CN104171426A - 一种用于乌鸡雏鸡的微生态复合添加剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种用于乌鸡雏鸡的微生态复合添加剂及其制备方法，按重量份数取枯草芽孢杆菌制剂2-4份、党参10-20份、黄芪10-20份、茯苓10-20份、神曲5-10份、麦芽5-10份、山楂5-10份、甘草2.5-5份，混合后搅拌均匀，得到微生态复合添加剂。该微生态复合添加剂，每克微生态复合添加剂中益生菌孢子数约为100亿个，能够提高乌鸡雏鸡生长以及免疫性能。

Description

一种用于乌鸡雏鸡的微生态复合添加剂及其制备方法

技术领域

    本发明涉及饲料添加剂技术领域，具体涉及一种用于乌鸡雏鸡的微生态复合添加剂及其制备方法。

背景技术

随着抗生素饲料添加剂的危害逐渐被人们所认识，禁用抗生素已成世界共识，寻找新的能促生长、无毒副作用的绿色添加剂成为饲料行业研究的热点。研究发现芽孢杆菌微生态制剂具有促生长、提高机体免疫力等多种益生作用，其抗逆性强，耐酸碱、耐高温高压且生产工艺简单，作为抗生素替代品得到了广泛的研究与应用。由于胃肠道微生物具有宿主和环境专一性，因此，研制开发理想的禽用饲料添加剂，必须加强对家禽胃肠道益生微生物的研究。

中药作为我国传统医学的重要组成部分，是我国的传统医学文化遗产及国宝，具有作用广泛、副作用少、无残留、无耐药性、费用低廉等优点并逐渐为世界所接受。现代研究证明现代研究表明，中药含有多种成分，包括多糖、生物碱、苷类等，少则数种、数十种，多则上百种。随着实际需要的增长与现代科学的迅速发展，中药的研究日益深入，包括来源、栽培、炮制、鉴定、化学成分和药理作用，临床应用等诸多方面。已有很多研究表明中药有效成分在神经学，免疫学，心血管血方面均有提高与改善的作用。现在已有很多将中药疗法引入到动物疾病的预防与治疗中，中药制剂作为动物饲料添加剂可以起到促进生长、改善动物健康、提高饲料利用率等作用。另一方面中草药具有天然性、毒副作用小，不宜在畜禽机体内残留，长期使用不产生抗药性和耐药性等特点。与目前广泛使用的抗生素以及化学合成饲料添加剂相比，可以在一定程度上妥善解决我国禽类生产上长期沿用以化药抗生素为主体配合疫苗防疫体系所带来的化药、激素、抗菌素残留等问题。因此，中药制剂已成为当前饲料添加剂研究的一大热点。

肠道菌群对中药有效成分的代谢处置主要是以水解和还原反应为主。目前已经发现许多种中药有效成分被肠道菌群代谢后，发生转化，产生出具有较强药理活性的代谢产物，尤其是具有水溶性糖部分的葡糖苷成分，这类化合物在肠道内难以吸收，生物利用度低，肠内滞留时间较长而易受到肠道菌群的作用。它们以原形物显示药理活性的可能性较小，经肠菌代谢后被水解，生成苷元而发挥其药理作用。肠道菌群会产生许多药物代谢酶，不同种类的细菌产生不同的代谢酶，不同的药物代谢酶又参与到不同类型的药物代谢中这些细菌可通过“药物活化”使无活性的药物转化为有活性的药物，同时使有害的物质无毒化，反之亦然。中药和肠道菌群的相互作用对研究中药药效的发挥以及胃肠道消化系统疾病具有重要的意义。

    乌骨鸡(学名 Gallus domesticlus brisson), 又名乌鸡(White Silkie Bantams), 是闻名中外的药用家禽, 具有特殊的药用、营养及观赏价值。在唐朝，乌鸡被当作丹药的主要成份来治疗所有妇科疾病。《本草纲目》认为乌骨鸡有补虚劳羸弱，制消渴，益产妇，治妇人崩中带下及一些虚损诸病的功用。现代医学研究，乌鸡内含丰富的黑色素，蛋白质，B族维生素等18种氨基酸和18种微量元素，其中烟酸、维生素E、磷、铁、钾、钠的含量均高于普通鸡肉，胆固醇和脂肪含量却很低。乌鸡的血清总蛋白和球蛋白质含量均明显高于普通鸡。乌鸡肉中含氨基酸高于普通鸡，而且含铁元素也比普通鸡高很多，是营养价值极高的滋补品，被人们称乌鸡是“黑了心的宝贝”，所以，乌鸡是补虚劳、养身体的上好佳品。加强对乌骨鸡饲用抗生素替代品的研究，生产出质量上乘的药用家禽，是制备良好的中成药和保健食品的重要任务。

发明内容

本发明的目的是为解决上述技术问题的不足，提供一种用于乌鸡雏鸡的微生态复合添加剂及其制备方法，制得的微生态复合添加剂能够提高乌鸡雏鸡生长以及免疫性能。

本发明为解决上述技术问题的不足，所采用的技术方案是：一种用于乌鸡雏鸡的微生态复合添加剂，由以下重量份数的原料组成：枯草芽孢杆菌制剂2-4份、党参10-20份、黄芪10-20份、茯苓10-20份、神曲5-10份、麦芽5-10份、山楂5-10份、甘草2.5-5份组成。

一种用于乌鸡雏鸡的微生态复合添加剂的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

（1）、取中药原料党参、黄芪、茯苓、神曲、麦芽、山楂和甘草，分别粉碎后过80目筛，备用；

（2）、将所筛选自乌鸡的枯草芽孢杆菌菌种先放在恒温培养箱活化37℃、12h，冷却后得一级种子液，后按照二级种子液体积的2%-4%接种，在pH为6.0-8.0，温度为37℃，以及转速为140r/min的条件下恒温培养12h，进入对数期的二级种子液按照发酵培养基体积的2%进行接种，在温度为37℃，转速为200r/min以及pH为6.5，通气量为1.33VVm(0-12h)，2.77VVm(12-36h)的条件下进行发酵，发酵结束后的发酵液加入体积百分比10%的硅藻土制成母液，再经喷雾干燥机干燥制得枯草芽孢杆菌制剂；

所述种子液的配方为：葡萄糖3.8%、蛋白胨3.8%、牛肉浸膏3.8%、淀粉2.3%、氯化钠3.3%、KH₂PO₄ 3.3%，余量为蒸馏水；

所述发酵培养基的配方为：豆饼粉5.6%，玉米粉7.2%，Na₂HPO₄ 0.8%，(NH₄)₂SO₄ 0.4%，NH₄Cl 0.13%，CaCl₂0.13%，余量为蒸馏水；

（3）、按重量份数取枯草芽孢杆菌制剂2-4份、党参10-20份、黄芪10-20份、茯苓10-20份、神曲5-10份、麦芽5-10份、山楂5-10份、甘草2.5-5份，混合后搅拌均匀，得到微生态复合添加剂。

所述微生态复合添加剂，每克微生态复合添加剂中益生菌孢子数约为100亿个。

本发明的微生态复合添加剂的用量为：每一吨饲料加入1Kg复合添加剂。

有益效果

本发明的用于乌鸡雏鸡的微生态复合添加剂，每克微生态复合添加剂中益生菌孢子数约为100亿个，能够提高乌鸡雏鸡生长以及免疫性能。

附图说明

图1为本发明的复合添加剂不同配比对平均日增重影响的示意图；

图2为本发明的复合添加剂不同配比对不同时期料重比影响的示意图；

图3为本发明的复合添加剂不同配比对对脾脏指数影响的示意图；

图4为本发明的复合添加剂不同配比对法式囊指数影响的示意图；

图5为本发明的复合添加剂不同配比对ND效价影响的示意图。

具体实施方式

实施例1

一种用于乌鸡雏鸡的微生态复合添加剂的制备方法，包括以下步骤：

（1）、取中药原料党参、黄芪、茯苓、神曲、麦芽、山楂和甘草，分别粉碎后过80目筛，备用；

（2）、将所筛选自乌鸡的枯草芽孢杆菌菌种先放在恒温培养箱活化37℃、12h，冷却后得一级种子液，后按照二级种子液体积的2%%接种，在pH为6.0，温度为37℃，以及转速为140r/min的条件下恒温培养12h，进入对数期的二级种子液按照发酵培养基体积的2%进行接种，在温度为37℃，转速为200r/min以及pH为6.5，通气量为1.33VVm(0-12h)，2.77VVm(12-36h)的条件下进行发酵，发酵结束后的发酵液加入体积百分比10%的硅藻土制成母液，再经喷雾干燥机干燥制得枯草芽孢杆菌制剂；

所述种子液的配方为：葡萄糖3.8%、蛋白胨3.8%、牛肉浸膏3.8%、淀粉2.3%、氯化钠3.3%、KH₂PO₄ 3.3%，余量为蒸馏水；

所述发酵培养基的配方为：豆饼粉5.6%，玉米粉7.2%，Na₂HPO₄ 0.8%，(NH₄)₂SO₄ 0.4%，NH₄Cl 0.13%，CaCl₂0.13%，余量为蒸馏水；

乌鸡源枯草芽孢杆菌的筛选：将购买的健康泰和乌鸡无菌操作进行解剖，分别取胃肠数段，迅速刮取胃肠粘液于无菌试管中80℃水浴20分钟。梯度稀释涂平板。 挑取生长良好、菌落较大的单菌落再进行划线培养分离，将培养分离纯化的菌落接种于营养琼脂培养基斜面上，培养24～48ｈ后，保存于4℃冰箱中待用。对所挑选的单菌落进行革兰氏染色及改良的Schaeffer和Fulton氏芽孢染色，镜检，选择所需菌落进一步分离纯化培养。所用培养基为LB培养基：蛋白胨1g，牛肉膏0.5g，氯化钠0.5g，蒸馏水l00mL，pH7.2，若为固体培养基则加入2g的琼脂，121℃灭菌20min。

将分离到的芽孢杆菌进行下述生理生化鉴定：淀粉水解试验；酪素水解试验；明胶液化试验；过氧化氢酶试验；L-酪氨酸水解试验甲基红试验；v-p试验；吲哚试验；葡萄糖产酸产气。生理生化试验及判别标准参照《伯杰细菌鉴定手册第8版》进行操作。

菌种在液体培养基中过夜，取1.5ml菌液于EP管中，8000 r/min离心1min获得菌体然后用细菌基因组DNA提取试剂盒提取细菌总DNA。细菌基因组DNA提取试剂盒（购自北京艾德莱生物技术有限公司）。详细操作步骤见试剂盒说明书。

对菌株16S rDNA进行扩增。扩增引物 27F：5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3'，1492R：5'-GGTTACCTTGTTACGACTT-3'。PCR反应条件：30个循环，94℃变性5min，94℃40s，54℃50s，72℃60s，72℃延伸10min，4℃保存。取3μlPCR 产物于 1.0% 琼脂糖凝胶电泳后在凝胶成像仪中观察条带。将PCR产物送至上海生工测序。

根据测序结果以及生理生化鉴定可以推断该菌种为枯草芽孢杆菌。对该菌种进行高产酶高耐受筛选后，进行动物实验，发现该菌种具有促生长、提高机体免疫力等多种益生作用。

    （3）、按重量份数取枯草芽孢杆菌制剂2份、党参10份、黄芪10份、茯苓10份、神曲5份、麦芽5份、山楂5份、甘草2.5份，混合后搅拌均匀，得到微生态复合添加剂。

所述微生态复合添加剂，每克微生态复合添加剂中益生菌孢子数约为100亿个。

实施例2

一种用于乌鸡雏鸡的微生态复合添加剂的制备方法，包括以下步骤：

（1）、取中药原料党参、黄芪、茯苓、神曲、麦芽、山楂和甘草，分别粉碎后过80目筛，备用；

（2）、将所筛选自乌鸡的枯草芽孢杆菌菌种先放在恒温培养箱活化37℃、12h，冷却后得一级种子液，后按照二级种子液体积的4%接种，在pH为8.0，温度为37℃，以及转速为140r/min的条件下恒温培养12h，进入对数期的二级种子液按照发酵培养基体积的2%进行接种，在温度为37℃，转速为200r/min以及pH为6.5，通气量为1.33VVm(0-12h)，2.77VVm(12-36h)的条件下进行发酵，发酵结束后的发酵液加入体积百分比10%的硅藻土制成母液，再经喷雾干燥机干燥制得枯草芽孢杆菌制剂；

所述种子液的配方为：葡萄糖3.8%、蛋白胨3.8%、牛肉浸膏3.8%、淀粉2.3%、氯化钠3.3%、KH₂PO₄ 3.3%，余量为蒸馏水；

所述发酵培养基的配方为：豆饼粉5.6%，玉米粉7.2%，Na₂HPO₄ 0.8%，(NH₄)₂SO₄ 0.4%，NH₄Cl 0.13%，CaCl₂0.13%，余量为蒸馏水；

   （3）、按重量份数取枯草芽孢杆菌制剂2份、党参15份、黄芪15份、茯苓15份、神曲7.5份、麦芽7.5份、山楂7.5份、甘草3.5份，混合后搅拌均匀，得到微生态复合添加剂。

实施例3

一种用于乌鸡雏鸡的微生态复合添加剂的制备方法，包括以下步骤：

（1）、取中药原料党参、黄芪、茯苓、神曲、麦芽、山楂和甘草，分别粉碎后过80目筛，备用；

（2）、将所筛选自乌鸡的枯草芽孢杆菌菌种先放在恒温培养箱活化37℃、12h，冷却后得一级种子液，后按照二级种子液体积的3%接种，在pH为7.0，温度为37℃，以及转速为140r/min的条件下恒温培养12h，进入对数期的二级种子液按照发酵培养基体积的2%进行接种，在温度为37℃，转速为200r/min以及pH为6.5，通气量为1.33VVm(0-12h)，2.77VVm(12-36h)的条件下进行发酵，发酵结束后的发酵液加入体积百分比10%的硅藻土制成母液，再经喷雾干燥机干燥制得枯草芽孢杆菌制剂；

所述种子液的配方为：葡萄糖3.8%、蛋白胨3.8%、牛肉浸膏3.8%、淀粉2.3%、氯化钠3.3%、KH₂PO₄ 3.3%，余量为蒸馏水；

所述发酵培养基的配方为：豆饼粉5.6%，玉米粉7.2%，Na₂HPO₄ 0.8%，(NH₄)₂SO₄ 0.4%，NH₄Cl 0.13%，CaCl₂0.13%，余量为蒸馏水；

   （3）、按重量份数取枯草芽孢杆菌制剂2份、党参20份、黄芪20份、茯苓20份、神曲10份、麦芽10份、山楂10份、甘草5份，混合后搅拌均匀，得到微生态复合添加剂。

不同配比的饲料添加剂对乌鸡不同时期生长性能的影响以及不同时期免疫性能的影响

    取一日龄泰和乌鸡200只分四组，分别为普通日粮组（不添加本发明的添加剂）、低剂量中草药配方组（加入实施例1制得的饲料添加剂）、中剂量中草药配方组（加入实施例2制得的饲料添加剂）以及高剂量中草药配方组（加入实施例3制得的饲料添加剂），实验结果如附图所示。

Claims (3)

1.一种用于乌鸡雏鸡的微生态复合添加剂，其特征在于：由以下重量份数的原料组成：枯草芽孢杆菌制剂2-4份、党参10-20份、黄芪10-20份、茯苓10-20份、神曲5-10份、麦芽5-10份、山楂5-10份、甘草2.5-5份组成。

2.如权利要求1所述的一种用于乌鸡雏鸡的微生态复合添加剂的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

（1）、取中药原料党参、黄芪、茯苓、神曲、麦芽、山楂和甘草，分别粉碎后过80目筛，备用；

（2）、将所筛选自乌鸡的枯草芽孢杆菌菌种先放在恒温培养箱活化37℃、12h，冷却后得一级种子液，后按照二级种子液体积的2%-4%接种，在pH为6.0-8.0，温度为37℃，以及转速为140r/min的条件下恒温培养12h，进入对数期的二级种子液按照发酵培养基体积的2%进行接种，在温度为37℃，转速为200r/min以及pH为6.5，通气量为1.33VVm(0-12h)，2.77VVm(12-36h)的条件下进行发酵，发酵结束后的发酵液加入体积百分比10%的硅藻土制成母液，再经喷雾干燥机干燥制得枯草芽孢杆菌制剂；

所述种子液的配方为：葡萄糖3.8%、蛋白胨3.8%、牛肉浸膏3.8%、淀粉2.3%、氯化钠3.3%、KH₂PO₄ 3.3%，余量为蒸馏水；

所述发酵培养基的配方为：豆饼粉5.6%，玉米粉7.2%，Na₂HPO₄ 0.8%，(NH₄)₂SO₄ 0.4%，NH₄Cl 0.13%，CaCl₂0.13%，余量为蒸馏水；

、按重量份数取枯草芽孢杆菌制剂2-4份、党参10-20份、黄芪10-20份、茯苓10-20份、神曲5-10份、麦芽5-10份、山楂5-10份、甘草2.5-5份，混合后搅拌均匀，得到微生态复合添加剂。

3.如权利要求2所述的一种用于乌鸡雏鸡的微生态复合添加剂的制备方法制得的微生态复合添加剂，其特征在于：每克微生态复合添加剂中益生菌孢子数约为100亿个。