CN104207324B - 一种烟叶处理方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及烟草领域，特别是涉及一种烟叶处理方法。本发明提供一种烟叶处理方法，包括如下步骤：烟叶接种：使用枯草芽孢杆菌对烟叶进行接种；发酵：将接种后的烟叶进行发酵。本发明用不同接种浓度的枯草芽孢杆菌处理烟叶，结果表明：接种枯草芽孢杆菌后，能够增加烟叶中致香物质的含量，且酸类、醇类、酯类致香物质的总量增幅较大。

Description

一种烟叶处理方法

技术领域

本发明涉及烟草领域，特别是涉及一种烟叶处理方法。

背景技术

在烟叶表面存在着大量的微生物群落，微生物参与了烟叶生产及加工过程。国内外大量研究表明，微生物不仅能够明显地缩短烟叶醇化时间,而且在一定程度上可以提高烟叶的内在质量。Kolle最先进行了向烟叶中接种微生物以增加香气和改善吸味的尝试，在雪茄烟中接种酵母菌，可大大加快发酵进程，使发酵更为彻底，但同时也会促进细菌和霉菌的生长。English研究表明，烟叶中的芽孢杆菌、嗜热细菌和小球菌可以有效提升烟叶的香气和品质。Tamayo等报道，在烟叶中接种一种小球菌，可改善烟叶的香气。国内也报道了利用微生物增加烟叶香气的研究，陈福星、朱大恒、罗家基、赵铭钦等研究表明，用微生物处理烟叶后，明显改善烟叶香气质量，减轻杂气和刺激性，使烟气更加醇和饱满。

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)是一类好氧型、内生抗逆孢子的杆状细菌，是一些重要工业酶制剂的生产菌。由于其具有非致病性、分泌蛋白能力强的特性和良好的发酵基础，所以应用十分广泛。关于枯草芽孢杆菌在烟叶上的应用，有报道从枯草芽孢杆菌代谢物中分离纯化蛋白，进行对烟草青枯病菌的抗病作用的研究。

本研究以从食品中筛选出的具有产香功能的枯草芽孢杆菌（Bacillus sp，编号gzuifr-Bps）为对象，在烟叶上进行试验，目的是探讨在特定环境下加入致香微生物对烟叶致香物质和感官品质的影响，从特殊的微生物上获取致香物质，以提升烟叶品质，并为烟叶生产中进一步应用枯草芽孢杆菌提供理论依据。

发明内容

鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种烟叶处理方法，用于解决现有技术中的问题。

为实现上述目的及其他相关目的，本发明提供一种烟叶处理方法，包括如下步骤：

1）烟叶接种：使用枯草芽孢杆菌对烟叶进行接种；

2）发酵：将接种后的烟叶进行发酵。

优选的，所述步骤1中，枯草芽孢杆菌的种类为芽孢杆菌Bacillus subtilis,保藏号为：CCTCC M2013150。（武汉保藏中心）

优选的，所述步骤1中，接种方法为喷洒枯草芽孢杆菌溶液。所述枯草芽孢杆菌溶液即为枯草芽孢杆菌悬液。

优选的，所述枯草芽孢杆菌溶液使用食品豆豉培养获得。

所述食品豆豉为市售新鲜发酵的食品豆豉（湿豆豉，豆粒之间具粘丝者佳）。

优选的，所述枯草芽孢杆菌溶液的制备方法包括如下步骤：将豆豉使用适量蒸馏水稀释，将其稀释液涂布在固体培养基上，置于35-37℃培养箱内培养24小时以上，将固体培养基上的菌苔接种到液体培养基中，35-37℃，摇床转数≥180rpm，培养时间为32小时以上，即得母种；离心、洗涤后直接冷冻干燥或制成悬液备用。

优选的，稀释时，豆豉与蒸馏水的重量比为1：100，涂布时，0.1ml稀释液对应20g培养基。

所述固体培养基的配方为：牛肉膏0.5%；蛋白胨1%；氯化钠0.5%；琼脂2%；余量为水。

所述液体培养基的配方即为所述固体培养基去除琼脂。

更优选的，所述步骤1中，所述枯草芽孢杆菌溶液的浓度为2×10⁸-4.8×10⁸个/ml，对烟草的接种量为0.01ml/g。

优选的，本发明所提供的烟叶处理方法所针对的烟叶为烤烟。

优选的，所述烤烟为中部上等烟，更优选的，所述烟叶为贵州黔南A2C2等级烟叶。

优选的，所述步骤2中，烟叶进行发酵的具体方法为：温度为室温，湿度为60-80%，发酵时间为15天以上。

本发明第二方面提供所述烟叶处理方法在烟草制备领域的应用。

如上所述，本发明的一种烟叶处理方法，具有以下有益效果：本发明以一株产香的枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis,保藏号为：CCTCC M2013150）为对象，用不同接种浓度处理烟叶，结果表明：接种枯草芽孢杆菌后，能够增加烟叶中致香物质的含量，且酸类、醇类、酯类致香物质的总量增幅较大；醇类、酚类、酸类、酮类、酯类、杂环类致香物质的总量均以2×10⁸个/ml接种浓度的处理较高，醛类和烯类致香物质的总量均以4.8×10⁸个/ml接种浓度的处理较高；感官品质上，能够提高烟叶香气质，改善吃味，减轻杂气，降低刺激性，使烟气更为细腻、柔和，且4.8×10⁸个/ml接种浓度的处理效果较为明显。

具体实施方式

以下通过特定的具体实例说明本发明的实施方式，本领域技术人员可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点与功效。本发明还可以通过另外不同的具体实施方式加以实施或应用，本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用，在没有背离本发明的精神下进行各种修饰或改变。

实施例1

1.烟叶接种：

用浓度分别为2×10⁸个/ml（W1）、4.8×10⁸个/ml（W2）的两个枯草芽孢杆菌处理对烟叶进行接种，以喷蒸馏水为对照(CK)。接种处理后将烟叶置于30℃温度条件下，试验15天。在试验达15天时，对供试烟叶取样。将每个均匀混合后的烟叶处理分为两份，一份用于主要致香物质的含量测定，一份用于感官品质鉴定。

本试验从食品中筛选出具有产香功能的枯草芽孢杆菌（Bacillus sp，保藏号为：CCTCC M2013150），培养方法为如下：

1）烟叶发酵用芽孢杆菌所用培养基

芽孢杆菌来源：市售新鲜发酵食品豆豉（湿豆豉，豆粒之间具粘丝者佳），

分离用培养基：牛肉膏0.5%；蛋白胨1%；氯化钠0.5%；琼脂2%；余量为水

pH7.0～7.2，121℃，20分钟灭菌后倒平板备用。

液体培养基：上述培养基去除琼脂，装液量发酵罐75%，三角瓶25%（体积比）。接种量8-10%。

2）芽孢杆菌分离

豆豉处理按1：100（重量比）稀释，将其稀释液用移液枪吸取0.1毫升，涂布在20g固体培养基上，置于35-37℃培养箱内，24小时后即可见到半透明边缘不整齐菌落，移入试管中相同温度培养形成菌株备用。

3）芽孢杆菌液体扩大培养

将菌株中的菌苔用接种环挑取一环接种到灭菌后的液体培养集中，35-37℃，摇床转数不低于180rpm。32小时既可作为母种。发酵罐通气比2。

4）菌体收集与应用

3500rpm离心，等渗透压盐水洗涤，或直接冷冻干燥或制成悬液备用。

2.致香物质检测方法：

仪器设备：自同时蒸馏萃取装置；7890A/5975C气相色谱/质谱联用仪（美国Agilent公司）；HP-5MS毛细管色谱柱；R114旋转蒸发仪（瑞士BüCHI公司）。

分析方法：将烟叶原料样品粉碎过60目筛子，烟末在恒温恒湿箱中于温度22℃，湿度60%的条件下平衡24h，然后准确称取平衡后的样品25.0g，放入同时蒸馏萃取装置中，并加入一定量的内标物(萘)，采用二氯甲烷作为溶剂对样品进行连续动态萃取2h。所得提取物经干燥后浓缩定容至1.0mL。浓缩液采用气相色谱/质谱联用仪进行分析，所得图谱经计算机谱库（NIST05和Wiley275）检索，并用内标校正归一化法计算各峰的相对含量。

分析条件：毛细管柱：HP-5MS（30m×0.25mm×0.25μm）；进样口温度：250℃；载气：He，1mL/min；程序升温：初始温度50℃，保持1min，以8℃/min升温到160℃，保持2min，再以8℃/min升温到260℃，保持15min，总运行时间为：46.75min；进样量：1μL，分流比：20:1；传输线温度：280℃；电离方式：EI，电离能量：70eV；离子源温度：230℃；四级杆温度：150℃；质量范围35-455aum。

3.感官鉴定方法：

参考国标GB5606.4-2005和烟草行业标准YC/T138-1998，对比评吸鉴定烟叶香气质、香气量、吃味、杂气、刺激性、烟气细腻度和柔和度等指标。

4.结果与分析

4.1枯草芽孢杆菌对醇类致香物质的影响

不同处理醇类致香物质含量变化结果，从试验结果（表1）看，接种枯草芽孢杆菌后烟叶中醇类致香物质含量有较明显变化。

在2×10⁸个/ml接种浓度下，所检测的9种醇类化合物含量均表现为含量增加，增幅最大的为西柏三烯二醇，达到了69.31%，增幅最小的为芳樟醇，为3.47%，9种醇类致香物质增幅顺序为：西柏三烯二醇＞寸拜醇＞植醇＞苯乙醇＞3-氧代-α-紫罗兰醇＞苯甲醇＞3-甲基-1-丁醇＞糠醇＞芳樟醇。

在4.8×10⁸个/ml接种浓度下，所检测的9种醇类化合物中含量增加的有6种，以西柏三烯二醇增幅最大，达到了46.56%，含量增加的6种醇类致香物质增幅顺序为：西柏三烯二醇＞寸拜醇＞3-氧代-α-紫罗兰醇＞植醇＞糠醇＞3-甲基-1-丁醇。从含量减少的醇类物质来看，降幅均在9%以下，降幅顺序为：苯乙醇＜芳樟醇＜苯甲醇。

烟叶接种枯草芽孢杆菌后，醇类致香物质总量两处理均为增加，增幅较大的为：西柏三烯二醇、寸拜醇、植醇、3-氧代-α-紫罗兰醇、3-甲基-1-丁醇、糠醇。相比之下，2×10⁸个/ml接种浓度的处理增幅较大，达到了28.14%。

表1不同处理醇类致香物质含量变化结果

注：表中“-”表示含量减少，下同。

4.2枯草芽孢杆菌对酚类致香物质的影响

不同处理酚类致香物质含量变化结果如表2所示。从试验结果（表2）看，烟叶接种枯草芽孢杆菌后对酚类致香物质含量有较明显的影响。

在2×10⁸个/ml接种浓度下，所检测的4种酚类化合物含量均表现为含量增加，增幅最大的为2-甲氧基-苯酚，达到了13.04%，增幅最小的为苯并[b]噻酚，为5.95%，4种酚类致香物质增幅顺序为：2-甲氧基-苯酚＞苯酚＞2-甲氧基-4-乙烯基苯酚＞苯并[b]噻酚。

在4.8×10⁸个/ml接种浓度下，在检测的4种酚类化合物中含量增加的有2种，苯酚含量增幅较大，达到了26.53%，2-甲氧基-4-乙烯基苯酚含量增幅次之，为6.72%。从含量减少的酚类物质来看，降幅均在10%以下，降幅顺序为：苯并[b]噻酚＜2-甲氧基-苯酚。

烟叶接种枯草芽孢杆菌，两处理的酚类致香物质总量均为增加，增幅较大的为苯酚。相比之下，2×10⁸个/ml接种浓度的处理酚类致香物质的总量增幅较大，达到了7.35%。

表2不同处理酚类致香物质含量变化结果

4.3枯草芽孢杆菌对醛类致香物质的影响

接种枯草芽孢杆菌后烟叶中醛类致香物质含量变化结果列于表3。

在2×10⁸个/ml接种浓度下，所检测的16种醛类化合物中含量增加的有11种，2-吡啶甲醛增幅最大，达到了23.08%，苯甲醛增幅最小，仅0.64%，11种醛类致香物质增幅顺序为：2-吡啶甲醛＞1H-吡咯-2-甲醛＞藏花醛＞1-甲基-1H-吡咯-2-甲醛＞2,6-壬二烯醛＞十四醛＞壬醛＞4-吡啶甲醛＞3-甲基-2-丁烯醛＞5-甲基糠醛＞苯甲醛。从含量减少的醛类物质来看，2,4-庚二烯醛A降幅最大，达到了18.75%，糠醛降幅最小，为0.52%，降幅顺序为：糠醛＜苯乙醛＜2,4-庚二烯醛B＜己醛＜2,4-庚二烯醛A。

在4.8×10⁸个/ml接种浓度下，16种醛类化合物中含量增加的有10种，1H-吡咯-2-甲醛含量增幅较大，达到了33.33%，2,4-庚二烯醛B含量增幅最小，为3.13%，10种醛类致香物质增幅顺序为：1H-吡咯-2-甲醛＞4-吡啶甲醛＞3-甲基-2-丁烯醛＞2-吡啶甲醛＞糠醛＞己醛＞5-甲基糠醛＞苯甲醛＞十四醛＞2,4-庚二烯醛B。从含量减少的醛类物质来看，2,4-庚二烯醛A降幅最大，达到了20.31%，2,6-壬二烯醛降幅最小，为3.64%，降幅顺序为：2,6-壬二烯醛＜苯乙醛＜壬醛＜藏花醛＜1-甲基-1H-吡咯-2-甲醛＜2,4-庚二烯醛A。

烟叶接种枯草芽孢杆菌后，醛类致香物质总量两处理均为增加，增幅较大的为：1H-吡咯-2-甲醛、2-吡啶甲醛、4-吡啶甲醛、3-甲基-2-丁烯醛，降幅较大的为：2,4-庚二烯醛A。相比之下，4.8×10⁸个/ml接种浓度的处理增幅较大，达到了6.82%。

表3不同处理醛类致香物质含量变化结果

4.4枯草芽孢杆菌对酸类致香物质的影响

不同处理酸类致香物质含量变化结果如表4所示。从试验结果看，接种枯草芽孢杆菌后烟叶中酸类致香物质含量有较明显变化。

在2×10⁸个/ml接种浓度下，7种酸类化合物中含量增加的有4种，棕榈酸+未知物增幅最大，达到了112.74%，2-甲基丁酸增幅最小，仅0.44%，4种酸类致香物质增幅顺序为：棕榈酸+未知物＞肉豆蔻酸＞糠酸＞2-甲基丁酸。从含量减少的酸类物质来看，戊酸降幅最大，达到了26.92%，十五酸降幅最小，为2.15%，降幅顺序为：十五酸＜己酸＜戊酸。

在4.8×10⁸个/ml接种浓度下，7种酸类化合物中含量增加的6有种，棕榈酸+未知物含量增幅较大，达到了109.20%，戊酸含量增幅最小，为11.54%，6种酸类致香物质增幅顺序为：棕榈酸+未知物＞肉豆蔻酸＞糠酸＞2-甲基丁酸＞十五酸＞戊酸。含量减少的酸类物质只有己酸，降幅为14.29%。

烟叶接种枯草芽孢杆菌后，酸类致香物质总量两处理均为增加，增幅均超过100%，且接种处理间差异较小。增幅较大的为：棕榈酸+未知物、肉豆蔻酸、糠酸、2-甲基丁酸，降幅较大的为己酸。

表4不同处理酸类致香物质含量变化结果

4.5枯草芽孢杆菌对酮类致香物质的影响

不同处理酮类致香物质含量变化结果如表5所示。从试验结果看，接种枯草芽孢杆菌后影响着烟叶中酮类致香物质含量。

在2×10⁸个/ml接种浓度下，所检测的23种酮类化合物中含量增加的有22种，金合欢基丙酮B增幅最大，达到了109.09%，面包酮增幅最小，为3.67%，22种酮类致香物质增幅顺序为：金合欢基丙酮B＞3-羟基-2-丁酮＞1-(3-吡啶基)-乙酮＞2,3,6-三甲基-1,4-萘二酮＞1-(1H-吡咯-2-基)-乙酮＞巨豆三烯酮D＞茄那士酮＞巨豆三烯酮C＞胡薄荷酮＞巨豆三烯酮A＞巨豆三烯酮B＞β-紫罗兰酮＞香叶基丙酮＞1-(2-呋喃基)-乙酮＞茄酮＞金合欢基丙酮A＞2-环戊烯-1,4-二酮＞β-大马酮＞β-二氢大马酮＞6-甲基-5-庚烯-2-酮＞氧化异佛尔酮＞面包酮。含量减少的酮类物质为1-戊烯-3-酮，降幅仅0.21%。

在4.8×10⁸个/ml接种浓度下，23种酮类化合物中含量增加的有15种，金合欢基丙酮B含量增幅较大，达到了68.18%，1-戊烯-3-酮含量增幅最小，为1.05%，15种酮类致香物质增幅顺序为：金合欢基丙酮B＞1-(2-呋喃基)-乙酮＞2,3,6-三甲基-1,4-萘二酮＞3-羟基-2-丁酮＞面包酮＞2-环戊烯-1,4-二酮＞巨豆三烯酮B＞巨豆三烯酮D＞茄那士酮＞巨豆三烯酮C＞6-甲基-5-庚烯-2-酮＞1-(3-吡啶基)-乙酮＞巨豆三烯酮A＞1-(1H-吡咯-2-基)-乙酮＞1-戊烯-3-酮。从含量减少的酮类物质来看，胡薄荷酮降幅最大，达到了20.53%，β-大马酮降幅最小，为2.73%，降幅顺序为：β-大马酮＜金合欢基丙酮A＜茄酮＜氧化异佛尔酮＜β-紫罗兰酮＜β-二氢大马酮＜香叶基丙酮＜胡薄荷酮。

烟叶接种枯草芽孢杆菌后，酮类致香物质总量两处理均为增加的，增幅较大的为：金合欢基丙酮B、3-羟基-2-丁酮、2,3,6-三甲基-1,4-萘二酮、1-(2-呋喃基)-乙酮、1-(3-吡啶基)-乙酮、巨豆三烯酮D、2-环戊烯-1,4-二酮、面包酮、巨豆三烯酮B、茄那士酮、巨豆三烯酮C、1-(1H-吡咯-2-基)-乙酮。相比之下，2×10⁸个/ml接种浓度的处理增幅较大，达到了13.07%。

表5不同处理酮类致香物质含量变化结果

4.6枯草芽孢杆菌对烯类致香物质的影响

不同处理烯类致香物质含量变化结果如表6所示，从试验结果看，接种枯草芽孢杆菌对烟叶中烯类致香物质含量有较明显变化。

从所检测的1种烯类致香物质新植二烯的结果看，在2×10⁸个/ml接种浓度下，含量为减少，降幅为2.52%；在4.8×10⁸个/ml接种浓度下，含量为增加，增幅为7.52%。

表6不同处理烯类致香物质含量变化结果

4.7枯草芽孢杆菌对酯类致香物质的影响

接种枯草芽孢杆菌对烟叶中酯类致香物质含量的影响结果列于表7。

在2×10⁸个/ml接种浓度下，7种酯类化合物含量均表现为增加的，亚麻酸甲酯增幅最大，达到了39.98%，苯二甲酸二丁酯增幅最小，为8.03%，7种酯类致香物质增幅顺序为：亚麻酸甲酯＞棕榈酸乙酯＞二氢猕猴桃内酯＞肉豆蔻酸甲酯＞丁内酯＞棕榈酸甲酯＞邻苯二甲酸二丁酯。

在4.8×10⁸个/ml接种浓度下，7种酯类化合物中含量增加的有6种，棕榈酸乙酯含量增幅较大，达到了45.64%，肉豆蔻酸甲酯含量增幅最小，为4.12%，6种酯类致香物质增幅顺序为：棕榈酸乙酯＞丁内酯＞邻苯二甲酸二丁酯＞二氢猕猴桃内酯＞亚麻酸甲酯＞肉豆蔻酸甲酯。含量减少的酯类物质为棕榈酸甲酯，降幅为4.13%。

烟叶接种枯草芽孢杆菌后，酯类致香物质总量两处理均为增加的，增幅较大的为：棕榈酸乙酯、丁内酯、邻苯二甲酸二丁酯、亚麻酸甲酯、二氢猕猴桃内酯、肉豆蔻酸甲酯。相比之下，2×10⁸个/ml接种浓度的处理增幅较大，达到了22.29%。

表7不同处理酯类致香物质含量变化结果

4.8枯草芽孢杆菌对杂环类致香物质的影响

不同处理杂环类致香物质含量变化结果如表8所示。从表8中结果看，在2×10⁸个/ml接种浓度下，10种杂环类化合物中含量增加的有8种，2,3'-联吡啶增幅最大，达到了25.94%，吡啶增幅最小，为3.16%，8种杂环类致香物质增幅顺序为：2,3'-联吡啶＞2,3-二氢苯并呋喃＞3-(1-甲基乙基)(1H)吡唑[3,4-b]吡嗪＞蒽＞丁基化羟基甲苯＞去氢去甲基烟碱＞2-乙酰基-1,4,5,6-四氢吡啶＞吡啶；含量减少的杂环类物质为2-戊基呋喃，降幅为4.26%；另外，吲哚含量未发生变化。

在4.8×10⁸个/ml接种浓度下，10种杂环类化合物中含量增加的有6种，蒽含量增幅较大，达到了53.28%，吡啶含量增幅最小，仅0.63%，6种杂环类致香物质增幅顺序为：蒽＞2-戊基呋喃＞2,3'-联吡啶＞3-(1-甲基乙基)(1H)吡唑[3,4-b]吡嗪＞2,3-二氢苯并呋喃＞吡啶。从含量减少的杂环类物质来看，去氢去甲基烟碱降幅最大，达到了30.56%，2-乙酰基-1,4,5,6-四氢吡啶降幅最小，为9.52%，降幅顺序为：2-乙酰基-1,4,5,6-四氢吡啶＜丁基化羟基甲苯＜吲哚＜去氢去甲基烟碱。

烟叶接种枯草芽孢杆菌后，杂环类致香物质总量两处理均为增加的，增幅较大的为：蒽、2,3'-联吡啶、3-(1-甲基乙基)(1H)吡唑[3,4-b]吡嗪、2,3-二氢苯并呋喃，降幅较大的为去氢去甲基烟碱。相比之下，2×10⁸个/ml接种浓度的处理增幅较大，达到了8.61%。

表8不同处理杂环类致香物质含量变化结果

4.9枯草芽孢杆菌对致香物质总量的影响

枯草芽孢杆菌对致香物质总量的影响如表9所示。由表9可以看出，用枯草芽孢杆菌处理的烟叶样品总致香物质含量均高于对照烟叶样品，且随着枯草芽孢杆菌用量的增加呈现出逐渐递增的趋势，即W2处理总致香物质的含量最高。

表9枯草芽孢杆菌对致香物质总量的影响

4.10枯草芽孢杆菌对烟叶感官品质的影响

不同处理烟叶感官品质结果如表10所示。由表10可以看出，烟叶接种枯草芽孢杆菌后，能提高香气质，改善吃味，减少杂气，降低刺激性，使烟气更为细腻、柔和，感官品质整体提高。不同接种浓度相比，4.8×10⁸个/ml接种浓度的处理效果较为明显，主要在香气量、吃味和柔和度上的改善效果优于2.0×10⁸个/ml接种浓度的处理。

表10不同处理烟叶感官品质结果

注：表中“+”表示有改善，“++”表示有较明显改善。

5结论与讨论

本试验从食品中筛选出具有产香功能的枯草芽孢杆菌（Bacillus sp，编号gzuifr-Bps），以2.0×10⁸个/ml和4.8×108个/ml两种不同接种浓度对烟叶进行试验，以探讨在特定环境下加入致香微生物对烟叶致香物质和感官品质的影响，就本试验初步分析的结果看：

（1）接种枯草芽孢杆菌后能够增加烟叶中致香物质的含量。其中，酸类、醇类、酯类致香物质的总量增幅较大，酸类中的棕榈酸+未知物、肉豆蔻酸，醇类中的西柏三烯二醇、寸拜醇、植醇、3-氧代-α-紫罗兰醇、3-甲基-1-丁醇、糠醇，酯类中的棕榈酸乙酯、亚麻酸甲酯、丁内酯、邻苯二甲酸二丁酯、二氢猕猴桃内酯、肉豆蔻酸甲酯，这些致香物质的含量增加较为明显。另外，2,4-庚二烯醛A、己酸、去氢去甲基烟碱3种致香物质的含量降幅也较明显。

（2）烟叶接种枯草芽孢杆菌后，致香物质总量随着枯草芽孢杆菌用量的增加呈现出逐渐递增的趋势，其中醇类、酚类、酸类、酮类、酯类、杂环类致香物质的总量均以2×10⁸个/ml接种浓度的处理较高，而醛类和烯类致香物质的总量均以4.8×10⁸个/ml接种浓度的处理较高。

（3）烟叶接种枯草芽孢杆菌后，能提高香气质，改善吃味，减少杂气，降低刺激性，使烟气更为细腻、柔和，感官品质整体提高与致香物质总量增加表现出一致性，即4.8×10⁸个/ml接种浓度的处理感官品质最好。

综上所述，本发明有效克服了现有技术中的种种缺点而具高度产业利用价值。

上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效，而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰或改变。因此，举凡所属技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变，仍应由本发明的权利要求所涵盖。

保藏号为：CCTCC M2013150；

保藏单位：中国典型培养物保藏中心；

保藏地址：中国武汉武汉大学；

保藏日期：2013年4月18日；

分类命名信息：枯草芽孢杆菌Gzzy jszx-01（Bacillus subtilis Gzzy jszx-01）。

Claims (3)

1.一种烟叶处理方法，包括如下步骤：

1)烟叶接种：使用枯草芽孢杆菌对烟叶进行接种；

2)发酵：将接种后的烟叶进行发酵；

所述烟叶为烤烟；

所述步骤1中，枯草芽孢杆菌的种类为芽孢杆菌Bacillus subtilis，保藏号为：CCTCC M2013150；

所述步骤1中，接种方法为喷洒枯草芽孢杆菌溶液；

所述步骤1中，所述枯草芽孢杆菌溶液的浓度为2×10⁸-4.8×10⁸个/ml，对烟草的接种量为0.01ml/g；

所述步骤2中，烟叶进行发酵的具体方法为：温度为室温，湿度为50-60％，发酵时间为15天以上。

2.如权利要求1所述的一种烟叶处理方法，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌溶液使用食品豆豉培养获得。

3.如权利要求1-2任一权利要求所述的烟叶处理方法在烟草制备领域的应用。