CN104231115A - 肺组织降解提取肝素新工艺 - Google Patents
肺组织降解提取肝素新工艺 Download PDFInfo
- Publication number
- CN104231115A CN104231115A CN201410554321.6A CN201410554321A CN104231115A CN 104231115 A CN104231115 A CN 104231115A CN 201410554321 A CN201410554321 A CN 201410554321A CN 104231115 A CN104231115 A CN 104231115A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- lung
- heparin
- hours
- enzymolysis
- add
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 title claims abstract description 61
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 title claims abstract description 29
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 28
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 title claims abstract description 24
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 23
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 title abstract 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims abstract description 27
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims abstract description 27
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 claims abstract description 21
- 239000005515 coenzyme Substances 0.000 claims abstract description 13
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 40
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 claims description 30
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 29
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 claims description 24
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 claims description 21
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 20
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 20
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 17
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 15
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 15
- 238000010792 warming Methods 0.000 claims description 15
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 claims description 10
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 claims description 10
- 235000011837 pasties Nutrition 0.000 claims description 10
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims description 9
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 9
- DAJSVUQLFFJUSX-UHFFFAOYSA-M sodium;dodecane-1-sulfonate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCS([O-])(=O)=O DAJSVUQLFFJUSX-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 9
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 claims description 7
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 claims description 7
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 6
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 claims description 5
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 claims description 5
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 claims description 5
- 101710130006 Beta-glucanase Proteins 0.000 claims description 5
- 108010059892 Cellulase Proteins 0.000 claims description 5
- 244000035851 Chrysanthemum leucanthemum Species 0.000 claims description 5
- 235000008495 Chrysanthemum leucanthemum Nutrition 0.000 claims description 5
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 claims description 5
- 244000134552 Plantago ovata Species 0.000 claims description 5
- 235000003421 Plantago ovata Nutrition 0.000 claims description 5
- 108010059820 Polygalacturonase Proteins 0.000 claims description 5
- 239000009223 Psyllium Substances 0.000 claims description 5
- 240000007164 Salvia officinalis Species 0.000 claims description 5
- 241000245665 Taraxacum Species 0.000 claims description 5
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 claims description 5
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 claims description 5
- 235000021028 berry Nutrition 0.000 claims description 5
- 239000012267 brine Substances 0.000 claims description 5
- 210000000621 bronchi Anatomy 0.000 claims description 5
- 229940106157 cellulase Drugs 0.000 claims description 5
- 239000012043 crude product Substances 0.000 claims description 5
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 claims description 5
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 claims description 5
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 claims description 5
- 229940070687 psyllium Drugs 0.000 claims description 5
- 235000005412 red sage Nutrition 0.000 claims description 5
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims description 5
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims description 5
- 239000002002 slurry Substances 0.000 claims description 5
- UAJTZZNRJCKXJN-UHFFFAOYSA-M sodium;2-dodecoxy-2-oxoethanesulfonate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOC(=O)CS([O-])(=O)=O UAJTZZNRJCKXJN-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 5
- HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M sodium;chloride;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Cl-] HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 5
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 5
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 3
- 239000004141 Sodium laurylsulphate Substances 0.000 claims 3
- 235000019333 sodium laurylsulphate Nutrition 0.000 claims 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 abstract description 7
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 abstract description 7
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 7
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 abstract description 6
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 abstract description 5
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 abstract description 5
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 abstract description 5
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 abstract description 5
- 239000002994 raw material Substances 0.000 abstract description 4
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 abstract description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 abstract description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 abstract 4
- 239000012224 working solution Substances 0.000 abstract 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 abstract 1
- 230000007071 enzymatic hydrolysis Effects 0.000 abstract 1
- 238000006047 enzymatic hydrolysis reaction Methods 0.000 abstract 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 5
- ZFGMDIBRIDKWMY-PASTXAENSA-N heparin Chemical compound CC(O)=N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](COS(O)(=O)=O)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](C(O)=O)O[C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](OS(O)(=O)=O)[C@@H](O[C@@H]3[C@@H](OC(O)[C@H](OS(O)(=O)=O)[C@H]3O)C(O)=O)O[C@@H]2O)CS(O)(=O)=O)[C@H](O)[C@H]1O ZFGMDIBRIDKWMY-PASTXAENSA-N 0.000 description 5
- 229960001008 heparin sodium Drugs 0.000 description 5
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 4
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 4
- 102000004245 Proteasome Endopeptidase Complex Human genes 0.000 description 3
- 108090000708 Proteasome Endopeptidase Complex Proteins 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 description 2
- -1 sulfuric acid ester Chemical class 0.000 description 2
- MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 2-amino-2-deoxy-D-glucopyranose Chemical compound N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 229920002683 Glycosaminoglycan Polymers 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N N-acelyl-D-glucosamine Natural products CC(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N N-acetyl-beta-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N 0.000 description 1
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 1
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 1
- MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N beta-D-galactosamine Natural products NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 238000006065 biodegradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 229960002442 glucosamine Drugs 0.000 description 1
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 229950006780 n-acetylglucosamine Drugs 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N sulfuric acid Substances OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
本发明涉及生物工程领域,具体涉及一种肺组织降解提取肝素新工艺,包括以下步骤:将原料猪肺,牛肺去脂肪和支气管后,捣碎,通过配制复合酶制剂,再加入辅酶成分制得活化酶使用液,酶解猪肺,牛肺。能将猪肺和牛肺组织酶解成水溶性成分。由于降解条件温和,充分保留了猪肺和牛肺中的活性成分,更利于其肝素,蛋白质,多肽等成分的分离。
Description
技术领域
本发明涉及生物工程领域,涉及一种生物组织的降解方法,具体涉及一种肺组织降解提取肝素新工艺。
背景技术
猪肺和牛肺中含有抗凝血成分——肝素。肝素是一种由葡萄糖胺,L-艾杜糖醛苷、N-乙酰葡萄糖胺和D-葡萄糖醛酸交替组成的黏多糖硫酸脂,平均分子量为15KD,呈强酸性。肝素在组织中可与蛋白质结合。国内外一般采取单一蛋白酶降解法,此法仅能部分降解猪肺和牛肺组织,使得原料中肝素,多肽,蛋白质活性成分在后续常规分离中收率降低,提取的肝素钠效价在10-30IU/MG范围,规模生产可能性减小。另外,也有研究者采取较激烈的强酸强碱分离手段,此手段较多破坏了其中的活性成分。
发明内容
本发明为了解决猪肺和牛肺充分降解,同时又不破坏其生理活性成分的问题,提供了一种条件温和的生物降解方法。
解决上述技术问题的技术方案为:
首先,进行原料处理:取适量新鲜猪肺和牛肺,去脂肪和支气管,清水浸60分钟,清水洗去红细胞,捣碎成糊状。
进一步地,酶解:取糊状肺浆,加4~8倍盐水,盐水浓度为1.8%-3.8%,升温至40±2℃,调PH8.0~9.0,加活化酶使用液总量的一半,搅匀,缓慢升温至58±2℃,酶解1小时,加入0.6‰~1‰的十二烷基磺酸钠(SDS),缓慢搅拌,再加入剩余活化酶使用液,酶解2小时,至体系无固体物。酶解过程中维持酶解温度58±2℃,pH8.5~9.0。
其中,活化酶使用液的配制方法如下:
a)按重量百分比称取碱性蛋白酶粉3~5%、果胶酶粉3~5%、纤维素酶粉15~40%、淀粉酶15~20%、木聚糖酶15~20%、β-葡聚糖酶15~20%混合均匀;
b)按重量百分比取鱼腥草25%、蒲公英16%、丹参4%、野菊花4%、五味子5%、夏枯草15%、海藻5%、海带5%、甘草6%、车前草15%加入至500ml去离子水中,煎煮60分钟后再加入300ml去离子水煎煮30分钟,取上清液;
c)将步骤b)所得的上清液加入步骤a)所得的混合酶中,搅拌均匀制得复合酶;
d)取总质量为新鲜猪肺和牛肺总质量的2‰~6‰的复合酶,调pH值在8.5~9.0之间,再加入浓度为75%的食用酒精和辅酶成分,食用酒精的体积比达到6%~10%,辅酶成分质量比达到0.6‰~1‰,搅匀,静置3小时;配制成活化酶使用液。
进一步地,吸附:将酶解液升温至85~90℃,保温30分钟,80目尼龙网过滤。降温至58~60℃,盐度1.8~2.0,0.5%阴离子交换树脂吸附8小时。
进一步地,洗脱:共3次,时间分别为5小时,3小时,2小时。洗脱液的浓度分别为:18°~20°盐水,21°~22°盐水,22°~24°盐水,第三次盐水洗脱后,配成24°~25°盐水回收,可供下次第一次洗脱用。
进一步地,沉淀:集中第一次洗脱液和第二次洗脱液,用85°~88°食用酒精,加至酒精度为38°~40°,沉淀24小时。
更进一步地,脱水干燥:用虹吸法弃去上清液,收集沉淀物,用95%酒精,脱水两次,每次酒精的使用量为沉淀物的2~3倍,处理时间不超过30分钟。挥干酒精,干燥得肝素粗品。
采用了上述方案,由于酶解过程中维持酶解温度58±2℃,pH8.5~9.0,条件温和,在不破坏生理活性成分的情况下,解决了猪肺和牛肺等动物肺组织完全降解的问题,提高了肺组织中肝素、蛋白质多肽等生物活性成分的提取和分离效率,使以猪肺、牛肺等动物肺组织作为原料规模化生产肝素、蛋白质多肽等生物活性成分的成本大大降低,收益率显著提高。并且充分保留了肺组织中的生理活性成分,提取的肝素钠效价较单一蛋白酶降解法显著提高,一次提取出的肝素钠效价大于60IU/MG。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明作进一步详细的说明。
实施例1
首先,进行原料处理:取1份新鲜猪肺和牛肺,去脂肪和支气管,清水浸60分钟,清水洗去红细胞,捣碎成糊状。
进一步地,酶解:取糊状肺浆,加4倍盐水,盐水浓度为1.8%~3.8%,升温至40±2℃,调pH8.0~9.0,加活化酶使用液总量的一半,搅匀,缓慢升温至58±2℃,酶解1小时,加入0.6‰的十二烷基磺酸钠(SDS),缓慢搅拌,再加入剩余活化酶使用液,酶解2小时,至体系无固体物。酶解过程中维持酶解温度58±2℃,pH8.5~9.0。
其中,活化酶使用液的配制方法如下:a)按重量百分比称取碱性蛋白酶粉3%、果胶酶粉3%、纤维素酶粉34%、淀粉酶20%、木聚糖酶20%、β-葡聚糖酶20%混合均匀;
b)按重量百分比取鱼腥草25%、蒲公英16%、丹参4%、野菊花4%、五味子5%、夏枯草15%、海藻5%、海带5%、甘草6%、车前草15%加入至500ml去离子水中,煎煮60分钟后再加入300ml去离子水煎煮30分钟,取上清液;
c)将步骤b)所得的上清液加入步骤a)所得的混合酶中,搅拌均匀制得复合酶;
d)取总质量为新鲜猪肺和牛肺总质量的2‰~6‰的复合酶,调pH值在8.5~9.0之间,再加入浓度为75%的食用酒精和辅酶成分,食用酒精的体积比达到6%~10%,辅酶成分质量比达到0.6‰~1‰,搅匀,静置3小时;配制成活化酶使用液。
进一步地,吸附:将酶解液升温至85~90℃,保温30分钟,80目尼龙网过滤。降温至58~60℃,盐度1.8~2.0,0.5%阴离子交换树脂吸附8小时。
进一步地,洗脱:共3次,时间分别为5小时,3小时,2小时。洗脱液的浓度分别为:18°~20°盐水,21°~22°盐水,22°~24°盐水,第三次盐水洗脱后,配成24°~25°盐水回收,可供下次第一次洗脱用。
进一步地,沉淀:集中第一次洗脱液和第二次洗脱液,用85°~88°食用酒精,加至酒精度为38°~40°,沉淀24小时。
更进一步地,脱水干燥:用虹吸法弃去上清液,收集沉淀物,用95%酒精,脱水两次,每次酒精的使用量为沉淀物的2~3倍,处理时间不超过30分钟。挥干酒精,干燥得肝素粗品。
实施例2
首先,进行原料处理:取1份新鲜猪肺和牛肺,去脂肪和支气管,清水浸60分钟,清水洗去红细胞,捣碎成糊状。
进一步地,酶解:取糊状肺浆,加8倍盐水,盐水浓度为1.8%~3.8%,升温至40±2℃,调PH8.0~9.0,加活化酶使用液总量的一半,搅匀,缓慢升温至58±2℃,酶解1小时,加入1‰的十二烷基磺酸钠(SDS),缓慢搅拌,再加入剩余活化酶使用液,酶解2小时,至体系无固体物。酶解过程中维持酶解温度58±2℃,pH8.5~9.0。
其中,活化酶使用液的配制方法如下:
a)按重量百分比称取碱性蛋白酶粉5%、果胶酶粉5%、纤维素酶粉40%、淀粉酶15%、木聚糖酶15%、β-葡聚糖酶20%混合均匀;
b)按重量百分比取鱼腥草25%、蒲公英16%、丹参4%、野菊花4%、五味子5%、夏枯草15%、海藻5%、海带5%、甘草6%、车前草15%加入至500ml去离子水中,煎煮60分钟后再加入300ml去离子水煎煮30分钟,取上清液;
c)将步骤b)所得的上清液加入步骤a)所得的混合酶中,搅拌均匀制得复合酶;
d)取总质量为新鲜猪肺和牛肺总质量的2‰~6‰的复合酶,调pH值在8.5~9.0之间,再加入浓度为75%的食用酒精和辅酶成分,食用酒精的体积比达到6%~10%,辅酶成分质量比达到0.6‰~1‰,搅匀,静置3小时;配制成活化酶使用液。
进一步地,吸附:将酶解液升温至85~90℃,保温30分钟,80目尼龙网过滤。降温至58~60℃,盐度1.8~2.0,0.5%阴离子交换树脂吸附8小时。
进一步地,洗脱:共3次,时间分别为5小时,3小时,2小时。洗脱液的浓度分别为:18°~20°盐水,21°~22°盐水,22°~24°盐水,第三次盐水洗脱后,配成24°~25°盐水回收,可供下次第一次洗脱用。
进一步地,沉淀:集中第一次洗脱液和第二次洗脱液,用85°~88°食用酒精,加至酒精度为38°~40°,沉淀24小时。
更进一步地,脱水干燥:用虹吸法弃去上清液,收集沉淀物,用95%酒精,脱水两次,每次酒精的使用量为沉淀物的2~3倍,处理时间不超过30分钟。挥干酒精,干燥得肝素粗品。
实施例3
首先,进行原料处理:取1份新鲜猪肺和牛肺,去脂肪和支气管,清水浸60分钟,清水洗去红细胞,捣碎成糊状。
进一步地,酶解:取糊状肺浆,加6倍盐水,盐水浓度为1.8%~3.8%,升温至40±2℃,调PH8.0~9.0,加活化酶使用液总量的一半,搅匀,缓慢升温至58±2℃,酶解1小时,加入0.8‰的十二烷基磺酸钠(SDS),缓慢搅拌,再加入剩余活化酶使用液,酶解2小时,至体系无固体物。酶解过程中维持酶解温度58±2℃,pH8.5~9.0。
其中,活化酶使用液的配制方法如下:
a)按重量百分比称取碱性蛋白酶粉3%、果胶酶粉5%、纤维素酶粉40%、淀粉酶17%、木聚糖酶20%、β-葡聚糖酶15%混合均匀;
b)按重量百分比取鱼腥草25%、蒲公英16%、丹参4%、野菊花4%、五味子5%、夏枯草15%、海藻5%、海带5%、甘草6%、车前草15%加入至500ml去离子水中,煎煮60分钟后再加入300ml去离子水煎煮30分钟,取上清液;
c)将步骤b)所得的上清液加入步骤a)所得的混合酶中,搅拌均匀制得复合酶;
d)取总质量为新鲜猪肺和牛肺总质量的2‰~6‰的复合酶,调pH值在8.5~9.0之间,再加入浓度为75%的食用酒精和辅酶成分,食用酒精的体积比达到6%~10%,辅酶成分质量比达到0.6‰~1‰,搅匀,静置3小时;配制成活化酶使用液。
进一步地,吸附:将酶解液升温至85~90℃,保温30分钟,80目尼龙网过滤。降温至58~60℃,盐度1.8~2.0,0.5%阴离子交换树脂吸附8小时。
进一步地,洗脱:共3次,时间分别为5小时,3小时,2小时。洗脱液的浓度分别为:18°~20°盐水,21°~22°盐水,22°~24°盐水,第三次盐水洗脱后,配成24°~25°盐水回收,可供下次第一次洗脱用。
进一步地,沉淀:集中第一次洗脱液和第二次沈脱液,用85°~88°食用酒精,加至酒精度为38°~40°,沉淀24小时。
更进一步地,脱水干燥:用虹吸法弃去上清液,收集沉淀物,用95%酒精,脱水两次,每次酒精的使用量为沉淀物的2~3倍5处理时间不超过30分钟。挥干酒精,干燥得肝素粗品。
采用了上述方案,由于酶解过程中维持酶解温度58±2℃,pH8.5~9.0,条件温和,在不破坏生理活性成分的情况下,解决了猪肺和牛肺等动物肺组织完全降解的问题,提高了肺组织中肝素、蛋白质多肽等生物活性成分的提取和分离效率,使以猪肺、牛肺等动物肺组织作为原料规模化生产肝素、蛋白质多肽等生物活性成分的成本大大降低,收益率显著提高。并且充分保留了肺组织中的生理活性成分,提取的肝素钠效价较单一蛋白酶降解法显著提高,一次提取出的肝素钠效价大于60IU/MG。
Claims (6)
1.肺组织降解提取肝素新工艺,其特征在于,包括以下步骤:
(1)原料处理:取适量新鲜猪肺和牛肺,去脂肪和支气管,清水浸泡60分钟,清水洗去红细胞之后捣碎成糊状;
(2)活化酶使用液的配制:
a)按重量百分比称取碱性蛋白酶粉3~5%、果胶酶粉3~5%、纤维素酶粉15~40%、淀粉酶15~20%、木聚糖酶15~20%、β-葡聚糖酶15~20%混合均匀;
b)按重量百分比取鱼腥草25%、蒲公英16%、丹参4%、野菊花4%、五味子5%、夏枯草15%、海藻5%、海带5%、甘草6%、车前草15%加入至500ml去离子水中,煎煮60分钟后再加入300ml去离子水煎煮30分钟,取上清液;
c)将步骤b)所得的上清液加入步骤a)所得的混合酶中,搅拌均匀制得复合酶;
d)取总质量为上述步骤(1)所述的新鲜猪肺和牛肺总质量的2‰~6‰的复合酶,调pH值在8.5~9.0之间,再加入浓度为75%的食用酒精和辅酶成分,食用酒精的体积比达到6%~10%,辅酶成分质量比达到0.6‰~1‰,搅匀,静置3小时;
(3)酶解:取上述步骤(1)所得的糊状肺浆,按照质量分数1:5的比例加入盐水,所述的盐水浓度为1.8%~3.8%,升温至38~42℃,调节pH在8.0~9.0之间,加入上述步骤(2)制得的活化酶液总量的一半,搅匀,缓慢升温至56~60℃,酶解1小时,加入辅酶成分,缓慢搅拌,再加入剩余活化酶使用液,酶解2小时,至体系无固体物;
(4)吸附:将上述步骤(3)得到的酶解液升温至85~90℃,保温30分钟,用80目尼龙网对其进行过滤,然后将滤液降温至58~60℃,调节盐度至1.8~2.0,0.5%阴离子交换树脂吸附8小时;
(5)洗脱:将上述步骤(4)得到的酶解液用盐水洗脱数次得洗脱液;
(6)沉淀:收集上述步骤(5)所得的洗脱液,用85°~88°食用酒精,加至酒精度为38°~40°,沉淀24小时;
(7)脱水干燥:用虹吸法弃去上清液,收集沉淀物,用95%的酒精,脱水两次,每次酒精的使用量为沉淀物的2~3倍,处理时间不超过30分钟,待挥干酒精,干燥得肝素粗品。
2.根据权利要求1所述的肺组织降解提取肝素新工艺,其特征在于:步骤(2)和步骤(3)中所述的辅酶成分为:十二烷基磺酸钠(SDS)。
3.根据权利要求2所述的肺组织降解提取肝素新工艺,其特征在于:所述的十二烷基硫酸钠(SDS)的加入量为总量的0.5~1.5‰。
4.根据权利要求1所述的肺组织降解提取肝素新工艺,其特征在于:酶解过程中均维持酶解温度56~60℃,pH8.5~9.0。
5.根据权利要求1所述的肺组织降解提取肝素新工艺,其特征在于:步骤(5)中所述的洗脱次数为三次,时间分别为5小时,3小时,2小时,所述的盐水的浓度分别为18°~20°盐水,21°~22°盐水,22°~24°盐水。
6.根据权利要求1所述的肺组织降解提取肝素新工艺,其特征在于:步骤(6)中所述的洗脱液包括第一次洗脱液和第二次洗脱液。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201410554321.6A CN104231115B (zh) | 2014-10-20 | 2014-10-20 | 肺组织降解提取肝素新工艺 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201410554321.6A CN104231115B (zh) | 2014-10-20 | 2014-10-20 | 肺组织降解提取肝素新工艺 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN104231115A true CN104231115A (zh) | 2014-12-24 |
CN104231115B CN104231115B (zh) | 2016-10-19 |
Family
ID=52220095
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201410554321.6A Active CN104231115B (zh) | 2014-10-20 | 2014-10-20 | 肺组织降解提取肝素新工艺 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN104231115B (zh) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN117327205A (zh) * | 2023-08-10 | 2024-01-02 | 浩泰健康济盛(吉林)生物科技有限公司 | 一种从猪肺中提取肝素的方法 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102344502A (zh) * | 2011-11-11 | 2012-02-08 | 宁发子 | 利用猪肺提取肝素钠的方法 |
CN103467624A (zh) * | 2013-08-29 | 2013-12-25 | 武汉多宝微生物技术有限公司 | 一种肝素钠粗品的提取方法 |
CN103951768A (zh) * | 2014-04-29 | 2014-07-30 | 贵州慧静生物科技有限公司 | 利用猪、牛肺提取肝素钠并联产多肽蛋白粉、氨基酸蛋白粉的方法 |
-
2014
- 2014-10-20 CN CN201410554321.6A patent/CN104231115B/zh active Active
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102344502A (zh) * | 2011-11-11 | 2012-02-08 | 宁发子 | 利用猪肺提取肝素钠的方法 |
CN103467624A (zh) * | 2013-08-29 | 2013-12-25 | 武汉多宝微生物技术有限公司 | 一种肝素钠粗品的提取方法 |
CN103951768A (zh) * | 2014-04-29 | 2014-07-30 | 贵州慧静生物科技有限公司 | 利用猪、牛肺提取肝素钠并联产多肽蛋白粉、氨基酸蛋白粉的方法 |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN117327205A (zh) * | 2023-08-10 | 2024-01-02 | 浩泰健康济盛(吉林)生物科技有限公司 | 一种从猪肺中提取肝素的方法 |
CN117327205B (zh) * | 2023-08-10 | 2024-07-02 | 浩泰健康济盛(吉林)生物科技有限公司 | 一种从猪肺中提取肝素的方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN104231115B (zh) | 2016-10-19 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN103992384B (zh) | 一种大黄鱼鱼骨胶原肽及其制备方法和用途 | |
CN101948897B (zh) | 从文冠果中提取文冠果油、文冠果多糖、文冠果水解蛋白肽的方法 | |
CN105385737A (zh) | 一种牦牛骨胶原寡肽的制备工艺 | |
CN103484235A (zh) | 一种从牡丹籽或牡丹籽粕中提油的方法 | |
CN100451022C (zh) | 从菜籽饼粕中提取菜籽蛋白和植酸钙的工艺方法 | |
CN108948227A (zh) | 一种高压脉冲提取黄秋葵果胶的方法 | |
CN106177898A (zh) | 一种无抗水产免疫增强剂的制备方法 | |
CN102839047A (zh) | 一种用带鱼及其下脚料提取鱼油和生产牛磺酸海鲜调味品的方法 | |
CN103374594A (zh) | 采用生物酶解工艺制取鱼皮明胶的方法 | |
CN111040046A (zh) | 一种绣球菌多糖的高效制备方法 | |
CN102732592A (zh) | 酶法制备淡水鱼骨明胶的方法 | |
CN105707729A (zh) | 一种制取鹿骨全骨粉的工艺 | |
CN104611310A (zh) | 从辣木叶中提取蛋白质和超氧化物歧化酶(sod)的工艺 | |
CN106387304B (zh) | 一种高压脉冲电场偶联生物酶解制备鲍鱼内脏磷脂的方法 | |
CN106748923A (zh) | 一种从黑蒜中提取蒜氨酸的方法 | |
CN105886569A (zh) | 一种茶黄素的制备方法 | |
CN104970418A (zh) | 一种生物复合酶法桂花汁的生产方法 | |
CN104928341A (zh) | 一种联合超声波辅助酶解和微生物发酵麸皮制备阿魏酸的工艺 | |
CN102775511B (zh) | 一种从辣椒渣中提取辣椒多糖的方法 | |
CN104231115A (zh) | 肺组织降解提取肝素新工艺 | |
CN108101980B (zh) | 一种高纯度藻蓝色素的制备方法 | |
CN108753872B (zh) | 一种莲子多糖高收率的提取方法 | |
CN102746413B (zh) | 蜂花粉多糖酶解破壁结合热水超声浸提方法 | |
CN105362300A (zh) | 一种利用海藻制备富含海藻多酚浓缩液的方法 | |
CN102140143B (zh) | 一种从蟹壳中提取甲壳质的方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C41 | Transfer of patent application or patent right or utility model | ||
TA01 | Transfer of patent application right |
Effective date of registration: 20160831 Address after: 515556 north section of east side, No.1 street, hi tech Industrial Development Zone, Guangdong, Jieyang Applicant after: Jieyang embellish casing Co., Ltd. Address before: 522000 inspection and Quarantine Building, Xinyang Road, Rongcheng District, Guangdong, Jieyang Applicant before: Liu Chuliang |
|
C14 | Grant of patent or utility model | ||
GR01 | Patent grant |