F、123I或125I。
包含上述同位素和/或其它原子的其它同位素的本发明化合物和所述化合物的药学上可接受的盐包括在本发明范围内。同位素标记的本发明化合物，例如已经掺入放射性同位素(例如3H或14C)的那些化合物可用于药物和/或底物组织分布测试。氚代的(即3H)和碳-14(即14C)同位素尤其优选，因为其易于制备和检测。11C和18F同位素尤其在PET(正电子成像术)中有用。
纯度
由于本发明化合物可用于药物组合物中，将容易理解它们各自优选以基本上纯的形式提供，例如至少60％纯度，更合适地至少75％纯度和优选至少85％，尤其至少98％纯度(％基于重量-重量比)。所述化合物的不纯制品可以用于制备用于药物组合物的更纯的形式。
缩写和符号
在发明的描述中，化学元素的命名按照元素周期表。本文中所使用的缩写和符号按照化学和生物学领域中技术人员对于此类缩写和符号的常规用法。具体地，在本说明书全篇和实施例中可使用如下缩写：
g(克)；           mg(毫克)；
kg(千克)；        μg(微克)；
L(升)；           mL(毫升)；
μL(微升)；       psi(磅/平方英尺)；
M(摩尔浓度)；     mM(毫摩尔浓度)；
μM(微摩尔浓度)； nM(纳摩尔浓度)；
pM(皮摩尔浓度)；  nm(纳米)；
mm(毫米)；        wt(重量)；
N(当量浓度)；     CFU(菌落形成单位)；
I.V.(静脉内)；    Hz(赫兹)；
MHz(兆赫)；       mol(摩尔)；
mmol(毫摩尔)；    RT(室温)；
min(分钟)；       h(小时)；
b.p.(沸点)；      TLC(薄层色谱法)；
Tr(保留时间)；    RP(反相)；
MeOH(甲醇)；                   i-PrOH(异丙醇)；
TEA(三乙胺)；                  TFA(三氟乙酸)；
TFAA(三氟乙酸酐)；             THF(四氢呋喃)；
DMSO(二甲亚砜)；               EtOAc(乙酸乙酯)；
DME(1，2-二甲氧基乙烷)；       DCM(二氯甲烷)；
DCE(二氯乙烷)；                DMF(N，N-二甲基甲酰胺)；
DMPU(N，N′-二甲基亚丙基脲)；  CDI(1，1-羰基二咪唑)；
IBCF(氯甲酸异丁酯)；           AcOH(乙酸)；
HOAt(1-羟基-7-氮杂苯并三唑)；
THP(四氢呋喃)；                NMM(N-甲基吗啉)；
Pd/C(负载在碳上的钯)；         MTBE(叔丁基甲基醚)；
HOBT(1-羟基苯并三唑)；         mCPBA(间-氯过苯甲酸)；
EDC(1-[3-二甲基氨基)丙基]-3-乙基碳二亚胺盐酸盐)；
Boc(叔丁氧基羰基)；            FMOC(9-芴基甲氧基羰基)；
DCC(二环己基碳二亚胺)；        CBZ(苄氧基羰基)；
Ac(乙酰基)；                   atm(大气压)；
TMSE(2-(三甲基甲硅烷基)乙基)； TMS(三甲基甲硅烷基)；
TIPS(三异丙基甲硅烷基)；       TBS(叔丁基二甲基甲硅烷基)；
DMAP(4-二甲基氨基吡啶)；       BSA(牛血清白蛋白)
NAD(烟酰胺腺嘌呤二核苷酸)；
HPLC(高压液相色谱)；
LC/MS(液相色谱/质谱)；
BOP(双(2-氧代-3-唑烷基)膦酰氯)；
TBAF(四正丁基氟化铵)；
HBTU(O-苯并三唑-1-基-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸盐)；
HEPES(4-(2-羟基乙基)-1-哌嗪乙烷磺酸)；
DPPA(二苯基磷酰基叠氮化物)；   LAH(氢化锂铝)；
fHNO3(发烟HNO3)；              NaOMe(甲醇钠)；
EDTA(乙二胺四乙酸)
TMEDA(N，N，N′，N′-四甲基-1，2-乙二胺)
NBS(N-溴代琥珀酰亚胺)             DIPEA(二异丙基乙胺)；
dppf(1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁)；和
NIS(N-碘代琥珀酰亚胺)。
所有引用醚的地方都是指乙醚，盐水是指饱和NaCl水溶液。
合成方案和一般制备方法
本发明还涉及制备式(I)化合物或其药学上可接受的盐的方法。
式(I)化合物或其药学上可接受的盐可通过使用下面的方案中说明的合成方法获得或利用熟练的有机化学工作者的知识获得。
在这些方案中提供的合成方法适合通过应用合适的前体制备具有多种不同的官能团的本发明化合物，它们在需要时适当保护，以达到与本文所述反应相容。需要时，随后进行脱保护基以得到一般公开的所述实际化合物。虽然所述方案用文中所限定的化合物说明，但它们是用于制备本发明化合物的方法的说明。
中间体(用于制备本发明化合物的化合物)也可以盐的形式存在。因此，对于中间体，术语“式(数字)的化合物”指的是具有该结构式的化合物或其药学上可接受的盐。
本发明还涉及制备式(I)化合物或其药学上可接受的盐的方法。根据式(I)至(II)的化合物或其药学上可接受的盐可分别使用常规的有机合成的方法制备。
本发明化合物可通过使用下面的方案中说明的合成方法获得或利用熟练的有机化学工作者的知识获得。
合适的合成路线描述在下面的一般反应方案中。
化合物制备
根据式I的化合物或其药学上可接受的盐使用常规的有机合成的方法制备，合适的合成路线示于下面的一般反应方案中。
本领域熟练技术人员将会理解，如果在此所述的取代基不与在此所述的合成方法相匹配，那么该取代基可以用合适的、对反应条件稳定的保护基保护。在反应工序中，所述的保护基可以在合适的时刻除去，以便得到所需中间体或目标化合物。合适的保护基以及使用这些合适的保护基保护和脱保护不同的取代基的方法是本领域熟练技术人员公知的；其实例可以在T.Greene和P.Wuts，Protecting Groups in Chemical Synthesis(3rd ed.)，JohnWiley & Sons，NY(1999)中找到。在有些情况下，可以特定地选择取代基以便在所使用的反应条件下是活性的。在这些情况下，所述的反应条件将所选的取代基转化成另一种取代基，其作为中间体化合物是有用的或者在目标化合物中是一种所需的取代基。
方案1
如方案1中所示，(11)可通过下面方法制备：在碱如正丁基锂的存在下，使合适的酰氯(2)与手性试剂如(S)-(-)-4-苄基-2-唑烷酮(Evans′手性唑烷酮)反应得到手性中间体(3)。在螯合剂如四氯化钛存在下，在溶剂如四氢呋喃中，用碱如二异丙基乙胺处理化合物(3)，随后加入亲电子试剂如苄氧基甲基氯，得到化合物(4)。化合物(4)向相应的羟基酸(7)的转化可通过下列一系列的反应完成：使用例如H2O2和氢氧化锂氧化裂解手性唑烷酮分别得到中间体(5)，随后通过氢解得到中间体(7)。按照另一种两步的方法也可将化合物(3)转化为中间体(7)。对于该转化，可在螯合剂如四氯化钛存在下，在溶剂如四氢呋喃中，将(3)用碱如二异丙基乙胺处理，随后加入三烷或合适的另外的甲醛等价物(alternative formaldehyde equivalent)，得到化合物(6)，然后使用例如H2O2和氢氧化锂氧化裂解手性唑烷酮分别得到酸(7)。
在偶合剂如EDC和DMAP存在下使用苄氧基胺偶合酸(7)得到酰胺(8)。使用Mitsunobu条件可将其环化为氮杂环丁烷-2-酮(9)。在合适的溶剂中使用例如氢氧化锂水解氮杂环丁烷-2-酮(9)得到相应的酸(10)。化合物(10)向产物(11)的转化可使用合适的甲酰化试剂如甲酸/乙酸酐或甲酸甲酯，在纯的反应试剂中或在合适的溶剂如二氯甲烷中来完成。
方案2
如方案2中所示，THP-保护的中间体(15)可通过下面方法制备：在合适的溶剂如乙醇中使用催化剂如10％Pd/C氢化氮杂环丁烷-2-酮(9)得到(12)。在酸催化剂如对甲苯磺酸吡啶盐下，在合适的溶剂如二氯甲烷中，用二氢吡喃处理(12)得到THP-保护的氮杂环丁烷-2-酮(13)。使用例如氢氧化锂在合适的溶剂中水解氮杂环丁烷-2-酮(13)得到相应的酸(14)。化合物(14)向产物(15)的转化可使用合适的甲酰化试剂如甲酸/乙酸酐或甲酸甲酯，在纯的反应试剂中或在合适的溶剂如二氯甲烷中来完成。化合物(14)向产物(15)的转化也可在合适的溶剂如丙酮中使用5-甲基-2-硫代-[1，3，4]噻二唑-3-甲醛(Yazawa，Hisatoyo；Goto，Shunsuke；Tetrahedron Lett.26；31；1985；3703-3706)作为甲酰化试剂来完成。
中间体(15)也可根据文献方法[Bracken，Bushell，Dean，Francavilla，Jain，Lee，Seepersaud，Shu，Sundram，Yuan；PCT Int.Appl.(2006)，WO 2006127576A2]制备。
方案3
如方案3中所示，使用条件如EDC-HOAt-NMM将手性酸(11或15)与嘧啶基肼(16，R2＝烷基、卤素、H)偶合得到酰肼(17或18)。最后进行脱保护基反应(当P为Bn时，使用催化剂如10％Pd/C，在合适的溶剂如乙醇中，进行氢解；当P为THP时，在室温或40℃下使用80％乙酸-水处理)，得到其中R2＝烷基、卤素、H的最终所需的化合物(1)。
本领域一般技术人员根据文献方法可制备通式结构(16)的肼。下面的肼(16)的具体结构的实例以及用于生成它们的合成方法只是用于解释说明并不构成对本发明范围的限制。
其中R2为烷基且R3为氨基(R4R5N)的肼(24)可由合适的前体按照方案4中所述的方法制备。
方案4
如方案4中所示，R2为氢或烷基的肼(24)可根据下面方法制备：使市售可得的氟代丙二酸酯(19)与合适的脒(20)在碱性条件下进行缩合，得到嘧啶酮(21)。脒(20)是市售可得的或可由本领域一般技术人员根据文献方法制备得到。使用POCl3处理嘧啶酮(21)得到二氯嘧啶(22)。在室温下在合适的溶剂如甲醇或DMSO中使用所需的胺R4R5NH处理二氯嘧啶(22)，随后在合适的溶剂如DMSO中，通常使用加热进一步用肼一水合物处理，然后得到其中R2为氢或烷基的所需的产物(24)。
式(30)的肼[(16)，其中R2＝氯]可按照方案5或6所示的方法制备。
方案5
在碱性条件下使市售可得的氟代丙二酸酯(19)与脲缩合得到嘧啶酮(25)。将嘧啶酮(25)用POCl3处理得到三氯嘧啶(26)。在室温下在合适的溶剂如THF中用Boc-保护的肼和二异丙基乙胺处理三氯嘧啶(26)，得到中间体(27)。在二异丙基乙胺和DMAP存在下，在合适的溶剂如二氯甲烷中，进一步用焦碳酸二叔丁酯(di-t-butyl dicarbonate)处理，然后得到所需的三-Boc-保护的产物(28)。在合适的溶剂如DMF中使用胺R4R5NH处理(28)，得到嘧啶(29)，并在酸性条件下对(29)进行脱保护基，随后进行碱性条件的后处理，得到所需的肼(30)。
或者，式(30)的肼可按照方案6中所示的制备。
方案6
在室温下，在合适的溶剂如DMSO中，用所需的胺R4R5NH处理三氯嘧啶(26)，随后进一步用肼一水合物处理并加热，得到所需的产物(30)以及区域异构(regioisomeric)产物(32)。这两个区域异构体通常可通过色谱法如HPLC分离。
其中R2为甲硫基或甲氧基的最终化合物(1)可按照方案7中所示的制备。
方案7
在碱性条件下，将市售可得的氟代丙二酸酯(19)与O-甲基异脲半硫酸盐或S-甲基异硫脲半硫酸盐进行缩合，得到嘧啶酮(33)，其中R2分别为甲氧基或甲硫基。用POCl3处理嘧啶酮(33)得到二氯嘧啶(34)。在合适的溶剂如甲醇中用肼一水合物处理二氯嘧啶(34)，得到嘧啶基肼(35)，然后使用条件如EDC-HOAt-NMM将其与酸(11)或(15)偶合，得到中间体(36)。将R4R5NH加入到中间体(36)中，得到O-Bn-保护的或O-THP-保护的产物(37)。当P为Bn时，最终的脱保护基的反应通过在合适的溶剂如乙醇中，使用催化剂如10％Pd/C进行氢解；或者当P为THP时，在室温下或40℃下用80％乙酸-水处理，得到其中R2分别为甲氧基或甲硫基的最终的所需化合物(1)。
胺R4R5NH可购自商业上可获得的来源，由本领域的一般技术人员根据文献方法制备，或按照文中实施例中所述的方法制备。
药物组合物、剂型和给药方案
本发明涉及包括新的式(I)化合物或其药学上可接受的盐以及至少一种药学上可接受的赋形剂的药物组合物。
用于本发明的药物组合物中的合适的化合物可包括但不限于：
-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐晶型1和2；
-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺二甲磺酸盐(dimethanesuphonate)(即，其也称为[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺二甲磺酸盐(dimesylate))；或者
-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺樟脑磺酸盐。
在给药于患者之前，通常将本发明的化合物，但不是必须，配制成药物组合物。
因此，在另一方面中，本发明涉及包含本发明的式(I)化合物或其药学上可接受的盐以及一种或多种药学上可接受的赋形剂的药物组合物。特别地，本发明还可涉及药物组合物或制剂，其包括式(I)所限定的化合物或其药学上可接受的盐、至少一种药学上可接受的赋形剂以及任选的一种或多种其他治疗成分。
本发明的药物组合物可以以成批形式制备和包装，其中可以提取安全和有效量的本发明化合物，然后例如以粉剂或糖浆的形式给予患者。或者，本发明的药物组合物可以以单位剂型的形式制备和包装，其中每个物理上分开的单元含有安全和有效量的本发明化合物。当以单位剂型制备时，本发明的药物组合物典型地含有25mg至1.5g，合适的为100mg至500mg的本发明化合物。
本发明的药物组合物典型地含有一种本发明化合物。然而，在某些实施方案中，本发明的药物组合物可以含有不止一种本发明化合物。例如，在某些实施方案中，本发明的药物组合物可含有两种本发明的化合物。此外，本发明的药物组合物可以任选进一步包含一个或多个其它的药学活性化合物。
在此所使用的″药学上可接受的赋形剂″是指药学上可接受的物质、组合物或赋形剂，例如它们用于产生药物组合物的形状或一致性。当混入时，每种赋形剂必须与药物组合物中的其它组分相容，这样当给予患者时将避免显著降低本发明化合物的效力以及避免导致药物组合物不是药学上可接受的。此外，每种赋形剂必须具有足够高的纯度，以使得它是药学上可接受的。
典型地，将本发明化合物和药学上可接受的一种或多种赋形剂配制成一种剂型，该剂型适合通过所需的给药途径给药于所述的患者。例如，剂型包括那些，适合于(1)口服给药例如片剂、胶囊、小胶囊、丸剂、锭剂、粉剂、糖浆、酏剂、悬浮液、溶液、乳剂、囊剂和扁囊剂；(2)肠胃外给药例如无菌溶液、悬浮液和重构(reconstitution)的粉剂；(3)经皮给药例如经皮贴片；(4)直肠给药例如栓剂；(5)吸入给药例如干粉、气雾剂、悬浮液和溶液；以及(6)局部给药例如乳剂、膏剂、洗液、溶液、糊剂、喷雾剂、泡沫和凝胶剂。
合适的药学上可接受的赋形剂将随所选择的具体剂型而改变。此外，可以选择合适的药学上可接受的赋形剂，以便它们在组合物中起特定的作用。
例如，可以选择某些药学上可接受的赋形剂，这些赋型剂能够促进生成均匀的剂型。可以选择某些药学上可接受的赋形剂，这些赋型剂能够促进生成稳定的剂型。可以选择某些药学上可接受的赋形剂，一旦给予患者，它们能够促进本发明的一个或多个化合物从一种器官或身体的一部分携带或输送到另一器官或身体的另一部分。可以选择某些药学上可接受的赋形剂，它们能够增强患者的顺应性。而且，药物组合物、制剂、剂型等，可方便地以单位剂型存在且可通过制药领域众所周知的方法制备。
所有方法包括将活性成分与构成一种或多种辅助成分的载体结合的步骤。通常，制剂通过将活性成分与液体载体或微细固体载体或它们两者均匀和紧密地结合而制备，如果必要的话，将产物成形为所需的制剂。
合适的药学上可接受的赋形剂包括下列类型的赋形剂：稀释剂、填料、粘合剂、崩解剂、润滑剂、助流剂、成粒剂、包衣剂、润湿剂、溶剂、共溶剂、助悬剂、乳化剂、甜味剂、调味剂、掩味剂、着色剂、抗结块剂、湿润剂(hemectants)、螯合剂、增塑剂、增粘剂、抗氧化剂、防腐剂、稳定剂、表面活性剂和缓冲剂。本领域熟练技术人员将会理解，某些药学上可接受的赋形剂可以起不止一种作用，并且根据制剂中赋形剂量的多少以及制剂中存在的其它组分，可以起可供选择的作用。
本领域熟练技术人员能够选择合适的药学上可接受的赋形剂以合适的量用于本发明中。此外，本领域熟练技术人员可以从许多描述药学上可接受的赋形剂的地方获得资源并可用于选择合适的药学上可接受的赋形剂。实例包括Remington′s Pharmaceutical Sciences(Mack Publishing Company)，The Handbook of Pharmaceutical Additives(Gower Publishing Limited)和TheHandbook of Pharmaceutical Excipients(the American PharmaceuticalAssociation and the Pharmaceutical Press)。
本发明的药物组合物使用本领域熟练技术人员已知的工艺和方法进行制备。在本领域中使用的一些通用方法描述在Remington′s Pharmaceutical Sciences(Mack Publishing Company)中。
典型地，可将本发明化合物和药学上可接受的一种或多种赋形剂配制成一种剂型，该剂型适合通过所需的给药途径给药于所述的患者。
对于本发明，常规的剂型包括那些，适合于(1)口服给药例如片剂、胶囊、小胶囊、丸剂、锭剂、粉剂、糖浆、酏剂、悬浮液、溶液、乳剂、囊剂和扁囊剂；(2)肠胃外给药例如无菌溶液、悬浮液和重构(reconstitution)的粉剂；(3)经皮给药例如经皮贴片；(4)直肠给药例如栓剂；(5)吸入给药例如气雾剂和溶液；(6)局部给药例如乳剂、膏剂、洗液、溶液、糊剂、喷雾剂、泡沫和凝胶剂。
通常，本发明的药物组合物使用常规的物质和技术例如混合、掺和等制备。
对于本发明的目的，术语“活性剂”被定义为本发明的任何化学物质或组合物，可将其从设备中递送到使用环境中，获得所需的效果。
当然，化合物在组合物中的百分含量可随着治疗用的组合物中活性成分量的改变而改变，从而可获得合适的剂量。
一方面，本发明涉及药物组合物，其包括式(I)化合物或其药学上可接受的盐以及一种或多种药学上可接受的赋形剂。
另一方面，本发明涉及药物组合物，其包括式(II)化合物或其药学上可接受的盐以及一种或多种药学上可接受的赋形剂。
另一方面，本发明涉及药物组合物，其包括文中所述的本发明的一种或多种化合物或其药学上可接受的盐以及一种或多种药学上可接受的赋形剂。
应当理解用于本发明组合物的化合物的实际的优选剂量可根据所要配制的具体组合物、给药方式、给药的具体位置和所要治疗的宿主而变化。
本发明的活性化合物可例如与惰性稀释剂或与可同化的食用载体一起口服给药，或者它们可包封在硬或软壳胶囊中，或者它们可被压制成片剂，或者它们可直接与食品混合等。
一方面，本发明涉及固体口服剂型如片剂或胶囊，其包含安全和有效量的本发明化合物和稀释剂或填料。合适的稀释剂和填料包括乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇、山梨糖醇、淀粉(例如玉米淀粉、马铃薯淀粉和预胶凝化的淀粉)、纤维素及其衍生物(例如微晶纤维素)、硫酸钙和磷酸氢钙。所述的口服固体剂型可以进一步包含粘合剂。合适的粘合剂包括淀粉(例如玉米淀粉、马铃薯淀粉和预胶凝淀粉)、明胶、阿拉伯胶、海藻酸钠、海藻酸、西黄蓍胶、瓜尔胶、聚维酮和纤维素及其衍生物(例如微晶纤维素)。所述的口服固体剂型可以进一步包含崩解剂。合适的崩解剂包括交聚维酮、淀粉羟基乙酸钠、交联甲羧纤维素、海藻酸和羧甲基纤维素钠。所述的口服固体剂型可以进一步包含润滑剂。合适的润滑剂包括硬脂酸、硬脂酸镁、硬脂酸钙和滑石粉。
如果合适的话，可以对口服给药的剂量单位制剂进行微胶囊化。例如，通过将粒状物质包衣或包埋在聚合物、蜡等中，可以延长或维持该组合物的释放。
本发明化合物还可以与作为靶向药物载体的可溶性聚合物偶联。这些聚合物可以包括聚维酮、吡喃共聚物、聚羟丙基甲基丙烯酰胺-苯酚、聚羟乙基天冬酰胺苯酚或被棕榈酰残基取代的聚氧化乙烯多聚赖氨酸。此外，本发明的化合物可以与在获得控制释放药物中使用的一类可生物降解的聚合物偶合，例如，聚乳酸、聚己内酯(polepsilon caprolactone)、多羟基丁酸、聚原酸酯、聚缩醛、聚二氢吡喃、聚氰基丙烯酸酯和水凝胶的交联或两亲嵌段共聚物。
在另一方面中，本发明涉及液体口服剂型。口服液体如溶液、糖浆和酏剂可以以剂量单位形式制得，这样给定的数量中含有预定量的本发明化合物。糖浆可以通过将本发明化合物溶解在适当调味的水溶液中制得，而酏剂通过使用无毒性醇赋形剂制得。悬浮液可以通过将本发明化合物分散在无毒性赋形剂中进行配制。还可以加入增溶剂和乳化剂如乙氧基化异硬脂醇和聚氧乙烯山梨糖醇醚、防腐剂、调味添加剂如薄荷油或天然甜味料或糖精或其他人工甜味料等。
另一方面，本发明涉及肠胃外给药，即通过静脉内、肌内、皮下、鼻内、直肠内、阴道内、腹膜内给药、胸骨内注射或输液技术。通常优选皮下和肌内形式的肠胃外给药。一方面，该组合物通过肠胃外给药，最适合通过静脉内给药。用于该给药方式的合适的剂型可以通过常规的技术制备。
可配制本发明的药物组合物以使得在将该组合物给药于患者时本发明的化合物是生物可利用的。
适合于肠胃外给药的药物组合物包括含水和非水无菌注射液，其可以含有抗氧化剂、缓冲液、抑菌剂和溶质，其使得所述制剂与所指定的接受者的血液等渗；以及含水和非水无菌悬浮液，其可以包括助悬剂和增稠剂。所述的组合物可以在单位-剂量或多剂量容器，例如密封的安瓿、药瓶、小袋等中存在，并且可以在冻干(冷冻干燥)条件下存储，其仅需要在临用时加入无菌液体载体，例如注射用水。临时注射溶液和悬浮液可以由无菌粉剂、粒剂和片剂制备。
药物组合物可为液体形式，例如酏剂、糖浆、溶液、乳剂或悬浮液。该液体可用于口服给药或通过注射递送。用于通过注射给药的组合物，其还可以包括一种或多种表面活性剂、防腐剂、润湿剂、分散剂、助悬剂、缓冲剂、稳定剂和等渗剂。
本发明的液体组合物，无论它们是溶液、悬浮液或其他类似的形式，也可包括一种或多种下列组分：无菌稀释剂如用于注射的水、盐水溶液(优选生理盐水)、林格(氏)溶液、等渗氯化钠、混合油如合成的单酸甘油酯或甘油二酯，其可用作溶剂或悬浮介质、聚乙二醇、甘油、环糊精、丙二醇或其它溶剂；抗菌剂如苄醇或尼泊金甲酯；抗氧化剂如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合剂如乙二胺四乙酸；缓冲剂如乙酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐，以及用于调节等渗的试剂，如氯化钠或葡萄糖。肠胃外组合物可封装于安瓿中、一次性注射器或多剂量小瓶(玻璃、塑料或其他材料制成)中。生理盐水是优选的辅剂。可注射的组合物优选是无菌的。
有效治疗特定病症或适应症的本发明化合物的量将取决于病症或适应症的性质，并且可通过标准的临床技术确定。此外，可任选使用体外或体内试验以帮助确定最佳剂量范围。组合物中所用的精确剂量也将取决于给药途径和疾病或病症的严重程度，并且应当根据从业医生的判断和每个患者的实际情况来决定。
另一方面，本发明涉及药物组合物，其包括[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐。
另一方面，本发明涉及药物组合物，其分别包括[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐晶型1或晶型2，其为无水晶体或结晶无水形式、水合物或其混合物。
另一方面，本发明涉及药物组合物，其包括[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐晶型1，其为无水晶体或结晶无水形式。
另一方面，本发明涉及药物组合物，其包括[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐晶型2，其为无水晶体或结晶无水形式。
另一方面，本发明涉及药物组合物，其包含[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺、或其药学上可接受的盐以及至少一种药学上可接受的赋形剂。
另一方面，本发明涉及药物组合物，其包括[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐和至少一种药学上可接受的赋形剂。
另一方面，本发明涉及药物组合物，其包括[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐晶型1和至少一种药学上可接受的赋形剂。
另一方面，本发明涉及药物组合物，其包括[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐晶型2和至少一种药学上可接受的赋形剂。
另一方面，本发明涉及药物组合物，其包括[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺二甲磺酸盐和至少一种药学上可接受的赋形剂。
另一方面，本发明涉及药物组合物，其包括[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺樟脑磺酸盐和至少一种药学上可接受的赋形剂。
给药
给药本发明的式(I)化合物、或其药学上可接受的盐或其相应的药物组合物的治疗方案也可由本领域的一般技术人员很容易地确定。
一方面本发明涉及给药式(I)化合物或其药学上可接受的盐或其相应的药物组合物。
用于单独给药或在本发明的药物组合物中的合适的化合物包括但不限于：
-分别为[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐晶型1和2；
-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺二甲磺酸盐(dimethanesuphonate)(或即也称为[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺二甲磺酸盐(dimesylate))；或者
-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺樟脑磺酸盐等。
给药本发明化合物、药物组合物或剂型的量可在宽的范围内变化从而每天根据患者的体重提供有效量的单位剂量以根据给药方式获得所需的效果。
本发明的范围包括所有的化合物、药物组合物或控释制剂或剂型，其中含有以获得所需目的的有效量。尽管个人的需要不同，但是每个成分的有效量的最佳范围的确定在本领域的技术范围内。
本发明的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或相应的药物组合物可以通过任何合适的给药途径给药，包括全身给药和局部给药两者。全身给药包括口服给药、肠胃外给药、经皮给药、直肠给药，和吸入给药。
肠胃外给药是指除肠道给药、经皮给药或吸入给药以外的给药途径，并且典型地通过注射或输液给药。肠胃外给药包括静脉内、肌内和皮下注射或输液。吸入给药是指通过患者的肺给药，不管是通过口腔吸入或通过鼻通道吸入。一方面，本发明的药物组合物、制剂、剂量、剂型或给药方案适于通过吸入给药。
局部给药包括施用于皮肤以及眼内、阴道内和鼻内给药。
本发明的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或相应的药物组合物可给药一次，或根据给药方案给药，其中多个剂量以不同的时间间隔给药给定的时间段。例如，剂量可每天给药一次、两次、三次或四次。剂量可给药直到达到所需的治疗效果或无期限地保持所需的治疗效果。
本发明的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或相应的药物组合物的合适的给药方案取决于该化合物的药物动力学性质，例如吸收、分布和半衰期，其可以由本领域熟练技术人员确定。此外，对于本发明的化合物，合适的给药方案，包括这些给药方案的持续时间，将取决于所治疗的疾病、所治疗疾病的严重程度、所治疗患者的年龄和身体状态、所治疗患者的病史、同步疗法(concurrent therapy)的性质、所需的疗效等因素，这些都在本领域熟练技术人员知识和技术的范围内。本领域熟练技术人员可以进一步理解，考虑个体患者对给药方案的反应后，合适的给药方案可能需要调整，或者随时间由于个体患者需要的改变而调整。
在另一方面中，本发明涉及液体口服剂型。口服液体如溶液、糖浆和酏剂可以以剂量单位形式制得，这样给定的数量中含有预定量的本发明化合物。糖浆可以通过将本发明化合物溶解在适当调味的水溶液中制得，而酏剂通过使用无毒性醇赋形剂制得。悬浮液可以通过将本发明化合物分散在无毒性赋形剂中进行配制。还可以加入增溶剂和乳化剂如乙氧基化异硬脂醇和聚氧乙烯山梨糖醇醚、防腐剂、调味添加剂如薄荷油或天然甜味料或糖精或其他人工甜味料等。
另一方面，本发明涉及肠胃外给药。适合于肠胃外给药的药物组合物包括含水和无水无菌注射液，其可以含有抗氧化剂、缓冲液、抑菌剂和溶质，其使得所述制剂与所指定的接受者的血液等渗；并且含水和无水无菌悬浮液可以包括助悬剂和增稠剂。所述的组合物可以在单位-剂量或多剂量容器，例如密封的安瓿和药瓶中存在，并且可以在冻干(冷冻干燥)条件下存储，其仅需要在使用前立即加入无菌液体载体，例如注射用水。临时注射溶液和悬浮液可以由无菌粉剂、粒剂和片剂制备。
典型的日剂量可以随所选择的具体给药途径而改变。对于口服给药来说，典型的日剂量为对于大约70kg体重的人，每天给药7mg-7g范围内的，合适地，3.5mg-3.5g范围内的本发明的化合物。
本发明的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或相应的药物组合物可作为注射剂、胶囊剂、片剂和颗粒剂，经肠胃外或口服给药，并且优选作为注射剂给药。所给予的量通常可为每1kg患者或动物的体重约0.1至100mg/天，优选约0.5至50mg/天，如果要求的话，分为每天2-4次。当用作注射剂时载体为例如蒸馏水、盐水等，并且碱等可用于pH调节。当用作胶囊剂、颗粒剂或片剂时，载体可为已知的赋形剂(例如，淀粉、乳糖、蔗糖、碳酸钙、磷酸钙等)、粘合剂(例如，淀粉、阿拉伯树胶、羧甲基纤维素、羟丙基纤维素、结晶纤维素等)、润滑剂(例如，硬脂酸镁、滑石等)等。
对于本文所公开的式(I)至(II)化合物的所有使用方法，每日口服剂量疗法优选为约0.05至约80mg/kg的总体重，优选约0.1至30mg/kg，更优选约0.5mg至15mg/kg，以一个或多个日剂量给药。例如，每日肠胃外剂量疗法为约0.1至约80mg/kg的总体重，优选约0.2至30mg/kg，并且更优选约0.5mg至15mg/kg，以一个或多个日剂量给药。每日局部剂量疗法优选为0.01mg至150mg，每天给药一至四次。每日吸入剂量疗法优选为每天约0.05微克/kg至约5mg/kg或约0.2微克/kg至约20微克/kg，以一个或多个日剂量给药。
本领域技术人员还认为式(I)至(II)化合物或其药学上可接受的盐的最佳用量和个体剂量范围分别应根据所治疗疾病的性质和程度、给药的剂型、途经和部位以及所治疗的具体患者来决定，且这类最佳方案可以通过常规技术来确定。本领域技术人员还应当理解，最佳疗程，即，限定的天数中每天分别给药式(I)至(II)化合物或其药学上可接受的盐的剂量数值，可通过本领域技术人员使用常规疗程测定试验确定。
当然，达到治疗效果所需的本发明式(I)化合物或其药学上可接受的盐或相应的药物组合物的量，将根据具体化合物，给药途径，治疗的受治疗者和治疗的具体病症或疾病而改变。
本发明的化合物的合适的给药方案取决于该化合物的药代动力学性质，如吸收、分布和半衰期，其可由本领域技术人员确定。此外，本发明的化合物的合适的给药方案，包括该方案给药的持续时间，取决于治疗的疾病、治疗的疾病的严重性、治疗患者的年龄和身体情况、治疗患者的病史、同时进行的治疗的性质、所需的治疗效果，和本领域技术人员的知识和专门技术范围内的类似因素。本领域技术人员应进一步理解基于单独的患者对给药方案的响应或随时间按照单独患者需求的改变，合适的给药方案可能需要调节。
此外，本发明的化合物可以以前药给药。如本文所使用的，本发明的化合物的″前药″为该化合物的功能衍生物，其在给药于患者后，最终体内释放本发明的化合物。作为前药给药本发明的化合物可使得本领域技术人员进行以下项目的一种或多种：(a)改进该化合物体内的开始作用；(b)改进该化合物体内的作用持续时间；(c)改进该化合物体内的运输或分布；(d)改进该化合物体内的溶解性；和(e)克服副作用或化合物遇到的其它困难。用于制备前药的典型的功能衍生物包括修饰体内化学或酶催裂解的化合物。这些修饰包括制备磷酸酯、酰胺、酯、硫酯、碳酸酯和氨基甲酸酯，是本领域技术人员众所周知的。
本发明还提供了用于医学治疗，特别是治疗细菌感染的本发明化合物。因此，在另一方面，本发明涉及式I的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗细菌感染的药物中的用途。
另一方面，本发明涉及[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺、或其药学上可接受的盐，其可配制用于口服给药，合适的为液体或片剂形式，或者可配制用于肠胃外给药。
另一方面，本发明涉及如上所限定的药物组合物或制剂，其中每个被配制用于静脉内(iv)给药。
使用方法
本发明还涉及治疗细菌感染的方法，所述方法包括给药于需要该治疗的患者有效量的式(I)化合物、或其药学上可接受的盐。
本发明的化合物是细菌的肽脱甲酰化酶(PDF)的抑制剂，并因此能够抑制细菌生长。这些化合物能用于治疗其中所述的潜在病状(至少在某种程度上)可归因于(即原因为)多种原核生物的感染性疾病。
实例包括但不限于源自下列的革兰氏阳性和革兰氏阴性需氧和厌氧细菌：链球菌属(Streptococcus)例如肺炎链球菌(S.pneumoniae)和酿脓链球菌(S.pyogenes)，葡萄球菌属(Staphylococcus)例如金黄色葡萄球菌(S.aureus)、表皮葡萄球菌(S.epidermidis)和腐生葡萄球菌(S.saprophyticus)，莫拉菌属(Moraxella)例如粘膜炎莫拉氏菌(M.catarrhalis)，嗜血杆菌属(Haemophilus)例如流感嗜血杆菌(H.influenzae)，奈瑟氏菌属(Neisseria)，支原体属(Mycoplasma)例如肺炎支原体(M.pneumoniae)，军团菌属(Legionella)例如嗜肺军团菌(L.pneumophila)，衣原体属(Chlamydia)例如肺炎衣原体(C.pneumoniae)，拟杆菌属(Bacteroides)，梭菌属(Clostridium)，梭杆菌属(Fusobacterium)，丙酸杆菌属(Propionibacterium)和消化链球菌属(Peptostreptococcus)。
合适地，本发明的化合物可用于治疗由链球菌属所引起的细菌感染，更合适地，本发明的化合物可用于治疗由肺炎链球菌或酿脓链球菌所引起的细菌感染。
合适地，本发明的化合物可用于治疗由葡萄球菌属所引起的细菌感染，更合适地，本发明的化合物可用于治疗由金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌或腐生葡萄球菌所引起的细菌感染。
合适地，本发明的化合物可用于治疗由莫拉菌属所引起的细菌感染，更合适地，本发明的化合物可用于治疗由粘膜炎莫拉氏菌所引起的细菌感染。
合适地，本发明的化合物可用于治疗由嗜血杆菌属所引起的细菌感染，更合适地，本发明的化合物可用于治疗由流感嗜血杆菌所引起的细菌感染。
合适地，本发明的化合物可用于治疗由奈瑟氏菌属所引起的细菌感染。
合适地，本发明的化合物可用于治疗由支原体属所引起的细菌感染，更合适地，本发明的化合物可用于治疗由肺炎支原体所引起的细菌感染。
合适地，本发明的化合物可用于治疗由军团菌属所引起的感染细菌，更合适地，本发明的化合物可用于治疗由嗜肺军团菌所引起的细菌感染。
合适地，本发明的化合物可用于治疗由衣原体属所引起的细菌感染，更合适地，本发明的化合物可用于治疗由肺炎衣原体所引起的细菌感染。
合适地，本发明的化合物可用于治疗由拟杆菌属所引起的细菌感染。
合适地，本发明的化合物可用于治疗由梭菌属所引起的细菌感染。
合适地，本发明的化合物可用于治疗由梭杆菌属所引起的细菌感染。
合适地，本发明的化合物可用于治疗由丙酸杆菌属所引起的细菌感染。
合适地，本发明的化合物可用于治疗由消化链球菌属所引起的细菌感染。
本发明的化合物也可用于治疗由对β-内酰胺、喹诺酮、大环内酯类、酮内酯类、糖肽和唑烷酮类抗生素耐药的细菌所引起的细菌感染。抗细菌感染的药物包括但不限于对青霉素、大环内酯或左氧氟沙星耐药的肺炎链球菌；对甲氧西林或大环内酯耐药、以及对万古霉素中度耐药的金黄色葡萄球菌；对甲氧西林耐药的表皮葡萄球菌；和对唑烷酮耐药的金黄色葡萄球菌。
本发明的化合物可用于治疗哺乳动物特别是人中的细菌感染。这种感染包括但不限于耳朵感染、鼻窦炎、上呼吸道和下呼吸道感染、生殖器感染、皮肤和软组织感染和细菌性心内膜炎。本发明的化合物也可用于预防哺乳动物特别是人中的细菌感染，如可能由医疗和牙科程序所引起的细菌感染。
合适地，本发明的化合物可用于治疗耳朵感染。
合适地，本发明的化合物可用于治疗鼻窦炎。
合适地，本发明的化合物可用于治疗上呼吸道和下呼吸道感染。
合适地，本发明的化合物可用于治疗生殖器感染。
合适地，本发明的化合物可用于治疗皮肤和软组织感染。
合适地，本发明的化合物可用于治疗细菌性心内膜炎。
如文中所用的“感染性疾病”指的是其特征在于存在有微生物感染如细菌感染的任何疾病。
在此所使用的″治疗″与疾病有关，是指：(1)改善或预防疾病或疾病的一个或多个生物学表现，(2)干涉(a)生物学级联(biological cascade)的一个或多个点，其引起疾病或是造成疾病的原因或(b)疾病的一个或多个生物学表现，(3)减轻与疾病有关的一个或多个症状或影响，或(4)减缓疾病的进展或疾病的一个或多个生物学表现。
如上所述的疾病的″治疗″包括该疾病的预防。本领域熟练技术人员将会理解，″预防″不是绝对的术语。在医学中，″预防″被理解为是指预防性给予药物以显著削弱疾病或其生物学表现的可能或严重程度，或延迟这种疾病或其生物学表现的发病。
在此所使用的关于本发明化合物的″有效量″是指在正确的医学判断范围内，足以治疗患者的疾病但同时足够低以避免严重副作用(合理的益处/风险比)的化合物数量。化合物的有效量将随所选择的具体化合物(例如考虑该化合物的药效、效力和半衰期)；所选择的给药途径；所治疗的疾病；所治疗疾病的严重程度；所治疗患者的年龄、大小、体重和身体状态；所治疗患者的病史；治疗的持续时间；联合治疗的性质；所需的治疗效果等因素而变化，但通常可由本领域熟练技术人员确定。
在此所使用的″患者″是指人或其它哺乳动物。
本发明的化合物可以通过任何合适的给药途径给予，包括全身性给药和局部给药。全身性给药包括口服给药、肠胃外给药、经皮给药、直肠给药和吸入给药。肠胃外给药是指除肠道给药、经皮给药或吸入给药以外的给药途径，并且典型地通过注射或输液给药。肠胃外给药包括静脉内、肌内和皮下注射或输液。吸入给药是指通过口腔或通过鼻通道吸入给药于患者的肺。局部给药包括施用于皮肤和眼内、阴道内和鼻内给药。
本发明的化合物可以给药一次，或根据给药方案，在规定的时间内以可变的时间间隔多次给药。例如，每日可以给药一次、二次、三次或四次。可以一直给予剂量，直到实现所需的疗效为止，或者无期限地给药以维持所需的疗效。本发明化合物的合适的给药方案取决于该化合物的药物动力学性质，例如吸收、分布和半衰期，其可以由本领域熟练技术人员确定。此外，对于本发明的化合物，合适的给药方案，包括这些给药方案的持续时间，将取决于所治疗的疾病、所治疗疾病的严重程度、所治疗患者的年龄和身体状态、所治疗患者的病史、同步疗法(concurrent therapy)的性质、所需的疗效等因素，这些都在本领域熟练技术人员知识和技术的范围内。本领域熟练技术人员可以进一步理解，考虑个体患者对给药方案的反应后，合适的给药方案可能需要调整，或者随时间由于个体患者需要的改变而调整。
典型的日剂量可以随所选择的具体给药途径而改变。对于口服给药来说，典型的日剂量为对于大约70kg体重的人，每天给药50mg-3g范围内的，合适地，100mg-2g范围内的本发明的化合物。
此外，可以前药的形式给予本发明的化合物。在此所使用的本发明化合物的″前药″是该化合物的功能衍生物，当将它给予患者时，其在体内最终释放出本发明的化合物。以前药的形式给予本发明的化合物可以使本领域熟练技术人员去做下列一个或多个：(a)改变化合物在体内的开始；(b)改变化合物在体内的作用持续时间；(c)改变化合物在体内的运输或分布；(d)改变化合物在体内的溶解度；以及(e)克服化合物的副作用或化合物所遇到的其它难点。用于制备前药的典型的功能衍生物包括修饰在体内化学或酶裂解的化合物。这些修饰，其包括磷酸酯、酰胺、酯、硫代酯、碳酸酯和氨基甲酸酯的制备，是本领域熟练技术人员公知的。
本发明还提供了在医学治疗特别是在细菌感染中使用的本发明的化合物。因此，另一方面，本发明涉及式I的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗细菌感染的药物中的用途。
本发明的治疗方法，特别是治疗感染性疾病包括细菌感染的方法，所述方法包括给药于需要该治疗的患者有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐。
一方面，本发明提供在人中治疗细菌感染的方法，所述方法包括向需要该治疗的人给药治疗有效量的[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺或其药学上可接受的盐。
一方面，本发明提供在人中治疗细菌感染的方法，所述方法包括向需要该治疗的人给药治疗有效量的[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐。
一方面，本发明提供在人中治疗细菌感染的方法，所述方法包括向需要该治疗的人给药治疗有效量的[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐晶型1。
一方面，本发明提供在人中治疗细菌感染的方法，所述方法包括向需要该治疗的人给药治疗有效量的[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐晶型2。
一方面，本发明提供在人中治疗细菌感染的方法，所述方法包括给药治疗有效量的[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺二甲磺酸盐(dimethanesuphonate)(或者即[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺二甲磺酸盐(dimesylate))。
一方面，本发明提供在人中治疗细菌感染的方法，所述方法包括给药治疗有效量的[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺樟脑磺酸盐。
一方面，本发明提供治疗细菌感染的方法，所述方法包括向需要该治疗的人给药治疗有效量的药物组合物，其包括[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺、或其药学上可接受的盐以及至少一种药学上可接受的赋形剂。
一方面，本发明提供治疗细菌感染的方法，所述方法包括向需要该治疗的人给药治疗有效量的药物组合物，其包括[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐以及至少一种药学上可接受的赋形剂。
一方面，本发明提供治疗细菌感染的方法，所述方法包括向需要该治疗的人给药治疗有效量的药物组合物，其包括[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐晶型1以及至少一种药学上可接受的赋形剂。
一方面，本发明提供治疗细菌感染的方法，所述方法包括向需要该治疗的人给药治疗有效量的药物组合物，其包括[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐晶型2以及至少一种药学上可接受的赋形剂。
一方面，本发明提供治疗细菌感染的方法，所述方法包括向需要该治疗的人给药治疗有效量的药物组合物，其包括[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺二甲磺酸盐(dimethanesuphonate)(或，即[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺二甲磺酸盐(dimesylate))以及至少一种药学上可接受的赋形剂。
一方面，本发明提供治疗细菌感染的方法，所述方法包括向需要该治疗的人给药治疗有效量的药物组合物，其包括[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺樟脑磺酸盐以及至少一种药学上可接受的赋形剂。
对于上述每个方面，每种方法中所述的细菌感染可以是由链球菌属、葡萄球菌属、莫拉菌属、嗜血杆菌属、奈瑟氏菌属、支原体属、军团菌属、衣原体属、拟杆菌属、梭菌属、梭杆菌属、丙酸杆菌属或消化链球菌属所引起的细菌感染。
对于上述每个方面，每种方法中所述的细菌感染可以选自：耳朵感染、鼻窦炎、上呼吸道感染、下呼吸道感染、生殖器感染、皮肤和软组织感染或细菌性心内膜炎等。
生物和生物学试验
如上所述，根据式(I)的化合物或其药学上可接受的盐可用于抑制细菌的肽脱甲酰化酶(PDF)活性，并用于细菌感染的治疗方法中。根据式(I)的化合物或其药学上可接受的盐的生物活性可使用合适的试验如那些测定该抑制作用的试验以及那些评价本发明化合物抑制体外或在感染的动物模型中的细菌生长的能力的试验来确定。
根据式(I)的化合物或其药学上可接受的盐的生物活性可使用合适的试验如那些测定PDF的酶活性的抑制作用的试验以及那些评价本发明化合物抑制体外或在感染的动物模型中的细菌生长的能力的试验来确定。
相比WO 03/101442中的实施例，本发明的某些实施例具有更高的体外抗菌活性(MIC和/或MIC90)和/或更好的体内效力。这些实施例包括但不限于下列这些化合物：
-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。
PDF IC50测试
PDF的酶活性使用甲酸脱氢酶(FDH)-偶联的试验测定[Lazennec andMeinnel(1997)Anal.Biochem.244，180-182]。一旦甲酸通过PDF从甲硫氨酸释放，其即被FDH氧化，从而还原一分子的NAD成NADH，且导致在340nm的吸光度增加。反应通过添加PDF至包含所有其它反应组分的微量滴定板中而引发，且在25℃连续监测20分钟。金黄色葡萄球菌PDF(SaPDF)测试的最终反应组成为50mM磷酸钾，pH 7.6、5单位/mL FDH、7mM NAD、5％DMSO、1nM SaPDF和2.9mM甲酰基-Met-Ala-Ser，总体积为50μL。抑制剂的系列稀释用DMSO进行。试剂和测试形式对于流感嗜血杆菌PDF是相同的，除了甲酰基-Met-Ala-Ser最终为6mM。在肺炎链球菌PDF测试中，反应条件类似但包含30pM酶、2mM NAD和4mM甲酰基-Met-Ala-Ser。对于使用不同的PDF同工酶的底物，不同的甲酰基-Met-Ala-Ser浓度反映了KM值。IC50通过拟合至方程：％抑制＝100/1+(IC50/[I])s而确定，其中s为斜率因子，I为抑制剂浓度且IC50为引起50％抑制的化合物浓度。
结果
实施例1-4抑制金黄色葡萄球菌、流感嗜血杆菌和肺炎链球菌PDF活性的IC50＜100nM。
抗微生物活性测试
全细胞抗微生物活性通过肉汤微量稀释液使用临床和实验室标准研究所(CLSI，以前为NCCLS)推荐的方法(NCCLS Document M7-A6，″Methodsfor Dilution Susceptibility Tests for Bacteria that Grow Aerobically-ApprovedStandard Sixth Edition″，2003)测定。化合物以系列的两倍稀释液测试，范围为64至0.06μg/mL。在该测试中，评价12个菌株的板。该板由以下实验室菌株组成：金黄色葡萄球菌Oxford、金黄色葡萄球菌WCUH29、粪肠球菌I、粪肠球菌7、流感嗜血杆菌Q1、流感嗜血杆菌NEMCl、粘膜炎莫拉氏菌1502、肺炎链球菌1629、肺炎链球菌N1387、肺炎链球菌Ery2、大肠杆菌7623(AcrABEFD+)和大肠杆菌120(AcrAB-)。最小抑制浓度(MIC)测定为抑制可见生长的化合物最低浓度。使用读出镜以辅助测定MIC终点。
结果
各个实施例1-4对至少一种以上所列的生物体具有最小抑制浓度(MIC)≤4μg/mL。除了粪肠球菌I和粪肠球菌7以外，对于上述所列出的所有生物的至少一种菌株，至少一个实施例具有MIC≤4μg/mL；而对于粪肠球菌I和粪肠球菌7，大多数实施例具有MIC≥16μg/mL。
具体实施例的抗微生物活性数据(MIC，μg/mL)示于表2中。
表2
*MIC数据以所获得的所有结果的中值表示。
感染的动物模型
所有方法根据GSK Institutional Animal Care and Use Committee批准的方案进行，且满足或超过American Association for the Accreditation ofLaboratory Animal Care(AAALAC)，the United States Department of Healthand Human Services和所有地方和联邦动物福利法的标准。
使用流感嗜血杆菌或肺炎链球菌的大鼠呼吸道感染(RTI)模型。
在该模型中，麻醉的大鼠(雄性Sprague Dawley[Crl：CD(SD]100g)(Charles River)通过支气管内滴注2-3x106细菌CFU/大鼠(在100μL琼脂中)直接进入肺而感染[G.Smith(1991)Lab Animals vol 25，46-49]。动物(每组n＝6)被给药不同量的化合物(2-倍稀释液，从37.5至300mg/kg)，从感染1小时后开始每天灌胃两次保持4天。对照动物按照相同程序表给药稀释液。大鼠在感染96小时后安乐死且在无菌条件取出肺且使用stomacher匀质器在1mL无菌盐水中匀质化。在无菌盐水中进行10倍系列稀释以计算有活力的细菌数。已显示该大鼠肺感染模型能预测在肺炎链球菌引起的人的社区获得性肺炎(CAP)中的功效[Hoover J.L.，C.Mininger，R.Page，R.Straub，S.Rittenhouse，and D.Payne.(2007).Abstract A-17.Proceedings of the 47thICAAC，Chicago，Illinois]。
小鼠腹股沟皮肤和软组织感染(SSTI)的金黄色葡萄球菌脓肿模型。
在该模型中，麻醉的小鼠(雄性CD1，20g)(Charles River)在皮下腹股沟区域用半固体琼脂中的金黄色葡萄球菌(1x106CFU/小鼠)感染(Jarvest，R.L.，Berge，J.M.，Berry，V.，Boyd，H.F.，Brown，M.J.，Elder，J.S.，Forrest，A.K.，Fosberry，A.P.，Gentry，D.R.，Hibbs，M.J.，Jaworski，D.D.，O’Hanlon，P.J.，Pope，A.J.，Rittenhouse，S.Sheppard，R.J.，Slater-Radosti，C.and Worby，A.(2002)J.Med Chem.，45，1959-1962)。该动物(每组n＝6)被给药不同量的化合物(2-倍稀释液，从37.5至300mg/kg)，从感染1小时后开始每天灌胃两次。对照动物按照相同程序表给药稀释液。小鼠在感染96小时后安乐死且在无菌条件下取出脓肿且匀化。用无菌盐水进行10倍系列稀释以计算有活力的细菌数。
结果
本文所述的一些具体实施例在一种或多种上述感染的动物模型中证实了口服功效，相对于未治疗的对照动物，将从肺或脓肿回收的细菌的量减少了≥3log10CFU/mL。
实施例
下面的实施例对本发明进行解释。这些实施例不是用于限制本发明的范围，而是指导本领域熟练技术人员制备和使用本发明的化合物、组合物和方法。
虽然描述了本发明的具体实施方案，但是本领域熟练技术人员将会理解，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，可以进行各种改变和改进。
如文中这些方法、方案和实施例中所用的符号以及常规术语都是与同期的科学文献例如the Journal of the American Chemical Society或the Journalof Biological Chemistry中所用的相一致。标准的单字母或三字母缩写通常用于命名氨基酸残基，除非另外指出，假定其为L-构型。除非另外指出，所有的起始物料可由工业的供应厂商获得并不需进一步纯化即可使用。
所有有关的醚指的是乙醚；盐水指的是饱和的NaCl水溶液。除非另外指出，所有的温度以℃(摄氏度数)表示。除非另外指出，所有的反应都是在惰性气氛下于室温条件下进行，并且除非另外指出，所有溶剂为能得到的最高纯度。
在Varian VXR-300、Varian Unity-300、Varian Unity-400仪器、BruckerAVANCE-400、General Electric QE-300或Bruker AM 400谱仪上记录1HNMR(后文中也称为″NMR″)谱。化学位移以百万分之几(ppm，δ单位)表示。偶合常数是以赫兹(Hz)为单位。分裂模式描述了表观的多重性，并以如下表示：s(单峰)、d(双峰)、t(三重峰)、q(四重峰)、quint(五重峰)、m(多重峰)、br(宽峰)。
质谱使用电喷雾电离，运行于开放入口的LC-MS系统。LC条件：10％至80％的CH3CN(0.018％TFA)3.0分钟，其中1.25分钟的保持，0.5分钟的再平衡；通过质谱、214 nm处的紫外和散射光监测器(ELS)检测。柱：2.1X50mm Zorbax SB-C8。
对于制备型(prep)HPLC，将在1000μL MeOH、DMSO或DMF中的约100mg终产物以35mL/min的速度，注射到SunFire Prep C18 OBD 5um 30x75mm柱中，在10分钟内梯度从5％CH3CN的水溶液至95％CH3CN的水溶液，随后为90％CH3CN的水溶液保持1.9分钟。在Merck硅胶60(230-400目)上，或使用正相的Teledyne Isco Combiflash Companion，可弃去的Redi-Sep快速柱进行快速色谱法纯化。
XRPD光谱使用PANalytical X′Pert Pro MPD-XRD，PW3040记录。
ATR-IR光谱使用具有Diamond ATR附件的Thermo Electron Nexus 470FTIR记录。
中间体
中间体A
(2R)-3-环戊基-2-({甲酰基[(苯基甲基)氧基]氨基}甲基)丙酸
部分A：
(4S)-苄基-3-(3-环戊基丙酰基)唑烷-2-酮
在-78℃下，向(S)-(-)-4-苄基-2-唑烷酮(25g，141mmol)的THF(350mL)溶液中滴加n-BuLi(56.4mL，2.5M的己烷溶液，141mmol)。在相同温度下搅拌60分钟后，然后用0.25小时将反应混合物用3-环戊基丙酰氯(21.6mL，141mmol)处理。将反应混合物温热至室温并搅拌过夜。将该反应用饱和的NH4Cl水溶液(320mL)终止。将水层用EtOAc(3x200mL)萃取。将合并的有机层干燥(MgSO4)并蒸发，得到白色固体的(4S)-苄基-3-(3-环戊基丙酰基)唑烷-2-酮(42.4g，100％)。LCMS：(M+H)+：302.3。
部分B：
(4S)-3-((2R)-3-环戊基-2-{[(苯基甲基)氧基]甲基}丙酰基)-4-(苯基甲基)-1，3-唑烷-2-酮
在0℃下，在氮气下，向(4S)-苄基-3-(3-环戊基丙酰基)唑烷-2-酮(42.4g，141mmol)的二氯甲烷(500mL)溶液中以缓慢稳定的流速加入氯化钛(IV)(1M的DCM溶液，155mL，155mmol)。5分钟后，滴加二异丙基乙胺(27mL，155mmol)。在0℃下搅拌1小时后，以缓慢稳定的流速将苄基氯甲基醚(TCI-America)(39mL，280mmol)加入到生成的烯醇钛中，并将混合物在0℃下保持3.5小时。然后将反应混合物用水(400mL)终止。将水层用二氯甲烷(150mLx2)萃取。将有机萃取物用饱和的NaHCO3洗涤，干燥(MgSO4)并蒸发。将残余物用乙醚(2x)洗涤，然后用己烷/乙醚研磨，得到2批的(4S)-3-((2R)-3-环戊基-2-{[(苯基甲基)氧基]甲基}丙酰基)-4-(苯基甲基)-1，3-唑烷-2-酮，为淡黄色固体(42.7g，72％)。LCMS：(M+H)+：422.2.
部分C：
(4S)-3-[(2R)-3-环戊基-2-(羟基甲基)丙酰基]-4-(苯基甲基)-1，3-唑烷-2-酮
将(4S)-3-((2R)-3-环戊基-2-{[(苯基甲基)氧基]甲基}丙酰基)-4-(苯基甲基)-1，3-唑烷-2-酮(42.7g，0.1mol)在乙醇(800mL)和DMF(180mL)中的溶液使用10％Pd/C(4g)和氢气球进行催化氢化。24小时后通过LCMS表明该反应完成了50％。将该反应用氮气吹扫，并使用新鲜的氢气球。再60小时后，将该反应再次用氮气吹扫，并过滤，将滤液溶剂除去，得到(4S)-3-[(2R)-3-环戊基-2-(羟基甲基)丙酰基]-4-(苯基甲基)-1，3-唑烷-2-酮(33.1 g，100％)。LCMS：(M+H)+：332.3.
部分D：
(2R)-3-环戊基-2-(羟基甲基)丙酸
将(4S)-3-[(2R)-3-环戊基-2-(羟基甲基)丙酰基]-4-(苯基甲基)-1，3-唑烷-2-酮(33.1g，0.1mol)在THF(330mL)和水(55mL)的混合物中搅拌，并冷却至0℃。加入30％过氧化氢(96mL，1mol)，随后加入氢氧化锂单水合物(8.4g，0.2mol)。将该反应温热至室温，然后搅拌过夜。旋转蒸发除去THF。将含水残余物用二氯甲烷(3x100mL)洗涤，用6N HCl酸化，并用乙酸乙酯(4x100mL)萃取。将有机萃取物干燥(MgSO4)并蒸发，得到(2R)-3-环戊基-2-(羟基甲基)丙酸，为透明无色油状物(18.5g，＞100％)。LCMS：(M+H)+：未检测。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ7.3(br s，1H)，3.79(d，J＝5.83Hz，2H)，2.64-2.71(m，1H)，1.45-1.87(m，9H)，1.05-.14(m，2H).
部分E：
(2R)-3-环戊基-2-(羟基甲基)-N-[(苯基甲基)氧基]丙酰胺
在0℃下，向(2R)-3-环戊基-2-(羟基甲基)丙酸(18.3g，106mmol)、O-苄基羟基胺盐酸盐(18.62g，117mmol)和4-(二甲基氨基)吡啶(28.5g，233mmol)的二氯甲烷(110mL)混合物中加入1-[3-(二甲基氨基)丙基]-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(22.3g，117mmol)。将该混合物在0℃下保持3小时。随后，加入500mL的1N冷的、HCl水溶液，并将该混合物再搅拌30分钟。将生成的白色固体沉淀过滤收集。将该沉淀用1N HCl、用水并用冷的DCM洗涤。在真空干燥器中干燥过夜，得到(2R)-3-环戊基-2-(羟基甲基)-N-[(苯基甲基)氧基]丙酰胺(19.1g，65％)。LCMS：(M+H)+：278.1.
部分F：
(3R)-3-(环戊基甲基)-1-[(苯基甲基)氧基]-2-氮杂环丁酮
在0℃下，向(2R)-3-环戊基-2-(羟基甲基)-N-[(苯基甲基)氧基]丙酰胺(22.5g，81mmol)和三苯基膦(22.5g，97mmol)的THF(800mL)混合物中滴加偶氮二甲酸二异丙酯(18.9mL，97mmol)。将反应混合物在0℃下保持45分钟，然后蒸发。通过硅胶色谱法使用己烷/EtOAc(95：5)洗脱体系纯化，得到(3R)-3-(环戊基甲基)-1-[(苯基甲基)氧基]-2-氮杂环丁酮(16.9g，81％)。LCMS：(M+H)+：260.1.
部分G：
(2R)-3-环戊基-2-({[(苯基甲基)氧基]氨基}甲基)丙酸
将(3R)-3-(环戊基甲基)-1-[(苯基甲基)氧基]-2-氮杂环丁酮(20g，77.1mmol)和LiOH·H2O(32.4g，0.77mol)的THF/水(500mL/170mL)混合物在室温下搅拌36小时。向该反应混合物中加入6M HCl(130mL)，并然后加入1N NaOH直至获得中性的pH。分离各层，并将水层用EtOAc萃取一次。将合并的有机物干燥(MgSO4)并浓缩，得到(2R)-3-环戊基-2-({[(苯基甲基)氧基]氨基}甲基)丙酸(22.85g，＞100％)，为透明无色油状物。LCMS：(M+H)+：277.9.
部分H：
(2R)-3-环戊基-2-({甲酰基[(苯基甲基)氧基]氨基}甲基)丙酸
在氮气下，将甲酸(192mL，5mol)溶于CH2Cl2(450mL)中，并冷却至0℃。然后加入乙酸酐(73mL，0.77mol)，并将反应混合物搅拌45分钟。随后，加入(2R)-3-环戊基-2-({[(苯基甲基)氧基]氨基}甲基)丙酸(22.85g粗物质，假定为77.1mmol)的CH2Cl2(450mL)溶液，将生成的混合物在0℃下搅拌1.5小时。然后除去挥发物，将粗的残余物溶于EtOAc(500mL)中，并将混合物用盐水(4X100mL)洗涤。将有机物干燥(MgSO4)并浓缩，得到(2R)-3-环戊基-2-({甲酰基[(苯基甲基)氧基]氨基}甲基)丙酸(23.5g，100％)，为粘稠的浆状物。LCMS：(M+H)+：306.1.
按照下面的方法可制备(2R)-3-环戊基-2-({甲酰基[(苯基甲基)氧基]氨基}甲基)丙酸，二异丙基乙胺盐，异丙醇溶剂合物：
向(2R)-3-环戊基-2-({甲酰基[(苯基甲基)氧基]氨基}甲基)丙酸(25.9h，85mmol)的乙醚(85mL)溶液中加入二异丙基乙胺(19.7mL，113mmol)，并将该混合物在室温下搅拌大约3小时。然后将反应混合物用另外的乙醚(85mL)和水(400mL)稀释。分离各层，并将有机层用水/盐水混合物(250mL水，加入30mL盐水，200mL水，加入30mL盐水)萃取两次以上。然后将合并的水层用40％异丙醇的氯仿溶液(3x300mL)萃取。将合并的异丙醇/氯仿层干燥(Na2SO4)，过滤并蒸发，得到2(R)-3-环戊基-2-({甲酰基[(苯基甲基)氧基]氨基}甲基)丙酸，二异丙基乙胺盐，异丙醇溶剂合物(30.29g)，为透明的淡棕色油状物。LCMS：(M+H)+：306.2.
中间体B
(2R)-3-环戊基-2-{[甲酰基(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)氨基]甲基}丙酸
部分A：
(3R)-3-(环戊基甲基)-1-(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)-2-氮杂环丁酮
将(3R)-3-(环戊基甲基)-1-[(苯基甲基)氧基]-2-氮杂环丁酮(100g，386mmol)溶于乙醇(1.2L)中，并将该溶液除气。加入Pd/C(10％，干的，8g)，将该悬浮液用氢气吹扫，并在氢气氛(气球)下搅拌直至该反应通过LC-MS显示该反应完成(大约6小时)。然后将该悬浮液用氮气吹扫，通过Celite过滤，并蒸发至干。将生成的固体再溶于CH2Cl2(1L)中，并加入二氢吡喃(70mL，767mmol)，随后加入对甲苯磺酸吡啶盐(PPTS，5％，4.85g)。将反应混合物在室温下搅拌3天，然后浓缩，并使用10-20％乙酸乙酯的己烷溶液的硅胶色谱法纯化，得到(3R)-3-(环戊基甲基)-1-(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)-2-氮杂环丁酮，为无色液体(100％)。
部分B：
(2R)-3-环戊基-2-{[(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)氨基]甲基}丙酸
将(3R)-3-(环戊基甲基)-1-(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)-2-氮杂环丁酮(68g，268mmol)溶于THF(1L)中，并置于3-颈3L圆底烧瓶中，该烧瓶安装有内部的热电偶、回流冷凝器和机械搅拌器。制备氢氧化锂单水合物(56.3g，1.34mol)在400mLH2O中的溶液，在剧烈搅拌下通过加料漏斗滴加。将反应混合物在室温下搅拌36小时，随后用H2O(350 mL)稀释，并用己烷(300mL)洗涤。将有机层用H2O(100mL)萃取，并将合并的水层冷却至0℃，并用90分钟的时间通过滴加2M柠檬酸(～525mL)小心地进行酸化，同时保持内部温度低于10℃。将该酸化的物质用乙酸乙酯(3x250mL)萃取，并将合并的有机层用水(2x)洗涤，经MgSO4干燥，过滤，并蒸发。加入苯(500mL)并蒸发，并将残余物真空干燥，得到无色液体的(2R)-3-环戊基-2-{[(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)氨基]甲基}丙酸(70.9g，98％)。
部分C：
(2R)-3-环戊基-2-{[甲酰基(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)氨基]甲基}丙酸
在室温下，向(2R)-3-环戊基-2-{[(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)氨基]甲基}丙酸(97.05g，358mmol)的丙酮(1.1L)溶液中加入5-甲基-2-硫代-[1，3，4]噻二唑-3-甲醛(57.3g，358mmol)(Tetrahedron Lett.1985，26，3703-3706)。当认为该反应完成时，真空除去丙酮。将残余物悬浮在己烷(320mL)和甲基-叔丁基醚(180mL)的混合物中，然后进行声处理。10min后，滤出白色固体(假定为5-甲基-3H-[1，3，4]噻二唑-2-硫酮)，并将滤液真空蒸发，得到淡黄色树胶状的(2R)-3-环戊基-2-{[甲酰基(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)氨基]甲基}丙酸(124g，＞100％)。NMR显示产物中含有少量的MTBE和5-甲基-3H-[1，3，4]噻二唑-2-硫酮。
根据文献方法[Bracken，Bushell，Dean，Francavilla，Jain，Lee，Seepersaud，Shu，Sundram，Yuan；PCT Int.Appl.(2006)，WO 2006127576 A2]也可制备(2R)-3-环戊基-2-{[甲酰基(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)氨基]甲基}丙酸。
按照下面的方法可制备(2R)-3-环戊基-2-{[甲酰基(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)氨基]甲基}丙酸，二异丙基乙胺盐：
将(2R)-3-环戊基-2-{[(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)氨基]甲基}丙酸(39.45g，145mmol)在甲酸甲酯(300mL)和二异丙基乙胺(27.9mL，160mmol)中的溶液置于密封管中，并于50℃加热4天。冷却至室温后，真空除去甲酸甲酯，将剩余的残余物溶于乙醚中。将乙醚溶液用水萃取，分离各层。然后将水层用40％异丙醇的氯仿溶液(2X)反萃取。然后真空浓缩合并的异丙醇/氯仿层，得到(2R)-3-环戊基-2-{[甲酰基(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)氨基]甲基}丙酸二异丙基乙基胺盐(28g，含有残余量的氯仿和异丙醇)。
中间体C
4，6-二氯-5-氟-2-甲基嘧啶
部分A：
5-氟-4，6-二羟基-2-甲基嘧啶
将200mL的25％wt甲醇钠的甲醇(0.84mol)溶液用另外的200mL甲醇稀释。将乙脒-HCl(40g，0.42mol)加入到甲醇钠溶液中(形成白色沉淀)，随后加入氟丙二酸二甲酯(70g，0.46mol)。将内容物在室温下搅拌过夜，然后真空浓缩至干。将生成的残余物再溶于热的水(300mL)中。将水溶液冷却至室温后，缓慢地加入浓HCl直至在大约pH 5形成结晶(细的白色方晶)。滴加浓HCl直至pH 3，并然后过滤内容物。将分离的晶体用1M HCl洗涤，真空干燥，得到5-氟-4，6-二羟基-2-甲基嘧啶(65.5g，＞100％)。LCMS：(M+H)+：145.
部分B：
4，6-二氯-5-氟-2-甲基嘧啶
将5-氟-4，6-二羟基-2-甲基嘧啶(假定为60g，0.42mol)用300mL的POCl3在120℃下处理3小时。然后将反应混合物冷却至室温并真空浓缩，直至除去溶剂的速度减慢至滴速少于1滴/秒。产物有点挥发，并且过度真空浓缩会减少产率。将粗残余物倒入到碎冰上，并将生成的浆液搅拌1小时，在此期间溶液变成室温。滤出形成的黄色的固体，用水洗涤，短暂的风干直至具有高流动性。收集该固体，并置于干燥器中经P2O5处理直至干燥，得到纯的4，6-二氯-5-氟-2-甲基嘧啶(59g，79％)。LCMS：(M+H)+：181/183.
中间体D
4，6-二氯-2-乙基-5-氟嘧啶
部分A：
2-乙基-5-氟-6-羟基-4(1H)-嘧啶酮
在室温下，将丙酰胺盐酸盐(30.0g，276.3mmol)和氟丙二酸二甲酯(41.4g，276.3mmol)在无水甲醇(400mL)中分批用固体NaOMe(45g，829mmol)处理。加入后，将白色悬浮液加热至85℃，并搅拌2小时。然后将溶剂蒸发至干。在剧烈搅拌下向该残余物中加入70mL的6N HCl溶液。将该悬浮液搅拌10分钟直至残余物充分中和。过滤收集该白色沉淀，并真空干燥，得到白色固体的2-乙基-5-氟-6-羟基-4(1H)-嘧啶酮。LCMS：(M+H)+：159.0；(M+Na)+：181.1。在一些情况下，该产物可能含有共同沉淀的NaCl，其引起产率超出理论值。在此情况下，该产物在NaCl存在下进行下面的步骤。
部分B：
4，6-二氯-2-乙基-5-氟嘧啶
将2-乙基-5-氟-6-羟基-4(1H)-嘧啶酮(20g，126.6mmol)在POCl3(58mL，633mmol)中于125℃(油浴)加热2小时。将另外68mL新鲜的POCl3加入到热的溶液中。将生成的溶液加热另外2小时直至所有的起始物消耗。真空蒸馏过量的POCl3(62℃-68℃)，得到淡棕色的残余物。冷却至室温后，将残余物用50mL的CH2Cl2稀释，然后倒入到冰水(200mL)中。向该混合物中加入200mL的CH2Cl2，随后将混合物搅拌10分钟。分离两层后，将水层进一步用100mL的CH2Cl2萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥，然后通过少量的硅胶垫过滤，然后将其用150mL的1％MeOH的CH2Cl2溶液洗涤。蒸发溶剂得到淡黄色液体的4，6-二氯-2-乙基-5-氟嘧啶(21g，85％)。LCMS：(M+H)+：未检测。
中间体E
[(2R)-3-{2-[6-氯-5-氟-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基](四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰胺
部分A：
5-氟-6-羟基-2-甲硫基-4(1H)-嘧啶酮
在0℃(冰浴)下，向搅拌下的2-甲基-2-异硫脲硫酸盐(41.7g，0.15mol)和氟丙二酸二甲酯(45g，0.30mol)的MeOH(600mL)溶液中以一批加入NaOMe(48.6g，0.90mol)。加入完成后，除去冰浴，并将反应混合物在室温下搅拌过夜。LCMS显示形成了所需的嘧啶酮产物。将反应混合物真空浓缩至接近干燥，用水(50mL)稀释，并用6N HCl(～150mL)酸化至pH大约为2以沉淀产物。过滤后，将该固体用1N HCl(2x10mL)洗涤并真空干燥，得到白色固体的5-氟-6-羟基-2-甲硫基-4(1H)-嘧啶酮(35.7g，68％)。LCMS：(M+H)+：177.3.
部分B：
4，6-二氯-5-氟-2-(甲硫基)嘧啶
将5-氟-6-羟基-2-(甲硫基)-4(1H)-嘧啶酮(35.7g，0.20mol)在POCl3(150mL)中的混合物于115℃加热3小时。冷却至室温后，将反应混合物缓慢地倒入到冰-水混合物(1500mL)中，并搅拌20分钟。将产物萃取到乙酸乙酯(3x800mL)中，并将合并的有机萃取物用水(2x1000mL)、盐水(1000mL)洗涤，并干燥(Na2SO4)。蒸发溶剂，得到淡黄色固体的4，6-二氯-5-氟-2-(甲硫基)嘧啶(37.8g，89％)。LCMS：(M+H)+：未检测。
部分C：
4-氯-5-氟-6-肼基-2-(甲硫基)嘧啶
将4，6-二氯-5-氟-2-(甲硫基)嘧啶(16.8g，78.85mmol)和三乙胺(16.49mL，118.3mmol)溶于DMSO(200mL)中并搅拌。将该混合物在冰水浴下冷却至～5℃。向该溶液中缓慢地加入肼单水合物(4.59mL，94.62mmol)。添加完成后，将反应混合物温热至室温，并继续搅拌1小时。将反应混合物用水(500mL)稀释，将水溶液用CH2Cl2(3x300mL)萃取。将合并的有机溶液用水(3x250mL)和盐水(250mL)洗涤，然后干燥(Na2SO4)并真空浓缩，得到红色的泡沫状固体的4-氯-5-氟-6-肼基-2-(甲硫基)嘧啶(9.70g，59％)。LCMS：(M+H)+：208.9.
部分D：
[(2R)-3-{2-[6-氯-5-氟-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基](四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰胺
将4-氯-5-氟-6-肼基-2-(甲硫基)嘧啶(9.70g，46.5mmol)、(2R)-3-环戊基-2-{[甲酰基(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)氨基]甲基}丙酸(19.9g，46.5mmol)、HOAr(6.96g，51.2mmol)、EDCI(9.82g，51.2mmol)和N-甲基吗啉(25.6mL，232.5mmol)的DMF(300mL)混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物用乙酸乙酯/己烷(3∶2，1L)稀释，并用水(3x500mL)洗涤，并将有机物干燥(Na2SO4)，并真空浓缩。将残余物通过Gilson RP-HPLC(35-95％乙腈/水，8min梯度洗脱时间)纯化，得到红色玻璃状的[(2R)-3-{2-[6-氯-5-氟-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基](四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰胺(12.89g，56.0％)。LCMS：(M+H)+：490.4.
中间体F
2，4，6-三氯-5-氟嘧啶
部分A：
5-氟-6-羟基-2，4(1H，3H)-嘧啶二酮
将机械搅拌下的尿素(60.06g，1mol)和氟丙二酸二甲酯(150.11g，1mol)在甲醇(1L)中的溶液用25wt％NaOMe的甲醇溶液(～4.6M，435mL，2mol)处理。将该混合物回流3小时，并然后冷却至室温。将该混合物过滤，将湿的滤饼溶于温水(～1.2L)中，并将生成的水溶液用浓的HCl水溶液(～160mL)酸化至pH＝2，同时搅拌1小时。将该混合物冷却至室温，并将产物过滤，用水彻底洗涤，然后真空干燥，得到白色固体的5-氟-6-羟基-2，4(1H，3H)-嘧啶二酮(80g，55％)。LCMS：(M+H)+：147.0.
部分B：
2，4，6-三氯-5-氟嘧啶
用30分钟的时间，在搅拌下，将细的粉末状的5-氟-6-羟基-2，4(1H，3H)-嘧啶二酮(74g，0.507mol)分批加入到POCl3(232mL，2.5mol)中(放热)。在完成添加后，将该混合物置于60℃下，同时通过注射器滴加N，N，-二甲基苯胺(65mL)。添加后，将混合物加热至100-110℃(内部温度)直至判断该反应完成，通常为4-8小时。将该混合物冷却，并将大批剩余的POCl3通过在80-90℃下小心地真空蒸馏除去(在POCl3蒸馏物中可检测出一些产物)。将剩余的残余物倒入到冰(～1L)上，并搅拌30分钟，然后用乙醚萃取(1x400mL，2x150mL)。将合并的萃取物用水和盐水洗涤，然后干燥(MgSO4)。过滤并常压蒸馏乙醚，得到粗产物，将其减压蒸馏，得到产物(28.8g，28％)，其为具有低熔点的白色结晶固体(b.p.80-85℃，12mm)。LCMS：(M+H)+：未检测.
中间体G
2-(2，6-二氯-5-氟-4-嘧啶基)-1，1，2-肼三甲酸三(1，1-二甲基乙基)酯
部分A：
2-(2，6-二氯-5-氟-4-嘧啶基)肼甲酸1，1-二甲基乙基酯
在室温下，将2，4，6-三氯-5-氟嘧啶(20.92g，104.1mmol)溶于THF(300mL)中并搅拌。向该搅拌的溶液中加入肼基甲酸叔丁酯(13.74g，104.1mmol)，随后加入二异丙基乙胺(19.0mL，109.3mmol)。该反应混合物变成淡黄色，几分钟后形成沉淀。大约1.5小时后通过TLC(10％EtOAc/Hex)检测显示该反应完成。将反应混合物真空浓缩以除去大部分的THF，并将残余物溶于CH2Cl2(～400mL)中。将该溶液用～400mL的饱和NH4Cl水溶液洗涤。将有机物干燥并浓缩，得到淡黄色固体(31.37g)。LCMS：(M+H+2Na-Boc)+：241.
部分B：
2-(2，6-二氯-5-氟-4-嘧啶基)-1，1，2-肼三甲酸三(1，1-二甲基乙基)酯
将2-(2，6-二氯-5-氟-4-嘧啶基)肼甲酸1，1-二甲基乙基酯(31.37g，假定104.1mmol)悬浮在CH2Cl2(400mL)中+将二碳酸二叔丁酯(44.75g，205.0mmol)加入到该溶液中，随后加入二异丙基乙胺(36.3mL，208.2mmol)。当几乎每个物质溶解时，缓慢地加入DMAP(1.27g，10.4mmol)。该反应混合物变成淡红色，～5分钟后，观察到轻微的冒泡。45分钟后，通过LCMS显示该反应完成，该混合物变成淡橙色。将反应混合物用～300mL饱和的NH4Cl水溶液洗涤，分开有机物。使用～1800mL Florsil的CH2Cl2溶液制备浆液，将其倒入到大的多孔玻璃漏斗中。然后将全部有机溶液通过Florsil垫倾倒，用2L的CH2Cl2洗涤。在Florsil上留下红色的带，并且TLC显示该产物已经从垫上洗脱下来。将滤液浓缩成泡沫状的无色油状物，将其在冰箱中结晶过夜(37.87g，由2，4，6-三氯-5-氟嘧啶得到的产率为73％).LCMS：(M+3H+2Na-3Boc)+：241.
中间体H
4，6-二氯-5-氟-2-(氟代甲基)嘧啶
部分A：
5-氟-2-(氟代甲基)-6-羟基-4(1H)-嘧啶酮
将2-氟-乙脒盐酸盐(11.2g，100mmol)和氟丙二酸二甲酯(15g，100mmol)在无水甲醇(300mL)中的溶液用固体NaOMe(16.2g，300mmol)处理，并在搅拌下加热至50℃。当LCMS显示所需的产物形成时，将溶剂蒸发至干，并将残余物用浓HCl(20mL)中和。过滤收集该白色沉淀，得到5-氟-2-(氟代甲基)-6-羟基-4(1H)-嘧啶酮(100％产率)。LCMS：(M+H)+：163.1.
部分B：
4，6-二氯-5-氟-2-(氟代甲基)嘧啶
将5-氟-2-(氟代甲基)-6-羟基-4(1H)-嘧啶酮(6g，37mmol)悬浮在POCl3(20mL，222mmol)中，并在120℃下搅拌2小时。将过量的POCl3蒸发后，将残余物倒入到冰上，并将生成的残余物倒入到冰上，并将生成的混合物用CH2Cl2萃取。将该CH2Cl2溶液通过硅胶垫，并将生成的滤液浓缩，得到纯的4，6-二氯-5-氟-2-(氟代甲基)嘧啶(6g，81％)，为无色液体。LCMS：(M+H)+：未检测.
中间体I
4，6-二氯-2-(二氟甲基)-5-氟嘧啶
部分A
2，2-二氟乙脒.HCl
在0℃下，向搅拌下的氯化铵(5.1g，95mmol)在甲苯(150mL)中的悬浮液中加入三甲基铝(46mL，2M，92mmol)，搅拌直至停止冒泡。加入二氟乙酸甲酯(2.38mL，27mmol)，并将生成的混合物于80℃搅拌过夜。冷却至0℃后，缓慢地加入甲醇，并将生成的溶液在减压下搅拌90分钟以形成固体。将其通过Celite过滤除去，并将滤液蒸发，得到淡黄色固体的2，2-二氟乙脒.HCl(1.7g，485％)。
部分B
2-(二氟甲基)-5-氟-6-羟基-4(1H)-嘧啶酮
将钠金属(0.91g，40mmol)溶于MeOH(100mL)中形成甲醇钠。加入2，2-二氟乙脒HCl(1.73g，13mmol)，随后加入氟丙二酸二甲酯(2.0g，13mmol)。将生成的溶液在80℃下搅拌3小时，然后冷却至室温。加入HCl水溶液(6mL，6M，36mmol)，并将生成的混合物真空浓缩。将剩余的固体用冷水洗涤并过滤，得到2-(二氟甲基)-5-氟-6-羟基-4(1H)-嘧啶酮(1.43g，61％)。
部分C
4，6-二氯-2-(二氟甲基)-5-氟嘧啶
将2-(二氟甲基)-5-氟-6-羟基-4(1H)-嘧啶酮(1.43g，8.0mmol)和POCl3(6mL)的混合物在110℃下加热2.5小时。冷却至室温后，将反应混合物倒入到冰上，并搅拌30分钟。将产物萃取到DCM中，并将合并的有机物用饱和的碳酸氢钠水溶液洗涤一次。将合并的有机物用硫酸钠干燥，真空浓缩，得到黄色油状的4，6-二氯-2-(二氟甲基)-5-氟嘧啶(460mg，27％)。
实施例化合物
实施例1
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
部分A：
N-(苯基甲基)-D-丝氨酸
按照WO2005058245中所述的方法，将D-丝氨酸甲酯盐酸盐(98.84g，635.3mmol)在MeOH(280mL)中的混合物冷却至10℃。向该混合物中缓慢地加入三乙胺(88.5mL，635.0mmol)。将该混合物温热至室温，并将生成的溶液冷却至10℃。向该溶液中加入苯甲醛(64mL，630.2mmol)，并将该溶液搅拌30分钟。用30分钟的时间，向该溶液中分批加入硼氢化钠(24.03g，635.2mmol)，并将该混合物再搅拌30分钟。在分开的烧瓶中，将MeOH(114mL)加入到水(170mL)中，并向该溶液中加入NaOH(77.25g，1931mmol)的水(155mL)溶液。将该溶液冷却至15℃，用15分钟的时间，将还原胺化的混合物缓慢地加入到NaOH-水-MeOH溶液中。用30min的时间将该溶液搅拌并温热至室温，加入水(170mL)，随后加入足够的6N的HCl水溶液以调节pH至9.5。将该溶液用EtOAc(2x60mL)洗涤，并加入足够的6N的HCl水溶液以调节pH至6.5。将该混合物冷却至0℃，并保持过夜。将生成的固体通过真空过滤收集，并用水(2x200mL)、随后用庚烷(2x200mL)洗涤。将白色固体在40℃下在高真空下干燥3天，得到N-(苯基甲基)-D-丝氨酸(79.51g，64％)。LCMS：(M+H)+：196.1.
部分B：
(3R)-5-氧代-4-(苯基甲基)-3-吗啉甲酸
按照WO2005058245中所述的方法，将N-(苯基甲基)-D-丝氨酸(79.51g，407.3mmol)的THF(485mL)溶液冷却至0℃，并加入预先冷却至0℃的K2CO3(168.87g，1222mmol)的水(485mL)溶液。向很好搅拌的混合物中缓慢地加入氯乙酰氯(45.4mL，570.0mmol)，同时保持内部温度低于5℃。将该混合物在0℃下剧烈搅拌30min，并然后缓慢地加入另外一批氯乙酰氯(4.54mL，57.0mmol)。将该混合物在0℃下搅拌另外的30min。向该混合物中加入足够量的预先冷却至0℃的NaOH水溶液(50％w/w)以调节pH＞13.5，同时保持内部温度在5℃和10℃之间。将该混合物在0℃下搅拌2小时，并然后温热至20℃。将该混合物用庚烷(165mL)、随后用第二批新鲜的庚烷(240mL)洗涤。将水相冷却至0℃，并用浓的HCl水溶液调节至pH＜2，同时保持内部温度低于10℃。将该混合物置于0℃的冰箱中过夜，并将该固体通过真空过滤收集。将该固体用水(2x300mL)洗涤，并于42℃真空干燥过夜。将生成的(3R)-5-氧代-4-(苯基甲基)-3-吗啉甲酸(72.20g，75％)分离，为白色固体。LCMS：(M+H)+：236.1.
部分C：
(3R)-5-氧代-N，4-双(苯基甲基)-3-吗啉甲酰胺
将(3R)-5-氧代-4-(苯基甲基)-3-吗啉甲酸(69.67g，296.2mmol)和1-羟基苯并三唑(48.01g，355.4mmol)在DCM(990mL)中的混合物冷却至0℃。向该混合物中加入4-甲基吗啉(163mL，1483mmol)，苄基胺(35.6mL，325.9mmol)和EDC(62.46g，325.8mmol)。将该黄色溶液在室温下搅拌过夜，然后将其用水(500mL)、6N的HCl水溶液(300mL)和水(200mL)洗涤。将有机相经无水Na2SO4干燥，过滤，并真空浓缩，得到粗的(3R)-5-氧代-N，4-双(苯基甲基)-3-吗啉甲酰胺(97.05g，＞100％粗的产率)，为黄色的泡沫状物质。LCMS：(M+H)+：325.2.
部分D：
1-苯基-N-{[(3S)-4-(苯基甲基)-3-吗啉基]甲基}甲胺
通过加料漏斗向0℃的(3R)-5-氧代-N，4-双(苯基甲基)-3-吗啉甲酰胺(假定为96.07g，296.2mmol)在PhMe(750mL)中的溶液中加入Red-Al(65％w/w in PhMe，645mL)。加入大约50mL的Re-Al后，将生成的混合物温热至室温，然后用30分钟的时间加入剩余的Red-Al。然后将该混合物加热至50℃，并搅拌过夜。将该溶液冷却至0℃，并将该反应通过缓慢地滴加1N NaOH水溶液(50mL)终止。然后加入另外一批1N NaOH水溶液(500mL)，随后加入Et2O(200mL)。分离各层，并将有机相用新鲜的1N NaOH水溶液(400mL)洗涤。将合并的水相用新鲜的4：1PhMe-Et2O(250mL)萃取，并将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤，并真空浓缩，得到黄色油状的1-苯基-N-{[(3S)-4-(苯基甲基)-3-吗啉基]甲基}甲胺，将其不需进一步纯化而使用。LCMS：(M+H)+：297.1.
部分E：
{[(3S)-4-(苯基甲基)-3吗啉基]甲基}氨基)乙酸乙基氧代((苯基甲基)酯
将1-苯基-N-{[(3S)-4-(苯基甲基)-3-吗啉基]甲基}甲胺(假定为87.79g，296.2mmol)和N，N-二异丙基乙胺(67.1mL，385.2mmol)在THF(1000mL)中的溶液冷却至0℃。通过加料漏斗向该溶液中滴加氯(氧代)乙酸乙酯(36.3mL，326.2mmol)。将生成的混合物搅拌并温热至室温1小时。然后真空除去溶剂至大约20％体积，并将残余物在EtOAc(600mL)、水(100mL)和饱和的NaHCO3水溶液(500mL)之间分配。将水相用新鲜的一批EtOAc(200mL)萃取，并将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤，并真空浓缩。然后将残余物与EtOH(100mL)共沸，得到黄色油状的{[(3S)-4-(苯基甲基)-3-吗啉基]甲基}氨基)乙酸乙基氧代((苯基甲基)酯，将其不需进一步纯化而使用。LCMS：(M+H)+：397.2.
部分F：
(9aS)-8-(苯基甲基)六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-6，7-二酮
向{[(3S)-4-(苯基甲基)-3-吗啉基]甲基}氨基)乙酸乙基氧代((苯基甲基)酯(假定为117.43g，296.2mmol)的EtOH(1000mL)溶液中加入10％Pd/C(23g)。将生成的混合物在气球压力下氢化5天，并然后通过玻璃纤维过滤器使用EtOH洗涤液过滤。然后将该溶液真空浓缩，并由EtOH-EtOAc结晶，得到大约15g的白色固体。然后将Pd/C滤饼使用MeOH(600mL)浆化，并将该混合物通过玻璃纤维过滤器使用MeOH洗涤液过滤。然后将该溶液真空浓缩，并由EtOH-EtOAc结晶，得到白色固体，将其与最初一批的固体合并。然后将合并的母液真空浓缩，并由EtOH-EtOAc重结晶，得到白色固体，将其与前两批的固体合并，得到(9aS)-8-(苯基甲基)六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-6，7-二酮(39.97g，4步，52％产率)。LCMS：(M+H)+：261.1.
部分G：
(9aS)-8-(苯基甲基)八氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪
向0℃下的两批合并的(9aS)-8-(苯基甲基)六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-6，7-二酮(合并的总量42.29g，162.5mmol)在Et2O(406 mL)中的混合物中用40min的时间通过滴液漏斗加入1M LiAlH4的Et2O(406mL，406mmol)溶液。然后将该混合物温热至35℃，并搅拌6天。然后将该混合物冷却至0℃，并缓慢地加入EtOAc(100mL)，随后加入水(20mL)、15％NaOH水溶液(20mL)和水(60mL)。将该混合物剧烈搅拌1小时，并然后用EtOAc(500mL)稀释。将该混合物过滤，并将滤饼用1N NaOH水溶液(500mL)稀释，并用Et2O(2x200mL)萃取。将合并的有机相(滤液和Et2O萃取液)经无水Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩，与MeOH(100mL)共沸，并在高真空下干燥过夜。将生成的无色油状物与第二批相同方式由(9aS)-8-(苯基甲基)六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-6，7-二酮(0.3047g，1.1mmol)制备的产物合并，得到粗的(9aS)-8-(苯基甲基)八氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪(合并的总量38.59g，＞100％粗产率)。LCMS：(M+H)+：233.1.
部分H：
(9aS)-八氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪二盐酸盐
向(9aS)-8-(苯基甲基)八氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪(假定为38.02g，163.6mmol)的MeOH(330mL)溶液中加入6N的HCl水溶液(55mL，330mmol)和10％Pd/C(3.80g)。将该混合物氢化过夜，并然后通过玻璃纤维过滤器过滤。将滤饼用MeOH洗涤，并将合并的溶液真空浓缩，并与MeOH(4x150mL)共沸，得到红色油状的(9aS)-八氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪二盐酸盐(34.78g，2步，99％产率)，在高真空下固化。LCMS：(M+H)+：142.9.
部分I：
(9aS)-8-(6-氯-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基)八氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪
向(9aS)-八氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪二盐酸盐(23.28g，108.2mmol)的DCM(360mL)混合物中加入4，6-二氯-5-氟-2-甲基嘧啶(19.59g，108.2mmol)和N，N-二异丙基乙胺(68mL，390.4mmol)。将该混合物搅拌2小时，并将生成的溶液用DCM(100mL)稀释，并用饱和的NaHCO3水溶液(200mL)洗涤。将水相用一批新鲜的DCM(100mL)萃取，并将该有机相用饱和的NaHCO3水溶液(50mL)洗涤。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤，并真空浓缩，得到淡黄色油状的(9aS)-8-(6-氯-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基)八氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪，将其不需进一步纯化而使用。LCMS：(M+H)+：287.1.
部分J：
(9aS)-8-(5-氟-6-肼基-2-甲基-4-嘧啶基)八氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪
向(9aS)-8-(6-氯-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基)八氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪(假定为31.03g，108.2mmol)的二烷(430mL)溶液中加入肼单水合物(31mL)。将该混合物加热，并在80℃下搅拌过夜，然后在85℃下搅拌7小时。将该混合物冷却至室温，并真空浓缩。将残余物溶于DCM(500mL)中，并用饱和的NaHCO3(200mL)水溶液洗涤。将水相用新鲜的一部分DCM(100mL)萃取，并将该有机相用饱和的NaHCO3水溶液(100mL)洗涤。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩，并在高真空下干燥过夜，得到(9aS)-8-(5-氟-6-肼基-2-甲基-4-嘧啶基)八氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪(27.98g，92％产率，2步)，为淡黄色固体。LCMS：(M+H)+：283.3.
部分K：
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺
向(2R)-3-环戊基-2-({甲酰基[(苯基甲基)氧基]氨基}甲基)丙酸，N，N-二异丙基乙胺盐，异丙醇溶剂合物(33.64g，68.0mmol)的DMF(230mL)溶液中加入(9aS)-8-(5-氟-6-肼基-2-甲基-4-嘧啶基)八氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪(20.16g，71.4mmol)、N-甲基吗啉(30mL，273mmol)、1-羟基-7-氮杂苯并三唑(11.10g，81.6mmol)和EDC(15.64g，81.6mmol)。将该溶液搅拌过夜，并然后用Et2O(500mL)稀释。将该混合物用水(2x200mL)洗涤，并将合并的水相用新的一批Et2O(100mL)萃取。然后将该Et2O相用水(50mL)洗涤。将该萃取-洗涤过程重复6次，并然后将全部合并的有机相用DCM(250mL)稀释。然后将有机相经无水Na2SO4干燥，过滤，并真空浓缩，得到粗的[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺(42.32 g，＞100％粗的产率)，为淡黄色泡沫状物质。LCMS：(M+H)+：570.3.
部分L：
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
向[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺(假定为38.74g，68.0mmol)的甲醇(225mL)溶液中加入10％Pd/C(5.81g)。将该混合物在气球压力下氢化4小时，并然后通过玻璃纤维过滤器使用MeOH洗涤液过滤。将生成的溶液真空浓缩至大约10％体积，用EtOAc(400mL)稀释，并真空浓缩至大约30％体积。将生成的固体通过真空过滤收集，并用EtOAc洗涤。将母液和EtOAc洗涤液真空浓缩至大约10％体积，并将生成的固体通过真空过滤收集，并用EtOAc洗涤。将两批固体合并，并在高真空下于50℃干燥16小时，得到白色固体的[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺(25.48 g，2步，78％产率)。LCMS：(M+H)+：480.1.
其它的方法
向粗的[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺(假定为39.73g，69.74mmol)的MeOH(350mL)溶液中加入10％Pd/C(50％水，7.9g)。将该悬浮液在气球压力下氢化3小时，并然后通过两个玻璃纤维过滤器使用MeOH洗涤液过滤。将生成的溶液真空浓缩至体积大约为70mL，然后用EtOAc(500mL)稀释。将该溶液真空浓缩以除去大约100mL的溶剂。将生成的固体通过真空过滤收集，并用EtOAc随后用己烷充分洗涤。将母液真空浓缩，并然后用EtOAc(200mL)稀释。将该混合物真空浓缩至大约50％体积，并将生成的固体通过真空过滤收集，并用EtOAc随后用己烷充分洗涤。将两批固体合并，并置于高真空下过夜。然后向该物质中加入大约466mg通过类似方法制备的物质，并将合并的批次在高真空下于50℃加热过夜，得到[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺(28.27g，2步，83％产率)。LC/MS：(M+H)+：480.3。将生成的固体进行分析表征发现其为多晶型，晶型1。
实施例2
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
根据一般方法E，使用(9aS)-八氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪二盐酸盐(其可按照实施例24，部分A-H中所述的方法制备)代替部分A中的异丙基胺，在部分B中使用2N HCl的乙醚溶液，在部分C中进行萃取(乙醚/水)后处理而不是HPLC纯化，并在部分D中通过由EtOAc/乙醚重结晶而不是HPLC纯化最终的产物，来制备[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：501.0.
实施例3
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(9aR)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
部分A：
(3S)-5-氧代-4-(苯基甲基)-3-吗啉甲酸
向0℃下的N-苄基丝氨酸(19.15g，105.7mmol)在2N NaOH水溶液(100mL)中的溶液中滴加氯乙酰氯(10.2mL，126.4mmol)，并将该溶液搅拌45分钟。向该溶液中滴加30％NaOH水溶液(40mL)，并将该反应搅拌1小时，并然后搅拌，并温热至室温72小时。将该反应调节至pH为1，并用三份EtOAc萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤，并真空浓缩。将残余物用EtOAc/己烷洗涤，得到(3S)-5-氧代-4-(苯基甲基)-3-吗啉甲酸(4.61g，19％产率)。
部分B：
(3S)-5-氧代-N，4-双(苯基甲基)-3-吗啉甲酰胺
向(3S)-5-氧代-4-(苯基甲基)-3-吗啉甲酸(4.611g，19.60mmol)的DCM(65mL)溶液中加入苄基胺(2.6mL，23.80mmol)、N-甲基吗啉(11mL，100.0mmol)、1-羟基-7-氮杂苯并三唑(3.20g，23.51mmol)和EDC(4.51g，23.53mmol)。将该溶液搅拌过夜，并然后用DCM(100mL)稀释。将该溶液用6N HCl水溶液(2x100mL)洗涤，并将有机相经无水MgSO4干燥，过滤，并真空浓缩，得到粗的(3S)-5-氧代-N，4-双(苯基甲基)-3-吗啉甲酰胺(6.454g，＞100％粗产率)，为淡黄色泡沫状物质。LCMS：(M+H)+：325.2.
部分C：
1-苯基-N-{[(3R)-4-(苯基甲基)-3-吗啉基]甲基}甲胺
向(3S)-5-氧代-N，4-双(苯基甲基)-3-吗啉甲酰胺(6.3109g，19.45mmol)的1，2-二甲氧基乙烷(100mL)溶液中加入LiAlH4(2.6g，68.51mmol)。将该混合物于100℃加热，并搅拌6小时，并然后冷却至60℃并搅拌过夜。将该混合物冷却至0℃，并通过缓慢地加入1N NaOH水溶液(100mL)来淬灭。将该混合物用Et2O(2x150mL)萃取，并将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤，并真空浓缩。将残余物通过梯度硅胶色谱法(1％至5％MeOH的DCM溶液)纯化，得到1-苯基-N-{[(3R)-4-(苯基甲基)-3-吗啉基]甲基}甲胺(3.8342g，66％)，为淡黄色油状物。LCMS：(M+H)+：297.1.
部分D：
{[(3R)-4-(苯基甲基)-3-吗啉基]甲基}氨基)乙酸甲基氧代((苯基甲基)酯
向1-苯基-N-{[(3R)-4-(苯基甲基)-3-吗啉基]甲基}甲胺(3.3777g，11.40mmol)的THF(114mL)溶液中加入N，N-二异丙基乙胺(3mL，17.22mmol)。向该溶液中通过注射器滴加氯(氧代)乙酸甲酯(1.15mL，12.50mmol)，并将该混合物搅拌3小时。将该溶剂真空除去，并将残余物溶于EtOAc(200mL)中，并用饱和的NaHCO3水溶液、随后用水洗涤。将有机相经无水Na2SO4干燥，过滤，并真空浓缩，得到粗的{[(3R)-4-(苯基甲基)-3-吗啉基]甲基}氨基)乙酸甲基氧代((苯基甲基)酯(4.6881g，＞100％粗产率)，为黄色油状物。LCMS：(M+H)+：383.1.
部分E：
(9aR)-8-(苯基甲基)六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-6，7-二酮
向粗的{[(3R)-4-(苯基甲基)-3-吗啉基]甲基}氨基)乙酸甲基氧代((苯基甲基)酯(假定为4.3583g，11.40mmol)的MeOH(114mL)溶液中加入10％Pd/C(50％水，870mg)。将该混合物在气球压力下氢化16小时，并然后通过0.2μm膜过滤。将该溶液真空浓缩，并将残余物用20％EtOAc-己烷研磨。将生成的固体通过真空过滤收集，并用己烷洗涤，得到(9aR)-8-(苯基甲基)六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-6，7-二酮(2.5610g，2步，86％)，为淡黄色固体。LCMS：(M+H)+：261.1.
部分F：
(9aR)-8-(苯基甲基)八氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪
向0℃下的(9aR)-8-(苯基甲基)六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-6，7-二酮(2.5610g，9.84mmol)在THF(100mL)中的溶液中分批加入LiAlH4(1.12g，29.51mmol)。将该混合物于70℃加热，并搅拌1周。然后将该混合物冷却至0℃，并通过加入Na2SO4·10H2O(2g)、随后加入1N NaOH水溶液(100mL)来淬灭。将该混合物用Et2O(2x150mL)萃取，并将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩。将残余物溶于DCM(200mL)中，经无水Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩。将残余物通过梯度硅胶色谱法(0％至100％EtOAc的己烷溶液；1％Et3N)纯化，得到(9aR)-8-(苯基甲基)八氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪(1.8147g，79％)，为无色油状物。LCMS：(M+H)+：233.1.
部分G：
(9aR)-八氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪二盐酸盐
向(9aR)-8-(苯基甲基)八氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪(1.8055g，7.77mmol)的MeOH(80mL)溶液中加入1N HCl水溶液(15.5mL，15.5mmol)和10％Pd/C(50％水，360mg)。将该混合物在气球压力下氢化过夜，并然后通过0.2μmPTFE膜过滤。将该溶液真空浓缩，并将残余物与MeOH(3x50mL)共沸，得到粗的(9aR)-八氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪二盐酸盐(1.7185g，＞100％粗产率)，为橙色固体。LCMS：(M+H)+：142.9.
部分H：
2-{2-氯-5-氟-6-[(9aR)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-4-嘧啶基}-1，1，2-肼三甲酸三(1，1-二甲基乙基)酯
向粗的(9aR)-八氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪二盐酸盐(1.7185g，7.99mmol)的DMF(40mL)溶液中加入2-(2，6-二氯-5-氟-4-嘧啶基)-1，1，2-肼三甲酸三(1，1-二甲基乙基)酯(3.97g，7.98mmol)和N，N-二异丙基乙胺(4.60mL，26.41mmol)。将该溶液搅拌过夜，并然后用Et2O(200mL)稀释。将该混合物用水(2x100mL)洗涤，并将合并的水相用新鲜的一批Et2O(100mL)萃取。将合并的有机相用新的一批水(50mL)洗涤，并然后经无水Na2SO4干燥。将该混合物过滤，真空浓缩，并将残余物溶于DCM(200mL)中，经无水Na2SO4干燥。将该混合物过滤，并将该溶液真空浓缩。将残余物通过梯度硅胶色谱法(0％至100％EtOAc的己烷溶液；1％Et3N)纯化，得到2-{2-氯-5-氟-6-[(9aR)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-4-嘧啶基}-1，1，2-肼三甲酸三(1，1-二甲基乙基)酯(4.34g，90％)，为白色泡沫状物质。LCMS：(M+H)+：603.3.
部分I：
(9aR)-8-(2-氯-5-氟-6-肼基-4-嘧啶基)八氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪
向2-{2-氯-5-氟-6-[(9aR)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-4-嘧啶基}-1，1，2-肼三甲酸三(1，1-二甲基乙基)酯(4.34g，7.20mmol)的MeOH(18mL)溶液中加入4N HCl的二烷溶液(18mL，72mmol)。将该溶液搅拌3天，并然后真空浓缩。将残余物溶于水(50mL)中，并将该溶液用20％K2CO3水溶液调节至pH 10。将该混合物用DCM(2x100mL)萃取，并将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤，并真空浓缩，得到(9aR)-8-(2-氯-5-氟-6-肼基-4-嘧啶基)八氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪(1.41g，65％)，为橙色固体。LCMS：(M+H)+：303.1.
部分J：
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(9aR)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺
向(9aR)-8-(2-氯-5-氟-6-肼基-4-嘧啶基)八氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪(1.41g，4.66mmol)的DMF(45mL)溶液中加入(2R)-3-环戊基-2-({甲酰基[(苯基甲基)氧基]氨基}甲基)丙酸(1.36g，4.45mmol)、N-甲基吗啉(2.45mL，22.3mmol)、1-羟基-7-氮杂苯并三唑(0.730g，5.364mmol)和EDC(1.02g，5.32mmol)。将该溶液搅拌过夜，然后用Et2O(200mL)稀释。将该混合物用水(2x100mL)洗涤，并将合并的水相用新鲜的一批Et2O(100mL)萃取。将该Et2O层用新的一批水(50mL)洗涤，并将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩。将残余物溶于DCM(200mL)中，经无水Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩。将残余物与MeOH(50mL)共沸，得到[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(9aR)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺(2.4027g，91％粗产率)，为红色/橙色油状物。LCMS：(M+H)+：590.2.
部分K：
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(9aR)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
向[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(9aR)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺(2.3947g，4.058mmol)的MeOH(40mL)溶液中加入20％Pd(OH)2/C(50％水，240mg)。将该混合物在气球压力下氢化2.5小时，并然后通过0.2μm膜过滤。将该溶液真空浓缩，并将残余物通过Gilson RPLC(10％MeCN的水溶液至65％MeCN的水溶液；8min梯度)纯化。合并所需的级分，并将MeCN真空除去。将生成的混合物用EtOAc(2x150mL)萃取，并将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤，并真空浓缩。然后将残余物由EtOAc-己烷结晶，得到[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(9aR)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺(1.2759g，63％)，为淡粉色固体。LCMS：(M+H)+：500.1.
实施例4
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-(氟代甲基)-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
根据一般方法A，在部分A中使用(9aS)-八氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪二盐酸盐(实施例22)代替吡咯烷，使用4，6-二氯-5-氟-2-(氟代甲基)嘧啶代替4，6-二氯-5-氟-2-甲基嘧啶，并使用3当量的DIPEA制备[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-(氟代甲基)-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：498.3.
实施例5
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺
根据一般方法C，在部分A中使用(9aS)-八氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪二盐酸盐(实施例22)代替氮杂环丁烷盐酸盐制备((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+512.2.
实施例6
(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐晶型1。
将晶体[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺(500mg)溶于四氢呋喃(THF，5mL)中。将乙酸乙酯(20mL)加入到该溶液中。单独地，制备甲磺酸(100mg)的乙酸乙酯(10mL)溶液。用几分钟的时间，将该甲磺酸溶液滴加到游离碱在四氢呋喃和乙酸乙酯中的溶液中。形成沉淀。将浆液在低热(40℃至50℃)下搅拌几小时。通过偏振光显微镜检查验证沉淀物的结晶度。通过过滤分离沉淀和上清液。将该固体用乙酸乙酯洗涤。然后将固体真空干燥。通过NMR(图1和2，表1和2)和XRPD(图3和表3)，将生成的固体分析表征，发现为[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺的甲磺酸盐的晶型1。
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4] 嗪- 8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐晶型1的 质子( 1 H)和碳( 13 C)核磁共振谱图
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐在DMSO-d6(33.3mg/mL，25℃)中的400MHz1H NMR谱图和101MHz13CNMR谱图分别如图1和图2所示。在表1和表2中分别给出了谱图的解释，其中编号顺序如下结构中所示。该1H和13C NMR谱图与所提出的结构一致。
表1：[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐晶型1在DMSO-d6中的1H NMR谱图的解释
表2：[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐晶型1在DMSO-d6中的13C NMR谱图的解释
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4] 嗪- 8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐晶型1的 X射线粉末衍射
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐多晶型1的XRPD图示于图3中。
衍射峰列表(表3)是通过选取了前四个衍射峰，随后从剩余的衍射峰列表中选取了六个最强的峰(其为清楚确定的峰而不是峰肩)制成的。收集采用铜Kα辐射(由Kα1和Kα2组成)的X射线衍射数据。将每个衍射峰曲线拟合，并记录Kα1组分的结果。峰位置估计的不确定度为+/-0.3度2θ。
该衍射峰列表中的10个峰可能在重复的测定中会有少许的变化，这是由于优选取向所引起的峰的相对强度的变化。
表3：基于铜K-α1辐射的[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐多晶型1的XRPD峰位置
红外光谱
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1h)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐晶型1的衰减全反射(ATR)红外光谱示于图4中。在表4中给出了红外光谱的解释。该吸收特征与所提出的结构一致。
表4：[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1h)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐晶型1的ATR红外光谱的解释
热分析法
根据图5所示的差示扫描量热法(DSC)和图6所示的热重分析(TGA)，[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1h)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐的多晶型1在氮气下在大约180℃下分解。
溶出度和溶解性
将[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1h)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺用研钵和杵研磨。将生成的粉末(20g，1.0eq，主要成分)装入到250mL带夹套的容器中。在该容器的顶部装有设定为60RPM的搅拌器。将夹套中的液体控制在23℃。制备纯净水(125mL)和甲磺酸(4.0g，2.7mL，1.0eq)的溶液。将甲磺酸水溶液加入到含有[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1h)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺的容器中。将生成的悬浮液连续搅拌，并通过浊度和目视检查来监测。1天后，浊度和pH读数稳定。将该悬浮液观察7.1天，没有观察到完全溶出。
将[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1h)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐用研钵和杵研磨。将生成的粉末(24g，1.0eq)装入到类似的250mL带夹套的容器中。在该容器的顶部装有设定为60RPM的搅拌器。将夹套中的液体控制在23℃。将纯净水(125mL)加入到含有[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1h)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐的容器中。将生成的悬浮液连续搅拌，并通过浊度和目视检查来监测。在3分钟时目测观察到澄清的溶液，并确定比浊。
当用一当量的160mg/mL浓度的甲磺酸和水处理时，与游离碱相比[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1h)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐显示出更快的溶出和增加的溶解性。
pH溶度曲线可如下表5中所示。
表5：pH溶度曲线.
*pH高于约3.5的溶解行为典型地为弱碱。pH低于约3.5，(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1h)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐表现出自结合，并且(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1h)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐晶型1的溶解度增加，由于加入更多的酸pH没有降低。
**没有达到平衡
新的用途
当与[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1h)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺的冻干制品相比时，由于增加的溶解度和/或溶出度，可配制[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1h)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐晶型1以改善下面的特性：
1)每个小瓶中的药物装载量为400mg至1200mg(游离碱当量)，2)在加工处理、贮存(在强制条件：50℃，环境湿度下，游离碱的降解速率为1.7％/月，相比于甲磺酸盐的降解速率为0.2％/月)和重构过程的降解速率(参见表6)，3)对于患者在设定的剂量浓度下pH的范围：对于游离碱为3.0-3.2，对于甲磺酸盐为3.8-4.0，4)对于最终产物可以选择直接粉末填充。
表6：5mg/mL重构的亲液物的水解的降解速率
实施例7
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐的多晶型1
将1-丙醇(600mL)加入到晶体[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺(100g)中。将生成的浆液以每分钟1.5℃的速度温热至60℃。将甲磺酸(13.54mL)加入到该浆液中。观察到完全溶解。将该溶液通过滤纸过滤。将溶出杯和滤纸用1-丙醇(100mL)洗涤。将溶液的温度调节至50℃，并加入[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐晶种(1.0g)以引发结晶。将生成的浆液在50℃下熟化1小时，然后以0.1℃/分钟的速度冷却至20℃，然后熟化2小时，并以0.1℃/分钟的速度冷却至0℃。在0℃下将浆液熟化大约3小时。将生成的固体和上清液在0℃下过滤分离。将该固体用1-丙醇(100mL)洗涤。将该固体用氮气吹45分钟。然后将固体在50℃下真空干燥大约40分钟。将生成的固体进行分析表征，发现为晶型1。
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4] 嗪- 8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐多晶型I 的 13 C固态核磁共振(SSNMR)
通过基本上如图12中所示的峰形来识别和表征无水晶体[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐多晶型I的13C固态核磁共振(SSNMR)。所述13C固态核磁共振(SSNMR)谱图在用于13C观察的以100.56MHz的频率操作的波谱仪上，使用具有Bruker 4-mm三共振魔角旋转探针的交叉极化脉冲序列，在8kHz的转子频率下获得。
通过下面的特征化学位移峰来识别图12的13C SSNMR谱图：约176.47±0.2、162.53±0.2、160.63±0.2、152.70±0.2、147.69±0.2、131.27±0.2*(即*131.27和128.75ppm，它们是由于一个碳位点被1JC-F偶合裂分)，128.75±0.2*，64.86±0.2，56.15±0.2，54.77±0.2，52.22±0.2，45.94±0.2，42.51±0.2，42.03±0.2，37.96±0.2，36.66±0.2，33.27±0.2，31.67±0.2，25.50±0.2和22.32±0.2ppm。
无水晶体[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1- c][1，4] 嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸 盐多晶型I的 19 F固态核磁共振(SSNMR)谱图
通过基本上如图13中所示的峰形来识别和表征无水晶体[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐多晶型1的19F固态核磁共振(SSNMR)谱图。该19F SSNMR谱图在用于19F观察的以376.21MHz的频率操作的波谱仪上，使用具有Bruker 4-mm三共振魔角旋转探针的交叉极化脉冲序列，在12.5kHz的转子频率下获得。该19F SSNMR在-166.32±0.2ppm处包括各向同性的化学位移。
实施例8
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺二甲磺酸盐。
将晶体[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺(100mg)溶于乙酸乙酯(10mL)中。制备甲磺酸(40.1mg)的乙酸乙酯(大约10mL)溶液。将该甲磺酸溶液滴加到游离碱在乙酸乙酯中的溶液。形成沉淀。将该浆液搅拌并放置过夜。沉淀物的结晶型通过偏振光显微镜检查确定。将沉淀和上清液通过过滤分离。然后将该固体真空干燥。将生成的固体通过XRPD分析表征，发现为[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺二甲磺酸盐的晶型1(参见图7)。
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4] 嗪- 8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺二甲磺酸盐的X射 线粉末衍射
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺二甲磺酸盐多晶型1的XRPD谱图示于图7中。使用具有铜Kα辐射、自动的分散过滤狭缝(divergent slits)、镍Kβ滤光片和多阵列检测器(multiple strip detector)的衍射系统收集该X-射线粉末衍射图。将薄层粉末的样品装到零背景的硅晶片上。
热分析
根据图8所示的差示扫描量热法(DSC)和图9所示的热重分析(TGA)，[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1h)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺二甲磺酸盐的多晶型1在氮气下在约180至185℃下分解。
实施例9
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺樟脑磺酸盐
将晶体[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺(324.3mg)加入到乙腈(MeCN，3.2mL)中。向该浆液中加入(7，7-二甲基-2-氧代双环并[2.2.1]庚-1-基)甲磺酸(樟脑磺酸，171.8mg)。固体溶解。将该溶液温热至40℃，并放置2小时，然后冷却至环境温度(大约23℃)并放置过夜。观察生成固体，通过过滤分离，得到[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺樟脑磺酸盐(421.1mg)。将生成的固体通过NMR(参见图19)和XRPD(参见图10)进行分析表征，发现为[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺樟脑磺酸盐的晶型1。
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4] 嗪- 8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺樟脑磺酸盐的 1 H 核磁共振数据( 1 H NMR)
1H NMR(400MHz，DMSO-d6，参照TMS＝0.00ppm，T＝25C，由于位阻旋转存在旋转异构体，所列的主要旋转异构体整合四舍五入至接近1/2单位)δppm 10.6-9.0(4H，多个宽s)，8.30(1/2H，s)，7.87(1/2H，s)，4.40-4.28(2H，多个多重峰)，4.08-4.00(2H，多个m)，3.82-3.72(3/2H，多个m)，3.56-3.23(17/2H，多个m)，3.05-2.99(1H，m)，2.92(1H，d，J＝15Hz)，2.82-2.61(2H，多个m)，2.44(1H，d，J＝15Hz)，2.28-2.21(4H，多个s和m)，2.00-1.79(5H，多个m)，1.72-1.47(6H，多个m)，1.36-1.20(3H，多个m)，1.10-1.00(2H，多个m)，1.04(3H，s)，0.75(3H，s)(参见图19)。
X射线粉末衍射
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺樟脑磺酸盐多晶型1的XRPD谱图示于图10中。使用具有铜Kα辐射、自动的分散过滤狭缝(divergent slits)、镍Kβ滤光片和多阵列检测器(multiple strip detector)的衍射系统收集该X-射线粉末衍射图。将薄层粉末的样品装到零背景的硅晶片上。
热分析
根据图11中所示的差示扫描量热法(DSC)，[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1h)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺樟脑磺酸盐的多晶型1在氮气下，在大约140℃开始明显熔化，并在大约180℃分解。
实施例10
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1h)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐晶型1和晶型2的药物制剂
实施例10A
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1h)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐晶型1的药物制剂
通过将目标浓度为120mg/mL的[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1h)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐晶型1和50mg/mL无水甘露醇溶于含纯净水的容器中来制备药物制剂。搅拌容器中的物质，得到溶液，使用纯净水以获得最终体积，并再次搅拌以确保完全混合。将该溶液通过0.2μm消毒过滤器。然后将已知量的溶液装入到玻璃容器中，并将该容器用橡胶冻干瓶塞局部塞住。然后将该容器置于托盘(tray)型冷冻干燥器中，并冷冻干燥。将该冷冻干燥器用干燥的氮气装填使得刚好低于大气压(大约650Torr)，并将容器完全塞住。将容器从冷冻干燥器中取出，并密封。
实施例10B
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1h)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐晶型2的药物制剂
通过将目标浓度为120mg/mL的[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1h)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐晶型2和50mg/mL无水甘露醇溶于含纯净水的容器中来制备药物制剂。搅拌容器中的物质，得到溶液，使用纯净水以获得最终体积，并再次搅拌以确保完全混合。将该溶液通过0.2μm消毒过滤器。然后将已知量的溶液装入到玻璃容器中，并将该容器用橡胶冻干瓶塞局部塞住。然后将该容器置于托盘(tray)型冷冻干燥器中，并冷冻干燥。将该冷冻干燥器用干燥的氮气装填使得刚好低于大气压(大约650Torr)，并将容器完全塞住。将容器从冷冻干燥器中取出，并密封。
实施例11
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐多晶型2
将晶体[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺(15g)加入到1-丙醇(nPrOH，240mL)和异辛烷(60mL)中。在10℃下，向该浆液中加入在nPrOH(15ml)中稀释的甲磺酸(2.992g)。固体溶解。
将该溶液温热至35℃，并用[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐多晶型1种晶。将该批物料冷却至10℃，导致伴随有晶型2的成核。将该晶型的混合物加热至35℃，并冷却至10℃，并将该固体通过过滤分离，得到[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐(14.32g)。
将生成的固体通过IR、NMR和XRPD进行分析表征，发现为[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐的晶型2(参见，图14至18)。
红外光谱
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1h)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐晶型2的衰减全反射(ATR)红外光谱示于图14中，并且红外光谱的解释在表7中给出。该吸收特征与所提出的结构一致并相符。
表7：[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1h)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐晶型2的ATR红外光谱的解释
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4] 嗪- 8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐多晶型2 的X射线粉末衍射
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐多晶型2的XRPD谱图示于图15中。
晶型2的衍射峰列表(表8)是通过从毛细管X-射线粉末衍射图的22θ至202θ(2θ)范围内选取了10个最强的峰的度2θ(2θ)位置制成的。收集采用铜Kα辐射(由Kα1和Kα2组成)的X射线衍射数据。将每个衍射峰曲线拟合，并记录Kα1组分的结果。峰位置估计的不确定度为+/-0.3度2θ。
正如本领域一般技术人员所理解，由于样品架中的样品颗粒的优选取向以及仪器的校正不同，样品之间和制品之间的峰的相对强度可能会不同。
表8：基于铜K-α1辐射的多晶型[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐晶型2的XRPD峰位置
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4] 嗪- 8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐多晶型2 的 1 H核磁共振( 1 H NMR)
1H NMR(500MHz，DMSO-d6，参照TMS＝0.00ppm，T＝25℃，由于位阻旋转存在旋转异构体，所列的主要旋转异构体整合四舍五入至接近1/2单位)δppm 10.6-9.7(3H，多个宽s)，9.06(1/2H，s)，9.03(1/2H，s)，8.30(1/2H，s)，7.87(1/2H，s)，4.38(1H，d，J＝13Hz)，4.30(1H，d，J＝13Hz)，4.08-4.00(2H，多个m)，3.81-3.72(3/2H，多个m)，3.56-3.24(17/2H，多个m)，3.04-3.00(1H，m)，2.82-2.70(1H，多个m)，2.41(3H，s)，2.26-2.23(3H，多个s)，1.99-1.90(2H，多个m)，1.71(1H，宽m)，1.66-1.47(5H，多个m)，1.27-1.20(1H，m)，1.08-1.02(2H，多个m)。(参见图16)
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4] 嗪- 8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐多晶型2 的 13 C和 19 F固态核磁共振(SSNMR)
13C和19F固态NMR数据分别使用如下所述的在399.87MHz的1H频率操作的Bruker Avance 400三共振波谱仪获得。
所示的13C SSNMR谱图使用具有Bruker 4-mm三共振魔角旋转探针的交叉极化脉冲序列，在8kHz的转子频率(rotor frequency)下获得。在1H通道(channel)上使用由75至90 kHz的线性的功率提升(power ramp)以增强交叉极化效率。自旋边带通过五脉冲全边带抑制脉冲序列消除。1H去偶使用Spinal-64序列获得。
所示的19F SSNMR谱图使用具有Bruker 4-mm三共振魔角旋转探针的交叉极化脉冲序列，在12.5kHz的转子频率(rotor frequency)下获得。相对于在0ppm的四甲基硅烷记录特征性的13C NMR峰位置(百万分之几)，并且指出具有由仪器偏差和校正产生的+/-0.2ppm的精密度。
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4] 嗪- 8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐多晶型2 的 13 C固态核磁共振(SSNMR)
通过基本上如图17中所示的峰形的13C固态核磁共振(SSNMR)谱图来识别或表征[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐无水多晶型2，所述13C固态核磁共振(SSNMR)谱图在用于13C观察的以100.56MHz的频率操作的波谱仪上，使用具有Bruker 4-mm三共振魔角旋转探针的交叉极化脉冲序列，在8kHz的转子频率下获得。
图17示出了13C SSNMR，其在下面位置显示出特征化学位移峰：174.30±0.2，161.44±0.2，161.16±0.2，160.86±0.2，160.39±0.2154.28±0.2，153.01±0.2，149.82±0.2，132.12±0.2*131.77±0.2*，129.70±0.2*，129.31±0.2*68.30±0.2，64.57±0.2，63.83±0.2，61.34±0.2，59.89±0.2，54.19±0.2，53.81±0.2，52.92±0.2，52.43±0.2，51.31±0.2，50.16±0.2，45.90±0.2，42.86±0.2，41.87±0.2，40.22±0.2，38.73±0.2，37.75±0.2，36.48±0.2，35.59±0.2，33.97±0.2，32.82±0.2，26.89±0.2，26.23±0.2，25.86±0.2和25.23±0.2ppm(即，其中*132.12，131.77，129.70和128.75ppm是由两个碳位点产生的，每个碳位点被1JC-F偶合裂分)。
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4] 嗪- 8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐多晶型2 的 19 F固态核磁共振(SSNMR)谱图
通过基本上如图18中所示的峰形来表征并识别[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐无水多晶型2的19F固态核磁共振(SSNMR)谱图，其中该SSNMR谱图在用于19F观察的以376.21MHz的频率操作的波谱仪上，使用具有Bruker 4-mm三共振魔角旋转探针的交叉极化脉冲序列，在12.5kHz的转子频率下获得。
图18示出了19F SSNMR，其在下面位置显示出特征的各向同性的化学位移峰：-166.56±0.2和-171.26±0.2ppm。
实施例12
多晶型[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐晶型2.
将[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺(33.8g)加入到1L夹套实验室反应器(“JLR”)中。将正丙醇(473mL)加入到1L JLR中。将内容物加热至70℃以溶解。确认完全溶解。将反应器用正丙醇(68mL)洗涤。将内容物以0.25℃/min的速度冷却至25℃。将甲磺酸溶液(11.4mL的20％wt/wt甲磺酸的正丙醇溶液)装入JLR中。将[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐多晶型2(0.34g)加入到该浆液中。将浆液放置超过30分钟。
用6小时的时间，以线性的控制速率将甲磺酸溶液(45.5mL的20％wt/wt甲磺酸的正丙醇溶液)装入到JLR中。将生成的浆液放置2小时。用6小时的时间，以控制速率向该浆液中加入异辛烷(144mL)。然后将浆液以0.1℃/min速度冷却至15℃，并放置1小时。将生成的固体通过过滤分离。
将该固体用正丙醇(100mL)和异辛烷(25mL)的混合物洗涤。然后将该固体用异辛烷(100mL)洗涤。将滤饼用氮气吹2小时，并在50℃下真空干燥48小时，得到34.6g(85.1％摩尔产率)的[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐多晶型2(通过XRPD确定)(参见图20)。
应当理解本发明并不限于上文说明的具体实施方案，并且所要求的权利保留在说明的实施方案和下面的权利要求的范围内的所有改进方案中。
在本说明书中引用的杂志、专利和其他出版物的各种参考文献包括该本领域的技术水平，并且全文引入作为参考。

Claims (51)

1.化合物，其为[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐。
2.化合物，其为[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐的多晶型1。
3.根据权利要求2的化合物，其具有图1所示的1H NMR谱图。
4.根据权利要求2的化合物，其具有图2所示的13C NMR谱图。
5.根据权利要求2的化合物，其具有X-射线衍射图，该X-射线衍射图包括如图3中所示的以°2θ表示的特征峰。
6.根据权利要求5的化合物，其具有从0°2-θ(2θ)至55°2-θ(2θ)范围内下面位置的特征峰：约5.3±0.3(2θ)、9.7±0.3(2θ)、10.8±0.3(2θ)、11.4±0.3(2θ)、13.5±0.3(2θ)、14.9±0.3(2θ)、17.8±0.3(2θ)、18.9±0.3(2θ)、21.2±0.3(2θ)和22.1±0.3(2θ)。
7.根据权利要求2的化合物，其具有衰减全反射红外光谱，该光谱包括如图4中所示的以波数表示的特征吸收带。
8.根据权利要求7的化合物，其具有从500cm-1至4000cm-1波数范围内下面位置的特征红外光谱峰：约1174cm-1、1151cm-1、1130cm-1、1112cm-1、1225cm-1、1583cm-1、1606cm-1、1657cm-1、1670cm-1、2453cm-1、2947cm-1、2865cm-1和3204cm-1。
9.根据权利要求2的化合物，其具有如图5所示的差示扫描量热法(DSC)谱图。
10.根据权利要求2的化合物，其具有如图6所示的热重分析(TGA)谱图。
11.化合物，其为[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺二甲磺酸盐。
12.根据权利要求11的化合物，其具有X-射线衍射图，该X-射线衍射图包括如图7中所示的以°2θ表示的特征峰。
13.根据权利要求11的化合物，其具有如图8所示的差示扫描量热法(DSC)谱图。
14.根据权利要求11的化合物，其具有如图9所示的热重分析(TGA)谱图。
15.化合物，其为[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺樟脑磺酸盐。
16.根据权利要求15的化合物，其具有X-射线衍射图，该X-射线衍射图包括如图10中所示的以°2θ表示的特征峰。
17.根据权利要求15的化合物，其具有如图11所示的差示扫描量热法(DSC)谱图。
18.药物组合物，其包括[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐和至少一种药学上可接受的赋形剂。
19.根据权利要求18的药物组合物，其中[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐为晶型1或晶型2。
20.根据权利要求18的药物组合物，其配制用于静脉内(iv)给药。
21.药物组合物，其包括[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺二甲磺酸盐和至少一种药学上可接受的赋形剂。
22.根据权利要求21的药物组合物，其配制用于静脉内(iv)给药。
23.药物组合物，其包括[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺樟脑磺酸盐和至少一种药学上可接受的赋形剂。
24.根据权利要求23的药物组合物，其配制用于静脉内(iv)给药。
25.治疗细菌感染的方法，所述方法包括向需要该治疗的人给药治疗有效量的[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐。
26.根据权利要求25的治疗细菌感染的方法，其中[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐选自[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐晶型1或[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐晶型2。
27.根据权利要求25的方法，其中该细菌感染是由链球菌属、葡萄球菌属、莫拉菌属、嗜血杆菌属、奈瑟氏菌属、支原体属、军团菌属、衣原体属、拟杆菌属、梭菌属、梭杆菌属、丙酸杆菌属或消化链球菌属引起的。
28.根据权利要求25的方法，其中该细菌感染为耳朵感染、鼻窦炎、上呼吸道感染、下呼吸道感染、生殖器感染、皮肤和软组织感染或细菌性心内膜炎。
29.治疗细菌感染的方法，所述方法包括向需要该治疗的人给药治疗有效量的[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺二甲磺酸盐。
30.根据权利要求29的方法，其中该细菌感染是由链球菌属、葡萄球菌属、莫拉菌属、嗜血杆菌属、奈瑟氏菌属、支原体属、军团菌属、衣原体属、拟杆菌属、梭菌属、梭杆菌属、丙酸杆菌属或消化链球菌属引起的。
31.根据权利要求29的方法，其中该细菌感染为耳朵感染、鼻窦炎、上呼吸道感染、下呼吸道感染、生殖器感染、皮肤和软组织感染或细菌性心内膜炎。
32.治疗细菌感染的方法，所述方法包括向需要该治疗的人给药治疗有效量的[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺樟脑磺酸盐。
33.根据权利要求32的方法，其中该细菌感染是由链球菌属、葡萄球菌属、莫拉菌属、嗜血杆菌属、奈瑟氏菌属、支原体属、军团菌属、衣原体属、拟杆菌属、梭菌属、梭杆菌属、丙酸杆菌属或消化链球菌属引起的。
34.根据权利要求32的方法，其中该细菌感染为耳朵感染、鼻窦炎、上呼吸道感染、下呼吸道感染、生殖器感染、皮肤和软组织感染或细菌性心内膜炎。
35.根据权利要求2的方法，其中化合物(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐晶型1为无水晶体或结晶无水形式、水合物或其混合物。
36.根据权利要求35的方法，其中化合物(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐晶型1为无水晶体或结晶无水形式。
37.根据权利要求36的化合物，其具有如图12所示的13C固态NMR(SSNMR)谱图。
38.根据权利要求36的化合物，其具有如图13所示的19F固态NMR(19F SSNMR)谱图。
39.药物组合物，其包括[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐晶型1，其为无水晶体或结晶无水形式。
40.化合物，其为[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐晶型2。
41.根据权利要求40的化合物，其中化合物[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐晶型2为无水晶体或结晶无水形式、水合物或其混合物。
42.根据权利要求41的化合物，其中化合物[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐晶型2为无水晶体或结晶无水形式。
43.根据权利要求40的化合物，其具有如图16所示的1H NMR谱图。
44.根据权利要求40的化合物，其具有如图17所示的13C固态NMR谱图。
45.根据权利要求40的化合物，其具有X-射线衍射图，该X-射线衍射图包括如图15中所示的以°2θ表示的特征峰。
46.根据权利要求45的化合物，其具有从0°2-θ(2θ)至55°2-θ(2θ)范围内下面位置的特征峰：约5.5±0.3(2θ)、9.3±0.3(2θ)、9.7±0.3(2θ)、10.8±0.3(2θ)、13.6±0.3(2θ)、14.5±0.3(2θ)、15.0±0.3(2θ)、16.2±0.3(2θ)、17.8±0.3(2θ)和19.6±0.3(2θ)。
47.根据权利要求40的化合物，其具有衰减全反射红外光谱，该光谱包括如图14中所示的以波数表示的特征吸收带。
48.根据权利要求47的化合物，其具有从500cm-1至4000cm-1波数范围内下面位置的特征红外光谱峰：约766cm-1、1034cm-1、1154cm-1、1329cm-1、1347cm-1、1577cm-1、1611cm-1、1653cm-1、1699cm-1、2626cm- 1、2863cm-1、3201cm-1、2943cm-1、3468cm-1和3565cm-1。
49.根据权利要求40的化合物，其具有如图17所示的13C固态NMR。
50.根据权利要求40的化合物，其具有如图18所示的19F固态NMR谱图。
51.药物组合物，其包括[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺甲磺酸盐晶型2，其为无水晶体或结晶无水形式。
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