CN104211751A - 一种将多肽稳定为alpha螺旋二级结构的方法 - Google Patents

一种将多肽稳定为alpha螺旋二级结构的方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种将多肽稳定为alpha螺旋二级结构的方法，其依次包括如下步骤：（1）将多肽的氨基端连接非天然氨基酸，并乙酰化封尾；（2）将步骤（1）的产物经过巯基-烯反应获得硫醚侧链修饰的多肽化合物；（3）将硫醚侧链修饰的多肽化合物氧化，获得R型或者S型亚砜侧链修饰的多肽化合物；（4）将步骤（3）的产物分离纯化，获得R型亚砜侧链修饰的多肽化合物。通过CD证明了该方法利用手性亚砜侧链对稳定多肽的alpha螺旋二级结构效果很好，而且对多肽序列有良好的耐受性。

Description

一种将多肽稳定为alpha螺旋二级结构的方法
技术领域
本发明属于多肽结构稳定技术领域。更具体地说，本发明涉及一种通过构建侧链来稳定多肽alpha螺旋的方法以及由该方法构建的带有侧链修饰的多肽化合物。
背景技术
研究发现：在一个蛋白质中真正起到结合作用的往往只有很小的一段序列，而其他部分往往是为了达到这一序列的结构专一性而存在的。alpha-helix构象作为蛋白最重要的二级构象之一，在细胞生理过程起着至关重要的作用，如很多蛋白-蛋白相互作用的区域多为alpha螺旋构象。此外，使多肽具有稳定的alpha螺旋构象还能大幅提升多肽的抗蛋白降解能力和穿膜能力。
为了使多肽具有稳定的alpha螺旋构象，研究人员开发了各种各样的多肽构象稳定技术，如盐桥、金属螯合、HBS、构建共价侧链等。其中构建共价侧链是其中较为常用的方法，最早出现的是以酰胺键的形成作为侧链构建方法。此后二硫键，碳碳双键的形成等均被用于构建侧链以稳定多肽的alpha构象。
在侧链共价键的构建过程中偶联的侧链一般在alpha螺旋的同一面上，所以侧链偶联氨基酸的位置一般为i/i+3,i/i+4,i/i+7,i/i+11等。其中应用较多的是i/i+4与i/i+7。
但是每种稳定方法都有其一定的局限性，例如在酰胺键稳定技术中，由于酰胺键本身易水解所以在体内可能很容易被水解掉而无法发挥作用；以两个半胱氨酸为侧链形成基础的稳定技术中的侧链结构往往含有芳香基团，其对多肽本身的性质影响较大；基于叠氮与炔反应的侧链形成的三氮唑本身就是一个药效基团，其对多肽成药性影响可能更大。
所以至今为止并没有一种侧链技术是普适性的，故而需要开发多种多肽稳定技术以便于研发人员针对不同情况选择适合的技术。
发明内容
本发明的目的是提供一种通过构建新型的含有手性亚砜的侧链来稳定多肽的alpha螺旋的方法。
本发明的另一目的是提供一种具有稳定alpha螺旋结构的带有侧链修饰的多肽化合物及其制备方法。
进而，本发明提供了一种将多肽稳定为alpha螺旋二级结构的方法，它包括如下步骤：
（1）将多肽的氨基端连接非天然氨基酸，并乙酰化封尾；
（2）将步骤（1）的产物经过巯基-烯反应获得硫醚侧链修饰的多肽化合物；该硫醚侧链偶联氨基酸的位置为i/i+4；
（3）将硫醚侧链修饰的多肽化合物氧化，获得R型或者S型亚砜侧链修饰的多肽化合物；
（4）将步骤（3）的产物分离纯化，获得R型亚砜侧链修饰的多肽化合物。
在一优选例中，所述步骤（1）中的非天然氨基酸具有如下结构式：
其中R6为氢或亚甲基，n为1～6的正整数。
在另一优选例中，所述步骤（2）中的巯基-烯反应是先将步骤（1）的产物与半胱氨酸或者半胱氨酸衍生物进行光聚合反应，然后通过酰胺键的形成合成硫醚侧链修饰的多肽化合物。
在另一优选例中，所述步骤（2）和步骤（3）的反应式如下：
本发明第二方面是提供了一种带有侧链修饰的多肽化合物，该多肽化合物具有如下结构式：
其中，R1和R5各自独立地为氢或甲基，R2～R4各自独立地为氨基酸残基，n为1-6的正整数，亚砜的构型为R。
在一优选例中，所述多肽的长度不大于20个氨基酸。
在另一优选例中，所述n为3或4。
本发明还提供了上述多肽化合物的制备方法，它包括如下步骤：
（ⅰ）将多肽的氨基端连接非天然氨基酸，并乙酰化封尾，所述非天然氨基酸具有如下结构式：
其中R6为氢或亚甲基，n为1～6的正整数；
（ⅱ）将步骤（i）的产物经过巯基-烯反应获得硫醚侧链修饰的多肽化合物，该侧链偶联氨基酸的位置为i/i+4；
（ⅲ）将硫醚侧链修饰的多肽化合物氧化，获得R型或者S型亚砜侧链修饰的多肽化合物；
（ⅳ）将步骤（ⅲ）的产物分离纯化，获得R型亚砜侧链修饰的多肽化合物。
在一优选例中，所述步骤（ⅱ）中的巯基-烯反应是先将步骤（i）的产物与半胱氨酸或者半胱氨酸衍生物进行光聚合反应，然后通过酰胺键的形成合成硫醚侧链修饰的多肽化合物。
在另一优选例中，所述步骤（ⅱ）和步骤（ⅲ）的反应式如下：
本发明的其它方面由于本文的公开内容，对本领域的技术人员而言是显而易见的。
附图说明
图1为n=3时，Ac-cyclo(1,5)-monoS5AAAC-NH2sulfoxide A和B在10mM ph=7.4的PBS缓冲液里的CD图。
图2为Ac-cyclo(1,5)-monoS5AAAC-NH2sulfoxide B在PBS和50%TFE溶液里的CD图。
图3为Ac-cyclo(1,5)-monoS5AAAC-NH2sulfoxide B（ASOB），Ac-cyclo(1,5)-monoS5AGAC-NH2sulfoxide B(GSOB)，Ac-cyclo(1,5)-monoS5AIAC-NH2sulfoxide B(ISOB)的CD图。
图4为n=4时，Ac-cyclo(1,5)-monoS6AAAC-NH2sulfoxide A和B在10mM ph=7.4的PBS缓冲液里的CD图。
图5为纯化Ac-cyclo(1,5)-monoS5AAAC-NH2的HPLC色谱图。
图6为多肽Ac-cyclo(1,5)-monoS5AAAC-NH2的LC-MS色谱图。
图7为多肽Ac-cyclo(1,5)-monoS5AAAC-NH2sulfoxide A的LC-MS色谱图。
图8为多肽Ac-cyclo(1,5)-monoS5AAAC-NH2sulfoxide B的LC-MS色谱图。
图9为多肽Ac-cyclo(1,5)-monoS6AAAC-NH2sulfoxide A的LC-MS色谱图。
图10为多肽Ac-cyclo(1,5)-monoS6AAAC-NH2sulfoxide B的LC-MS色谱图。
图11为多肽Ac-cyclo(1,5)-monoS5AAAC-NH2sulfoxide A和B的HPLC色谱图。
具体实施方式
研究证实，多肽分子具有小分子药物所不具有的大接触面积和低毒性，但多肽往往不具有蛋白的二级或三级结构。此外，在生理环境下少于二十个氨基酸的短肽往往不具有稳定的构象。所以如何使少于20个氨基酸的多肽在水相中具有稳定构象一直是多肽化学中的研究热点。alpha螺旋是蛋白中最重要的二级结构之一，在很多重要的生理过程，如信号传导、蛋白-蛋白相互作用等中起着重要作用，所以如果能够使多肽具有稳定的alpha螺旋结构将会使这些过程更加容易调控。以构建共价键的侧链来稳定多肽alpha螺旋构象是其中应用最多的策略之一。
本发明人以五肽为模型，通过构建一种新的侧链使得多肽alpha螺旋的稳定性有明显提高，而且这一侧链具有很高的序列耐受能力。这一新型的多肽稳定方法将具有良好的运用前景。首先，本发明人运用thiolene反应构建硫醚侧链稳定的多肽化合物，并进一步将硫醚氧化成含手性亚砜。之后通过CD证明了这一手性亚砜侧链对稳定多肽的alpha螺旋二级结构效果很好，而且对多肽序列有良好的耐受性。
所述侧链在多肽化合物中的位置有如下结构通式：
通式中R1和R5各自独立地为氢或甲基，R2～R4各自独立地为二十种天然氨基酸的残基，n为1～6的正整数，较优选地，n为3或4，亚砜的构型为R。
制备上述侧链稳定的多肽化合物的核心反应步骤如下：
化合物1是将多肽的氨基端连接非天然氨基酸，并乙酰化封尾而得。其中的天然氨基酸是由Fmoc（芴甲氧羰基）保护的固相接肽完成，所述非天然氨基酸（简称为monoSn+2）的结构式如下：
所述非天然氨基酸可通过固相接肽连接到树脂上，其中R6可以为氢或亚甲基。
n可以为1～6中的任何一个正整数。在本发明的一个优选例中，以n=3或4为示例进行表述。
化合物2，是由化合物1与半胱氨酸（Cys-amide）及其衍生物进行反应而得。反应条件设定为：取化合物10.5mmol，加入光引发剂DMPA1.5mmol，Cys-amide衍生物1.5-2.5mmol，然后加入10ml DMF作溶剂，脱气于365nm紫外光下反应3h，滤掉反应液洗涤即可得化合物2。
将上一步得到的化合物2加入10ml三氟乙酸（TFA）/三异丙基硅烷（TIS）/水（H2O）（9.5：0.25：0.25体积/体积）的剪切液中反应3h，用氮气将剪切液吹干，10ml乙醚/正己烷（4：1）沉淀；将沉淀抽干后溶于200ml N,N’-二甲基甲酰胺（DMF）中，脱气,冰浴下加入1.0g2-（7-偶氮苯并三氮唑）-N,N,N′,N′-四甲基脲六氟磷酸酯（HATU），0.9ml二异丙基乙胺（DIEA）,缓慢升至室温反应36h；LCMS检测反应完全后，将溶剂旋干，HPLC纯化，冻干，得到干净的化合物3，即硫醚侧链修饰的多肽化合物。
将化合物3溶于4ml水中加入1ml30%双氧水反应3h。HPLC纯化得化合物4，即亚砜侧链修饰的多肽化合物。化合物4含有两个异构体，其中出峰在前的称为化合物4A，出峰在后的为化合物4B。
将得到的化合物溶于10mM pH=7.4的磷酸盐缓冲液中测CD谱。化合物4B具有良好的alpha螺旋，与传统的酰胺键稳定方法相比，相同序列下可以有更高的螺旋含量。
本发明人进而通过CD结果证实了这一手性亚砜侧链对稳定多肽的alpha螺旋二级结构效果很好，而且对多肽序列有良好的耐受性。
综上所述，本发明提供了一种通过构建新型的侧链稳定多肽alpha螺旋的方法，而且该方法在一定范围内可通过调节链长来控制alpha螺旋的含量。通过与酰胺键稳定alpha螺旋对比，该方法可以产生更好的alpha螺旋稳定效果。其侧链简单、螺旋含量高、序列耐受性好以及螺旋含量通过链长调节在一定范围内可调等优点是目前本领域的其他稳定方法所不具备的。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。
除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。
实施例1 n=3时，手性亚砜侧链稳定的多肽Ac-cyclo(1,5)-monoS5AAAC-NH2sulfoxide的合成：
monoS5的结构式为：
首先是以Fmoc固相多肽合成法合成Ac-monoS5AAA-CTC树脂:
具体路线如下：
具体操作为：
1.接第一个氨基酸：称取1.0g CTC树脂于100ml接肽管中，加入20ml N-甲基吡咯烷酮（NMP）鼓氮气溶胀30min;滤掉溶剂加入用9331mg Fmoc-Ala-OH,9.6mlNMP及2.11mlDIEA配制成的溶液，鼓氮气3.0h；洗涤：将接肽管中的溶剂抽干，将树脂用NMP（10ml*3）洗涤三次，每次一分钟；封闭：洗涤结束后，滤掉反应液，加入NMP/MeOH/DIEA(体积比17/2/1)10mL鼓氮气5min，滤掉反应液，洗涤并进行下一步反应。
2.接第二个氨基酸：脱保护：加入体积比为25%吗啡啉的NMP溶液,鼓氮气30min，洗涤；连接反应：将配制好的Fmoc-Ala-OH(0.4M in NMP)溶液，6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯(HCUT)(0.38M in NMP),DIEA按7.5ml/7.5ml/1ml混匀加入树脂中鼓氮气50min；滤掉反应液，洗涤然后进行下一步操作。
3.接第三个个氨基酸：操作同2接第三个Ala。
4.接非天然氨基酸monoS5:脱保护，加入Fmoc-monoS5-OH(0.4M in NMP)溶液，HCUT(0.38M in NMP),DIEA按5.0ml/5.0ml/0.71ml混匀加入树脂中鼓氮气120min，滤掉反应液进行下一步反应。
5.乙酰化封尾：脱保护，洗涤，滤掉NMP;加入10ml Ac2O/DIEA/NMP(1：3：16)的混合液，鼓氮气50min。
6.滤掉反应液，将树脂依次用NMP(10ml)，二氯甲烷（DCM）(10ml)，甲醇（MeOH）(10ml)交替洗涤，抽干保存或用于下一步反应。
切割：取30mg树脂于1.5ml eppendof管中，加入0.5ml TFA/TIPS/H2O(体积比9.5：0.25：0.25)震荡反应0.5h；沉淀：树脂过滤除去，用氮气把剪切液吹干，然后加入冷的1ml乙醚/正己烷（4:1）的混合液；离心去上清，将固体沉淀抽干。
将产物溶于0.5ml氘代DMSO中进行核磁检测：
1H NMR(500MHz,DMSO)δ8.07(d,J=7.3Hz,1H),8.02(d,J=7.4Hz,1H),7.97(d,J=7.9Hz,1H),7.81(d,J=7.6Hz,1H),5.80–5.71(m,1H),5.02–4.89(m,2H),4.23–4.15(m,4H),1.82(s,3H),1.59(d,J=9.4Hz,1H),1.45(d,J=5.4Hz,1H),1.39–1.28(m,2H),1.28–1.13(m,11H).
通过thiol-ene反应（巯基-烯反应）来完成侧链构建。
首先进行光聚合反应：
所获得反应中间体的结构式为：
具体操作为：称取1.0g Ac-monoS5AAA-CTC树脂于25ml烧瓶中,依次然后加入780mgCys-amide，380mg DMPA,50ml DMF;用氮气换气三次除掉溶剂中的氧;将该烧瓶置于高压汞灯20cm处搅拌下反应3h；将反应树脂转入接肽管中，滤除反应液，用DMF(10ml)，DCM(10ml)，MeOH(10ml)交替洗涤，抽干得Ac-monoS5（Cys-NH2）AAA-CTC树脂。
取30mg Ac-monoS5（Cys-NH2）AAA-CTC树脂切割，沉淀，核磁检测，通过观察氢谱上5.80–5.71(m,1H),5.02–4.89(m,2H)两处的双键峰来检测反应是否进行完全，如仍有双键峰则重复thiol-ene反应。如双键峰消失说明反应完全，将剩余的树脂用10ml切割液反应3h，氮气吹干切割液，加10ml冻乙醚/正己烷（4:1）10ml沉淀，离心去上清，最后将所得固体抽干保存。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.14(s,3H),8.08(d,J=7.3Hz,1H),8.05–7.96(m,2H),7.93–7.85(m,2H),7.67(s,1H),4.30–4.11(m,5H),2.93–2.91(m,1H),2.87–2.77(m,1H),1.84(s,3H),1.65–1.54(m,1H),1.54–1.39(m,3H),1.39–1.16(m,13H).
然后通过酰胺键的形成合成环状多肽Ac-cyclo(1,5)-monoS5AAAC-NH2。
具体操作：将thiol-ene反应中所得的固体转移到1000ml烧瓶中，加入500ml DMF,氮气换气三次；氮气保护下冰浴加入1.0g接肽试剂HATU，搅拌10min后加入0.9ml DIEA,缓慢升至室温反应12h。
反应液旋干之后用HPLC纯化，250*10mm C18反相色谱，A液：0.1%TFA H2O,B液：0.1%TFA乙腈；溶剂梯度：0-45min5-50%；Rt=31.492。HPLC色谱图（图5）及LCMS检测（图6）。
图5的具体结果如表1所示。
表1 Ac-cyclo(1,5)-monoS5AAAC-NH2的HPLC分析结果
产物冻干后取2mg溶于0.5ml氘代DMSO中核磁检测：
1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.38(d,J=7.3Hz,1H),8.20(d,J=5.9Hz,1H),8.00(d,J=7.8Hz,1H),7.95(d,J=8.1Hz,1H),7.39(d,J=6.4Hz,1H),7.21(s,1H),7.08(s,1H),4.29–4.05(m,5H),2.84(dd,J=13.9,4.4Hz,1H),2.76–2.65(m,1H),1.82(s,3H),1.74–1.69(m,1H),1.62–1.12(m,18H).
将产物环肽Ac-cyclo(1,5)-monoS5AAAC-NH23mg溶于4ml水中然后加入1ml30%H2O2反应3h HPLC纯化，得到侧链含有手性亚砜的两种环肽非对应异构体：Ac-cyclo(1,5)-monoS5AAAC-NH2sulfoxide A,Ac-cyclo(1,5)-monoS5AAAC-NH2sulfoxide B.如图11：
图11的具体结果如表2所示。
表2 Ac-cyclo(1,5)-monoS5AAAC-NH2sulfoxide A和B的HPLC分析结果
两个产物用LC-MS分析（图7，图8），及核磁氢谱分析：
Ac-cyclo(1,5)-monoS5AAAC-NH2sulfoxide A
1H NMR(500MHz,DMSO)δ8.36(d,J=7.5Hz,1H),8.22(d,J=7.5Hz,2H),7.95(d,J=8Hz,1H),7.53(d,J=5Hz,1H),7.18(d,J=7.5Hz,2H),4.51–4.39(m,1H),4.25–4.19(m,2H),4.01–3.95(m,1H),3.15–3.03(m,2H),2.87–2.81(m,1H),2.70–2.64(m,1H),1.81(s,3H),1.75–1.62(m,2H),1.45–1.34(m,5H),1.32(s,3H),1.25–1.21(m,9H).
Ac-cyclo(1,5)-monoS5AAAC-NH2sulfoxide B
1H NMR(500MHz,DMSO)δ8.42(d,J=6.9Hz,1H),8.12(d,J=6.2Hz,1H),8.07(d,J=5.7Hz,1H),7.95(d,J=8.7Hz,1H),7.28(d,J=10.4Hz,2H),7.20(s,1H),4.57(t,J=8.4Hz,1H),4.13(dd,J=14.5,7.4Hz,3H),4.06–3.97(m,1H),3.08–2.94(m,2H),2.87(dd,J=13.2,7.1Hz,1H),2.70–2.60(m,1H),1.87(s,3H),1.79(dd,J=18.3,11.6Hz,2H),1.60–1.47(m,3H),1.32(s,3H),1.24(t,J=6.5Hz,9H).
将Ac-cyclo(1,5)-monoS5AAAC-NH2sulfoxide两种异构体ASOA/ASOB溶于10mM PBS溶液中测定CD图谱：取0.1-0.5mg样品分别溶于0.5ml10mmol PBS中测CD波长为190nm-250nm处的色谱图，然后根据以下公式计算得alpha螺旋含量；结果如表3。
alpha螺旋计算公式：
fΗ=([θ]obs215-[θ]C)/([θ]∞215-[θ]C)
[θ]obs215＝θ/(10*C*Np*□)
[θ]∞215=（-44000+250T）(1-к/Np)
[θ]C=2220-53T=1054
T=22℃,к=4.0,Np=6(对于五肽),□=0.1(cm),C为样品摩尔浓度M。
从CD（图1）可以看出两种异构体只有在HPLC分离中出峰靠后的异构体B具有稳定的alpha螺旋。
对比Ac-cyclo(1,5)-monoS5AAAC-NH2sulfoxide B在PBS和50%TFE缓冲液中的CD图可发现，TFE缓冲液对这一异构体没有alpha螺旋的提高，说明这一侧链稳定方法已经将短肽的alpha螺旋提高到了最佳值。
改变五肽的中间氨基酸为不利于alpha螺旋的G和I得到Ac-cyclo(1,5)-monoS5AGAC-NH2sulfoxide B(GSOB)，Ac-cyclo(1,5)-monoS5AIAC-NH2sulfoxide B(ISOB)结果同样有很高的alpha螺旋含量（表3，图3）
将本发明的方法与传统的酰胺键稳定方法进行对比，表3中ASOA/对照，结果表明相同中间序列情况下，这一稳定方法相对于酰胺键侧链稳定多肽alpha螺旋稳定效果提高14%。
表3 多肽在pH=7.422℃10mM PBS中的相对alpha螺旋含量
*以ASOB为标准[θ]215（x）/[θ]215（ASOB）为相对alpha螺旋含量
**control为酰胺键侧链的环肽Ac-(cyclo2,6)-R[KAAAD]-NH2
实施例2 n=4时亚砜侧链稳定的多肽的合成及CD图谱的测定
将monoS5换成多一个碳原子的monoS6用同样的合成路线，我们得到了两个非对映异构体，同样根据HPLC上出峰时间的先后命名为Ac-cyclo(1,5)-monoS6AAAC-NH2sulfoxide A和Ac-cyclo(1,5)-monoS6AAAC-NH2sulfoxide B,LCMS鉴定（图9，图10），及核磁氢谱：
Ac-cyclo(1,5)-monoS6AAAC-NH2sulfoxide A
1H NMR(500MHz,DMSO)δ8.42(d,J=7.6Hz,1H),8.33(d,J=8.2Hz,1H),8.19(d,J=6.4Hz,1H),7.99(d,J=7.9Hz,1H),7.24–7.16(m,3H),4.68–4.61(m,1H),4.30–4.08(m,4H),3.17(dd,J=13.8,3.0Hz,1H),3.02(dd,J=13.9,9.3Hz,1H),2.71(dd,J=13.7,6.5Hz,2H),1.81(s,3H),1.76–1.67(m,1H),1.67–1.52(m,2H),1.52–1.40(m,3H),1.40–1.18(m,13H).
Ac-cyclo(1,5)-monoS6AAAC-NH2sulfoxide B
1H NMR(500MHz,DMSO)δ8.41(d,J=7.4Hz,1H),8.20(d,J=6.8Hz,1H),8.13(d,J=8.7Hz,1H),7.98(d,J=7.7Hz,1H),7.39(s,1H),7.20(d,J=7.5Hz,2H),4.54(t,J=9.7Hz,1H),4.29–4.13(m,4H),3.08–2.93(m,2H),2.74(td,J=13.3,6.4Hz,2H),1.82(s,3H),1.64(t,J=18.4Hz,3H),1.44(d,J=6.9Hz,3H),1.38–1.17(m,13H).
测定Ac-cyclo(1,5)-monoS6AAAC-NH2sulfoxide A/B的CD（图4），同样只有B异构体才有alpha螺旋稳定效果。
本发明所涉及的多个方面已做如上阐述。然而，应理解的是，在不偏离本发明精神之前提下，本领域专业人员可对其进行等同改变和修饰，所述改变和修饰同样落入本专利申请所附权利要求的覆盖范围。

Claims (10)

1.一种将多肽稳定为alpha螺旋二级结构的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：
（1）将多肽的氨基端连接非天然氨基酸，并乙酰化封尾；
（2）将步骤（1）的产物经过巯基-烯反应获得硫醚侧链修饰的多肽化合物，该硫醚侧链偶联氨基酸的位置为i/i+4；
（3）将硫醚侧链修饰的多肽化合物氧化，获得R型或S型亚砜侧链修饰的多肽化合物；
（4）将步骤（3）的产物分离纯化，获得R型亚砜侧链修饰的多肽化合物。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（1）中的非天然氨基酸具有如下结构式：
其中R6为氢或亚甲基，n为1～6的正整数。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（2）中的巯基-烯反应是先将步骤（1）的产物与半胱氨酸或半胱氨酸衍生物进行光聚合反应，然后通过酰胺键的形成合成硫醚侧链修饰的多肽化合物。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（2）和步骤（3）的反应式如下：
5.一种带有侧链修饰的多肽化合物，其特征在于，该多肽化合物具有如下结构式：
其中，R1和R5各自独立地为氢或甲基，R2～R4各自独立地为氨基酸残基，n为1～6的正整数，亚砜的构型为R。
6.如权利要求5所述的多肽化合物，其特征在于，所述多肽的长度不大于20个氨基酸。
7.如权利要求5所述的多肽化合物，其特征在于，所述n为3或4。
8.如权利要求5所述的多肽化合物的制备方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：
（ⅰ）将多肽的氨基端连接非天然氨基酸，并乙酰化封尾，所述非天然氨基酸具有如下结构式：
其中R6为氢或亚甲基，n为1～6的正整数；
（ⅱ）将步骤（ⅰ）的产物经过巯基-烯反应获得硫醚侧链修饰的多肽化合物，该侧链偶联氨基酸的位置为i/i+4；
（ⅲ）将硫醚侧链修饰的多肽化合物氧化，获得R型或S型亚砜侧链修饰的多肽化合物；
（ⅳ）将步骤（ⅲ）的产物分离纯化，获得R型亚砜侧链修饰的多肽化合物。
9.如权利要求8所述的多肽化合物的制备方法，其特征在于，所述步骤（ⅱ）中的巯基-烯反应是先将步骤（ⅰ）的产物与半胱氨酸或半胱氨酸衍生物进行光聚合反应，然后通过酰胺键的形成合成硫醚侧链修饰的多肽化合物。
10.如权利要求8所述的多肽化合物的制备方法，其特征在于，所述步骤（ⅱ）和步骤（ⅲ）的反应式如下：
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