CN104159615A - 含有阳离子性脂质的组合的脂质纳米粒子 - Google Patents

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Abstract

本发明提供含有使得能容易将例如核酸导入到细胞内等的阳离子性脂质的、用于药物传递的脂质纳米粒子等，所述脂质纳米粒子含有式(I)表示的阳离子性脂质及式(II)表示的阳离子性脂质。式(I)中，R1及R2相同或不相同，为链烯基等，X3不存在或为烷基等，X1及X2为氢原子，或一起形成单键或亚烷基，Y1不存在或为阴离子，L1为单键等，R3为烷基等。式(II)中，R4及R5相同或不相同，为链烯基等，X4及X5为氢原子，或一起形成单键或亚烷基，X6不存在或为烷基等，Y2不存在或为阴离子，a及b相同或不相同，为0～3，L4为单键等，R6为烷基等，L2及L3为-O-、-CO-O-或-O-CO-。

Description

含有阳离子性脂质的组合的脂质纳米粒子
技术领域
本发明涉及含有阳离子性脂质的组合的脂质纳米粒子等，所述阳离子性脂质使得能容易地将例如核酸导入到细胞内等。
背景技术
阳离子性脂质是两亲性分子，其具有包含一个或多个烃基的脂质亲和性区域、和包含至少一个带正电的极性头基(head group)的亲水性区域。阳离子性脂质与核酸等巨大分子形成以总电荷计带正电的复合体，由此使得核酸等巨大分子容易通过细胞的原生质膜而进入到细胞质，因此，阳离子性脂质是有用的。关于能在体外(in vitro)及体内(in vivo)进行的该方法，已知有转染。
典型地，阳离子性脂质可单独使用或与磷脂等中性脂质组合。对于将阳离子性脂质与中性脂质组合而言，已知其由于能容易形成包含整齐排列的脂双层的囊泡所以是有用的。阳离子性脂质单独形成的、或与中性脂质组合而形成的囊泡或脂质体在表面具有大量的正电荷，通过所述正电荷，能与多核苷酸或带负电的蛋白质等其他阴离子性分子形成复合体。通过在多核苷酸/阳离子性脂质/中性脂质复合体的表面上残留的总阳离子电荷，可与细胞膜表面上主要存在的负电荷发生强相互反应。
大量的不同种类的阳离子性脂质被合成以用于转染，并正在市场上销售。这样的阳离子性脂质例如有Lipofectin、Lipofectin ACE、Lipofect AMINE、Transfeactam、DOTAP等。
专利文献1中公开的N-[1-(2,3-二油酰氧)丙基]-N,N,N-三甲基氯化铵(DOTMA)等是初期开发出的阳离子性脂质之一。DOTMA等的特征在于：向分子提供阳离子部位的、具有季氮的丙铵(propanaminium)基，及以醚键键合在分子的丙基主链上的一对高级烃。季氮被甲基等链比较短的烷基链三取代。结构上类似的阳离子性脂质N-(2,3-二-(9-(Z)-十八碳烯酰基氧基))-丙-1-基-N,N,N-三甲基氯化铵(DOTAP)不包含以醚键键合的烷基，而包含酰基。
专利文献2及3中公开的例如N-[1-(2,3-二油酰氧丙基)]-N,N-二甲基-N-羟基乙基溴化铵(DORIE)、2,3-二油酰氧-N-[2-(精胺羧基酰胺)乙基]-N,N-二甲基-1-丙基-三氟乙酸铵(DOSPA)等的特征在于：向分子提供阳离子部位的、具有季氮的丙铵基，以及以醚键键合在分子的丙基主链上的一对高级烃，进一步的特征在于，季氮被甲基等链比较短的烷基链和羟基烷基三取代。
专利文献4中公开了例如1,2-二亚油基氧基-N,N-二甲基氨基丙烷(DLinDMA)等。为了开发更柔软的阳离子性脂质、通过该更柔软的阳离子性脂质而提高脂质体等的膜流动性，DLinDMA等的特征在于，使结构上类似的阳离子性脂质DOTAP及DOTMA的高级烷基为至少包含2处不饱和部位的高级烷基。另外，专利文献5中公开了例如2,2-二亚油基-4-二甲基氨基甲基-[1,3]-二氧戊环(DLin-K-DMA)等。
另外，专利文献6中公开了例如(3R,4R)-3,4-双((Z)-十六碳-9-烯基氧基)-1-甲基吡咯烷(化合物14)、N-甲基-N,N-双(2-((Z)-十八碳-6-烯基氧基)乙基)胺(化合物36)等。
另一方面，专利文献7中公开了N-甲基-N,N-二油烯基胺等单纯烷基胺型(的盐)的阳离子性脂质。
[现有技术文献]
[专利文献]
[专利文献1]
日本特开昭61-161246号公报(美国专利5049386号说明书)
[专利文献2]
国际公开第91/16024号
[专利文献3]
国际公开第97/019675号
[专利文献4]
国际公开第2005/121348号
[专利文献5]
国际公开第2009/086558号
[专利文献6]
国际公开第2011/136368号
[专利文献7]
国际公开第1998/051278号
发明内容
[发明所要解决的技术问题]
本发明的目的在于，提供用于药物传递的脂质纳米粒子等，所述脂质纳米粒子含有使得能容易地将例如核酸导入到细胞内等的阳离子性脂质。
[用于解决技术问题的手段]
本发明涉及以下的(1)～(34)。
(1)一种脂质纳米粒子，含有式(I)表示的阳离子性脂质(lipid)及式(II)表示的阳离子性脂质，
(式中，R1及R2相同或不相同，为碳原子数为10～24的直链状或支链状的烷基、链烯基或炔基，
X1及X2为氢原子，或一起形成单键或亚烷基，
X3不存在，或为碳原子数为1～6的烷基或碳原子数为3～6的链烯基，
在X3不存在的情况下，
Y1也不存在，L1为单键，R3为氢原子、碳原子数为1～6的烷基、碳原子数为3～6的链烯基、吡咯烷-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基或被相同或不相同的1～3个的氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基(ammonio)、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数为1～6的烷基或碳原子数为3～6的链烯基，或者
Y1也不存在，L1为-CO-或-CO-O-，R3为吡咯烷-2-基、吡咯烷-3-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、吗啉-2-基、吗啉-3-基或被相同或不相同的1～3个的氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数为1～6的烷基或碳原子数为3～6的链烯基，所述取代基中的至少一个为氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基，
在X3为碳原子数为1～6的烷基或碳原子数为3～6的链烯基的情况下，
Y1为制药上可接受的阴离子，L1为单键，R3为碳原子数为1～6的烷基、碳原子数为3～6的链烯基、吡咯烷-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基或被相同或不相同的1～3个的氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数为1～6的烷基或碳原子数为3～6的链烯基)
(式中，R4及R5相同或不相同，为碳原子数为12～24的直链状或支链状的烷基、链烯基或炔基，或R4及R5一起形成二烷基亚甲基、二链烯基亚甲基、二炔基亚甲基或烷基链烯基亚甲基，
X4及X5为氢原子，或一起形成单键或亚烷基，
X6不存在，或为碳原子数为1～6的烷基或碳原子数为3～6的链烯基，
在X6不存在的情况下，
Y2也不存在，a及b为0，L4为单键，R6为碳原子数为1～6的烷基、碳原子数为3～6的链烯基、吡咯烷-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基或被相同或不相同的1～3个的氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数为1～6的烷基或碳原子数为3～6的链烯基，L2及L3为-O-，或
Y2也不存在，a及b相同或不相同，为0～3，并且a和b不会同时为0，L4为单键，R6为碳原子数为1～6的烷基、碳原子数为3～6的链烯基、吡咯烷-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基或被相同或不相同的1～3个的氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数为1～6的烷基或碳原子数为3～6的链烯基，L2及L3相同或不相同，为-O-、-CO-O-或-O-CO-，或
Y2也不存在，a及b相同或不相同，为0～3，L4为单键，R6为氢原子，L2及L3相同或不相同，为-O-、-CO-O-或-O-CO-，或者
Y2也不存在，a及b相同或不相同，为0～3，L4为-CO-或-CO-O-，R6为吡咯烷-2-基、吡咯烷-3-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、吗啉-2-基、吗啉-3-基或被相同或不相同的1～3个的氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数为1～6的烷基或碳原子数为3～6的链烯基，所述取代基中的至少一个为氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基，L2及L3相同或不相同，为-O-、-CO-O-或-O-CO-，
在X6为碳原子数为1～6的烷基或碳原子数为3～6的链烯基的情况下，
Y2为制药上可接受的阴离子，a及b相同或不相同，为0～3，L4为单键，R6为碳原子数为1～6的烷基、碳原子数为3～6的链烯基、吡咯烷-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基或被相同或不相同的1～3个的氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数为1～6的烷基或碳原子数为3～6的链烯基，L2及L3相同或不相同，为-O-、-CO-O-或-O-CO-)。
(2)如上述(1)所述的脂质纳米粒子，其中，R1及R2为十二烷基、十四烷基、(Z)-十二碳-7-烯基、(Z)-十四碳-7-烯基、(Z)-十六碳-4-烯基、(Z)-十六碳-7-烯基、(E)-十六碳-7-烯基、(Z)-十六碳-9-烯基、(7Z,10Z)-十六碳-7,10-二烯基、(7Z,10Z,13Z)-十六碳-7,10,13-三烯基、(Z)-十八碳-9-烯基或(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基。
(3)如上述(1)所述的脂质纳米粒子，其中，R1及R2同为十四烷基、十六烷基、(Z)-十四碳-9-烯基、(Z)-十六碳-9-烯基、(Z)-十八碳-6-烯基、(Z)-十八碳-9-烯基、(E)-十八碳-9-烯基、(Z)-十八碳-11-烯基、(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基、(9Z,12Z,15Z)-十八碳-9,12,15-三烯基、(Z)-二十碳-11-烯基或(11Z,14Z)-二十碳-11,14-二烯基。
(4)如上述(1)～(3)中任一项所述的脂质纳米粒子，其中，L1为单键，R3为氢原子、甲基、吡咯烷-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基或被相同或不相同的1～3个的氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数为1～6的烷基或碳原子数为3～6的链烯基。
(5)如上述(1)～(3)中任一项所述的脂质纳米粒子，其中，L1为-CO-或-CO-O-，R3为吡咯烷-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基或被相同或不相同的1～3个的氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数为1～6的烷基或碳原子数为3～6的链烯基，所述取代基中的至少一个为氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基。
(6)如上述(1)～(5)中任一项所述的脂质纳米粒子，其中，X1及X2一起形成单键或亚烷基。
(7)如上述(1)～(5)中任一项所述的脂质纳米粒子，其中，X1及X2一起形成单键或亚烷基，R3为氢原子、甲基或被相同或不相同的1～3个的氨基、羟基或氨基甲酰基取代的碳原子数为1～6的烷基或碳原子数为3～6的链烯基。
(8)如上述(1)～(5)中任一项所述的脂质纳米粒子，其中，X1及X2为氢原子，R3为氢原子、甲基或被相同或不相同的1～3个的氨基、羟基或氨基甲酰基取代的碳原子数为1～6的烷基或碳原子数为3～6的链烯基。
(9)如上述(1)～(8)中任一项所述的脂质纳米粒子，其中，X3不存在。
(10)如上述(1)～(9)中任一项所述的脂质纳米粒子，其中，L2及L3为-O-或-O-CO-，R4及R5为十二烷基、十四烷基、十六烷基、十八烷基、二十烷基、二十二烷基、二十四烷基、(Z)-十四碳-9-烯基、(Z)-十六碳-9-烯基、(Z)-十八碳-6-烯基、(Z)-十八碳-9-烯基、(E)-十八碳-9-烯基、(Z)-十八碳-11-烯基、(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基、(9Z,12Z,15Z)-十八碳-9,12,15-三烯基、(Z)-二十碳-11-烯基、(11Z,14Z)-二十碳-11,14-二烯基、3,7,11-三甲基十二碳-2,6,10-三烯基或3,7,11,15-四甲基十六碳-2-烯基。
(11)如上述(1)～(9)中任一项所述的脂质纳米粒子，其中，L2及L3为-CO-O-，R4及R5为十三烷基、十五烷基、十七烷基、十九烷基、二十一烷基、二十三烷基、(Z)-十三碳-8-烯基、(Z)-十五碳-8-烯基、(Z)-十七碳-5-烯基、(Z)-十七碳-8-烯基、(E)-十七碳-8-烯基、(Z)-十七碳-10-烯基、(8Z,11Z)-十七碳-8,11-二烯基、(8Z,11Z,14Z)-十八碳-8,11,14-三烯基、(Z)-十九碳-10-烯基、(10Z,13Z)-十九碳-10,13-二烯基、(11Z,14Z)-二十碳-11,14-二烯基、2,6,10-三甲基十一碳-1,5,9-三烯基或2,6,10,14-四甲基十五碳-1-烯基。
(12)如上述(1)～(11)中任一项所述的脂质纳米粒子，其中，L4为单键，R6为氢原子、甲基、吡咯烷-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基或被相同或不相同的1～3个的氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数为1～6的烷基或碳原子数为3～6的链烯基。
(13)如上述(1)～(11)中任一项所述的脂质纳米粒子，其中，L4为-CO-或-CO-O-，R6为吡咯烷-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基或被相同或不相同的1～3个的氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数为1～6的烷基或碳原子数为3～6的链烯基，所述取代基中的至少一个为氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基。
(14)如上述(1)～(13)中任一项所述的脂质纳米粒子，其中，X4及X5一起形成单键或亚烷基。
(15)如上述(1)～(13)中任一项所述的脂质纳米粒子，其中，X4及X5一起形成单键或亚烷基，R6为氢原子、甲基或被相同或不相同的1～3个的氨基、羟基或氨基甲酰基取代的碳原子数为1～6的烷基或碳原子数为3～6的链烯基。
(16)如上述(1)～(13)中任一项所述的脂质纳米粒子，其中，X4及X5为氢原子，R6为氢原子、甲基或被相同或不相同的1～3个的氨基、羟基或氨基甲酰基取代的碳原子数为1～6的烷基或碳原子数为3～6的链烯基。
(17)如上述(1)～(13)中任一项所述的脂质纳米粒子，其中，X4及X5一起形成单键或亚烷基，R6为被相同或不相同的1～3个的氨基、羟基或氨基甲酰基取代的碳原子数为1～6的烷基或碳原子数为3～6的链烯基。
(18)如上述(1)～(13)中任一项所述的脂质纳米粒子，其中，X4及X5为氢原子，R6为被相同或不相同的1～3个的氨基、羟基或氨基甲酰基取代的碳原子数为1～6的烷基或碳原子数为3～6的链烯基。
(19)如上述(1)～(18)中任一项所述的脂质纳米粒子，其中，X6不存在或为甲基。
(20)如上述(1)～(19)中任一项所述的脂质纳米粒子，其中，含有核酸作为药物。
(21)如上述(20)所述的脂质纳米粒子，其中，阳离子性脂质与该核酸形成复合体，或者，阳离子性脂质与中性脂质及/或高分子组合而成的物质与该核酸形成复合体。
(22)如上述(20)所述的脂质纳米粒子，其中，阳离子性脂质与该核酸形成复合体，或者，阳离子性脂质与中性脂质及/或高分子组合而成的物质与该核酸形成复合体，所述脂质纳米粒子由该复合体及将该复合体封入的脂质膜构成。
(23)如上述(20)～(22)中任一项所述的脂质纳米粒子，其中，核酸是具有利用了RNA干扰(RNAi)的、靶基因表达抑制作用的核酸。
(24)如上述(23)所述的脂质纳米粒子，其中，靶基因是与肿瘤或炎症相关的基因。
(25)一种使用上述(20)～(24)中任一项所述的脂质纳米粒子将所述核酸导入到细胞内的方法。
(26)如上述(25)所述的方法，其中，细胞是位于哺乳类动物的肿瘤或炎症部位的细胞。
(27)如上述(25)或(26)所述的方法，其中，细胞是位于哺乳类动物的肝脏、肺、肾脏或脾脏的细胞。
(28)如上述(26)或(27)所述的方法，其中，导入到细胞内的方法是利用静脉内给予导入到细胞内的方法。
(29)一种癌或炎症疾病的治疗方法，其中，将上述(1)～(24)中任一项所述的脂质纳米粒子给予哺乳动物。
(30)如上述(29)所述的方法，其中，给予的方法是静脉内给予。
(31)一种用于治疗疾病的医药，所述医药包含上述(1)～(24)中任一项所述的脂质纳米粒子。
(32)如上述(31)所述的医药，其用于静脉内给予。
(33)一种癌或炎症疾病的治疗剂，所述治疗剂用于癌或炎症疾病的治疗，包括上述(1)～(24)中任一项所述的脂质纳米粒子。
(34)如上述(33)所述的癌或炎症疾病的治疗剂，其用于静脉内给予。
[发明效果]
通过将含有例如核酸的本发明的用于药物传递的脂质纳米粒子给予至哺乳类动物等，能容易地将该核酸导入到例如细胞内等。
附图说明
[图1]表示以相当于10mg/kg CKAP5 siRNA的量向MIA PaCa-2异种移植小鼠(xenograft mice)分别给予实施例1及比较例1中得到的制剂后48小时后的肿瘤中CKAP5 mRNA的量。纵轴表示CKAP5mRNA的量的相对值(将生理盐水处置组的值作为1)。
[图2]表示在第0天及第7天以相当于10mg/kg CKAP5 siRNA的量向MIA PaCa-2异种移植小鼠给予实施例1中得到的制剂时的肿瘤体积的变化。纵轴表示肿瘤体积的相对值(将第0天的值作为1)。横轴表示实验开始后经过的天数。
[图3]表示以相当于10mg/kg Eg5 siRNA的量向MIA PaCa-2异种移植小鼠分别给予实施例2～5及比较例2中得到的制剂后48小时后的肿瘤中Eg5 mRNA的量。纵轴表示Eg5 mRNA量的相对值(将生理盐水处置组的值作为1)。
[图4]表示在第0天以相当于10mg/kg Eg5 siRNA的量向MIAPaCa-2异种移植小鼠给予实施例2中得到的制剂时的肿瘤体积的变化。纵轴表示肿瘤体积的相对值(将第0天的值作为1)。横轴表示实验开始后经过的天数。◇表示生理盐水给予组、■表示实施例2中得到的制剂的给予组。
具体实施方式
本发明的脂质纳米粒子所含有的阳离子性脂质是式(I)表示的化合物和式(II)表示的化合物。
(式中，R1及R2相同或不相同，为碳原子数为10～24的直链状或支链状的烷基、链烯基或炔基，
X1及X2为氢原子，或一起形成单键或亚烷基，
X3不存在，或为碳原子数为1～6的烷基或碳原子数为3～6的链烯基，
在X3不存在的情况下，
Y1也不存在，L1为单键，R3为氢原子、碳原子数为1～6的烷基、碳原子数为3～6的链烯基、吡咯烷-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基或被相同或不相同的1～3个的氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数为1～6的烷基或碳原子数为3～6的链烯基，或者
Y1也不存在，L1为-CO-或-CO-O-，R3为吡咯烷-2-基、吡咯烷-3-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、吗啉-2-基、吗啉-3-基或被相同或不相同的1～3个的氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数为1～6的烷基或碳原子数为3～6的链烯基，所述取代基中的至少一个为氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基，
在X3为碳原子数为1～6的烷基或碳原子数为3～6的链烯基的情况下，
Y1为制药上可接受的阴离子，L1为单键，R3为碳原子数为1～6的烷基、碳原子数为3～6的链烯基、吡咯烷-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基或被相同或不相同的1～3个的氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数为1～6的烷基或碳原子数为3～6的链烯基)
(式中，R4及R5相同或不相同，为碳原子数为12～24的直链状或支链状的烷基、链烯基或炔基，或R4及R5一起形成二烷基亚甲基、二链烯基亚甲基、二炔基亚甲基或烷基链烯基亚甲基，
X4及X5为氢原子，或一起形成单键或亚烷基，
X6不存在，或为碳原子数为1～6的烷基或碳原子数为3～6的链烯基，
在X6不存在的情况下，
Y2也不存在，a及b为0，L4为单键，R6为碳原子数为1～6的烷基、碳原子数为3～6的链烯基、吡咯烷-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基或被相同或不相同的1～3个的氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数为1～6的烷基或碳原子数为3～6的链烯基，L2及L3为-O-，或
Y2也不存在，a及b相同或不相同，为0～3，并且a和b不会同时为0，L4为单键，R6为碳原子数为1～6的烷基、碳原子数为3～6的链烯基、吡咯烷-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基或被相同或不相同的1～3个的氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数为1～6的烷基或碳原子数为3～6的链烯基，L2及L3相同或不相同，为-O-、-CO-O-或-O-CO-，或
Y2也不存在，a及b相同或不相同，为0～3，L4为单键，R6为氢原子，L2及L3相同或不相同，为-O-、-CO-O-或-O-CO-，或者
Y2也不存在，a及b相同或不相同，为0～3，L4为-CO-或-CO-O-，R6为吡咯烷-2-基、吡咯烷-3-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、吗啉-2-基、吗啉-3-基或被相同或不相同的1～3个的氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数为1～6的烷基或碳原子数为3～6的链烯基，所述取代基中的至少一个为氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基，L2及L3相同或不相同，为-O-、-CO-O-或-O-CO-，
在X6为碳原子数为1～6的烷基或碳原子数为3～6的链烯基的情况下，
Y2为制药上可接受的阴离子，a及b相同或不相同，为0～3，L4为单键，R6为碳原子数为1～6的烷基、碳原子数为3～6的链烯基、吡咯烷-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基或被相同或不相同的1～3个的氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数为1～6的烷基或碳原子数为3～6的链烯基，L2及L3相同或不相同，为-O-、-CO-O-或-O-CO-)
以下，有时也将式(I)及式(II)表示的化合物分别称为化合物(I)及化合物(II)。对于其他的化学式编号的化合物也同样如是。
式(I)的各基团的定义中，作为碳原子数为10～24的直链状或支链状的烷基，可举出例如癸基、十一烷基、十二烷基、十三烷基、6,10-二甲基十一烷-2-基、十四烷基、十五烷基、十六烷基、十七烷基、十八烷基、6,10,14-三甲基十五烷-2-基、十九烷基、二十烷基、二十一烷基、二十二烷基、二十三烷基、二十四烷基等。
式(I)的各基团的定义中，作为碳原子数为10～24的直链状或支链状的链烯基，可以为包含1～3个的双键的碳原子数为10～24的直链状或支链状的链烯基，可举出例如(Z)-十二碳-7-烯基、(Z)-十四碳-7-烯基、(Z)-十四碳-9-烯基、(Z)-十六碳-4-烯基、(Z)-十六碳-7-烯基、(E)-十六碳-7-烯基、(Z)-十六碳-9-烯基、(7Z,10Z)-十六碳-7,10-二烯基、(7Z,10Z,13Z)-十六碳-7,10,13-三烯基、(Z)-十八碳-6-烯基、(Z)-十八碳-9-烯基、(E)-十八碳-9-烯基、(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基、(Z)-十八碳-11-烯基、(9Z,12Z,15Z)-十八碳-9,12,15-三烯基、(Z)-二十碳-11-烯基、(11Z,14Z)-二十碳-11,14-二烯基等，可优选举出(Z)-十二碳-7-烯基、(Z)-十四碳-7-烯基、(Z)-十六碳-4-烯基、(Z)-十六碳-7-烯基、(E)-十六碳-7-烯基、(Z)-十六碳-9-烯基、(7Z,10Z)-十六碳-7,10-二烯基、(7Z,10Z,13Z)-十六碳-7,10,13-三烯基、(Z)-十八碳-9-烯基、(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基、(11Z,14Z)-二十碳-11,14-二烯基等。
式(I)的各基团的定义中，作为碳原子数为10～24的直链状或支链状的炔基，可以为包含1～3个的三键的碳原子数为10～24的直链状或支链状的炔基，可举出例如癸-9-炔基、十二碳-4-炔基、十二碳-11-炔基、十四碳-5-炔基、十四碳-6-炔基、十六碳-7-炔基、十六碳-3,5-二炔基、十六碳-5,7-二炔基、十八碳-9-炔基等。
需要说明的是，式(I)中，更优选地，R1及R2为相同的碳原子数为10～24的直链状或支链状的烷基、链烯基或炔基。另外，R1及R2相同或不相同的情况下，均更优选为碳原子数为10～24的直链状或支链状的烷基或链烯基，进一步更优选为碳原子数为10～24的直链状的链烯基。
式(II)的各基团的定义中，作为碳原子数为12～24的直链状或支链状的烷基，可举出例如十二烷基、十三烷基、十四烷基、2,6,10-三甲基十一烷基、十五烷基、3,7,11-三甲基十二烷基、十六烷基、十七烷基、十八烷基、6,10,14-三甲基十五烷-2-基、十九烷基、2,6,10,14-四甲基十五烷基、二十烷基、3,7,11,15-四甲基十六烷基、二十一烷基、二十二烷基、二十三烷基、二十四烷基等。
式(II)的各基团的定义中，作为碳原子数为12～24的直链状或支链状的链烯基，可以为包含1～3个的双键的碳原子数为12～24的直链状或支链状的链烯基，可举出例如(Z)-十三碳-8-烯基、(Z)-十四碳-9-烯基、(Z)-十五碳-8-烯基、(Z)-十六碳-9-烯基、(Z)-十七碳-5-烯基、(Z)-十八碳-6-烯基、(Z)-十七碳-8-烯基、(Z)-十八碳-9-烯基、(E)-十七碳-8-烯基、(E)-十八碳-9-烯基、(Z)-十七碳-10-烯基、(Z)-十八碳-11-烯基、(8Z,11Z)-十七碳-8,11-二烯基、(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基、(8Z,11Z,14Z)-十八碳-8,11,14-三烯基、(9Z,12Z,15Z)-十八碳-9,12,15-三烯基、(Z)-十九碳-10-烯基、(Z)-二十碳-11-烯基、(10Z,13Z)-十九碳-10,13-二烯基、(11Z,14Z)-二十碳-11,14-二烯基、2,6,10-三甲基十一碳-1,5,9-三烯基、3,7,11-三甲基十二碳-2,6,10-三烯基、2,6,10,14-四甲基十五碳-1-烯基、3,7,11,15-四甲基十六碳-2-烯基等，可优选举出(Z)-十五碳-8-烯基、(Z)-十六碳-9-烯基、(Z)-十七碳-5-烯基、(Z)-十八碳-6-烯基、(Z)-十七碳-8-烯基、(Z)-十八碳-9-烯基、(8Z,11Z)-十七碳-8,11-二烯基、(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基等。
式(II)的各基团的定义中，作为碳原子数为12～24的直链状或支链状的炔基，可以为包含1～3个的三键的碳原子数为12～24的直链状或支链状的炔基，可举出例如十二碳-11-炔基、十三碳-12-炔基、十五碳-6-炔基、十六碳-7-炔基、十五碳-4,6-二炔基、十六碳-5,7-二炔基、十七碳-8-炔基、十八碳-9-炔基等。
需要说明的是，化合物(II)中，更优选地，R4及R5为相同的碳原子数为12～24的直链状或支链状的烷基、链烯基或炔基。另外，R4及R5相同或不相同的情况下，均更优选为碳原子数为12～24的直链状或支链状的烷基或链烯基，进一步更优选为碳原子数为12～24的直链状的链烯基。
化合物(I)及化合物(II)中，作为亚烷基，可举出例如亚甲基、亚乙基、亚丙基等。
作为碳原子数为1～6的烷基，可举出例如甲基、乙基、丙基、异丙基、环丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、环丁基、环丙基甲基、戊基、异戊基、仲戊基、新戊基、叔戊基、环戊基、己基、环己基等，可优选举出甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基、仲戊基、叔戊基、新戊基、己基等，可进一步优选举出甲基、乙基、丙基等。
作为碳原子数为3～6的链烯基，可举出例如烯丙基、1-丙烯基、丁烯基、戊烯基、己烯基等，可优选举出烯丙基等。
作为被取代的碳原子数为1～6的烷基中的烷基部分及被取代的碳原子数为3～6的链烯基中的链烯基部分，分别与上述碳原子数为1～6的烷基及碳原子数为3～6的链烯基的含义相同。
二烷基亚甲基、二链烯基亚甲基、二炔基亚甲基或烷基链烯基亚甲基中的烷基、链烯基及炔基部分分别与上述碳原子数为12～24的直链状或支链状的烷基、碳原子数为12～24的直链状或支链状的链烯基及碳原子数为12～24的直链状或支链状的炔基的含义相同。需要说明的是，更优选地，二烷基亚甲基、二链烯基亚甲基及二炔基亚甲基中的烷基、链烯基及炔基部分分别相同。
化合物(I)及化合物(II)中，作为制药上可接受的阴离子，可举出例如氯化物离子、溴化物离子、硝酸根离子、硫酸根离子、磷酸根离子等无机离子，乙酸根离子、草酸根离子、马来酸根离子、富马酸根离子、柠檬酸根离子、苯甲酸根离子、甲磺酸根离子等有机酸根离子等。
化合物(I)及化合物(II)中，吡咯烷-2-基、吡咯烷-3-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、吗啉-2-基及吗啉-3-基分别包含：环中氮原子上键合的氢原子改变为甲基或乙基而得的基团。
作为单烷基氨基及二烷基氨基，分别地，可以为被1个、或被相同或不相同的2个碳原子数为1～6的烷基(与上述含义相同)或经下述基团取代的碳原子数为1～6的烷基(与上述含义相同)取代的氨基，所述基团为氨基、甲基氨基、乙基氨基、二甲基氨基、二乙基氨基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基，作为所述单烷基氨基及二烷基氨基，可举出例如甲基氨基、乙基氨基、丙基氨基、丁基氨基、戊基氨基、己基氨基、二甲基氨基、二乙基氨基、乙基甲基氨基、甲基丙基氨基、丁基甲基氨基、甲基戊基氨基、己基甲基氨基、氨基乙基氨基、氨基丙基氨基、(氨基乙基)甲基氨基、双(氨基乙基)氨基等，可优选举出甲基氨基、乙基氨基、二甲基氨基、二乙基氨基、氨基丙基氨基、双(氨基乙基)氨基等。
化合物(I)及化合物(II)中，氨基、单烷基氨基及二烷基氨基分别可以在氮原子上的孤对电子上配位氢离子而形成铵基、单烷基铵基及二烷基铵基，氨基、单烷基氨基及二烷基氨基分别包含铵基、单烷基铵基及二烷基铵基。
作为三烷基铵基，可以为被相同或不相同的3个碳原子数为1～6的烷基(与上述含义相同)或经下述基团取代的碳原子数为1～6的烷基(与上述含义相同)取代的铵基，所述基团为氨基、甲基氨基、乙基氨基、二甲基氨基、二乙基氨基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基，作为所述三烷基铵基，可举出例如三甲基铵基、乙基二甲基铵基、二乙基甲基铵基、三乙基铵基、三丙基铵基、三丁基铵基、三戊基铵基、三己基铵基、三(氨基乙基)铵基、(氨基乙基)二甲基铵基、双(氨基乙基)甲基铵基等，可优选举出三甲基铵基、三乙基铵基、三(氨基乙基)铵基、(氨基乙基)二甲基铵基、双(氨基乙基)甲基铵基等。
本发明中，在氨基、单烷基氨基及二烷基氨基的氮原子上的孤对电子上配位了氢离子而成的铵基、单烷基铵基及二烷基铵基、以及三烷基铵基也可以与制药上可接受的阴离子(与上述含义相同)形成盐。
作为烷氧基，可以为被碳原子数为1～6的烷基(与上述含义相同)或经下述基团取代的碳原子数为1～6的烷基(与上述含义相同)取代的羟基，所述基团为氨基、甲基氨基、乙基氨基、二甲基氨基、二乙基氨基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基，作为所述烷氧基，可举出例如甲氧基、乙氧基、丙基氧基、丁基氧基、戊基氧基、己基氧基、氨基乙氧基、甲基氨基乙氧基等，可优选举出甲氧基、乙氧基、氨基乙氧基、甲基氨基乙氧基等。
作为单烷基氨基甲酰基及二烷基氨基甲酰基，分别地，可以为被1个、或被相同或不相同的2个碳原子数为1～6的烷基(与上述含义相同)或经下述基团取代的碳原子数为1～6的烷基(与上述含义相同)取代的氨基甲酰基，所述基团为氨基、甲基氨基、乙基氨基、二甲基氨基、二乙基氨基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基，作为所述单烷基氨基甲酰基及二烷基氨基甲酰基，可举出例如甲基氨基甲酰基、乙基氨基甲酰基、丙基氨基甲酰基、丁基氨基甲酰基、戊基氨基甲酰基、己基氨基甲酰基、二甲基氨基甲酰基、二乙基氨基甲酰基、乙基甲基氨基甲酰基、甲基丙基氨基甲酰基、丁基甲基氨基甲酰基、甲基戊基氨基甲酰基、己基甲基氨基甲酰基、氨基乙基氨基甲酰基、氨基丙基氨基甲酰基、(氨基乙基)甲基氨基甲酰基、双(氨基乙基)氨基甲酰基等，可优选举出甲基氨基甲酰基、乙基氨基甲酰基、二甲基氨基甲酰基等。
化合物(I)中，X1及X2更优选为氢原子。此时，优选地，R1及R2相同或不相同，为十二烷基、十四烷基、(Z)-十二碳-7-烯基、(Z)-十四碳-7-烯基、(Z)-十六碳-4-烯基、(Z)-十六碳-7-烯基、(E)-十六碳-7-烯基、(Z)-十六碳-9-烯基、(7Z,10Z)-十六碳-7,10-二烯基、(7Z,10Z,13Z)-十六碳-7,10,13-三烯基、(Z)-十八碳-9-烯基或(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基；更优选地，R1及R2相同或不相同，为(Z)-十四碳-7-烯基、(Z)-十六碳-7-烯基、(7Z,10Z)-十六碳-7,10-二烯基或(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基；最优选地，R1及R2相同，为(Z)-十四碳-7-烯基、(Z)-十六碳-7-烯基、(7Z,10Z)-十六碳-7,10-二烯基或(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基。
需要说明的是，X1及X2为氢原子时，R3更优选为氢原子、甲基、吡咯烷-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基或被相同或不相同的1～3个的氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数为1～6的烷基或碳原子数为3～6的链烯基，进一步优选为氢原子、甲基或被相同或不相同的1～3个的氨基、羟基或氨基甲酰基取代的碳原子数为1～6的烷基或碳原子数为3～6的链烯基，最优选为氢原子、甲基等。
另外，X1及X2一起形成单键或亚烷基时，优选地，R1及R2相同或不相同，为十四烷基、十六烷基、(Z)-十四碳-9-烯基、(Z)-十六碳-9-烯基、(Z)-十八碳-6-烯基、(Z)-十八碳-9-烯基、(E)-十八碳-9-烯基、(Z)-十八碳-11-烯基、(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基、(9Z,12Z,15Z)-十八碳-9,12,15-三烯基、(Z)-二十碳-11-烯基或(11Z,14Z)-二十碳-11,14-二烯基；更优选地，为(Z)-十八碳-9-烯基或(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基；最优选地，R1及R2相同，为(Z)-十八碳-9-烯基或(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基。
另外，X1及X2一起形成单键或亚烷基时，R3更优选为氢原子、甲基、吡咯烷-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基或被相同或不相同的1～3个的氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数为1～6的烷基或碳原子数为3～6的链烯基，进一步优选为氢原子、甲基或被相同或不相同的1～3个的氨基、羟基或氨基甲酰基取代的碳原子数为1～6的烷基或碳原子数为3～6的链烯基，最优选为氢原子、甲基等。
另外，X1及X2一起形成单键时，L1为-CO-或-CO-O-、优选为-CO-也是本发明的更优选方案之一。此时，R3进一步优选为氨基甲基、1,2-二氨基乙基、2-氨基乙基、1,3-二氨基丙基、1,4-二氨基丁基、1,5-二氨基戊基、3-氨基丙基、4-氨基丁基、5-氨基戊基等，最优选为1,2-二氨基乙基、1,3-二氨基丙基、1,4-二氨基丁基、1,5-二氨基戊基；R1及R2相同或不相同，优选为十四烷基、十六烷基、(Z)-十四碳-9-烯基、(Z)-十六碳-9-烯基、(Z)-十八碳-6-烯基、(Z)-十八碳-9-烯基、(E)-十八碳-9-烯基、(Z)-十八碳-11-烯基、(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基、(9Z,12Z,15Z)-十八碳-9,12,15-三烯基、(Z)-二十碳-11-烯基或(11Z,14Z)-二十碳-11,14-二烯基，更优选为(Z)-十八碳-9-烯基或(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基，最优选R1及R2相同，为(Z)-十八碳-9-烯基或(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基。
另外，X1及X2一起形成单键时，X3为碳原子数为1～6的烷基或碳原子数为3～6的链烯基、优选为甲基也是本发明的更优选方案之一。
另外，L1更优选为单键。
另外，L1为单键时，R3更优选为氢原子、甲基、吡咯烷-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基或被相同或不相同的1～3个的氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数为1～6的烷基或碳原子数为3～6的链烯基，进一步优选为氢原子、甲基、羟基甲基、2-羟基乙基、2,3-二羟基丙基、2-羟基丙基、3-羟基丙基、2-羟基-3-甲氧基丙基、氨基甲基、2-氨基乙基、3-氨基丙基、4-氨基丁基、5-氨基戊基、2-(N,N-二甲基氨基)乙基、3-(N,N-二甲基氨基)丙基、2-氨基甲酰基乙基、2-二甲基氨基甲酰基乙基、1-甲基哌啶-4-基等，最优选为氢原子、甲基等。
另外，L1为-CO-或-CO-O-时，R3更优选为吡咯烷-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基或被相同或不相同的1～3个的氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数为1～6的烷基或碳原子数为3～6的链烯基，所述取代基中的至少一个为氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基，R3进一步优选为氨基甲基、1,2-二氨基乙基、2-氨基乙基、1,3-二氨基丙基、3-氨基丙基、1,4-二氨基丁基、4-氨基丁基、1,5-二氨基戊基、5-氨基戊基、(N,N-二甲基氨基)甲基、2-(N,N-二甲基氨基)乙基、3-(N,N-二甲基氨基)丙基、1-羟基-2-氨基乙基、1-氨基-2-羟基乙基等，最优选为1,2-二氨基乙基、2-氨基乙基、1,3-二氨基丙基、3-氨基丙基、1,4-二氨基丁基、4-氨基丁基、1,5-二氨基戊基、5-氨基戊基等。
另外，更优选地，X3不存在或为甲基，进一步更优选地，X3不存在。X3为甲基时，R3为甲基是更优选的。
需要说明的是，X3不存在、Y1也不存在、L1为单键、R3为氢原子的情况也是本发明的更优选方案之一。此时，优选地，R1及R2相同或不相同，为十二烷基、十四烷基、(Z)-十二碳-7-烯基、(Z)-十四碳-7-烯基、(Z)-十六碳-4-烯基、(Z)-十六碳-7-烯基、(E)-十六碳-7-烯基、(Z)-十六碳-9-烯基、(7Z,10Z)-十六碳-7,10-二烯基、(7Z,10Z,13Z)-十六碳-7,10,13-三烯基、(Z)-十八碳-9-烯基或(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基；更优选地，R1及R2相同或不相同，为(Z)-十四碳-7-烯基、(Z)-十六碳-7-烯基或(7Z,10Z)-十六碳-7,10-二烯基；R1及R2同为(Z)-十四碳-7-烯基是最优选方案之一，R1及R2同为(Z)-十六碳-7-烯基是最优选方案之一，或者，最优选地，R1及R2同为(7Z,10Z)-十六碳-7,10-二烯基。
另外，X3不存在、Y1也不存在、L1为单键、R3为甲基的情况也是本发明的更优选方案之一。此时，优选地，R1及R2相同或不相同，为十二烷基、十四烷基、(Z)-十二碳-7-烯基、(Z)-十四碳-7-烯基、(Z)-十六碳-4-烯基、(Z)-十六碳-7-烯基、(E)-十六碳-7-烯基、(Z)-十六碳-9-烯基、(7Z,10Z)-十六碳-7,10-二烯基、(7Z,10Z,13Z)-十六碳-7,10,13-三烯基、(Z)-十八碳-9-烯基或(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基；更优选地，R1及R2相同或不相同，为(Z)-十四碳-7-烯基、(Z)-十六碳-7-烯基、(7Z,10Z)-十六碳-7,10-二烯基或(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基；R1及R2同为(Z)-十四碳-7-烯基为最优选方案之一，R1及R2同为(Z)-十六碳-7-烯基为最优选方案之一，R1及R2同为(7Z,10Z)-十六碳-7,10-二烯基为最优选方案之一，或者最优选地，R1及R2同为(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基。
化合物(II)中，更优选地，L2及L3相同且为-O-、-CO-O-或-O-CO-。
另外，L2及L3中至少一个为-O-时，更优选地，键合于-O-的R4及R5相同或不相同，为十二烷基、十四烷基、十六烷基、十八烷基、二十烷基、二十二烷基、二十四烷基、(Z)-十四碳-9-烯基、(Z)-十六碳-9-烯基、(Z)-十八碳-6-烯基、(Z)-十八碳-9-烯基、(E)-十八碳-9-烯基、(Z)-十八碳-11-烯基、(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基、(9Z,12Z,15Z)-十八碳-9,12,15-三烯基、(Z)-二十碳-11-烯基、(11Z,14Z)-二十碳-11,14-二烯基、3,7,11-三甲基十二碳-2,6,10-三烯基、3,7,11,15-四甲基十六碳-2-烯基，或R4及R5一起形成二烷基亚甲基或二链烯基亚甲基，进一步优选地，R4及R5相同或不相同，为十四烷基、十六烷基、十八烷基、(Z)-十六碳-9-烯基、(Z)-十八碳-6-烯基、(Z)-十八碳-9-烯基、(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基，或R4及R5一起形成二(十四烷基)亚甲基、二(十六烷基)亚甲基、二(十八烷基)亚甲基、二((Z)-十六碳-9-烯基)亚甲基、二((Z)-十八碳-6-烯基)亚甲基、二((Z)-十八碳-9-烯基)亚甲基、二((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基)亚甲基，最优选地，R4及R5相同或不相同，为十四烷基、十六烷基、十八烷基、(Z)-十六碳-9-烯基、(Z)-十八碳-6-烯基、(Z)-十八碳-9-烯基、(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基。需要说明的是，在任一情况下，R4及R5相同，或R4及R5一起形成其中烷基、链烯基或炔基部分相同的二烷基亚甲基、二链烯基亚甲基或二炔基亚甲基均为更优选的。
另外，L2及L3中至少一个为-O-CO-时，更优选地，键合于-O-CO-的R4及R5相同或不相同，为十二烷基、十四烷基、十六烷基、十八烷基、二十烷基、二十二烷基、二十四烷基、(Z)-十四碳-9-烯基、(Z)-十六碳-9-烯基、(Z)-十八碳-6-烯基、(Z)-十八碳-9-烯基、(E)-十八碳-9-烯基、(Z)-十八碳-11-烯基、(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基、(9Z,12Z,15Z)-十八碳-9,12,15-三烯基、(Z)-二十碳-11-烯基、(11Z,14Z)-二十碳-11,14-二烯基、3,7,11-三甲基十二碳-2,6,10-三烯基、3,7,11,15-四甲基十六碳-2-烯基，进一步优选地，R4及R5相同或不相同，为十四烷基、十六烷基、十八烷基、(Z)-十六碳-9-烯基、(Z)-十八碳-6-烯基、(Z)-十八碳-9-烯基、(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基。需要说明的是，在任一情况下，R4及R5相同均为更进一步优选的。
另外，L2及L3中至少一个为-CO-O-时，更优选地，键合于-CO-O-的R4及R5相同或不相同，为十三烷基、十五烷基、十七烷基、十九烷基、二十一烷基、二十三烷基、(Z)-十三碳-8-烯基、(Z)-十五碳-8-烯基、(Z)-十七碳-5-烯基、(Z)-十七碳-8-烯基、(E)-十七碳-8-烯基、(Z)-十七碳-10-烯基、(8Z,11Z)-十七碳-8,11-二烯基、(8Z,11Z,14Z)-十八碳-8,11,14-三烯基、(Z)-十九碳-10-烯基、(10Z,13Z)-十九碳-10,13-二烯基、(11Z,14Z)-二十碳-11,14-二烯基、2,6,10-三甲基十一碳-1,5,9-三烯基、2,6,10,14-四甲基十五碳-1-烯基，或R4及R5一起形成二烷基亚甲基、二链烯基亚甲基、二炔基亚甲基或烷基链烯基亚甲基，进一步更优选地，R4及R5相同或不相同，为十三烷基、十五烷基、十七烷基、(Z)-十五碳-8-烯基、(Z)-十七碳-5-烯基、(Z)-十七碳-8-烯基、(8Z,11Z)-十七碳-8,11-二烯基。需要说明的是，在任一情况下，R4及R5相同，或R4及R5一起形成其中烷基、链烯基或炔基部分相同的二烷基亚甲基、二链烯基亚甲基或二炔基亚甲基均为进一步更优选的。
另外，a及b更优选同时为0或1。
需要说明的是，a及b同时为1时，X4及X5更优选一起形成单键或亚烷基。另外，a及b同时为1、L4为单键时，L2及L3为-CO-O-也是本发明的更优选方案之一。
另外，X4及X5更优选一起形成单键或亚烷基。需要说明的是，X4及X5一起形成单键或亚烷基时，R6更优选为氢原子、甲基、吡咯烷-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基或被相同或不相同的1～3个的氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数为1～6的烷基或碳原子数为3～6的链烯基，进一步优选为氢原子、甲基或被相同或不相同的1～3个的氨基、羟基或氨基甲酰基取代的碳原子数为1～6的烷基或碳原子数为3～6的链烯基，最优选为氢原子、甲基、2,3-二羟基丙基、3-羟基丙基、氨基甲基、1,2-二氨基乙基、2-氨基乙基、1,3-二氨基丙基、1,4-二氨基丁基、1,5-二氨基戊基、3-氨基丙基、4-氨基丁基、5-氨基戊基、2-氨基甲酰基乙基等。
另外，X4及X5一起形成单键时，L4为-CO-或-CO-O-、优选为-CO-也是本发明的更优选方案之一。此时，R6进一步优选为氨基甲基、1,2-二氨基乙基、2-氨基乙基、1,3-二氨基丙基、1,4-二氨基丁基、1,5-二氨基戊基、3-氨基丙基、4-氨基丁基、5-氨基戊基等，最优选为1,2-二氨基乙基、1,3-二氨基丙基、1,4-二氨基丁基、1,5-二氨基戊基。
另外，X4及X5一起形成单键时，a及b相同或不相同、为1～3、优选为1也是本发明的更优选方案之一。此时，L2及L3相同且为-CO-O-或-O-CO-(优选为-CO-O-)、R6为甲基也是本发明的进一步优选方案之一，此时，更优选地，R4及R5相同或不相同，为(Z)-十七碳-8-烯基或(8Z,11Z)-十七碳-8,11-二烯基，最优选地，R4及R5相同且为(Z)-十七碳-8-烯基或(8Z,11Z)-十七碳-8,11-二烯基。
另外，X4及X5一起形成单键时，X6为碳原子数为1～6的烷基或碳原子数为3～6的链烯基、优选为甲基也是本发明的更优选方案之一，此时，进一步优选地，L2及L3相同且为-CO-O-或-O-CO-，最优选地，L2及L3同为-CO-O-。
需要说明的是，X4及X5为氢原子时，R6更优选为氢原子、甲基、吡咯烷-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基或被相同或不相同的1～3个的氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数为1～6的烷基或碳原子数为3～6的链烯基，进一步优选为氢原子、甲基或被相同或不相同的1～3个的氨基、羟基或氨基甲酰基取代的碳原子数为1～6的烷基或碳原子数为3～6的链烯基，最优选为氢原子、甲基、2,3-二羟基丙基、3-羟基丙基、氨基甲基、1,2-二氨基乙基、2-氨基乙基、1-氨基-2-羟基乙基、1,3-二氨基丙基、1,4-二氨基丁基、1,5-二氨基戊基、3-氨基丙基、4-氨基丁基、5-氨基戊基、2-氨基甲酰基乙基等。
另外，L4更优选为单键。需要说明的是，L4为单键时，L2及L3更优选为-O-。
另外，L4为单键时，R6更优选为氢原子、甲基、吡咯烷-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基或被相同或不相同的1～3个的氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数为1～6的烷基或碳原子数为3～6的链烯基，进一步优选为氢原子、甲基、羟基甲基、2-羟基乙基、2,3-二羟基丙基、2-羟基丙基、3-羟基丙基、2-羟基-3-甲氧基丙基、氨基甲基、2-氨基乙基、3-氨基丙基、4-氨基丁基、5-氨基戊基、2-(N,N-二甲基氨基)乙基、3-(N,N-二甲基氨基)丙基、2-氨基甲酰基乙基、2-二甲基氨基甲酰基乙基、1-甲基哌啶-4-基等，最优选为氢原子、甲基、2,3-二羟基丙基、3-羟基丙基、2-氨基乙基、3-氨基丙基、4-氨基丁基、5-氨基戊基、2-氨基甲酰基乙基等，在任一情况下，L2及L3为-O-均更优选。
需要说明的是，X6不存在、Y2也不存在、L4为单键、R6为氢原子时，L2及L3相同且为-CO-O-或-O-CO-、优选同为-CO-O-也是本发明的更优选方案之一。此时，更优选地，R4及R5相同或不相同，为(Z)-十七碳-5-烯基或(Z)-十七碳-8-烯基，最优选地，R4及R5相同且为(Z)-十七碳-5-烯基或(Z)-十七碳-8-烯基。
需要说明的是，L4为-CO-或-CO-O-时，L2及L3更优选相同且为-CO-O-或-O-CO-，进一步优选同为-CO-O-。
另外，L4为-CO-或-CO-O-时，R6更优选为吡咯烷-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基或被相同或不相同的1～3个的氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数为1～6的烷基或碳原子数为3～6的链烯基，所述取代基中的至少一个为氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基，R6进一步优选为氨基甲基、1,2-二氨基乙基、2-氨基乙基、1,3-二氨基丙基、3-氨基丙基、1,4-二氨基丁基、4-氨基丁基、1,5-二氨基戊基、5-氨基戊基、(N,N-二甲基氨基)甲基、2-(N,N-二甲基氨基)乙基、3-(N,N-二甲基氨基)丙基、1-氨基-2-羟基乙基等，最优选为1,2-二氨基乙基、2-氨基乙基、1,3-二氨基丙基、3-氨基丙基、1,4-二氨基丁基、4-氨基丁基、1,5-二氨基戊基、5-氨基戊基等。
L4为-CO-或-CO-O-时，R6为氨基甲基、1-羟基-2-氨基乙基、2-氨基乙基、1,3-二氨基丙基、3-氨基丙基、1,4-二氨基丁基、4-氨基丁基、1,5-二氨基戊基、5-氨基戊基、L2及L3同为-O-也是本发明的进一步优选方案之一。此时，更优选地，R4及R5相同或不相同，为(Z)-十八碳-9-烯基或(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基，最优选地，R4及R5相同且为(Z)-十八碳-9-烯基或(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基。
另外，更优选地，X6不存在或为甲基。X6为甲基时，R6更优选为甲基，L2及L3更优选相同且为-CO-O-或-O-CO-，进一步更优选地，L2及L3同为-CO-O-。
化合物(II)中，可举出式(ii)表示的化合物(ii)作为更优选的化合物(II)之一。
(式中，R7及R8为：R4及R5中的相同或不相同的碳原子数为12～24的直链状或支链状的烷基、链烯基或炔基，
L5及L6为-CO-O-或-O-CO-，优选为-CO-O-，
a及b分别与上述含义相同，优选为1，
R9为R6中的氢原子、碳原子数为1～6的烷基或碳原子数为3～6的链烯基)
接着，说明化合物(I)的制造方法。需要说明的是，在以下所示的制造方法中，定义的基团在该制造方法的条件下将发生变化或不适于实施该制造方法时，可通过使用有机合成化学中常用的导入及除去保护基的方法(例如“Protective Groups in Organic Synthesis”等中记载的方法(T.W.Greene著，“Protective Groups in OrganicSynthesis”，第3版，美国，John Wiley&Sons Inc.，1999年))等，来制造目标化合物。另外，根据需要，也可改变取代基导入等反应工序的顺序。
制造方法1
化合物(Ia)(其为化合物(I)中X1及X2为氢原子、L1为单键、X3及Y1不存在的情况)可利用以下的方法制造。
(式中，R1、R2及R3分别与上述含义相同，Z表示氯原子、溴原子、碘原子、三氟甲磺酰氧基、甲磺酰氧基、苯磺酰氧基、对甲苯磺酰氧基等离去基团)
工序1及2
化合物(IIIb)可通过如下方式制造：将化合物(IIIa)和化合物(IVa)在无溶剂的情况下或在溶剂中，根据需要、在优选1～10当量的碱的存在下，在室温与200℃之间的温度下，处理5分钟～100小时。进而，化合物(Ia)可通过如下方式制造：将化合物(IIIb)和化合物(IVb)在无溶剂的情况下或在溶剂中，根据需要、在优选1～10当量的碱的存在下，在室温与200℃之间的温度下，处理5分钟～100小时，进行分离。
作为溶剂，可举出例如甲醇、乙醇、二氯甲烷、氯仿、1,2-二氯乙烷、甲苯、乙酸乙酯、乙腈、乙醚、四氢呋喃、1,2-二甲氧基乙烷、二氧杂环己烷、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷酮、吡啶、水等，它们可以单独使用或混合使用。
作为碱，可举出例如碳酸钾、氢氧化钾、氢氧化钠、甲醇钠、叔丁醇钾、三乙基胺、二异丙基乙基胺、N-甲基吗啉、吡啶、1,8-二氮杂双环[5.4.0]-7-十一碳烯(DBU)等。
化合物(IIIa)可利用市售品获得，或可利用已知的方法(例如，“实验化学讲座14有机化合物的合成II”，第5版，丸善，2005年，第351页)或以此为基准的方法得到。
化合物(IVa)及化合物(IVb)可利用市售品获得，或可利用已知的方法(例如，“实验化学讲座13有机化合物的合成I”，第5版，丸善，2005年，第374页)或以此为基准的方法得到。
其中R1与R2相同时的化合物(Ia)可通过在工序1中使用2当量以上的化合物(IVa)而得到。
制造方法2
化合物(Ib)(其为化合物(I)中X1及X2一起形成单键或亚烷基、L1为单键、X3及Y1不存在的情况)可利用以下的方法制造。
(式中，R1、R2、R3及Z分别与上述含义相同，X4表示单键或亚烷基)
工序3及4
化合物(Vb)可通过如下方式制造：将化合物(Va)和化合物(VIa)在溶剂中，在1～10当量的碱的存在下，在-100℃与100℃之间的温度下，处理5分钟～100小时。进而，化合物(Vc)可通过如下方式制造：将化合物(Vb)和化合物(VIb)，在无溶剂的情况下或在溶剂中，根据需要、在优选1～10当量的碱的存在下，在-100℃与100℃之间的温度下，处理5分钟～100小时，进行分离。
作为溶剂，可举出与制造方法1相同的溶剂。
作为碱，可举出例如氢化钠、氢化钾、叔丁醇钾、叔丁醇钠、二异丙基氨基锂(LDA)、六甲基二硅基胺基锂(LHMDS)等。
化合物(Va)可利用市售品获得或可利用已知的方法(例如，“实验化学讲座16有机化合物的合成IV”,第5版，丸善，2005年，p.146)或以此为基准的方法得到。
化合物(VIa)及化合物(VIb)可利用市售品获得或可利用已知的方法(例如，“实验化学讲座13有机化合物的合成I”，第5版，丸善，2005年，第374页)或以此为基准的方法得到。
其中R1与R2相同时的化合物(Vc)可通过在工序3中使用2当量以上的化合物(VIa)而得到。
工序5
化合物(Ib)可通过如下方式得到：将化合物(Vc)在溶剂中，在1当量～大量过量的还原剂及根据需要的优选0.1～10当量的金属化合物的存在下，在-100℃与100℃之间的温度下，处理5分钟～100小时。
作为还原剂，可举出例如氢化铝锂、硼氢化钠、三乙酰氧基硼氢化钠、氰基硼氢化钠等。
作为金属化合物，可举出例如氯化钴、铁的氯化物、氯化铝等。
制造方法3
化合物(Ic)(化合物(I)中，L1为单键，R3为-CHRARB、X3及Y1不存在的情况)可利用以下的方法制造(-CHRARB中，RA及RB相同或不相同，为氢原子、碳原子数为1～5的烷基、碳原子数为2～5的链烯基、吡咯烷-2-基、吡咯烷-3-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、吗啉-2-基、吗啉-3-基或被相同或不相同的1～3个的氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数为1～5的烷基或碳原子数为2～5的链烯基，或者RA及RB与相邻的碳原子一起形成吡咯烷-3-基、哌啶-3-基或哌啶-4-基，但不包括RA及RB均为氢原子的情况，RA及RB的烷基、被取代的烷基的烷基部分、链烯基及被取代的链烯基的链烯基部分的碳原子数的总和为1～5，RA及RB中任一个为吡咯烷-2-基、吡咯烷-3-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、吗啉-2-基或吗啉-3-基时，所述RA及RB中的另一个为氢原子、碳原子数为1～5的烷基、碳原子数为2～5的链烯基、吡咯烷-2-基、吡咯烷-3-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、吗啉-2-基、吗啉-3-基或被相同或不相同的1个或2个的氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数为1～5的烷基或碳原子数为3～5的链烯基，RA及RB为被取代的烷基或链烯基时，所述取代基的总数为2或3)：
(式中，R1、R2、RA、RB、X1及X2分别与上述含义相同)
工序6
化合物(Ic)可通过如下方式制造：在溶剂中，在优选1当量～大量过量的还原剂及根据需要优选的1～10当量的酸的存在下，在-20℃与150℃之间的温度下，使化合物(Ia)及化合物(Ib)中的R3为氢原子的化合物(Id)与优选1～10当量的化合物(VII)反应5分钟～72小时。
作为溶剂，可举出例如甲醇、乙醇、二氯甲烷、氯仿、1,2-二氯乙烷、甲苯、乙酸乙酯、乙腈、乙醚、四氢呋喃、1,2-二甲氧基乙烷、二氧杂环己烷、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷酮、水等，这些可以单独使用或混合使用。
作为还原剂，可举出例如三乙酰氧基硼氢化钠、氰基硼氢化钠等。
作为酸，可举出例如盐酸、乙酸等。
化合物(VII)可利用市售品获得或可利用已知的方法(例如，“实验化学讲座15有机化合物的合成III”,第5版，丸善，2005年，第1页，“实验化学讲座15有机化合物的合成III”，第5版，丸善，2005年，第153页)或以此为基准得到。
制造方法4
化合物(I)中L1为-CO-、X3及Y1不存在的化合物(Ie)可利用以下的方法制造。
(式中，R1、R2、R3、X1及X2分别与上述含义相同)
工序7
化合物(Ie)可通过如下方式制造：将化合物(Id)和化合物(VIII)，在溶剂中，在-20℃与150℃之间的温度下，使用1当量～大量过量的缩合剂，处理5分钟～100小时。此时，也可根据需要在优选0.01～10当量的添加剂的存在下，及/或，根据需要加入优选1当量～大量过量的碱，来促进反应。
作为溶剂，可举出例如甲醇、乙醇、二氯甲烷、氯仿、1,2-二氯乙烷、甲苯、乙酸乙酯、乙腈、乙醚、四氢呋喃、1,2-二甲氧基乙烷、二氧杂环己烷、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷酮、二甲基亚砜、水等，这些可以单独使用或混合使用。
作为缩合剂，可举出例如1,3-二环己基碳二亚胺、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺·盐酸盐、羰基二咪唑、苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)鏻六氟磷酸盐、(苯并三唑-1-基氧基)三吡咯烷基鏻六氟磷酸盐、O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐、O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐、碘化2-氯-1-甲基吡啶鎓等。
作为添加剂，可举出例如1-羟基苯并三唑、4-二甲基氨基吡啶等。
作为碱，可举出例如乙酸钾、碳酸氢钠、碳酸钾、氢氧化钾、氢氧化钠、甲醇钠、叔丁醇钾、三乙基胺、二异丙基乙基胺、N-甲基吗啉、吡啶、1,8-二氮杂双环[5.4.0]-7-十一碳烯等。
化合物(VIII)可利用市售品获得或可利用已知的方法(例如，“实验化学讲座16有机化合物的合成IV”，第5版，丸善，2005年，p.1)或以此为基准得到。
制造方法5
化合物(I)中L1为-CO-O-、X3及Y1不存在的化合物(If)可利用以下的方法制造。
(式中，R1、R2、R3、X1及X2分别与上述含义相同)
工序8
化合物(If)可通过如下方式制造：在无溶剂的情况下或在溶剂中，根据需要在优选1～10当量的添加剂的存在下，及/或根据需要在优选1～10当量的碱的存在下，在-20℃与150℃之间的温度下，使化合物(Id)与化合物(IX)反应5分钟～72小时。
作为溶剂及添加剂，可举出与制造方法4相同的溶剂及添加剂。
作为碱，可举出例如三乙基胺、二异丙基乙基胺、N-甲基吗啉、吡啶、1,8-二氮杂双环[5.4.0]-7-十一碳烯等。
化合物(IX)可利用市售品获得或可利用已知的方法(例如，“Journal of American Chemical Society(J.Am.Chem.Soc.)”，(美国)，1981年，第103卷，第4194-4199页)或以此为基准的方法得到。
制造方法6
化合物(Ig)(化合物(I)中，L1为单键、R3为-CH2-C(OH)RCRD、X3及Y1不存在的情况)可利用以下的方法制造(-CH2-C(OH)RCRD式中，RC及RD相同或不相同，为氢原子、碳原子数为1～4的烷基、碳原子数为2～4的链烯基、吡咯烷-2-基、吡咯烷-3-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、吗啉-2-基、吗啉-3-基或被相同或不相同的1个或2个的氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数为1～4的烷基或碳原子数为2～4的链烯基，但不包括RC及RD均为氢原子的情况，RC及RD的烷基、被取代的烷基的烷基部分、链烯基及被取代的链烯基的链烯基部分的碳原子数的总和为1～4，RC及RD中的任一个为吡咯烷-2-基、吡咯烷-3-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、吗啉-2-基或吗啉-3-基时，所述RC及RD中的另一个为氢原子、碳原子数为1～4的烷基、碳原子数为2～4的链烯基、吡咯烷-2-基、吡咯烷-3-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、吗啉-2-基、吗啉-3-基或被1个氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数为1～4的烷基或碳原子数为2～4的链烯基，RC及RD为被取代的烷基或链烯基时，所述取代基的总数为2)：
(式中，R1、R2、RC、RD、X1及X2分别与上述含义相同)
工序9
化合物(Ig)可通过如下方式制造：在溶剂中或无溶剂的情况下，在0℃与230℃之间的温度下，对化合物(Id)和化合物(X)处理5分钟～100小时。
作为溶剂，可举出例如甲醇、乙醇、1-丙醇、二氯甲烷、氯仿、1,2-二氯乙烷、甲苯、乙酸乙酯、乙腈、乙醚、四氢呋喃、1,2-二甲氧基乙烷、二氧杂环己烷、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷酮、二甲基亚砜等，这些可以单独使用或混合使用。
化合物(X)可利用市售品获得或可利用已知的方法(例如，“实验化学讲座17有机化合物的合成V”，第5版，丸善，2005年，第186页)或以此为基准而得到。
制造方法7
化合物(Ih)(化合物(I)中L1为单键、X3为碳原子数为1～6的烷基或碳原子数为3～6的链烯基、Y1为制药上可接受的阴离子的情况)可利用以下的方法制造。
(式中，R1、R2、R3、X1、X2、X3、Y1及Z分别与上述含义相同)
工序10及11
化合物(Ii)为化合物(Ia)或化合物(Ib)。
化合物(Ih-A)可通过如下方式得到：在溶剂中或在无溶剂的情况下，在0℃与230℃之间的温度下，对化合物(Ii)与化合物(XI)处理5分钟～100小时。化合物(Ih)可通过用Y型的阴离子交换树脂处理化合物(Ih-A)而得到。
作为溶剂，可举出例如甲醇、乙醇、二氯甲烷、氯仿、1,2-二氯乙烷、甲苯、乙酸乙酯、乙腈、乙醚、四氢呋喃、1,2-二甲氧基乙烷、二氧杂环己烷、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷酮、吡啶等，这些可以单独使用或混合使用。
化合物(XI)可利用市售品获得或可利用已知的方法(例如，实验化学讲座13有机化合物的合成I”，第5版，丸善，2005年，第374页)或以此为基准而得到。
另外，Z与Y1相同时，可通过省略工序11来制造(Ih)。
化合物(I)中的R1、R2或R3中含有的官能团的转化也可利用已知的方法(例如，“Comprehensive Organic Transformations”等中记载的方法(R.C.Larock著，“Comprehensive Organic Transformations”，(美国)，第2版，Vch Verlagsgesellschaft Mbh，1999年))或以这些方法为基准而进行。
上述各制造方法中的中间体及目标化合物可通过实施有机合成化学中常用的分离纯化法例如过滤、萃取、洗涤、干燥、浓缩、重结晶、各种色谱法等来进行分离纯化。另外，中间体也可不特别纯化而供于后续反应。
化合物(I)中，可以在结构中的氮原子上的孤对电子上配位氢离子，该氮原子也可以与制药上可接受的阴离子(与上述含义相同)形成盐，化合物(I)中也包含在该氮原子上的孤对电子上配位了氢离子的化合物。需要说明的是，本发明中，X3不存在的情况也包括配位氢离子的情况。
化合物(I)中，有时也可存在几何异构体、光学异构体等立体异构体、互变异构体等，化合物(I)包含所有的可能的异构体(包括上述异构体在内)及它们的混合物。
化合物(I)中的各原子的一部分或全部也可被置换为分别对应的同位素原子，化合物(I)也包含被这些同位素原子置换后的化合物。例如，化合物(I)中的氢原子的一部分或全部也可以是原子量为2的氢原子(氘原子)。
化合物(I)中的各原子的一部分或全部被分别对应的同位素原子置换后的化合物，可使用市售的结构单元(building block)，利用与上述各制造方法同样的方法制造。另外，化合物(I)中的氢原子的一部分或全部被氘原子取代的化合物例如也可使用如下方法合成：1)使用过氧化氘、在碱性条件下将羧酸等氘化的方法(参照美国专利第3849458号说明书)；2)使用铱络合物作为催化剂，使用重水作为氘源将醇、羧酸等氘化的方法(参照“J.Am.Chem.Soc.”，(美国)，2002年，第124卷，第10号，第2092页)；3)使用钯碳作为催化剂，仅使用氘气作为氘源将脂肪酸氘化的方法(参照“LIPIDS”(美国)，1974年，第9卷，第11号，第913页)；4)使用铂、钯、铑、钌、铱等金属作为催化剂，使用重水作为氘源或者使用重水及氘气作为氘源将丙烯酸、丙烯酸甲酯、甲基丙烯酸、甲基丙烯酸甲酯等氘化的方法(参照日本特公平5-19536号公报，日本特开昭61-277648号公报及日本特开昭61-275241号公报)；5)使用钯、镍、铜或者亚铬酸铜等催化剂，使用重水作为氘源，将丙烯酸、甲基丙烯酸甲酯等氘化的方法(参照日本特开昭63-198638号公报)等。
化合物(II)可利用与国际公开第2011/136368号中记载的制造方法同样的方法得到。
需要说明的是，在化合物(II)中定义的基团在该制造方法的条件下将发生变化或不适于实施该制造方法时，可通过使用有机合成化学中常用的导入及除去保护基的方法(例如“Protective Groups inOrganic Synthesis”等中记载的方法(T.W.Greene著，“ProtectiveGroups in Organic Synthesis”，第3版，美国，John Wiley&Sons Inc.，1999年))等，来制造目标化合物。另外，根据需要，也可改变取代基导入等反应工序的顺序。
将化合物(I)的具体例示于表1，将化合物(II)的具体例示于表2～12。但本发明中的化合物(I)及化合物(II)不限于这些。
表1
表2
表3
表4
表5
表6
表7
表8
表9
表10
表11
表12
另外，作为本发明中使用的核酸，只要是核苷酸及/或与所述核苷酸具有同等功能的分子聚合而得到的分子，则可以为任何分子，可以举出例如作为核糖核苷酸的聚合体的RNA、作为脱氧核糖核苷酸的聚合体的DNA、RNA与DNA形成的嵌合核酸、及上述核酸中的至少一个核苷酸被与所述核苷酸具有同等功能的分子置换而得到的核苷酸聚合体。另外，含有至少一种将核苷酸及/或与所述核苷酸具有同等功能的分子聚合而得到的分子的衍生物也包括在本发明的核酸中。进而还可举出肽核酸(PNA)(“Acc.Chem.Res.”，(美国)，1999年，第32卷，第624页)、氧基肽核酸(OPNA)(“J.Am.Chem.Soc.”，(美国)，2001年，第123卷，第4653页)、肽核糖核酸(PRNA)(“J.Am.Chem.Soc.”，(美国)，2000年，122卷，第6900页)等。需要说明的是，本发明中，RNA中的尿苷U与DNA中的胸腺嘧啶T可以分别互换来读出。
作为与核苷酸具有同等功能的分子，可以举出例如核苷酸衍生物等。
作为核苷酸衍生物，只要是对核苷酸进行修饰而得的分子则可以为任何分子，例如与RNA或者DNA相比，为了提高核酸酶耐性或使其免受其他分解因子的影响而稳定化，为了提高与互补链核酸的亲和性，为了提高细胞透过性，或者为了使其可被观察到，适合使用对核糖核苷酸或者脱氧核糖核苷酸进行修饰而得的分子等。
作为核苷酸衍生物，可以举出例如糖部修饰核苷酸、磷酸二酯键修饰核苷酸、碱基修饰核苷酸等。
作为糖部修饰核苷酸，只要为对核苷酸的糖的化学结构的一部分或者全部用任意的取代基进行了修饰或取代的产物、或者用任意的原子进行了取代的产物，则可以为任何物质，可以优选使用2’-修饰核苷酸。
作为糖部修饰核苷酸的修饰基团，可以举出例如2’-氰基、2’-烷基、2’-取代烷基、2’-链烯基、2’-取代链烯基、2’-卤素、2’-O-氰基、2’-O-烷基、2’-O-取代烷基、2’-O-链烯基、2’-O-取代链烯基、2’-S-烷基、2’-S-取代烷基、2’-S-链烯基、2’-S-取代链烯基、2’-氨基、2’-NH-烷基、2’-NH-取代烷基、2’-NH-链烯基、2’-NH-取代链烯基、2’-SO-烷基、2’-SO-取代烷基、2’-羧基、2’-CO-烷基、2’-CO-取代烷基、2’-Se-烷基、2’-Se-取代烷基、2’-SiH2-烷基、2’-SiH2-取代烷基、2’-ONO2、2’-NO2、2’-N3、2’-氨基酸残基(从氨基酸的羧酸中除去羟基得到的基团)、2’-O-氨基酸残基(与上述氨基酸残基含义相同)等。另外，具有2’位的修饰基团与4’位的碳原子桥联的结构的桥联结构型人工核酸(Bridged Nucleic Acid)(BNA)，更具体而言，2’位的氧原子与4’位的碳原子经亚甲基桥联而得到的锁人工核酸(Locked NucleicAcid)(LNA)、及亚乙基桥联结构型人工核酸(Ethylene bridgednucleic acid)(ENA)(“Nucleic Acids Research”，(英国)，2004年，32卷，第e175页)等也包括在本发明中的在2’位被修饰基团取代的核糖内。
作为糖部修饰核苷酸的修饰基团，优选2’-氰基、2’-卤素、2’-O-氰基、2’-烷基、2’-取代烷基、2’-O-烷基、2’-O-取代烷基、2’-O-链烯基、2’-O-取代链烯基、2’-Se-烷基、2’-Se-取代烷基，更优选2’-氰基、2’-氟、2’-氯、2’-溴、2’-三氟甲基、2’-O-甲基、2’-O-乙基、2’-O-异丙基、2’-O-三氟甲基、2’-O-[2-(甲氧基)乙基]、2’-O-(3-氨基丙基)、2’-O-[2-(N,N-二甲基)氨基氧基]乙基、2’-O-[3-(N,N-二甲基氨基)丙基]、2’-O-{2-[2-(N,N-二甲基氨基)乙氧基]乙基}、2’-O-[2-(甲基氨基)-2-氧代乙基]、2’-Se-甲基等，进一步优选2’-O-甲基、2’-O-乙基、2’-氟等，最优选2’-O-甲基、2’-O-乙基。
另外，关于糖部修饰核苷酸的修饰基团，还可以从其大小考虑来定义优选范围，从氟的大小考虑优选相当于-O-丁基的大小的基团，从-O-甲基的大小考虑较优选相当于-O-乙基的大小的基团。
糖部修饰核苷酸的修饰基团中的烷基与化合物(I)中的碳原子数为1～6的烷基含义相同。
糖部修饰核苷酸的修饰基团中的链烯基与化合物(I)中的碳原子数为3～6的链烯基含义相同。
作为糖部修饰核苷酸的修饰基团中的卤素，可举出氟原子、氯原子、溴原子、碘原子。
作为氨基酸残基中的氨基酸，可以举出例如脂肪族氨基酸(具体而言，甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸等)、羟基氨基酸(具体而言，丝氨酸、苏氨酸等)、酸性氨基酸(具体而言，天冬氨酸、谷氨酸等)、酸性氨基酸酰胺(具体而言，天冬酰胺、谷氨酰胺等)、碱性氨基酸(具体而言，赖氨酸、羟基赖氨酸、精氨酸、鸟氨酸等)、含硫氨基酸(具体而言，半胱氨酸、胱氨酸、蛋氨酸等)、亚氨基酸(具体而言，脯氨酸、4-羟基脯氨酸等)等。
作为糖部修饰核苷酸的修饰基团中的取代烷基及取代链烯基的取代基，可以举出例如卤素(与上述含义相同)、羟基、巯基、氨基、氧代、-O-烷基(该-O-烷基的烷基部分与上述烷基含义相同)、-S-烷基(该-S-烷基的烷基部分与上述烷基含义相同)、-NH-烷基(该-NH-烷基的烷基部分与上述烷基含义相同)、二烷基氨基氧基(该二烷基氨基氧基的2个烷基相同或不同，与上述烷基含义相同)、二烷基氨基(该二烷基氨基的2个烷基相同或不同，与上述烷基含义相同)、二烷基氨基亚烷基氧基(该二烷基氨基亚烷基氧基的2个烷基相同或不同，与上述烷基含义相同，亚烷基部分表示从上述烷基除去1个氢原子得到的基团)等，取代数优选为1～3。
作为磷酸二酯键修饰核苷酸，只要是对核苷酸的磷酸二酯键的化学结构的一部分或者全部用任意的取代基修饰或取代的核苷酸，或者用任意的原子取代的核苷酸，则可以为任意的核苷酸，可以举出例如磷酸二酯键被硫代磷酸酯键取代的核苷酸、磷酸二酯键被二硫代磷酸酯键取代的核苷酸、磷酸二酯键被膦酸烷基酯键取代的核苷酸、磷酸二酯键被氨基磷酸酯键取代的核苷酸等。
作为碱基修饰核苷酸，只要是对核苷酸的碱基的化学结构的一部分或者全部用任意的取代基修饰或取代的核苷酸，或者用任意的原子取代的核苷酸，则可以为任意的核苷酸，可以举出例如碱基内的氧原子被硫原子取代的核苷酸，氢原子被碳原子数1～6的烷基取代的核苷酸，甲基被氢原子或碳原子数2～6的烷基取代的核苷酸，氨基被碳原子数1～6的烷基、碳原子数1～6的烷酰基等保护基保护的核苷酸。
进而，作为核苷酸衍生物，还可以举出在核苷酸或者糖部、磷酸二酯键或碱基的至少一方被修饰的核苷酸衍生物中加成脂质、磷脂、吩嗪、叶酸(folate)、菲啶、蒽醌、吖啶、荧光素、罗丹明、香豆素、色素等、其他化学物质的产物，具体而言，可以举出5’-多胺加成核苷酸衍生物、胆固醇加成核苷酸衍生物、甾体加成核苷酸衍生物、胆汁酸加成核苷酸衍生物、维生素加成核苷酸衍生物、Cy5加成核苷酸衍生物、Cy3加成核苷酸衍生物、6-FAM加成核苷酸衍生物、及生物素加成核苷酸衍生物等。
另外，核苷酸衍生物中，可以形成核酸内的其他核苷酸或者核苷酸衍生物与亚烷基结构、肽结构、核苷酸结构、醚结构、酯结构、及将它们中的至少一方组合得到的结构等的交联结构。
作为本发明中使用的核酸，优选可以举出抑制靶基因表达的核酸，较优选可以举出具有利用了RNA干扰(RNAi)的靶基因表达抑制作用的核酸。
作为本发明中使用的靶基因，只要是产生mRNA进行表达的基因则没有特别限定，优选例如与肿瘤或者炎症相关的基因，可以举出例如血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，以下简称为VEGF)、血管内皮生长因子受体(vascular endothelial growth factorreceptor，以下简称为VEGFR)、成纤维细胞生长因子、成纤维细胞生长因子受体、来自血小板的生长因子、来自血小板的生长因子受体、肝细胞生长因子、肝细胞生长因子受体、Kruppel样因子(Kruppel-likefactor，以下简称为KLF)、Ets转录因子、核因子、低氧诱导因子、细胞周期相关因子、染色体复制相关因子、染色体修复相关因子、微管相关因子、生长信号通路相关因子、生长相关转录因子、凋亡相关因子等编码蛋白质的基因等，具体而言，可以举出VEGF基因、VEGFR基因、成纤维细胞生长因子基因、成纤维细胞生长因子受体基因、来自血小板的生长因子基因、来自血小板的生长因子受体基因、肝细胞生长因子基因、肝细胞生长因子受体基因、KLF基因、Ets转录因子基因、核因子基因、低氧诱导因子基因、细胞周期相关因子基因、染色体复制相关因子基因、染色体修复相关因子基因、微管相关因子基因(例如，CKAP5基因等)、生长信号通路相关因子基因、生长相关转录因子基因、凋亡相关因子(例如，BCL-2基因等)等。
另外，作为本发明中使用的靶基因，优选例如在肝脏、肺、肾脏或者脾脏中表达的基因，可以举出例如上述与肿瘤或者炎症相关的基因、乙型肝炎病毒基因组、丙型肝炎病毒基因组、编码下述蛋白质的基因等，所述蛋白质为载脂蛋白(APO)、羟甲基戊二酸单酰(HMG)CoA还原酶、kexin 9型丝氨酸蛋白酶(PCSK9)、因子XII、胰高血糖素受体、糖皮质激素受体、白三烯受体、血栓素A2受体、组胺H1受体、碳酸酐酶、血管紧张肽转化酶、肾素、p53、酪氨酸磷酸酶(PTP)、钠依赖性葡萄糖运送载体、肿瘤坏死因子、白细胞介素等。
作为抑制靶基因表达的核酸，只要是例如含有相对于编码蛋白质等的基因(靶基因)的mRNA的一部分碱基序列互补的碱基序列、并且抑制靶基因的表达的核酸，则可以使用例如siRNA(短干扰RNA，short interference RNA)、miRNA(微型RNA，micro RNA)等双链核酸；shRNA(短发卡RNA，short hairpin RNA)、反义核酸、核酶等单链核酸等任意的核酸，优选使用双链核酸。
将含有相对于靶基因的mRNA的一部分碱基序列互补的碱基序列的核酸称为反义链核酸，还将含有相对于反义链核酸的碱基序列互补的碱基序列的核酸称为有义链核酸。有义链核酸是指由靶基因的一部分碱基序列形成的核酸本身等、能够与反义链核酸配对形成双链形成部的核酸。
所谓双链核酸，是指两条链配对具有双链形成部的核酸。所谓双链形成部，是指构成双链核酸的核苷酸或者其衍生物构成碱基对形成双链的部分。构成双链形成部的碱基对，通常为15～27个碱基对，优选为15～25个碱基对，较优选为15～23个碱基对，更优选为15～21个碱基对，特别优选为15～19个碱基对。
作为双链形成部的反义链核酸，优选使用含有靶基因的mRNA的一部分序列的核酸、或者在该核酸中取代、缺失或添加1～3个碱基(优选1～2个碱基、较优选1个碱基)、并且具有靶蛋白的表达抑制活性的核酸。构成双链核酸的单链的核酸长度通常含有15～30个碱基，优选15～29个碱基、较优选15～27个碱基、更优选15～25个碱基、特别优选17～23个碱基、最优选19～21个碱基。
构成双链核酸的反义链、有义链中的任一方或者双方的核酸可以在与双链形成部连续的3’侧或者5’侧具有未形成双链的追加的核酸。所述未形成双链的部分也称为突出部(悬挂，overhang)。
作为具有突出部的双链核酸，使用在至少一方的链的3’末端或者5’末端具有含有1～4个碱基、通常含有1～3个碱基的突出部的双链核酸，优选使用具有含有2个碱基的突出部的双链核酸，较优选使用具有含有dTdT或者UU的突出部的双链核酸。突出部可以仅在反义链一方具有，可以仅在有义链一方具有，也可以在反义链和有义链双方均具有，优选使用在反义链和有义链双方均具有突出部的双链核酸。
另外，可以使用与双链形成部连续且与靶基因的mRNA的一部分或者全部一致的序列，或者，与双链形成部连续且与靶基因的mRNA的互补链的碱基序列一致的序列。并且，作为抑制靶基因的表达的核酸，还可以使用例如通过Dicer等核糖核酸酶的作用生成上述双链核酸的核酸分子(国际公开第2005/089287号)、或者不具有3’末端或5’末端的突出部的双链核酸等。
另外，上述双链核酸为siRNA时，反义链中，由5’末端侧向3’末端侧至少第1～17个碱基的序列为与靶基因的mRNA的连续17个碱基的序列互补的碱基的序列，优选的是，该反义链中，从5’末端侧向3’末端侧第1～19个碱基的序列为与靶基因的mRNA的连续19个碱基的序列互补的碱基的序列，或者第1～21个碱基的序列为与靶基因的mRNA的连续21个碱基的序列互补的碱基的序列，或者第1～25个碱基的序列为与靶基因的mRNA的连续25个碱基的序列互补的碱基的序列。
进而，本发明中使用的核酸为siRNA时，优选该核酸中的糖的10～70％、较优选15～60％、更优选20～50％为在2’位被修饰基团取代的核糖。本发明中的在核糖的2’位被修饰基团取代是指2’位的羟基被修饰基团取代，可以与核糖的2’位的羟基的构型相同或不同，优选与核糖的2’位的羟基的构型相同。在2’位被修饰基团取代的核糖被包含在糖部修饰核苷酸中的2’-修饰核苷酸中，在2’位被修饰基团取代的核糖的修饰基团与2’-修饰核苷酸的修饰基团含义相同。
本发明中使用的核酸中包括：核酸结构中的磷酸部、酯部等中含有的氧原子等例如被取代为硫原子等其他原子的衍生物。
另外，键合于反义链及有义链的5’末端的碱基的糖中，各个5’位的羟基可以被磷酸基或上述修饰基团、或者通过生物体内的核酸分解酶等转换为磷酸基或上述修饰基团的基团修饰。
另外，键合于反义链及有义链的3’末端的碱基的糖中，各个3’位的羟基可以被磷酸基或上述修饰基团、或者通过生物体内的核酸分解酶等转换为磷酸基或上述修饰基团的基团修饰。
作为单链的核酸，只要是包括包含靶基因的连续15～27个碱基、优选15～25个碱基、较优选15～23个碱基、更优选15～21个碱基、特别优选15～19个碱基的序列的互补序列的核酸、或者在该核酸中有1～3个碱基、优选1～2个碱基、较优选1个碱基被取代、缺失或添加，并且具有靶蛋白的表达抑制活性的核酸则可以为任意的核酸，优选使用该单链的核酸长度为15～30个碱基以下，优选15～29个碱基、较优选15～27个碱基、更优选15～25个碱基、特别优选15～23个碱基的单链核酸。
作为单链核酸，也可以使用将构成上述双链核酸的反义链及有义链经间隔序列(间隔寡核苷酸)连接得到的核酸。作为间隔寡核苷酸，优选6～12个碱基的单链核酸分子，优选其5’末端侧的序列为2个U。作为间隔寡核苷酸的例子，可以举出含有UUCAAGAGA序列的核酸。对于经由间隔寡核苷酸连接的反义链及有义链的顺序，任一方形成5’侧均可。作为该单链核酸，优选为通过茎环结构具有双链形成部的shRNA等单链核酸。shRNA等单链核酸通常为50～70个碱基长度。
可以使用通过核糖核酸酶等的作用，以生成上述单链核酸或者双链核酸的方式设计的、70个碱基长度以下，优选50个碱基长度以下，更优选30个碱基长度以下的核酸。
需要说明的是，本发明中使用的核酸可采用已知的RNA或DNA合成法、及RNA或DNA修饰法进行制造。
本发明的脂质纳米粒子是含有化合物(I)及化合物(II)的脂质纳米粒子，可举出例如含有下述复合体的脂质纳米粒子、由该复合体及将该复合体封入的脂质膜构成的脂质纳米粒子等，所述复合体是：化合物(I)及化合物(II)与核酸等的复合体；或化合物(I)及化合物(II)、和中性脂质及/或高分子组合而得的物质与核酸等的复合体。脂质膜可以是脂质单层膜(脂质单分子膜)，也可以是脂质双层膜(脂质双分子膜)。需要说明的是，该脂质膜中可以含有化合物(I)、化合物(II)、中性脂质及/或高分子。另外，该复合体及/或该脂质膜中还可以含有化合物(I)及化合物(II)以外的阳离子性脂质。
另外，作为本发明的脂质纳米粒子，还可举出例如由下述复合体和将该复合体封入的脂质膜构成、且在脂质膜中含有化合物(II)的脂质纳米粒子等，所述复合体是：化合物(I)与核酸等的复合体；或化合物(I)与中性脂质及/或高分子组合而成的物质与核酸等的复合体。此时的脂质膜可以是脂质单层膜(脂质单分子膜)，也可以是脂质双层膜(脂质双分子膜)。需要说明的是，该脂质膜还可以含有化合物(I)、中性脂质及/或高分子。另外，该复合体及/或该脂质膜中还可以含有化合物(I)及化合物(II)以外的阳离子性脂质。
另外，作为本发明的脂质纳米粒子，还可举出例如由下述复合体和将该复合体封入的脂质膜构成、且在脂质膜中含有化合物(I)的脂质纳米粒子等，所述复合体是：化合物(II)与核酸等的复合体；或化合物(II)与中性脂质及/或高分子组合而成的物质与核酸等的复合体。此时的脂质膜可以是脂质单层膜(脂质单分子膜)，也可以是脂质双层膜(脂质双分子膜)。需要说明的是，该脂质膜还可以含有化合物(II)、中性脂质及/或高分子。另外，该复合体及/或该脂质膜中还可以含有化合物(I)及化合物(II)以外的阳离子性脂质。
另外，作为本发明的脂质纳米粒子，还可举出例如由下述复合体和将该复合体封入的脂质膜构成、且在脂质膜中含有化合物(I)及化合物(II)的脂质纳米粒子等，所述复合体是：化合物(I)及化合物(II)以外的阳离子性脂质、与核酸等的复合体；或化合物(I)及化合物(II)以外的阳离子性脂质、与中性脂质及/或高分子组合而成的物质与核酸等的复合体。此时的脂质膜可以是脂质单层膜(脂质单分子膜)，也可以是脂质双层膜(脂质双分子膜)。需要说明的是，该脂质膜还可以含有化合物(I)及化合物(II)以外的阳离子性脂质、中性脂质及/或高分子。
本发明的脂质纳米粒子中，更优选的是下述这些：含有化合物(I)及化合物(II)与核酸等的复合体的脂质纳米粒子；由下述复合体及将该复合体封入的脂质膜构成、且在脂质膜中含有化合物(II)的脂质纳米粒子，所述复合体是化合物(I)、或化合物(I)及化合物(II)，与核酸等的复合体；以及，由下述复合体及将该复合体封入的脂质膜构成、且在脂质膜中含有化合物(I)及化合物(II)的脂质纳米粒子，所述复合体是化合物(I)、化合物(II)、化合物(I)及化合物(II)、或者化合物(I)及化合物(II)以外的阳离子性脂质，与核酸等的复合体；进一步优选为：含有化合物(I)及化合物(II)与核酸等的复合体的脂质纳米粒子；或由下述复合体及将该复合体封入的脂质膜构成、且在脂质膜中含有化合物(I)及化合物(II)的脂质纳米粒子，所述复合体是化合物(I)、或化合物(I)及化合物(II)，与核酸等的复合体；最优选为：由化合物(I)与核酸等的复合体、及将该复合体封入的脂质膜构成，且在脂质膜中含有化合物(I)及化合物(II)的脂质纳米粒子。需要说明的是，在该脂质膜中也可以含有中性脂质及/或高分子。另外，该复合体及/或该脂质膜中也可以含有化合物(I)及化合物(II)以外的阳离子性脂质。
作为复合体的形态，在任意情况下，均可举出核酸等与由脂质单层形成的膜(反胶束)的复合体、核酸等与脂质体的复合体、核酸等与胶束的复合体等，可优选举出核酸等与由脂质单层形成的膜的复合体、或核酸等与脂质体的复合体。
作为由复合体及将该复合体封入的脂质双层膜构成的脂质纳米粒子，可举出由该复合体及将该复合体封入的脂质双层膜构成的脂质体等。
需要说明的是，本发明的脂质纳米粒子可含有例如核酸作为药物，但也可还含有与核酸化学性质近似的化合物。
在任一情况下，本发明的脂质纳米粒子中，可使用化合物(I)及化合物(II)中的分别的一种或多种，另外，在化合物(I)及/或化合物(II)中，也可混合化合物(I)及化合物(II)以外的阳离子性脂质。
作为化合物(I)及化合物(II)以外的阳离子性脂质，可举出例如日本特开昭61-161246号公报(美国专利5049386号说明书)中公开的DOTMA、DOTAP等，国际公开第91/16024号及国际公开第97/019675号中公开的DORIE、DOSPA等，国际公开第2005/121348号中公开的DLinDMA等，国际公开第2009/086558号中公开的DLin-K-DMA等，可优选举出DOTMA、DOTAP、DORIE、DOSPA、DLinDMA、DLin-K-DMA等具有有2个非取代烷基的叔胺部位或有3个非取代烷基的季铵部位的阳离子性脂质，可更优选举出具有该叔胺部位的阳离子性脂质。该叔胺部位及该季铵部位的非取代烷基更优选为甲基。
本发明中的脂质纳米粒子可按照已知的制造方法或以此为基准制造，可以是采用任何制造方法制造的脂质纳米粒子。例如，在作为脂质纳米粒子之一的脂质体的制造中，可应用已知的脂质体的制备方法。作为已知的脂质体的制备方法，可举出例如Bangham等的脂质体制备法(参照“Journal of Molecular Biology(J.Mol.Biol.)”，1965年，第13卷，第238-252页)、乙醇注入法(参照“Journal of Cell Biology(J.Cell Biol.)”，1975年，第66卷，第621-634页)、法压法(参照“FEBS Letters(FEBS Lett.)”，1979年，第99卷，第210-214页)、冷冻熔化法(参照“Archives of Biochemistry and Biophysics(Arch.Biochem.Biophys.)”，1981年，第212卷，第186页-194页)、反相蒸发法(参照“Proceedings of the National Academy of Science UnitedStates of America(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)”，1978年，第75卷，第4194-4198页)或pH梯度法(参照例如日本专利第2572554号公报、日本专利第2659136号公报等)等。作为制造脂质体时将脂质体分散的溶液，可以使用例如水、酸、碱、各种缓冲液、生理盐溶液或者氨基酸输液等。另外，在制造脂质体时，还可以添加例如柠檬酸、抗坏血酸、半胱氨酸或者乙二胺四乙酸(EDTA)等抗氧化剂、例如甘油、葡萄糖或者氯化钠等等渗剂等。另外，也可以通过将脂质等溶解在例如乙醇等有机溶剂中、蒸馏除去溶剂后、添加生理盐水等、振荡搅拌、形成脂质体，由此来制造脂质体。
另外，本发明的脂质纳米粒子例如可通过如下方法等方法制造：将化合物(I)及化合物(II)，或化合物(I)及化合物(II)与化合物(I)及化合物(II)以外的阳离子性脂质的混合物预先溶解在氯仿中，接着，加入核酸等的水溶液和甲醇并进行混合，形成阳离子性脂质/核酸等的复合体，进而提取出氯仿层，向其中加入聚乙二醇化磷脂、中性脂质和水，形成油包水型(W/O)乳液，利用反相蒸发法进行处理，由此制造(参照日本特表2002-508765号公报)；将核酸等溶解在酸性的电解质水溶液中，加入脂质(乙醇中)，将乙醇浓度降低至20v/v％，制备内含上述核酸等的脂质纳米粒子，进行尺寸过滤(sizingfiltration)，通过透析除去过量的乙醇后，进一步提高试样的pH，透析除去附着在脂质纳米粒子表面的核酸等，由此制造(参照日本特表2002-501511号公报及“Biochimica et Biophysica Acta”，参照2001年，第1510卷，第152-166页)等。
本发明的脂质纳米粒子中，由下述复合体及将该复合体封入的脂质双层膜构成的脂质体例如可按照国际公开第02/28367号及国际公开第2006/080118号等中记载的制造方法制造，所述复合体是：化合物(I)及化合物(II)与核酸等的复合体，或者，化合物(I)及化合物(II)、和中性脂质及/或高分子组合而得的物质与核酸等的复合体。
另外，本发明的脂质纳米粒子中的下述脂质纳米粒子可如下获得：按照国际公开第02/28367号及国际公开第2006/080118号等中记载的制造方法，制造分别的复合体，不使该复合体溶解地使该复合体分散在水或0～20％乙醇水溶液中(A液)，另外，将分别的脂质膜成分溶解在乙醇水溶液中(B液)，将等量的A液和B液混合，进而适当地加入水，由此得到；所述脂质纳米粒子是下述脂质纳米粒子等：由下述复合体和将该复合体封入的脂质膜构成、且在脂质膜中含有化合物(I)、化合物(II)、及/或化合物(I)及化合物(II)以外的阳离子性脂质的脂质纳米粒子，所述复合体是化合物(I)及化合物(II)与核酸等的复合体，或者，化合物(I)及化合物(II)、与中性脂质及/或高分子组合而得的物质与核酸等的复合体；由下述复合体及将该复合体封入的脂质膜构成、且在脂质膜中含有化合物(II)、或化合物(I)及化合物(II)的脂质纳米粒子，所述复合体是化合物(I)与核酸等的复合体，或化合物(I)、与中性脂质及/或高分子组合而得的物质与核酸等的复合体；由下述复合体及将该复合体封入的脂质膜构成、且在脂质膜中含有化合物(I)、或化合物(I)及化合物(II)的脂质纳米粒子，所述复合体是化合物(II)与核酸等的复合体，或化合物(II)、与中性脂质及/或高分子组合而得的物质与核酸等的复合体；以及，由下述复合体及将该复合体封入的脂质膜构成、且在脂质膜中含有化合物(I)及化合物(II)的脂质纳米粒子，所述复合体是化合物(I)及化合物(II)以外的阳离子性脂质、与核酸等的复合体，或化合物(I)及化合物(II)以外的阳离子性脂质、与中性脂质及/或高分子组合而得的物质与核酸等的复合体。需要说明的是，关于A液及B液中的化合物(I)、化合物(II)、以及化合物(I)及化合物(II)以外的阳离子性脂质，可使用一种或更多种，也可将各种组合并混合来使用。
需要说明的是，在本发明中，在下述脂质纳米粒子的制造期间及制造后，由于复合体中的核酸等与脂质膜中的阳离子性脂质的静电相互作用、复合体中的阳离子性脂质与脂质膜中的阳离子性脂质的融合，复合体及膜的结构发生位移而得到的脂质纳米粒子，也包含在下述的各脂质纳米粒子中，所述脂质纳米粒子是下述脂质纳米粒子等：由下述复合体和将该复合体封入的脂质膜构成、且在脂质膜中含有化合物(I)、化合物(II)、及/或化合物(I)及化合物(II)以外的阳离子性脂质的脂质纳米粒子，所述复合体是，化合物(I)及化合物(II)、与核酸等的复合体，或者，化合物(I)及化合物(II)、与中性脂质及/或高分子组合而得的物质与核酸等的复合体；由下述复合体及将该复合体封入的脂质膜构成、且在脂质膜中含有化合物(II)、或化合物(I)及化合物(II)的脂质纳米粒子，所述复合体是，化合物(I)、与核酸等的复合体，或化合物(I)、与中性脂质及/或高分子组合而得的物质与核酸等的复合体；由下述复合体及将该复合体封入的脂质膜构成、且在脂质膜中含有化合物(I)、或化合物(I)及化合物(II)的脂质纳米粒子，所述复合体是，化合物(II)、与核酸等的复合体，或化合物(II)、与中性脂质及/或高分子组合而得的物质与核酸等的复合体；以及，由下述复合体及将该复合体封入的脂质膜构成、且在脂质膜中含有化合物(I)及化合物(II)的脂质纳米粒子，所述复合体是，化合物(I)及化合物(II)以外的阳离子性脂质、与核酸等的复合体，或化合物(I)及化合物(II)以外的阳离子性脂质、与中性脂质及/或高分子组合而得的物质与核酸等的复合体。
在任一情况下，均更优选在脂质膜中混合使用化合物(I)和化合物(II)。即，更优选下述脂质纳米粒子：由下述复合体及将该复合体封入的脂质膜构成、且在脂质膜中含有化合物(I)、化合物(II)、及/或化合物(I)及化合物(II)以外的阳离子性脂质的脂质纳米粒子，所述复合体是，化合物(I)及化合物(II)、与核酸等的复合体，或化合物(I)及化合物(II)、与中性脂质及/或高分子组合而得的物质与核酸等的复合体；由下述复合体及将该复合体封入的脂质膜构成、且在脂质膜中含有化合物(I)及化合物(II)的脂质纳米粒子，所述复合体是，化合物(I)、与核酸等的复合体，或化合物(I)、与中性脂质及/或高分子组合而得的物质与核酸等的复合体；由下述复合体及将该复合体封入的脂质膜构成、且在脂质膜中含有化合物(I)及化合物(II)的脂质纳米粒子，所述复合体是，化合物(II)、与核酸等的复合体，或化合物(II)、与中性脂质及/或高分子组合而得的物质与核酸等的复合体；以及，由下述复合体及将该复合体封入的脂质膜构成、且在脂质膜中含有化合物(I)及化合物(II)的脂质纳米粒子，所述复合体是，化合物(I)及化合物(II)以外的阳离子性脂质、与核酸等的复合体，或化合物(I)及化合物(II)以外的阳离子性脂质、与中性脂质及/或高分子组合而得的物质，与核酸等的复合体；进一步优选下述脂质纳米粒子：由下述复合体及将该复合体封入的脂质膜构成、且在脂质膜中含有化合物(I)、化合物(II)、及/或化合物(I)及化合物(II)以外的阳离子性脂质的脂质纳米粒子，所述复合体是，化合物(I)及化合物(II)、与核酸等的复合体，或化合物(I)及化合物(II)、与中性脂质及/或高分子组合而得的物质与核酸等的复合体；由下述复合体及将该复合体封入的脂质膜构成、且在脂质膜中含有化合物(I)及化合物(II)的脂质纳米粒子，所述复合体是，化合物(I)、与核酸等的复合体，化合物(I)、与中性脂质及/或高分子组合而成的物质与核酸等的复合体，最优选下述脂质纳米粒子：由下述复合体及将该复合体封入的脂质膜构成、且在脂质膜中含有化合物(I)及化合物(II)的脂质纳米粒子，所述复合体是化合物(I)与核酸等的复合体，或化合物(I)及化合物(II)与核酸等的复合体。
在本发明的含有核酸的脂质纳米粒子中，复合体中的化合物(I)的分子的总数相对于核酸的磷原子数而言优选为0.5～8倍，更优选为1.5～5倍，进一步优选为2～3倍。另外，该复合体中的化合物(I)及化合物(I)以外的阳离子性脂质的分子的总数相对于该核酸的磷原子数而言优选为0.5～8倍，更优选为1.5～5倍，进一步优选为2～3倍。
在本发明的含有核酸的脂质纳米粒子中，由复合体及将该复合体封入的脂质膜构成的脂质纳米粒子中的化合物(I)的分子的总数相对于该核酸的磷原子数而言优选为1～15倍，更优选为2.5～10倍，进一步优选为3.5～8倍。另外，该脂质纳米粒子中的化合物(I)及化合物(I)以外的阳离子性脂质的分子的总数相对于该核酸的磷原子数而言优选为1～15倍，更优选为2.5～10倍，进一步优选为3.5～8倍。
按照国际公开第02/28367号及国际公开第2006/080118号等中记载的制造方法，制造核酸(与上述含义相同)(优选双链核酸)与含有任意的阳离子性脂质(优选化合物(I)及/或本发明中的化合物(I)以外的阳离子性脂质)的脂质体的复合体，不使该复合体溶解地将该复合体分散在水或0～20％乙醇水溶液中(A液)，另外，将任意的阳离子性脂质(优选化合物(I)及/或本发明中的化合物(I)以外的阳离子性脂质)溶解在乙醇水溶液中(B液)，混合等量或体积比1:1的A液和B液，或者，进一步适当地加入水，得到含有该核酸和该阳离子性脂质的脂质纳米粒子。该脂质纳米粒子优选为含有阳离子性脂质与核酸的复合体、及将该复合体封入的脂质膜的脂质纳米粒子，更优选为含有下述复合体及将该复合体封入的脂质膜的脂质纳米粒子，所述复合体为该核酸与由含有该阳离子性脂质的脂质单层形成的膜(反胶束)的复合体。上述情况下的脂质膜可以是脂质单层膜(脂质单分子膜)，也可以是脂质双层膜(脂质双分子膜)。
另外，本发明中公开的该核酸与该脂质体的复合体中的脂质体优选为预先将大小调节为平均粒径10nm～400nm、更优选30nm～110nm、进一步优选40nm～80nm的脂质体。另外，在该复合体及/或脂质膜中还可以含有中性脂质及/或高分子。另外，A液只要是能形成脂质体与该核酸的复合体即可，乙醇浓度可以为20～40％。
另外，也可以不混合等量的A液与B液，而是以下述A液和B液之比来混合A液和B液，所述A液和B液之比使得：将A液和B液混合后而得的乙醇水溶液的乙醇浓度使得复合体不溶解、并且B液中的阳离子性脂质不溶解，优选地，使得复合体不溶解、B液中的阳离子性脂质溶解、并且乙醇浓度为30～60％；或者，也可以以下述方式来来进行：以使得将A液和B液混合后得到的乙醇浓度使得复合体不溶解的A液和B液的比将A液和B液混合，进而通过加入水，从而成为B液中的阳离子性脂质变得不溶解的乙醇浓度。
本发明中公开的该A液中的核酸与脂质体的复合体，在将A液和B液混合，进而适当地加入水后，形态发生变化，成为由含有阳离子性脂质的脂质单层形成的膜(反胶束)与核酸的复合体。利用本发明中公开的制造方法得到的含有该核酸与该阳离子性脂质的脂质纳米粒子优选为含有阳离子性脂质与核酸的复合体及将该复合体封入的脂质膜的脂质纳米粒子，更优选为包含由含有阳离子性脂质的脂质单层形成的膜(反胶束)与核酸的复合体及将该复合体封入的脂质膜、且在该脂质膜中含有阳离子性脂质的脂质纳米粒子，其制造性(收率及/或均匀性)优异。
该A液中的核酸与脂质体的复合体中，复合体中的阳离子性脂质的分子的总数相对于核酸的磷原子数而言优选为0.5～8倍，更优选为1.5～5倍，进一步优选为2～3倍。
在将A液与B液混合后的、含有该核酸与由含有该阳离子性脂质的脂质单层形成的膜(反胶束)的复合体及将该复合体封入的脂质膜的脂质纳米粒子中，该复合体及将该复合体封入的脂质膜中的阳离子性脂质的分子的总数相对于该核酸的磷原子数而言优选为1～15倍，更优选为2.5～10倍，进一步优选为3.5～8倍。
作为中性脂质，可以为单纯脂质、复合脂质或者衍生脂质中的任一种，例如可以举出磷脂(phospholipid)、甘油糖脂(glyceroglycolipid)、鞘糖脂(sphingoglycolipid)、鞘氨基醇(sphingoid)或者甾醇(sterol)等，但不限于此。
本发明的脂质纳米粒子中含有中性脂质时，相对于化合物(I)及化合物(II)、以及化合物(I)及化合物(II)以外的阳离子性脂质的分子的总数而言，中性脂质的分子的总数优选为0.1～1.8倍，更优选为0.3～1.2倍，进一步优选为0.4～0.9倍。本发明中的脂质纳米粒子可以在复合体中含有中性脂质，也可以在将该复合体封入的脂质膜中含有中性脂质，更优选至少在将该复合体封入的脂质膜中含有中性脂质，进一步优选在该复合体及该将该复合体封入的脂质膜中均含有中性脂质。
作为中性脂质中的磷脂，可以举出例如磷脂酰胆碱(phosphatidylcholine)(具体而言，大豆磷脂酰胆碱(soybeanphosphatidylcholine)、蛋黄磷脂酰胆碱(egg yolk phosphatidylcholine)(EPC)、二硬脂酰磷脂酰胆碱(distearoyl phosphatidylcholine)(DSPC)、二棕榈酰磷脂酰胆碱(dipalmitoyl phosphatidylcholine)(DPPC)、棕榈酰油酰磷脂酰胆碱(palmitoyloleoylphosphatidylcholine)(POPC)、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱(dimyristoylphosphatidylcholine)(DMPC)、二油酰磷脂酰胆碱(dioleoylphosphatidylcholine)(DOPC)等)、磷脂酰乙醇胺(phosphatidylethanolamine)(具体而言，二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(distearoyl phosphatidylethanolamine)(DSPE)、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺(dipalmitoyl phosphatidylethanolamine)(DPPE)、二油酰磷脂酰乙醇胺(dioleoyl phosphatidylethanolamine)(DOPE)、二肉豆蔻酰磷酸乙醇胺(dimyristoyl phosphoethanolamine)(DMPE)、16-0-单甲基PE(16-0-monomethyl PE)、16-0-二甲基PE(16-0-dimethyl PE)、18-1-反式PE(18-1-trans PE)、棕榈酰油酰-磷脂酰乙醇胺(palmitoyloleoyl-phosphatidylethanolamine)(POPE)、1-硬酯酰-2-油酰-磷脂酰乙醇胺(1-stearoyl-2-oleoyl-phosphatidylethanolamine)(SOPE)等)、甘油磷脂(glycerophospholipid)(具体而言，磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine)、磷脂酸(phosphatidic acid)、磷脂酰甘油(phosphatidylglycerol)、磷脂酰肌醇(phosphatidylinositol)、棕榈酰油酰磷脂酰甘油(palmitoyloleoyl phosphatidylglycerol)(POPG)、溶血磷脂酰胆碱(lysophosphatidylcholine)等)、神经鞘氨醇磷脂(sphingophospholipid)(具体而言，神经鞘磷脂(sphingomyelin)、磷酸乙醇胺神经酰胺(ceramidephosphoethanolamine)、神经酰胺磷酸甘油(ceramidephosphoglycerol)、磷酸甘油磷酸神经酰胺(ceramidephosphoglycerophosphate)等)、甘油磷酸脂(glycerophosphonolipid)、神经鞘磷酸脂(sphingophosphonolipid)、天然卵磷脂(natural lecithin)(具体而言蛋黄卵磷脂(egg yolk lecithin)、大豆卵磷脂(soybeanlecithin)等)或者氢化磷脂(hydrogenated phospholipid)(具体而言氢化大豆磷脂酰胆碱(hydrogenated soybean phosphatidylcholine)等)等天然或者合成的磷脂。
作为中性脂质中的甘油糖脂，可以举出例如硫氧基核糖基甘油酯(sulfoxyribosyl glyceride)、二糖基甘油二酯(diglycosyl diglyceride)、二半乳糖甘油二酯(digalactosyl diglyceride)、半乳糖甘油二酯(galactosyl diglyceride)或者糖基甘油二酯(glycosyl diglyceride)等。
作为中性脂质中的鞘糖脂，可以举出例如半乳糖基脑苷脂(galactosyl cerebroside)、乳糖脑苷脂(lactosyl cerebroside)或者神经节苷脂(ganglioside)等。
作为中性脂质中的鞘氨基醇，可以举出例如鞘氨糖(sphingan)、二十鞘氨糖(icosasphingan)、鞘氨醇(sphingosine)或者它们的衍生物等。作为衍生物，可以举出将例如鞘氨糖、二十鞘氨糖或者鞘氨醇等的-NH2转化为-NHCO(CH2)xCH3(式中，x为0～18的整数，其中优选6、12或者18)的产物等。
作为中性脂质中的甾醇，可以举出例如胆固醇(cholesterol)、二氢胆甾醇(dihydrocholesterol)、羊毛甾醇(lanosterol)、β-谷甾醇(β-sitosterol)、菜油甾醇(campesterol)、豆甾醇(stigmasterol)、菜子甾醇(brassicasterol)、麦角钙化甾醇(ergocasterol)、岩藻甾醇(fucosterol)或者3β-[N-(N’,N’-二甲基氨基乙基)氨基甲酰基]胆固醇(3β-[N-(N’,N’-dimethylaminoethyl)carbamoyl]cholesterol)(DC-Chol)等。
作为高分子，可以举出包含例如蛋白质、白蛋白(albumin)、葡聚糖(dextran)、polyfect、脱乙酰壳多糖(chitosan)、硫酸葡聚糖(dextran sulfate)、例如聚-L-赖氨酸、聚乙烯亚胺、聚天冬氨酸、苯乙烯马来酸共聚物、异丙基丙烯酰胺(isopropylacrylamide)-丙烯基吡咯烷酮(acrylpyrrolidone)共聚物、聚乙二醇修饰树状聚体(dendrimer)、聚乳酸、聚乳酸聚乙醇酸或者聚乙二醇化聚乳酸等高分子或者它们的盐的1种以上的胶束。
此处，高分子中的盐，包括例如金属盐、铵盐、酸加成盐、有机胺加成盐、氨基酸加成盐等。作为金属盐，可以举出例如锂盐、钠盐、钾盐等碱金属盐，镁盐、钙盐等碱土金属盐，铝盐或者锌盐等。作为铵盐，可以举出例如铵或者四甲基铵等盐。作为酸加成盐，可以举出例如盐酸盐、硫酸盐、硝酸盐或者磷酸盐等无机酸盐，及乙酸盐、马来酸盐、富马酸盐或者柠檬酸盐等有机酸盐。作为有机胺加成盐，可以举出例如吗啉或者哌啶等的加成盐。作为氨基酸加成盐，可以举出例如甘氨酸、苯丙氨酸、天冬氨酸、谷氨酸或者赖氨酸等的加成盐。
另外，本发明中的脂质纳米粒子无论哪种均可以含有例如选自糖、肽、核酸及水溶性高分子中的1种以上的物质的脂质衍生物或脂肪酸衍生物或者表面活性剂等。所述选自糖、肽、核酸及水溶性高分子中的1种以上的物质的脂质衍生物或脂肪酸衍生物或者表面活性剂可以包含在复合体中，也可以包含在封入复合体的脂质膜中，更优选在复合体中和封入该复合体的脂质膜中均含有。
本发明的脂质纳米粒子含有选自糖、肽、核酸及水溶性高分子中的一种以上的物质的脂质衍生物或脂肪酸衍生物时，选自糖、肽、核酸及水溶性高分子中的一种以上的物质的脂质衍生物及脂肪酸衍生物的分子的总数相对于化合物(I)、化合物(I)及化合物(I)以外的阳离子性脂质的分子的总数优选为0.05～0.3倍，更优选为0.07～0.25倍，进一步优选为0.1～0.2倍。
作为选自糖、肽、核酸及水溶性高分子中的1种以上的物质的脂质衍生物或脂肪酸衍生物或者表面活性剂，优选可举出糖脂、或者水溶性高分子的脂质衍生物或脂肪酸衍生物，更优选可举出水溶性高分子的脂质衍生物或者脂肪酸衍生物。选自糖、肽、核酸及水溶性高分子中的1种以上的物质的脂质衍生物或脂肪酸衍生物或者表面活性剂优选为下述具有两面性的物质，所述物质具有分子的一部分与脂质纳米粒子的其他构成成分通过例如疏水性亲和力、静电相互作用等结合的性质，并且具有其他部分与制造脂质纳米粒子时的溶剂通过例如亲水性亲和力、静电相互作用等结合的性质。
作为糖、肽或者核酸的脂质衍生物或者脂肪酸衍生物，可以举出例如蔗糖、山梨糖醇、乳糖等糖，例如来自酪蛋白的肽、来自蛋清的肽、来自大豆的肽、谷胱甘肽等肽，或者例如DNA、RNA、质粒、siRNA、ODN等核酸，与上述脂质纳米粒子的定义中举出的中性脂质或本发明的阳离子性脂质或者例如硬脂酸、棕榈酸、肉豆蔻酸、月桂酸等脂肪酸键合形成的产物等。
另外，作为糖的脂质衍生物或者脂肪酸衍生物，还包括例如上述脂质纳米粒子的定义中举出的甘油糖脂或者鞘糖脂等。
作为水溶性高分子的脂质衍生物或者脂肪酸衍生物，可以举出例如聚乙二醇、聚甘油、聚乙烯亚胺、聚乙烯醇、聚丙烯酸、聚丙烯酰胺、寡糖、糊精、水溶性纤维素、葡聚糖、硫酸软骨素、聚甘油、脱乙酰壳多糖、聚乙烯吡咯烷酮、聚天冬酰胺、聚-L-赖氨酸、甘露聚糖、普鲁兰多糖(pullulan)、寡甘油(oligoglycerol)等或者它们的衍生物、与上述脂质纳米粒子的定义中举出的中性脂质或本发明的阳离子性脂质、或者例如硬脂酸、棕榈酸、肉豆蔻酸或者月桂酸等脂肪酸键合形成的产物、它们的盐等，较优选举出聚乙二醇衍生物、聚甘油衍生物等的脂质衍生物或者脂肪酸衍生物，更优选举出聚乙二醇衍生物的脂质衍生物或者脂肪酸衍生物及它们的盐。
作为聚乙二醇衍生物的脂质衍生物或者脂肪酸衍生物，可以举出例如聚乙二醇化脂质(具体而言聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺(更具体而言1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-[甲氧基(聚乙二醇)-2000](PEG-DSPE)、1,2-二肉豆蔻酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-[甲氧基(聚乙二醇)-2000](PEG-DMPE)等)、聚氧乙烯氢化蓖麻油60、聚氧乙烯蓖麻油(CREMOPHOR EL)等)、聚乙二醇山梨糖醇酐脂肪酸酯类(具体而言聚氧乙烯山梨醇酐单油酸酯等)或者聚乙二醇脂肪酸酯类等，较优选举出聚乙二醇化脂质。
作为聚甘油衍生物的脂质衍生物或者脂肪酸衍生物，可以举出例如聚甘油化脂质(具体而言聚甘油-磷脂酰乙醇胺等)或者聚甘油脂肪酸酯类等，较优选举出聚甘油化脂质。
作为表面活性剂，可以举出例如聚氧乙烯山梨糖醇酐单油酸酯(具体而言聚山梨醇酯80(polysorbate 80)等)、聚氧乙烯聚氧丙烯二醇(具体而言普朗尼克(Pluronic)F68等)、山梨糖醇酐脂肪酸酯(具体而言山梨糖醇酐单月桂酸酯、山梨糖醇酐单油酸酯等)、聚氧乙烯衍生物(具体而言聚氧乙烯氢化蓖麻油60、聚氧乙烯月桂醇等)、丙三醇脂肪酸酯或者聚乙二醇烷基醚等，优选举出聚氧乙烯聚氧丙烯二醇、甘油脂肪酸酯或者聚乙二醇烷基醚等。
另外，还可以任选地对本发明的脂质纳米粒子进行基于例如高分子、聚氧乙烯衍生物等的表面改性(参照D.D.Lasic、F.Martin编，“Stealth Liposomes”(美国)，CRC Press Inc，1995年，第93-102页)。作为可以用于表面改性的高分子，可以举出例如葡聚糖、普鲁兰多糖、甘露聚糖、支链淀粉或者羟乙基淀粉等。作为聚氧乙烯衍生物，可以举出例如聚山梨醇酯80、普朗尼克F68、聚氧乙烯氢化蓖麻油60、聚氧乙烯月桂醇或者PEG-DSPE等。通过该表面改性，可以在本发明的脂质纳米粒子、脂质纳米粒子中的复合体及脂质膜中含有选自糖、肽、核酸及水溶性高分子中的一种以上的物质的脂质衍生物或脂肪酸衍生物、或表面活性剂。
另外，也可以任选地通过将经靶向化的配体以共价键键合于本发明的脂质纳米粒子的脂质成分的极性首残基而将该经靶向化的配体直接键合于本发明的脂质纳米粒子的表面(参照国际公开第2006/116107号)。
本发明中的脂质纳米粒子的平均粒径可以根据需要自由选择，优选形成为下述粒径。作为调节平均粒径的方法，可以举出例如挤出法(extrusion method)、将较大的多层脂质体(MLV)等机械粉碎(具体而言使用Manton-gaulin、高压微射流均质机(microfluidizer)等)的方法(参照R.H.Muller、S.Benita、B.Bohm编著，“Emulsion andNanosuspensions for the Formulation of Poorly Soluble Drugs”，德国，Scientific Publishers Stuttgart，1998年，第267-294页)等。
对于本发明中的脂质纳米粒子的大小而言，平均粒径优选为约10nm～1000nm，更优选为约30nm～300nm，进一步优选为约50nm～200nm。
通过将本发明的脂质纳米粒子给予至哺乳类动物的细胞，可将本发明的脂质纳米粒子中的核酸等导入到细胞内。
在体外将本发明的脂质纳米粒子给予至哺乳类动物的细胞的方法，按照能在体外进行的已知的转染步骤进行即可。
在体内将本发明的脂质纳米粒子给予至哺乳类动物的细胞的方法按照能在体内进行的已知的转染步骤进行即可。例如，通过将本发明的脂质纳米粒子静脉内给予至包括人在内的哺乳动物，能够将所述脂质纳米粒子送达至例如产生癌或者炎症的脏器或者部位，从而将本发明脂质纳米粒子中的核酸等导入到送达脏器或者部位的细胞内。作为产生癌或者炎症的脏器或者部位，没有特别限定，可以举出例如胃、大肠、肝脏、肺、脾脏、胰腺、肾脏、膀胱、皮肤、血管、眼球等。另外，通过将本发明的脂质纳米粒子静脉内给予至包括人在内的哺乳动物，能够将所述脂质纳米粒子送达至例如血管、肝脏、肺、脾脏及/或肾脏，从而将本发明的脂质纳米粒子中的核酸导入到送达脏器或者部位的细胞内。肝脏、肺、脾脏及/或肾脏的细胞可以为正常细胞、与癌或炎症相关的细胞或者与其他疾病相关的细胞中的任何。
本发明的脂质纳米粒子中的核酸等只要是具有利用了RNA干扰(RNAi)的靶基因表达抑制作用的核酸，则能够在体内将抑制基因表达的核酸等导入到哺乳类动物的细胞内，能够抑制基因等的表达。给予对象优选为人。
另外，本发明的脂质纳米粒子的靶基因只要是例如与肿瘤或者炎症相关的基因，则能够将本发明的脂质纳米粒子用作癌或者炎症疾病的治疗剂或者预防剂，优选用作实体癌或者血管或血管附近的炎症的治疗剂或者预防剂。具体而言，本发明脂质纳米粒子的靶基因只要是与血管新生相关的基因等，则能够抑制血管平滑肌的增殖或血管新生等，因此能够将本发明的脂质纳米粒子用作例如伴随有血管平滑肌的增殖或血管新生的癌或者炎症疾病的治疗剂或者预防剂。当将本发明的阳离子性脂质多种组合使用时，或与本发明的阳离子性脂质以外的阳离子性脂质组合使用时，与单独使用各阳离子性脂质的情况相比而言能够减量使用本发明的阳离子性脂质，因此，能够降低因阳离子性脂质而导致的不理想情况的发生率或发生程度。
即，本发明还提供将上述说明的本发明的脂质纳米粒子给予至哺乳动物的、癌或者炎症疾病的治疗方法。给予对象优选为人，更优选罹患癌或者炎症疾病的人。
另外，也可将本发明的脂质纳米粒子用作在与癌或炎症疾病的治疗剂或预防剂有关的体内的药效评价模型中用于验证抑制靶基因的作用的有效性的工具。
本发明的脂质纳米粒子还可以用作目的在于下述这些的制剂：将例如血液成分等生物体成分(例如血液、消化管等)中的上述核酸等的稳定化、降低副作用、或者增大在包括靶基因的表达部位的组织或者脏器中的药物蓄积性等。
将本发明的脂质纳米粒子用作作为药品的癌或者炎症疾病等的治疗剂或者预防剂时，作为给予途径，优选使用在治疗时最有效的给予途径，可以举出口腔内、气管内、直肠内、皮下、肌肉内或者静脉内等非口服给予或者口服给予，可以优选举出静脉内给予或者肌肉内给予，较优选举出静脉内给予。
给予量根据给予对象的病情、年龄、或给予途径等的不同而不同，例如可以以换算为核酸的1天给予量约为0.1μg～1000mg的量给予。
作为适合于静脉内给予或者肌肉内给予的制剂，可以举出例如注射剂，通过上述方法制备的脂质纳米粒子的分散液可以直接以例如注射剂等的形态使用，还可以从该分散液中通过例如过滤、离心分离等除去溶剂进行使用，还可以将该分散液冷冻干燥进行使用、及/或将加入了例如甘露糖醇、乳糖、海藻糖、麦芽糖或甘氨酸等赋形剂的分散液冷冻干燥进行使用。
在注射剂的情况下，优选在上述的脂质纳米粒子的分散液、或将上述溶剂除去或进行冷冻干燥而得到的脂质纳米粒子中，混合例如水、酸、碱、各种缓冲液、生理盐水或氨基酸输液等，配制成注射剂。另外，还可以添加例如柠檬酸、抗坏血酸、半胱氨酸或EDTA等抗氧化剂，或甘油、葡萄糖或氯化钠等等渗剂等，配制成注射剂。另外，还可以加入例如甘油等冷冻保存剂进行冷冻保存。
接下来，利用实施例及试验例具体地说明本发明。但本发明不受这些实施例及试验例的限制。
需要说明的是，参考例中所示的质子核磁共振谱(1H NMR)是在270MHz、300MHz或400MHz下测得的。根据化合物及测定条件不同，有时不能清楚地观测到交换性质子。需要说明的是，作为信号的多重度的符号，使用通常使用的符号，br表示是表观宽信号。
参考例1
甲基二((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基)胺(化合物1)
向甲基胺(Aldrich公司制，约2mol/L的四氢呋喃溶液，10.5mL，21.0mmol)中加入甲磺酸(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基酯(Nu-ChekPrep,Inc.制，1.03g，3.00mmol)，使用微波反应装置在150℃下进行90分钟加热搅拌。用乙酸乙酯稀释反应液，用2mol/L氢氧化钠水溶液洗涤，接着用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸镁干燥后过滤，在减压下进行浓缩，由此得到甲基((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基)胺的粗产物。
向得到的粗产物中加入甲磺酸(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基酯(Nu-Chek Prep,Inc公司制，0.93g，2.70mmol)及50％氢氧化钠水溶液(0.960g，12.0mmol)，在油浴上在135℃进行60分钟加热搅拌。冷却至室温后，用乙酸乙酯稀释反应液，用水洗涤，接着用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸镁干燥后过滤，在减压下进行浓缩。通过硅胶柱色谱法(氯仿/甲醇＝100/0～97/3)纯化得到的残渣，得到化合物1(1.07g，67.2％)。
ESI-MS m/z:529(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.89(t,J＝6.7Hz,6H),1.29(br s,32H),1.40-1.51(m,4H),1.97-2.06(m,8H),2.20(s,3H),2.30(t,J＝7.6Hz,4H),2.77(t,J＝5.8Hz,4H),5.28-5.43(m,8H)。
参考例2
甲基二((Z)-十六碳-9-烯基)胺(化合物2)
利用与参考例1同样的方法，使用甲基胺(Aldrich公司制，约2mol/L四氢呋喃溶液，10.0mL，20.0mmol)及甲磺酸(Z)-十六碳-9-烯基酯(Nu-Chek Prep,Inc公司制，1.21g，3.80mmol)，得到了化合物2(0.491g，51.6％)。
ESI-MS m/z:477(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.88(t,J＝6.7Hz,6H),1.29(br s,36H),1.46-1.57(m,4H),1.97-2.05(m,8H),2.33(s,3H),2.45(t,J＝7.9Hz,4H),5.29-5.41(m,4H)。
参考例3
甲基二((11Z,14Z)-二十碳-11,14-二烯基)胺(化合物3)
利用与参考例1同样的方法，使用甲基胺(Aldrich公司制，约2mol/L四氢呋喃溶液，16.0mL，32.0mmol)及甲磺酸(11Z,14Z)-二十碳-11,14-二烯基酯(Nu-Chek Prep，Inc公司制，2.98g，8.00mmol)，得到了化合物3(1.27g,54.4％)。
ESI-MS m/z:585(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.89(t,J＝6.7Hz,6H),1.27(br s,40H),1.39-1.51(m,4H),2.01-2.09(m,8H),2.20(s,3H),2.30(t,J＝7.6Hz,4H),2.79(d,J＝6.3Hz,4H),5.28-5.43(m,8H)。
参考例4
二((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基)胺(化合物4)
利用与参考例1同样的方法，使用氨(东京化成工业公司制，约2mol/L甲醇溶液，18.0mL，36.0mmol)及甲磺酸(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基酯(Nu-Chek Prep,Inc公司制，2.79g，8.10mmol)，得到了化合物4(0.838g，36.2％)。
ESI-MS m/z:515(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.89(t,J＝6.9Hz,6H),1.30(br s,33H),1.41-1.54(m,4H),2.01-2.09(m,8H),2.59(t,J＝7.2Hz,4H),2.77(t,J＝5.6Hz,4H),5.28-5.43(m,8H)。
参考例5
二((Z)-十八碳-9-烯基)胺(化合物5)
利用与参考例1同样的方法，使用氨(东京化成工业公司制，约2mol/L甲醇溶液，12.0mL，24.0mmol)及甲磺酸(Z)-十八碳-9-烯基酯(Nu-Chek Prep,Inc公司制，1.87g，5.40mmol)，得到了化合物5(0.562g，36.2％)。
ESI-MS m/z:519(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.88(t,J＝6.7Hz,6H),1.29(br s,45H),1.41-1.52(m,4H),1.97-2.05(m,8H),2.58(t,J＝7.2Hz,4H),5.28-5.40(m,4H)。
参考例6
甲基二((Z)-十八碳-9-烯基)胺(化合物6)
利用与参考例1同样的方法，使用甲基胺(Aldrich公司制，约2mol/L四氢呋喃溶液，11.2mL，22.4mmol)及甲磺酸(Z)-十八碳-9-烯基酯(Nu-Chek Prep,Inc公司制，2.11g，6.09mmol)，得到了化合物6(1.20g，70.2％)。
ESI-MS m/z:533(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.88(t,J＝6.6Hz,6H),1.27(br s,44H),1.39-1.50(m,4H),1.97-2.06(m,8H),2.20(s,3H),2.30(t,J＝7.6Hz,4H),5.28-5.40(m,4H)。
参考例7反式-1-(叔丁氧基羰基)-3,4-双(((Z)-十八碳-9-烯酰基氧 基)甲基)吡咯烷(化合物145)
将参考国际公开第2006/100036号合成出的反式-3,4-双(羟基甲基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(156mg，0.674mmol)溶解在二氯甲烷(6mL)中，加入油酸(东京化成工业公司制，419mg，1.48mmol)、WSCD(国产化学公司制，297mg，1.55mmol)、4-二甲基氨基吡啶(东京化成工业公司制，DMAP(20.6mg，0.169mmol)，在室温下搅拌一夜。向反应液中加入饱和碳酸氢钠水溶液，用乙酸乙酯进行萃取。用水及饱和食盐水洗涤有机层，用无水硫酸镁干燥，然后在减压下进行浓缩。通过硅胶柱色谱法(己烷/氯仿＝50/50～0/100)纯化残渣，由此得到了化合物145(280mg，54.6％)。
ESI-MS m/z:761(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.88(t,J＝6.6Hz,6H),1.25-1.46(m,36H),1.46(s,9H),1.46-1.66(m,8H),1.97-2.04(m,8H),2.27-2.38(m,6H),3.10-3.23(m,2H),3.53-3.66(m,2H),4.03(dd,J＝10.8,6.0Hz,2H),4.14(dd,J＝10.8,6.0Hz,2H),5.28-5.40(m,4H)。
参考例8反式-1-(叔丁氧基羰基)-3,4-双(((9Z,12Z)-十八碳-9,12- 二烯酰基氧基)甲基)吡咯烷(化合物146)
利用与参考例7同样的方法，使用参考国际公开第2006/100036号合成出的反式-3,4-双(羟基甲基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(150mg，0.674mmol)及亚油酸(Aldrich公司制，400mg，1.48mmol)，得到了化合物146(351mg，71.7％)。
ESI-MS m/z:757(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.89(t,J＝6.8Hz,6H),1.21-1.45(m,26H),1.46(s,9H),1.47-1.68(m,6H),2.05(q,J＝6.7Hz,8H),2.26-2.38(m,6H),2.77(t,J＝5.9Hz,4H),3.10-3.23(m,2H),3.53-3.66(m,2H),4.03(dd,J＝11.0,6.0Hz,2H),4.14(dd,J＝11.0,6.0Hz,2H),5.28-5.43(m,8H)。
参考例9反式-3,4-双(((Z)-十八碳-9-烯酰基氧基)甲基)吡咯烷(化 合物110)
将参考例7中得到的化合物145(278mg，0.366mmol)溶解在二氯甲烷(6mL)中，加入三氟乙酸(0.563mL，7.31mmol)，在室温下进行3小时搅拌。向反应混合物中加入饱和碳酸氢钠水溶液，用氯仿萃取水层。用饱和食盐水洗涤有机层，用无水硫酸镁干燥后过滤，在减压下进行浓缩。将得到的残渣溶解在少量的甲醇中，使其吸附于填充在塑料柱中的BONDESIL-SCX(VARIAN公司制，6g)的上部，用甲醇洗涤，接着，用氨·甲醇溶液(东京化成工业公司制，2mol/L)洗脱目标物。通过在减压下浓缩包含目标物的级分而得到了化合物110(162mg，67.2％)。
ESI-MS m/z:661(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.88(t,J＝6.6Hz,6H),1.27-1.35(m,40H),1.56-1.64(m,4H),2.01(q,J＝5.9Hz,8H),2.09-2.16(m,2H),2.30(t,J＝7.5Hz,4H),2.72(dd,J＝11.3,5.5Hz,2H),3.11(dd,J＝11.3,7.1Hz,2H),3.99-4.12(m,4H),5.29-5.40(m,4H)。
参考例10反式-3,4-双(((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯酰基氧基)甲 基)吡咯烷(化合物111)
利用与参考例9同样的方法，使用参考例8中得到的化合物146(350mg，0.463mmol)，得到了化合物111(224mg，73.6％)。
ESI-MS m/z:657(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.89(t,J＝6.8Hz,6H),1.26-1.40(m,28H),1.57-1.66(m,4H),2.05(q,J＝6.6Hz,8H),2.09-2.17(m,2H),2.31(t,J＝7.5Hz,4H),2.72(dd,J＝11.3,6.0Hz,2H),2.77(t,J＝6.2Hz,4H),3.11(dd,J＝11.3,7.3Hz,2H),3.99-4.13(m,4H),5.28-5.43(m,8H)。
参考例11反式-1-甲基-3,4-双(((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯酰基氧 基)甲基)吡咯烷(化合物117)
将参考例10中得到的化合物111(80mg，0.12mmol)溶解在1,2-二氯乙烷(1.5mL)、甲醇(1.5mL)中，经过多次来添加甲醛(0.091mL，1.22mmol)、三乙酰氧基硼氢化钠(Acros Organics公司制，129mg，0.610mmol)，在室温下进行1.5小时搅拌。向反应溶液中加入饱和碳酸氢钠水溶液，用乙酸乙酯萃取水层。用饱和氯化钠水溶液洗涤有机层，用无水硫酸镁干燥后过滤，在减压下进行浓缩。用硅胶柱色谱法(氯仿/甲醇＝100/0～93/7)纯化得到的残渣，由此得到了化合物117(66mg，81％)。
ESI-MS m/z:671(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.89(t,J＝6.8Hz,6H),1.25-1.40(m,28H),1.57-1.66(m,4H),2.05(q,J＝6.7Hz,8H),2.13-2.24(m,2H),2.27-2.37(m,9H),2.66(dd,J＝9.2,7.3Hz,2H),2.77(t,J＝5.7Hz,4H),3.99-4.12(m,4H),5.28-5.43(m,8H)。
参考例12反式-1-甲基-3,4-双(((Z)-十八碳-9-烯酰基氧基)甲基) 吡咯烷(化合物116)
利用与参考例11同样的方法，使用参考例9中得到的化合物110(50mg，0.076mmol)，得到了化合物116(47mg，92％)。
ESI-MS m/z:675(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.88(t,J＝6.6Hz,6H),1.26-1.35(m,40H),1.56-1.65(m,4H),2.01(q,J＝5.5Hz,8H),2.15-2.24(m,2H),2.27-2.37(m,9H),2.67(dd,J＝9.3,7.1Hz,2H),3.99-4.12(m,4H),5.29-5.40(m,4H)。
参考例13反式-1-甲基-3,4-双(((Z)-十六碳-9-烯酰基氧基)甲基) 吡咯烷(化合物118)
向通过国际公开第2011/136368号所述的方法(参考例16)得到的(反式-1-苄基吡咯烷-3,4-二基)二甲醇(2.06g，9.31mmol)的甲醇(3mL)溶液中加入碘甲烷(东京化成工业公司制，26.4g，186mmol)，在室温进行2小时搅拌。在减压下浓缩反应液。将残渣装载于阴离子交换树脂(Dowex 1x-200氯化物型(The Dow Chemical Company制)，约30mL，用水和甲醇进行了预洗涤)，用甲醇洗脱。在减压下浓缩洗脱液。向残渣中加入乙酸乙酯，滤取生成的结晶，由此得到了反式-1-苄基-3,4-双(羟基甲基)-1-甲基吡咯烷鎓氯化物(2.53g，定量的收率)。
ESI-MS m/z:236M+；1H-NMR(CDCl3)δ:2.67(m,2H),3.08(s,3H),3.28-3.45(m,4H),3.53-3.98(m,6H),4.63(s,2H),7.49-7.63(m,5H)。
向得到的反式-1-苄基-3,4-双(羟基甲基)-1-甲基吡咯烷鎓氯化物(2.53g，9.31mmol)加入钯碳(约含水10％，0.495g，0.465mmol)和甲醇(25mL)，在氢气气氛下进行50℃、3小时加热搅拌。对反应液进行硅藻土过滤，用甲醇洗涤。合并滤液，在减压下进行浓缩，从而得到了反式-3,4-双(羟基甲基)-1-甲基吡咯烷盐酸盐(1.71g，定量的收率)。
ESI-MS m/z:146(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ:2.42(m,2H),2.89(s,3H),3.22-3.42(m,4H),3.44-3.69(m,6H)。
向得到的反式-3,4-双(羟基甲基)-1-甲基吡咯烷盐酸盐(200mg，1.10mmol)的氯仿(8ml)溶液中加入(Z)-十六碳-9-烯酸(东京化成工业公司制，616mg，2.422mmol)、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺·盐酸盐(同仁堂公司制485mg，2.53mmol)、三乙基胺(东京化成工业公司制，0.614ml，4.40mmol)及4-二甲基氨基吡啶(东京化成工业公司制33.6mg，0.275mmol)，在室温下搅拌一夜。向反应液中加入饱和碳酸氢钠水溶液，用氯仿萃取。合并有机层，用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸镁干燥，过滤，在减压下进行浓缩。用硅胶柱色谱法(甲醇/氯仿＝0/100～2/98)纯化得到的残渣，得到了化合物118(163mg，24％)。
ESI-MS m/z:146(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ:0.88(t,J＝6.6Hz,6H),1.26-1.31(m,34H),1.56-1.64(m,4H),1.97-2.03(m,8H),2.15-2.23(m,2H),2.27-2.38(m,9H),2.67(dd,J＝9.3,7.1Hz,2H),3.99-4.12(m,4H),5.29-5.40(m,4H)。
比较例1
使用参考例1中得到的化合物1，按照以下方法制造制剂。使用的核酸是包括有义链[5’-mGmGAAGCUGGCGAUUAUGCAGAUUmUmA-3’(键合于带有m的碱基的糖是被2’-O-甲基取代的核糖)]、和反义链[5’-UAAAUCUGCAUAAUCGCCAGCUUCC-3’(5’末端磷酸化)]的碱基序列的、抑制CKAP5基因的表达的CKAP5 siRNA，从NipponEGT公司、GeneDesign,Inc.、Invitrogen公司或Hokkaido SystemScience Co.,Ltd.获得完成退火的冷冻干燥siRNA，用蒸馏水将其溶解，由此调制成24mg/mL(以下称为CKAP5 siRNA溶液)。
将化合物1/1,2-二肉豆蔻酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-(甲氧基(聚乙二醇)-2000)钠盐(PEG-DMPE Na、N-(羰基甲氧基聚乙二醇2000)-1,2-二肉豆蔻酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺＝钠盐、日油社制)以57.26/5.521mmol/L的量悬浮于含有盐酸及乙醇的水溶液中，利用涡旋(vortex)搅拌混合机进行搅拌，以及反复进行加热，得到了均匀的悬浮液。在室温下使该悬浮液通过0.2μm的聚碳酸酯膜滤器及0.05μm的聚碳酸酯膜滤器，得到了前导(lead)粒子的分散液。利用动态光散射(Dynamic light scattering)(DLS)测定得到的前导粒子的平均粒径，确认了在30nm～100nm的范围内。以3:1的比例在得到的前导粒子的分散液中混合CKAP5siRNA溶液，进而加入3倍量的蒸馏水，进行混合，从而制备了阳离子性脂质/核酸复合体粒子的分散液。
另一方面，以化合物1/1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-(甲氧基(聚乙二醇)-2000)钠盐(PEG-DSPE Na、N-(羰基甲氧基聚乙二醇2000)-1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺＝钠盐、日油社制)/二硬脂酰基磷脂酰胆碱(DSPC，1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱，日油社制)/胆固醇(日油社制)＝8.947/2.943/5.707/11.83mmol/L的量称量各试样并将其溶解在90vol％乙醇中，制备脂质膜构成成分的溶液。
将得到的脂质膜构成成分的溶液加热，然后以1:1的比例混合得到的阳离子性脂质/核酸复合体粒子的分散液，进而混合数倍量的蒸馏水，得到了粗制剂。
使用Amicon Ultra(Millipore公司制)浓缩得到的粗制剂，进而置换进生理盐水，使用0.2μm的滤器(东洋滤纸公司制)在洁净台内进行过滤。进而测定得到的制剂的siRNA浓度，使用生理盐水稀释至以siRNA浓度计为1.0mg/mL。该制剂中的脂质纳米粒子的平均粒径为86.0nm。
[实施例1]
使用参考例1中得到的化合物1和参考例11中得到的化合物117，按照以下方法制造制剂。
与比较例1同样地操作，由CKAP5 siRNA以及前导粒子，制备阳离子性脂质/核酸复合体粒子的分散液。
另一方面，以化合物1/化合物117/1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-(甲氧基(聚乙二醇)-2000)钠盐(PEG-DSPE Na、N-(羰基甲氧基聚乙二醇2000)-1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺＝钠盐、日油社制)/二硬脂酰基磷脂酰胆碱(DSPC、1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱、日油社制)/胆固醇(日油社制)＝2.982/5.965/2.943/5.707/11.83mmol/L的量称量各试样并将其溶解在90vol％乙醇中，制备脂质膜构成成分的溶液。
将得到的脂质膜构成成分的溶液加热，然后以1:1的比例混合得到的阳离子性脂质/核酸复合体粒子的分散液，进而混合数倍量的蒸馏水，得到了粗制剂。
使用Amicon Ultra(Millipore公司制)浓缩得到的粗制剂，进而置换进生理盐水，使用0.2μm的滤器(东洋滤纸公司制)在洁净台内进行过滤。进而测定得到的制剂的siRNA浓度，使用生理盐水稀释至以siRNA浓度计为1.0mg/mL。使用粒径测定装置(Zetasizer NanoZS，Malvern公司制)测定制剂中的脂质纳米粒子的粒径，结果，该制剂中的脂质纳米粒子的平均粒径为93.9nm。
试验例1
对于实施例1中得到的制剂(含有化合物1、化合物117及核酸的脂质纳米粒子)及比较例1中得到的制剂(含有化合物1及核酸的脂质纳米粒子)，分别按照以下方法，实施体内mRNA敲低(knockdown)评价试验。
作为来自人胰腺癌的细胞株的MIA PaCa-2由JCRB细胞库(CellBank)获得，使用包含10％灭活胎牛血清(GIBCO公司制)及1vol％青霉素-链霉素(NACALAI TESQUE,INC.制，26253-84)的含有高葡萄糖的DMEM(GIBCO公司制，11995-073)在37℃、5％CO2条件下进行培养。以1×108个细胞/mL的浓度将MIA PaCa-2悬浮在PBS中，将该细胞悬浮液100μL移植到SCID小鼠(从NIPPON KUREA获得)的背部皮下(1×107个细胞/0.1mL PBS/头)。移植6天后，以肿瘤体积为指标进行分组，每组3只，以10mg/kg(10mL/kg)向小鼠静脉内给予实施例1及比较例1中得到的制剂。使用生理盐水作为阴性对照，以10mL/kg给予。在给予前及给予48小时后测定小鼠的体重。测定体重后，将小鼠安乐死，摘出皮下肿瘤。立即用液氮将摘出的肿瘤冷冻，将其保存在-80℃直到使用。
针对得到的肿瘤样品，向放入了样品的2mL圆底试管(tube)中添加1mL的Trizol试剂(Invitrogen制，15596-018)及5mm的二氧化锆珠，用Tissue lyser II(QIAGEN制)在1/25freq、1.5min、2次的条件下将其破碎。破碎后进行离心(10000rpm，10min)，回收上清液，添加200μL的氯仿，剧烈搅拌，然后再次进行离心(15000rpm，15min)。利用自动核酸提取仪MagNA PURE 96(Roche制)，使用Cellular RNA Large Volume试剂盒(Roche制，5467535)，从得到的上清液200μL中，提取RNA。用微量吸光光度计Dropsense96(Trinean制)测定提取的RNA浓度，使用Transcriptor(Roche制，4897030)对相当于200-1000ng的RNA进行逆转录。反应液组成、反应条件遵循所附说明书。用dH2O将得到的cDNA样品稀释10倍，作为qPCR的模板使用。qPCR反应中使用TaqMan Gene ExpressionMaster Mix(Applied Biosystems制，4369542)，TaqMan GeneExpression Assays(Applied Biosystems制，4331182)。PCR反应的条件遵循TaqMan Gene Expression附带的使用说明书。以将生理盐水给予组中的CKAP5的mRNA量作为1时的相对比例算出被分析物的mRNA量。
图1示出了分别以siRNA 10mg/kg的量给予实施例1及比较例1中得到的各制剂后48小时后的肿瘤中CKAP5 mRNA量。纵轴表示将生理盐水处置组作为1时的CKAP5 mRNA量的相对值。
由图1可知，对于实施例1及比较例1中得到的制剂，分别进行了体内药效评价试验，结果表明，这些制剂极强地抑制了CKAP5基因的表达，在体内的作用出乎意料地强，均作为用于体内的药物传递的脂质纳米粒子有用，这是本领域技术人员预料不到的效果。还确认了具有如下这样的本领域技术人员更加预料不到的效果：作为针对肿瘤的用于体内药物传递的脂质纳米粒子特别有用。
另外，由图1可知，对于实施例1中得到的制剂(含有化合物1、化合物117及核酸的脂质纳米粒子)而言，尽管在化合物1(其使得能容易地在体内将药物传递到肿瘤的细胞内)中混合化合物117，化合物1的使用量减少，但与比较例1中得到的制剂(含有化合物1及核酸的脂质纳米粒子)相比，在体内的药效评价试验的结果也为同样程度地极强地抑制了CKAP5基因的表达，抗肿瘤作用强。
因此，对于含有化合物(I)及化合物(II)的脂质纳米粒子而言，可知其具有如下这样的预料不到的作用：尽管化合物(I)的使用量减少，但并未减弱化合物(I)的使得能容易地在体内将药物传递到肿瘤的细胞内的作用。另外，通过减少化合物(I)的使用量、而不减弱使得能容易地在体内将药物传递到肿瘤的细胞内的作用，可减少因化合物(I)而导致的毒性作用，因此可知，其具有如下这样的本领域技术人员预料不到的效果：作为用于体内药物传递的脂质纳米粒子更有用。
试验例2
对于实施例1中得到的制剂(含有化合物1、化合物117及核酸的脂质纳米粒子)，利用以下的方法实施肿瘤增殖评价试验。
与试验例1同样地操作，使用将作为来自胰腺癌的细胞株的MIAPaCa-2移植到SCID小鼠而得到的异种移植模型来实施。以肿瘤体积为指标以每组6只实施分组(第0天)，在第0天及第7天以10mg/kg(10mL/kg)静脉内给予实施例1中得到的制剂。以10mL/kg给予生理盐水。从第0天～第14天测定各个体的肿瘤径，使用以下式算出肿瘤体积、体积比。
肿瘤体积(mm3)＝长径(mm)×短径(mm)×短径(mm)×0.5
体积比(V/V0)＝各时间点的肿瘤体积(mm3)÷第0天的肿瘤体积(mm3)
图2中示出了在第0天及第7天给予10mg/kg时的肿瘤体积的变化。纵轴表示以第0天为1时的肿瘤体积的相对值。横轴表示实验开始后的经过天数。
由图2可知，使用实施例1中得到的制剂(含有抑制CKAP5基因的表达的CKAP5 siRNA、和化合物1及化合物117的脂质纳米粒子)，实施体内药效评价试验的结果为，抗肿瘤作用强。
由此可知，本发明的脂质纳米粒子能将核酸导入到细胞内等，含有化合物(I)及化合物(II)的脂质纳米粒子是能够在体内良好地将药物传递到细胞内的优异的脂质纳米粒子。
比较例2
使用参考例1中得到的化合物1，按照以下方法制造制剂。使用的核酸是市售的抑制Eg5基因的表达的Eg5 siRNA(Invitrogen公司制，产品目录编号HSS105842)，有义链中包含5’-CCCAUCAACACUGGUAAGAACUGAA-3’的碱基序列，反义链中包含5’-UUCAGUUCUUACCAGUGUUGAUGGG-3’的碱基序列。从Invitrogen公司获得完成退火的冷冻干燥siRNA，用蒸馏水溶解，从而调制成24mg/mL(以下称为Eg5 siRNA溶液)。
将化合物1/1,2-二肉豆蔻酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-(甲氧基(聚乙二醇)-2000)钠盐(PEG-DMPE Na、N-(羰基甲氧基聚乙二醇2000)-1,2-二肉豆蔻酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺＝钠盐、日油社制)以57.26/5.521mmol/L的量悬浮于含有盐酸及乙醇的水溶液中，利用涡旋搅拌混合机进行搅拌，以及反复进行加热，得到了均匀的悬浮液。在室温下使该悬浮液通过0.2μm的聚碳酸酯膜滤器及0.05μm的聚碳酸酯膜滤器，得到了前导粒子的分散液。利用动态光散射(DLS)测定得到的前导粒子的平均粒径，确认了在30nm～100nm的范围内。以3:1的比例在得到的前导粒子的分散液中混合Eg5siRNA溶液，进而加入3倍量的蒸馏水，进行混合，从而制备了阳离子性脂质/核酸复合体粒子的分散液。
另一方面，以化合物1/1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-(甲氧基(聚乙二醇)-2000)钠盐(PEG-DSPE Na、N-(羰基甲氧基聚乙二醇2000)-1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺＝钠盐、日油社制)/二硬脂酰基磷脂酰胆碱(DSPC、1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱、日油社制)/胆固醇(日油社制)＝8.947/2.943/5.707/11.83mmol/L的量称量各试样，并将各试样溶解在90vol％乙醇中，制备脂质膜构成成分的溶液。
将得到的脂质膜构成成分的溶液加热，然后以1:1的比例混合得到的阳离子性脂质/核酸复合体粒子的分散液，进而混合数倍量的蒸馏水，得到了粗制剂。
使用Amicon Ultra(Millipore公司制)浓缩得到的粗制剂，进而置换进生理盐水，使用0.2μm的滤器(东洋滤纸公司制)在洁净台内进行过滤。进而测定得到的制剂的siRNA浓度，使用生理盐水稀释至以siRNA浓度计为1.0mg/mL。该制剂中的脂质纳米粒子的平均粒径为80.3nm。
[实施例2]
使用参考例1中得到的化合物1和参考例11中得到的化合物117，按照以下方法制造制剂。
与比较例2同样地操作，由Eg5 siRNA以及前导粒子制备阳离子性脂质/核酸复合体粒子的分散液。
另一方面，以化合物1/化合物117/1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-(甲氧基(聚乙二醇)-2000)钠盐(PEG-DSPE Na、N-(羰基甲氧基聚乙二醇2000)-1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺＝钠盐、日油社制)/二硬脂酰基磷脂酰胆碱(DSPC、1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱、日油社制)/胆固醇(日油社制)＝2.982/5.965/2.943/5.707/11.83mmol/L的量称量各试样，将各试样溶解在90vol％乙醇中，制备脂质膜构成成分的溶液。
将得到的脂质膜构成成分的溶液加热，然后以1:1的比例混合得到的阳离子性脂质/核酸复合体粒子的分散液，进而混合数倍量的蒸馏水，得到了粗制剂。
使用Amicon Ultra(Millipore公司制)浓缩得到的粗制剂，进而置换进生理盐水，使用0.2μm的滤器(东洋滤纸公司制)在洁净台内进行过滤。进而测定得到的制剂的siRNA浓度，使用生理盐水稀释至以siRNA浓度计为1.0mg/mL。该制剂中的脂质纳米粒子的平均粒径为80.5nm。
[实施例3]
使用参考例1中得到的化合物1和参考例11中得到的化合物117，按照以下方法制造制剂。
与比较例2同样地操作，由Eg5 siRNA以及前导粒子，制备阳离子性脂质/核酸复合体粒子的分散液。
另一方面，以化合物117/1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-(甲氧基(聚乙二醇)-2000)钠盐(PEG-DSPE Na、N-(羰基甲氧基聚乙二醇2000)-1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺＝钠盐、日油社制)/二硬脂酰基磷脂酰胆碱(DSPC、1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱、日油社制)/胆固醇(日油社制)＝8.947/2.943/5.707/11.83mmol/L的量称量各试样，将各试样溶解在90vol％乙醇中，制备脂质膜构成成分的溶液。
将得到的脂质膜构成成分的溶液加热，然后以1:1的比例混合得到的阳离子性脂质/核酸复合体粒子的分散液，进而混合数倍量的蒸馏水，得到了粗制剂。
使用Amicon Ultra(Millipore公司制)浓缩得到的粗制剂，进而置换进生理盐水，使用0.2μm的滤器(东洋滤纸公司制)在洁净台内进行过滤。进而测定得到的制剂的siRNA浓度，使用生理盐水稀释至以siRNA浓度计为1.0mg/mL。该制剂中的脂质纳米粒子的平均粒径为79.6nm。
[实施例4]
使用参考例1中得到的化合物1和参考例12中得到的化合物116，按照以下方法制造制剂。
与比较例2同样地操作，由Eg5 siRNA以及前导粒子，制备阳离子性脂质/核酸复合体粒子的分散液。
另一方面，以化合物116/1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-(甲氧基(聚乙二醇)-2000)钠盐(PEG-DSPE Na、N-(羰基甲氧基聚乙二醇2000)-1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺＝钠盐、日油社制)/二硬脂酰基磷脂酰胆碱(DSPC、1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱、日油社制)/胆固醇(日油社制)＝8.947/2.943/5.707/11.83mmol/L的量称量各试样，将各试样溶解在90vol％乙醇中，制备脂质膜构成成分的溶液。
将得到的脂质膜构成成分的溶液加热，然后以1:1的比例混合得到的阳离子性脂质/核酸复合体粒子的分散液，进而混合数倍量的蒸馏水，得到了粗制剂。
使用Amicon Ultra(Millipore公司制)浓缩得到的粗制剂，进而置换进生理盐水，使用0.2μm的滤器(东洋滤纸公司制)在洁净台内进行过滤。进而测定得到的制剂的siRNA浓度，使用生理盐水稀释至以siRNA浓度计为1.0mg/mL。该制剂中的脂质纳米粒子的平均粒径为77.6nm。
[实施例5]
使用参考例1中得到的化合物1和参考例13中得到的化合物118，按照以下方法制造制剂。
与比较例2同样地操作，由Eg5 siRNA以及前导粒子，制备阳离子性脂质/核酸复合体粒子的分散液。
另一方面，以化合物118/1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-(甲氧基(聚乙二醇)-2000)钠盐(PEG-DSPE Na、N-(羰基甲氧基聚乙二醇2000)-1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺＝钠盐、日油社制)/二硬脂酰基磷脂酰胆碱(DSPC、1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱、日油社制)/胆固醇(日油社制)＝8.947/2.943/5.707/11.83mmol/L的量，称量各试样，将各试样溶解在90vol％乙醇中，制备脂质膜构成成分的溶液。
将得到的脂质膜构成成分的溶液加热，然后以1:1的比例混合得到的阳离子性脂质/核酸复合体粒子的分散液，进而混合数倍量的蒸馏水，得到了粗制剂。
使用Amicon Ultra(Millipore公司制)浓缩得到的粗制剂，进而置换进生理盐水，使用0.2μm的滤器(东洋滤纸公司制)在洁净台内进行过滤。进而测定得到的制剂的siRNA浓度，使用生理盐水稀释至以siRNA浓度计为1.0mg/mL。该制剂中的脂质纳米粒子的平均粒径为81.6nm。
试验例3
对于实施例2～5中得到的制剂(含有化合物1、及化合物117、116或118以及核酸的脂质纳米粒子)及比较例2中得到的制剂(含有化合物1及核酸的脂质纳米粒子)，分别按照以下方法，实施体内mRNA敲低评价试验。
与试验例1同样地操作，使用将作为来自胰腺癌的细胞株的MIAPaCa-2移植到SCID小鼠而成的异种移植模型实施。移植6天后，以肿瘤体积为指标进行分组，每组3只，以10mg/kg(10mL/kg)向小鼠静脉内给予实施例2～5及比较例1中得到的制剂。使用生理盐水作为阴性对照，以10mL/kg给予。在给予前及给予48小时后，测定小鼠的体重。测定体重后，将小鼠安乐死，摘出皮下肿瘤。立即用液氮将摘出的肿瘤冷冻，将其保存在-80℃直到使用。
针对得到的肿瘤样品，向放入了样品的2mL圆底试管中添加1mL的Trizol试剂(Invitrogen制，15596-018)及5mm的二氧化锆珠，用Tissue lyser II(QIAGEN制)，在1/25freq、1.5min、2次的条件下将其破碎。破碎后离心(10000rpm，10min)，回收上清液，添加200μL的氯仿，剧烈搅拌，然后再次进行离心(15000rpm，15min)。利用自动核酸提取仪MagNA PURE 96(Roche制)，使用Cellular RNA Large Volume试剂盒(Roche制，5467535)，从得到的上清液200μL中提取RNA。使用微量吸光光度计Dropsense96(Trinean制)测定提取的RNA浓度，使用Transcriptor(Roche制，4897030)对相当于200-1000ng的RNA进行逆转录。反应液组成、反应条件遵循所附说明书。用dH2O将得到的cDNA样品稀释10倍，作为qPCR的模板使用。qPCR反应中使用TaqMan Gene ExpressionMaster Mix(Applied Biosystems制，4369542)，TaqMan GeneExpression Assays(Applied Biosystems制，4331182)。PCR反应的条件遵循TaqMan Gene Expression附带的使用说明书。以将生理盐水给予组中的Eg5的mRNA量作为1时的相对比例算出被分析物的mRNA量。
图3示出了分别以siRNA 10mg/kg的量给予实施例2～5及比较例2中得到的各制剂后48小时后的肿瘤中Eg5 mRNA量。纵轴表示将生理盐水处置组作为1时的Eg5 mRNA量的相对值。
由图3可知，对于实施例2～5及比较例1中得到的制剂，分别进行了体内药效评价试验，结果表明，这些制剂极强地抑制了Eg5基因的表达，在体内的作用出乎意料地强，均作为用于体内药物传递的脂质纳米粒子有用，这是本领域技术人员预料不到的效果。还可知具有如下这样的本领域技术人员更加预料不到的效果：作为针对肿瘤的用于体内药物传递的脂质纳米粒子特别有用。
另外，由图3可知，对于实施例2～5中得到的制剂(含有化合物1、及化合物117、116或118以及核酸的脂质纳米粒子)而言，尽管在化合物1(其使得能够容易地在体内将药物传递到肿瘤的细胞内)中混合化合物117、116或118，化合物1的使用量减少，但与比较例1中得到的制剂(含有化合物1及核酸的脂质纳米粒子)相比，在体内的药效评价试验的结果也为同样程度地极强地抑制了Eg5基因的表达，抗肿瘤作用强。
因此，对于含有化合物(I)及化合物(II)的脂质纳米粒子而言，可知其具有如下这样的预料不到的作用：尽管化合物(I)的使用量减少，但并未减弱化合物(I)的使得能容易地在体内将药物传递到肿瘤的细胞内的作用。另外，通过减少化合物(I)的使用量、而不减弱使得能容易地在体内将药物传递到肿瘤的细胞内的作用，可减少因化合物(I)而导致的毒性作用，因此可知，具有如下这样的本领域技术人员预料不到的技术效果：作为用于体内药物传递的脂质纳米粒子更有用。
试验例4
对于实施例2中得到的制剂(含有化合物1、化合物117及核酸的脂质纳米粒子)，利用以下的方法实施肿瘤增殖评价试验。
与试验例1同样地操作，使用将作为来自胰腺癌的细胞株的MIA PaCa-2移植到SCID小鼠而得到的异种移植模型实施。以肿瘤体积为指标以每组5只实施分组(第0天)，以10mg/kg(10mL/kg)静脉内给予实施例2中得到的制剂。以10mL/kg给予生理盐水。从第0天～第15天测定各个体的肿瘤径，与试验例2同样地算出肿瘤体积、体积比。
图4中示出了在第0天给予10mg/kg时的肿瘤体积的变化。纵轴表示将第0天作为1时的肿瘤体积的相对值。横轴表示实验开始后的经过天数。
由图4可知，使用实施例2中得到的制剂(含有抑制Eg5基因的表达的Eg5 siRNA、和化合物1及化合物117的脂质纳米粒子)实施体内药效评价试验的结果为，抗肿瘤作用强。
因此可知，本发明的脂质纳米粒子能将核酸导入到细胞内等，含有化合物(I)及化合物(II)的脂质纳米粒子是能够在体内良好地将药物传递至细胞内的优异的脂质纳米粒子。
产业上的可利用性
通过将本发明的新型的含有阳离子性脂质及核酸的脂质纳米粒子给予至哺乳类动物等，能容易地将该核酸导入到例如细胞内等。
[序列表文本]
序列号1-siRNA 有义链
序列号2-siRNA 反义链
序列号2-5’-磷酸化腺苷(5’-phosphorylated Adenosine)
序列号3-siRNA 有义链
序列号4-siRNA 反义链

Claims (34)

1.一种脂质纳米粒子，含有式(I)表示的阳离子性脂质及式(II)表示的阳离子性脂质，
式(I)中，R1及R2相同或不相同，为碳原子数为10～24的直链状或支链状的烷基、链烯基或炔基，
X1及X2为氢原子，或一起形成单键或亚烷基，
X3不存在，或为碳原子数为1～6的烷基或碳原子数为3～6的链烯基，
在X3不存在的情况下，
Y1也不存在，L1为单键，R3为氢原子、碳原子数为1～6的烷基、碳原子数为3～6的链烯基、吡咯烷-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基或被相同或不相同的1～3个的氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数为1～6的烷基或碳原子数为3～6的链烯基，或者
Y1也不存在，L1为-CO-或-CO-O-，R3为吡咯烷-2-基、吡咯烷-3-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、吗啉-2-基、吗啉-3-基或被相同或不相同的1～3个的氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数为1～6的烷基或碳原子数为3～6的链烯基，所述取代基中的至少一个为氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基，
在X3为碳原子数为1～6的烷基或碳原子数为3～6的链烯基的情况下，
Y1为制药上可接受的阴离子，L1为单键，R3为碳原子数为1～6的烷基、碳原子数为3～6的链烯基、吡咯烷-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基或被相同或不相同的1～3个的氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数为1～6的烷基或碳原子数为3～6的链烯基，
式(II)中，R4及R5相同或不相同，为碳原子数为12～24的直链状或支链状的烷基、链烯基或炔基，或R4及R5一起形成二烷基亚甲基、二链烯基亚甲基、二炔基亚甲基或烷基链烯基亚甲基，
X4及X5为氢原子，或一起形成单键或亚烷基，
X6不存在，或为碳原子数为1～6的烷基或碳原子数为3～6的链烯基，
在X6不存在的情况下，
Y2也不存在，a及b为0，L4为单键，R6为碳原子数为1～6的烷基、碳原子数为3～6的链烯基、吡咯烷-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基或被相同或不相同的1～3个的氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数为1～6的烷基或碳原子数为3～6的链烯基，L2及L3为-O-，或
Y2也不存在，a及b相同或不相同，为0～3，并且a和b不会同时为0，L4为单键，R6为碳原子数为1～6的烷基、碳原子数为3～6的链烯基、吡咯烷-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基或被相同或不相同的1～3个的氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数为1～6的烷基或碳原子数为3～6的链烯基，L2及L3相同或不相同，为-O-、-CO-O-或-O-CO-，或
Y2也不存在，a及b相同或不相同，为0～3，L4为单键，R6为氢原子，L2及L3相同或不相同，为-O-、-CO-O-或-O-CO-，或者
Y2也不存在，a及b相同或不相同，为0～3，L4为-CO-或-CO-O-，R6为吡咯烷-2-基、吡咯烷-3-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、吗啉-2-基、吗啉-3-基或被相同或不相同的1～3个的氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数为1～6的烷基或碳原子数为3～6的链烯基，所述取代基中的至少一个为氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基，L2及L3相同或不相同，为-O-、-CO-O-或-O-CO-，
在X6为碳原子数为1～6的烷基或碳原子数为3～6的链烯基的情况下，
Y2为制药上可接受的阴离子，a及b相同或不相同，为0～3，L4为单键，R6为碳原子数为1～6的烷基、碳原子数为3～6的链烯基、吡咯烷-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基或被相同或不相同的1～3个的氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数为1～6的烷基或碳原子数为3～6的链烯基，L2及L3相同或不相同，为-O-、-CO-O-或-O-CO-。
2.如权利要求1所述的脂质纳米粒子，其中，R1及R2为十二烷基、十四烷基、(Z)-十二碳-7-烯基、(Z)-十四碳-7-烯基、(Z)-十六碳-4-烯基、(Z)-十六碳-7-烯基、(E)-十六碳-7-烯基、(Z)-十六碳-9-烯基、(7Z,10Z)-十六碳-7,10-二烯基、(7Z,10Z,13Z)-十六碳-7,10,13-三烯基、(Z)-十八碳-9-烯基或(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基。
3.如权利要求1所述的脂质纳米粒子，其中，R1及R2同为十四烷基、十六烷基、(Z)-十四碳-9-烯基、(Z)-十六碳-9-烯基、(Z)-十八碳-6-烯基、(Z)-十八碳-9-烯基、(E)-十八碳-9-烯基、(Z)-十八碳-11-烯基、(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基、(9Z,12Z,15Z)-十八碳-9,12,15-三烯基、(Z)-二十碳-11-烯基或(11Z,14Z)-二十碳-11,14-二烯基。
4.如权利要求1～3中任一项所述的脂质纳米粒子，其中，L1为单键，R3为氢原子、甲基、吡咯烷-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基或被相同或不相同的1～3个的氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数为1～6的烷基或碳原子数为3～6的链烯基。
5.如权利要求1～3中任一项所述的脂质纳米粒子，其中，L1为-CO-或-CO-O-，R3为吡咯烷-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基或被相同或不相同的1～3个的氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数为1～6的烷基或碳原子数为3～6的链烯基，所述取代基中的至少一个为氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基。
6.如权利要求1～5中任一项所述的脂质纳米粒子，其中，X1及X2一起形成单键或亚烷基。
7.如权利要求1～5中任一项所述的脂质纳米粒子，其中，X1及X2一起形成单键或亚烷基，R3为氢原子、甲基或被相同或不相同的1～3个的氨基、羟基或氨基甲酰基取代的碳原子数为1～6的烷基或碳原子数为3～6的链烯基。
8.如权利要求1～5中任一项所述的脂质纳米粒子，其中，X1及X2为氢原子，R3为氢原子、甲基或被相同或不相同的1～3个的氨基、羟基或氨基甲酰基取代的碳原子数为1～6的烷基或碳原子数为3～6的链烯基。
9.如权利要求1～8中任一项所述的脂质纳米粒子，其中，X3不存在。
10.如权利要求1～9中任一项所述的脂质纳米粒子，其中，L2及L3为-O-或-O-CO-，R4及R5为十二烷基、十四烷基、十六烷基、十八烷基、二十烷基、二十二烷基、二十四烷基、(Z)-十四碳-9-烯基、(Z)-十六碳-9-烯基、(Z)-十八碳-6-烯基、(Z)-十八碳-9-烯基、(E)-十八碳-9-烯基、(Z)-十八碳-11-烯基、(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基、(9Z,12Z,15Z)-十八碳-9,12,15-三烯基、(Z)-二十碳-11-烯基、(11Z,14Z)-二十碳-11,14-二烯基、3,7,11-三甲基十二碳-2,6,10-三烯基或3,7,11,15-四甲基十六碳-2-烯基。
11.如权利要求1～9中任一项所述的脂质纳米粒子，其中，L2及L3为-CO-O-，R4及R5为十三烷基、十五烷基、十七烷基、十九烷基、二十一烷基、二十三烷基、(Z)-十三碳-8-烯基、(Z)-十五碳-8-烯基、(Z)-十七碳-5-烯基、(Z)-十七碳-8-烯基、(E)-十七碳-8-烯基、(Z)-十七碳-10-烯基、(8Z,11Z)-十七碳-8,11-二烯基、(8Z,11Z,14Z)-十八碳-8,11,14-三烯基、(Z)-十九碳-10-烯基、(10Z,13Z)-十九碳-10,13-二烯基、(11Z,14Z)-二十碳-11,14-二烯基、2,6,10-三甲基十一碳-1,5,9-三烯基或2,6,10,14-四甲基十五碳-1-烯基。
12.如权利要求1～11中任一项所述的脂质纳米粒子，其中，L4为单键，R6为氢原子、甲基、吡咯烷-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基或被相同或不相同的1～3个的氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数为1～6的烷基或碳原子数为3～6的链烯基。
13.如权利要求1～11中任一项所述的脂质纳米粒子，其中，L4为-CO-或-CO-O-，R6为吡咯烷-3-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基或被相同或不相同的1～3个的氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、羟基、烷氧基、氨基甲酰基、单烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基取代的碳原子数为1～6的烷基或碳原子数为3～6的链烯基，所述取代基中的至少一个为氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、三烷基铵基、吡咯烷基、哌啶基或吗啉基。
14.如权利要求1～13中任一项所述的脂质纳米粒子，其中，X4及X5一起形成单键或亚烷基。
15.如权利要求1～13中任一项所述的脂质纳米粒子，其中，X4及X5一起形成单键或亚烷基，R6为氢原子、甲基或被相同或不相同的1～3个的氨基、羟基或氨基甲酰基取代的碳原子数为1～6的烷基或碳原子数为3～6的链烯基。
16.如权利要求1～13中任一项所述的脂质纳米粒子，其中，X4及X5为氢原子，R6为氢原子、甲基或被相同或不相同的1～3个的氨基、羟基或氨基甲酰基取代的碳原子数为1～6的烷基或碳原子数为3～6的链烯基。
17.如权利要求1～13中任一项所述的脂质纳米粒子，其中，X4及X5一起形成单键或亚烷基，R6为被相同或不相同的1～3个的氨基、羟基或氨基甲酰基取代的碳原子数为1～6的烷基或碳原子数为3～6的链烯基。
18.如权利要求1～13中任一项所述的脂质纳米粒子，其中，X4及X5为氢原子，R6为被相同或不相同的1～3个的氨基、羟基或氨基甲酰基取代的碳原子数为1～6的烷基或碳原子数为3～6的链烯基。
19.如权利要求1～18中任一项所述的脂质纳米粒子，其中，X6不存在或为甲基。
20.如权利要求1～19中任一项所述的脂质纳米粒子，其中，含有核酸作为药物。
21.如权利要求20所述的脂质纳米粒子，其中，阳离子性脂质与所述核酸形成复合体，或者，阳离子性脂质与中性脂质及/或高分子组合而成的物质与所述核酸形成复合体。
22.如权利要求20所述的脂质纳米粒子，其中，阳离子性脂质与所述核酸形成复合体，或者，阳离子脂质与中性脂质及/或高分子组合而成的物质与所述核酸形成复合体，所述脂质纳米粒子由所述复合体及将所述复合体封入的脂质膜构成。
23.如权利要求20～22中任一项所述的脂质纳米粒子，其中，核酸是具有利用了RNA干扰(RNAi)的、靶基因表达抑制作用的核酸。
24.如权利要求23所述的脂质纳米粒子，其中，靶基因是与肿瘤或炎症相关的基因。
25.一种使用权利要求20～24中任一项所述的脂质纳米粒子将所述核酸导入到细胞内的方法。
26.如权利要求25所述的方法，其中，细胞是位于哺乳类动物的肿瘤或炎症部位的细胞。
27.如权利要求25或26所述的方法，其中，细胞是位于哺乳类动物的肝脏、肺、肾脏或脾脏的细胞。
28.如权利要求26或27所述的方法，其中，导入到细胞内的方法是利用静脉内给予导入到细胞内的方法。
29.一种癌或炎症疾病的治疗方法，其中，将权利要求1～24中任一项所述的脂质纳米粒子给予哺乳动物。
30.如权利要求29所述的方法，其中，给予的方法是静脉内给予。
31.一种用于治疗疾病的医药，所述医药包含权利要求1～24中任一项所述的脂质纳米粒子。
32.如权利要求31所述的医药，其用于静脉内给予。
33.一种癌或炎症疾病的治疗剂，其用于癌或炎症疾病的治疗，所述治疗剂包括权利要求1～24中任一项所述的脂质纳米粒子。
34.如权利要求33所述的癌或炎症疾病的治疗剂，其用于静脉内给予。
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