CN105362390A - 黑莓籽提取物在制备抗血栓药物方面的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种黑莓籽提取物在制备抗血栓药物方面的应用，该黑莓籽提取物为黑莓籽的乙醇总浸膏、石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位中的一种或两种以上的混合物；其经下述步骤获得：将粉碎过的黑莓籽用石油醚在室温下浸提2－4次，每次2－4天，挥干石油醚后，加入60－80V？%乙醇浸提2－4次，每次2－4天，浸提液合并、过滤、浓缩得乙醇总浸膏；依次用溶剂石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，挥干溶剂后即分别获得石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位。对黑莓籽的乙醇总浸膏、石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位的体内抗血栓作用进行考察，结果表明：上述四个组分均具有良好的抗血栓作用，可单独或组合用于制备抗血栓药物。

Description

黑莓籽提取物在制备抗血栓药物方面的应用
技术领域
本发明属于医药或/和保健品技术领域，具体涉及一种黑莓籽活性成分的提取方法及其新用途，确切地说是黑莓籽提取物在制备抗血栓药物方面的应用。
背景技术
黑莓Rubusspp.Blackberry为蔷薇科悬钩子属聚合果类植物，未作药用，是世界上新兴的四种小果类果树之一。原产北美，其果实酸甜可口，具有很高的营养价值和药用价值，除鲜食外还大部分制成速冻果、果汁、果酒和果酱等食品。文献检索发现：对黑莓的研究主要集中在果实挥发油、黑莓籽油脂肪酸成分和黑莓叶、种子中黄酮、花色苷及维生素E含量分析方面，其具有抗氧化、抑菌、抗炎、抗增殖、降血糖、凝血等药理活性。
黑莓籽是黑莓果酒、黑莓汁等加工产品的副产物，含有约27.14%的功能性油脂，其中不饱和脂肪酸总量高达93.55%，此外还有人体必需的氨基酸，在对抗动脉粥样硬化，抗糖尿病、免疫调节、促进生长和智力发育等方面具有重要的作用。
血液中存在着互相拮抗的凝血系统和抗血栓系统（纤维蛋白溶解系统）。在生理情况下血液中的凝血因子不断地被激活，从而产生凝血酶，形成微量的纤维蛋白，沉着于血管内膜上。但这些微量的纤维蛋白又不断地被激活了的纤维蛋白溶解系统所溶解，同时被激活的凝血因子也不断地被单核吞噬细胞系统所吞噬。凝血系统和纤维蛋白溶解系统的动态平衡，既保证了血液有潜在的可凝固性又始终保证了血液的流体状态。然而，有时在某些能促进凝固过程的因素的作用下，打破了上述的动态平衡，触发了凝血过程，便形成血栓。
血栓形成是许多疾病如心肌梗死、缺血性卒死、深静脉血栓等的基本病理过程，它严重地危害着人类的健康，它的形成与血小板的聚集、粘附，内源性和外源性凝血系统以及纤维蛋白的形成密切相关。根据世界卫生组织的调查报告，由于动脉粥样硬化导致的血栓疾病引起的死亡已经排到了第一位。动脉血栓是由于动脉粥样硬化，斑块不稳定发生了斑块的破裂，使血液里的血小板发生聚集，激活了体内的凝血系统，最后导致血栓形成。一旦堵塞以后就会发生组织的缺血和坏死，产生严重的后果。在动脉血栓性疾病的急性或特殊状态下，需要辅助使用抗血栓药物，才能达到更好的抗血栓效果。
发明内容
本发明目的在于克服现有技术缺陷，提供一种具有抗血栓作用的黑莓籽提取物，同时提供其制备方法和应用。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种黑莓籽提取物的制备方法，所述黑莓籽提取物为黑莓籽的乙醇总浸膏、石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位中的一种或两种以上的混合物；具体经下述步骤获得：将粉碎过的黑莓籽用石油醚在室温下浸提2－4次，每次2－4天，挥干石油醚后，加入60－80V%乙醇浸提2－4次，每次2－4天，浸提液合并、过滤、浓缩得乙醇总浸膏；依次用溶剂石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，挥干溶剂后即分别获得石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位。
采用上述方法制备获得的黑莓籽提取物。
上述的黑莓籽提取物在制备抗血栓药物方面的应用。
本发明的有益效果：本发明对黑莓籽的乙醇总浸膏、石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位的体内抗血栓作用进行考察，结果表明：上述的这四个组分均具有良好的抗血栓作用，可单独或组合用于制备抗血栓药物。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明的技术方案作进一步地详细介绍，但本发明的保护范围并不局限于此。
下述实施例中，所用黑莓籽购自河南省封丘县黑莓种植基地，为蔷薇科悬钩子属植物黑莓（Rubusspp.Blackberry）的籽。
实施例1
一种黑莓籽提取物，所述黑莓籽提取物为黑莓籽的乙醇总浸膏、石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位中的一种或两种以上的混合物；具体经下述步骤获得：将粉碎过的黑莓籽用石油醚在室温下浸提4次，每次3天，挥干石油醚后，加入70V%乙醇浸提3次，每次3天，浸提液合并、过滤、浓缩得乙醇总浸膏；依次用溶剂石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，挥干溶剂后即分别获得石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位。
实施例2
本实施例为实施例1所得黑莓籽提取物（黑莓籽的乙醇总浸膏、石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位）的抗血栓作用试验
方法：采用皮下注射盐酸肾上腺素和冰水浴的方法制备大鼠的急性血瘀模型。大鼠连续灌胃7次，考察黑莓籽提取物对急性血瘀模型大鼠血液流变性和凝血四项的影响。
仪器和材料：HF6000-4半自动凝血分析仪、HT-100C血流变粘度测试仪、TGL-16gR高速台式冷冻离心机（上海安亭科学仪器厂）；凝血酶原时间（PT）测定试剂盒（105262）；活化部分凝血酶时间（APTT）测定试剂盒（1121781）；凝血酶时间（TT）测定试剂盒（121119）；纤维蛋白原（FIB）含量测定试剂盒（132079）均由上海太阳生物技术有限公司生产。
实验动物：SPF级的SD大鼠，雌雄各半，体重230～270g，由河南省实验动物中心提供，许可证号：SCXK(豫)2010-0002。
实验方法：雌雄各半的SD大鼠，随机分为7组，每组6只。分别为空白对照组、模型组、阳性对照组和四个给药组。连续给药7次，早晚各一次（每次间隔12h），空白对照组和模型组给予相应的空白溶剂（食用开水），阳性对照组给予阿司匹林（100mg/kg），四个给药组分别给予相应的药物（950mg/kg），即黑莓籽的乙醇总浸膏、石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位。于第5次给药后开始造模，方法如下：
大鼠皮下注射盐酸肾上腺素注射液（0.8mg/kg）2次，间隔时间为4h。第1次皮下给予盐酸肾上腺素后2h，将大鼠置于0～2℃冰水中游泳5min，造成大鼠急性血瘀模型。最后一次皮下注射盐酸肾上腺素后大鼠禁食不禁水饲养，在相应的时间给第六次药。最后一次注射盐酸肾上腺素16h进行最后一次给药，给药30min后用10%水合氯醛（300mg/kg）麻醉大鼠，于腹主动脉取血，测量相应的指标。
数据处理：结果采用算术平均值和标准差表示，数值统计采用SPSS19.0软件单因素方差分析法（One-WayANOVA）比较其显著性差异。测定结果见表1。
表1黑莓籽提取物对急性血瘀模型大鼠全血粘度的影响
注：Datarepresentmean±SD.n=6；
与空白组相比，***P<0.001or；0.001<**P<0.01；
与模型组相比，### P<0.001；
与阳性对照相比，△△△ P<0.001，0.001<△△ P<0.01；
由表1可知：模型组与空白对照组相比，在高、中、低切变频率下全血粘度均极显著地升高（P<0.001），说明大鼠急性血瘀模型造模成功。各给药组与模型组相比，高、中、低切变频率下的全血粘度均极显著降低（P<0.001），说明黑莓籽的乙醇总浸膏、石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位均具有较好的抗血栓作用。
表2黑莓籽提取物对急性血瘀模型大鼠血浆粘度的影响
注：Datarepresentmean±SD.n=6；
与空白组相比，***P<0.001or,0.001<**P<0.01；
与模型组相比，### P<0.001；
与阳性对照相比，△△△ P<0.001；
由表2可知：模型组与空白组相比，血浆粘度极显著增加（P<0.001），说明大鼠急性血瘀模型造模成功。各给药组与模型组相比，能极显著降低大鼠血浆粘度（P<0.001），说明黑莓籽的乙醇总浸膏、石油醚部位、乙酸乙酯和正丁醇部位均具有较好的抗血栓作用，且石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位的抗血栓作用与阳性对照阿司匹林相比无差异（P>0.05）。
表3黑莓籽提取物对急性血瘀模型大鼠凝血四项的影响
注：Datarepresentmean±SD.n=6；
与空白组相比，***P<0.001or,0.001<**P<0.01；
与模型组相比，### P<0.001；
与阳性对照相比，△△△ P<0.001，0.001<△△ P<0.01；
由表3可知：模型组与空白组相比，TT、PT和APTT均极显著地降低，而FIB极显著地升高（P<0.001），说明大鼠急性血瘀模型造模成功。与模型组相比，各给药组能极显著地延长TT、PT和APTT，且能极显著地降低FIB的含量（P<0.001），说明黑莓籽提取物可以通过抑制血液的凝固来抑制血栓的形成。
综上可以看出：黑莓籽的乙醇总浸膏、石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位均具有良好的抗血栓作用，可单独或组合用于制备抗血栓药物。

Claims (3)

1.一种黑莓籽提取物的制备方法，其特征在于，所述黑莓籽提取物为黑莓籽的乙醇总浸膏、石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位中的一种或两种以上的混合物；具体经下述步骤获得：将粉碎过的黑莓籽用石油醚在室温下浸提2－4次，每次2－4天，挥干石油醚后，加入60－80V%乙醇浸提2－4次，每次2－4天，浸提液合并、过滤、浓缩得乙醇总浸膏；依次用溶剂石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，挥干溶剂后即分别获得石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位。
2.采用在权利要求1所述方法制备获得的黑莓籽提取物。
3.权利要求2所述的黑莓籽提取物在制备抗血栓药物方面的应用。
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