CN109566905A - 一种提高土鸡免疫力的中草药益生菌 - Google Patents

一种提高土鸡免疫力的中草药益生菌 Download PDF

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Abstract

本发明属于畜牧技术领域，具体涉及一种提高土鸡免疫力的中草药益生菌，按照重量份数计：包括中草药制剂10～15重量份、复合益生菌微囊1.2～2.5重量份、寡糖0.8～1.5重量份；所述复合益生菌微囊由以下原料按照重量份数计制得：蜡样芽孢杆菌微囊3～5份、枯草芽孢杆菌微囊1～5份、布氏乳杆菌微囊2.5～4.5份、米曲霉菌微囊2.2～3.8份；所述寡糖为大豆低聚糖、甘露寡糖、异麦芽寡糖三种原料按照质量比为1:2～3:1.2～1.8混合而得。本发明能提高益生菌在胃液中的存活率、提高林下无抗散养鸡群免疫功能，减少鸡群疾病的发生和减少抗生素滥用现象。

Description

一种提高土鸡免疫力的中草药益生菌
【技术领域】
本发明涉及畜牧技术领域，具体涉及一种提高土鸡免疫力的中草药益生菌。
【背景技术】
改革开放以来，我国畜牧业得到了快速发展，畜牧业生产水平不断提高，养殖模式更趋向于集约化养殖。但是随着养殖集约化程度的提高，养殖环境日趋恶化，病害发生率越来越高，促使抗生素使用现象加剧，同时畜产品的质量不断下降，引起人们对食品安全问题极大关注。
林下无抗生态散养鸡因其为绿色、无公害畜产品、肉品质鲜美、不使用饲料添加剂，特别是抗生素和激素的使用，所生产的畜产品安全而普遍受到消费者的青睐。但是无抗散养会存在一个问题：在没用抗生素作为防治药物的情况下，鸡的疾病发生率增加，无抗生素治疗将会增加感染鸡的死亡率，造成经济损失，增加饲养成本。寻找一种能够替代抗生素，对人体健康无影响的绿色兽药是目前的研究方向。
中草药益生菌制剂是目前养殖业疾病防治的研究热点。中草药具有抗菌、抑菌且抗菌谱广、毒副作用小、不易产生耐药性的特点，并具有促生长、抗病毒、增强机体免疫功能的作用，是一种天然、绿色药物，对动物和人体安全性高。益生菌可以改善动物消化道微生态平衡，补充益生菌的同时可抑制致病菌群的生长繁殖、刺激免疫系统应答。但是由于鸡的消化道胃液pH在2.0～3.0左右，益生菌进入胃后，存活率很低，使益生菌制剂达不到理想效果。因此，研究能提高益生菌在胃液中的存活率、提高鸡群免疫力的中草药益生菌制剂，减少鸡群疾病的发生、减少抗生素滥用现象，具有重要意义。
【发明内容】
本发明的发明目的在于：针对上述的问题，提供一种提高土鸡免疫力的中草药益生菌，能提高益生菌在胃液中的存活率、提高林下无抗散养鸡群免疫功能，减少鸡群疾病的发生和减少抗生素滥用现象。
为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
一种提高土鸡免疫力的中草药益生菌，按照重量份数计：包括中草药制剂10～15重量份、复合益生菌微囊1.2～2.5重量份、寡糖0.8～1.5重量份；
所述中草药制剂由以下原料按照重量份数计制得：
党参10～20份、黄芪15～20份、白术5～10份、茯苓3～8份、板蓝根5～15份，神曲5～10份、麦芽2～6份、山楂1～4份、甘草2～4份；
所述复合益生菌微囊由以下原料按照重量份数计制得：蜡样芽孢杆菌微囊3～5份、枯草芽孢杆菌微囊1～5份、布氏乳杆菌微囊2.5～4.5份、米曲霉菌微囊2.2～3.8份；
所述寡糖为大豆低聚糖、甘露寡糖、异麦芽寡糖三种原料按照质量比为1:2～3:1.2～1.8混合而得。
进一步说明，所述复合益生菌微囊的具体操作是：
(1)菌悬液准备：分别将蜡样芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、布氏乳杆菌、米曲霉分别接种于100mL改良牛肉膏蛋白胨液体培养基中，于37℃，150r/min培养72h；将菌液6000r/min离心5min，弃上清，菌体沉淀用10mL无菌生理水悬浮成1×109cfu/mL；
(2)制备蜡样芽孢杆菌微囊：将植物油与吐温-80混合乳化得到植物油乳化液，分别将蜡样芽孢杆菌悬液、枯草芽孢杆菌悬液、布氏乳杆菌悬液、米曲霉菌悬液，以0.2ml/s的速度滴加入海藻酸钠溶液中搅拌混合后，与植物油乳化液按照1:3～5的体积比混合，用乳化机进行乳化20～45min，然后将乳化液加入到氯化钙溶液中，继续用乳化机乳化10～15min，接着继续加入壳聚糖进行固化后，用氯化钙溶液和氯化钠溶液洗涤后离心30min，收集大小为10～15μm的微囊，将微囊放置在45℃下干燥处理3h，即可分别制备成蜡样芽孢杆菌微囊、枯草芽孢杆菌微囊、布氏乳杆菌微囊、米曲霉菌微囊，将微囊混合即可得到复合益生菌微囊。
进一步说明，所述植物油为亚麻油、大豆油、橄榄油中的一种。
进一步说明，所述改良牛肉膏蛋白胨液体培养基的培养基配方为：牛肉膏3g、蛋白胨10g、NaCl5g、琼脂15g、党参多糖3～5g、香蕉汁100ml、马蹄汁100ml、水800ml、pH7.0～8.0。
进一步说明，所述党参多糖是由以下具体操作制备得到：
将党参超微粉碎后，然后加入体积3～5倍的石油醚混合，水浴50～55℃下进行回流提取1～3次、过滤后将滤渣进醇提，然后离心取沉淀，与D160大孔吸附树脂按照体积比为1:2混合，接着振荡混匀过滤后，以流速2s/ml的速度使用清水冲洗D160大孔吸附树脂，过滤，合并滤液，然后加入适量亚硒酸钠，混匀，再加入适量次磷酸钠，混匀，在60℃下水浴反应2～3小时，趁热过滤，向滤液中加入质量浓度75％乙醇进行醇提过夜，过滤后的滤液进行浓缩、喷雾干燥得到富硒的党参多糖。
进一步说明，所述中草药制剂具体操作如下：
第一步、按照重量份数计，分别称取党参10～20份、黄芪15～20份、白术5～10份、茯苓3～8份、板蓝根5～15份、神曲5～10份、麦芽2～6份、山楂1～4份、甘草2～4份；
第二步、将甘蔗压榨汁、灭菌、酒精发酵、醋酸发酵、过滤灭菌得到甘蔗原醋；
第三步、将党参、黄芪、白术、茯苓、板蓝根、神曲、麦芽经过超微粉碎后得到≤5μm粒径的混合粉末，加入甘蔗原醋直至浸没超过混合粉末并高出1～2cm，常温下进行浸泡20～30min后，然后进行真空浓缩，得到中草药醋粉；
第四步、将山楂、甘草经过超微粉碎后得到≤5μm粒径的混合粉末，然后与中草药醋粉混合得到中草药制剂。
进一步说明，所述甘蔗原醋的酸度为2.81～2.96g/100mL。
如上所述的一种提高土鸡免疫力的中草药益生菌的应用，所述中草药益生菌作为鸡饲料的添加剂，添加量为饲料重量的2％，能提高鸡免疫力。
综上所述，由于采用了上述技术方案，本发明的有益效果是：
现有技术中虽已公开寡糖、益生菌和中草药之间达到在调整肠道微生态平衡方面具有协同作用，但是并未有针对鸡禽的饲料添加剂，且并未有公开过如何能提高饲料添加剂在鸡禽肠道中能充分发挥添加剂的作用，益生菌存活率提高，中草药制剂如何能充分利用也是丞待解决的问题。本申请采用的技术方案完全能解决上述的问题。
(1)本申请将益生菌进行正交筛选发现，将蜡样芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、布氏乳杆菌、米曲霉菌按照本申请去比例复配后能够更好的促进鸡肠胃中的有益菌的分解和促进消化的作用，但是各种菌进入鸡肠胃后在肠胃的pH环境下，存活率不高，仅仅达到20％左右，本申请人研究发现将复配的菌进行微囊化处理后能够大大提高了复合益生菌进入鸡的肠胃后的存活率，但发现经过常规微囊化处理后释放的复合益生菌与未经过微囊化处理的复合益生菌存活量相等时，复合益生菌的活性弱于未经过微囊化处理的复合益生菌，这可能是因为经过微囊化处理后，益生菌的在缓慢释放过程益生菌超过了生长期进入了衰亡期降低了益生菌的活性，也有可能是益生菌在经过微囊处理后破壁被囊壁上的某些物质所影响而降低益生菌的活性，经过试验研究对复合益生菌进行培养，对牛肉膏蛋白胨液体培养基经过改良后的培养基进行培养，筛选出本申请的改良培养基进行培养有效的提高了益生菌的活性和耐性，并且能提高益生菌的在鸡食用后在肠胃下具有更好的促进饲料的消化速率；
(2)另，中草药制剂能有效的提高鸡免疫力的功效，党参具有调整胃肠运动、抗溃疡、增强机体免疫功能、增强造血功能、抗应激的作用，黄芪具有补气升阳、益卫固表提升巨噬细胞吞噬能力的作用，对体液免疫、细胞免疫均有促进作用，白术具有抑菌、免疫调节、修复胃黏膜、抗炎镇痛作用，白术挥发油对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌具有抑制作用，能有效促进外周血淋巴细胞增殖，对细胞因子IL-2、IL-4、IL-10、IL-12的分泌具有明显的促进作用，茯苓中的多糖可增强机体的细胞免疫和体液免疫水平等，板蓝根含有植物性蛋白、树脂状物、糖类、芥子甙、多种氨基酸及微量元素；神曲含有酵母菌、淀粉酶、维生素B复合体、麦角甾醇、蛋白质及脂肪；麦芽含有淀粉酶、催化酶、过氧化异构酶等，另含大麦芽碱，大麦芽胍碱A、B，腺嘌呤、蛋白质，氨基酸，维生素D、D、E，细胞色素C，共同作用后；这七种中草药原料具有的单一成分中均对鸡的免疫力提高有一定的功效，但是发现现有很多的养殖户为了达到提高鸡免疫力的作用仅仅将中草药粉碎后作为饲料的添加剂，发现药效并不显著，并且对鸡粪进行检测长期食用，鸡粪中残留的中草药含量高达18～26％，说明中草药的利用率有限，经过本申请人的研究发现对中草药进行超微处理能进一步的提高鸡肠胃的消化率，并且将超微粉碎后的混合粉末进行甘蔗原醋处理后，能有效的软化中草药粉末，并能对中草药中难溶物质进行溶解出液体相，接着加入超微粉碎后的山楂、甘草粉末，能进一步的提高中草药制剂的适口性和促进鸡的采食量；
(3)寡糖选用大豆低聚糖、甘露寡糖、异麦芽寡糖按照质量比为1:2～3:1.2～1.8混合而得，当益生菌进入鸡肠胃后提供一个良好的环境能够针对本申请正交试验后得到的蜡样芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、布氏乳杆菌、米曲霉菌具有促进增殖的作用，对其他菌有抑制作用；
综上所述，本申请的技术方案中有针对性的对鸡的免疫力进行研究，正交筛选适合的复合益生菌，并针对各种环境的应对，创新对复合益生菌进行特殊培养基培养，并复配适合的复合益生菌的寡糖，三者直接相互协同促进，相辅相成，缺一不可，共同作用，应用在鸡饲料中，有效的提高了鸡的免疫力性能。
【具体实施方式】
为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合实施例，进一步阐述本发明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
香蕉汁是将香蕉去皮后加入3倍体积的去离子水进行搅拌成汁即可。
马蹄汁是将马蹄去皮后加入3倍体积的去离子水进行搅拌成汁即可。
实施例1
一、原料组成：
一种提高土鸡免疫力的中草药益生菌，按照重量份数计：包括中草药制剂10重量份、复合益生菌微囊1.2重量份、寡糖0.8重量份；
中草药制剂由以下原料按照重量份数计制得：
党参10份、黄芪15份、白术5份、茯苓3份、板蓝根5份，神曲5份、麦芽2份、山楂1份、甘草2份；
复合益生菌微囊由以下原料按照重量份数计制得：蜡样芽孢杆菌微囊3份、枯草芽孢杆菌微囊1份、布氏乳杆菌微囊2.5份、米曲霉菌微囊2.2份；
寡糖为大豆低聚糖、甘露寡糖、异麦芽寡糖三种原料按照质量比为1:2:1.2混合而得。
二、制备工艺：
将上述的原料应用在以下的一种提高土鸡免疫力的中草药益生菌的制备方法，具体步骤如下：
第一步、中草药制剂的准备：
S1、按照重量份数计，分别称取党参10份、黄芪15份、白术5份、茯苓3份、板蓝根5份，神曲5份、麦芽2份、山楂1份、甘草2份；
S2、将甘蔗压榨汁、灭菌、酒精发酵、醋酸发酵、过滤灭菌得到酸度为2.81g/100mL的甘蔗原醋；
S3、将党参、黄芪、白术、茯苓、板蓝根、神曲、麦芽经过超微粉碎后得到≤5μm粒径的混合粉末，加入甘蔗原醋直至浸没超过混合粉末并高出1cm，常温下进行浸泡20min后，然后进行真空浓缩，得到中草药醋粉；
S4、将山楂、甘草经过超微粉碎后得到≤5μm粒径的混合粉末，然后与中草药醋粉混合得到中草药制剂；
第二步、复合益生菌微囊的准备：
(1)党参多糖的准备：将党参超微粉碎后，然后加入体积3倍的石油醚混合，水浴50℃下进行回流提取1次、过滤后将滤渣进醇提，然后离心取沉淀，与D160大孔吸附树脂按照体积比为1:2混合，接着振荡混匀过滤后，以流速2s/ml的速度使用清水冲洗D160大孔吸附树脂，过滤，合并滤液，然后加入适量亚硒酸钠，混匀，再加入适量次磷酸钠，混匀，在60℃下水浴反应2小时，趁热过滤，向滤液中加入质量浓度75％乙醇进行醇提过夜，过滤后的滤液进行浓缩、喷雾干燥得到富硒的党参多糖；
(2)改良牛肉膏蛋白胨液体培养基的准备：称取党参多糖3g、牛肉膏3g、蛋白胨10g、NaCl5g、琼脂15g、香蕉汁100ml、马蹄汁100ml、水800ml、调节pH7.0得到改良牛肉膏蛋白胨液体培养基；
(3)菌悬液准备：分别将蜡样芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、布氏乳杆菌、米曲霉分别接种于100mL改良牛肉膏蛋白胨液体培养基中，于37℃，150r/min培养72h；将菌液6000r/min离心5min，弃上清，菌体沉淀用10mL无菌生理水悬浮成1×109cfu/mL；
(4)制备蜡样芽孢杆菌微囊：将亚麻油与吐温-80混合乳化得到植物油乳化液，分别将蜡样芽孢杆菌悬液、枯草芽孢杆菌悬液、布氏乳杆菌悬液、米曲霉菌悬液，以0.2ml/s的速度滴加入海藻酸钠溶液中搅拌混合后，与植物油乳化液按照1:3的体积比混合，用乳化机进行乳化20min，然后将乳化液加入到氯化钙溶液中，继续用乳化机乳化10min，接着继续加入壳聚糖进行固化后，用氯化钙溶液和氯化钠溶液洗涤后离心30min，收集大小为10μm的微囊，将微囊放置在45℃下干燥处理3h，即可分别制备成蜡样芽孢杆菌微囊、枯草芽孢杆菌微囊、布氏乳杆菌微囊、米曲霉菌微囊，将微囊混合即可得到复合益生菌微囊。
第三步、中草药益生菌：将步骤一准备的中草药制剂、步骤二准备的复合益生菌微囊、寡糖按照原料组成比例称取混合，即可得到中草药益生菌。
实施例2
一、原料组成：
一种提高土鸡免疫力的中草药益生菌，按照重量份数计：包括中草药制剂15重量份、复合益生菌微囊2.5重量份、寡糖1.5重量份；
中草药制剂由以下原料按照重量份数计制得：
党参20份、黄芪20份、白术10份、茯苓8份、板蓝根15份，神曲10份、麦芽6份、山楂4份、甘草4份；
复合益生菌微囊由以下原料按照重量份数计制得：蜡样芽孢杆菌微囊5份、枯草芽孢杆菌微囊5份、布氏乳杆菌微囊4.5份、米曲霉菌微囊3.8份；
寡糖为大豆低聚糖、甘露寡糖、异麦芽寡糖三种原料按照质量比为1:3:1.8混合而得。
二、制备工艺：
将上述的原料应用在以下的一种提高土鸡免疫力的中草药益生菌的制备方法，具体步骤如下：
第一步、中草药制剂的准备：
S1、按照重量份数计，分别称取党参20份、黄芪20份、白术10份、茯苓8份、板蓝根15份，神曲10份、麦芽6份、山楂4份、甘草4份；
S2、将甘蔗压榨汁、灭菌、酒精发酵、醋酸发酵、过滤灭菌得到酸度为2.96g/100mL的甘蔗原醋；
S3、将党参、黄芪、白术、茯苓、板蓝根、神曲、麦芽经过超微粉碎后得到≤5μm粒径的混合粉末，加入甘蔗原醋直至浸没超过混合粉末并高出2cm，常温下进行浸泡30min后，然后进行真空浓缩，得到中草药醋粉；
S4、将山楂、甘草经过超微粉碎后得到≤5μm粒径的混合粉末，然后与中草药醋粉混合得到中草药制剂；
第二步、复合益生菌微囊的准备：
(1)党参多糖的准备：将党参超微粉碎后，然后加入体积5倍的石油醚混合，水浴55℃下进行回流提取3次、过滤后将滤渣进醇提，然后离心取沉淀，与D160大孔吸附树脂按照体积比为1:2混合，接着振荡混匀过滤后，以流速2s/ml的速度使用清水冲洗D160大孔吸附树脂，过滤，合并滤液，然后加入适量亚硒酸钠，混匀，再加入适量次磷酸钠，混匀，在60℃下水浴反应3小时，趁热过滤，向滤液中加入质量浓度75％乙醇进行醇提过夜，过滤后的滤液进行浓缩、喷雾干燥得到富硒的党参多糖；
(2)改良牛肉膏蛋白胨液体培养基的准备：称取党参多糖5g、牛肉膏3g、蛋白胨10g、NaCl5g、琼脂15g、香蕉汁100ml、马蹄汁100ml、水800ml、调节pH8.0得到改良牛肉膏蛋白胨液体培养基；
(3)菌悬液准备：分别将蜡样芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、布氏乳杆菌、米曲霉分别接种于100mL改良牛肉膏蛋白胨液体培养基中，于37℃，150r/min培养72h；将菌液6000r/min离心5min，弃上清，菌体沉淀用10mL无菌生理水悬浮成1×109cfu/mL；
(4)制备蜡样芽孢杆菌微囊：将橄榄油植物油与吐温-80混合乳化得到植物油乳化液，分别将蜡样芽孢杆菌悬液、枯草芽孢杆菌悬液、布氏乳杆菌悬液、米曲霉菌悬液，以0.2ml/s的速度滴加入海藻酸钠溶液中搅拌混合后，与植物油乳化液按照1:5的体积比混合，用乳化机进行乳化45min，然后将乳化液加入到氯化钙溶液中，继续用乳化机乳化15min，接着继续加入壳聚糖进行固化后，用氯化钙溶液和氯化钠溶液洗涤后离心30min，收集大小为15μm的微囊，将微囊放置在45℃下干燥处理3h，即可分别制备成蜡样芽孢杆菌微囊、枯草芽孢杆菌微囊、布氏乳杆菌微囊、米曲霉菌微囊，将微囊混合即可得到复合益生菌微囊。
第三步、中草药益生菌：将步骤一准备的中草药制剂、步骤二准备的复合益生菌微囊、寡糖按照原料组成比例称取混合，即可得到中草药益生菌。
实施例3
一、原料组成：
一种提高土鸡免疫力的中草药益生菌，按照重量份数计：包括中草药制剂12重量份、复合益生菌微囊1.9重量份、寡糖1.2重量份；
中草药制剂由以下原料按照重量份数计制得：
党参16份、黄芪18份、白术7份、茯苓5份、板蓝根12份，神曲8份、麦芽5份、山楂3份、甘草3份；
复合益生菌微囊由以下原料按照重量份数计制得：蜡样芽孢杆菌微囊4份、枯草芽孢杆菌微囊3份、布氏乳杆菌微囊3.5份、米曲霉菌微囊2.8份；
寡糖为大豆低聚糖、甘露寡糖、异麦芽寡糖三种原料按照质量比为1:2.3:1.5混合而得。
二、制备工艺：
将上述的原料应用在以下的一种提高土鸡免疫力的中草药益生菌的制备方法，具体步骤如下：
第一步、中草药制剂的准备：
S1、按照重量份数计，分别称取党参16份、黄芪18份、白术7份、茯苓5份、板蓝根12份，神曲8份、麦芽5份、山楂3份、甘草3份；
S2、将甘蔗压榨汁、灭菌、酒精发酵、醋酸发酵、过滤灭菌得到酸度为2.92g/100mL的甘蔗原醋；
S3、将党参、黄芪、白术、茯苓、板蓝根、神曲、麦芽经过超微粉碎后得到≤5μm粒径的混合粉末，加入甘蔗原醋直至浸没超过混合粉末并高出1.5cm，常温下进行浸泡25min后，然后进行真空浓缩，得到中草药醋粉；
S4、将山楂、甘草经过超微粉碎后得到≤5μm粒径的混合粉末，然后与中草药醋粉混合得到中草药制剂；
第二步、复合益生菌微囊的准备：
(1)党参多糖的准备：将党参超微粉碎后，然后加入体积4倍的石油醚混合，水浴52℃下进行回流提取2次、过滤后将滤渣进醇提，然后离心取沉淀，与D160大孔吸附树脂按照体积比为1:2混合，接着振荡混匀过滤后，以流速2s/ml的速度使用清水冲洗D160大孔吸附树脂，过滤，合并滤液，然后加入适量亚硒酸钠，混匀，再加入适量次磷酸钠，混匀，在60℃下水浴反应2.5小时，趁热过滤，向滤液中加入质量浓度75％乙醇进行醇提过夜，过滤后的滤液进行浓缩、喷雾干燥得到富硒的党参多糖；
(2)改良牛肉膏蛋白胨液体培养基的准备：称取党参多糖4g、牛肉膏3g、蛋白胨10g、NaCl5g、琼脂15g、香蕉汁100ml、马蹄汁100ml、水800ml、调节pH7.2得到改良牛肉膏蛋白胨液体培养基；
(3)菌悬液准备：分别将蜡样芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、布氏乳杆菌、米曲霉分别接种于100mL改良牛肉膏蛋白胨液体培养基中，于37℃，150r/min培养72h；将菌液6000r/min离心5min，弃上清，菌体沉淀用10mL无菌生理水悬浮成1×109cfu/mL；
(4)制备蜡样芽孢杆菌微囊：将大豆油与吐温-80混合乳化得到植物油乳化液，分别将蜡样芽孢杆菌悬液、枯草芽孢杆菌悬液、布氏乳杆菌悬液、米曲霉菌悬液，以0.2ml/s的速度滴加入海藻酸钠溶液中搅拌混合后，与植物油乳化液按照1:4的体积比混合，用乳化机进行乳化32min，然后将乳化液加入到氯化钙溶液中，继续用乳化机乳化12min，接着继续加入壳聚糖进行固化后，用氯化钙溶液和氯化钠溶液洗涤后离心30min，收集大小为12μm的微囊，将微囊放置在45℃下干燥处理3h，即可分别制备成蜡样芽孢杆菌微囊、枯草芽孢杆菌微囊、布氏乳杆菌微囊、米曲霉菌微囊，将微囊混合即可得到复合益生菌微囊。
第三步、中草药益生菌：将步骤一准备的中草药制剂、步骤二准备的复合益生菌微囊、寡糖按照原料组成比例称取混合，即可得到中草药益生菌。
验证一：
1.试验方法
分别将实施例1制备得到的中草药益生菌作为鸡饲料的添加剂，添加量为饲料重量的2％；
将330只1日龄土鸡随机分成11组，每组30只鸡。
组1：只添加基础日粮(玉米60％、豆粕30％、鱼粉3％、豆油3％、食盐0.25％、磷酸氢钙1.5％、石粉1.5％、氯化胆碱0.1％、复合维生素与微量元素0.65％)；
组2：基础日粮中添加2％中草药制剂；
组3：基础日粮中添加1.8％中草药制剂和0.2％蜡样芽孢杆菌微囊；
组4：基础日粮中添加1.8％中草药制剂和0.2％枯草芽孢杆菌微囊；
组5：基础日粮中添加1.8％中草药制剂和0.2％布氏乳杆菌微囊；
组6：基础日粮中添加1.8％中草药制剂和0.2％米曲霉菌微囊；
组7：基础日粮中添加1.8％中草药制剂和0.2％益生菌微囊(包括蜡样芽孢杆菌微囊、枯草芽孢杆菌微囊、布氏乳杆菌微囊、米曲霉菌微囊按照3：1:2.5:2.2比例混合)；
组8：基础日粮中添加1.8％中草药制剂、0.2％益生菌微囊(包括蜡样芽孢杆菌微囊、枯草芽孢杆菌微囊、布氏乳杆菌微囊、米曲霉菌微囊按照3：1:2.5:2.2比例混合)和0.05％大豆低聚糖；
组9：基础日粮中添加1.8％中草药制剂、0.2％益生菌微囊(包括蜡样芽孢杆菌微囊、枯草芽孢杆菌微囊、布氏乳杆菌微囊、米曲霉菌微囊按照3：1:2.5:2.2比例混合)和0.05％甘露寡糖；
组10：基础日粮中添加1.8％中草药制剂、0.2％益生菌微囊(包括蜡样芽孢杆菌微囊、枯草芽孢杆菌微囊、布氏乳杆菌微囊、米曲霉菌微囊按照3：1:2.5:2.2比例混合)和0.05％异麦芽寡糖；
组11：基础日粮中添加1.8％中草药制剂、0.2％益生菌微囊(包括蜡样芽孢杆菌微囊、枯草芽孢杆菌微囊、布氏乳杆菌微囊、米曲霉菌微囊按照3：1:2.5:2.2比例混合)和0.05％大豆低聚糖、甘露寡糖、异麦芽寡糖(按照质量比为1:2:1.2混合)
饲养条件相同，将11组鸡饲喂21d后称重，取脾脏和法氏囊，分别计算脾脏指数和法氏囊指数，脾脏指数＝脾脏重(mg)/体重(g)，法氏囊指数＝法氏囊重(mg)/体重(g)，并采血，进行以下试验。
1.1鸡外周血中IgG、IL-2测定：
采鸡的外周血，37℃放置2h，4℃放置4～6h后取血清，ELISA方法测定血清中的IgG、IL-2浓度。
1.2鸡外周血中CD4、CD8T淋巴细胞数的测定：
采鸡的外周血，加入抗凝剂，用等体积PBS稀释抗凝血，将4mL稀释后的抗凝血缓慢加至等体积1083淋巴细胞分离液面上，常温下1 200×g离心40min，收集中间层淋巴细胞液，PBS洗3次，1 200×g离心5min～10min，PBS重悬细胞并将细胞滴度调至5×106个/mL。流式细胞仪测定外周血中CD4、CD8T淋巴细胞数。
试验结果见下表：
表1
结果如表1，从结果可以看出，中草药制剂、益生菌微囊和寡糖配伍能提高鸡血液中IgG、IL-2、CD4、CD8的水平，并能促进脾脏、法氏囊的发育，说明中草药制剂、益生菌微囊和寡糖配伍能提高鸡的免疫力功能。并且影响的高低为中草药制剂＞益生菌微囊＞寡糖。
试验证明二：
1.试验方法
1.1设立对照组
对照组1：原料组成与实施例3相同，制备工艺基本相同，不同点是第一步、中草药制剂的准备中未有步骤S2、S3。
1.2将实施例1-3制备得到的中草药制剂与对照组1制备得到的中草药制剂，分别加入按照基础日粮的2％添加，将120只1日龄土鸡随机分成4组，每组30只鸡；饲养条件相同，将11组鸡饲喂21d后称重，取脾脏和法氏囊，分别计算脾脏指数和法氏囊指数，脾脏指数＝脾脏重(mg)/体重(g)，法氏囊指数＝法氏囊重(mg)/体重(g)，并采血，进行以下试验。鸡外周血中IgG、IL-2测定、鸡外周血中CD4、CD8T淋巴细胞数的测定；随机在饲喂的第七天与第十天对每一个组的鸡粪进行中草药成分含量的测定：
试验结果见下表：
表2
结果如表2，从结果可以看出，中草药制剂经过本申请的工艺制备方案后能有效的提高鸡血液中IgG、IL-2、CD4、CD8的水平，并能促进脾脏、法氏囊的发育。
试验证明三：
1、试验建立：
1.1人工模拟胃液的制备：
盐酸1.64mL，胃蛋白酶1g，加水定容至100mL，pH为1.2，过滤除菌。
1.2微囊耐胃酸试验
对比例1：原料组成与实施例3基本相同，制备工艺基本相同，不同点是：第二步、复合益生菌微囊的准备中步骤(1)没有，步骤(2)中党参多糖为常规提取，市面采购到的替换步骤(1)中的党参多糖。
对比例2：原料组成与实施例3基本相同，制备工艺基本相同，不同点是：第二步、复合益生菌微囊的准备中步骤(2)改良牛肉膏蛋白胨液体培养基的配方为称取党参多糖4g、牛肉膏3g、蛋白胨10g、NaCl5g、琼脂15g、香蕉汁200ml、水800ml、调节pH7.2即可。
对比例3：原料组成与实施例3基本相同，制备工艺基本相同，不同点是：第二步、复合益生菌微囊的准备中步骤(2)改良牛肉膏蛋白胨液体培养基的配方为称取党参多糖4g、牛肉膏3g、蛋白胨10g、NaCl5g、琼脂15g、马蹄汁200ml、水800ml、调节pH7.2即可。
对比例4：原料组成与实施例3基本相同，制备工艺基本相同，不同点是：第二步、复合益生菌微囊的准备中步骤(2)改良牛肉膏蛋白胨液体培养基的配方为称取牛肉膏3g、蛋白胨10g、NaCl5g、琼脂15g、水1000ml、调节pH7.2即可。
分别将实施例1-3、对比例1-4制备得到的蜡样芽孢杆菌微囊、枯草芽孢杆菌微囊、布氏乳杆菌微囊、米曲霉菌微囊各1g加入到人工模拟胃液中，置于37℃80r/min摇床中分别处理90min和180min。益生菌微囊还添加入破囊液中使其完全崩解，测定活菌数。
表3存活率(％)
结果如表3，从结果可以看出，采用本申请的培养基配方对微囊的存活率有很大的提高。
综上试验证明一、二、三的数据力证了针对鸡的体质，本申请人发明的复合益生菌、中草药制剂和寡糖通过复配并在本申请的比例下，能够相互协同促进，相辅相成，缺一不可，共同作用，应用在鸡饲料中，有效的提高了鸡的免疫力性能。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (8)

1.一种提高土鸡免疫力的中草药益生菌，其特征在于：按照重量份数计：包括中草药制剂10～15重量份、复合益生菌微囊1.2～2.5重量份、寡糖0.8～1.5重量份；
所述中草药制剂由以下原料按照重量份数计制得：
党参10～20份、黄芪15～20份、白术5～10份、茯苓3～8份、板蓝根5～15份，神曲5～10份、麦芽2～6份、山楂1～4份、甘草2～4份；
所述复合益生菌微囊由以下原料按照重量份数计制得：蜡样芽孢杆菌微囊3～5份、枯草芽孢杆菌微囊1～5份、布氏乳杆菌微囊2.5～4.5份、米曲霉菌微囊2.2～3.8份；
所述寡糖为大豆低聚糖、甘露寡糖、异麦芽寡糖三种原料按照质量比为1:2～3:1.2～1.8混合而得。
2.根据权利要求1所述的一种提高土鸡免疫力的中草药益生菌，其特征在于，所述复合益生菌微囊的具体操作是：
(1)菌悬液准备：分别将蜡样芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、布氏乳杆菌、米曲霉分别接种于100mL改良牛肉膏蛋白胨液体培养基中，于37℃，150r/min培养72h；将菌液6000r/min离心5min，弃上清，菌体沉淀用10mL无菌生理水悬浮成1×109cfu/mL；
(2)制备蜡样芽孢杆菌微囊：将植物油与吐温-80混合乳化得到植物油乳化液，分别将蜡样芽孢杆菌悬液、枯草芽孢杆菌悬液、布氏乳杆菌悬液、米曲霉菌悬液，以0.2ml/s的速度滴加入海藻酸钠溶液中搅拌混合后，与植物油乳化液按照1:3～5的体积比混合，用乳化机进行乳化20～45min，然后将乳化液加入到氯化钙溶液中，继续用乳化机乳化10～15min，接着继续加入壳聚糖进行固化后，用氯化钙溶液和氯化钠溶液洗涤后离心30min，收集大小为10～15μm的微囊，将微囊放置在45℃下干燥处理3h，即可分别制备成蜡样芽孢杆菌微囊、枯草芽孢杆菌微囊、布氏乳杆菌微囊、米曲霉菌微囊，将微囊混合即可得到复合益生菌微囊。
3.根据权利要求2所述的一种提高土鸡免疫力的中草药益生菌，其特征在于，所述植物油为亚麻油、大豆油、橄榄油中的一种。
4.根据权利要求2所述的一种提高土鸡免疫力的中草药益生菌，其特征在于，所述改良牛肉膏蛋白胨液体培养基的培养基配方为：牛肉膏3g、蛋白胨10g、NaCl5g、琼脂15g、党参多糖3～5g、香蕉汁100ml、马蹄汁100ml、水800ml、pH7.0～8.0。
5.根据权利要求4所述的一种提高土鸡免疫力的中草药益生菌，其特征在于，所述党参多糖是由以下具体操作制备得到：
将党参超微粉碎后，然后加入体积3～5倍的石油醚混合，水浴50～55℃下进行回流提取1～3次、过滤后将滤渣进醇提，然后离心取沉淀，与D160大孔吸附树脂按照体积比为1:2混合，接着振荡混匀过滤后，以流速2s/ml的速度使用清水冲洗D160大孔吸附树脂，过滤，合并滤液，然后加入适量亚硒酸钠，混匀，再加入适量次磷酸钠，混匀，在60℃下水浴反应2～3小时，趁热过滤，向滤液中加入质量浓度75％乙醇进行醇提过夜，过滤后的滤液进行浓缩、喷雾干燥得到富硒的党参多糖。
6.根据权利要求1所述的一种提高土鸡免疫力的中草药益生菌，其特征在于，所述中草药制剂具体操作如下：
第一步、按照重量份数计，分别称取党参10～20份、黄芪15～20份、白术5～10份、茯苓3～8份、板蓝根5～15份、神曲5～10份、麦芽2～6份、山楂1～4份、甘草2～4份；
第二步、将甘蔗压榨汁、灭菌、酒精发酵、醋酸发酵、过滤灭菌得到甘蔗原醋；
第三步、将党参、黄芪、白术、茯苓、板蓝根、神曲、麦芽经过超微粉碎后得到≤5μm粒径的混合粉末，加入甘蔗原醋直至浸没超过混合粉末并高出1～2cm，常温下进行浸泡20～30min后，然后进行真空浓缩，得到中草药醋粉；
第四步、将山楂、甘草经过超微粉碎后得到≤5μm粒径的混合粉末，然后与中草药醋粉混合得到中草药制剂。
7.根据权利要求6所述的一种提高土鸡免疫力的中草药益生菌，其特征在于，所述甘蔗原醋的酸度为2.81～2.96g/100mL。
8.根据权利要求1-7任意一项所述的一种提高土鸡免疫力的中草药益生菌的应用，其特征在于，所述中草药益生菌作为鸡饲料的添加剂，添加量为饲料重量的2％，能提高鸡群免疫力。
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