CN105907646B - 一种樟芝孢子粉及樟芝谷物粉的制备方法 - Google Patents

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    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor

Abstract

本发明提供的樟芝孢子粉及樟芝谷物粉的制备方法，由于发酵过程简单，并且效率高,能够获得大量的樟芝孢子粉，所以容易实现大规模生产，具有重要的工业应用价值；另外制备樟芝孢子粉的中间产物经烘干粉碎即可以得到具有樟芝芳香风味及具有良好的总抗氧化性的樟芝谷物粉。

Description

一种樟芝孢子粉及樟芝谷物粉的制备方法
技术领域
本发明公开了一种樟芝孢子粉及樟芝谷物粉的制备方法，属于微生物发酵技术领域。
背景技术
樟芝是台湾地区特有的一类十分珍稀的食药两用真菌，素有“神芝”、“森林中的红宝石”之称。自20世纪90年代樟芝被发现以来，越来越受到国内外学者的青睐。众多研究表明，樟芝具有解酒保肝、抗肿瘤、抗病毒、抗氧化、抗炎症和免疫调节等药理活性。作为一种极具开发潜力和应用前景的药用真菌，关于樟芝菌的代谢产物及其药理活性的研究近年来逐渐成为国内外研究和开发的热点。
由于樟芝的唯一宿主牛樟树是台湾地区特有的珍稀树种，加上野生樟芝子实体生长极其缓慢，使得天然野生樟芝子实体昂贵难求，完全无法满足社会需求，因此利用现代技术进行樟芝的人工培养已经成为解决供需矛盾的有效方式。目前主要有三种人工培养方式—椴木栽培法、固态发酵法和液态发酵法。其中椴木栽培法获得子实体，固态和液态发酵法获得樟芝的菌丝体。
除了樟芝菌丝体外，樟芝孢子也是活性成分的主要来源。樟芝孢子含有丰富的多糖、三萜类化合物，具有良好的保肝、调节免疫活性。 但是目前对于樟芝孢子的制备以及先关研究非常少，缺少获得樟芝孢子的方法。
发明内容
本发明要解决的技术问题是是提供一种樟芝孢子粉及樟芝谷物粉的制备方法，用于大规模生产制备樟芝孢子粉，开发出新型樟芝产品樟芝谷物粉。
本发明采用了以下技术方案：
本发明提供的樟芝孢子粉及樟芝谷物粉的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一，以樟芝菌株(Antrodia camphorata)S-29为生产菌株，接入到液态种子培养基中培养得到液态种子；
步骤二，将按一定接入比例接入液态种子后的谷物固态发酵培养基放入发酵容器中，在温度28℃、湿度60-90％的条件下进行8-20天的固态发酵，得到含有樟芝孢子粉的发酵谷物；
步骤三，将发酵谷物从谷物固态发酵培养基中取出，放置到振动筛上进行振动筛分，在振动筛的筛面下收集得到樟芝孢子粉，在振动筛的筛面上得到固体谷物；
步骤四，将固体谷物烘干粉碎后，得到樟芝谷物粉。
本发明提供的樟芝孢子粉及樟芝谷物粉的制备方法，还具有这样的特征，其中，发酵容器包括支撑板及多个容纳单元，容纳单元为若干个开口设置在支撑板上并且底端向下延伸的圆柱筒，圆柱筒用于放 置谷物固态发酵培养基，圆柱筒的侧壁上设置有若干个用于通风散热的贯穿孔。
本发明提供的樟芝孢子粉及樟芝谷物粉的制备方法，还具有这样的特征：其中，在步骤二中，谷物固态发酵培养基的主体物质为粮食谷物类，接入比例为按谷物固态发酵培养基中每100g粮食谷物类接入10-40ml的液态种子。
本发明提供的樟芝孢子粉及樟芝谷物粉的制备方法，还具有这样的特征：其中，粮食谷物类为玉米、黑米、大米、小米、青稞中的任意一种或任意两种以上。
本发明提供的樟芝孢子粉及樟芝谷物粉的制备方法，还具有这样的特征：其中，在步骤四中，烘干的温度为40-80℃。
本发明提供的樟芝孢子粉及樟芝谷物粉的制备方法，还具有这样的特征：其中，在步骤二中得到的发酵谷物，每1kg发酵谷物中含有0.4～4.7g的樟芝孢子粉。
发明作用与效果
本发明提供的樟芝孢子粉及樟芝谷物粉的制备方法，由于发酵过程简单，并且效率高，能够获得大量的樟芝孢子粉，所以容易实现大规模生产，具有重要的工业应用价值。
附图说明
图1是本发明的实施例中的发酵容器结构示意图；
图2是本发明的实施例中的发酵容器的容纳单元的结构示意图。
具体实施方式
以下结合具体实施例进一步阐述本发明。对于实施例中所用到的具体方法或材料，本领域技术人员可以在本发明技术思路的基础上，根据已有的技术进行常规的替换选择，而不仅限于本发明实施例的具体记载。
下述实施实例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法；所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1
图1是本发明的实施例中的发酵容器结构示意图；
图2是本发明的实施例中的发酵容器的容纳单元的结构示意图。
本实施例提供的樟芝孢子粉及樟芝谷物粉的制备方法，采用如图1、图2所示的发酵容器100进行固态发酵，发酵容器100包括支撑板10和多个容纳单元20，容纳单元20为开口设置在支撑板上的圆柱筒，圆柱筒上设置多个贯穿的小孔21，固态培养时，固态培养基放置在各个圆柱筒内培养，培养过程中，通过小孔21进行通风换气。
本实施例提供的包括以下步骤：
步骤一，准备阶段，
斜面培养基：采用麦芽汁琼脂培养基；
液态种子培养基组成为(g/L)：每1L液态培养基中包括葡萄糖 20g、胰蛋白胨4g、玉米浆粉2g；
固态发酵培养基：采用以下谷物玉米、黑米、大米、小米、青稞中的任意一种或任意两种以上作为基本料制成谷物固态发酵培养基，本实施例中的固态培养基组成为：大米100g、大豆蛋白胨0.6g、MgSO4 0.05g、KH2PO4 0.05g；
生产菌株：采用牛樟芝菌株(Antrodia camphorata)S-29为生产菌株。该牛樟芝菌株(Antrodia camphorata)S-29已于2014年09月09日保藏于中国普通微生物保藏中心(地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号)，其保藏编号为CGMCC 9590。
步骤二，激活菌种，
将准备好的樟芝菌株在斜面培养基内在温度28℃的条件下培养12天，得到激活的樟芝菌种；
步骤三，培养液态种子，
将步骤一激活得到的樟芝菌种接入到液态种子培养基中，在温度30℃的条件下培养3天得到液态种子；
步骤四，浸泡谷物固态发酵培养基，按以下比例向谷物固态发酵培养基中加入自来水：每100g大米中加入80ml，然后在温度25℃的条件下浸泡谷物固态发酵培养基15个小时；
步骤五，进行固态发酵，
将以下接入比例将步骤二得到的液体种子接入谷物固态发酵培养基中：每100g谷物固态发酵培养基中接入10ml的液态种子，
然后将接入液态种子后的谷物固态发酵培养基放入发酵容器100的各个圆柱筒容纳单元20内，在温度28℃、湿度60％的条件下进行8天的固态发酵，得到含有樟芝孢子粉的发酵谷物；
步骤六，将发酵谷物从谷物固态发酵培养基中取出，放置到实验振动筛上进行振动筛分，在实验振动筛的筛面下收集得到樟芝孢子粉，在振动筛的筛面上得到固体谷物；
步骤七，将固体谷物放入烘箱内，在40℃下烘干，然后经粉碎机粉碎后，得到樟芝谷物粉。
产物成分
本实施例中制备的中间产物固体谷物中，每1kg的固体谷物就含有0.4g的樟芝孢子粉。
本实施例制备得到的樟芝谷物粉，经检测，抗氧化性为120U/g。
实施例2
图1是本发明的实施例中的发酵容器结构示意图；
图2是本发明的实施例中的发酵容器的容纳单元的结构示意图。
本实施例提供的樟芝孢子粉及樟芝谷物粉的制备方法，采用如图1、图2所示的发酵容器100进行固态发酵，发酵容器100包括支撑板10和多个容纳单元20，容纳单元20为开口设置在支撑板上的圆柱筒，圆柱筒上设置多个贯穿的小孔21，固态培养时，固态培养基放置在各个圆柱筒内培养，培养过程中，通过小孔21进行通风换气。
本实施例提供的包括以下步骤：
步骤一，准备阶段，
斜面培养基：采用麦芽汁琼脂培养基；
液态种子培养基组成为(g/L)：每1L液态培养基中包括葡萄糖20g、胰蛋白胨4g、玉米浆粉2g；
固态发酵培养基：采用以下谷物玉米、黑米、大米、小米、青稞中的任意一种或任意两种以上作为基本料制成谷物固态发酵培养基，本实施例中的固态培养基组成为：大米100g、大豆蛋白胨0.6g、MgSO4 0.05g、KH2PO4 0.05g；
生产菌株：采用牛樟芝菌株(Antrodia camphorata)S-29为生产菌株。该牛樟芝菌株(Antrodia camphorata)S-29已于2014年09月09日保藏于中国普通微生物保藏中心(地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号)，其保藏编号为CGMCC 9590。
步骤二，激活菌种，
将准备好的樟芝菌株在斜面培养基内在温度28℃的条件下培养12天，得到激活的樟芝菌种；
步骤三，培养液态种子，
将步骤二激活得到的樟芝菌种接入到液态种子培养基中，在温度30℃的条件下培养3天得到液态种子；
步骤四，浸泡谷物固态发酵培养基，按以下比例向谷物固态发酵培养基中加入自来水：每100g大米中加入80ml，
然后在温度25℃的条件下浸泡谷物固态发酵培养基15个小时；
步骤五，进行固态发酵，
将以下接入比例将步骤二得到的液体种子接入谷物固态发酵培养基中：每100g谷物固态发酵培养基中接入20ml的液态种子，
然后将接入液态种子后的谷物固态发酵培养基放入发酵容器100的各个圆柱筒容纳单元20内，在温度28℃、湿度75％的条件下进行15天的固态发酵，得到含有樟芝孢子粉的发酵谷物；
步骤六，将发酵谷物从谷物固态发酵培养基中取出，放置到实验振动筛上进行振动筛分，在实验振动筛的筛面下收集得到樟芝孢子粉，在振动筛的筛面上得到固体谷物；
步骤七，将固体谷物放入烘箱内，在60℃下烘干，然后经粉碎机粉碎后，得到樟芝谷物粉。
产物成分
本实施例的方法制备得到的固体谷物中，每1kg的固体谷物就含有1.7g的樟芝孢子粉。
本实施例制备得到的樟芝谷物粉，具有樟芝芳香风味，经检测，抗氧化性为185U/g。
实施例3
图1是本发明的实施例中的发酵容器结构示意图；
图2是本发明的实施例中的发酵容器的容纳单元的结构示意图。
本实施例提供的樟芝孢子粉及樟芝谷物粉的制备方法，采用如图1、图2所示的发酵容器100进行固态发酵，发酵容器100包括支撑板10和多个容纳单元20，容纳单元20为开口设置在支撑板上的圆柱筒，圆柱筒上设置多个贯穿的小孔21，固态培养时，固态培养基放置在各个圆柱筒内培养，培养过程中，通过小孔21进行通风换气。
本实施例提供的包括以下步骤：
步骤一，准备阶段，
斜面培养基：采用麦芽汁琼脂培养基；
液态种子培养基组成为(g/L)：每1L液态培养基中包括葡萄糖20g、胰蛋白胨4g、玉米浆粉2g；
固态发酵培养基：采用以下谷物玉米、黑米、大米、小米、青稞中的任意一种或任意两种以上作为基本料制成谷物固态发酵培养基，本实施例中的固态培养基组成为：大米100g、大豆蛋白胨0.6g、MgSO4 0.05g、KH2PO4 0.05g；
生产菌株：采用牛樟芝菌株(Antrodia camphorata)S-29为生产菌株。该牛樟芝菌株(Antrodia camphorata)S-29已于2014年09月09日保藏于中国普通微生物保藏中心(地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号)，其保藏编号为CGMCC 9590。
步骤二，激活菌种，
将准备好的樟芝菌株在斜面培养基内在温度28℃的条件下培养 12天，得到激活的樟芝菌种；
步骤三，培养液态种子，
将步骤二激活得到的樟芝菌种接入到液态种子培养基中，在温度30℃的条件下培养3天得到液态种子；
步骤四，浸泡谷物固态发酵培养基，按以下比例向谷物固态发酵培养基中加入自来水：每100g大米中加入80ml，
然后在温度25℃的条件下浸泡谷物固态发酵培养基15个小时；
步骤五，进行固态发酵，
将以下接入比例将步骤二得到的液体种子接入谷物固态发酵培养基中：每100g谷物固态发酵培养基中接入40ml的液态种子，
然后将接入液态种子后的谷物固态发酵培养基放入发酵容器100的各个圆柱筒容纳单元20内，在温度28℃、湿度90％的条件下进行20天的固态发酵，得到含有樟芝孢子粉的发酵谷物；
步骤六，将发酵谷物从谷物固态发酵培养基中取出，放置到实验振动筛上进行振动筛分，在实验振动筛的筛面下收集得到樟芝孢子粉，在振动筛的筛面上得到固体谷物；
步骤七，将固体谷物放入烘箱内，在80℃下烘干，然后经粉碎机粉碎后，得到樟芝谷物粉。
产物成分
本实施例的制备方法得到的中间产物固体谷物中，每1kg的固体 谷物就含有1.2g的樟芝孢子粉，可见发酵过程简单，效率高，容易实现大规模生产，具有重要的工业应用价值。
本实施例制备得到的樟芝谷物粉，具有樟芝芳香风味经检测，抗氧化性为520U/g。
实施例4
图1是本发明的实施例中的发酵容器结构示意图；
图2是本发明的实施例中的发酵容器的容纳单元的结构示意图。
本实施例提供的樟芝孢子粉及樟芝谷物粉的制备方法，采用如图1、图2所示的发酵容器100进行固态发酵，发酵容器100包括支撑板10和多个容纳单元20，容纳单元20为开口设置在支撑板上的圆柱筒，圆柱筒上设置多个贯穿的小孔21，固态培养时，固态培养基放置在各个圆柱筒内培养，培养过程中，通过小孔21进行通风换气。
本实施例提供的包括以下步骤：
步骤一，准备阶段，
斜面培养基：采用麦芽汁琼脂培养基；
液态种子培养基组成为(g/L)：每1L液态培养基中包括葡萄糖20g、胰蛋白胨4g、玉米浆粉2g；
固态发酵培养基：采用以下谷物玉米、黑米、大米、小米、青稞中的任意一种或任意两种以上作为基本料制成谷物固态发酵培养基，本实施例中的固态培养基组成为：大米100g、大豆蛋白胨0.6g、MgSO4 0.05g、KH2PO4 0.05g；
生产菌株：采用牛樟芝菌株(Antrodia camphorata)S-29为生产菌株。该牛樟芝菌株(Antrodia camphorata)S-29已于2014年09月09日保藏于中国普通微生物保藏中心(地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号)，其保藏编号为CGMCC 9590。
步骤二，激活菌种，
将准备好的樟芝菌株在斜面培养基内在温度28℃的条件下培养12天，得到激活的樟芝菌种；
步骤三，培养液态种子，
将步骤二激活得到的樟芝菌种接入到液态种子培养基中，在温度30℃的条件下培养3天得到液态种子；
步骤四，浸泡谷物固态发酵培养基，按以下比例向谷物固态发酵培养基中加入自来水：每100g大米中加入80ml，
然后在温度25℃的条件下浸泡谷物固态发酵培养基15个小时；
步骤五，进行固态发酵，
将以下接入比例将步骤二得到的液体种子接入谷物固态发酵培养基中：每100g谷物固态发酵培养基中接入20ml的液态种子，
然后将接入液态种子后的谷物固态发酵培养基放入发酵容器100的各个圆柱筒容纳单元20内，在温度28℃、湿度75％的条件下进行15天的固态发酵，得到含有樟芝孢子粉的发酵谷物；
步骤六，将发酵谷物从谷物固态发酵培养基中取出，放置到实验振动筛上进行振动筛分，在实验振动筛的筛面下收集得到樟芝孢子 粉，在振动筛的筛面上得到固体谷物；
步骤七，将固体谷物放入烘箱内，在60℃下烘干，然后经粉碎机粉碎后，得到樟芝谷物粉。
产物成分
本实施例的制备方法得到的中间产物固体谷物中，每1kg的固体谷物就含有2.4g的樟芝孢子粉。
本实施例制备得到的樟芝谷物粉，具有樟芝芳香风味，经检测，抗氧化性为240U/g。
实施例5
图1是本发明的实施例中的发酵容器结构示意图；
图2是本发明的实施例中的发酵容器的容纳单元的结构示意图。
本实施例提供的樟芝孢子粉及樟芝谷物粉的制备方法，采用如图1、图2所示的发酵容器100进行固态发酵，发酵容器100包括支撑板10和多个容纳单元20，容纳单元20为开口设置在支撑板上的圆柱筒，圆柱筒上设置多个贯穿的小孔21，固态培养时，固态培养基放置在各个圆柱筒内培养，培养过程中，通过小孔21进行通风换气。
本实施例提供的包括以下步骤：
步骤一，准备阶段，
斜面培养基：采用麦芽汁琼脂培养基；
液态种子培养基组成为(g/L)：每1L液态培养基中包括葡萄糖 20g、胰蛋白胨4g、玉米浆粉2g；
固态发酵培养基：采用以下谷物玉米、黑米、大米、小米、青稞中的任意一种或任意两种以上作为基本料制成谷物固态发酵培养基，本实施例中的固态培养基组成为：大米100g、大豆蛋白胨0.6g、MgSO4 0.05g、KH2PO4 0.05g；
生产菌株：采用牛樟芝菌株(Antrodia camphorata)S-29为生产菌株。该牛樟芝菌株(Antrodia camphorata)S-29已于2014年09月09日保藏于中国普通微生物保藏中心(地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号)，其保藏编号为CGMCC 9590。
步骤二，激活菌种，
将准备好的樟芝菌株在斜面培养基内在温度28℃的条件下培养12天，得到激活的樟芝菌种；
步骤三，培养液态种子，
将步骤一激活得到的樟芝菌种接入到液态种子培养基中，在温度30℃的条件下培养3天得到液态种子；
步骤四，浸泡谷物固态发酵培养基，按以下比例向谷物固态发酵培养基中加入自来水：每100g大米中加入80ml，
然后在温度25℃的条件下浸泡谷物固态发酵培养基15个小时；
步骤五，进行固态发酵，
将以下接入比例将步骤二得到的液体种子接入谷物固态发酵培养基中：每100g谷物固态发酵培养基中接入25ml的液态种子，
然后将接入液态种子后的谷物固态发酵培养基放入发酵容器100的各个圆柱筒容纳单元20内，在温度28℃、湿度90％的条件下进行8天的固态发酵，得到含有樟芝孢子粉的发酵谷物；
步骤六，将发酵谷物从谷物固态发酵培养基中取出，放置到实验振动筛上进行振动筛分，在实验振动筛的筛面下收集得到樟芝孢子粉，在振动筛的筛面上得到固体谷物；
步骤七，将固体谷物放入烘箱内，在60℃下烘干，然后经粉碎机粉碎后，得到樟芝谷物粉。
产物成分
本实施例的制备方法得到的中间产物固体谷物中，每1kg的固体谷物就含有4.7g的樟芝孢子粉。
本实施例制备得到的樟芝谷物粉，具有樟芝芳香风味，经检测，抗氧化性为340U/g。
实施例作用与效果
实施例1-5提供的樟芝孢子粉及樟芝谷物粉的制备方法，由于进行固态发酵时采用的发酵容器的容纳单元上具有多个镂空的小孔，解决了固态发酵中热量不易散发和通风换气困难的问题，十分有利于樟芝固态发酵，从而通过简单控制培养条件就能得到大量的樟芝孢子粉，每1kg的固体谷物含有的樟芝孢子粉可高达4.7g，所以实施例提供的制备方法发酵过程简单，效率高，容易实现大规模生产，具有重 要的工业应用价值。
本实施例制备得到的樟芝谷物粉，经检测，抗氧化性高达520U/g，具有较高的保健价值。

Claims (6)

1.一种樟芝孢子粉及樟芝谷物粉的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一，以牛樟芝菌株(Antrodia camphorata)S-29为生产菌株，接入到液态种子培养基中在温度30℃的条件下培养3天得到液态种子，所述牛樟芝菌株(Antrodia camphorata)S-29已于2014年09月09日保藏于中国普通微生物保藏中心，其保藏编号为CGMCC 9590；
步骤二，将按一定接入比例接入所述液态种子后的谷物固态发酵培养基放入发酵容器中，在温度28℃、湿度60-90％的条件下进行8-20天的固态发酵，得到含有樟芝孢子粉的发酵谷物；
步骤三，将所述发酵谷物从所述谷物固态发酵培养基中取出，放置到振动筛上进行振动筛分，在所述振动筛的筛面下收集得到所述樟芝孢子粉，在所述振动筛的筛面上得到固体谷物；
步骤四，将所述固体谷物烘干粉碎后，得到所述樟芝谷物粉。
2.根据权利要求1所述的樟芝孢子粉及樟芝谷物粉的制备方法，其特征在于：
其中，所述发酵容器包括支撑板及多个容纳单元，所述容纳单元为若干个开口设置在所述支撑板上并且底端向下延伸的圆柱筒，所述圆柱筒用于放置所述谷物固态发酵培养基，
所述圆柱筒的侧壁上设置有若干个用于通风散热的贯穿孔。
3.根据权利要求1所述的樟芝孢子粉及樟芝谷物粉的制备方法，其特征在于：
其中，在步骤二中，所述谷物固态发酵培养基的主体物质为粮食谷物类，
所述接入比例为按所述谷物固态发酵培养基中每100g所述粮食谷物类接入10-40ml的所述液态种子。
4.根据权利要求3所述的樟芝孢子粉及樟芝谷物粉的制备方法，其特征在于：
其中，所述粮食谷物类为玉米、黑米、大米、小米、青稞中的任意一种或任意两种以上。
5.根据权利要求1所述的樟芝孢子粉及樟芝谷物粉的制备方法，其特征在于：
其中，在所述步骤四中，所述烘干的温度为40-80℃。
6.根据权利要求1所述的樟芝孢子粉及樟芝谷物粉的制备方法，其特征在于：
其中，在步骤二中得到的所述发酵谷物，每1kg所述发酵谷物中含有0.4～4.7g的所述樟芝孢子粉。
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