CN104221709B - 一种金针菇菌种的生产方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种金针菇菌种的生产方法，其技术方案的要点是包括以下步骤：选取母体菇种、制备斜面培养基、制备一次性培养基、制备摇瓶培养基、培养液体初培养菌种、菌种培养桶培养菌种。以金针菇为接种菌株，采用无菌培养技术，所得菌种发芽率高，出产的金针菇杆部更直外观颜色更白，口感更好。
Description
【技术领域】
本发明涉及一种金针菇菌种的生产方法。
【背景技术】
金针菇学名毛柄金钱菌，又称毛柄小火菇、朴菇、冬菇、冻菌、金菇、智力菇等。因其菌柄细长，似金针菜，故称金针菇，属伞菌目白蘑科金针菇属，是一种菌藻地衣类。金针菇具有很高的药用食疗价值。金针菇是秋冬与早春栽培的食用菌，以其菌盖滑嫩、柄脆、营养丰富、味美适口而著称于世，特别是凉拌菜和火锅的上好食材，其营养丰富，清香扑鼻而且味道鲜美，深受大众的喜爱。据测定，金针菇氨基酸的含量非常丰富，高于一般菇类，尤其是赖氨酸的含量特别高，赖氨酸具有促进儿童智力发育的功能。金针菇干品中含蛋白质8.87％，碳水化合物60.2％，粗纤维达7.4％，经常食用可防治溃疡病。有研究又表明，金针菇内所含的一种物质具有很好的抗癌作用。
金针菇大量生产，常出现杂菌污染等导致减产，特别是大量培养菌种过程中，存在发芽率低的情况，严重影响经济效益。
【发明内容】
本发明目的是提供一种金针菇菌种的生产方法，以金针菇为接种菌株，采用无菌培养技术，所得菌种发芽率高，出产的金针菇杆部更直外观颜色更白，口感更好。
本发明为了实现上述目的，采用以下技术方案：
一种金针菇菌种的生产方法，其特征在于包括以下步骤：选取母体菇种、制备斜面培养基、制备一次性培养基、制备摇瓶培养基、培养液体初培养菌种、菌种培养桶培养菌种。
所述步骤具体如下：
A:选取母体菇种
选择六～八成熟的金针菇，于2～4℃条件存放2天，水分减至40～50％，分离出杆部得母体菇种；
B:制备斜面培养基
按照质量百分比将PDA培养基3.5～4％、磷酸二氢钾0.05～0.08％、MgSO4·5H2O 0.05～0.08％、蛋白胨0.1～0.15％、pH6.5～7的蒸馏水余量的混合物加入试管中，混匀后于122～123℃条件，灭菌20～25min，灭菌后降温至96～98℃取出试管，摆成斜面，制得斜面培养基；
C:制备一次性培养基
按照质量百分比将PDA培养基3.5～4％，pH6.5～7的蒸馏水余量的混合物加入三角瓶中混匀，混匀后于122～123℃条件，灭菌30～35min，灭菌后降温至96～98℃取出三角瓶，将三角瓶放入超净工作台中，冷却至60℃以下，将三角瓶内的培养基，再倒入一次性培养皿中，待降至室温，制得一次性培养基；
D：制备摇瓶培养基
按照质量百分比将白糖2～2.3％、磷酸二氢钾0.2～0.23％、MgSO4·5H2O 0.02～0.023％、蛋白胨0.02～0.023％、pH为6.5～7的蒸馏水余量的混合物配置加入三角瓶中，混匀后用锡纸将瓶口塞住，于122～123℃条件，灭菌40～45min，灭菌后将三角瓶降温至96～98℃取出，再放入超净工作台中冷却至60℃以下，制备得摇瓶培养基；
E:培养液体初培养菌种
(1)选取制备好的母体菇种，接种到制备好的斜面培养基培养，条件：20～22℃，5～6天，待斜面菌丝长满，即得到母种A；
(2)取用母种A，接种到制备好的一次性培养基培养，条件：20～22℃，6～7天，待菌丝长满培养皿，即得到母种B；
(3)取用母种B，将母种B外表面的菌丝皮割掉，将下方的接种培养基再次接种到制备好的一次性培养基中培养，条件：20～22℃，6～7天，待菌丝长满培养皿后，即得到母种C；
(4)取用母种C，将母种C菌块去掉表皮，接种到摇瓶培养基中，之后将摇瓶培养基连同三角瓶一同移到摇床中，18～20℃条件，转速为110-120r/min，培养8～10天，即得液体初培养菌种；
F:菌种培养桶培养菌种
(1)菌种培养桶的配置，按照质量百分比将白糖3～3.5％、磷酸二氢钾0.3～0.35％、MgSO4·5H2O 0.05～0.06％、消泡剂0.02～0.025％、pH为6.5～7的软化过滤水余量的混合物加入菌种培养桶，混匀后将菌种培养桶密封并移入菌包灭菌柜中灭菌，100℃保温60min，123℃灭菌120min，再密闭放置30min，冷却至96～98℃打开灭菌柜门，将菌种培养桶移至冷却室冷却，冷却时菌种培养桶内通入0.075～0.08mpa无菌的空气，菌种培养桶的桶壁用循环水冷却，直至菌种培养桶冷却到18～20℃；
(2)将三角瓶内的液体初培养菌种，用自动搅拌器搅拌，搅拌器转速4000～5000r/min，搅拌停止后，在火焰保护下，由菌种培养桶专用接种口倒入并培养，通入0.075～0.08mpa的无菌空气，16～18℃，培养5～6天，得金针菇菌种。
所述自动搅拌器的搅拌棒为不锈钢圆柱状的可拆卸式结构，在搅拌使用前需在灭菌锅中灭菌处理，灭菌条件为122～123℃，50min，后放入超净工作台冷却到18～20℃，灭菌期间需用锡纸包裹搅拌棒，待灭菌完成后装入搅拌器前拆下锡纸包装，搅拌作业时将搅拌棒直接插入三角瓶中进行搅拌，搅拌的过程时间控制为：a、搅拌：4S，b、停止：2S，c、搅拌：15S，d、停止：2S，e、搅拌：2S后停止。
所述培养液体初培养菌种时取用母种C，一次取用母种C的菌块4～6块，大小为横截面积为4～6mm2的圆柱形。
所述制备一次性培养基时，所使用的一次性培养皿降至室温步骤：将一次性培养皿上盖掀开，经超净工作台的上吹风冷却，待上盖完全无水雾时，将上盖盖上，从培养皿的正反两面观察目视为透明的，无任何其他的杂物存在即可。
所述摇瓶培养基接种到菌种培养桶后，在培养过程中的第三天与第五天，分别需用LB培养基检查培养测试其发育状况。
所述LB培养基的配置，是按照质量百分比将LB琼脂培养基3.5～4％，pH为6.5～7的蒸馏水余量混合加入三角瓶，于122～123℃，灭菌30～35min，灭菌降温至96～98℃取出三角瓶，再放入超净工作台中冷却至60℃以下，后将三角瓶内的培养基，倒入一次性培养皿中，待一次性培养皿降至室温，即得LB培养基。
本发明与现有技术相比，有如下优点：
本发明提供一种金针菇菌种的生产方法，采用独特的培养基配比组合，且菌种培养过程中经过斜面培养基，一次性培养基和摇瓶培养基的多次无菌培养，所得菌种无污染，发芽率高。
所用的自动搅拌器，采用可拆卸式搅拌棒，短时高速搅拌，搅拌混合效果好，且因时间短菌种不易污染。
采用大容量的菌种培养桶进行扩大培养，效率更高，提高了发芽率的同时，提高了产能，有效控制成本，使用本菌种，一般条件下发芽率保证在90％以上，所培育出的金针菇产品，单瓶(1100ml)单产高出同类菌种单产30～50克，产能效率极大提高。
【具体实施方式】
以下实施例中的金针菇，是选用本公司自产菌种发芽得的金针菇。
实施例1：
A:选取母体菇种
选择八成熟的金针菇，于2℃条件存放2天，水分减至40％，抽真空后分离出杆部得母体菇种；(抽真空后更易分离)；
B:制备斜面培养基
按照质量百分比将PDA培养基3.5％、磷酸二氢钾0.05％、MgSO4·5H2O 0.05％、蛋白胨0.1％、pH 6.5的蒸馏水余量的混合物加入试管中，保持混合物pH为6.1，混匀后于122℃条件，灭菌20min，灭菌后降温至96℃取出试管，摆成斜面，制得斜面培养基；制得的培养基需做无菌检验，将制得的培养基转移至30℃的培养箱中10h，无菌落长出可备用；
C:制备一次性培养基
按照质量百分比将PDA培养基3.5％，pH6.5的蒸馏水余量的混合物加入三角瓶中混匀，保持混合物pH为6.1，混匀后于122℃条件，灭菌30min，灭菌后降温至96℃取出三角瓶，将三角瓶放入超净工作台中，冷却至60℃以下，将三角瓶内的培养基，再倒入一次性培养皿中，每个倒入15ml，所使用的一次性培养皿降至室温步骤：将一次性培养皿上盖掀开，经超净工作台的上吹风冷却，待上盖完全无水雾时，将上盖盖上，从培养皿的正反两面观察目视为透明的，无任何其他的杂物存在即可，制得一次性培养基；制得的培养基需做无菌检验，将制得的培养基转移至30℃的培养箱中10h，无菌落长出可备用；
D：制备摇瓶培养基
按照质量百分比将白糖2％、磷酸二氢钾0.2％、MgSO4·5H2O0.02％、蛋白胨0.02％、pH为6.5的蒸馏水余量的混合物配置加入三角瓶中，保持混合物pH为5.8，混匀后用锡纸将瓶口塞住，于122℃条件，灭菌40min，灭菌后将三角瓶降温至96℃取出，再放入超净工作台中冷却至60℃以下，制备得摇瓶培养基；制得的培养基需做无菌检验，将制得的培养基转移至30℃的培养箱中10h，无菌落长出可备用；
E:培养液体初培养菌种
(1)将选取的母体菇种0.3克，接种到制备好的斜面培养基培养，条件：20℃，5天，待斜面菌丝长满，即得到母种A；
(2)取用母种A，接种到制备好的一次性培养基培养，条件：20℃，6天，待菌丝长满培养皿，即得到母种B；
(3)取用母种B，将母种B外表面的菌丝皮割掉，将下方的接种培养基再次接种到制备好的一次性培养基中培养，条件：20℃，6天，待菌丝长满培养皿后，即得到母种C；
(4)一次取用母种C大小为横截面积为4mm2的圆柱形的菌块6块，去掉表皮，接种到摇瓶培养基中，之后将摇瓶培养基连同三角瓶一同移到摇床中，18℃条件，转速为110r/min，培养8天，即得液体初培养菌种；
F:菌种培养桶培养菌种
(1)菌种培养桶的配置，按照质量百分比将白糖3％、磷酸二氢钾0.3％、MgSO4·5H2O 0.05％、消泡剂0.02％、pH为6.5的软化过滤水余量的混合物加入菌种培养桶，保持混合物pH为6.5，混匀后将菌种培养桶密封并移入菌包灭菌柜中灭菌，100℃保温60min，123℃灭菌120min，再密闭放置30min，冷却至96℃打开灭菌柜门，将菌种培养桶移至冷却室冷却，冷却时菌种培养桶内通入0.075mpa无菌的空气，菌种培养桶的桶壁用循环水冷却，直至菌种培养桶冷却到18℃；
(2)将三角瓶内培养好的液体初培养菌种，用自动搅拌器搅拌，搅拌器转速4000r/min，搅拌的过程时间控制为：a、搅拌：4S，b、停止：2S，c、搅拌：15S，d、停止：2S，e、搅拌：2S，搅拌停止后，在火焰保护下，由菌种培养桶专用接种口倒入并培养，通入0.075mpa的无菌空气，16℃，培养5天，在培养过程中的第三天与第五天，分别需用LB培养基检查培养测试其发育状况，得金针菇菌种。
LB培养基的配置，是按照质量百分比将LB琼脂培养基3.5％，pH为6.5的蒸馏水余量混合加入三角瓶，保持混合物pH为6.5，于122℃，灭菌30min，灭菌降温至96℃取出三角瓶，再放入超净工作台中冷却至60℃以下，后将三角瓶内的培养基，倒入一次性培养皿中，每个倒入10ml，待一次性培养皿降至室温，即得LB培养基。
实施例2：
A:选取母体菇种
选择七成熟的金针菇，于3℃条件存放2天，水分减至45％，抽真空后分离出杆部得母体菇种；(抽真空后更易分离)；
B:制备斜面培养基
按照质量百分比将PDA培养基3.8％、磷酸二氢钾0.06％、MgSO4·5H2O 0.06％、蛋白胨0.13％、pH 6.8的蒸馏水余量的混合物加入试管中，保持混合物pH为6.2，混匀后于122℃条件，灭菌22min，灭菌后降温至97℃取出试管，摆成斜面，制得斜面培养基；制得的培养基需做无菌检验，将制得的培养基转移至32℃的培养箱中11h，无菌落长出可备用；
C:制备一次性培养基
按照质量百分比将PDA培养基3.8％，pH6.7的蒸馏水余量的混合物加入三角瓶中混匀，保持混合物pH为6.2，混匀后于122℃条件，灭菌33min，灭菌后降温至97℃取出三角瓶，将三角瓶放入超净工作台中，冷却至60℃以下，将三角瓶内的培养基，再倒入一次性培养皿中，每个倒入18ml，所使用的一次性培养皿降至室温步骤：将一次性培养皿上盖掀开，经超净工作台的上吹风冷却，待上盖完全无水雾时，将上盖盖上，从培养皿的正反两面观察目视为透明的，无任何其他的杂物存在即可，制得一次性培养基；制得的培养基需做无菌检验，将制得的培养基转移至32℃的培养箱中11h，无菌落长出可备用；
D：制备摇瓶培养基
按照质量百分比将白糖2.2％、磷酸二氢钾0.21％、MgSO4·5H2O 0.021％、蛋白胨0.021％、pH为6.7的蒸馏水余量的混合物配置加入三角瓶中，保持混合物pH为5.9，混匀后用锡纸将瓶口塞住，于122℃条件，灭菌40min，灭菌后将三角瓶降温至96℃取出，再放入超净工作台中冷却至60℃以下，制备得摇瓶培养基；制得的培养基需做无菌检验，将制得的培养基转移至32℃的培养箱中11h，无菌落长出可备用；
E:培养液体初培养菌种
(1)将选取的母体菇0.5克，接种到制备好的斜面培养基培养，条件：21℃，5天，待斜面菌丝长满，即得到母种A；
(2)取用母种A，接种到制备好的一次性培养基培养，条件：21℃，6天，待菌丝长满培养皿，即得到母种B；
(3)取用母种B，将母种B外表面的菌丝皮割掉，将下方的接种培养基再次接种到制备好的一次性培养基中培养，条件：21℃，7天，待菌丝长满培养皿后，即得到母种C；
(4)一次取用母种C大小为横截面积为5mm2的圆柱形的菌块5块，去掉表皮，接种到摇瓶培养基中，之后将摇瓶培养基连同三角瓶一同移到摇床中，19℃条件，转速为115r/min，培养9天，即得液体初培养菌种；
F:菌种培养桶培养菌种
(1)菌种培养桶的配置，按照质量百分比将白糖3.3％、磷酸二氢钾0.33％、MgSO4·5H2O 0.05％、消泡剂0.023％、pH为6.7的软化过滤水余量的混合物加入菌种培养桶，保持混合物pH为6.7，混匀后将菌种培养桶密封并移入菌包灭菌柜中灭菌，100℃保温60min，123℃灭菌120min，再密闭放置30min，冷却至97℃打开灭菌柜门，将菌种培养桶移至冷却室冷却，冷却时菌种培养桶内通入0.078mpa无菌的空气，菌种培养桶的桶壁用循环水冷却，直至菌种培养桶冷却到19℃；
(2)将三角瓶内培养好的液体初培养菌种，用自动搅拌器搅拌，搅拌器转速4500r/min，搅拌的过程时间控制为：a、搅拌：4S，b、停止：2S，c、搅拌：15S，d、停止：2S，e、搅拌：2S，搅拌停止后，在火焰保护下，由菌种培养桶专用接种口倒入并培养，通入0.078mpa的无菌空气，16℃，培养5天，在培养过程中的第三天与第五天，分别需用LB培养基检查培养测试其发育状况，得金针菇菌种。
LB培养基的配置，是按照质量百分比将LB琼脂培养基3.7％，pH为6.7的蒸馏水余量混合加入三角瓶，保持混合物pH为6.7，于123℃，灭菌33min，灭菌降温至97℃取出三角瓶，再放入超净工作台中冷却至60℃以下，后将三角瓶内的培养基，倒入一次性培养皿中，每个倒入13ml，待一次性培养皿降至室温，即得LB培养基。
实施例3：
A:选取母体菇种
选择六成熟的金针菇，于4℃条件存放2天，水分减至50％，抽真空后分离出杆部得母体菇种；(抽真空后更易分离)；
B:制备斜面培养基
按照质量百分比将PDA培养基4％、磷酸二氢钾0.08％、MgSO4·5H2O 0.08％、蛋白胨0.15％、pH 7的蒸馏水余量的混合物加入试管中，保持混合物pH为6.3，混匀后于123℃条件，灭菌25min，灭菌后降温至98℃取出试管，摆成斜面，制得斜面培养基；制得的培养基需做无菌检验，将制得的培养基转移至35℃的培养箱中12h，无菌落长出可备用；
C:制备一次性培养基
按照质量百分比将PDA培养基4％，pH7的蒸馏水余量的混合物混合加入三角瓶中混匀，保持混合物pH为6.3，混匀后于123℃条件，灭菌35min，灭菌后降温至98℃取出三角瓶，将三角瓶放入超净工作台中，冷却至60℃以下，将三角瓶内的培养基，再倒入一次性培养皿中，每个倒入20ml，所使用的一次性培养皿降至室温步骤：将一次性培养皿上盖掀开，经超净工作台的上吹风冷却，待上盖完全无水雾时，将上盖盖上，从培养皿的正反两面观察目视为透明的，无任何其他的杂物存在即可，制得一次性培养基；制得的培养基需做无菌检验，将制得的培养基转移至35℃的培养箱中12h，无菌落长出可备用；
D：制备摇瓶培养基
按照质量百分比将白糖2.3％、磷酸二氢钾0.23％、MgSO4·5H2O0.023％、蛋白胨0.023％、pH为7的蒸馏水余量的混合物配置加入三角瓶中，保持混合物pH为6.0，混匀后用锡纸将瓶口塞住，于123℃条件，灭菌45min，灭菌后将三角瓶降温至98℃取出，再放入超净工作台中冷却至60℃以下，制备得摇瓶培养基；制得的培养基需做无菌检验，将制得的培养基转移至35℃的培养箱中12h，无菌落长出可备用；
E:培养液体初培养菌种
(1)将选取的母体菇种截取0.6克，接种到制备好的斜面培养基培养，条件：22℃，6天，待斜面菌丝长满，即得到母种A；
(2)取用母种A，接种到制备好的一次性培养基培养，条件：22℃，7天，待菌丝长满培养皿，即得到母种B；
(3)取用母种B，将母种B外表面的菌丝皮割掉，将下方的接种培养基再次接种到制备好的一次性培养基中培养，条件：22℃，7天，待菌丝长满培养皿后，即得到母种C；
(4)一次取用母种C大小为横截面积为6mm2的圆柱形的菌块4块，去掉表皮，接种到摇瓶培养基中，之后将摇瓶培养基连同三角瓶一同移到摇床中，20℃条件，转速为120r/min，培养10天，即得液体初培养菌种；
F:菌种培养桶培养菌种
(1)菌种培养桶的配置，按照质量百分比将白糖3.5％、磷酸二氢钾0.35％、MgSO4·5H2O 0.06％、消泡剂0.025％、pH为7的软化过滤水余量的混合物加入菌种培养桶，保持混合物pH为7，混匀后将菌种培养桶密封并移入菌包灭菌柜中灭菌，100℃保温60min，123℃灭菌120min，再密闭放置30min，冷却至98℃打开灭菌柜门，将菌种培养桶移至冷却室冷却，冷却时菌种培养桶内通入0.08mpa无菌的空气，菌种培养桶的桶壁用循环水冷却，直至菌种培养桶冷却到20℃；
(2)将三角瓶内培养好的液体初培养菌种，用自动搅拌器搅拌，搅拌器转速5000r/min，搅拌的过程时间控制为：a、搅拌：4S，b、停止：2S，c、搅拌：15S，d、停止：2S，e、搅拌：2S，搅拌停止后，在火焰保护下，由菌种培养桶专用接种口倒入并培养，通入0.08mpa的无菌空气，18℃，培养6天，在培养过程中的第三天与第五天，分别需用LB培养基检查培养测试其发育状况，得金针菇菌种。
LB培养基的配置，是按照质量百分比将LB琼脂培养基4％，pH为7的蒸馏水余量混合加入三角瓶，保持混合物pH为7，于123℃，灭菌35min，灭菌降温至98℃取出三角瓶，再放入超净工作台中冷却至60℃以下，后将三角瓶内的培养基，倒入一次性培养皿中，每个倒入15ml，待一次性培养皿降至室温，即得LB培养基。
以上所述仅为本发明优选实施例，并不限于本发明，凡在本发明的范围内，所做的修改，替换等，均应包含在本发明保护范围内。
Claims (6)
1.一种金针菇菌种的生产方法，其特征在于包括以下步骤 ：选取母体菇种、制备斜面培养基、制备一次性培养基、制备摇瓶培养基、培养液体初培养菌种、菌种培养桶培养菌种；
所述步骤具体如下：
A: 选取母体菇种
选择六~八成熟的金针菇，于2~4℃条件存放2天，水分减至40~50%，分离出杆部得母体菇种；
B: 制备斜面培养基
按照质量百分比将PDA培养基 3.5～4%、磷酸二氢钾 0.05 ～ 0.08%、MgSO4·5H2O 0.05 ～ 0.08%、蛋白胨0. 1 ～ 0.15%、pH 6.5~7的蒸馏水余量的混合物加入试管中， 混匀后于 122～ 123℃条件，灭菌 20～25min ， 灭菌后降温至96~98℃取出试管， 摆成斜面，制得斜面培养基；
C: 制备一次性培养基
按照质量百分比将PDA培养基 3.5 ～ 4%，pH6.5～7的蒸馏水余量的混合物加入三角瓶中混匀， 混匀后于 122 ～ 123℃条件， 灭菌30 ～ 35min ，灭菌后降温至96～98℃取出三角瓶，将三角瓶放入超净工作台中，冷却至60℃以下，将三角瓶内的培养基，再倒入一次性培养皿中，待降至室温，制得一次性培养基；
D：制备摇瓶培养基
按照质量百分比将白糖 2 ～ 2.3%、磷酸二氢钾 0.2 ～ 0.23%、MgSO4·5H2O 0.02 ～ 0.023%、蛋白胨0.02 ～ 0.023%、pH为6.5~7的蒸馏水余量的混合物配置加入三角瓶中，混匀后用锡纸将瓶口塞住，于122 ～ 123℃条件， 灭菌40～45min ，灭菌后将三角瓶降温至96~98℃取出，再放入超净工作台中冷却至60℃以下，制备得摇瓶培养基；
E: 培养液体初培养菌种
(1)选取制备好的母体菇种，接种到制备好的斜面培养基培养，条件 ： 20～22℃， 5～6 天， 待斜面菌丝长满， 即得到母种 A ；
(2) 取用母种 A，接种到制备好的一次性培养基培养， 条件 ： 20 ～ 22℃， 6 ～ 7 天， 待菌丝长满培养皿， 即得到母种 B ；
(3) 取用母种 B， 将母种B外表面的菌丝皮割掉，将下方的接种培养基再次接种到制备好的一次性培养基中培养，条件：20 ～ 22℃，6 ～ 7天，待菌丝长满培养皿后， 即得到母种 C ；
(4) 取用母种C，将母种C菌块去掉表皮，接种到摇瓶培养基中，之后将摇瓶培养基连同三角瓶一同移到摇床中，18 ～ 20℃条件，转速为110-120r/min，培养8 ～ 10天，即得液体初培养菌种 ；
F : 菌种培养桶培养菌种
(1)菌种培养桶的配置，按照质量百分比将白糖 3～3.5%、磷酸二氢钾 0.3～0.35%、 MgSO4·5H2O 0.05～0.06%、消泡剂0.02～0.025%、pH为6.5~7的软化过滤水余量的混合物加入菌种培养桶，混匀后将菌种培养桶密封并移入菌包灭菌柜中灭菌，100℃保温60min， 123℃灭菌120min，再密闭放置30min ，冷却至96～98℃打开灭菌柜门，将菌种培养桶移至冷却室冷却，冷却时菌种培养桶内通入0.075~0.08mpa无菌的空气，菌种培养桶的桶壁用循环水冷却，直至菌种培养桶冷却到18～20℃；
(2)将三角瓶内的液体初培养菌种，用自动搅拌器搅拌，搅拌器转速4000~5000 r/min，搅拌停止后，在火焰保护下，由菌种培养桶专用接种口倒入并培养，通入0.075~0.08mpa的无菌空气，16~18℃，培养5~6天，得金针菇菌种。
2.根据权利要求1所述的一种金针菇菌种的生产方法，其特征在于所述自动搅拌器的搅拌棒为不锈钢圆柱状的可拆卸式结构，在搅拌使用前需在灭菌锅中灭菌处理，灭菌条件为122~123℃，50 min，后放入超净工作台冷却到18~20℃，灭菌期间需用锡纸包裹搅拌棒，待灭菌完成后装入搅拌器前拆下锡纸包装，搅拌作业时将搅拌棒直接插入三角瓶中进行搅拌, 搅拌的过程时间控制为：a、搅拌：4S，b、停止：2S，c、搅拌：15S，d、停止：2S，e、搅拌：2S后停止。
3.根据权利要求1所述的一种金针菇菌种的生产方法，其特征在于所述培养液体初培养菌种时取用母种C，一次取用母种C的菌块4~6块，大小为横截面积为4~6mm2的圆柱形。
4.根据权利要求1所述的一种金针菇菌种的生产方法，其特征在于所述制备一次性培养基时，所使用的一次性培养皿降至室温步骤 ： 将一次性培养皿上盖掀开，经超净工作台的上吹风冷却， 待上盖完全无水雾时，将上盖盖上，从培养皿的正反两面观察目视为透明的，无任何其他的杂物存在即可。
5.根据权利要求1所述的一种金针菇菌种的生产方法，其特征在于所述液体初培养菌种接种到菌种培养桶后，在培养过程中的第三天与第五天，分别需用LB培养基检查培养测试其发育状况。
6.根据权利要求5所述的一种金针菇菌种的生产方法，其特征在于所述LB培养基的配置，是按照质量百分比将LB琼脂培养基 3.5 ～ 4%，pH为6.5~7的蒸馏水余量混合加入三角瓶，于122 ～ 123℃， 灭菌30 ～ 35min ，灭菌降温至96~98℃取出三角瓶，再放入超净工作台中冷却至60℃以下，后将三角瓶内的培养基，倒入一次性培养皿中，待一次性培养皿降至室温，即得LB培养基。
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