CN104189139A

CN104189139A - 黑莓籽有效成分在制备降血脂保健品或药物上的应用

Info

Publication number: CN104189139A
Application number: CN201410334901.4A
Authority: CN
Inventors: 魏金凤; 周琳; 康文艺; 尹震花
Original assignee: Henan University
Current assignee: Henan University
Priority date: 2014-07-15
Filing date: 2014-07-15
Publication date: 2014-12-10

Abstract

本发明属于植物提取物应用技术领域，具体涉及黑莓籽有效成分的另一种新应用，具体涉及其在具有调节脂质代谢和抗脂质过氧化作用的降血脂保健品或药物上的应用。本发明研究证实了黑莓籽石油醚部位、正丁醇部位和黑莓籽油对高脂血症小鼠具有调节脂质代谢和抗脂质过氧化作用，能改善脂质在小鼠肝脏和脾中的蓄积，减少氧化应激，推测其是黑莓籽有效成分降血脂的作用机制之一。

Description

黑莓籽有效成分在制备降血脂保健品或药物上的应用

技术领域

本发明属于植物提取物应用技术领域，具体涉及一种黑莓籽有效成分在制备降血脂保健品或药物上的新应用。

背景技术

随着人们生活水平的提高和医学科学的进步，人们的健康水平得到很大的提高，在控制感染性疾病方面得到了很大的进步。血脂异常俗称高脂血症。近年来，随着生活习惯和饮食习惯改变等因素影响，高脂血症发病率有明显增长趋势，已经成为危害人类身体健康的重大疾病之一，是引发动脉粥样硬化的最主要因素，动脉粥样硬化所致的心血管疾病是当前危机人类健康和生命的主要疾病之一。心脑血管病具有发病率高、致残率高、死亡率高和复发率高的特点。这类病在全世界已成为危害人类健康的“头号杀手”。美国心肺血研究院进行7年的冠心病防治研究证实，降血脂药的应用可减少心脏病死亡率 24%，减少非致死性心脏病发作率19%。降脂药能延缓或减轻AS病变的发展，并促进其消退。

目前国外开发的新型降血脂药物多是人工合成的化合物，并且多以他汀类降脂药为主，但有肝脏和肌肉毒副作用，严重者可导致横纹肌溶解症。我国的降血脂药物多是天然的、无毒的或无毒副作用的。目前有三十多种中药被用于高脂血症的治疗当中，已报道的中药降脂活性成分包括蛋白质、黄酮类、皂苷类、活性多糖、不饱和脂肪酸、酚类成分、蒽醌类、生物碱类和萜类等。中药降脂药疗效肯定、持续、副作用小。随着现代科技手段的不断进步，众多中外学者对中药中具有降脂活性的成分进行研究发现中药的降脂作用主要从抑制胆固醇的吸收、调节血脂代谢、促进胆固醇排泄来体现，科学地解释了中药的治疗机制，为应用中药治疗高脂血症提供了理论依据。

在当今时代，为预防和治疗世界上日益增多的高血脂及其相关的心脑血管病患者，深入研究具有降脂功能的食物和药用植物，努力发现和开发降脂作用显著、没有任何毒副作用的降血脂药物或保健食品成为国内外的研究热点。

黑莓 (Rubus spp. Blackberry) 属于蔷薇科 (Rasaceae) 悬钩子属聚合果类植物，其果实具有很高的营养价值和药用价值，具有改善人体新陈代谢、清除自由基、延缓衰老、增强免疫力等功能，特别具有降低胆固醇含量、防治心脏疾病、抗癌 (降低化疗引起的毒副作用) 和抗血栓的功效。

黑莓籽是黑莓果酒、黑莓汁等加工产品的副产物，含有丰富的多酚类化合物，多年来被大量遗弃，造成资源的大量浪费。近几年，技术人员从黑莓籽中提取了黑莓籽油。

研究表明，黑莓籽油含有较高的不饱和脂肪酸，如棕榈酸、硬脂酸、油酸、亚油酸和亚麻酸等，能够提供给人体基本的脂肪酸，而且这些脂肪酸不能通过任何已知的化学途径合成，必须从食物中获取。另外，籽油具有有效清除自由基、有效抑制H₂O₂诱导的小鼠红细胞氧化溶血和VC- FeSO₄体系诱导的小鼠肝组织丙二醛生成及VC-FeSO₄体系诱导的小鼠肝线粒体肿胀的作用，与其抗心血管脂氧化和抗癌活性息息相关；此外，还发现黑莓籽经脱脂后的主要有效成分为原花青素，是由单体黄烷-3-醇以不同聚合度连接而成的多酚类化合物，具有高效的清除自由基的能力，具有治疗动脉硬化、消炎防肿、抗突变和预防癌症等广泛用途。未见黑莓籽对调节血脂代谢和抗脂质过氧化，用于治疗高脂血症作用的报道。

发明内容

本发明为了扩大黑莓籽的应用领域，通过灌胃高脂乳剂诱导小鼠高脂血症，测定血清中TG、TC、HDL-C和LDL-C的含量评价其调节血脂的作用，测定血清中MDA的含量和SOD的活力，评价其体内抗脂质过氧化的作用，为合理开发和利用黑莓籽资源提供科学依据，提供了黑莓籽在调节血脂和抗脂质过氧化方面的新应用。

本发明为实现上述目的，采用以下技术方案：

黑莓籽有效成分在制备降血脂保健品或药物上的应用，所述黑莓籽有效成分为黑莓籽的石油醚部位、正丁醇部位和/或黑莓籽油。

黑莓籽有效成分在抗脂质过氧化的应用，所述黑莓籽有效成分为黑莓籽的石油醚部位、正丁醇部位和/或黑莓籽油。

黑莓籽有效成分改善脂质在肝肾脾的蓄积应用，所述黑莓籽有效成分为黑莓籽的石油醚部位、正丁醇部位和/或黑莓籽油。

黑莓籽有效成分（石油醚部位、正丁醇部位和黑莓籽油）采用以下方法制得，黑莓籽用石油醚冷浸脱脂，脱脂后的提取液回收石油醚得到黑莓籽油；脱脂后的黑莓籽残渣用乙醇（65-80V%）冷浸，乙醇提取液浓缩得乙醇总浸膏，乙醇总浸膏分散于水中，依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇进行萃取，得到的石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物，即分别为黑莓籽的石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位。

为了提高黑莓籽有效成分的提取效果，可以在石油醚冷浸前将黑莓籽粉碎。

石油醚冷浸脱脂时，重复4-5次，每次3-4d，合并提取液；每次石油醚的用量是黑莓籽质量的8-10倍，冷浸温度为室温。

乙醇冷浸时，重复2-3次，每次3-4d，合并乙醇提取液；每次乙醇的用量是黑莓籽残渣质量的8-10倍，冷浸温度为室温。

本发明从黑莓籽中提取到了石油醚部位、正丁醇部位和黑莓籽油，并采用灌胃高脂乳剂诱导高血脂小鼠模型，首次研究黑莓籽对高脂乳剂诱导的高脂血症小鼠的影响。研究证实了这些有效部位均具有不同程度的降低血清中TG、TC、LDL-C和MDA的含量、升高HDL-C的含量及SOD的活力的功效，其中石油醚低剂量组能显著性地降低血清中TG、TC、LDL-C和MDA的含量，升高HDL-C的含量及SOD的活力；正丁醇部位中低剂量组均能显著性的降低血清中TG、TC、LDL-C和MDA的含量，升高SOD的活力；黑莓籽油高剂量组能显著性地降低血清中TG、TC、LDL-C和MDA的含量，升高SOD的活力；黑莓籽油中剂量组能显著性地降低血清中TG、TC和MDA的含量，升高HDL-C的含量和 SOD的活力；正丁醇部位高剂量组能显著性地降低血清中TG和MDA的含量，升高HDL-C的含量及SOD的活力，黑莓籽油低剂量组能降低血清中TG、TC和LDL-C的含量，升高HDL-C的含量，石油醚部位高（TG和TC）、中（TC和HDL-C）剂量组能显著性改变，其他各指标虽不具有显著性，但与模型组相比，均具有一定的效果；另外，研究肝肾脾系数发现，除石油醚高剂量组外，其他各组均能不同程度地显著性降低肝系数和脾系数；仅有正丁醇低剂量组能显著性地降低肾系数，这些有效部位均能改善脂质在小鼠肝脏和脾中的蓄积，减少氧化应激。由以上数据可知，黑莓籽有效部位具有一定程度的调节血脂代谢和抗脂质过氧化、改善脂质在小鼠肝脏和脾中的蓄积、减少氧化应激的作用，推测其是黑莓籽降血脂的作用机制之一。

具体实施方式

实施例1

黑莓籽有效成分的提取方法，步骤如下：500g黑莓籽粉碎，每次使用4000mL石油醚冷浸脱脂，重复4次，每次4d，过滤，合并提取液，提取液回收石油醚得到黑莓籽油145.04g；

脱脂后的黑莓籽残渣341g用2800mL乙醇（70V%）冷浸，重复3次，每次3d，合并乙醇提取液，乙醇提取液浓缩得乙醇总浸膏，乙醇总浸膏分散于水中，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，得到的石油醚萃取物2.34g、乙酸乙酯萃取物5.46g和正丁醇萃取物13.42g，即分别为黑莓籽的石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位。

实施例2

黑莓籽有效成分的提取方法，步骤如下：500 g黑莓籽粉碎，每次使用5000 mL石油醚冷浸脱脂，重复5次，每次3 d，过滤，合并提取液，提取液回收石油醚得到黑莓籽油162.50 g；

脱脂后的黑莓籽残渣332g用3000mL乙醇（65V%）冷浸，重复2次，每次4d，合并乙醇提取液，乙醇提取液浓缩得乙醇总浸膏，乙醇总浸膏分散于水中，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，得到的石油醚萃取物2.02g、乙酸乙酯萃取物5.10g和正丁醇萃取物14.28g，即分别为黑莓籽的石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位。

实施例3

黑莓籽有效成分的提取方法，步骤如下：500 g黑莓籽粉碎，每次使用4500 mL石油醚冷浸脱脂，重复4次，每次4d，合并提取液，提取液回收石油醚得到黑莓籽油162.26 g；

脱脂后的黑莓籽残渣335g用3300mL乙醇（80V%）冷浸，重复3次，每次4d，合并乙醇提取液，乙醇提取液浓缩得乙醇总浸膏，乙醇总浸膏分散于水中，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，得到的石油醚萃取物2.26g、乙酸乙酯萃取物5.54g和正丁醇萃取物12.94g，即分别为黑莓籽的石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位。

效果实验黑莓籽不同部位对高脂乳剂诱导的高脂乳剂小鼠的影响

实验原料：将实施例1-3制得的石油醚部位、正丁醇部位、黑莓籽油分别混合作为三种实验原料。

实验动物：昆明种小鼠，体重22 ± 2 g，SPF级，由山东鲁抗医药股份有限公司质检中心动物实验室提供，生产许可证号：SCXD鲁20080002。

实验试剂：甘油三酯（TG）测定试剂盒（浙江东瓯诊断产品有限公司，Lot：2014030025）；总胆固醇（TC）测定试剂盒（浙江东瓯诊断产品有限公司，Lot：2014040011）；丙二醛（MDA）试剂盒（南京建成生物工程研究所，20140324）；SOD试剂盒（测总）（南京建成生物工程研究所，20140507）；高密度脂蛋白胆固醇（HDL）测定试剂盒（北京化康泰临床试剂有限公司，20130718）；低密度脂蛋白胆固醇（LDL）测定试剂盒（北京化康泰临床试剂有限公司，20130722）；决明降脂片（吉林吉春制药有限公司批号：070501）；丙硫氧嘧啶（Merck，Germany）；3号胆盐（北京奥博星生物技术有限公司，批号：100602816）；胆固醇（纯度>99.5%，北京奥博星生物技术有限公司，批号：1029352）；猪油（自制）。

实验仪器：LRH-150恒温培养箱；Multiskan MK3酶标仪；电子天平；旋转蒸发仪；UV-2000型紫外可见分光光度计；CS-H1型混合器；各规格的微量移液器及枪头等。

实验方法与结果

1、实验方法

高脂乳剂的配制：取1 g丙硫氧嘧啶、20 g胆固醇和40 g葡萄糖在乳钵中一起研碎，取猪油40 g（自制猪油先用40℃水浴融化）导入乳钵，研磨，然后再加入1 mL吐温-80和2 mL丙二醇，向2 g 3号胆盐中加入20 mL水配置成10%的溶液，再将胆盐溶液倒入乳钵中研磨均匀，最后用蒸馏水定容至100 mL，超声30 min直至乳剂呈稀奶油状，密封后放入冰箱中，用时37℃水浴融化即可。

动物分组与处理：取健康昆明小鼠120只（22±2 g）随机分为12组，每组10只，分别为空白组，模型组，阳性对照组（决明降脂片），黑莓籽石油醚部位高剂量组（800 mg/kg）、中剂量组（400 mg/kg）和低剂量组（200 mg/kg），黑莓籽正丁醇部位高剂量组（600 mg/kg）、中剂量组（300 mg/kg）和低剂量组（150 mg/kg），黑莓籽油高剂量组（1000 mg/kg）、中剂量组（500 mg/kg）和低剂量组（250 mg/kg）。上午除空白组外给小鼠按照0.2 mL/10g灌胃高脂乳剂进行造模，下午灌胃相应的药物，于第14d给药2h后，禁食不禁水12h后，摘除眼球取血，血浆室温静置5min，待血清分离后离心，得到血清，放置于冰箱0-3℃保存，用于测定TG、TC、HDL-C、LDL-C、MDA和SOD。采用统计软件SPSS 17.0对实验结果进行统计学处理，所有数据采用 ±s表示，以One-way ANOVA分析各组别之间的显著性差异，两组均数比较采用t检验。

2、实验结果如下：

（1）结果见表1。与空白组比较，模型组小鼠血清中的TG和TC含量均极显著升高（p<0.001)，说明建模成功。与模型组比较，阳性对照组能显著性地降低小鼠血清中TG和TC含量（p<0.001，p<0.05）；石油醚部位高低剂量组、正丁醇部位中低剂量组以及黑莓籽油高中低剂量组均能显著降低小鼠血清中的TG和TC含量，呈现不同程度的显著性。石油醚部位中剂量组只能显著性地降低TC含量（p<0.01）。石油醚部位随着给药剂量的降低，小鼠血清中TC含量逐渐升高，即呈现一定的剂量正效应；正丁醇部位相反，随着给药剂量的降低，小鼠血清中TC含量逐渐降低，即呈现一定的剂量负效应。

（2）结果见表1。与空白组比较，模型组小鼠血清中HDL-C含量显著性的降低（p<0.05），LDL-C含量显著性的升高（p<0.01）。与模型组比较，阳性对照组能显著性地升高HDL-C的含量（p<0.05），显著性地降低LDL-C含量（p<0.01）；石油醚部位低剂量组和黑莓籽油低剂量组均能升高HDL-C的含量（p<0.05），显著性地降低LDL-C含量（p<0.01）；石油醚部位中剂量组、正丁醇部位高剂量组和黑莓籽油中剂量组均能显著性的升高HDL-C含量（p<0.05）；正丁醇部位中低剂量组均能显著性的降低LDL-C含量（p<0.01、p<0.01）；其他各组升高HDL-C含量和降低LDL-C含量不具有显著性，但是HDL含量高于模型组，LDL-C含量低于模型组。石油醚部位随着给药剂量的降低，小鼠血清中LDL-C含量逐渐降低，即呈现一定的剂量负效应；正丁醇部位相反，随着给药剂量的降低，小鼠血清中HDL-C含量逐渐降低，即呈现一定的剂量正效应。

（3）结果见表2。与空白组比较，模型组小鼠血清中SOD水平显著性的降低（p<0.01），MDA含量显著性的升高（p<0.01）。与模型组比较，阳性对照组能显著性的升高SOD水平（p<0.05），显著性的降低MDA含量（p<0.05）；石油醚部位低剂量组、正丁醇部位高中低剂量组和黑莓籽油高中剂量组均能显著性升高SOD水平和降低MDA含量，呈现不同程度的显著性；其他各组升高SOD水平和降低MDA含量不具有显著性，但是SOD水平高于模型组，MDA含量低于模型组。石油醚部位随着给药剂量的降低，小鼠血清中SOD水平逐渐升高，MDA含量逐渐降低，即呈现一定的剂量负效应；正丁醇部位随着给药剂量的降低，小鼠血清中SOD水平逐渐降低，MDA含量逐渐升高，即呈现一定的剂量正效应；黑莓籽油随着剂量的降低，小鼠血清中SOD水平逐渐降低，即呈现一定的剂量正效应。

（4）结果见表3。与空白组比较，模型组小鼠中肝系数、肾系数和脾系数均呈显著性的升高（p<0.001，p <0.01，p<0.05）。与模型组比较，阳性对照组能显著性的降低肝系数（p<0.01）和脾系数（p<0.05）；除石油醚高剂量组外，其他各组均能不同程度的显著性降低肝系数，（p<0.01）和脾系数（p<0.05）；仅有正丁醇低剂量组能显著性的降低肾系数（p<0.05）。

Claims

1.黑莓籽有效成分在制备降血脂保健品或药物上的应用，所述黑莓籽有效成分为黑莓籽的石油醚部位、正丁醇部位和/或黑莓籽油。

2.黑莓籽有效成分在抗脂质过氧化方面的应用，所述黑莓籽有效成分为黑莓籽的石油醚部位、正丁醇部位和/或黑莓籽油。