CN104152141A - 胰蛋白酶荧光化学传感器的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及基于硅纳米线与其表面荧光团之间能量转移的胰蛋白酶荧光化学传感器的制备方法。本发明是通过荧光团标记的胰蛋白酶选择性肽链中的肽链将硅纳米线和荧光团共价连接在一起构建而成胰蛋白酶荧光化学传感器。本发明的胰蛋白酶荧光化学传感器可用于含有胰蛋白酶的溶液体系中的胰蛋白酶的检测。当检测体系中不存在胰蛋白酶时，硅纳米线与其表面荧光团之间的能量转移使荧光团的荧光猝灭；当检测体系中有胰蛋白酶存在时，由于胰蛋白酶的加入切断了肽链，改变了硅纳米线与荧光团之间的距离，抑制了硅纳米线与荧光团之间的能量转移，使检测体系中的荧光恢复。根据荧光强度的变化，实现对检测体系中是否含胰蛋白酶的检测。
Description
技术领域
本发明属于纳米结构的荧光化学传感器领域，特别涉及基于硅纳米线与其表面荧光团之间能量转移的胰蛋白酶荧光化学传感器的制备方法。
背景技术
硅纳米线作为一种重要的一维半导体纳米材料，具有稳定性高、生物兼容性好、表面易修饰、与现有硅技术相兼容等特点，使其在传感器方面有广泛的应用。2001年，Lieber等人在Science上首次报道了基于硅纳米线的pH和钙离子电化学传感器，通过电导率的改变进行pH和生物分子的识别(Y.Cui,QQ Wei,H Park,CM Lieber,Science,2001,293,1289)。之后，科学家发展了基于硅纳米线的DNA、糖类、蛋白质、病毒等电化学传感器。考虑到光化学传感器与电化学传感器相比具有：不受电磁干扰，可以通过光纤远距离传输、单细胞检测不需要参比电极等特点。2008年，Shi等人在NanoLett上首次报道了基于硅纳米线的荧光化学铜离子传感器。该传感器与没有硅纳米线的传感分子相比，灵敏度大大提高(LX Mu,WS Shi,JC Chang,ST Lee,NanoLett,2008,8,104)。之后，研究人员又发展了基于硅纳米线的荧光pH、碱性磷酸酶、NO、超氧化物歧化酶等传感器并将其用在细胞凋亡过程中释放SOD的实时原位检测。这些工作显示了硅纳米线荧光传感器与有机小分子相比，在传感器的选择性和灵敏度方面有所改善，尤其是可以通过将单根硅纳米线传感器插入细胞特定部位进行检测，在亚细胞器检测方面有明显优势。然而，这些硅纳米线荧光传感器都是基于硅纳米线表面的氧化层进行修饰，以硅纳米线为基底，没有利用硅纳米线本身的性质。近年来，碳纳米管、石墨烯、纳米金被发现能够有效地猝灭荧光，并广泛用于能量转移的荧光传感器中，表现出了很好的传感性能。而在硅光伏器件研究中，通常利用硅纳米线与量子点之间的能量转移来提高光电转化效率，将这种能量转移用于硅纳米线传感器中，对发展新型硅纳米线传感器和提高硅纳米线传感器的性能具有重要意义。因此，本发明以胰蛋白酶为检测模型，通过肽链将硅纳米线和荧光团共价链接起来，改变荧光团和硅纳米线之间的距离，研究二者之间的能量转移，并将其用于胰蛋白酶的检测，为硅纳米线蛋白酶荧光传感器提供了新的机理和方法。
发明内容
本发明的主要目的是提供一种基于硅纳米线与其表面荧光团之间能量转移的胰蛋白酶荧光化学传感器的制备方法，并且利用该胰蛋白酶荧光化学传感器对含有胰蛋白酶的溶液体系中的胰蛋白酶进行检测。
本发明的基于硅纳米线与其表面荧光团之间能量转移的胰蛋白酶荧光化学传感器的制备方法包括以下步骤：
1)室温下，将硅纳米线浸泡在质量浓度为1％～5％的氢氟酸水溶液中(一般浸泡的时间为30秒～5分钟)，取出硅纳米线并用去离子水清洗干净，得到表面具有Si-H键的硅纳米线；将得到的表面具有Si-H键的硅纳米线浸泡于除氧的0.025～1g/mL叔丁氧基N-氨基甲酸丙烯的无水乙醇或无水甲醇溶液中，在500W的汞灯下光照1～6小时，收集硅纳米线，反复用有机溶剂清洗后浸泡于三氟乙酸：甲醇的体积比为1:1～1:8的三氟乙酸甲醇溶液中1～4小时，得到表面修饰有氨基的硅纳米线，收集并用有机溶剂反复清洗；
2)将步骤1)清洗后得到的表面修饰有氨基的硅纳米线浸泡于浓度为0.01～1M的对苯二异硫氰酸酯的乙醇溶液中，在温度为30～50℃下浸泡30分钟～2小时后，得到表面修饰有异硫氰酸根的硅纳米线，收集并用有机溶剂反复清洗；
3)将步骤2)清洗后得到的表面修饰有异硫氰酸根的硅纳米线浸泡于浓度为0.5～1.5mol/L的荧光团标记的胰蛋白酶选择性肽链的N,N-二甲基甲酰胺(DMF)溶液中，并按照每20mL荧光团标记的胰蛋白酶选择性肽链的N,N-二甲基甲酰胺溶液加入10～60μL的N,N-二异丙基乙胺加入N,N-二异丙基乙胺，室温下搅拌10～24小时后，用有机溶剂反复超声清洗除去未反应的荧光团标记的胰蛋白酶选择性肽链，得到基于硅纳米线与其表面荧光团之间能量转移的胰蛋白酶荧光化学传感器。
所述的硅纳米线是由化学气相沉积法制备得到的直径为10～15nm的硅纳米线或由化学刻蚀法制备得到的直径为200～400nm，长度为15～20μm的硅纳米线。
所述的有机溶剂是甲醇、乙醇、N,N-二甲基甲酰胺(DMF)或丙酮。
所述的荧光团标记的胰蛋白酶选择性肽链中的荧光团可以是荧光素或其它发射波长的荧光团如罗丹明、花青类等。
所述的荧光团标记的胰蛋白酶选择性肽链中的肽链可以是含有胰蛋白酶选择性作用位点的不同长度的肽链，如N-GCGPLGVRGK-amidation或N-RGK-amidation。
所述的荧光团标记的胰蛋白酶选择性肽链优选是N-FITC-GCGPLGVRGK-amidation或N-FITC-RGK-amidation。
本发明中所述的化学气相沉积法制备硅纳米线的方法可是：室温下，将一氧化硅经研钵研磨后放入瓷舟中，并将瓷舟放在石英管的中部，系统先用机械泵和分子泵对石英管抽真空至10-3Pa，随后以20～50sccm(mL/min)的流速通入氩气(占混合气体的体积95％)与氢气(占混合气体的体积5％)的混合气体，当压力稳定在700～1000Pa时，系统开始升温；系统以10～20℃/min升至300℃，再以10～20℃/min升温至800℃，此时关闭气阀和泵闸，保温10～30分钟后继续升温至1350℃，在1350℃下反应(一般反应时间为3～7小时)，反应结束后，自然冷却至室温，在瓷舟的两侧收集产物硅纳米线。
本发明中所述的化学刻蚀法制备硅纳米线的方法可是：取不同尺寸的n(100)硅片，依次用丙酮、乙醇、蒸馏水进行超声清洗(一般超声清洗的时间为10～30分钟)，将清洗后的硅片置于含有浓度为3～8mmol/L的AgNO3和2～7mol/L的HF的混合水溶液中进行浸泡(一般浸泡的时间为5～10分钟)，将硅片取出后浸入含有浓度为2～7mol/L的HF和0.05～0.4mol/L的H2O2的混合水溶液中，体系由温度为40～60℃的水浴保温，15～45分钟后取出硅片，放入浓盐酸(质量浓度为36％)：浓硝酸(质量浓度为36％)的体积比为3：1的混合液中，浸泡0.5～2.5小时后取出硅片，用蒸馏水冲洗后自然晾干，得到由硅纳米线构成的硅纳米线阵列；超声使硅纳米线从基底上脱落，离心收集硅纳米线。
本发明的制备方法得到的基于硅纳米线与其表面荧光团之间能量转移的胰蛋白酶荧光化学传感器，是通过荧光团标记的胰蛋白酶选择性肽链中的肽链将硅纳米线和荧光团标记的胰蛋白酶选择性肽链中的荧光团共价连接在一起构建而成的胰蛋白酶荧光化学传感器。该胰蛋白酶荧光化学传感器是以硅纳米线作为能量转移的受体，利用硅纳米线与其表面荧光团之间的能量转移的发生或抑制使荧光团的荧光猝灭或恢复；当检测体系中不存在胰蛋白酶时，硅纳米线与其表面荧光团之间的能量转移使荧光团的荧光猝灭；当检测体系中有胰蛋白酶存在时，由于胰蛋白酶的加入切断了肽链，改变了硅纳米线与荧光团之间的距离，抑制了硅纳米线与荧光团之间的能量转移，使检测体系中的荧光恢复。根据荧光强度的变化，实现对检测体系中是否含胰蛋白酶的检测。
本发明的基于硅纳米线与其表面荧光团之间能量转移的胰蛋白酶荧光化学传感器可用于含有胰蛋白酶的溶液体系中的胰蛋白酶的检测。在有胰蛋白酶存在的溶液体系中，所述的胰蛋白酶荧光化学传感器会产生荧光增强，通过绘制已知胰蛋白酶的浓度和荧光特征峰相对强度的定标曲线，并与待检测的溶液体系中的由所述的胰蛋白酶荧光化学传感器检测到的荧光特征峰的荧光增强进行比较，确定检测的溶液体系中的胰蛋白酶的浓度。
本发明的基于硅纳米线与其表面荧光团之间能量转移的胰蛋白酶荧光化学传感器在用于含有胰蛋白酶的溶液体系中的胰蛋白酶检测时，所述的有胰蛋白酶存在的溶液体系，是将胰蛋白酶的溶液直接加入到含有本发明的基于硅纳米线与其表面荧光团之间能量转移的胰蛋白酶荧光化学传感器的溶液中，在37℃下作用，之后再进行荧光强度的测试，用荧光光谱仪进行检测。所用的激发光源为氙灯(最大激发波长为489nm)，本发明的基于硅纳米线与其表面荧光团之间能量转移的胰蛋白酶荧光化学传感器的最大发射波长为520nm。
本发明的制备方法得到的基于硅纳米线与其表面荧光团之间能量转移的胰蛋白酶荧光化学传感器为硅纳米线传感器的研究提供了新的机理，同时也为基于硅纳米线与表面荧光团之间能量转移的蛋白酶检测提供了新机理，为蛋白酶的检测提供了一种新的方法。在单细胞蛋白酶检测方面有广泛的应用前景。
下面结合具体实施例及附图对本发明作进一步的说明。
附图说明
图1.本发明实施例1～4的基于硅纳米线与其表面荧光团之间能量转移的胰蛋白酶荧光化学传感器对胰蛋白酶的响应机理示意图。
图2.发明实施例1中，基于硅纳米线与其表面荧光团之间能量转移的胰蛋白酶荧光化学传感器的荧光强度随胰蛋白酶(质量比2.5％的胰蛋白酶)加入量和时间的变化。
图3.本发明实施例2中，基于硅纳米线与其表面荧光团之间能量转移的胰蛋白酶荧光化学传感器在加入不同酶时的相对荧光强度。
图4.本发明实施例3中，不同浓度的基于硅纳米线与其表面荧光团之间能量转移的胰蛋白酶荧光化学传感器对胰蛋白酶的滴定曲线。
图5.本发明实施例4中，基于硅纳米线与其表面荧光团之间能量转移的胰蛋白酶荧光化学传感器的结构及制备过程示意图。
具体实施方式
实施例1
1)室温下，将用化学气相沉积法制备得到的直径为10～15nm的硅纳米线浸泡在质量浓度为15％的氢氟酸水溶液中30秒，取出硅纳米线并用去离子水清洗干净，得到表面具有Si-H键的硅纳米线；将得到的表面具有Si-H键的硅纳米线浸泡于除氧1g/mL叔丁氧基N-氨基甲酸丙烯的无水乙醇溶液中，在500W的汞灯下光照6小时，收集硅纳米线，反复用乙醇清洗后浸泡于三氟乙酸：甲醇的体积比为1:4的三氟乙酸甲醇溶液中4小时，得到表面修饰有氨基的硅纳米线，收集并用甲醇反复清洗；
2)将步骤1)清洗后得到的表面修饰有氨基的硅纳米线浸泡于浓度为0.01M的对苯二异硫氰酸酯的乙醇溶液中，在40℃下浸泡2小时后，得到表面修饰有异硫氰酸根的硅纳米线，收集并用乙醇反复清洗；
3)将步骤2)清洗后得到的表面修饰有异硫氰酸根的硅纳米线浸泡于浓度为1.5mol/L的荧光团标记的胰蛋白酶选择性肽链(N-FITC-GCGPLGVRGK-amidation，购于上海淘普生物科技有限公司)的N,N-二甲基甲酰胺溶液中，并按照每20mL荧光团标记的胰蛋白酶选择性肽链的N,N-二甲基甲酰胺溶液加入40μL的N,N-二异丙基乙胺加入N,N-二异丙基乙胺，室温下搅拌24小时后，用DMF反复超声清洗除去未反应的荧光团标记的胰蛋白酶选择性肽链，得到基于硅纳米线与其表面荧光团之间能量转移的胰蛋白酶荧光化学传感器。
所得基于硅纳米线与其表面荧光团之间能量转移的胰蛋白酶荧光化学传感器是通过荧光团标记的胰蛋白酶选择性肽链中的肽链将硅纳米线和荧光团标记的胰蛋白酶选择性肽链中的荧光团共价连接在一起构建而成的胰蛋白酶荧光化学传感器。基于硅纳米线与其表面荧光团之间能量转移的胰蛋白酶荧光化学传感器对胰蛋白酶的响应机理如图1所示。将基于硅纳米线与其表面荧光团之间能量转移的胰蛋白酶荧光化学传感器分散在pH8.0的PBS缓冲液中，得到20μg/mL的基于硅纳米线与其表面荧光团之间能量转移的胰蛋白酶荧光化学传感器的悬浊液。从图2可以看出，每隔5分钟加入不同量(10μl、10μl、10μl、10μl、40μl)的质量比2.5％的胰蛋白酶到基于硅纳米线与其表面荧光团之间能量转移的胰蛋白酶荧光化学传感器的1mL悬浊液中，用荧光光谱仪测荧光(激发波长489nm)，结果显示基于硅纳米线与其表面荧光团之间能量转移的胰蛋白酶荧光化学传感器的荧光强度逐渐增强。
实施例2
1)室温下，将用化学刻蚀法制备得到的直径为200～300nm的硅纳米线浸泡在质量浓度为5％的氢氟酸水溶液中5分钟，取出硅纳米线并用去离子水清洗干净，得到表面具有Si-H键的硅纳米线；将得到的表面具有Si-H键的硅纳米线浸泡于除氧0.025g/mL叔丁氧基N-氨基甲酸丙烯的无水甲醇溶液中，在500W的汞灯下光照4小时，收集硅纳米线，反复用乙醇清洗后浸泡于三氟乙酸：甲醇的体积比为1:8的三氟乙酸甲醇溶液中1小时，得到表面修饰有氨基的硅纳米线，收集并用甲醇反复清洗；
2)将步骤1)清洗后得到的表面修饰有氨基的硅纳米线浸泡于浓度为1M的对苯二异硫氰酸酯的乙醇溶液中，在50℃下浸泡30分钟后，得到表面修饰有异硫氰酸根的硅纳米线，收集并用乙醇反复清洗；
3)将步骤2)清洗后得到的表面修饰有异硫氰酸根的硅纳米线浸泡于浓度为0.5mol/L的荧光团标记的胰蛋白酶选择性肽链(N-FITC-GCGPLGVRGK-amidation，购于上海淘普生物科技有限公司)的DMF溶液中，并按照每20mL荧光团标记的胰蛋白酶选择性肽链的DMF溶液加入10μL的N,N-二异丙基乙胺加入N,N-二异丙基乙胺，室温下搅拌10小时后，用DMF反复超声清洗除去未反应的荧光团标记的胰蛋白酶选择性肽链，得到基于硅纳米线与其表面荧光团之间能量转移的胰蛋白酶荧光化学传感器。
所得基于硅纳米线与其表面荧光团之间能量转移的胰蛋白酶荧光化学传感器是通过荧光团标记的胰蛋白酶选择性肽链中的肽链将硅纳米线和荧光团标记的胰蛋白酶选择性肽链中的荧光团共价连接在一起构建而成的胰蛋白酶荧光化学传感器。基于硅纳米线与其表面荧光团之间能量转移的胰蛋白酶荧光化学传感器对胰蛋白酶的响应机理如图1所示。将基于硅纳米线与其表面荧光团之间能量转移的胰蛋白酶荧光化学传感器分散在pH8.0的PBS缓冲液中，得到20μg/mL的基于硅纳米线与其表面荧光团之间能量转移的胰蛋白酶荧光化学传感器的悬浊液。分别取1mL基于硅纳米线与其表面荧光团之间能量转移的胰蛋白酶荧光化学传感器的悬浊液，并分别加入不同的酶(0.48mg/ml胰蛋白酶、2.7μM凝血酶、2.4mg/ml胃蛋白酶、1.4mg/ml溶解酵素、1.56mg/ml碱性磷酸酶)，在荧光光谱仪上测荧光(激发波长489纳米)，基于硅纳米线与其表面荧光团之间能量转移的胰蛋白酶荧光化学传感器相对荧光强度如图3所示。
实施例3
1)室温下，将用化学刻蚀法制备得到的直径250～400nm的硅纳米线浸泡在质量浓度为4％的氢氟酸水溶液中2分钟，取出硅纳米线并用去离子水清洗干净，得到表面具有Si-H键的硅纳米线；将得到的表面具有Si-H键的硅纳米线浸泡于除氧05g/mL叔丁氧基N-氨基甲酸丙烯的无水甲醇溶液中，在500W的汞灯下光照5小时，收集硅纳米线，反复用乙醇清洗后浸泡于三氟乙酸：甲醇的体积比为1:1的三氟乙酸甲醇溶液中3小时，得到表面修饰有氨基的硅纳米线，收集并用甲醇反复清洗；
2)将步骤1)清洗后得到的表面修饰有氨基的硅纳米线浸泡于浓度为0.05M的对苯二异硫氰酸酯的乙醇溶液中，在30℃下浸泡2小时后，得到表面修饰有异硫氰酸根的硅纳米线，收集并用乙醇反复清洗；
3)将步骤2)清洗后得到的表面修饰有异硫氰酸根的硅纳米线浸泡于浓度为1.5mol/L的荧光团标记的胰蛋白酶选择性肽链(N-FITC-RGK-amidation，购于上海淘普生物科技有限公司)的DMF溶液中，并按照每20mL荧光团标记的胰蛋白酶选择性肽链的DMF溶液加入60μL的N,N-二异丙基乙胺加入N,N-二异丙基乙胺，室温下搅拌12小时后，用DMF反复超声清洗除去未反应的荧光团标记的胰蛋白酶选择性肽链，得到基于硅纳米线与其表面荧光团之间能量转移的胰蛋白酶荧光化学传感器。
所得基于硅纳米线与其表面荧光团之间能量转移的胰蛋白酶荧光化学传感器是通过荧光团标记的胰蛋白酶选择性肽链中的肽链将硅纳米线和荧光团标记的胰蛋白酶选择性肽链中的荧光团共价连接在一起构建而成的胰蛋白酶荧光化学传感器。基于硅纳米线与其表面荧光团之间能量转移的胰蛋白酶荧光化学传感器对胰蛋白酶的响应机理如图1所示。将基于硅纳米线与其表面荧光团之间能量转移的胰蛋白酶荧光化学传感器分散在pH8.0的PBS缓冲液中，得到浓度分别为20μg/mL、5μg/mL、2μg/mL的基于硅纳米线与其表面荧光团之间能量转移的胰蛋白酶荧光化学传感器的悬浊液。分别取浓度为20μg/mL、5μg/mL、2μg/mL的基于硅纳米线与其表面荧光团之间能量转移的胰蛋白酶荧光化学传感器的悬浊液各1mL，加入不同浓度的胰蛋白酶，在荧光光谱仪上测荧光(激发波长489纳米)，得到基于硅纳米线与其表面荧光团之间能量转移的胰蛋白酶荧光化学传感器的相对荧光强度。通过绘制已知胰蛋白酶的浓度和荧光特征峰(520nm)相对强度的定标曲线(如图4所示)，并与待检测的溶液体系中的由所述的胰蛋白酶荧光化学传感器检测到的荧光特征峰的荧光增强进行比较，确定检测的溶液体系中的胰蛋白酶的浓度。
实施例4
1)室温下，将用化学气相沉积法制备得到的直径为10～15nm的硅纳米线浸泡在质量浓度为3％的氢氟酸水溶液中2分钟，取出硅纳米线并用去离子水清洗干净，得到表面具有Si-H键的硅纳米线；将得到的表面具有Si-H键的硅纳米线浸泡于除氧0.5g/mL叔丁氧基N-氨基甲酸丙烯的无水乙醇溶液中，在500W的汞灯下光照1小时，收集硅纳米线，反复用乙醇清洗后浸泡于三氟乙酸：甲醇的体积比为1:5的三氟乙酸甲醇溶液中2小时，得到表面修饰有氨基的硅纳米线，收集并用甲醇反复清洗；
2)将步骤1)清洗后得到的表面修饰有氨基的硅纳米线浸泡于浓度为0.05M的对苯二异硫氰酸酯的乙醇溶液中，在45℃下浸泡1小时后，得到表面修饰有异硫氰酸根的硅纳米线，收集并用乙醇反复清洗；
3)将步骤2)清洗后得到的表面修饰有异硫氰酸根的硅纳米线浸泡于浓度为1mol/L的荧光团标记的胰蛋白酶选择性肽链(N-FITC-RGK-amidation，购于上海淘普生物科技有限公司)的DMF溶液中，并按照每20mL荧光团标记的胰蛋白酶选择性肽链的DMF溶液加入20μL的N,N-二异丙基乙胺加入N,N-二异丙基乙胺，室温下搅拌18小时后，用DMF反复超声清洗除去未反应的荧光团标记的胰蛋白酶选择性肽链，得到基于硅纳米线与其表面荧光团之间能量转移的胰蛋白酶荧光化学传感器。
本实施例中基于硅纳米线与其表面荧光团之间能量转移的胰蛋白酶荧光化学传感器的制备过程如图5所示。基于硅纳米线与其表面荧光团之间能量转移的胰蛋白酶荧光化学传感器对胰蛋白酶的响应机理如图1所示。
Claims (10)
1.一种基于硅纳米线与其表面荧光团之间能量转移的胰蛋白酶荧光化学传感器的制备方法，其特征是，所述的制备方法包括以下步骤：
1)室温下，将硅纳米线浸泡在质量浓度为1％～5％的氢氟酸水溶液中，取出硅纳米线并用去离子水清洗干净，得到表面具有Si-H键的硅纳米线；将得到的表面具有Si-H键的硅纳米线浸泡于除氧的0.025～1g/mL叔丁氧基N-氨基甲酸丙烯的无水乙醇或无水甲醇溶液中，在500W的汞灯下光照1～6小时，收集硅纳米线，反复用有机溶剂清洗后浸泡于三氟乙酸：甲醇的体积比为1:1～1:8的三氟乙酸甲醇溶液中1～4小时，得到表面修饰有氨基的硅纳米线，收集并用有机溶剂反复清洗；
2)将步骤1)清洗后得到的表面修饰有氨基的硅纳米线浸泡于浓度为0.01～1M的对苯二异硫氰酸酯的乙醇溶液中，在温度为30～50℃下浸泡30分钟～2小时后，得到表面修饰有异硫氰酸根的硅纳米线，收集并用有机溶剂反复清洗；
3)将步骤2)清洗后得到的表面修饰有异硫氰酸根的硅纳米线浸泡于浓度为0.5～1.5mol/L的荧光团标记的胰蛋白酶选择性肽链的N,N-二甲基甲酰胺溶液中，并按照每20mL荧光团标记的胰蛋白酶选择性肽链的N,N-二甲基甲酰胺溶液加入10～60μL的N,N-二异丙基乙胺加入N,N-二异丙基乙胺，室温下搅拌10～24小时后，用有机溶剂反复超声清洗除去未反应的荧光团标记的胰蛋白酶选择性肽链，得到基于硅纳米线与其表面荧光团之间能量转移的胰蛋白酶荧光化学传感器。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征是：步骤1)所述的将硅纳米线浸泡在质量浓度为1％～5％的氢氟酸水溶液中，其浸泡的时间为30秒～5分钟。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征是：所述的硅纳米线是由化学气相沉积法制备得到的直径为10～15nm的硅纳米线或由化学刻蚀法制备得到的直径为200～400nm，长度为15～20μm的硅纳米线。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征是：所述的有机溶剂是甲醇、乙醇、N,N-二甲基甲酰胺或丙酮。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征是：所述的荧光团标记的胰蛋白酶选择性肽链中的荧光团是荧光素、罗丹明荧光团或花青荧光团；
所述的荧光团标记的胰蛋白酶选择性肽链中的肽链是含有胰蛋白酶选择性作用位点的不同长度的肽链，其为N-GCGPLGVRGK-amidation或N-RGK-amidation。
6.根据权利要求1或5所述的制备方法，其特征是：所述的荧光团标记的胰蛋白酶选择性肽链是N-FITC-GCGPLGVRGK-amidation或N-FITC-RGK-amidation。
7.一种基于硅纳米线与其表面荧光团之间能量转移的胰蛋白酶荧光化学传感器，其是由权利要求1～6任意一项所述的制备方法制备得到。
8.根据权利要求7所述的基于硅纳米线与其表面荧光团之间能量转移的胰蛋白酶荧光化学传感器，其特征是：所述的胰蛋白酶荧光化学传感器，是通过荧光团标记的胰蛋白酶选择性肽链中的肽链将硅纳米线和荧光团标记的胰蛋白酶选择性肽链中的荧光团共价连接在一起构建而成的胰蛋白酶荧光化学传感器。
9.一种权利要求7或8所述的基于硅纳米线与其表面荧光团之间能量转移的胰蛋白酶荧光化学传感器的应用，其特征是：所述的基于硅纳米线与其表面荧光团之间能量转移的胰蛋白酶荧光化学传感器用于含有胰蛋白酶的溶液体系中的胰蛋白酶的检测。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征是：所述的胰蛋白酶荧光化学传感器，在有胰蛋白酶存在的溶液体系中，所述的胰蛋白酶荧光化学传感器会产生荧光增强，通过绘制已知胰蛋白酶的浓度和荧光特征峰相对强度的定标曲线，并与待检测的溶液体系中的由所述的胰蛋白酶荧光化学传感器检测到的荧光特征峰的荧光增强进行比较，确定待检测的溶液体系中的胰蛋白酶的浓度。
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