CN104147344B - 龙牡壮骨颗粒的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种龙牡壮骨颗粒的制备方法，它是在原有龙牡壮骨颗粒制备工艺的基础上，增加了对清膏进行大孔树脂吸附的工艺，用30‑60％的乙醇洗脱，收集洗脱液并浓缩成稠膏。采用本发明的制备方法，可以减少中药提取物的总量，与没有大孔树脂吸附的工艺相比，提取物的总量可减少42.5％，更令人惊讶的是：提取物总量的减少并没有导致本品药效的降低，在服用相同剂量中药材的前提下，本发明的药效与原方法相比效果相差不大，因此可以将龙牡壮骨颗粒的服用剂量减少。而服用剂量的减少有利于减少辅料，降低成本，减少制剂规格，提高服药顺应性，同时还有利于降低药物的苦味，改善颗粒剂冲服时的口感。

Description

龙牡壮骨颗粒的制备方法

技术领域

本发明涉及中药的制备方法，具体是龙牡壮骨颗粒的制备方法。

背景技术

CN1466976A公开了一种防治佝偻病和骨质疏松症的药物及其制备方法，该药物属于中西药复方制剂，采用健脾补肾的中药进行配伍，从而发挥健脾和胃、强筋壮骨的功效，用于治疗和预防小儿佝偻病、软骨病等。该药物已有20多年的临床应用历史，是武汉健民药业集团股份有限公司的独家品种，商品名为龙牡壮骨颗粒，是中国驰名商标和国家中药保护品种，收载于《中国药典》2010年版一部。

本品的制备方法是将药材水提后直接浓缩、制粒，由于药材提取的出膏率大，造成制剂所需要的辅料量大，服用剂量(每次5-10g)和生产成本高，而且由于服药量大造成药物味苦、口感差，患者服药顺应性差。

发明内容

本发明的目的是对龙牡壮骨颗粒的制备方法进行改进，克服本品的服用剂量大，生产成本高，服药顺应性差等缺陷。

龙牡壮骨颗粒的制备方法，所采用的中药材的重量配比是：

该方法包括以下步骤：

1)以上十六味，将龟甲、五味子醋制，白术、鸡内金炒制，牡蛎煅制，备用；

2)将炒制后的鸡内金粉碎成细纷，备用；

3)取党参、黄芪、麦冬、白术、山药、五味子、茯苓、大枣、甘草九味，加水煎煮三次，每次2小时，合并煎液，滤过；龟甲、龙骨、牡蛎三味加水煎煮四次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液与党参等药材的提取液合并，浓缩至相对密度(相对于水的密度)为1.05-1.10的清膏；

4)将清膏上大孔吸附树脂柱，用30-60％(重量含量)的乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩成稠膏；

5)取稠膏，加入鸡内金粉、乳酸钙、葡萄糖酸钙、维生素D2及辅料，混匀，制成颗粒，干燥，即得。

优选的，所述大孔吸附树脂柱是AB-8型或DA-201型大孔吸附树脂柱。

优选的，所述大孔吸附树脂的用量为中药材总重量的2-5倍。

优选的，所述乙醇水溶液的体积为大孔吸附树脂柱体积的8-15倍。

大孔树脂吸附法是中药领域常用的一种纯化、精制方法，用于除去中药提取物中的无效成分，富集有效成分。但是，中药的成分非常复杂，有效和无效成分之间并没有明显的界限，例如多糖、蛋白质在某些中药中是无效成分，但是在另一些中药中可能是直接发挥药效作用的目标提取成份。本领域技术人员也不可能通过常规的技术手段分析出中药如龙牡壮骨颗粒中究竟哪些是有效成分，哪些是无效成分，现有技术中也没有给出哪些中药可以采用大孔树脂吸附法，哪些中药不能采用大孔树脂吸附法的任何教导。因此，本法一定要根据具体的品种谨慎采用，否则将会把中药中的有效成分当作杂质去掉，从而降低药物的疗效。

采用本发明的制备方法，可以减少中药提取物的总量，与没有大孔树脂吸附的工艺相比，提取物的总量可减少42.5％，更令人惊讶的是：提取物总量的减少并没有导致本品药效的降低，在服用相同剂量中药材的前提下，本发明的药效与原方法相比效果相差不大，因此可以将龙牡壮骨颗粒的服用剂量减少。

而服用剂量的减少有利于减少辅料，降低成本，减少制剂规格，提高服药顺应性，同时还有利于降低药物的苦味，改善颗粒剂冲服时的口感。

具体实施方式

以下结合实施例对本发明进行详细地说明，但不应理解为对本发明的限制。

实施例1

处方：

制法：

1)以上十六味，将龟甲、五味子醋制，白术、鸡内金炒制，牡蛎煅制，备用；

2)将炒制后的鸡内金粉碎成细纷，备用；

3)取党参、黄芪、麦冬、白术、山药、五味子、茯苓、大枣、甘草九味，加水煎煮三次，每次2小时，合并煎液，滤过；龟甲、龙骨、牡蛎三味加水煎煮四次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液与党参等提取液合并，浓缩至相对密度为1.05-1.10的清膏；

4)将清膏上AB-8型大孔吸附树脂柱(1368g AB-8型树脂装柱，树脂重量为药材重量的4倍)，用40％的乙醇18L(为大孔吸附树脂柱体积的12倍)洗脱，收集洗脱液，浓缩成稠膏；

5)取稠膏，加入鸡内金粉、乳酸钙、葡萄糖酸钙、维生素D2及糖粉，混匀，制成颗粒，干燥，即得。

实施例2

处方与制备方法的第1、2、3、5步均与实施例1相同，所不同的是步骤4)为：将清膏上DA-201型大孔吸附树脂柱(684g DA-201型树脂装柱，树脂重量为药材重量的2倍)，用30％的乙醇11.3L(为大孔吸附树脂柱体积的15倍)洗脱，收集洗脱液，浓缩成稠膏。

实施例3

处方与制备方法的第1、2、3、5步均与实施例1相同，所不同的是步骤4)为：将清膏上DA-201型大孔吸附树脂柱(1710g DA-201型树脂装柱，树脂重量为药材重量的5倍)，用60％的乙醇15L(为大孔吸附树脂柱体积的8倍)洗脱，收集洗脱液，浓缩成稠膏。

将实施例1-3与没有进行大孔树脂吸附的对比例1(投料量和制法中的其它步骤与实施例1相同)相比，结果见下表：

	干膏量(g)	辅料量(g)	制剂总量(g)	制剂规格(g/袋)
					实施例1	48.5	555	602	3
实施例2	57.9	665	718	3.6
					实施例3	52.8	630	680	3.4
对比例1	84.3	925	1007	5

从结果可以看出，采用大孔树脂吸附后，中药提取物的总量大幅减少，从而也相应地减少了制剂所需的辅料，以及制剂总量和制剂规格，对比例1的每次服用剂量是5-10g，实施例1的每次服用剂量是3-6g，而服用剂量的减少有利于提高顺应性、降低医疗费用。

实施例4药效试验

龙牡壮骨颗粒的中药部分主要起到健脾和胃的作用，为进一步验证大孔树脂吸附工艺对龙牡壮骨颗粒药效的影响，进行了以下试验。

1.材料与方法

1.1实验材料

实施例1-3和对比例1的中药浸膏，另外增加对比例2、3，对比例2、3的制备工艺如下：

对比例2：处方与制备方法的第1、2、3步均与实施例1相同，所不同的是步骤4)中采用20％的乙醇洗脱。

对比例3：处方与制备方法的第1、2、3步均与实施例1相同，所不同的是步骤4)中采用70％的乙醇洗脱。

各组的剂量设置按照正常成人推荐量25-30g生药材/d，按成人体重60Kg计为0.5g生药材/kg。同时设空白对照组。

1.2实验动物

实验动物中心提供ICR种成年雄性小鼠100只，体重20-25g。室内温度(22±2)℃，相对湿度60％，喂饲基础饲料。进行医学观察3d后按体重随机分成上述7组，每组动物15只。每天分别以实施例1-3和对比例1-3的中药浸膏稀释液灌胃，空白对照组每天以等量生理盐水灌胃，连续灌胃10d，每天1次，每4d称1次动物体重调整灌胃量。

1.3测定指标

1.3.1小鼠进食量与食物利用系数实验在给小白鼠灌胃期问，每天测定其摄食量、摄水量、湿便质量，每3d称体重1次，最终计算各组摄食量的增加和体重增加以及食物利用系数。

食物利用系数＝湿便质量/(摄食量+摄水量)

1.3.2小鼠小肠吸收实验小白鼠连续灌胃10d的最后1次进食后再以4％的木糖液0.3g/kg灌胃，空白对照组以等量生理盐水灌胃，1h后从其眼眶取血，间苯三酚显色法测其血清中木糖的浓度。按下式计算血清中木糖的浓度：血清中木糖浓度(mmol·L^-1)＝{样品吸光度值(Au)/标准液吸光度值(As)}x2

1.3.3小肠推进实验将连续灌胃10d后的各组小鼠禁食24h，期间自由饮水。实施例1-3和对比例1-3组灌胃给予(5mg/kg)复方地芬诺酯，空白对照组给蒸馏水。30min后，实施例1-3和对比例组灌胃给予含中药浸膏的墨汁悬液，空白对照组灌胃给予空白墨汁。25min后颈椎脱臼法处死动物，打开腹腔分离肠系膜。剪取上端自幽门、下端至回盲部的肠管，不加牵引轻轻将小肠拉成直线，测量肠管长度为“小肠总长度”，从幽门至墨汁前沿为“墨汁推进长度”。按下列度算小肠推进率：

小肠推进率(％)＝(墨汁推进长度(cm)/小肠总长度(cm))×100％

1.4统计学方法

实验数据用SPSS1 1.5软件进行ONEWAY处理，结果以表示。

2实验结果

2.1对小鼠体重的影响实验前各组体重差异无统计学意义：实施例1-3和对比例1均能增加试验小鼠的体重，各组与对照组相比差异均无统计学意义(P>0.05)，对比例2和3虽然也能增加试验小鼠的体重，但是效果明显比实施例1-3和对比例1差，尤其是对比例3(70％的乙醇洗脱)几乎没有效果。

表1不同制备方法的浸膏对小鼠体重的影响()

试验组	试验前体重(g)	试验末体重(g)	增重(g)
				实施例1	19.45±2.89	22.98±2.10	3.53±0.35
实施例2	20.22±3.12	23.63±2.59	3.41±0.51
				实施例3	19.23±2.17	22.67±1.58	3.44±0.28
对比例1	19.87±2.56	23.46±2.25	3.59±0.56
				对比例2	20.56±2.11	23.45±1.67	2.89±0.27
对比例3	19.23±2.67	21.40±1.89	1.67±0.33
				空白对照	18.99±2.50	20.11±2.15	1.12±0.31

2.2对小鼠摄食量、食物利用系数的影响

与空白对照组相比，实施例1-3和对比例1均能明显增加小鼠的湿便质量、摄食量和摄水量，从而提高食物利用系数，实施例1-3和对比例1之间差异不明显。对比例2和3对小鼠食物利用系数的影响不明显，与空白对照相比差异不大。结果见表2。

表2不同制备方法的浸膏对小鼠食物利用系数的影响()

试验组	湿便质量(g)	摄食量(g)	摄水量(g)	食物利用系数
					实施例1	1.95±0.28	3.26±0.56	4.17±0.22	0.263±0.14
实施例2	1.85±0.31	2.95±0.43	3.78±0.31	0.275±0.18
					实施例3	1.72±0.22	2.89±0.64	4.21±0.15	0.242±0.07
对比例1	1.99±0.17	3.17±0.59	3.98±0.21	0.278±0.11
					对比例2	1.34±0.21	2.45±0.67	3.89±0.27	0.212±0.16
对比例3	1.38±0.27	3.40±0.89	3.67±0.33	0.195±0.13
					空白对照	1.07±0.21	2.42±0.45	3.48±0.12	0.181±0.08

2.3改善小鼠小肠蠕动抑制作用实验结果

由表3可见，实施例1-3和对比例1的小肠推进率较空白对照组明显增加(P<0.05)，实施例1-3和对比例1之间差异不明显。对比例2和3小肠推进率的影响与空白对照相比区别不大。

表3不同制备方法的浸膏对小鼠小肠推进率的影响()

试验组	墨汁推进长度(cm)	小肠总长度(cm)	小肠推进率(％)
				实施例1	21.49±5.8	39.55±2.9	54.33±6.11
实施例2	34.15±4.7	58.16±3.4	58.72±5.28
				实施例3	27.69±5.1	49.90±3.7	55.49±5.63
对比例1	38.55±4.9	62.91±3.2	61.28±6.77
				对比例2	21.98±5.1	45.22±2.8	48.62±4.19
对比例3	29.80±4.8	56.47±3.9	52.77±5.20
				空白对照	31.47±5.7	68.83±2.8	45.72±5.64

2.4对小鼠小肠吸收的影响

检测小鼠经口腔摄取木糖后其血清中木糖的浓度，木糖浓度越高表明小肠消化吸收功能越好。由表4可以看出，与对照组相比，实施例1-3和对比例1在相用时间内其小肠吸收木糖的量增加，对其小肠吸收功能的影响达显著水平(P<0.05)；但对比例2和3其吸收木糖浓度与对照组相比差异无统计学意义。

表4不同制备方法的浸膏对小鼠小肠吸收的影响()

试验组	吸光度	木糖浓度(mmol/L)
			实施例1	0.164±0.004	0.658±0.312
实施例2	0.151±0.007	0.622±0.288
			实施例3	0.155±0.006	0.635±0.328
对比例1	0.167±0.004	0.698±0.257
			对比例2	0.123±0.005	0.482±0.281
对比例3	0.115±0.004	0.457±0.212
			空白对照	0.092±0.006	0.425±0.240

3.结论

龙牡壮骨颗粒的中药部分主要起到健脾和胃的作用，具有促进消化吸收的功能，从而促进人体对钙和微量元素的吸收、利用，进而用于治疗和预防小儿佝偻病、软骨病、小儿多汗、夜惊、食欲不振、消化不良、发育迟缓等症。由于中药的成分不明确，导致无法确定大孔树脂吸附后除去的成分是不是杂质，本试验首次证明在服用相同剂量中药材的前提下，采用大孔树脂吸附后的中药浸膏其疗效与原工艺相比没有明显降低，从而验证了采用大孔树脂吸附法对龙牡壮骨颗粒进行精制的工艺可行。

Claims (1)

1.龙牡壮骨颗粒的制备方法，其特征在于所采用的中药材的重量配比是：

该方法包括以下步骤：

1)以上十六味，将龟甲、五味子醋制，白术、鸡内金炒制，牡蛎煅制，备用；

2)将炒制后的鸡内金粉碎成细粉，备用；

3)取党参、黄芪、麦冬、白术、山药、五味子、茯苓、大枣、甘草九味，加水煎煮三次，每次2小时，合并煎液，滤过；龟甲、龙骨、牡蛎三味加水煎煮四次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液与党参等药材的提取液合并，浓缩至相对密度为1.05-1.10的清膏；

4)将清膏上大孔吸附树脂柱，用40％的乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩成稠膏；

5)取稠膏，加入鸡内金粉、乳酸钙、葡萄糖酸钙、维生素D2及辅料，混匀，制成颗粒，干燥，即得，

所述大孔吸附树脂柱是AB-8型大孔吸附树脂柱，

所述大孔吸附树脂柱中大孔吸附树脂的重量为中药材总重量的4倍，

所述乙醇的体积为大孔吸附树脂柱体积的12倍。