CN107929512B - 一种采用超高压提取制备龙牡壮骨颗粒的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种采用超高压提取制备龙牡壮骨颗粒的方法，它是先将党参、黄芪、麦冬、龟甲、白术、山药、五味子、龙骨、牡蛎、茯苓、大枣、甘草、鸡内金粉碎后，加水浸泡一段时间，然后再进行超高压提取，超高压提取包括升压阶段、保压阶段、泄压阶段等步骤。采用本发明的方法，与现有的提取方法相比，能够提高提取物中活性成分含量，减少杂质；同时还能提高活性成分的转移率，使提取更加充分。采用该方法制备的龙牡壮骨颗粒具有更好的药效活性。

Description

一种采用超高压提取制备龙牡壮骨颗粒的方法

技术领域

本发明属于制药领域，涉及龙牡壮骨颗粒的制备方法，尤其是一种采用超高压提取制备龙牡壮骨颗粒的方法。

背景技术

CN1466976A公开了一种防治佝偻病和骨质疏松症的药物及其制备方法，该药物属于中西药复方制剂，采用健脾补肾的中药进行配伍，从而发挥健脾和胃、强筋壮骨的功效，用于治疗和预防小儿佝偻病、软骨病等。该药物已有20多年的临床应用历史，是健民药业集团股份有限公司的独家品种，商品名为龙牡壮骨颗粒，“龙牡”是中国驰名商标，龙牡壮骨颗粒是国家中药保护品种，收载于《中国药典》2015年版一部。

随着中药提取技术的不断进步，越来越多的新方法被用于中药活性成分的提取中。CN 104147344A公开了一种龙牡壮骨颗粒的制备方法，该方法将党参、黄芪、麦冬、白术、山药、五味子、茯苓、大枣、甘草九味加水煎煮提取，然后采用大孔树脂吸附，以除掉部分杂质，从而减少服用剂量，提高了用药顺应性。

由于龙牡壮骨颗粒的药材中，龟甲、龙骨、牡蛎都属于动物药，含有大量的矿物质，质地坚硬，因此采用常规的煎煮等方法很难将活性成分提取出来。同时，鸡内金也属于动物药，含有大量的蛋白质等难溶性成分，很难采用常规的溶剂和方法进行提取，因此在CN1466976A和CN 104147344A中均是采用粉碎的方法直接入药，从而导致颗粒的溶解性不好，在冲服时会产生大量的鸡内金沉淀，另外，鸡内金具有难闻的腥味，这种直接入药的方式也导致颗粒冲服时口感很差，患者难以接受。

超高压提取也称超高冷等静压提取，是指用100-1000MPa的流体静压力作用于提取溶剂和中药的混合液上，并在预定压力下保持一段时间，使植物细胞内外压力达到平衡后迅速卸压。由于细胞内外渗透压力忽然增大，细胞膜的结构发生变化，使得细胞内的有效成分能够穿过细胞膜而转移到细胞外的提取液中，达到提取中药有效成分的目的。与其它提取方式相比，超高压提取具有温度低、时间短、效率高等优点。但是，直到目前尚未见采用超高压方法提取制备龙牡壮骨颗粒的报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种超高压提取制备龙牡壮骨颗粒的方法。

本发明提供的方法包括以下步骤：

1)取党参20-90重量份、黄芪10-50重量份、麦冬20-90重量份、龟甲5-30重量份、白术15-60重量份、山药30-120重量份、五味子15-60重量份、龙骨5-30重量份、牡蛎5-30重量份、茯苓20-90重量份、大枣10-50重量份、甘草5-30重量份、鸡内金10-50重量份，将以上药材一起粉碎至20-80目粒度的粉末，然后按药材总重量的5-20倍加水浸泡0.5-3小时，再将药材和水一起装入塑料袋中密封，放入超高压提取装置的提取容器中，在常温下进行超高压提取，提取程序如下：

A升压阶段：在10-30min内将提取容器内的压强升高到200-700Mpa；

B保压阶段：保持压强10-30min；

C泄压阶段：迅速将压强泄为常压；

D重复A-C 1-5次；

2)将塑料袋从提取容器中取出，倒出物料，过滤，离心，将提取液浓缩成稠膏；

3)向稠膏中加入维生素D2 0.002-0.06重量份，乳酸钙40-100重量份、葡萄糖酸钙10-30重量份，以及辅料，混匀，制粒，干燥，即得。

优选地，所述粉末的粒度为40-60目。粒径过大，溶剂不容易透过药材渗入到组织细胞，活性成分与溶剂的接触减少，导致提取效率降低；反之，如果粒径过小，则不仅活性成分溶出增加，药材组织、淀粉、鞣质等杂质类成分的溶出也会增加，反而会导致提取物中的活性成分含量降低。

优选地，步骤1)中，所述水占药材总重量的12倍。提取溶剂太少，则活性成分达到溶解平衡以后难以继续溶出，导致提取效率不高，溶剂太多则会增加成本。

优选地，所述升压阶段为在15min内将提取容器内的压强升高到400Mpa。压力越高，则溶剂浸润和活性成分的传递速度越快，同时还会影响溶剂密度、活度和药材基块结构，使活性成分的溶出速度加快，溶出量增加；但是如果压力过高，同样会使杂质类成分的溶出增加，对提取反而不利而且会增加成本。而升压的速度越快细胞壁越容易破裂。

优选地，所述保压阶段的时间为20min。在此条件下，溶质的溶解能更好地达到平衡。

所述泄压阶段的时间最好控制在15s以内。药材组织细胞的压力从几百兆帕的超高压迅速减为常压，在反向压力的作用下，发生流体以及药材基质体积的爆破膨胀，对药材组织形成强烈的冲击致使发生形变，同时细胞结构出现松散、孔洞、破裂，使药材成分与溶剂充分接触并向外迅速扩散。因此，理论上泄压时间应该越短越好，但如果时间过短，则会导致大量无效成分溶出，对提取反而不利。

优选地，重复A-C 2次，提取的活性成分最充分，继续增加次数会导致杂质提取增加，同时也不利于降低成本。

本发明的有益效果是：

1)采用本发明的方法，与现有的提取方法相比，能够提高提取物中的活性成分含量，减少杂质；同时还能提高活性成分的转移率，使药材利用率更高，提取更加充分。

2)与常规的热回流、煎煮等提取方法相比，本发明在较低的温度(室温)下进行，从而减少了能源消耗以及活性成分破坏，得到的提取物具有更好的药用活性。

3)与常规的提取方式相比，超高压提取对龟甲、龙骨、牡蛎、鸡内金等药材的提取效果更好，能将活性成分更充分地提取出来，从而进一步提高了药效。

4)本发明通过将鸡内金进行提取后入药，从而提高了颗粒冲服时的澄清度，减少了沉淀，同时降低了腥味，改善了口感。

具体实施方式

下面通过具体实施例对本发明进行详细地说明。

实施例1

处方：与CN 104147344A实施例1的处方相同。

制法：1)取党参、黄芪、麦冬、龟甲、白术、山药、五味子、龙骨、牡蛎、茯苓、大枣、甘草、鸡内金，将以上药材一起粉碎至50目粒度的粉末，然后按药材总重量的12倍加水浸泡1小时，再将药材和水一起装入塑料袋中密封，放入超高压提取装置的提取容器中，在常温下进行超高压提取，提取程序如下：

A升压阶段：在15min内将提取容器内的压强升高到400Mpa；

B保压阶段：保持压强20min；

C泄压阶段：在15s以内迅速将压强泄为常压；

D重复A-C 2次；

2)将塑料袋从提取容器中取出，倒出物料，过滤，离心，将提取液浓缩成相对密度为1.35的稠膏；

3)向稠膏中加入维生素D2，乳酸钙、葡萄糖酸钙，以及适量糖粉，混匀，制粒，干燥，即得。

实施例2

处方：与CN 104147344A实施例1的处方相同。

制法：1)取党参、黄芪、麦冬、龟甲、白术、山药、五味子、龙骨、牡蛎、茯苓、大枣、甘草、鸡内金，将以上药材一起粉碎至60目粒度的粉末，然后按药材总重量的8倍加水浸泡2小时，再将药材和水一起装入塑料袋中密封，放入超高压提取装置的提取容器中，在常温下进行超高压提取，提取程序如下：

A升压阶段：在30min内将提取容器内的压强升高到600Mpa；

B保压阶段：保持压强10min；

C泄压阶段：在30s以内迅速将压强泄为常压；

D重复A-C 1次；

2)将塑料袋从提取容器中取出，倒出物料，过滤，离心，将提取液浓缩成稠膏；

3)向稠膏中加入维生素D2，乳酸钙、葡萄糖酸钙，以及适量糖粉，混匀，制粒，干燥，即得。

实施例3

处方：与CN 104147344A实施例1的处方相同。

制法：1)取党参、黄芪、麦冬、龟甲、白术、山药、五味子、龙骨、牡蛎、茯苓、大枣、甘草、鸡内金，将以上药材一起粉碎至40目粒度的粉末，然后按药材总重量的15倍加水浸泡0.5小时，再将药材和水一起装入塑料袋中密封，放入超高压提取装置的提取容器中，在常温下进行超高压提取，提取程序如下：

A升压阶段：在10min内将提取容器内的压强升高到300Mpa；

B保压阶段：保持压强30min；

C泄压阶段：在10s以内迅速将压强泄为常压；

D重复A-C 3次；

2)将塑料袋从提取容器中取出，倒出物料，过滤，离心，将提取液浓缩成稠膏；

3)向稠膏中加入维生素D2，乳酸钙、葡萄糖酸钙，以及适量糖粉，混匀，制粒，干燥，即得。

实施例4

处方：与CN 104147344A实施例1的处方相同。

制法：1)取党参、黄芪、麦冬、龟甲、白术、山药、五味子、龙骨、牡蛎、茯苓、大枣、甘草、鸡内金，将以上药材一起粉碎至20目粒度的粉末，然后按药材总重量的20倍加水浸泡1小时，再将药材和水一起装入塑料袋中密封，放入超高压提取装置的提取容器中，在常温下进行超高压提取，提取程序如下：

A升压阶段：在20min内将提取容器内的压强升高到250Mpa；

B保压阶段：保持压强20min；

C泄压阶段：在15s以内迅速将压强泄为常压；

D重复A-C 5次；

2)将塑料袋从提取容器中取出，倒出物料，过滤，离心，将提取液浓缩成稠膏；

3)向稠膏中加入维生素D2，乳酸钙、葡萄糖酸钙，以及适量糖粉，混匀，制粒，干燥，即得。

实施例5

处方：与CN 104147344A实施例1的处方相同。

制法：1)取党参、黄芪、麦冬、龟甲、白术、山药、五味子、龙骨、牡蛎、茯苓、大枣、甘草、鸡内金，将以上药材一起粉碎至80目粒度的粉末，然后按药材总重量的5倍加水浸泡3小时，再将药材和水一起装入塑料袋中密封，放入超高压提取装置的提取容器中，在常温下进行超高压提取，提取程序如下：

A升压阶段：在15min内将提取容器内的压强升高到700Mpa；

B保压阶段：保持压强10min；

C泄压阶段：在25s以内迅速将压强泄为常压；

D重复A-C 3次；

2)将塑料袋从提取容器中取出，倒出物料，过滤，离心，将提取液浓缩成稠膏；

3)向稠膏中加入维生素D2，乳酸钙、葡萄糖酸钙，以及适量糖粉，混匀，制粒，干燥，即得。

试验例1

将实施例1-5步骤2)中的稠膏干燥至恒重，称重，采用HPLC法检测干膏中的黄芪苷含量，根据药材中的黄芪苷含量计算转移率，计算公式如下：

其中，黄芪药材中黄芪苷的含量为0.16％。

同时按处方配比取党参、黄芪、麦冬、龟甲、白术、山药、五味子、龙骨、牡蛎、茯苓、大枣、甘草、鸡内金共十三味药材，采用常规的加水煎煮提取，将提取液浓缩干燥后作为对比例。

表1

	干膏量(g)	黄芪苷含量(％)	黄芪苷转移率(％)
				实施例1	61.3	0.050	85.1
实施例2	62.5	0.048	83.3
				实施例3	66.8	0.042	77.9
实施例4	70.2	0.038	74.1
				实施例5	69.1	0.039	74.9
对比例	82.4	0.029	66.4

从以上结果可以看出，采用超高压提取，得到的干膏中黄芪苷的含量及转移率均高于常规的加水煎煮提取。说明本发明的提取物中活性成分的含量更高，杂质更少，提取更加充分。

试验例2药效试验

1.试验方法

实验动物中心提供ICR种成年雄性小鼠70只，体重20-25g。室内温度(22±2)℃，相对湿度60％，喂饲基础饲料。进行医学观察3d后按体重随机分成上述7组，每组动物10只。每天分别以实施例1-5和对比例的中药干膏稀释液灌胃，空白对照组每天以等量生理盐水灌胃，连续灌胃10d，每天1次，每4d称1次动物体重调整灌胃量。各组的剂量设置按照正常成人推荐量25-30g生药材/d，按成人体重60Kg计为0.5g生药材/kg。

2.测定指标

2.1对小鼠体重的影响：灌胃前后分别对小鼠称重，计算小鼠体重的增加值。

2.2小鼠小肠吸收实验：小白鼠连续灌胃10d的最后1次进食后再以4％的木糖液0.3g/kg灌胃，空白对照组以等量生理盐水灌胃，1h后从其眼眶取血，间苯三酚显色法测其血清中木糖的浓度。按下式计算血清中木糖的浓度：

血清中木糖浓度(mmol·L^-1)＝{样品吸光度值(Au)/标准液吸光度值(As)}x2

3.实验结果

3.1对小鼠体重的影响：从表2的结果可以看出，实施例1-5和对比例均能增加试验小鼠的体重，各组与空白对照组相比具有显著差异，且实施例1-5的增重效果更明显。

表2不同提取方法对小鼠体重的影响

试验组	增重(g)
		实施例1	3.7±0.5
实施例2	3.6±0.5
		实施例3	3.6±0.4
实施例4	3.4±0.3
		实施例5	3.2±0.3
对比例	3.1±0.3
		空白对照	1.4±0.3

3.2对小鼠小肠吸收的影响

检测小鼠经口腔摄取木糖后其血清中木糖的浓度，木糖浓度越高表明小肠消化吸收功能越好。由表3可以看出，与对照组相比，实施例1-5和对比例在相用时间内其小肠吸收木糖的量增加，对其小肠吸收功能的影响达显著水平(P<0.05)，且实施例1-5促进小肠吸收的效果更加明显。

表3不同提取方法对小鼠小肠吸收的影响

试验组	木糖浓度(mmol/L)
		实施例1	0.88
实施例2	0.84
		实施例3	0.82
实施例4	0.78
		实施例5	0.77
对比例	0.75
		空白对照	0.46

以上试验结果证明，采用本发明提取方法制备的龙牡壮骨颗粒具有健脾和胃，促进小鼠体重增加和小肠吸收的功能，且效果优于现有的水煎煮提取方法，表明采用超高压提取的活性成分种类更多，含量更高。

Claims (1)

1.一种采用超高压提取制备龙牡壮骨颗粒的方法，其特征在于包括以下步骤：

1)取党参20-90重量份、黄芪10-50重量份、麦冬20-90重量份、龟甲5-30重量份、白术15-60重量份、山药30-120重量份、五味子15-60重量份、龙骨5-30重量份、牡蛎5-30重量份、茯苓20-90重量份、大枣10-50重量份、甘草5-30重量份、鸡内金10-50重量份，将以上药材一起粉碎至40-60目粒度的粉末，然后按药材总重量的12倍加水浸泡0.5-3小时，再将药材和水一起装入塑料袋中密封，放入超高压提取装置的提取容器中，在常温下进行超高压提取，提取程序如下：

A升压阶段：在15min内将提取容器内的压强升高到400Mpa；

B保压阶段：保持压强20min；

C泄压阶段：迅速将压强泄为常压；

D重复A-C 2次；

2)将塑料袋从提取容器中取出，倒出物料，过滤，离心，将提取液浓缩成稠膏；

3)向稠膏中加入维生素D2 0.002-0.06重量份，乳酸钙40-100重量份、葡萄糖酸钙10-30重量份，以及辅料，混匀，制粒，干燥，即得。