CN104178416A - 一种用于分辨3种水产源气单胞菌复合群的检测试剂盒 - Google Patents

一种用于分辨3种水产源气单胞菌复合群的检测试剂盒 Download PDF

Info

Publication number
CN104178416A
CN104178416A CN201410436513.7A CN201410436513A CN104178416A CN 104178416 A CN104178416 A CN 104178416A CN 201410436513 A CN201410436513 A CN 201410436513A CN 104178416 A CN104178416 A CN 104178416A
Authority
CN
China
Prior art keywords
aeromonas
water
detection kit
bottle
aquatic products
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201410436513.7A
Other languages
English (en)
Inventor
谭爱萍
吴雅丽
姜兰
邓玉婷
罗理
王伟利
梁爱玲
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Pearl River Fisheries Research Institute CAFS
Original Assignee
Pearl River Fisheries Research Institute CAFS
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Pearl River Fisheries Research Institute CAFS filed Critical Pearl River Fisheries Research Institute CAFS
Priority to CN201410436513.7A priority Critical patent/CN104178416A/zh
Publication of CN104178416A publication Critical patent/CN104178416A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/26—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
    • C12Q1/04—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
    • C12Q1/04—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
    • C12Q1/045—Culture media therefor

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明公开了一种用于分辨3种水产源气单胞菌复合群的检测试剂盒，旨在提供一种同时筛选嗜水气单胞菌复合群、温和气单胞菌复合群、豚鼠气单胞菌复合群3种常见水产源气单胞菌复合群，且成本低，检测准确率高的试剂盒；其技术方案是这样的：该用于分辨3种水产源气单胞菌复合群的检测试剂盒，所述的试剂盒由下列鉴定材料组成：1)试剂A-无菌水；2)鉴定瓶1-无盐碱性蛋白胨水；3)鉴定瓶2-含氨苄西林的RS培养基；4)鉴定瓶3-胰蛋白胨大豆培养基；5)鉴定瓶4-阿拉伯糖培养基；6)鉴定瓶5-七叶苷培养基；7)鉴定瓶6-葡萄糖产气培养基；8)鉴定瓶7-氧化酶试纸；属于检测技术领域。

Description

一种用于分辨3种水产源气单胞菌复合群的检测试剂盒
技术领域
本发明涉及一种检测试剂盒，更具体的说是一种用于分辨嗜水气单胞菌复合群、温和气单胞菌复合群、豚鼠气单胞菌复合群3种常见水产源气单胞菌复合群的检测试剂盒。 
背景技术
气单胞菌属于气单胞菌科，广泛分布在水环境，也常在人体、水产动物和食物中检出。水产动物源气单胞菌分成3个复合群，包括嗜水气单胞菌复合群、温和气单胞菌复合群、豚鼠气单胞菌复合群，主要有嗜水气单胞菌、温和气单胞菌、维氏气单胞菌、豚鼠气单胞菌等，同时也是常见的人鱼共患病原菌，能引起人的食物中毒、腹泻、败血症等。气单胞菌具有广泛的致病性，在高温季节，容易单独或者混合感染包括鱼虾类、贝类、爬行两栖类等多种水产动物，是水产养殖中一种危害性较高的病原菌，容易引起水生动物多种细菌病的暴发，且危害程度高于其它细菌性疾病，成为我国淡水水产养殖业发展的主要威胁(唐江芳，气单胞菌及其在水产中的危害，2007)。而临床上的盲目用药，使病原菌在大范围药物选择压力下，渐渐保留了气单胞菌耐药菌株，甚至是多重耐药菌株，致使抗生素疗效下降(蔡丽娟，等，水产致病性嗜水气单胞菌耐药性比较与分析，水产科学，2011)。这不仅导致药物对水生动物疾病的防控能力大大减弱，同时也严重影响水产动物源食品的质量安全，还存在将耐药性传播给人类致病菌的潜在风险。因此，监测养殖动物和养殖水体中不同气单胞菌复合群的存在及其耐药性是防治相关水产动物疾病和保证食品安全的重要措施，而如何高效简便的分辨出水产源气单胞菌复合群是目前最需解决的问题。 
目前分辨出水产源气单胞菌复合群的技术有：1、通过普通培养基培养纯化单菌落后利用细菌快速自动鉴定系统进行鉴定分辨，该法需要昂贵的仪器设备和技术熟练的操作人员；2、通过普通培养基培养纯化单菌落后利用核酸的检测技术，包括DNA和PCR技术(聚合酶链式反应技术)，虽然具有快速、简洁和灵敏的特点，但该法需要昂贵的仪器设备和技术熟练的操作人员；3、经典的生理生化鉴定方法，该法不仅繁琐、耗时、且要求操作人员有良好的专业素质；4、目前也有些商品化的气单胞菌培养基，如RS培养基、AHM培养基和APM培养基等，但分离率和准确率不高(凌红丽，等，嗜水气单胞菌选择性培养基鉴别效果的比较，1998)。 
发明内容
针对上述不足，本发明的目的是提供了一种同时筛选嗜水气单胞菌复合群、温和气单胞菌复合群、豚鼠气单胞菌复合群3种常见水产源气单胞菌复合群且成本低，准确率高的试剂盒。 
为此，本发明提供的技术方案是这样的：该用于分辨3种水产源气单胞菌复合群的检测试剂盒，所述的试剂盒由下述鉴定瓶和试剂组成：1)试剂A-无菌水；2)鉴定瓶1-无盐碱性蛋白胨水；3)鉴定瓶2-含氨苄西林的RS培养基；4)鉴定瓶3-胰蛋白胨大豆培养基；5)鉴定瓶4-阿拉伯糖培养基；6)鉴定瓶5-七叶苷培养基；7)鉴定瓶6-葡萄糖产气培养基；8)鉴定瓶7-氧化酶试纸。 
上述的用于分辨3种水产源气单胞菌复合群的检测试剂盒，所述的水产源气单胞菌复合群为嗜水气单胞菌复合群、温和气单胞菌复合群和豚鼠气单胞菌复合群。 
进一步的，上述的用于分辨3种水产源气单胞菌复合群的检测试剂盒，所述的无盐碱性蛋白胨水由下述质量百分比的组分构成：蛋白胨1.9-2.1％，硝酸钾0.0095-0.015％，结晶碳酸钠0.015-0.025％，余量为水；pH8.2-8.5。 
进一步的，上述的用于分辨3种水产源气单胞菌复合群的检测试剂盒，所述的含氨苄西林的RS培养基由下述质量百分比的组分制成：L-盐酸鸟氨酸0.60-0.70％，L-盐酸赖氨酸0.4-0.6％，L-盐酸半胱氨酸0.02-0.04％，麦芽糖0.30-0.40％，硫代硫酸钠0.60-0.75％，枸橼酸铁胺0.07-0.09％，脱氧胆酸钠0.09-0.11％，酵母膏0.25-0.35％，氯化钠0.4-0.6％，溴麝香草酚蓝0.002-0.004％，新生霉素0.0004-0.0006％，琼脂1.2-1.8％，氨苄西林0.0001％，余量为水；pH6.8-7.2。 
进一步的，上述的用于分辨3种水产源气单胞菌复合群的检测试剂盒，所述的胰蛋白胨大豆培养基由下述质量百分比的组分构成：胰蛋白胨1.3-1.7％，大豆蛋白胨0.4-0.6％，氯化钠0.4-0.6％，琼脂1.2-1.7％，余量为水；pH7.2-7.6。 
进一步的，上述的用于分辨3种水产源气单胞菌复合群的检测试剂盒，所述的阿拉伯糖培养基由下述质量百分比的组分构成：牛肉膏粉0.4-0.6％，蛋白胨0.8-1.2％，氯化钠0.2-0.4％，磷酸氢二钾0.15-0.25％，阿拉伯糖0.8-1.2％，溴百里酚蓝0.002-0.004％，余量为水；pH7.2-7.6。 
进一步的，上述的用于分辨3种水产源气单胞菌复合群的检测试剂盒，所述的七叶苷培养基由下述质量百分比的组分构成：蛋白胨0.4-0.6％，牛肉浸膏0.2-0.4％，七叶苷0.09-0.11％，枸橼酸铁0.04-0.06％，琼脂1.2-1.8％，余量为水；pH7.2-7.6。 
进一步的，上述的用于分辨3种水产源气单胞菌复合群的检测试剂盒，所述的葡萄糖产气培养基由下述质量百分比的组分构成：多价胨1.5-2.5％，酵母膏0.4-0.6％，氯化钠0.4-0.6％，葡萄糖2.5-3.5％，吐温-804-6％，溴百里酚蓝0.002-0.004％，余量为水；pH6.8-7.2。 
与现有技术相比，本发明提供的技术方案具有如下技术优点： 
本发明提供的技术方案是在研究分析现有选择性培养基特性和气单胞菌不同生理生化特性的基础上建立的。通过用3种培养基筛选分离和4个生化反应结果进行归纳判断，能简便分离嗜水气单胞菌复合群、温和气单胞菌复合群、豚鼠气单胞菌复合群3种常见水产源气单胞菌复合群。 
本发明的试剂盒试剂构成、配制方法、使用方法简单，成本低，与细菌自动或半自动快速鉴定系统和基于核酸的检测技术相比，不需要昂贵的仪器设备和技术熟练的操作人员，为筛选分离水产源气单胞菌复合群提供了极大的方便。 
具体实施方式
为了更好的理解、实施本发明的权利要求，下面结合具体实施例对本发明的权利要求做进一步的详细说明，但本发明并不限于下述实施例，而是以权利要求为限。 
实施例1 
本发明提供的一种用于分辨嗜水气单胞菌复合群、温和气单胞菌复合群、豚鼠气单胞菌复合群3种常见水产源气单胞菌复合群的检测试剂盒，具体由下列鉴定瓶和试剂组成： 
1)用于稀释池塘底泥试剂A-无菌水； 
2)用于除去需盐并在酸性和中性环境中均能生长的细菌，特别是弧菌科细菌的鉴定瓶1-无盐碱性蛋白胨水，该鉴定瓶所含组分按质量分数100％计为：蛋白胨2％，硝酸钾0.01％，结晶碳酸钠0.02％，余量为水，pH8.4； 
3)用于筛选对氨苄西林不敏感的疑似气单胞菌的鉴定瓶2-含氨苄西林RS培养基，该鉴定瓶所含组分按质量分数100％计为：L-盐酸鸟氨酸0.65％，L-盐酸赖氨酸0.5％，L-盐酸半胱氨酸0.03％，麦芽糖0.35％，硫代硫酸钠0.68％，枸橼酸铁胺0.08％，脱氧胆酸钠0.1％，酵母膏0.3％，氯化钠0.5％，溴麝香草酚蓝 0.003％，新生霉素0.0005％，琼脂1.5％，氨苄西林0.0001％，余量为水，pH7.0； 
需要说明的是，本培养基现配现用，首先把RS培养基煮沸溶解1-2分钟，待培养基冷却至40-50℃后把氨苄西林加入培养基摇均匀，然后倒制琼脂平板。 
4)用于细菌的培养的鉴定瓶3-胰蛋白胨大豆培养基，该鉴定瓶所含组分按质量分数100％计为：胰蛋白胨1.5％，大豆蛋白胨0.5％，氯化钠0.5％，琼脂1.5％，余量为水，pH7.4； 
5)用于检查细菌对阿拉伯糖类发酵的特性，观察被检细菌的产酸能力的鉴定瓶4-阿拉伯糖培养基，该鉴定瓶所含组分按质量分数100％计为：牛肉膏粉0.5％，蛋白胨1％，氯化钠0.3％，磷酸氢二钾0.2％，阿拉伯糖1％，溴百里酚蓝0.003％，余量为水，pH7.4； 
6)用于检测细菌对七叶苷的水解能力的鉴定瓶5-七叶苷培养基，该鉴定瓶所含组分按质量分数100％计为：含蛋白胨0.5％，牛肉浸膏0.3％，七叶苷0.1％，枸橼酸铁0.05％，琼脂1.5％，余量为水，pH7.4； 
7)用于检测细菌产酸产气的能力的鉴定瓶6-葡萄糖产气培养基，该鉴定瓶所含组分按质量分数100％计为：多价胨2％，酵母膏0.5％，氯化钠0.5％，葡萄糖3％，吐温-805％，溴百里酚蓝0.003％，余量为水，将所有组分倒置放入直径2-3毫米发酵小管；pH7.0。 
8)用于检查细菌中是否含有细胞色素氧化酶鉴定瓶7-氧化酶试纸。 
上述各个鉴定瓶中的培养基以及试剂A中试剂组份都可以从现有产品中购买到，并可按照公知常规的方法进行配制。 
实施例2 
本发明提供的一种用于分辨嗜水气单胞菌复合群、温和气单胞菌复合群、豚鼠气单胞菌复合群3种常见水产源气单胞菌复合群的检测试剂盒，具体由下 列鉴定瓶和试剂组成： 
1)用于稀释池塘底泥试剂A-无菌水； 
2)用于除去需盐并在酸性和中性环境中均能生长的细菌，特别是弧菌科细菌的鉴定瓶1-无盐碱性蛋白胨水，该鉴定瓶所含组分按质量分数100％计为：蛋白胨2.1％，硝酸钾0.015％，结晶碳酸钠0.015％，余量为水；pH8.2； 
3)用于筛选对氨苄西林不敏感的疑似气单胞菌的鉴定瓶2-含氨苄西林RS培养基，该鉴定瓶所含组分按质量分数100％计为：L-盐酸鸟氨酸0.60％，L-盐酸赖氨酸0.6％，L-盐酸半胱氨酸0.02％，麦芽糖0.40％，硫代硫酸钠0.60％，枸橼酸铁胺0.09％，脱氧胆酸钠0.09％，酵母膏0.35％，氯化钠0.4％，溴麝香草酚蓝0.004％，新生霉素0.0004％，琼脂1.8％，氨苄西林0.0001％，余量为水；pH7.2。 
需要说明的是：本培养基现配现用，首先把RS培养基煮沸溶解1-2分钟，待培养基冷却至40-50℃后把氨苄西林加入培养基摇均匀，然后倒制琼脂平板。 
4)用于细菌的培养的鉴定瓶3-胰蛋白胨大豆培养基，该鉴定瓶所含组分按质量分数100％计为：胰蛋白胨1.3％，大豆蛋白胨0.6％，氯化钠0.4％，琼脂1.7％，余量为水；pH7.2。 
5)用于检查细菌对阿拉伯糖类发酵的特性，观察被检细菌的产酸能力的鉴定瓶4-阿拉伯糖培养基，该鉴定瓶所含组分按质量分数100％计为：牛肉膏粉0.4％，蛋白胨1.2％，氯化钠0.2％，磷酸氢二钾0.25％，阿拉伯糖0.8％，溴百里酚蓝0.004％，余量为水；pH7.2。 
6)用于检测细菌对七叶苷的水解能力的鉴定瓶5-七叶苷培养基：按质量分数100％计，蛋白胨0.6％，牛肉浸膏0.4％，七叶苷0.09％，枸橼酸铁0.06％，琼脂1.2％，余量为水；pH7.6。 
7)用于检测细菌产酸产气的能力的鉴定瓶6-葡萄糖产气培养基，该鉴定瓶 所含组分按质量分数100％计为：多价胨2.5％，酵母膏0.4％，氯化钠0.6％，葡萄糖2.5％，吐温-806％，溴百里酚蓝0.002％，余量为水；pH7.2。 
8)用于检查细菌中是否含有细胞色素氧化酶鉴定瓶7-氧化酶试纸。 
上述各个鉴定瓶中的培养基以及试剂A中试剂组份都可以从现有产品中购买到，并可按照公知常规的方法进行配制。 
实施例3 
本发明提供的一种用于分辨嗜水气单胞菌复合群、温和气单胞菌复合群、豚鼠气单胞菌复合群3种常见水产源气单胞菌复合群的检测试剂盒，具体由下列鉴定瓶和试剂组成： 
1)用于稀释池塘底泥试剂A-无菌水； 
2)用于除去需盐并在酸性和中性环境中均能生长的细菌，特别是弧菌科细菌的鉴定瓶1-无盐碱性蛋白胨水，该鉴定瓶所含组分按质量分数100％计为：蛋白胨1.9％，硝酸钾0.015％，结晶碳酸钠0.015％，余量为水；pH8.5； 
3)用于筛选对氨苄西林不敏感的疑似气单胞菌的鉴定瓶2-含氨苄西林RS培养基，该鉴定瓶所含组分按质量分数100％计为：L-盐酸鸟氨酸0.70％，L-盐酸赖氨酸0.4％，L-盐酸半胱氨酸0.04％，麦芽糖0.30％，硫代硫酸钠0.75％，枸橼酸铁胺0.07％，脱氧胆酸钠0.11％，酵母膏0.25％，氯化钠0.6％，溴麝香草酚蓝0.002％，新生霉素0.0006％，琼脂1.2％，氨苄西林0.0001％，余量为水；pH6.8。 
需要说明的是，本培养基现配现用，首先把RS培养基煮沸溶解1-2分钟，待培养基冷却至40-50℃后把氨苄西林加入培养基摇均匀，然后倒制琼脂平板。 
4)用于细菌的培养的鉴定瓶3-胰蛋白胨大豆培养基，该鉴定瓶所含组分按质量分数100％计为：胰蛋白胨1.7％，大豆蛋白胨0.4％，氯化钠0.6％，琼脂1.2％，余量为水；pH7.6； 
5)用于检查细菌对阿拉伯糖类发酵的特性，观察被检细菌的产酸能力的鉴定瓶4-阿拉伯糖培养基，该鉴定瓶所含组分按质量分数100％计为：牛肉膏粉0.6％，蛋白胨0.8％，氯化钠0.4％，磷酸氢二钾0.15％，阿拉伯糖1.2％，溴百里酚蓝0.002％，余量为水；pH7.6； 
6)用于检测细菌对七叶苷的水解能力的鉴定瓶5-七叶苷培养基：按质量分数100％计，蛋白胨0.4％，牛肉浸膏0.4％，七叶苷0.09％，枸橼酸铁0.06％，琼脂1.2％，余量为水；pH7.6。 
7)用于检测细菌产酸产气的能力的鉴定瓶6-葡萄糖产气培养基，该鉴定瓶所含组分按质量分数100％计为：多价胨1.5％，酵母膏0.6％，氯化钠0.4％，葡萄糖3.5％，吐温-804％，溴百里酚蓝0.004％，余量为水；pH6.8。 
8)用于检查细菌中是否含有细胞色素氧化酶鉴定瓶7-氧化酶试纸。 
上述各个鉴定瓶中的培养基以及试剂A中试剂组份都可以从现有产品中购买到，并可按照公知常规的方法进行配制。 
具体检测方法为： 
(1)样品采集 
①样品要求： 
A：底泥取约3g加入2mL无菌水混匀并静止10min后取100μL上层液体； 
B：环境水样(池塘表面下20-30cm)100μL； 
C：用镊子或剪子取绿豆大小的动物组织样品(鳃、肝脏、病灶)； 
②样品处理： 
将以上三类样品分别接种于3ml无盐碱性蛋白胨水中增菌，28℃振荡培养18-20h。剩余样品置4℃保存备用。 
③样品编号。 
(2)3种常见水产源气单胞菌复合群分离与鉴定(在无菌条件下进行操作) 
①筛选培养： 
用接种环蘸取各个样品增菌液，分别接种于含氨苄西林RS平板，28℃静置培养18-20h。若菌落在含氨苄西林RS平板上呈黄色且光滑，则初步判断为气单胞菌疑似菌； 
②分离纯化： 
每个平板挑取同1个优势黄色单菌落，分别接种于含氨苄西林RS平板和胰蛋白胨大豆培养基平板进行纯化，28℃静置培养18-20h； 
③用接种环取在胰蛋白胨大豆培养基平板上纯化培养的疑似菌，划于氧化酶试纸条，1min内观察，若划线处呈紫色或者紫红色，为氧化酶阳性；同时挑取适量氧化酶阳性的菌落分别接种于阿拉伯糖培养基、七叶苷培养基、葡萄糖产气培养基，35℃静置培养18-24h，观察培养基颜色的变化和葡萄糖产气培养基小管气体的产生。 
(3)结果判定 
若菌株在无盐碱性蛋白胨水生长良好，记为“+”，不生长记为“-”；菌落在含氨苄西林RS平板上呈黄色且光滑记为“+”，不生长或菌落为绿色或绿黄色记为“-”；菌落在胰蛋白胨大豆培养基上生长良好、呈米白色且光滑记为“+”，不生长或菌落为其他颜色记为“-”；阿拉伯糖培养基呈黄色记为“+”，紫色记为“-”；七叶苷培养基呈黄色记为“+”，紫色记为“-”；葡萄糖产气培养基中的发酵管有气泡记为“+”，无气泡记为“-”；氧化酶实验结果阳性记为“+”，阴性记为“-”；。把待检菌各反应结果与细菌鉴定表(表1)对照，如果与鉴定表中的细菌结果一致，则可判断待测菌为相应的复合群菌，因此可确定待检菌的分类位置。 
表1 细菌鉴定表 
实验例1 
对本实验室分离保存的已鉴定的细菌进行筛选鉴定。 
实验步骤： 
1、开菌株冻干保存管，用无盐碱性蛋白胨水增菌，28℃振荡培养18-20h。 
2、用接种环蘸取增菌液，分别接种于含氨苄西林RS平板和胰蛋白胨大豆培养基平板进行纯化，28℃静置培养18-20h。 
3、用接种环取在胰蛋白胨大豆培养基平板上纯化培养的疑似菌，划于氧化酶试纸条，1min内观察。 
4、结果记录 
试验所使用的90株细菌中，有77株为水产源气单胞菌，其中嗜水气单胞菌复合群43株(嗜水气单胞菌43株)，温和气单胞菌复合群21株(温和气单胞菌5株，维氏气单胞菌10株，脆弱气单胞菌3株，简达气单胞菌3株)，豚鼠气单胞菌复合群7株(豚鼠气单胞菌6株，中间气单胞菌1株)，A.aquariorum (气单胞菌属的国内暂无译文的菌株)5株，其他未定种的气单胞菌属菌株1株；金黄色葡萄球菌等非水产源气单胞菌14株。实验结果显示，除了5株A.aquariorum和1株未定种的气单胞菌属菌株外，其他71株已分类的常见水产源气单胞菌复合群中，除1株脆弱气单胞菌、1株维氏气单胞菌在无盐碱性蛋白胨水不生长外，其他69株水产源气单胞菌均能确定复合群的种类，准确率为97.18％；其他13株非水产源气单胞菌的实验结果均不符合本发明所判定的常见水产源气单胞菌复合群。结果见表2： 
表2 实验室分离保存的已鉴定的细菌筛选鉴定结果 
注：“/”表示不能确定的复合群，“？”表示使用本试剂盒鉴定结果与原鉴定结果不符，不能确定复合群。 
其中：“A”代表嗜水气单胞菌复合群；“B”代表温和气单胞菌复合群；“C”代表豚鼠气单胞菌复合群。 
实施例2 
采用本发明随机取三水、珠海、顺德养殖池塘的底泥、水和鱼组织分离水产源气单胞菌，结果显示，经细菌半自动鉴定仪和分子生物学技术分析，所采集的69份样品中，分离出68株水产源气单胞菌，其中A11株(嗜水气单胞菌11株)，B44株(温和气单胞菌6株，维氏气单胞菌31株，简达气单胞菌7株)，C6株(豚鼠气单胞菌6株)，斑点气单胞菌7株；希瓦氏菌属1株。实验结果显示，除了7株斑点气单胞菌外，其他71株待测菌均能确定复合群的种类，准确 率为100％。结果见表3： 
表3 常见水产源气单胞菌复合群筛选分离结果 
注：“/”表示不能确定的复合群。 
其中：“A”代表嗜水气单胞菌复合群；“B”代表温和气单胞菌复合群；“C”代表豚鼠气单胞菌复合群。 

Claims (8)

1.一种用于分辨3种水产源气单胞菌复合群的检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒由下述鉴定瓶和试剂组成：1)试剂A-无菌水；2)鉴定瓶1-无盐碱性蛋白胨水；3)鉴定瓶2-含氨苄西林的RS培养基；4)鉴定瓶3-胰蛋白胨大豆培养基；5)鉴定瓶4-阿拉伯糖培养基；6)鉴定瓶5-七叶苷培养基；7)鉴定瓶6-葡萄糖产气培养基；8)鉴定瓶7-氧化酶试纸。
2.根据权利要求1所述的用于分辨3种水产源气单胞菌复合群的检测试剂盒，其特征在于，所述的水产源气单胞菌复合群为嗜水气单胞菌复合群、温和气单胞菌复合群和豚鼠气单胞菌复合群。
3.根据权利要求1所述的用于分辨3种水产源气单胞菌复合群的检测试剂盒，其特征在于，所述的无盐碱性蛋白胨水由下述质量百分比的组分构成：蛋白胨1.9-2.1％，硝酸钾0.0095-0.015％，结晶碳酸钠0.015-0.025％，余量为水；pH8.2-8.5。
4.根据权利要求1所述的用于分辨3种水产源气单胞菌复合群的检测试剂盒，其特征在于，所述的含氨苄西林的RS培养基由下述质量百分比的组分制成：L-盐酸鸟氨酸0.60-0.70％，L-盐酸赖氨酸0.4-0.6％，L-盐酸半胱氨酸0.02-0.04％，麦芽糖0.30-0.40％，硫代硫酸钠0.60-0.75％，枸橼酸铁胺0.07-0.09％，脱氧胆酸钠0.09-0.11％，酵母膏0.25-0.35％，氯化钠0.4-0.6％，溴麝香草酚蓝0.002-0.004％，新生霉素0.0004-0.0006％，琼脂1.2-1.8％，氨苄西林0.0001％，余量为水；pH6.8-7.2。
5.根据权利要求1所述的用于分辨3种水产源气单胞菌复合群的检测试剂盒，其特征在于，所述的胰蛋白胨大豆培养基由下述质量百分比的组分构成：胰蛋白胨1.3-1.7％，大豆蛋白胨0.4-0.6％，氯化钠0.4-0.6％，琼脂1.2-1.7％，余量为水；pH7.2-7.6。
6.根据权利要求1所述的用于分辨3种水产源气单胞菌复合群的检测试剂盒，其特征在于，所述的阿拉伯糖培养基由下述质量百分比的组分构成：牛肉膏粉0.4-0.6％，蛋白胨0.8-1.2％，氯化钠0.2-0.4％，磷酸氢二钾0.15-0.25％，阿拉伯糖0.8-1.2％，溴百里酚蓝0.002-0.004％，余量为水；pH7.2-7.6。
7.根据权利要求1所述的用于分辨3种水产源气单胞菌复合群的检测试剂盒，其特征在于，所述的七叶苷培养基由下述质量百分比的组分构成：蛋白胨0.4-0.6％，牛肉浸膏0.2-0.4％，七叶苷0.09-0.11％，枸橼酸铁0.04-0.06％，琼脂1.2-1.8％，余量为水；pH7.2-7.6。
8.根据权利要求1所述的用于分辨3种水产源气单胞菌复合群的检测试剂盒，其特征在于，所述的葡萄糖产气培养基由下述质量百分比的组分构成：多价胨1.5-2.5％，酵母膏0.4-0.6％，氯化钠0.4-0.6％，葡萄糖2.5-3.5％，吐温-804-6％，溴百里酚蓝0.002-0.004％，余量为水；pH6.8-7.2。
CN201410436513.7A 2014-08-29 2014-08-29 一种用于分辨3种水产源气单胞菌复合群的检测试剂盒 Pending CN104178416A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410436513.7A CN104178416A (zh) 2014-08-29 2014-08-29 一种用于分辨3种水产源气单胞菌复合群的检测试剂盒

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410436513.7A CN104178416A (zh) 2014-08-29 2014-08-29 一种用于分辨3种水产源气单胞菌复合群的检测试剂盒

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN104178416A true CN104178416A (zh) 2014-12-03

Family

ID=51959767

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201410436513.7A Pending CN104178416A (zh) 2014-08-29 2014-08-29 一种用于分辨3种水产源气单胞菌复合群的检测试剂盒

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN104178416A (zh)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105734166A (zh) * 2016-05-11 2016-07-06 辽宁大学 一种多重pcr引物及其在大菱鲆养殖过程中的应用
CN105821113A (zh) * 2016-03-15 2016-08-03 上海市浦东新区疾病预防控制中心 鉴定气单胞菌属的试剂盒和方法
CN110343736A (zh) * 2019-08-12 2019-10-18 安徽天邦生物技术有限公司 一种改进型水产弧菌选择性鉴别培养基

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103194404A (zh) * 2013-03-07 2013-07-10 中国水产科学研究院珠江水产研究所 一种筛选水产源气单胞菌的简便方法

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103194404A (zh) * 2013-03-07 2013-07-10 中国水产科学研究院珠江水产研究所 一种筛选水产源气单胞菌的简便方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
杨正时等: "《人及动物病原细菌学》", 31 March 2003, 河北科学技术出版社 *
王礼文: "气单胞菌属分类与鉴定进展", 《中国卫生检验杂志》 *

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105821113A (zh) * 2016-03-15 2016-08-03 上海市浦东新区疾病预防控制中心 鉴定气单胞菌属的试剂盒和方法
CN105734166A (zh) * 2016-05-11 2016-07-06 辽宁大学 一种多重pcr引物及其在大菱鲆养殖过程中的应用
CN105734166B (zh) * 2016-05-11 2020-03-03 辽宁大学 一种多重pcr引物及其在大菱鲆养殖过程中的应用
CN110343736A (zh) * 2019-08-12 2019-10-18 安徽天邦生物技术有限公司 一种改进型水产弧菌选择性鉴别培养基
CN110343736B (zh) * 2019-08-12 2023-07-21 安徽天邦生物技术有限公司 一种改进型水产弧菌选择性鉴别培养基

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN106367500A (zh) 快速恒温检测创伤弧菌的方法、引物及应用
CN105985921A (zh) 可去除玉米烯酮毒素的液化淀粉芽孢杆菌及其用途
CN104178416A (zh) 一种用于分辨3种水产源气单胞菌复合群的检测试剂盒
WO1998026270A2 (en) Gel matrix with redox purple
CN101580873A (zh) 食品中金黄色葡萄球菌毒素基因的检测试剂盒及检测方法
CN102146429B (zh) 溶藻弧菌选择性鉴别培养基
CN101970682A (zh) 检测和/或鉴别艰难梭状芽孢杆菌的方法
Lai et al. Methanofollis aquaemaris sp. nov., a methanogen isolated from an aquaculture fish pond.
CN103468806A (zh) 扇贝致病性灿烂弧菌Vibrio splendidus的快速检测方法
Ku et al. Protein particulate retention and microorganism recovery for rapid detection of Salmonella
CN102747148B (zh) 副溶血性弧菌检测用引物组及方法
CN101555514A (zh) 拟态弧菌显色培养基
CN104342496A (zh) 一种快速检测、鉴定李斯特属细菌的方法
Gomez‐Gil et al. Isolation, enumeration, and preservation of the Vibrionaceae
CN103194404A (zh) 一种筛选水产源气单胞菌的简便方法
Batista et al. Methodological advances in the detection of biotoxins and pathogens affecting production and consumption of bivalve molluscs in a changing environment
CN106319054B (zh) 检测布鲁氏菌的引物及检测方法
CN107142300B (zh) 一种李斯特菌增菌培养基及制备方法
CN101492733A (zh) 环介导等温扩增方法检测假结核耶尔森氏菌的试剂盒及方法
Arzumanian et al. Communities of skin propionic bacteria: cultivation and antifungal antagonistic activity
Roth et al. Propidium monoazide-denaturing gradient gel electrophoresis (PMA-DGGE) assay for the characterization of viable diatoms in marine sediments
CN1934268A (zh) 检测微生物的质量保证体系
CN114214443B (zh) 可同时检测多种微生物的多重荧光定量pcr检测方法和多重荧光定量pcr检测试剂盒
CN104293880A (zh) 一种副溶血弧菌的海水选择性显色培养基及其鉴定计数方法
Arachchillaya Development and evaluation of a paper based biochemical sensor for realtime detection of food pathogen

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20141203