CN104147121B - 一种植物源水产品麻醉/休眠诱导剂及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种植物源水产品麻醉/休眠诱导剂及其制备方法和应用。该植物源水产品麻醉/休眠诱导剂包括巴东醉鱼草叶提取物与厚果崖豆藤果实提取物。克服了目前市场上使用的麻醉剂、镇静剂等所存在的安全、成本、效果等问题，提供天然绿色、成本低廉、安全可靠、效果优异、植物源水产品麻醉/休眠诱导剂。
Description
技术领域
本发明涉及水产品麻醉/休眠诱导剂技术领域，特别是涉及一种植物源水产品麻醉/休眠诱导剂及其制备方法和应用。
背景技术
我国水产品资源丰富，种类繁多，具有高蛋白、低脂肪、营养丰富且平衡等特点，是现代人类摄取最重要的动物性蛋白质来源之一。由于水产品具有独特的风味以及优越的营养特征，国民选择食用水产品代替畜禽肉类提供人体所需蛋白质，因而，人们对其需求量逐年递增。同时，随着水产养殖业的快速发展，目前，我国已被列入全球最大的水产品养殖国家行列中。在养殖过程中，由于时常需要对活体水产品进行倒池、采卵、采精、采血等操作，会导致产生强烈的应激反应，因此，经常使用各种麻醉剂使之镇静以方便开展相关作业。
近年来，人们对水产品的需求日益趋向鲜活化，使得鲜活水产品将逐渐占领国内外大部分水产市场份额。因此，保活运输就成为解决鲜活水产品供求平衡的关键。在水产品批量活体运输时，养殖户、商家均使用适量麻醉剂对其进行麻醉以降低应激反应，提高成活率，增加运输密度，延长保活时间。水产品从养殖到销售至终端客户，需要历经倒池、捕捞、转移、运输、包装、装卸、配送等各环节，商户均采用麻醉剂降低上述操作所带来的应激，到达提高成活率的目的。目前，水产品麻醉剂包括MS-222、丁香酚、盐酸苯佐卡因、液态二氧化碳、喹哪啶、2一苯氧乙醇、苄咪甲酯、苯唑卡因等，而市场上使用最多的麻醉剂主要有MS-222、丁香酚两种。但这些麻醉剂均存在安全问题，虽然美国FDA允许在规定范围内使用MS-222作为商品鱼的麻醉剂，但要求其在21d后才能够进行出售，同时，MS-222溶液应避免阳光直射，否则对水产品有较强的毒性。我国并未明确规定丁香酚作为麻醉剂在水产品中的使用量，目前，对于丁香酚使用后的代谢，机体残留等安全问题的分析尚未见权威报道。
水产品无水保活运输是一种低成本、高存活率、长时间、高品质，且优于其它相关技术的绿色保活方法。我们前期授权的发明专利（ZL201210251826.6）表明该技术关键工艺包括：停食暂养、梯度降温、冷驯化、无水包装、冰温运输、唤醒。其中，冷驯化的主要目的就是让不同水产品进入休眠状态，从而降低代谢作用，呼吸频率，耗氧量等实现无水运输。但是后续我们通过实验发现仅依靠冷驯化使水产品休眠只能在部分水产品中实现，而对于耗氧量大且体积较大的洄游性鱼类以及名贵的虾类等水产品难以较好地实现休眠作用。因此，有必要研究一种天然绿色、成本低廉、安全可靠、效果优异、植物源水产品麻醉剂/休眠诱导剂来作为低温驯化诱导休眠的协同技术。
醉鱼草Buddleja lindleyana Fortune为马钱科醉鱼草属植物，药用全草，醉鱼草属植物分布于南美洲、亚洲及非洲南部的热带、亚热带地区，共有约100种，我国有50余种，分布于全国各地并以西南分布最多。醉鱼草性温、辛苦，具祛风杀虫、活血之功效，主治流行性感冒、咳嗽、哮喘、风湿美节痛、蛔虫、钩虫病、跌打损伤、出血、痄腮、瘰疬、风寒牙痛等。
豆科(Leguminosae)蝶形花亚科(Papilionaceae)崖豆藤属(Millettia)植物广泛分布于热带与亚热带地区。根据《中国植物志》记载，我国共有53种，其中含有38个原种和l5个变种。在世界范围内，崖豆藤属共有200多种植物，近1个世纪以来，它们一直是天然产物科学家十分感兴趣的研究对象。二十世纪早期，国外研究人员以台湾产崖豆藤属植物展开过初步探索，但无跟踪报道。目前，全世界科研工作者共从崖豆藤属植物中提取到300多种化学物质及活性成分，包括黄酮类、萜类、甾体类、生物碱等。其中很多成分具有抗寄生虫、抗雌激素、抗肿瘤、抗炎、抗菌、抗病毒等活性。厚果崖豆藤是豆科崖豆藤属植物之一，味苦辛、热，有毒，具有杀虫、攻毒、止痛之功效。分布于西南、江西、福建、广东、广西等地，主治疥疮、癣、癞、痧气腹痛，小儿疳积等疼痛。
CN 103239463A在《一种水产品麻醉剂及其制备方法》中介绍了以α- 葡糖基丁香酚为主要成分，并与α- 葡萄糖苷酶协同作用的针对水产品的麻醉剂。该发明虽然麻醉效果较好，麻醉时间短，但是仍然存在安全隐患，该麻醉剂在水产品体内的残留量以及残留时间等都存在疑问。因此，为保证水产品在养殖、流通、试验等过程中的安全性，方便性，精确性等效果，研究一种安全可靠、成本低廉、天然绿色、效果优异的植物源水产品麻醉/休眠诱导剂迫在眉睫。
发明内容
本发明的目的就是针对上述存在的缺陷而提供一种植物源水产品麻醉/休眠诱导剂及其制备方法和应用。本发明针对水产品从养殖到销售过程中的捕捞、倒池、转移、流通、运输、包装、装卸、配送等环节，也包括试验过程中的采血、采卵、采精等操作而展开的麻醉镇定；以及用于水产品无水保活运输前期处理时诱导休眠，用以作为目前通过梯度降温达到诱导休眠目的的替代技术。克服了目前市场上使用的麻醉剂、镇静剂等所存在的安全、成本、效果等问题，提供天然绿色、成本低廉、安全可靠、效果优异、植物源水产品麻醉/休眠诱导剂。
本发明的一种植物源水产品麻醉/休眠诱导剂及其制备方法和应用技术方案为，一种植物源水产品麻醉/休眠诱导剂，包括巴东醉鱼草叶提取物与厚果崖豆藤果实提取物。
巴东醉鱼草叶与厚果崖豆藤果实的质量比为：3-4:5-6。
所述的一种植物源水产品麻醉/休眠诱导剂的制备方法，将巴东醉鱼草叶与厚果崖豆藤果实分别进行粉碎、提取粗提液，将两者粗体液混合后再进行超声提取、浓缩，冷冻干燥后得到麻醉/休眠诱导剂。
所述的一种植物源水产品麻醉/休眠诱导剂的制备方法，包括以下步骤：
(1)巴东醉鱼草叶预处理
将醉鱼草叶用蒸馏水清洗，沥水后烘干，将醉鱼草叶取出放置在4℃冷库中冷却，备用；
(2)巴东醉鱼草叶溶液的制备
将步骤(1)中制得的醉鱼草叶放入粉碎机中粉碎，加入蒸馏水，加热并搅拌后静置，过滤，制得巴东醉鱼草叶粗提液，备用；
或将步骤(1)中制得的醉鱼草叶粉碎，加入50%酒精，室温条件下搅拌，转移至4 ℃冷库中静置，过滤，制得巴东醉鱼草叶粗提液，备用；
(3)厚果崖豆藤果实溶液的制备
将厚果崖豆藤果实去皮后，粉碎，加入蒸馏水，加热并搅拌，转移至4 ℃冷库中静置，过滤，制得厚果崖豆藤果实粗提液，备用；
或将厚果崖豆藤果实，去皮后，粉碎，加入50%酒精，在室温条件下，搅拌，转移至4℃冷库中静置，过滤，制得厚果崖豆藤果实粗提液，备用；
(4)复合溶液的制备
将步骤(2)中制得的巴东醉鱼草叶粗提液与步骤(3)中制得的厚果崖豆藤果实粗提液混合并搅拌后静置，过滤，制得复合溶液，备用；
(5)超声提取液的制备
将步骤(4)中制得的复合溶液进行超声提取后进行离心分离，制得超声提取液，备用；
(6)浓缩液的制备
将步骤(5)中制得的超声提取液进行浓缩，制取复合浓缩液，备用；
(7)麻醉/休眠诱导剂的制备
将步骤(6)中制得的复合浓缩液冷冻干燥，制得复合粉末，即麻醉/休眠诱导剂；
巴东醉鱼草叶粗体液的制备具体为：
(1)巴东醉鱼草叶预处理
称取醉鱼草叶30-40份，采用蒸馏水清洗10-15 min后，沥水1-2 h，放入温度为55-65 ℃的烘箱中，均匀铺洒在烘箱内托盘上，烘干45-75 min，将醉鱼草叶取出放置在4℃冷库中冷却30-45 min，备用；
(2)巴东醉鱼草叶溶液的制备
将步骤(1)中制得的醉鱼草叶放入粉碎机中，粉碎5-10 min，倒入储存罐中，并按粉:水为1-3:300-500加入蒸馏水，再将其完全转移至搅拌器中，加热至45-50 ℃，并以转速为120-320 rmp搅拌5-10 min，室温静置15-20 min，将四块医用纱布叠加进行过滤，制得巴东醉鱼草叶粗提液，备用；
或将步骤(1)中制得的醉鱼草叶放入粉碎机中，粉碎2-3 min，倒入储存罐中，将按粉:酒精为1-3:100-200加入50%酒精，再将其完全转移至搅拌器中，在室温条件下，以转速为80-120 rmp搅拌3-5 min，转移至4 ℃冷库中静置5-8 min，将四块医用纱布叠加进行过滤，制得巴东醉鱼草叶粗提液，备用；
厚果崖豆藤果实粗体液的制备具体为：
(3)厚果崖豆藤果实溶液的制备
称取厚果崖豆藤果实50-60份，去皮后，放入粉碎机中，粉碎15-30 min，将粉碎后的粉末倒入储存罐中，并按粉:水为1-3:150-280加入蒸馏水，再将其完全转移至搅拌器中，加热至65-75 ℃，并以转速为360-480 rmp搅拌5-8 min，转移至4 ℃冷库中静置25-30min，将四块医用纱布叠加进行过滤，制得厚果崖豆藤果实粗提液，备用；
或称取厚果崖豆藤果实50-60份，去皮后，放入粉碎机中，粉碎8-15 min，将粉碎后的粉末倒入储存罐中，并按粉:酒精为1-3:100-200加入50%酒精，再将其完全转移至搅拌器中，在室温条件下，以转速为80-120 rmp搅拌3-5 min，转移至4 ℃冷库中静置5-8 min，将四块医用纱布叠加进行过滤，制得厚果崖豆藤果实粗提液，备用；
复合溶液到麻醉/休眠诱导剂的具体步骤为：
(4)复合溶液的制备
将步骤(2)中制得的巴东醉鱼草叶粗提液与步骤(3)中制得的厚果崖豆藤果实粗提液混合，并以转速为120-260 rmp搅拌10-15 min，室温静置1-2 h，将八块医用纱布叠加进行过滤，制得复合溶液，备用；
(5)超声提取液的制备
将步骤(4)中制得的复合溶液进行超声波提取，搅拌速度为80-120 rmp，超声波频率为40 KHZ，温度为45-60 ℃，并提取20-30 min后，停止15-20min，再继续提取20-30 min，将提取液转移至离心机中，以3500-4500 rmp转速进行分离，制得超声提取液，备用；
(6)浓缩液的制备
将步骤(5)中制得的超声提取液倒入浓缩罐中，设定真空度为-0.065--0.088Mpa，水浴温度为75-90 ℃，浓缩至比重为1.2-1.4时，停止浓缩，制得复合浓缩液，备用；
(7)麻醉/休眠诱导剂的制备
将步骤(6)中制得的复合浓缩液装入冷冻瓶内，放入-18 ℃的冰箱内冷冻12-36h，冷冻瓶连接至冷冻干燥机上，设定冷阱温度为-45--50 ℃，干燥室压力为60-80 Pa，干燥12-30 h，制得复合粉末，即麻醉/休眠诱导剂。
麻醉剂的使用方法：将麻醉/休眠诱导剂50-65 g，倒入1000 L清水中，在室温下以80-120 rmp搅拌5-10 min，制得麻醉剂溶液，将不同水产品放入数分钟后即可达到麻醉效果。
休眠诱导剂的使用方法：将麻醉/休眠诱导剂8-15 g，倒入1000 L清水中，在室温下以80-120 rmp搅拌2-5 min，制得休眠诱导剂溶液，将不同水产品放入，并进行诱导休眠，再参照水产品无水保活方法 （ZL201210251826.6），将其直接转移至生态冰温进行无水保活。
本发明的有益效果为：本发明针对水产品从养殖到销售过程中的捕捞、倒池、转移、流通、运输、包装、装卸、配送等环节，也包括试验过程中的采血、采卵、采精等操作而展开的麻醉镇定；以及用于水产品无水保活运输前期处理时诱导休眠，用以作为目前通过梯度降温达到诱导休眠目的的替代技术。克服了目前市场上使用的麻醉剂、镇静剂等所存在的安全、成本、效果等问题，提供一种天然绿色、成本低廉、安全可靠、效果优异、植物源水产品麻醉/休眠诱导剂。
附图说明：
图1所示为本发明的工业化实现系统图。
其中，1-清洗车间，2-烘干车间，3-粉碎车间，4-制液车间，5-提取车间，6-浓缩车间，7-干燥车间，8-入口，9-收料箱，10-U型传送带，11-清洗机，12-地沟，13-水池，14-水管，15-物料传送带，16-干燥箱，17-粉碎机，18-筛选过目机，19-搅拌机，20-管式过滤器，21-超声提取器，22-三组吊袋离心机，23-流槽，24-管道，25-浓缩罐，26-真空冷冻干燥机，27-全自动粉剂灌装压塞旋盖机。
具体实施方式：
为了更好地理解本发明，下面用具体实例来详细说明本发明的技术方案，但是本发明并不局限于此。
实施例１
本发明的植物源水产品麻醉/休眠诱导剂的制备及使用方法，包括以下步骤：
(1)巴东醉鱼草叶预处理
称取醉鱼草叶35份，采用蒸馏水清洗12.5 min后，沥水1.5 h，放入温度为60 ℃的烘箱中，均匀铺洒在烘箱内托盘上，烘干55 min，将醉鱼草叶取出放置在4 ℃冷库中冷却40min，备用；
(2)巴东醉鱼草叶溶液的制备
将步骤(1)中制得的醉鱼草叶放入粉碎机中，粉碎8 min，倒入储存罐中，并按粉:水为3:500加入蒸馏水，再将其完全转移至搅拌器中，加热至50 ℃，并以转速为140 rmp搅拌5 min，室温静置15min，将四块医用纱布叠加进行过滤，制得巴东醉鱼草叶粗提液，备用；
或将步骤(1)中制得的醉鱼草叶放入粉碎机中，粉碎2 min，倒入储存罐中，将按粉:酒精为1:100加入50%酒精，再将其完全转移至搅拌器中，在室温条件下，以转速为80rmp搅拌3 min，转移至4 ℃冷库中静置6 min，将四块医用纱布叠加进行过滤，制得巴东醉鱼草叶粗提液，备用；
(3)厚果崖豆藤果实溶液的制备
称取厚果崖豆藤果实50份，去皮后，放入粉碎机中，粉碎15 min，将粉碎后的粉末倒入储存罐中，并按粉:水为1:150加入蒸馏水，再将其完全转移至搅拌器中，加热至65 ℃，并以转速为360 rmp搅拌5 min，转移至4 ℃冷库中静置25 min，将四块医用纱布叠加进行过滤，制得厚果崖豆藤果实粗提液，备用；
或称取厚果崖豆藤果实50份，去皮后，放入粉碎机中，粉碎9 min，将粉碎后的粉末倒入储存罐中，并按粉:酒精为1:100加入50%酒精，再将其完全转移至搅拌器中，在室温条件下，以转速为80 rmp搅拌3 min，转移至4 ℃冷库中静置5 min，将四块医用纱布叠加进行过滤，制得厚果崖豆藤果实粗提液，备用；
(4)复合溶液的制备
将步骤(2)中制得的巴东醉鱼草叶粗提液与步骤(3)中制得的厚果崖豆藤果实粗提液混合，并以转速为190 rmp搅拌12 min，室温静置1 h，将八块医用纱布叠加进行过滤，制得复合溶液，备用；
(5)超声提取液的制备
将步骤(4)中制得的复合溶液转移至超声循环提取机中，开启电源，调节搅拌速度为100 rmp，超声波频率为40 KHZ，温度为50 ℃，并提取20 min后，停止15 min，再继续提取30 min，关闭电源，将提取液转移至三足吊袋式离心机中，以4500 rmp转速进行分离，制得超声提取液，备用；
(6)浓缩液的制备
将步骤(5)中制得的超声提取液倒入浓缩罐中，设定真空度为-0.07 Mpa，水浴温度为80℃，浓缩至比重为1.2 时，停止浓缩，制得复合浓缩液，备用；
(7)麻醉/休眠诱导剂的制备
将步骤(6)中制得的复合浓缩液装入冷冻瓶内，放入-18 ℃的冰箱内冷冻18 h，冷冻瓶连接至冷冻干燥机上，设定冷阱温度为-50 ℃，干燥室压力为65 Pa，干燥22 h，制得复合粉末，即麻醉/休眠诱导剂；
麻醉剂的使用方法：
以鲫鱼成鱼（体重300-400g）为例，称取步骤(7)中制得的复合粉末50 g，倒入1000L清水中，在室温下以80 rmp搅拌8 min，制得麻醉剂溶液，水温调节为18 ℃，连接曝气石向水中通入空气，将鲫鱼成鱼放入数分钟后即可达到麻醉效果。
对照例1
与实施例1不同之处在于，本对照例采用公开号为CN 103239463 A的专利申请中所述方法制备的麻醉剂按照最佳配比加入1000 L养殖水中进行麻醉；
对照例2
与实施例1不同之处在于，本对照例采用丁香酚对鲫鱼成鱼麻醉的最佳效果配比40mg/L加入1000 L养殖水中进行麻醉；
对照例3
与实施例1不同之处在于，本对照例采用MS-222对鲫鱼成鱼麻醉的最佳效果配比50mg/L加入1000 L养殖水中进行麻醉；
表1 麻醉效果比较
。
麻醉效果主要取决于麻醉剂使动物进入麻醉状态所需要时间与麻醉消失时间，这两者时间越短说明麻醉效果越好。从麻醉效果比较表可知，实施例1使鲫鱼完全失衡的时间仅需要2min15s，其它对照组所需时间均大于5min，是实施例1的两倍以上，其中对照例1完全失衡的时间则需要10min52s。实施例1处理后的鲫鱼平均恢复时间为8min32s，对照例3平均恢复时间远远大于实施例1为26min27s，对照例1与对照例2平均恢复时间已大于30min以上，明显超过对照例3，其中对照例1平均恢复时间最长，为38min。完全恢复平衡并暂养48h，测得存活率，实施例1可达100%，而对照组存活率均低于实施例1，其中对照例2存活率仅为83.9%。综述所示，实施例1的麻醉效果明显优于各对照组。
表2 麻醉剂残留比较
。
采用上述实施例1与3组对照对鲫鱼进行了麻醉处理，分别在麻醉前、完全麻醉时，麻醉后48h对鲫鱼血液进行了残留检测。从表2可以得出，实施例1仅在完全麻醉时残留量为0.1μg/ml，48h后则为零残留。对照组均在完全麻醉时残留量达到最高水平，48h后残留量明显降低，但仍然存在残留，其中对照例2残留量最高，为16.9μg/ml。综上所述，实施例1中鲫鱼完全麻醉时的残留量仅为0.1μg/ml，在麻醉48h后残留量为零，因此，是安全可靠，天然绿色的麻醉剂。
表3 鲫鱼肌糖原含量的变化
。
采用上述实施例1与3组对照对鲫鱼进行了麻醉处理，分别在麻醉前、完全失衡时、恢复平衡时、平衡后48h时对鲫鱼背部肌肉肌糖原含量进行了测定。从表3可以得出，各对照组对鲫鱼麻醉完全失衡时其肌糖原含量的下降幅度均大于实施例1；在恢复平衡时，实施例1最为接近麻醉前肌糖原含量，而对照组肌糖原含量也在逐步上升；平衡后48h实施例1肌糖原含量已达到麻醉前正常值，而对照组肌糖原含量处于接近麻醉前值。综上所述，实施例1麻醉过程中其肌糖原含量相对其它对照组较为稳定，且影响较小。
表4 鲫鱼血清皮质醇含量的变化
。
采用上述实施例1与3组对照对鲫鱼进行了麻醉处理，分别在麻醉前、完全失衡时、恢复平衡时、平衡后48h时对鲫鱼血清皮质醇含量进行了测定。从表4可以得出，实施例1处理的鲫鱼其皮质醇含量从麻醉前的1582.52mg/g降低到完全失衡的1394.66mg/g，而对照例1与对照例3处理的含量已分别降至765.13mg/g和765.13mg/g，对照例2处理的含量已降至1038.42mg/g。当恢复平衡时，与对照组相比，实施例1处理的含量最接近麻醉前。平衡后48h时，实施例1处理的含量已经到达正常值，而对照组处理的含量均向正常值靠近。由此说明，实施例1处理后对鲫鱼血液皮质醇含量的影响较小，使其含量趋于稳定，而对照组处理后则对其皮质醇含量影响较大，而且稳定性较差。
休眠剂的使用方法：
以青石斑鱼（体重500-600 g）为例，称取步骤(7)中制得的复合粉末10 g，倒入1000 L清水中，在室温下以100 rmp搅拌3 min，制得麻醉剂溶液，水温调节为20 ℃，连接曝气石向水中通入空气，将青石斑鱼放入进行诱导休眠，同时，进行梯度降温至2.5℃，（参照CN 102823523 A方法）再充氧包装直接转移至2.5℃冷库内进行无水保活。具体降温速率如表5所示：
表5
。
对照例4
与实施例1不同之处在于，本对照例不加入任何休眠剂，只根据实施例1中的降温速率进行降温至2.5℃，再充氧包装直接转移至2.5℃冷库内进行无水保活。
对照例5
与实施例1不同之处在于，本对照例未进行梯度降温，将青石斑鱼放入制得的休眠剂溶液中进行诱导休眠，待24h后完全休眠时，再充氧包装直接转移至2.5℃冷库内进行无水保活。
表6 青石斑鱼呼吸频率的变化
。
呼吸频率是鱼类状态以及机体代谢的重要表现特征，呼吸频率越低，其机体代谢越低，其休眠状态越深入。从表6可以得出，随着时间的延长，三组青石斑鱼呼吸频率均呈现降低趋势，其中实施例1降低速率最快。在3h时，各组呼吸频率次数十分接近，而到24h时，实施例1处理的青石斑鱼呼吸频率降至20次/min，对照例4与对照例5处理的青石斑鱼呼吸频率分别降至43次/min和27次/min。综上所述，24h时，实施例1处理的青石斑鱼机体代谢达到最低限，休眠状态也达到最佳点，对照例4处理的青石斑鱼次之。
表7 青石斑鱼无水保活时间与成活率的关系
。
从表7可以得出，随着保活时间的延长，对照例4与对照例5呈下降趋势，其中对照例1自36h开始就下降，72h时，成活率仅为52%。对照例2从60h时起开始下降，72h时，成活率为89%，而实施例1基本处于平稳状态，60h前成活率均为100%，72h时，成活率高达为99%。由此可见，实施例1处理的青石斑鱼无水保活时间最长，成活率最高，明显优越于对照组。
实施例2
一种植物源水产品麻醉/休眠诱导剂的制备及使用方法，包括以下步骤：
(1)巴东醉鱼草叶预处理
称取醉鱼草叶36份，采用蒸馏水清洗14 min后，沥水2 h，放入温度为55 ℃的烘箱中，均匀铺洒在烘箱内托盘上，烘干70 min，将醉鱼草叶取出放置在4 ℃冷库中冷却38min，备用；
(2)巴东醉鱼草叶溶液的制备
将步骤(1)中制得的醉鱼草叶放入粉碎机中，粉碎10 min，倒入储存罐中，并按粉:水为1.5:380加入蒸馏水，再将其完全转移至搅拌器中，加热至45 ℃，并以转速为320 rmp搅拌5 min，室温静置18 min，将四块医用纱布叠加进行过滤，制得巴东醉鱼草叶粗提液，备用；
或将步骤(1)中制得的醉鱼草叶放入粉碎机中，粉碎3 min，倒入储存罐中，将按粉:酒精为1:150加入50%酒精，再将其完全转移至搅拌器中，在室温条件下，以转速为100rmp搅拌5 min，转移至4 ℃冷库中静置7 min，将四块医用纱布叠加进行过滤，制得巴东醉鱼草叶粗提液，备用；
(3)厚果崖豆藤果实溶液的制备
称取厚果崖豆藤果实56份，去皮后，放入粉碎机中，粉碎25 min，将粉碎后的粉末倒入储存罐中，并按粉:水为3:280加入蒸馏水，再将其完全转移至搅拌器中，加热至65 ℃，并以转速为420 rmp搅拌7 min，转移至4 ℃冷库中静置30 min，将四块医用纱布叠加进行过滤，制得厚果崖豆藤果实粗提液，备用；
或称取厚果崖豆藤果实58份，去皮后，放入粉碎机中，粉碎10 min，将粉碎后的粉末倒入储存罐中，并按粉:酒精3:200加入50%酒精，再将其完全转移至搅拌器中，在室温条件下，以转速为120 rmp搅拌4 min，转移至4 ℃冷库中静置8 min，将四块医用纱布叠加进行过滤，制得厚果崖豆藤果实粗提液，备用；
(4)复合溶液的制备
将步骤(2)中制得的巴东醉鱼草叶粗提液与步骤(3)中制得的厚果崖豆藤果实粗提液混合，并以转速为210 rmp搅拌13 min，室温静置1 h，将八块医用纱布叠加进行过滤，制得复合溶液，备用；
(5)超声提取液的制备
将步骤(4)中制得的复合溶液转移至超声循环提取机中，开启电源，调节搅拌速度为100 rmp，超声波频率为40 KHZ，温度为50 ℃，并提取20 min后，停止16 min，再继续提取20 min，关闭电源，将提取液转移至三足吊袋式离心机中，以5500 rmp转速进行分离，制得超声提取液，备用；
(6)浓缩液的制备
将步骤(5)中制得的超声提取液倒入浓缩罐中，设定真空度为-0.072 Mpa，水浴温度为80 ℃，浓缩至比重为1.35时，停止浓缩，制得复合浓缩液，备用；
(7)麻醉/休眠诱导剂的制备
将步骤(6)中制得的复合浓缩液装入冷冻瓶内，放入-18 ℃的冰箱内冷冻24 h，冷冻瓶连接至冷冻干燥机上，设定冷阱温度为-50 ℃，干燥室压力为70 Pa，干燥20 h，制得复合粉末，即麻醉/休眠诱导剂；
麻醉剂的使用方法：
以大马哈鱼（体重1-2 kg）为例，称取步骤(7)中制得的复合粉末50 g，倒入1000 L清水中，在室温下以80 rmp搅拌8 min，制得麻醉剂溶液，水温调节为16 ℃，连接曝气石向水中通入空气，将大马哈鱼放入数分钟后即可达到麻醉效果。
对照例6
与实施例2不同之处在于，本对照例采用CN 103239463 A方法制备的麻醉剂按照最佳配比加入1000 L养殖水中进行麻醉；
对照例7
与实施例2不同之处在于，本对照例采用丁香酚对大马哈鱼麻醉的最佳效果配比40mg/L加入1000 L养殖水中进行麻醉；
对照例8
与实施例2不同之处在于，本对照例采用MS-222对大马哈鱼麻醉的最佳效果配比50mg/L加入1000 L养殖水中进行麻醉；
表8 麻醉效果比较
。
麻醉效果主要取决于麻醉剂使动物进入麻醉状态所需要时间与麻醉消失时间，这两者时间越短说明麻醉效果越好。从麻醉效果比较表可知，实施例2处理的大马哈鱼完全失衡时间最短仅需要3min48s，其它对照组所需时间均较长，其中对照例6完全失衡的时间最长15min10s。实施例2处理后的大马哈鱼平均恢复时间最短为10min55s，对照例6平均恢复时间是实施例2的三倍多，对照例7与对照例8平均恢复时间也分别为29min40s与32min35s，明显超过实施例2。完全恢复平衡并暂养48h，测得存活率，实施例2高达98.6%，而对照组存活率均低于实施例2。因此，通过上述指标的综合对比，实施例2的麻醉效果明显优于各对照组。
表9 麻醉剂残留比较
。
采用上述实施例2与3组对照对大马哈鱼进行了麻醉处理，分别在麻醉前、完全麻醉时，麻醉后48h对大马哈鱼血液进行了残留检测。从表9可以得出，实施例2仅在完全麻醉时残留量为13.3μg/ml，48h后则为零残留。对照组均在完全麻醉时残留量达到最高水平，48h后残留量明显降低，但仍然存在残留，而且残留量较大，其中对照例6残留量最高，为122.1μg/ml。综上所述，实施例2处理的大马哈鱼在麻醉48h后残留量为零，因此，是安全可靠，天然绿色的麻醉剂。
休眠剂的使用方法：
以中华鲟鱼（体重2-3 kg）为例，称取步骤(7)中制得的复合粉末15 g，倒入1000 L清水中，在室温下以120 rmp搅拌5 min，制得麻醉剂溶液，水温调节为20 ℃，连接曝气石向水中通入空气，将中华鲟鱼放入进行诱导休眠，同时，进行梯度降温至0.5℃，（参照CN102823523 A方法）再充氧包装直接转移至0.5℃冷库内进行无水保活。具体降温速率如表10所示：
表10
。
对照例9
与实施例2不同之处在于，本对照例不加入任何休眠剂，只根据实施例1中的降温速率进行梯度降温至0.5℃，再充氧包装直接转移至0.5℃冷库内进行无水保活。
对照例10
与实施例2不同之处在于，本对照例未进行梯度降温，将中华鲟鱼放入制得的休眠剂溶液中进行诱导休眠，待24h后完全休眠时，再充氧包装直接转移至0.5℃冷库内进行无水保活。
表11 中华鲟鱼呼吸频率的变化
。
呼吸频率是鱼类状态以及机体代谢的重要表现特征，呼吸频率越低，其机体代谢越低，其休眠状态越深入。从表11可以得出，随着时间的延长，各组中华鲟鱼呼吸频率均呈现下降趋势，其中实施例2降低速率最快，在24h时，其呼吸频率降至27次/min，而对照例9与对照例10呼吸频率高于实施例2，分别降至44次/min与39次/min。
24h时，实施例2处理的中华鲟鱼呼吸频率最低，机体代谢达到最低限，因此，休眠状态也达到最佳点。
表12 中华鲟鱼无水保活时间与成活率的关系
。
从表12可以得出，随着保活时间的延长，三组均呈现下降趋势，实施例2在60h时开始下降至94%，保活72h时，高达87%，而对照例9自36h就开始下降，保活72h时，成活率仅为45%。保活72h时，对照例10成活率为72%。由此可见，实施例2处理的中华鲟鱼无水保活时间最长，成活率最高，明显优越于对照组。
实施例3
植物源水产品麻醉/休眠诱导剂的工业化生产实现系统，如附图1所示，包括以下实现方案：
植物源水产品麻醉/休眠诱导剂制备方法：在由清洗车间1、烘干车间2、粉碎车间3、制液车间4、提取车间5、浓缩车间6、干燥车间7组成的植物源水产品麻醉/休眠诱导剂的工业化生产实现系统中对巴东醉鱼草与厚果崖豆藤进行清洗、烘干、粉碎、制粗提液、超声提取液、浓缩液、冷冻干燥得出的粉剂。
上述的工业化生产实现系统中，清洗车间内主要包括收料箱8、U型传送带10、清洗机11、水池13、地沟12、水龙头、水管14；物料直接从仓库运至清洗车间入口8，并分别装入收料箱9内，再将收料箱9放置U型传送带10，传送至清洗机11头端，把物料倒入清洗机11内，清洗机11中水是由水池13接入水管14连接到清洗机11，提前将清洗机池11中水放入适量，清洗后，再放入物料传送带15，传入烘干车间2；
烘干车间2主要包括干燥箱16、物料传送带15；清洗沥干后的物料从清洗车间1传入烘干车间2后，放入每个托盘，再转入干燥箱16内进行烘干，烘干后取出，并倒入物料传送带15传入粉碎车间3；
粉碎车间3主要包括粉碎机17、筛选过目机18；待烘干的物料传送至粉碎车间3，直接倒入粉碎机17内进行搅拌粉碎，粉碎后通过管道输送至筛选过目机18中，进行筛选，直径较大不能通过筛选过目机18的物料通过另一条管道重新送入粉碎机17中继续搅拌粉碎，通过筛选过目机18的物料则倒入物料传送带15传送至制液车间4；
制液车间4主要包括搅拌机19、管式过滤器20、流槽23、水池13、水管14；粉碎后的物料直接传入搅拌机19中，再通过水管14从水池13中向搅拌机19内注入适量的清水，再进行搅拌，待搅拌完毕后，打开搅拌机19溶液通过流槽23流入管式过滤器20，将较大直径物料滞留并清除，过滤后的溶液通过流槽23流入超声提取器21中，提取过的提取液通过管道流进三足吊袋离心机22，再进行分离提取，分离后的提取液通过管道24流进浓缩车间6；
浓缩车间6主要包括球型真空浓缩罐25、管道24；待分离后的提取液通过管道24流进球型真空浓缩罐25进行浓缩，浓缩完毕后，浓缩液通过管道24流入干燥车间7；
干燥车间7主要包括真空冷冻干燥机26、全自动粉剂灌装压塞旋盖机27；浓缩液通过管道24流入干燥车间7，并进行分装，再放入或连接真空冷冻干燥机26内；收集冷冻干燥制成的粉末，再由全自动粉剂灌装压塞旋盖机27进行包装处理，形成制品。
Claims (6)
1.一种植物源水产品休眠诱导剂，其特征在于，由巴东醉鱼草叶提取物与厚果崖豆藤果实提取物组成；
所述巴东醉鱼草叶与厚果崖豆藤果实的质量比为：3-4:5-6；
所述巴东醉鱼草叶提取物为水提取物或乙醇提取物；
所述厚果崖豆藤果实提取物为水提取物或乙醇提取物。
2.如权利要求1所述的一种植物源水产品休眠诱导剂的制备方法，其特征在于，将巴东醉鱼草叶与厚果崖豆藤果实分别进行粉碎、提取粗提液，将两者粗提液混合后再进行超声提取、浓缩，冷冻干燥后得到休眠诱导剂。
3.根据权利要求2所述的一种植物源水产品休眠诱导剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)巴东醉鱼草叶预处理
将醉鱼草叶用蒸馏水清洗，沥水后烘干，将醉鱼草叶取出放置在4℃冷库中冷却，备用；
(2)巴东醉鱼草叶溶液的制备
将步骤(1)中制得的醉鱼草叶放入粉碎机中粉碎，加入蒸馏水，加热并搅拌后静置，过滤，制得巴东醉鱼草叶粗提液，备用；
或将步骤(1)中制得的醉鱼草叶粉碎，加入50%酒精，室温条件下搅拌，转移至4 ℃冷库中静置，过滤，制得巴东醉鱼草叶粗提液，备用；
(3)厚果崖豆藤果实溶液的制备
将厚果崖豆藤果实去皮后，粉碎，加入蒸馏水，加热并搅拌，转移至4 ℃冷库中静置，过滤，制得厚果崖豆藤果实粗提液，备用；
或将厚果崖豆藤果实，去皮后，粉碎，加入50%酒精，在室温条件下，搅拌，转移至4 ℃冷库中静置，过滤，制得厚果崖豆藤果实粗提液，备用；
(4)复合溶液的制备
将步骤(2)中制得的巴东醉鱼草叶粗提液与步骤(3)中制得的厚果崖豆藤果实粗提液混合并搅拌后静置，过滤，制得复合溶液，备用；
(5)超声提取液的制备
将步骤(4)中制得的复合溶液进行超声提取后进行离心分离，制得超声提取液，备用；
(6)浓缩液的制备
将步骤(5)中制得的超声提取液进行浓缩，制取复合浓缩液，备用；
(7)休眠诱导剂的制备
将步骤(6)中制得的复合浓缩液冷冻干燥，制得复合粉末，即休眠诱导剂。
4.根据权利要求3所述的一种植物源水产品休眠诱导剂的制备方法，其特征在于，巴东醉鱼草叶粗提液的制备具体为：
(1)巴东醉鱼草叶预处理
称取醉鱼草叶30-40份，采用蒸馏水清洗10-15 min后，沥水1-2 h，放入温度为55-65℃的烘箱中，均匀铺洒在烘箱内托盘上，烘干45-75 min，将醉鱼草叶取出放置在4℃冷库中冷却30-45 min，备用；
(2)巴东醉鱼草叶溶液的制备
将步骤(1)中制得的醉鱼草叶放入粉碎机中，粉碎5-10 min，倒入储存罐中，并按粉:水为1-3:300-500加入蒸馏水，再将其完全转移至搅拌器中，加热至45-50 ℃，并以转速为120-320 rpm 搅拌5-10 min，室温静置15-20 min，将四块医用纱布叠加进行过滤，制得巴东醉鱼草叶粗提液，备用；
或将步骤(1)中制得的醉鱼草叶放入粉碎机中，粉碎2-3 min，倒入储存罐中，将按粉:酒精为1-3:100-200加入50%酒精，再将其完全转移至搅拌器中，在室温条件下，以转速为80-120 rpm 搅拌3-5 min，转移至4 ℃冷库中静置5-8 min，将四块医用纱布叠加进行过滤，制得巴东醉鱼草叶粗提液，备用。
5.根据权利要求3所述的一种植物源水产品休眠诱导剂的制备方法，其特征在于，厚果崖豆藤果实粗提液的制备具体为：
(3)厚果崖豆藤果实溶液的制备
称取厚果崖豆藤果实50-60份，去皮后，放入粉碎机中，粉碎15-30 min，将粉碎后的粉末倒入储存罐中，并按粉:水为1-3:150-280加入蒸馏水，再将其完全转移至搅拌器中，加热至65-75 ℃，并以转速为360-480 rpm 搅拌5-8 min，转移至4 ℃冷库中静置25-30 min，将四块医用纱布叠加进行过滤，制得厚果崖豆藤果实粗提液，备用；
或称取厚果崖豆藤果实50-60份，去皮后，放入粉碎机中，粉碎8-15 min，将粉碎后的粉末倒入储存罐中，并按粉:酒精为1-3:100-200加入50%酒精，再将其完全转移至搅拌器中，在室温条件下，以转速为80-120 rpm 搅拌3-5 min，转移至4 ℃冷库中静置5-8 min，将四块医用纱布叠加进行过滤，制得厚果崖豆藤果实粗提液，备用。
6.根据权利要求3所述的一种植物源水产品休眠诱导剂的制备方法，其特征在于，复合溶液到休眠诱导剂的具体步骤为：
(4)复合溶液的制备
将步骤(2)中制得的巴东醉鱼草叶粗提液与步骤(3)中制得的厚果崖豆藤果实粗提液混合，并以转速为120-260 rpm 搅拌10-15 min，室温静置1-2 h，将八块医用纱布叠加进行过滤，制得复合溶液，备用；
(5)超声提取液的制备
将步骤(4)中制得的复合溶液进行超声波提取，搅拌速度为80-120 rpm ，超声波频率为40 KHZ，温度为45-60 ℃，并提取20-30 min后，停止15-20min，再继续提取20-30 min，将提取液转移至离心机中，以3500-4500 rpm 转速进行分离，制得超声提取液，备用；
(6)浓缩液的制备
将步骤(5)中制得的超声提取液倒入浓缩罐中，设定真空度为-0.065--0.088 Mpa，水浴温度为75-90 ℃，浓缩至比重为1.2-1.4时，停止浓缩，制得复合浓缩液，备用；
(7)休眠诱导剂的制备
将步骤(6)中制得的复合浓缩液装入冷冻瓶内，放入-18 ℃的冰箱内冷冻12-36 h，冷冻瓶连接至冷冻干燥机上，设定冷阱温度为-45--50 ℃，干燥室压力为60-80 Pa，干燥12-30 h，制得复合粉末，即休眠诱导剂。
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