CN104177466A

CN104177466A - 一种从蛋黄油中提取胆固醇的制备工艺

Info

Publication number: CN104177466A
Application number: CN201310194034.4A
Authority: CN
Inventors: 陈卫林; 黄丽丝; 黄建军; 莫嘉伟; 许建峰; 伍延东
Original assignee: GUANGZHOU HANFANG PHARMACEUTICAL CO Ltd
Current assignee: GUANGZHOU HANFANG PHARMACEUTICAL CO Ltd
Priority date: 2013-05-22
Filing date: 2013-05-22
Publication date: 2014-12-03

Abstract

本发明提出了一种从蛋黄油中提取胆固醇的制备工艺，以蛋黄油为起始原料，通过氧化铝/正相硅胶柱层析吸附，低极性溶剂、高极性溶剂依次洗脱，乙醇溶液精制，可得到高收率、高质量的胆固醇，该制备工艺具有工艺简单、操作方便、收率高、成本低、污染小等优点。

Description

一种从蛋黄油中提取胆固醇的制备工艺

技术领域

本发明涉及胆固醇的制备领域，特别是指一种从蛋黄油中提取胆固醇的制备工艺。

背景技术

胆固醇（cholesterol）又名胆甾醇、异辛甾烯醇、胆甾-5-稀-3β-醇，是一种甾体化合物。早在18世纪人们已从胆结石中发现了胆固醇，1816年化学家本歇尔将这种具脂类性质的物质命名为胆固醇。胆固醇广泛存在于动物体内，尤以脑及神经组织中最为丰富，在肾、脾、皮肤、肝和胆汁中含量也高。其溶解性与脂肪类似，不溶于水，易溶于乙醚、氯仿等溶剂。胆固醇是动物组织细胞所不可缺少的重要物质，它不仅参与形成细胞膜，而且是合成胆汁酸，维生素D3以及甾体激素的原料。

胆固醇在商业应用在以下几个方面：维生素D₃和人造牛黄的生产原材料、虾饲料添加剂、医药、化妆品乳化剂/保湿剂以及液晶工业。

当前，世界上有关胆固醇的工业生产还未突破全合成，都是从天然产物中进行提取。目前，胆固醇真正具备工业化生产可能的方式只有通过动物脑髓提取以及从羊毛脂中提取两种方式来实现。由于西欧等国家疯牛病的发生，欧美国家对于以动物脑髓为原料生产的胆固醇成品持抵制态度，使脑髓胆固醇及以此为原料生产的产品进入欧美国家具有障碍。所以，目前的维生素D3生产所需的胆固醇均需要来源于羊毛脂，于是上游羊毛脂来源紧张会导致胆固醇供不应求的局面出现，因此，需要一种新的来源来解决或者缓解胆固醇的来源紧缺。

目前也有一些专利或文献中开始对一些新的制备方法的提出或者探讨，比如中国专利（公开号为：CN102643306A）《一种从蛋黄中提取卵磷脂、蛋黄油、和胆固醇的方法》中，提到了一种新的思路，从蛋黄中提出胆固醇的方法，其中关于胆固醇的提取，用到的是采用热乙醇对已分离出卵磷脂的蛋黄渣进行溶解，然后再将提取液冷却，使大部分胆固醇结晶分离出来，并在对蛋黄油的精制中，采用了β-环糊精去除多余的胆固醇。

但一般现有的方法存在许多不成熟或者不稳定的地方，比如上面提到的采用β-环糊精去除多余的胆固醇的方法，难以将胆固醇包合完全，解包合后胆固醇纯度较低等。

发明内容

本发明提出一种从蛋黄油中提取胆固醇的制备工艺，具有工艺简单、操作方便、收率高、成本低等优点，旨在提供一种新的制备胆固醇的工艺方法，解决或者缓解上述提到的问题。

本发明的技术方案是这样实现的：一种从蛋黄油中提取胆固醇的制备工艺，包括如下步骤：

步骤（1）：将蛋黄油上样至氧化铝/正相硅胶层析柱中；

步骤（2）：上样完后，加入极性溶剂进行洗脱；

步骤（3）：收集洗脱液，浓缩，得到胆固醇粗品；

步骤（4）：加入脂族醇或者脂族醇的水溶液对胆固醇粗品进行重结晶，过滤去除滤液，得到胆固醇产品。

优选的，步骤（1）中，经过发明人多次实验与生产，发现蛋黄油：氧化铝/正相硅胶的质量比为5：1～1：1时，对蛋黄油中的胆固醇吸附比较完全。质量比大于5：1时，胆固醇吸附不完全，发生泄漏，质量比小于1：1时，氧化铝/正相硅胶吸附未达到饱和，氧化铝/正相硅胶未达到有效使用。

优选的，步骤（2）中，经发明人反复筛选，结合胆固醇的理化分析以及氧化铝/正相硅胶柱层析理论，洗脱时先用极性小于3.5的低级性溶剂进行洗脱，优选为石油醚、环己烷、正己烷、二硫化碳、四氯化碳、二氯甲烷中的任一种；接着用极性大于4.0的高极性单一溶剂或混合溶剂洗脱，优选为丙酮、甲醇、乙醇、正丙醇、95%乙醇、正丁醇、乙酸乙酯、氯仿：甲醇≤30：1的混合溶剂、氯仿：丙酮≤15：1的混合溶剂、氯仿：乙醇≤30：1的混合溶剂中的任一种。

进一步，步骤（2）中，发明人对层析柱进行洗脱时，依次用1～5BV（床体积）低极性溶剂、1～5BV高极性溶剂进行洗脱。1～5BV低极性溶剂洗脱能有效地去除杂质并使胆固醇吸附于层析柱中不被洗脱下来，1～5BV高极性溶剂洗脱能有效地洗脱胆固醇，使胆固醇得到富集。

优选的，步骤（4）中，结合胆固醇的理化性质，选择胆固醇粗品质量的3～8倍脂族醇或者脂族醇的水溶液进行重结晶进一步除去杂质，增加胆固醇的纯度，脂族醇每个分子具有1～5个碳原子，更优选的为1～4个碳原子。

优选的，步骤（4）中，脂族醇的水溶液体积分数为80%～100%。

本发明的有益效果为：本发明以蛋黄油为起始原料，通过氧化铝/正相硅胶柱层析吸附，低极性溶剂、高极性溶剂依次洗脱，乙醇溶液精制，可得到高收率、高质量的胆固醇。本发明工艺与已报道文献工艺相比有如下优点：

1.以氧化铝或者正相硅胶为吸附剂，分离效果好；

2.胆固醇成品收率高，质量好，成品胆固醇含量≥95%，产品的收率≥2.0%。

3.生产操作简单，便于工业化生产。

具体实施方式

下面将对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1

本实施例提取胆固醇的操作方法按照如下两个步骤来进行：

胆固醇粗品的制备：将300g蛋黄油上样至150g氧化铝层析柱中；上样完后，先加入600ml二氯甲烷中进行洗脱，然后加入750ml甲醇进行洗脱；收集甲醇洗脱液，浓缩，回收溶剂，得到胆固醇粗品，其中回收的溶剂可以节约成本，便于工业生产。

胆固醇产品的制备：加入100ml95%乙醇对胆固醇粗品进行重结晶，过滤去除滤液，得到胆固醇产品，发明人对得到的胆固醇产品进行鉴定，采用红外图谱和高效液相色谱法对胆固醇的红外图谱和色谱图与2010年中国药典进行表征比较，其中，高效液相色谱分析条件为：柱长及型号：E2220696C184.6×250mm,5μm，柱温：30℃，流速：1ml/min，流动相：甲醇，检测器：蒸发光散射检测器，通过表征鉴定，得到的胆固醇与2010版中国药典的表征数据一致，通过高效液相色谱法分析胆固醇的含量与收率，得出胆固醇产品纯度为98.5%，收率为2.4%。

实施例2

本实施例提取胆固醇的操作方法按照如下两个步骤来进行：

胆固醇粗品的制备：将500g蛋黄油上样至300g正相硅胶层析柱中；上样完后，先加入1500ml环己烷中进行洗脱，然后加入1000ml乙醇进行洗脱；收集无水乙醇洗脱液，浓缩，回收溶剂，得到胆固醇粗品；

胆固醇产品的制备：加入120ml甲醇对胆固醇粗品进行重结晶，过滤去除滤液，得到胆固醇产品，采用同实施例1中同样的检测方法得出胆固醇产品纯度为99.4%，收率为2.5%。

实施例3

本实施例提取胆固醇的操作方法按照如下两个步骤来进行：

胆固醇粗品的制备：将15kg蛋黄油上样至10kg氧化铝层析柱中；上样完后，先加入30L石油醚中进行洗脱，然后加入40L氯仿：甲醇=10:1的混合溶剂进行洗脱；收集混合溶剂洗脱液，浓缩，回收溶剂，得到胆固醇粗品；

胆固醇产品的制备：加入3L乙醇对胆固醇粗品进行重结晶，过滤去除滤液，得到胆固醇产品，采用同实施例1中同样的检测方法得出胆固醇产品纯度为98.3%，收率为2.3%。

实施例4

本实施例提取胆固醇的操作方法按照如下两个步骤来进行：

胆固醇粗品的制备：将20kg蛋黄油上样至10kg正相硅胶层析柱中；上样完后，先加入40L环己烷中进行洗脱，然后加入35L丙酮进行洗脱；收集洗脱液，浓缩，回收溶剂，得到胆固醇粗品；

胆固醇产品的制备：加入4L90%乙醇对胆固醇粗品进行重结晶，过滤去除滤液，得到胆固醇产品，采用同实施例1中同样的检测方法得出胆固醇产品纯度为98.2%，收率为2.5%。

通过以上实施例可以得出，采用本发明公开的制备工艺，得到的成品胆固醇含量≥95%，产品的收率≥2.0%。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims

1.一种从蛋黄油中提取胆固醇的制备工艺，其特征在于，包括以下步骤：

步骤（1）：将蛋黄油上样至氧化铝/正相硅胶层析柱中；

步骤（2）：上样完后，加入极性溶剂进行洗脱；

步骤（3）：收集洗脱液，浓缩，得到胆固醇粗品；

2.如权利要求1所述的从蛋黄油中提取胆固醇的制备工艺，其特征在于：步骤（1）中，蛋黄油：氧化铝/正相硅胶的质量比为5：1～1：1。

3.如权利要求1所述的从蛋黄油中提取胆固醇的制备工艺，其特征在于：步骤（2）中，洗脱时先用1～5BV极性小于3.5的低极性溶剂进行洗脱，接着用1～5BV极性大于4.0的高极性单一溶剂或混合溶剂洗脱。

4.如权利要求3所述的从蛋黄油中提取胆固醇的制备工艺，其特征在于：所述低极性溶剂为石油醚、环己烷、正己烷、二硫化碳、四氯化碳、二氯甲烷、中的任一种。

5.如权利要求3所述的从蛋黄油中提取胆固醇的制备工艺，其特征在于：所述高极性单一溶剂或混合溶剂为丙酮、甲醇、乙醇、正丙醇、95%乙醇、正丁醇、乙酸乙酯、氯仿：甲醇≤30：1的混合溶剂、氯仿：丙酮≤15：1的混合溶剂、氯仿：乙醇≤30：1的混合溶剂中的任一种。

6.如权利要求1所述的从蛋黄油中提取胆固醇的制备工艺，其特征在于：步骤（4）中，加入胆固醇粗品质量的3～8倍脂族醇或者脂族醇的水溶液进行重结晶。

7.如权利要求1所述的从蛋黄油中提取胆固醇的制备工艺，其特征在于，步骤（4）中，所述脂族醇每个分子具有1～5个碳原子。

8.如权利要求7中所述的从蛋黄油中提取胆固醇的制备工艺，其特征在于：步骤（4）中，所述脂族醇每个分子具有1～4个碳原子。

9.如权利要求1所述的从蛋黄油中提取胆固醇的制备工艺，其特征在于：步骤（4）中，脂族醇的水溶液体积分数为80%～100%。