CN104198686B - 一种尿酸测定试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种用于尿酸测定试剂盒的复合稳定剂，所述复合稳定剂包括明胶、海藻糖、丙二醇、聚氧乙烯月桂醚和液体生物防腐剂Proclin 300，各组分的含量为：明胶 3~8 g/L、海藻糖 8~12 g/L、丙二醇 10~20 g/L、聚氧乙烯月桂醚 0.5~2.0 g/L、Proclin 300 0.5~2.0 g/L。通过上述方式，本发明的复合稳定剂加入到尿酸测定试剂盒中后，能延长尿酸测定试剂盒的保存时间，且测定结果准确度更高，稳定性更好，另外，该复合稳定剂成本低廉，配制简单，值得进一步推广使用。
Description
技术领域
本发明涉及体外诊断领域，特别是涉及一种用于尿酸测定试剂盒的复合稳定剂。
背景技术
尿酸是人体内嘌呤分解代谢的最终产物，由肾脏随尿液排出体外。尿酸是血浆中非蛋白氮重要成分之一，在严重肾脏损害时，血中尿酸可显著升高，而轻度受损时变化不大，故血浆中尿酸测定是诊断肾重度受损的敏感指标。目前测定尿酸含量多采用尿酸酶-过氧化物酶偶联法，此方法测定快速、准确，但是由于试剂盒中包含尿酸酶与过氧化物酶，而酶活性易受到pH、温度、紫外线、重金属盐、抑制剂、激活剂等各种因素的干扰，导致尿酸测定试剂盒缺乏稳定性，保存时间短，直接影响到临床使用。
目前关于尿酸测定试剂及其稳定性的报道非常有限。专利CN201310591044中提到一种尿酸测定试剂，包含尿酸酶、过氧化物酶、底物、显色剂、缓冲液、防腐剂等，但并未涉及该试剂的稳定性研究；专利CN200510111883提供了一种酶复合稳定剂，对单独的酶溶液具有良好的稳定效果，但并未提及对于成分更加复杂的试剂盒也可起到类似的稳定作用，且该稳定剂组成成分较复杂，包含牛血清白蛋白、乙二醇二乙醚二胺四乙酸（EGTA）、1,2-二硫代苏糖醇、葡萄糖酸钾、氯化钠、Proclin 300、醋酸镁等，容易对检测结果产生干扰。因此研究一种配制简单、成本低廉、对尿酸测定试剂盒有良好稳定效果的复合稳定剂，是非常必要的。
发明内容
本发明主要解决的技术问题是提供一种用于尿酸测定试剂盒的复合稳定剂，该复合稳定剂要配制简单、成本低廉且对尿酸测定试剂盒有良好的稳定效果。
为解决上述技术问题，本发明采用的一个技术方案是：提供一种用于尿酸测定试剂盒的复合稳定剂，所述复合稳定剂包括明胶、海藻糖、丙二醇、聚氧乙烯月桂醚和液体生物防腐剂Proclin 300，各组分的含量为：明胶 3~8 g/L、海藻糖 8~12 g/L、丙二醇 10~20 g/L、聚氧乙烯月桂醚 0.5~2.0 g/L、Proclin 300 0.5~2.0 g/L。
在本发明实施例中，所述复合稳定剂组分的含量为：明胶 5 g/L、海藻糖 10 g/L、丙二醇 15 g/L、聚氧乙烯月桂醚 1 g/L、Proclin 300 1g/L。
在本发明实施例中，所述复合稳定剂应用于尿酸测定试剂盒中，所述尿酸测定试剂盒包括第一试剂和第二试剂，所述第一试剂的组分为磷酸氢二钾 17.417g/L、磷酸二氢钾 2.3g/L、亚铁氰化钾 0.127g/L、4-氨基安替比林 0.122 g/L、尿酸酶 2000U/L，所述第二试剂的组分为磷酸氢二钾 17.417g/L、磷酸二氢钾 2.3g/L、ESPAS 1.476g/L、过氧化物酶4000U/L。
在本发明实施例中，所述复合稳定剂的使用量在尿酸测定试剂盒中的体积分数为0.5%。
本发明的有益效果是：本发明的用于尿酸测定试剂盒的复合稳定剂，能延长尿酸测定试剂盒的保存时间，且测定结果准确度更高，稳定性更好。另外，该复合稳定剂成本低廉，配制简单，更值得推广使用。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图，其中：
图1是本发明稳定性试验中质控血清2的稳定性试验结果；
图2是本发明稳定性试验中质控血清3的稳定性试验结果。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明以下实施例中涉及的仪器有：UV Blue Star紫外分光光度计1台（北京莱伯泰科仪器有限公司，亦或者其它品牌）、恒温数显水浴锅1台（上海梅香仪器有限公司，亦或者其它品牌）。
提供一种用于尿酸测定试剂盒的复合稳定剂，所述复合稳定剂包括明胶、海藻糖、丙二醇、聚氧乙烯月桂醚和液体生物防腐剂Proclin 300，各组分的含量为：明胶 5 g/L、海藻糖 10 g/L、丙二醇 15 g/L、聚氧乙烯月桂醚 1 g/L、Proclin 300 1g/L。
将上述复合稳定剂应用于尿酸测定试剂盒中，并从准确度、稳定性及使用量三方面进行评价。
（一）准确度试验：
1、供试稳定剂：上述复合稳定剂。
2、供试试剂盒为尿酸测定试剂盒，由试剂1和试剂2组成。组分如下：
试剂1：磷酸氢二钾 17.417g/L、磷酸二氢钾 2.3g/L、亚铁氰化钾 0.127g/L、4-氨基安替比林 0.122 g/L、尿酸酶 2000U/L；
试剂2：磷酸氢二钾 17.417g/L、磷酸二氢钾 2.3g/L、ESPAS 1.476g/L、过氧化物酶4000U/L。
3、试验方法及结果：
配制复合稳定剂，按1%（v/v）的量加入到尿酸试剂盒中（试剂1和试剂2均按此量添加），与不添加复合稳定剂的尿酸试剂盒分别测定样本中尿酸含量。本试验以英国朗道质控血清水平2（质控2）和质控血清水平3（质控3）为样本，标准品另购，采用紫外可见分光光度计进行检测，设一个空白测试、一个标准测试、两个样本测试，其中空白测试以蒸馏水代替样本。样本与试剂1和试剂2 的比例为：40μL：1000μL：500μL，设定的主波长为546nm、副波长为660nm，样本与试剂1混匀后，37℃孵育3.5min，读取各管吸光度A1，加入试剂2混匀后反应5min，读取吸光度A2，每管的吸光度变化△A=A2-A1，扣除试剂空白后计算出样本、标准品的吸光度变化值△A样本、△A标准，然后根据公式尿酸（mg/dL）=△A样本/△A标准× C标准计算出样本中尿酸含量（C标准为标准品浓度）。质控血清2 尿酸的靶值为5.73mg/dL，质控血清3尿酸的靶值为9.24mg/dL，允许误差范围在±10%。
根据以上测定方法，以同批次同瓶装的质控血清2、质控血清3作为检测样本，分别用添加1%（体积比）复合稳定剂的尿酸测定试剂盒和不添加复合稳定剂的尿酸测定试剂盒进行检测，连续检测8次，计算得到测定结果的平均值、相对偏差。相对偏差这项可反映测定结果的准确性。准确度比较试验结果见下表。
由上表数据可知，无论是否加入稳定剂，相对偏差都在允许范围内，说明1%复合稳定剂的加入并没有影响试剂盒测量的准确度，甚至加入1%稳定剂后试剂盒测定数据的准确度还有所提升，使其测定值更接近靶值。
（二）稳定性试验：
1、供试稳定剂：上述复合稳定剂。
2、供试试剂为尿酸测定试剂盒，组分参照准确度试验。
3、试验方法及结果
配制复合稳定剂，按1%（v/v）的量加入尿酸试剂盒中（试剂1和试剂2均按此量添加），与不添加复合稳定剂的尿酸试剂盒分别测定样本中尿酸含量。本试验以英国朗道质控血清水平2（质控2）和质控血清水平3（质控3）为样本，按准确度试验的测定方法，每5天测试一次，每次做三个平行并取其平均值，检测周期40天，共测试8次，得到针对质控血清2、质控血清3的测试结果。以测试天数作为横坐标，以测定平均值作为纵坐标作图，详见图1和图2。
由图1、2可以观察到，加入复合稳定剂的尿酸试剂盒，每次的测定值均在其靶值线附近上下浮动，相对地，未加入稳定剂的尿酸测定试剂盒仅在前期表现出良好的测试结果，后期偏离靶值线幅度较大，甚至超出了准确度偏差允许范围。由此可见，添加了1%复合稳定剂的试剂盒在测试稳定性方面表现更为优异，复合稳定剂对尿酸试剂盒有明显的稳定效果，可有效延长尿酸测定试剂盒的保存期限。
（三）使用量对比试验
1、供试稳定剂：上述复合稳定剂。
2、供试试剂为尿酸测定试剂盒，组分参照准确度试验。
3、试验方法及结果
将复合稳定剂按照0.1%（v/v）、0.5%（v/v）和1%（v/v）的比例分别加入尿酸试剂盒中（试剂1和试剂2均按同样量添加），进行样本中尿酸含量的测定。按本发明稳定性试验的测定方法测定，连续检测8次，计算得到测定结果的平均值、相对偏差、标准偏差，结果见下表。相对偏差这项可反映测定结果的准确性，标准偏差这项可反映测定结果的稳定性。
由上表数据可知，复合稳定剂的三种不同加入量对尿酸测定试剂盒的准确度均没有影响，测量值均在靶值允许偏差范围内，其中0.5%添加量的试剂盒相对偏差最小，分别为0.17%和0.11%，表明添加0.5%复合稳定剂的尿酸测定试剂盒准确度优于其它两种添加量。此外，从标准偏差数据来看，0.5%添加量的试剂盒的数值最小，仅为3.12%和6.05%，说明0.5%复合稳定剂的尿酸测定试剂盒重复性最佳，该试剂盒更为稳定，在试剂盒开瓶后40天左右还能保持良好的测试性能。从准确度和稳定性角度来看，0.5%可定为复合稳定剂在尿酸测定试剂盒中的最佳加入量。
从以上数据和分析结果可以得到，尿酸测定试剂盒加入本发明所述复合稳定剂后，能延长尿酸测定试剂盒的保存时间，测定结果准确度更高，稳定性更好，且最适加入体积比大约为0.5%。此外，该复合稳定剂成本低廉，配制简单，具有进一步推广价值。
以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书内容所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其它相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。
Claims (3)
1.一种尿酸测定试剂盒，其特征在于，包括用于尿酸测定试剂盒的复合稳定剂，和用于尿酸测定的第一试剂和第二试剂，所述复合稳定剂包括明胶、海藻糖、丙二醇、聚氧乙烯月桂醚和液体生物防腐剂Proclin 300，各组分的含量为：明胶 3~8 g/L、海藻糖 8~12 g/L、丙二醇 10~20 g/L、聚氧乙烯月桂醚 0.5~2.0 g/L、Proclin 300 0.5~2.0 g/L，所述第一试剂的组分为磷酸氢二钾 17.417g/L、磷酸二氢钾 2.3g/L、亚铁氰化钾 0.127g/L、4-氨基安替比林 0.122
g/L、尿酸酶 2000U/L，所述第二试剂的组分为磷酸氢二钾
17.417g/L、磷酸二氢钾 2.3g/L、ESPAS
1.476g/L、过氧化物酶4000U/L。
2.根据权利要求1所述的尿酸测定试剂盒，其特征在于，所述复合稳定剂组分的含量为：明胶 5 g/L、海藻糖 10 g/L、丙二醇 15 g/L、聚氧乙烯月桂醚 1 g/L、Proclin 300 1g/L。
3.根据权利要求1所述的尿酸测定试剂盒，其特征在于，所述复合稳定剂的使用量在尿酸测定试剂盒中的体积分数为0.5%。
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| CN102863495A (zh) * | 2011-07-06 | 2013-01-09 | 上海执诚生物科技股份有限公司 | 一种含有nad+或nadh的稳定的组合物 |
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