CN104224813A - 一种药物组合物及其制备方法与用途 - Google Patents

Abstract

本发明属于医药领域，公开了一种药物组合物及其制备方法与用途。本发明所述药物组合物包括曲札茋苷、去氧土大黄苷、白藜芦醇苷和土大黄苷元-3’-O-β-D-葡萄糖苷。本发明所述药物组合物对双氧水引起的神经损伤有显著的保护作用，且这种保护作用与其能够抑制iNOS的表达有关，可用于制备iNOS表达抑制剂及预防和/或治疗中枢神经系统疾病的药物。本发明药物组合物可以以拉萨大黄为原料提取得到操作简单，原料易得，反应条件温和，适合于所述药物组合物的大量制备。

Description

一种药物组合物及其制备方法与用途

技术领域

本发明属于医药领域，具体涉及一种药物组合物及其制备方法与用途，尤其是涉及所述药物组合物在制备预防和/或治疗中枢神经系统疾病的药物中的应用。

背景技术

中枢神经系统由脑和脊髓的组成(脑和脊髓是各种反射弧的中枢部分)是人体神经系统的最主体部分。中枢神经系统接受全身各处的传入信息，经它整合加工后成为协调的运动性传出，或者储存在中枢神经系统内成为学习、记忆的神经基础。人类的思维活动也是中枢神经系统的功能。因此中枢神经系统受致病因素影响发生病变，产生精神活动障碍，往往迁延不愈，给患者的工作、生活带来很大影响，致残率很高。如中枢神经系统退行性疾病、中枢神经损伤性疾病等等。

中枢神经系统退行性疾病是指一组由慢性进行性的中枢神经组织退行性变性而产生的疾病的总称，病理上可见脑和(或)脊髓发生神经元退行变性、丢失。主要疾病包括帕金森病(Parkinson’s disease,PD)、阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)、亨廷顿病(Huntington disease，HD)、肌萎缩侧索硬化症(amyotrophic lateral sclerosis，ALS)等。中枢神经系统退行性疾病的病因和发病机制尚不清楚，在众多有关假说中，兴奋毒性(excitotoxicity)、细胞凋亡(apoptosis)和氧化应激(oxidative stress)等假说受到广泛重视。随着社会发展和人口老龄化的出现，中枢神经系统退行性疾病已成为继心血管疾病和癌症之后,严重影响人类健康的第三位因素。但除PD患者通过合理用药可延长其寿命和改善其生活质量外，其他疾病的治疗效果均不理想。而中枢神经系统损伤性疾病包括缺血性脑病、出血性脑病、运动神经元疾病等，病理上表现神经细胞受损、缺失或死亡，使神经功能严重受损而导致偏瘫、失语、智力障碍或昏迷，甚至死亡，是一种严重威胁人类健康的疾病，并且迄今仍然缺乏有效的治疗手段。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种药物组合物包括曲札茋苷、去氧土大黄苷、白藜芦醇苷和土大黄苷元-3’-O-β-D-葡萄糖苷。

在一些实施方案中，本发明所述药物组合物各组分的重量百分比为：

在一些实施方案中，本发明所述药物组合物各组分的重量百分比为：

在另一些实施方案中，本发明所述药物组合物各组分的重量百分比为：

本发明的另一个目的是提供上述药物组合物的制备方法。

在一些实施方案中，上述药物组合物的制备方法，为以拉萨大黄为原料提取得到。

在一些实施方案中，上述药物组合物的制备方法中所述提取为水或乙醇回流提取，提取物过滤，收集滤液。

本发明还提供了所述以拉萨大黄为原料提取得到的药物组合物，即拉萨大黄提取物。

本发明还提供了上述药物组合物在制备iNOS表达抑制剂中的应用。

本发明的另一个目的是提供上述药物组合物在制备预防和/或治疗中枢神经系统疾病的药物中的应用。

本发明所述药物组合物包括曲札茋苷、去氧土大黄苷、白藜芦醇苷和土大黄苷元-3’-O-β-D-葡萄糖苷。本发明所述药物组合物对双氧水引起的神经损伤有显著的保护作用，且这种保护作用与其能够抑制iNOS的表达有关，可用于制备iNOS表达抑制剂及预防和/或治疗中枢神经系统疾病的药物。本发明药物组合物可以以拉萨大黄为原料提取得到操作简单，原料易得，反应条件温和，适合于所述药物组合物的大量制备。

附图说明

图1示曲札茋苷对照品色谱图，其中横坐标为横坐标是时间，单位min；纵坐标是响应值，单位是mAU；

图2示去氧土大黄苷对照品色谱图，其中横坐标为横坐标是时间，单位min；纵坐标是响应值，单位是mAU；

图3示白藜芦醇苷对照品色谱图，其中横坐标为横坐标是时间，单位min；纵坐标是响应值，单位是mAU；

图4示土大黄苷元-3’-O-β-D-葡萄糖苷对照品色谱图，其中横坐标为横坐标是时间，单位min；纵坐标是响应值，单位是mAU；

图5示实施例1制备的拉萨大黄提取物色谱图，其中横坐标为横坐标是时间，单位min；纵坐标是响应值，单位是mAU；

图6示实施例2制备的拉萨大黄提取物色谱图，其中横坐标为横坐标是时间，单位min；纵坐标是响应值，单位是mAU。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

拉萨大黄Rheum lhasaense A.J.Li et P.K.Hsiao是大黄属波叶组植物。藏族民间用草药，藏名叫曲札，以根茎晒干入药。《新修晶珠本草》中将其列为“亚大黄”，即“曲札”药材的一个习用品种，其根及根茎入药。《如意宝树》中说“亚大黄性缓，锐，化性平”。野生拉萨大黄主产于我国西藏、四川等地。申请人前期研究发现拉萨大黄中富含茋类成分，以曲札茋苷和去氧土大黄苷为主，此外还含有白藜芦醇苷和土大黄苷元-3’-O-β-D-葡萄糖苷。

因此本发明提供了一种药物组合物，包括曲札茋苷、去氧土大黄苷、白藜芦醇苷和土大黄苷元-3’-O-β-D-葡萄糖苷。

其中，所述曲札茋苷化学名为(E)-1-(3,5-二羟苯基)-2-(3-羟基-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苯基)乙烯或3,5,3',4'-四羟基茋-3'-O-β-葡萄糖苷，因其植物来源拉萨大黄根茎在藏药材中又名曲札(罗达尚主编。新修晶珠本草，四川科学技术出版社，2004)，故称该化合物为曲札茋苷，其结构如式I所示，

所述去氧土大黄苷(Deoxyrhapontin)又名脱氧土大黄苷、甲基虎杖苷，分子式为C₂₁H₂₄O₈，分子量为404.41，其结构如式II所示，

所述白藜芦醇苷(Polydatin)又名虎杖苷，化学名为3,4',5-三羟基芪(E)-5-[2-(4-羟苯基)-乙烯基]-1,3-苯二酚，分子式为C₁₄H₁₂O₃，分子量为228.24。白藜芦醇苷为白色针状结晶，难溶于冷水，能溶于热水、乙醇、乙酸乙酯、丙酮等，是植物体内一种天然的二苯乙烯类多酚物质，其结构如式III所示，

所述土大黄苷元-3’-O-β-D-葡萄糖苷,化学名为5-[(2E)-(3,5-二羟基苯基)乙烯基]-2-甲氧基苯基-1-O-β-D-吡喃葡萄糖苷，分子式为C₂₁H₂₄O₉，分子量为420。

在一些实施方案中，本发明所述药物组合物，所述各组分的重量百分比为：

进一步的，在一些具体实施例中，所述药物组合物，所述各组分的重量百分比为：

在另一些具体实施例中，所述的药物组合物，所述各组分的重量百分比为：

进一步的，申请人研究发现曲札茋苷、去氧土大黄苷、白藜芦醇苷和土大黄苷元-3’-O-β-D-葡萄糖苷4个成分为拉萨大黄的主要成分，而其他波叶组大黄提取物中不完全含有曲札茋苷、去氧土大黄苷、白藜芦醇苷和土大黄苷元-3’-O-β-D-葡萄糖苷4个成分。表明曲札茋苷、去氧土大黄苷、白藜芦醇苷和土大黄苷元-3’-O-β-D-葡萄糖苷4个成分为拉萨大黄指标性成分，以拉萨大黄为原料提取制备的提取物含有所述曲札茋苷、去氧土大黄苷、白藜芦醇苷和土大黄苷元-3’-O-β-D-葡萄糖苷4个成分。故本发明所述药物组合物可以以拉萨大黄为原料提取得到。因此本发明提供了本发明所述药物组合物的制备方法，其为以拉萨大黄为原料提取得到。

其中，所述提取可以按本领域技术人员公知的如水煎煮法、浸渍法、渗漉法、改良明胶法、回流法、溶剂提取法、水蒸气蒸馏法和升华法等方法进行。

在一些实施方案中，本发明所述药物组合物的制备方法，所述提取为回流提取。

回流提取是用易挥发的溶剂作为回流提取液提取原料成分，将浸出液加热蒸馏，其中挥发性溶剂馏出后又被冷却，重复流回浸出容器中浸提原料，这样周而复始，直至有效成分回流提取完全的方法。其中所述回流提取液可以为本领域技术人员公知的如水、乙醇、甲醇、丙酮等溶剂。

在一些实施方案中，本发明所述药物组合物的制备方法，所述提取为回流提取，所述回流提取液为水或乙醇。

提取后需要对提取物进行过滤，收集滤液得提取液。

在一些实施方案中，本发明所述药物组合物的制备方法，还将收集的滤液减压浓缩至干，加水100ml溶解静置过夜取上清液得提取液。

进一步的，在一些实施方案中，本发明所述药物组合物的制备方法，还包括提取液纯化的步骤。

所述纯化可以按本领域技术人员公知的如色谱分离法等方法进行。其中所述色谱分离法可以为凝胶过滤、离子交换色谱、吸附色谱、亲和色谱等方法。

在一些实施方案中，本发明所述药物组合物的制备方法，所述纯化为吸附色谱吸附。

进一步的，在一些具体实施例中，所述纯化具体为大孔吸附树脂吸附。

大孔吸附树脂是一类不含交换基团且有大孔结构的高分子吸附树脂，具有良好的大孔网状结构和较大的比表面积，可以通过物理吸附从水溶液中有选择地吸附有机物。大孔吸附树脂有非极性、弱极性、极性之分。

作为优选，本发明所述制备方法，所述纯化为非极性大孔吸附树脂吸附。如HPD-100大孔吸附树脂、HPD-300大孔吸附树脂、D-101大孔吸附树脂、X-5大孔吸附树脂或H103大孔吸附树脂。

在一些具体实施例中，本发明所述制备方法，所述提取液纯化具体为提取液通过大孔吸附树脂，之后依次用水、50％乙醇-水溶液洗脱，收集50％乙醇-水洗脱液，过滤，收集滤液即得。

其中所述大孔吸附树脂在使用前还需要对大孔吸附树脂进行预处理。所述预处理可以按本领域技术人员公知的方法进行。

在一些实施例中所述预处理的方法为大孔吸附树脂经乙醇浸泡24h，用乙醇洗至流出液不浑浊，用水洗至无醇味，5％HCl通过树脂柱浸泡2-4h，水洗至中性，2％NaOH通过树脂柱浸泡2-4h，水洗至中性，备用。

本发明还提供了上述制备方法制备得到的药物组合物，即以拉萨大黄为原料提取得到的药物组合物。

由于其他波叶组大黄提取物中不完全含有曲札茋苷、去氧土大黄苷、白藜芦醇苷和土大黄苷元-3’-O-β-D-葡萄糖苷4个成分，申请人将拉萨大黄提取的含有曲札茋苷、去氧土大黄苷、白藜芦醇苷和土大黄苷元-3’-O-β-D-葡萄糖苷4个成分的提取物命名为拉萨大黄提取物或拉萨大黄标准提取物(以下称拉萨大黄提取物)。

本发明还提供了一种拉萨大黄提取物，包括曲札茋苷、去氧土大黄苷、白藜芦醇苷和土大黄苷元-3’-O-β-D-葡萄糖苷。本发明所述拉萨大黄提取物成分明确，质量可控。

其中，在一些实施方案中，所述拉萨大黄提取物各组分的重量百分比为：

进一步的，在一些具体实施例中，所述拉萨大黄提取物各组分的重量百分比为：

在另一些具体实施例中，所述拉萨大黄提取物各组分的重量百分比为：

本发明所述药物组合物除了可以以拉萨大黄为原料提取得到外，还可以以其它方法得到。如以曲札茋苷、去氧土大黄苷、白藜芦醇苷和土大黄苷元-3’-O-β-D-葡萄糖苷为原料混合得到。

因此，本发明还提供了本发明所述药物组合物的制备方法，其为以曲札茋苷、去氧土大黄苷、白藜芦醇苷和土大黄苷元-3’-O-β-D-葡萄糖苷为原料混合得到。

其中，在一些实施例中，所述混合为各组分按如下重量份数混合：

进一步的，在一些具体实施例中，本发明所述药物组合物以曲札茋苷、去氧土大黄苷、白藜芦醇苷和土大黄苷元-3’-O-β-D-葡萄糖苷为原料，按如下重量份数混合得到：

在另一些具体实施例中，本发明所述药物组合物以曲札茋苷、去氧土大黄苷、白藜芦醇苷和土大黄苷元-3’-O-β-D-葡萄糖苷为原料，按如下重量份数混合得到：

一氧化氮(NO)的发现始于血管内皮舒张因子(EDRF)，研究发现NO可作为传递信息的化学物质，在中枢神经系统，NO具有调节递质释放和受体功能、参与学习和记忆形成、参与行为调节、参与痛觉调制、调节脑血流量，清除氧自由基及神经毒性作用。正常时NO接到突触信息传递，但大量NO产生则具有神经毒性作用。病理状态下过多的O₂ ^-与NO可生成ONOO^-和NO₂ ^-，ONOO^-可转变成细胞毒羟自由基，引起蛋白质、核酸及脂质膜的破坏，从而增强血管细胞炎症性损伤及对神经元产生毒性作用。如脑缺血、感染、免疫反应、炎症等刺激NO生成增加，造成或加重神经元的损伤和死亡。近年也有研究表明，神经退行性疾病如阿尔茨海默症、帕金森氏综合症等的病理变化均与NO的诱生增加存在密切关系。

NO的生物合成受多个环节的调节，包括底物和一氧化氮合酶(NOS)，其中NOS为调节体内NO合成的限速酶。根据NOS的性质、结构和对钙的依赖性不同，NOS可分为原生型NOS(cNOS)和诱生型NOS(iNOS)，cNOS又包括内皮型NOS(eNOS)和神经源性NOS(nNOS)。

在一具体实施方案中，本发明通过MTT法检测不同给药组的S-D大鼠皮层神经元经双氧水处理后的细胞存活率(％)，结果显示给予0.5mM的双氧水可引起神经元一定程度的损伤，但给予了本发明所述药物组合物(25μg/ml和50μg/ml)的处理组细胞存活率明显提高，表明本发明所述药物组合物对双氧水引起的神经损伤有显著的保护作用。

在另一具体实施方案中，检测不同给药组的S-D大鼠皮层神经元经双氧水处理后其中的诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达情况，结果显示给予0.5mM的双氧水后iNOS的表达明显增加，但给予了本发明所述药物组合物(25μg/ml和50μg/ml)的处理组iNOS阳性细胞数明显降低，显著抑制iNOS的表达，表明本发明所述药物组合物对双氧水引起的神经损伤的保护作用与其能够抑制iNOS的表达有关。

因此本发明提供了本发明所述药物组合物在制备iNOS表达抑制剂中的应用。

进一步的，由于本发明所述药物组合物能够通过抑制一氧化氮合酶的活性而降低神经细胞元损伤，保护神经元细胞生长及存活。因此本发明提供了本发明所述药物组合物在制备预防和/或治疗中枢神经系统疾病的药物中的应用。

本发明还提供所述拉萨大黄提取物在制备iNOS表达抑制剂中的应用。

同时本发明还提供了所述拉萨大黄提取物在制备预防和/或治疗中枢神经系统疾病的药物中的应用。

其中，所述中枢神经系统疾病为中枢神经系统退行性疾病或中枢神经系统损伤性疾病。

本发明还提供了一种药物制剂，包括有效量的所述药物组合物或所述拉萨大黄提取物。

本领域技术人员可将本发明所述药物组合物或所述拉萨大黄提取物直接或间接加入制备不同剂型时所需的药学上可接受的，如填充剂、崩解剂、润滑剂、粘合剂等常用辅料，以常规药物制剂方法，制成如片剂、胶囊剂、注射液、口服液、颗粒剂、丸剂、散剂和滴丸剂等常用制剂。其中，所述填充剂、崩解剂、润滑剂、粘合剂等常用辅料可以选用本领域技术人员公知的辅料物质。如填充剂可以为淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸中的一种或两种以上；崩解剂可以为琼脂、碳酸钙、土豆淀粉或木薯淀粉、海藻酸、某些硅酸盐和碳酸钠、低取代羟丙基纤维素中的一种或两种以上；润滑剂可以为滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂硫酸钠中的一种或两种以上；粘合剂可以为羧甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯酮、蔗糖和阿拉伯胶中的一种或两种以上。

在一些实施方案中，本发明所述药物制剂为注射液、冻干粉针剂、片剂、胶囊剂或颗粒剂。

下面结合具体实施例对本发明进行详细阐述。

实施例1、

取拉萨大黄药材100g，加入800ml水，回流提取，过滤，滤液通过预先用水平衡好的大孔树脂柱(D101型大孔树脂，装柱1Kg)，依次用水、50％乙醇-水溶液洗脱，收集50％乙醇-水洗脱液，过滤，滤液减压回收溶剂至干，研成细粉，得拉萨大黄提取物12g，编号为20130401。

实施例2、

取拉萨大黄药材100g，加入800ml95％乙醇，回流提取，过滤，滤液减压浓缩至干，加水100ml溶解静置过夜，取上清液通过预先用水平衡好的大孔树脂柱(D101型大孔树脂，装柱1Kg)，依次用水、50％乙醇-水溶液洗脱，收集50％乙醇-水洗脱液，过滤，滤液减压回收溶剂至干，研成细粉，得拉萨大黄提取物10.2g，编号为20130402。

实施例3、

取4.34g曲札茋苷、4.26g去氧土大黄苷、0.85g白藜芦醇苷和0.16g土大黄苷元-3’-O-β-D-葡萄糖苷混合得药物组合物9.61g，编号为20130403。

实施例4、

取7.43g曲札茋苷、18.6g去氧土大黄苷、3.8g白藜芦醇苷和0.2g土大黄苷元-3’-O-β-D-葡萄糖苷混合得药物组合物9.69g，编号为20130404。

实施例5、含量测定

分别取实施例1和实施例2制备的拉萨大黄提取物(编号20130401、20130402)适量，分别测定曲札茋苷、去氧土大黄苷、白藜芦醇苷和土大黄苷元-3’-O-β-D-葡萄糖苷的含量。

其中所述曲札茋苷、去氧土大黄苷、白藜芦醇苷、土大黄苷元-3’-O-β-D-葡萄糖苷对照品购自昆药制药集团股份有限公司，经面积归一法检测含量均大于98％，色谱图见图1-4。

色谱条件：色谱柱以碳十八烷基键合硅胶为填充剂；(2)流动相为乙腈-0.1％磷酸水溶液(15：85)进行梯度洗脱；(3)检测波长319nm，柱温30℃，流速1.0ml/min，进样体积10μl。

检测色谱图见图5和6，统计结果见表1

表1、拉萨大黄提取物含量测定结果

实施例6、对双氧水引起的神经元损伤模型的影响

1、实验材料

1.1受试样品

实施例1制备得到的拉萨大黄提取物，编号为20130401；

实施例2制备得到的拉萨大黄提取物，编号为20130402；

实施例3制备得到的药物组合物，编号为20130403；

实施例4制备得到的药物组合物，编号为20130404。

配制：称取适量上述样品后，加入0.01M PBS至所需体积，经0.2μm滤器过滤除菌后，得高剂量药物(1mg/ml)；按一定比例以PBS进行相应稀释，分别得各剂量药物。

1.2阳性对照品1

名称：尼莫地平

来源：Sigma

批号：SLBB1165V

性状：黄色粉末

配制：称取适量尼莫地平加入DMSO至所需体积(3mg/ml)；后经0.2μm滤器过滤除菌，按一定比例以PBS进行相应稀释，得所需剂量药物。

1.3阴性对照品

名称：无菌PBS

来源：武汉Boster生物技术有限公司

批号：S17B21

规格：500ml/瓶

性状：无色液体

1.4实验动物

品系：S-D大鼠

来源：上海西普尔-必凯实验动物有限公司

性别：雌雄不限

年龄：出生后1天

动物合格证号：SCXK(沪)2008-0016

1.5实验仪器

全自动酶标仪，Labsystem Dragon公司生产；CO₂培养箱，德国Heaeus公司生产；真空泵(GL-802型)，海门市其林贝尔仪器制造有限公司生产；倒置相差显微镜，Metrio公司生产。

1.6其它试剂

双氧水：Sigma公司生产，批号：131K2176；

DMEM培养液：Corning Cellgro生产，批号：R10013577；

D-Hanks缓冲液：武汉Boster生物技术有限公司生产，批号：08H16B75

L-多聚赖氨酸：Sigma公司生产，批号：931R366V；

L-Glutamax：Gibco公司生产，批号：1184649；

Neurobasal培养液：Gibco公司生产，批号：1158267；

B27添加剂：Gibco公司生产，批号：1153933

胎牛血清：上海普飞生物技术有限公司，批号：11A2375；

青-链霉素：武汉Boster生物技术有限公司生产，批号：05E10A16；

四氮唑蓝(MTT)：Sigma公司生产，批号：67R338V；

2.实验方法

皮层神经元培养

在超净台中，无菌条件下将出生后1天的S-D乳鼠断头取脑，用弯镊将双侧皮层收集于冰冷Hanks液中。仔细去除脑膜、血管等组织，并用虹膜剪剪碎组织至1mm³大小，加入适量胰酶(0.125％)，37℃消化20min，弃胰酶，并加全培液(含10％血清的DMEM液)作用5min，以终止胰酶的作用。800rpm离心5min后弃上清并加入1ml种植培养液，经75μm滤膜过滤后，计数重悬，制成密度均一的单细胞悬液(1-2x10⁵个/ml)，接种于预先用多聚赖氨酸包被的96孔板中，每孔200μl，置于37℃，5％CO₂的恒温培养箱内培养，24h后换以维持培养液(96％Neurobasal+2％B27+1％GlutaMAX+1％青-链霉素)继续培养，后每隔3天换液一次。

双氧水处理

培养至第10天的神经元，分为正常对照组，模型组(双氧水处理)，给药组以及阳性对照组(正常对照组不给药、不经双氧水处理，模型组给阴性对照品后经双氧水处理)。神经元预先给药孵育1h，之后加双氧水处理24h(终浓度0.5mM)，24h后做MTT分析。

所有数据用均值±标准差表示，统计学分析用方差分析进行，组间多重比较用student’s Newman-Keuls检验进行分析。

3.实验结果

各样品对双氧水引起的神经元损伤模型的影响结果见表2。

表2.各样品对双氧水引起的神经元损伤模型的影响

注：N试验重复次数；^*为与正常组比较，^*P<0.05；^#为与模型组比较，^##P<0.01。

由表2结果可见，给予0.5mM的双氧水可引起神经元一定程度的损伤，而25μg/ml实施例1和实施例2制备的拉萨大黄提取物、50μg/ml实施例1和实施例2制备的拉萨大黄提取物均对双氧水引起的神经损伤有显著的保护作用。

实施例7、对双氧水引起的神经元损伤模型中iNOS表达的影响

在上述实施例6的实验结果的基础上，通过免疫组化法(诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)免疫组化试剂盒，雅吉生物)观察双氧水处理后诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达情况以及给药处理对其可能的影响。

表3.对双氧水引起的神经元细胞损伤模型中iNOS的表达的影响

注：N为试验重复次数；^*为与正常组比较，^**P<0.01；^#为与模型组比较，^#P<0.05，^##P<0.01。

由表3结果可见，双氧水处理后明显增加了iNOS的表达，而25μg/ml实施例1和实施例2制备的拉萨大黄提取物、50μg/ml实施例1和实施例2制备的拉萨大黄提取物均能够显著抑制iNOS的表达。表明拉萨大黄的提取物是通过抑制iNOS的表达以保护神经元。

实施例8、

取实施例1制备得到的拉萨大黄提取物(20130401)，加适量注射用水溶解，超滤，灌装，灭菌，制成注射用注射剂。

实施例9、

取实施例2制备得到的拉萨大黄提取物(20130402)，加适量注射用水溶解，过滤，灌装，冷冻干燥，制成注射用冻干粉针剂。

实施例10、

取实施例3制备得到的药物组合物(20130403)，根据常规制剂方法制备成片剂。

实施例11、拉萨大黄标准提取物胶囊剂的制备

取实施例4制备得到的药物组合物(20130404)，根据常规制剂方法制备成片胶囊剂。

实施例12、拉萨大黄标准提取物颗粒剂的制备

取实施例1制备得到的拉萨大黄提取物(20130401)，根据常规制剂方法制备成颗粒剂。

Claims (10)

1.一种药物组合物，包括曲札茋苷、去氧土大黄苷、白藜芦醇苷和土大黄苷元-3’-O-β-D-葡萄糖苷。

2.根据权利要求1所述的药物组合物，所述各组分的重量百分比为：

3.根据权利要求1所述的药物组合物，所述各组分的重量百分比为：

4.根据权利要求1所述的药物组合物，所述各组分的重量百分比为：

5.权利要求1-4任意一项所述药物组合物的制备方法，以拉萨大黄为原料提取得到。

6.根据权利要求5所述的制备方法，所述提取为水或乙醇回流提取，提取物过滤，收集滤液。

7.权利要求5或6所述制备方法得到的药物组合物。

8.权利要求1-4及权利要求7任意一项所述药物组合物在制备iNOS表达抑制剂中的应用。

9.权利要求1-4及权利要求7任意一项所述药物组合物在制备预防和/或治疗中枢神经系统疾病的药物中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，所述中枢神经系统疾病为中枢神经系统退行性疾病或中枢神经系统损伤性疾病。