CN117327205B - 一种从猪肺中提取肝素的方法 - Google Patents
一种从猪肺中提取肝素的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN117327205B CN117327205B CN202311005201.6A CN202311005201A CN117327205B CN 117327205 B CN117327205 B CN 117327205B CN 202311005201 A CN202311005201 A CN 202311005201A CN 117327205 B CN117327205 B CN 117327205B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- parts
- enzyme
- weight
- supernatant
- pig lung
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 title claims abstract description 102
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 title claims abstract description 48
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 48
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 43
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 title claims abstract description 43
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims abstract description 101
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims abstract description 101
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 claims abstract description 101
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims abstract description 40
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims abstract description 24
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 16
- 108090000145 Bacillolysin Proteins 0.000 claims abstract description 14
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 claims abstract description 14
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 claims abstract description 14
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 claims abstract description 14
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 claims abstract description 13
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 claims abstract description 13
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 claims abstract description 13
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 claims abstract description 13
- 108010059892 Cellulase Proteins 0.000 claims abstract description 12
- 101710121765 Endo-1,4-beta-xylanase Proteins 0.000 claims abstract description 12
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 claims abstract description 12
- 239000004365 Protease Substances 0.000 claims abstract description 12
- 229940106157 cellulase Drugs 0.000 claims abstract description 12
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims abstract description 12
- 229940055729 papain Drugs 0.000 claims abstract description 12
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 claims abstract description 12
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 claims abstract description 12
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 92
- 239000002002 slurry Substances 0.000 claims description 59
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 44
- 239000003480 eluent Substances 0.000 claims description 43
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 claims description 37
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 35
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 32
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 claims description 24
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 23
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 22
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 22
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 22
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 21
- 238000002791 soaking Methods 0.000 claims description 21
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims description 20
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims description 13
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 claims description 13
- 241000512259 Ascophyllum nodosum Species 0.000 claims description 12
- 244000035851 Chrysanthemum leucanthemum Species 0.000 claims description 12
- 235000008495 Chrysanthemum leucanthemum Nutrition 0.000 claims description 12
- 241000885743 Melastoma dodecandrum Species 0.000 claims description 12
- 235000001855 Portulaca oleracea Nutrition 0.000 claims description 12
- 244000119298 Emblica officinalis Species 0.000 claims description 11
- 235000015489 Emblica officinalis Nutrition 0.000 claims description 11
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 claims description 11
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 11
- 240000002791 Brassica napus Species 0.000 claims description 10
- 235000011293 Brassica napus Nutrition 0.000 claims description 8
- 241000628997 Flos Species 0.000 claims description 6
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims description 4
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims description 4
- 241001278833 Rosa laevigata Species 0.000 claims description 3
- 235000000661 Rosa laevigata Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000009609 fructus phyllanthi Substances 0.000 claims description 3
- 210000000582 semen Anatomy 0.000 claims description 3
- 235000004977 Brassica sinapistrum Nutrition 0.000 claims description 2
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 claims description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 2
- 244000234609 Portulaca oleracea Species 0.000 claims 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 abstract description 8
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 abstract description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 4
- 108010059820 Polygalacturonase Proteins 0.000 abstract description 3
- 108010093305 exopolygalacturonase Proteins 0.000 abstract description 3
- 239000000419 plant extract Substances 0.000 abstract description 3
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 abstract description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 2
- 229960001322 trypsin Drugs 0.000 abstract description 2
- 239000012267 brine Substances 0.000 description 18
- HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M sodium;chloride;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Cl-] HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 18
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 12
- 241000219304 Portulacaceae Species 0.000 description 10
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 10
- 239000003957 anion exchange resin Substances 0.000 description 9
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 8
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 5
- ZFGMDIBRIDKWMY-PASTXAENSA-N heparin Chemical compound CC(O)=N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](COS(O)(=O)=O)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](C(O)=O)O[C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](OS(O)(=O)=O)[C@@H](O[C@@H]3[C@@H](OC(O)[C@H](OS(O)(=O)=O)[C@H]3O)C(O)=O)O[C@@H]2O)CS(O)(=O)=O)[C@H](O)[C@H]1O ZFGMDIBRIDKWMY-PASTXAENSA-N 0.000 description 5
- 229960001008 heparin sodium Drugs 0.000 description 5
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 3
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 238000007711 solidification Methods 0.000 description 3
- 230000008023 solidification Effects 0.000 description 3
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 2
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 210000004347 intestinal mucosa Anatomy 0.000 description 2
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 2-amino-2-deoxy-D-glucopyranose Chemical compound N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 0.000 description 1
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N Galacturonsaeure Natural products O=CC(O)C(O)C(O)C(O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002683 Glycosaminoglycan Polymers 0.000 description 1
- -1 L-iduroniside Chemical compound 0.000 description 1
- 241000266322 Melastoma Species 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N N-acelyl-D-glucosamine Natural products CC(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N N-acetyl-beta-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N 0.000 description 1
- MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N N-acetylglucosamine Natural products CC(=O)N[C@@H](C=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N 0.000 description 1
- 102000035092 Neutral proteases Human genes 0.000 description 1
- 108091005507 Neutral proteases Proteins 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- AEMOLEFTQBMNLQ-WAXACMCWSA-N alpha-D-glucuronic acid Chemical compound O[C@H]1O[C@H](C(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O AEMOLEFTQBMNLQ-WAXACMCWSA-N 0.000 description 1
- 230000010100 anticoagulation Effects 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N beta-D-galactosamine Natural products NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 1
- 210000000621 bronchi Anatomy 0.000 description 1
- 239000008395 clarifying agent Substances 0.000 description 1
- 239000005515 coenzyme Substances 0.000 description 1
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-NGQZWQHPSA-N d-xylitol Chemical compound OC[C@H](O)C(O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-NGQZWQHPSA-N 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 description 1
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 1
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003544 deproteinization Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000003912 environmental pollution Methods 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 229960002442 glucosamine Drugs 0.000 description 1
- 229940095529 heparin calcium Drugs 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 239000003055 low molecular weight heparin Substances 0.000 description 1
- 238000005360 mashing Methods 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 229950006780 n-acetylglucosamine Drugs 0.000 description 1
- 231100000956 nontoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 1
- 239000012286 potassium permanganate Substances 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000010298 pulverizing process Methods 0.000 description 1
- 238000007670 refining Methods 0.000 description 1
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 238000009777 vacuum freeze-drying Methods 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
Abstract
本发明提供了一种从猪肺中提取肝素的方法，涉及生物医药领域，该方法具体包括：(1)预处理；(2)活化酶制备；(3)酶解；(4)吸附、洗脱；(5)沉淀、干燥。本发明充分利用胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、纤维素酶、果胶酶、淀粉酶、枯草芽孢杆菌中性蛋白酶、木聚糖酶等复合酶，配合植物提取上清液成分，能有效提高反应效率、降低酶使用量，保证提取安全性的同时节约成本。
Description
技术领域
本发明涉及生物医药领域，具体涉及一种从猪肺中提取肝素的方法。
背景技术
肝素是一种葡萄糖胺、L-艾杜糖醛苷、N-乙酰葡萄糖胺和D-葡萄糖醛酸交替组成的粘多糖硫酸酯，存在于肺、血管壁、肠黏膜等组织中，是一种天然抗凝血物质，具体又包括肝素钠、肝素钙以及低分子肝素等，主要用于防治血栓形成。目前肝素的提取方法包括高锰酸钾和过氧化氢两步氧化法、过氧化氢分次加入二次氧化法以及酶解法，相比于前两种方法而言，酶解法能够避免肝素结构破坏、环境污染也较小，被广泛利用。
书籍：杨元娟.生物药物检测技术供药品生产技术、药品生物技术专业用[M].2017.第195页提及肝素广泛存在于哺乳动物的肝、肺、肾、胸腺、肠粘膜、肌肉和血液中，现主要从牛肺、猪肺或猪小肠粘膜中提取。书籍：曾宪科.农副产品深加工利用100例[M].广东科技出版社,2004.第90页也提及从猪肺提取肝素，具体包括水解、沉淀、精制等操作。
专利CN104530262A公开了一种从猪肺中提取肝素的生产方法，具体将新鲜猪肺绞碎成浆液、浆液保温酶解、酶解液过滤收集滤液、对滤液进行除蛋白处理、超滤、氧化沉淀、冷冻干燥得肝素粗品。该发明具有以下优点：采用的酶解方法能更彻底全面地溶解猪肺浆液，用胰蛋白酶终止酶解，真空冷冻干燥技术稳定了产品的质量以及提高收率，同时获得的粗品杂质少、效价高；生产方法中采用澄清剂来替代乙醇反复醇沉来去除蛋白质的传统工艺，具有去除率高，节约了大量乙醇的使用量，降低了生产成本；工艺设计合理，生产无毒、无害、生物绿色环保，猪肺原料来源易得，运营生产成本低，适合大规模工业化生产。但该方法中使用大量的碱液，破坏活性成分的同时，也会造成一定污染。
专利CN103980387B公开了一种生物酶法制备肝素钠的方法，通过将猪肺粉碎、酶解后，进行去蛋白处理，利用树脂交换后，再通过氧化脱色后得肝素钠溶液，将肝素钠溶液实施沉淀、脱水、干燥得到肝素钠精品，该方法来源广泛，通用性强，活性收率高，工艺品质稳定，生产成本低廉，实现肝素钠的低投入、低成本、高回收率。但该方法重点通过优化制备过程中的温度、时间各项参数以及配合D217树脂进行，整体而言，控制变量参数较多，工艺较为复杂，并不适用于工业规模化生产。
专利CN104231115A公开了肺组织降解提取肝素新工艺，具体将原料猪肺，牛肺去脂肪和支气管后，捣碎，通过配制复合酶制剂，再加入辅酶成分制得活化酶使用液，该发明中的方法降解条件温和，充分保留了猪肺和牛肺中的活性成分，更利于其肝素，蛋白质，多肽等成分的分离。该发明中的方法重点优化活化酶使用也以及各步骤参数，整体而言，生产得到的肝素效价相对较低。
针对现有技术存在的问题，寻找一种污染小、工艺相对简单同时所得肝素效价高的肝素提取工艺十分必要。
发明内容
本发明针对现有技术存在的问题，提供了一种从猪肺中提取肝素的方法，该方法能有效提高反应效率、降低酶使用量，保证提取安全性的同时节约成本。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
本发明提供了一种从猪肺中提取肝素的方法，包括以下步骤：
(1)预处理：将猪肺去除内外污物、脂肪和气管，浸泡后清洗、破碎，得到猪肺浆料；
(2)活化酶制备：将马齿苋、关山樱花、海带、野菊花、余甘子、油菜籽和地菍混合后，加入水浸泡、煎煮、过滤，得到上清液；将上清液和复合酶混合后搅拌均匀，得到酶混合物，调节pH后，加入乙醇、十二烷基磺酸钠，搅拌均匀后，静置，即得活化酶；
(3)酶解：将步骤(1)得到的猪肺浆料加入盐水，第一次升温，调节pH后，初次加入步骤(2)的活化酶，搅拌均匀后，第二次升温、酶解，加入十二烷基磺酸钠，继续搅拌，再次加入步骤(2)的活化酶，酶解得到物料A；
(4)吸附、洗脱：将步骤(3)得到的物料A升温后保温，过滤，降温后，使用树脂进行吸附、洗脱，得到洗脱液；
(5)沉淀、干燥：将步骤(4)的洗脱液调节pH，向其中加入乙醇，沉淀，弃去上清液，得到沉淀物，待酒精挥发后，干燥，即得。
进一步地，按重量份数计，步骤(2)中所述上清液的原料包括：8-10份马齿苋、5-8份关山樱花、8-10份海带、5-7份野菊花、5-7份余甘子、3-6份油菜籽和3-6份地菍。
优选地，按重量份数计，步骤(2)中所述上清液的原料包括：8份马齿苋、6份关山樱花、8份海带、6份野菊花、6份余甘子、5份油菜籽和5份地菍。
进一步地，步骤(2)中所述上清液和复合酶的重量比为2:1。
进一步地，所述关山樱花、油菜籽和地菍的重量比为5-8:3-6:3-6；优选为6:5:5。
进一步地，所述马齿苋、海带、野菊花的重量比为8-10:8-10:5-7；优选为8:8:6。
进一步地，步骤(2)中所述复合酶包括胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、纤维素酶、果胶酶、淀粉酶、枯草芽孢杆菌中性蛋白酶、木聚糖酶。
进一步地，按重量份数计，步骤(2)中所述复合酶包括1-5份胰蛋白酶、1-3份木瓜蛋白酶、18-35份纤维素酶、1-3份果胶酶、10-20份淀粉酶、2-4份枯草芽孢杆菌中性蛋白酶、12-14份木聚糖酶。
优选地，按重量份数计，步骤(2)中所述复合酶包括3份胰蛋白酶、2份木瓜蛋白酶、22份纤维素酶、2份果胶酶、15份淀粉酶、3份枯草芽孢杆菌中性蛋白酶、13份木聚糖酶。
进一步地，步骤(2)中所述酶混合物、乙醇、十二烷基磺酸钠的重量比为15-18:30-50:5-8。优选为16:40:7。
进一步地，步骤(3)中所述第一次升温的温度为37-40℃，第二次升温的温度为55-60℃。
进一步地，步骤(3)中所述初次加入步骤(2)的活化酶的重量与再次加入步骤(2)的活化酶的重量一致，均为猪肺浆料重量的0.75-0.9‰。
进一步地，步骤(4)中所述升温的温度为85-90℃，所述降温的温度为55-60℃。
在一些具体的实施方式中，所述从猪肺中提取肝素的方法，包括以下步骤：
(1)预处理：将猪肺去除内外污物、脂肪和气管，浸泡1h后清洗、破碎，得到猪肺浆料；
(2)活化酶制备：将马齿苋、关山樱花、海带、野菊花、余甘子、油菜籽和地菍混合后，加入上述原料8-10倍重量的水浸泡、煎煮0.5h后，再加入上述原料5-7倍重量的水，继续煎煮20min，过滤，得到上清液；将上清液和复合酶混合后搅拌均匀，得到酶混合物，调节pH为8.5-9后，加入体积分数为75％的乙醇、十二烷基磺酸钠，搅拌均匀后，静置3h，即得活化酶；
(3)酶解：将步骤(1)得到的猪肺浆料加入盐水(盐水的重量为猪肺浆料的3-5倍，质量分数为1.5-3.5％)，第一次升温，调节pH至8.5-9后，初次加入步骤(2)的活化酶，搅拌均匀后，第二次升温、酶解2h，加入猪肺浆料重量0.5-0.8‰的十二烷基磺酸钠，继续搅拌，再次加入步骤(2)的活化酶，酶解2h得到物料A；
(4)吸附、洗脱：将步骤(3)得到的物料A升温后，保温0.5h，过滤，降温后，使用阴离子交换树脂进行吸附、洗脱，得到洗脱液；
(5)沉淀、干燥：将步骤(4)的洗脱液调节pH至7-8，向其中加入洗脱液2倍体积的体积分数85％的乙醇，沉淀24h，弃去上清液，得到沉淀物，待酒精挥发后，干燥，即得。
进一步地，本发明还提供了上述的方法提取得到的肝素。
本发明所取得的技术效果是：
本发明的方法污染小、工艺相对简单，以猪肺为原料提取肝素，在提取过程中使用复合酶混合植物提取物上清液，其中含有维生素、低聚木糖等多类有效成分，能够充分促进酶活性，降低酶解所需反应条件要求，进而便于保持肺组织中的生理活性成分，促进猪肺中肝素的提取；此外，本发明活化酶制备过程中植物采用较为安全的成分，如药食同源成分，利用各成分中的有效物质，协同作用降低反应条件要求，能有效降低酶使用量，保证提取安全性的同时节约成本。
具体实施方式
以下通过特定的具体实例说明本发明的实施方式，本领域技术人员可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点与功效。本发明还可以通过另外不同的具体实施方式加以实施或应用，本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用，在没有背离本发明的精神下进行各种修饰或改变。
在进一步描述本发明具体实施方式之前，应理解，本发明的保护范围不局限于下述特定的具体实施方案；还应当理解，本发明实施例中使用的术语是为了描述特定的具体实施方案，而不是为了限制本发明的保护范围。
当实施例给出数值范围时，应理解，除非本发明另有说明，每个数值范围的两个端点以及两个端点之间任何一个数值均可选用。除非另外定义，本文中使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同意义。
值得说明的是，本发明中使用的枯草芽孢杆菌中性蛋白酶购自成都万象宏润生物科技有限公司，食品级(CAS：9068-59-1)，其余原料均为普通市售产品，因此对其来源不做具体限定。
实施例1
一种从猪肺中提取肝素的方法，包括以下步骤：
(1)预处理：将猪肺去除内外污物、脂肪和气管，浸泡1h后清洗、破碎，得到猪肺浆料；
(2)活化酶制备：将8份马齿苋、5份关山樱花、8份海带、5份野菊花、5份余甘子、3份油菜籽和3份地菍混合后，加入上述原料8倍重量的水浸泡、煎煮0.5h后，再加入上述原料5倍重量的水，继续煎煮20min，过滤，得到上清液；将重量比为2:1的上清液和复合酶(1份胰蛋白酶、1份木瓜蛋白酶、18份纤维素酶、1份果胶酶、10份淀粉酶、2份枯草芽孢杆菌中性蛋白酶、2份木聚糖酶)混合后搅拌均匀，得到酶混合物，调节pH为8.5-9后，加入体积分数为75％的乙醇、十二烷基磺酸钠(酶混合物、乙醇、十二烷基磺酸钠的重量比为15:30:5)，搅拌均匀后，静置3h，即得活化酶；
(3)酶解：将步骤(1)得到的猪肺浆料加入盐水(盐水的重量为猪肺浆料的3倍，质量分数为3.5％)，第一次升温至37℃，调节pH至8.5-9后，初次加入步骤(2)的活化酶(加入量为猪肺浆料重量的0.75‰)，搅拌均匀后，第二次升温至55℃、酶解2h，加入猪肺浆料重量0.5‰的十二烷基磺酸钠，继续搅拌，再次加入步骤(2)的活化酶(加入量为猪肺浆料重量的0.75‰)，酶解2h得到物料A；
(4)吸附、洗脱：将步骤(3)得到的物料A升温至85℃后，保温0.5h，过滤，降温至55℃后，使用阴离子交换树脂进行吸附、洗脱，得到洗脱液；
(5)沉淀、干燥：将步骤(4)的洗脱液调节pH至7-8，向其中加入洗脱液2倍体积的体积分数85％的乙醇，沉淀24h，弃去上清液，得到沉淀物，待酒精挥发后，干燥，即得。
实施例2
一种从猪肺中提取肝素的方法，包括以下步骤：
(1)预处理：将猪肺去除内外污物、脂肪和气管，浸泡1h后清洗、破碎，得到猪肺浆料；
(2)活化酶制备：将10份马齿苋、8份关山樱花、10份海带、7份野菊花、7份余甘子、6份油菜籽和6份地菍混合后，加入上述原料10倍重量的水浸泡、煎煮0.5h后，再加入上述原料7倍重量的水，继续煎煮20min，过滤，得到上清液；将重量比为2:1的上清液和复合酶(5份胰蛋白酶、3份木瓜蛋白酶、35份纤维素酶、3份果胶酶、20份淀粉酶、4份枯草芽孢杆菌中性蛋白酶、4份木聚糖酶)混合后搅拌均匀，得到酶混合物，调节pH为8.5-9后，加入体积分数为75％的乙醇、十二烷基磺酸钠(酶混合物、乙醇、十二烷基磺酸钠的重量比为18:50:8)，搅拌均匀后，静置3h，即得活化酶；
(3)酶解：将步骤(1)得到的猪肺浆料加入盐水(盐水的重量为猪肺浆料的5倍，质量分数为1.5％)，第一次升温至40℃，调节pH至8.5-9后，初次加入步骤(2)的活化酶(加入量为猪肺浆料重量的0.9‰)，搅拌均匀后，第二次升温至60℃、酶解2h，加入猪肺浆料重量0.8‰的十二烷基磺酸钠，继续搅拌，再次加入步骤(2)的活化酶(加入量为猪肺浆料重量的0.9‰)，酶解2h得到物料A；
(4)吸附、洗脱：将步骤(3)得到的物料A升温至90℃后，保温0.5h，过滤，降温至60℃后，使用阴离子交换树脂进行吸附、洗脱，得到洗脱液；
(5)沉淀、干燥：将步骤(4)的洗脱液调节pH至7-8，向其中加入洗脱液2倍体积的体积分数85％的乙醇，沉淀24h，弃去上清液，得到沉淀物，待酒精挥发后，干燥，即得。
实施例3
一种从猪肺中提取肝素的方法，包括以下步骤：
(1)预处理：将猪肺去除内外污物、脂肪和气管，浸泡1h后清洗、破碎，得到猪肺浆料；
(2)活化酶制备：将8份马齿苋、6份关山樱花、8份海带、6份野菊花、6份余甘子、5份油菜籽和5份地菍混合后，加入上述原料9倍重量的水浸泡、煎煮0.5h后，再加入上述原料6倍重量的水，继续煎煮20min，过滤，得到上清液；将重量比为2:1的上清液和复合酶(3份胰蛋白酶、2份木瓜蛋白酶、22份纤维素酶、2份果胶酶、15份淀粉酶、3份枯草芽孢杆菌中性蛋白酶、13份木聚糖酶)混合后搅拌均匀，得到酶混合物，调节pH为8.5-9后，加入体积分数为75％的乙醇、十二烷基磺酸钠(酶混合物、乙醇、十二烷基磺酸钠的重量比为16:40:7)，搅拌均匀后，静置3h，即得活化酶；
(3)酶解：将步骤(1)得到的猪肺浆料加入盐水(盐水的重量为猪肺浆料的4倍，质量分数为2％)，第一次升温至40℃，调节pH至8.5-9后，初次加入步骤(2)的活化酶(加入量为猪肺浆料重量的0.8‰)，搅拌均匀后，第二次升温至60℃、酶解2h，加入猪肺浆料重量0.6‰的十二烷基磺酸钠，继续搅拌，再次加入步骤(2)的活化酶(加入量为猪肺浆料重量的0.8‰)，酶解2h得到物料A；
(4)吸附、洗脱：将步骤(3)得到的物料A升温至90℃后，保温0.5h，过滤，降温至60℃后，使用阴离子交换树脂进行吸附、洗脱，得到洗脱液；
(5)沉淀、干燥：将步骤(4)的洗脱液调节pH至7-8，向其中加入洗脱液2倍体积的体积分数85％的乙醇，沉淀24h，弃去上清液，得到沉淀物，待酒精挥发后，干燥，即得。
对比例1
一种从猪肺中提取肝素的方法，包括以下步骤：
(1)预处理：将猪肺去除内外污物、脂肪和气管，浸泡1h后清洗、破碎，得到猪肺浆料；
(2)活化酶制备：将8份马齿苋、16份关山樱花、8份海带、6份野菊花、6份余甘子混合后，加入上述原9倍重量的水浸泡、煎煮0.5h后，再加入上述原料6倍重量的水，继续煎煮20min，过滤，得到上清液；将重量比为2:1的上清液和复合酶(3份胰蛋白酶、2份木瓜蛋白酶、22份纤维素酶、2份果胶酶、15份淀粉酶、3份枯草芽孢杆菌中性蛋白酶、13份木聚糖酶)混合后搅拌均匀，得到酶混合物，调节pH为8.5-9后，加入体积分数为75％的乙醇、十二烷基磺酸钠(酶混合物、乙醇、十二烷基磺酸钠的重量比为16:40:7)，搅拌均匀后，静置3h，即得活化酶；
(3)酶解：将步骤(1)得到的猪肺浆料加入盐水(盐水的重量为猪肺浆料的4倍，质量分数为2％)，第一次升温至40℃，调节pH至8.5-9后，初次加入步骤(2)的活化酶(加入量为猪肺浆料重量的0.8‰)，搅拌均匀后，第二次升温至60℃、酶解2h，加入猪肺浆料重量0.6‰的十二烷基磺酸钠，继续搅拌，再次加入步骤(2)的活化酶(加入量为猪肺浆料重量的0.8‰)，酶解2h得到物料A；
(4)吸附、洗脱：将步骤(3)得到的物料A升温至90℃后，保温0.5h，过滤，降温至60℃后，使用阴离子交换树脂进行吸附、洗脱，得到洗脱液；
(5)沉淀、干燥：将步骤(4)的洗脱液调节pH至7-8，向其中加入洗脱液2倍体积的体积分数85％的乙醇，沉淀24h，弃去上清液，得到沉淀物，待酒精挥发后，干燥，即得。
对比例2
一种从猪肺中提取肝素的方法，包括以下步骤：
(1)预处理：将猪肺去除内外污物、脂肪和气管，浸泡1h后清洗、破碎，得到猪肺浆料；
(2)活化酶制备：将8份马齿苋、8份海带、6份野菊花、6份余甘子、16份油菜籽混合后，加入上述原料9倍重量的水浸泡、煎煮0.5h后，再加入上述原料6倍重量的水，继续煎煮20min，过滤，得到上清液；将重量比为2:1的上清液和复合酶(3份胰蛋白酶、2份木瓜蛋白酶、22份纤维素酶、2份果胶酶、15份淀粉酶、3份枯草芽孢杆菌中性蛋白酶、13份木聚糖酶)混合后搅拌均匀，得到酶混合物，调节pH为8.5-9后，加入体积分数为75％的乙醇、十二烷基磺酸钠(酶混合物、乙醇、十二烷基磺酸钠的重量比为16:40:7)，搅拌均匀后，静置3h，即得活化酶；
(3)酶解：将步骤(1)得到的猪肺浆料加入盐水(盐水的重量为猪肺浆料的4倍，质量分数为2％)，第一次升温至40℃，调节pH至8.5-9后，初次加入步骤(2)的活化酶(加入量为猪肺浆料重量的0.8‰)，搅拌均匀后，第二次升温至60℃、酶解2h，加入猪肺浆料重量0.6‰的十二烷基磺酸钠，继续搅拌，再次加入步骤(2)的活化酶(加入量为猪肺浆料重量的0.8‰)，酶解2h得到物料A；
(4)吸附、洗脱：将步骤(3)得到的物料A升温至90℃后，保温0.5h，过滤，降温至60℃后，使用阴离子交换树脂进行吸附、洗脱，得到洗脱液；
(5)沉淀、干燥：将步骤(4)的洗脱液调节pH至7-8，向其中加入洗脱液2倍体积的体积分数85％的乙醇，沉淀24h，弃去上清液，得到沉淀物，待酒精挥发后，干燥，即得。
对比例3
一种从猪肺中提取肝素的方法，包括以下步骤：
(1)预处理：将猪肺去除内外污物、脂肪和气管，浸泡1h后清洗、破碎，得到猪肺浆料；
(2)活化酶制备：将8份马齿苋、8份海带、6份野菊花、6份余甘子、16份地菍混合后，加入上述原料9倍重量的水浸泡、煎煮0.5h后，再加入上述原料6倍重量的水，继续煎煮20min，过滤，得到上清液；将重量比为2:1的上清液和复合酶(3份胰蛋白酶、2份木瓜蛋白酶、22份纤维素酶、2份果胶酶、15份淀粉酶、3份枯草芽孢杆菌中性蛋白酶、13份木聚糖酶)混合后搅拌均匀，得到酶混合物，调节pH为8.5-9后，加入体积分数为75％的乙醇、十二烷基磺酸钠(酶混合物、乙醇、十二烷基磺酸钠的重量比为16:40:7)，搅拌均匀后，静置3h，即得活化酶；
(3)酶解：将步骤(1)得到的猪肺浆料加入盐水(盐水的重量为猪肺浆料的4倍，质量分数为2％)，第一次升温至40℃，调节pH至8.5-9后，初次加入步骤(2)的活化酶(加入量为猪肺浆料重量的0.8‰)，搅拌均匀后，第二次升温至60℃、酶解2h，加入猪肺浆料重量0.6‰的十二烷基磺酸钠，继续搅拌，再次加入步骤(2)的活化酶(加入量为猪肺浆料重量的0.8‰)，酶解2h得到物料A；
(4)吸附、洗脱：将步骤(3)得到的物料A升温至90℃后，保温0.5h，过滤，降温至60℃后，使用阴离子交换树脂进行吸附、洗脱，得到洗脱液；
(5)沉淀、干燥：将步骤(4)的洗脱液调节pH至7-8，向其中加入洗脱液2倍体积的体积分数85％的乙醇，沉淀24h，弃去上清液，得到沉淀物，待酒精挥发后，干燥，即得。
对比例4
一种从猪肺中提取肝素的方法，包括以下步骤：
(1)预处理：将猪肺去除内外污物、脂肪和气管，浸泡1h后清洗、破碎，得到猪肺浆料；
(2)活化酶制备：将8份马齿苋、6份关山樱花、8份海带、6份野菊花、6份余甘子、5份油菜籽和5份地菍混合后，加入上述原料9倍重量的水浸泡、煎煮0.5h后，再加入上述原料6倍重量的水，继续煎煮20min，过滤，得到上清液；将重量比为2:1的上清液和复合酶(3份胰蛋白酶、2份果胶酶、15份淀粉酶、3份枯草芽孢杆菌中性蛋白酶)混合后搅拌均匀，得到酶混合物，调节pH为8.5-9后，加入体积分数为75％的乙醇、十二烷基磺酸钠(酶混合物、乙醇、十二烷基磺酸钠的重量比为16:40:7)，搅拌均匀后，静置3h，即得活化酶；
(3)酶解：将步骤(1)得到的猪肺浆料加入盐水(盐水的重量为猪肺浆料的4倍，质量分数为2％)，第一次升温至40℃，调节pH至8.5-9后，初次加入步骤(2)的活化酶(加入量为猪肺浆料重量的0.8‰)，搅拌均匀后，第二次升温至60℃、酶解2h，加入猪肺浆料重量0.6‰的十二烷基磺酸钠，继续搅拌，再次加入步骤(2)的活化酶(加入量为猪肺浆料重量的0.8‰)，酶解2h得到物料A；
(4)吸附、洗脱：将步骤(3)得到的物料A升温至90℃后，保温0.5h，过滤，降温至60℃后，使用阴离子交换树脂进行吸附、洗脱，得到洗脱液；
(5)沉淀、干燥：将步骤(4)的洗脱液调节pH至7-8，向其中加入洗脱液2倍体积的体积分数85％的乙醇，沉淀24h，弃去上清液，得到沉淀物，待酒精挥发后，干燥，即得。
对比例5
一种从猪肺中提取肝素的方法，包括以下步骤：
(1)预处理：将猪肺去除内外污物、脂肪和气管，浸泡1h后清洗、破碎，得到猪肺浆料；
(2)复合酶剂制备：将重量比为2:1的去离子水和复合酶(3份胰蛋白酶、2份木瓜蛋白酶、22份纤维素酶、2份果胶酶、15份淀粉酶、3份枯草芽孢杆菌中性蛋白酶、13份木聚糖酶)混合后搅拌均匀，得到酶混合物，调节pH为8.5-9后，加入体积分数为75％的乙醇、十二烷基磺酸钠(酶混合物、乙醇、十二烷基磺酸钠的重量比为16:40:7)，搅拌均匀后，静置3h，即得复合酶剂；
(3)酶解：将步骤(1)得到的猪肺浆料加入盐水(盐水的重量为猪肺浆料的4倍，质量分数为2％)，第一次升温至40℃，调节pH至8.5-9后，初次加入步骤(2)的复合酶剂(加入量为猪肺浆料重量的0.8‰)，搅拌均匀后，第二次升温至60℃、酶解2h，加入猪肺浆料重量0.6‰的十二烷基磺酸钠，继续搅拌，再次加入步骤(2)的复合酶剂(加入量为猪肺浆料重量的0.8‰)，酶解2h得到物料A；
(4)吸附、洗脱：将步骤(3)得到的物料A升温至90℃后，保温0.5h，过滤，降温至60℃后，使用阴离子交换树脂进行吸附、洗脱，得到洗脱液；
(5)沉淀、干燥：将步骤(4)的洗脱液调节pH至7-8，向其中加入洗脱液2倍体积的体积分数85％的乙醇，沉淀24h，弃去上清液，得到沉淀物，待酒精挥发后，干燥，即得。
肝素活性及收率检测
试验1：肝素活性：现有研究表明羊血浆法与兔全血法测得的肝素效价等无显著差异，同时，羊血浆法还克服了兔全血法操作复杂、重现性差的缺陷，更为准确、简便、快速，因此，本次试验研究采用羊血浆法，具体步骤如下：
(1)向1mL血浆中加入0.8mL 0.25％氯化钠溶液，37℃保温，若5min内凝结，则该血浆可进行后续试验。
(2)标准品制备：取肝素钠标准品，使用纯水稀释至100U/mL，备用，用时稀释为7U/mL。
(3)供试品溶液制备：取各实例中制得的肝素适量，按照估计效价使用生理盐水稀释至与标准液相当效价浓度。
(4)血浆测定：向试管中各自加入梯度剂量分别为110μL、140μL、170μL、200μL、230μL的标准溶液，再加入1mL羊血浆、0.8mL 0.25％氯化钠溶液，充分混合后，37℃保温，准确记录1min，判断试管中的血液凝结程度，并以初步判定结果为中点，左右各以10μL为一级，相同方法测定，最终测定标准品的半凝点(1/2凝固点)。
血浆凝固程度判断标准详见下表：
表1血浆凝固程度判断标准
| 凝固程度 | 判断标准 |
| 完全凝固 | 溶液完全凝固，倒转管子并猛敲一下，凝块不从管壁脱落 |
| 3/4凝固 | 溶液完全凝固，但倒转管子并猛敲一下，凝块能从管壁脱落 |
| 1/2凝固 | 大约一般体积的溶液凝固 |
| 1/4凝固 | 很少溶液体积是凝固的 |
| 0凝固 | 溶液完全流动 |
(5)效价测定：向试管中分别加入梯度剂量的标准溶液和供试品溶液，以标准品的半凝点为中点，每隔10μL为一级，统计每管的凝结程度，计算效价，计算公式为：
，将结果统计至表2中。
试验2：肝素收率＝肝素成品含量/猪肺鲜重，将结果统计至表2中。
表2肝素效价及收率
| 实例 | 效价(U/mg) | 收率(g/kg肺) |
| 实施例1 | 166 | 2.5 |
| 实施例2 | 172 | 2.5 |
| 实施例3 | 179 | 2.7 |
| 对比例1 | 120 | 1.7 |
| 对比例2 | 131 | 2.0 |
| 对比例3 | 113 | 1.8 |
| 对比例4 | 106 | 1.7 |
| 对比例5 | 98 | 1.5 |
根据研究发现，本发明中肝素效价较优，可达到160U/mg以上，收率能达到2.5g/kg肺(鲜)以上。相对而言工艺未做酶活化处理，同时，不添加特定酶种或特定上清液时，相对应制备方法最终得到的肝素效价及收率均明显降低，主要是由于难以提高酶活性、不具有或极少具有相对应有效成分导致。
最后应当说明的是，以上内容仅用以说明本发明的技术方案，而非对本发明保护范围的限制，本领域的普通技术人员对本发明的技术方案进行的简单修改或者等同替换，均不脱离本发明技术方案的实质和范围。
Claims (6)
1.一种从猪肺中提取肝素的方法，其特征在于：具体为以下步骤：
（1）预处理：将猪肺去除内外污物、脂肪和气管，浸泡后清洗、破碎，得到猪肺浆料；
（2）活化酶制备：将马齿苋、关山樱花、海带、野菊花、余甘子、油菜籽和地菍混合后，加入水浸泡、煎煮、过滤，得到上清液；将上清液和复合酶混合后搅拌均匀，得到酶混合物，调节pH后，加入乙醇、十二烷基磺酸钠，搅拌均匀后，静置，即得活化酶；
（3）酶解：将步骤（1）得到的猪肺浆料加入盐水，第一次升温，调节pH后，初次加入步骤（2）的活化酶，搅拌均匀后，第二次升温、酶解，加入十二烷基磺酸钠，继续搅拌，再次加入步骤（2）的活化酶，酶解得到物料A；
（4）吸附、洗脱：将步骤（3）得到的物料A升温后保温，过滤，降温后，使用树脂进行吸附、洗脱，得到洗脱液；
（5）沉淀、干燥：将步骤（4）的洗脱液调节pH，向其中加入乙醇，沉淀，弃去上清液，得到沉淀物，待酒精挥发后，干燥，即得；
按重量份数计，步骤（2）中所述上清液的原料包括：8-10份马齿苋、5-8份关山樱花、8-10份海带、5-7份野菊花、5-7份余甘子、3-6份油菜籽和3-6份地菍；
按重量份数计，步骤（2）中所述复合酶包括1-5份胰蛋白酶、1-3份木瓜蛋白酶、18-35份纤维素酶、1-3份果胶酶、10-20份淀粉酶、2-4份枯草芽孢杆菌中性蛋白酶和2-4份木聚糖酶。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：按重量份数计，步骤（2）中所述上清液的原料包括：8份马齿苋、6份关山樱花、8份海带、6份野菊花、6份余甘子、5份油菜籽和5份地菍。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（2）中所述酶混合物、乙醇、十二烷基磺酸钠的重量比为15-18:30-50:5-8。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（3）中所述第一次升温的温度为37-40℃，第二次升温的温度为55-60℃。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（3）中所述初次加入步骤（2）的活化酶的重量与再次加入步骤（2）的活化酶的重量一致，均为猪肺浆料重量的0.75-0.9‰。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（4）中所述升温的温度为85-90℃，所述降温的温度为55-60℃。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202311005201.6A CN117327205B (zh) | 2023-08-10 | 一种从猪肺中提取肝素的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202311005201.6A CN117327205B (zh) | 2023-08-10 | 一种从猪肺中提取肝素的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN117327205A CN117327205A (zh) | 2024-01-02 |
| CN117327205B true CN117327205B (zh) | 2024-07-02 |
Family
ID=
Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102212149A (zh) * | 2011-06-15 | 2011-10-12 | 天津宝迪农业科技股份有限公司 | 利用猪肺提取肝素钠粗品的制备工艺 |
| CN103980387A (zh) * | 2014-05-26 | 2014-08-13 | 安徽科宝生物工程有限公司 | 一种生物酶法制备肝素钠的方法 |
| CN104031178A (zh) * | 2014-06-20 | 2014-09-10 | 安徽科宝生物工程有限公司 | 一种肝素钠的制备工艺 |
| CN104231115A (zh) * | 2014-10-20 | 2014-12-24 | 刘初亮 | 肺组织降解提取肝素新工艺 |
| CN104530260A (zh) * | 2014-12-10 | 2015-04-22 | 重庆都好生物科技有限公司 | 利用猪肺联产高纯度肝素钠和硫酸皮肤素的方法 |
| CN112574327A (zh) * | 2019-09-27 | 2021-03-30 | 成都祁连山生物科技股份有限公司 | 生物酶法利用猪肺制备粗品肝素钠的方法 |
| CN113980155A (zh) * | 2021-12-17 | 2022-01-28 | 揭阳市润达肠衣有限公司 | 一种提取动物肺脏中肝素的方法 |
Patent Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102212149A (zh) * | 2011-06-15 | 2011-10-12 | 天津宝迪农业科技股份有限公司 | 利用猪肺提取肝素钠粗品的制备工艺 |
| CN103980387A (zh) * | 2014-05-26 | 2014-08-13 | 安徽科宝生物工程有限公司 | 一种生物酶法制备肝素钠的方法 |
| CN104031178A (zh) * | 2014-06-20 | 2014-09-10 | 安徽科宝生物工程有限公司 | 一种肝素钠的制备工艺 |
| CN104231115A (zh) * | 2014-10-20 | 2014-12-24 | 刘初亮 | 肺组织降解提取肝素新工艺 |
| CN104530260A (zh) * | 2014-12-10 | 2015-04-22 | 重庆都好生物科技有限公司 | 利用猪肺联产高纯度肝素钠和硫酸皮肤素的方法 |
| CN112574327A (zh) * | 2019-09-27 | 2021-03-30 | 成都祁连山生物科技股份有限公司 | 生物酶法利用猪肺制备粗品肝素钠的方法 |
| CN113980155A (zh) * | 2021-12-17 | 2022-01-28 | 揭阳市润达肠衣有限公司 | 一种提取动物肺脏中肝素的方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN111793145A (zh) | 一种提高硫酸软骨素钠联产胶原蛋白肽质量与收率的工艺 | |
| US5332803A (en) | Processes for the preparation of amylase inhibitor | |
| CN101283760A (zh) | 从桃渣中提取制备膳食纤维的方法 | |
| CN106993807A (zh) | 一种生姜酵素的制备方法 | |
| CN106616163A (zh) | 一种果醋饮料的制作方法 | |
| CN107586821A (zh) | 一种肉苁蓉多肽的提取方法及用途 | |
| CN107200781B (zh) | 一种从大鲵中提取胶原蛋白的方法 | |
| CN113583904B (zh) | 胞外多聚物鞘氨醇单胞菌以及在制备高凝胶强度三赞胶中的应用 | |
| CN117327205B (zh) | 一种从猪肺中提取肝素的方法 | |
| CN110074418B (zh) | 一种海藻膳食纤维的提取方法 | |
| CN117327205A (zh) | 一种从猪肺中提取肝素的方法 | |
| CN111165750A (zh) | 一种利用发酵技术制备海参花粉剂的方法 | |
| CN113151382B (zh) | 一种用沉淀法生产小麦低聚肽的方法 | |
| CN112210022B (zh) | 一种低甲氧基山楂果胶的制备方法 | |
| CN114592024A (zh) | 一种羊胎盘多肽及其制备方法和应用 | |
| CN113694152A (zh) | 一种高稳定性酶解法获取薏苡仁提取液的方法 | |
| RU2336731C1 (ru) | Способ получения растительных пищевых волокон | |
| CN112608851A (zh) | 一种提取高山被孢霉所含油脂的方法 | |
| CN112375799A (zh) | 一种提高鲍鱼生物制品抗氧化能力的方法 | |
| CN110746284A (zh) | 一种啤酒花中β-酸同系物的提取分离方法 | |
| CN115057921B (zh) | 一种灰海马抗氧化抗疲劳活性胶原蛋白肽及规模化制备方法 | |
| CN113812583B (zh) | 一种水母提取物的制备方法 | |
| CN115044300B (zh) | 一种用牛皮生产糖果用明胶的方法 | |
| CN109053878A (zh) | 一种胶原蛋白的制备方法 | |
| KR102180261B1 (ko) | 돈육 부산물 유래 헤파린의 추출 방법 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant |