CN104099414B - 利用ssr分子标记鉴定杏品种的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种利用SSR分子标记鉴定杏品种的方法，本发明首先利用生物学特征差别较大的5个杏品种进行了大量引物的筛选，从190对SSR引物中筛选出38对多态性好、主带清晰的引物进行样品的聚丙烯酰胺凝胶分析，最后又从6％聚丙烯酰氨凝胶电泳胶图中选出特异带清晰、非特异带少、多态性高的10个SSR标记的图谱进行读带分析。通过对读带数据的分析，最终筛选出鉴别效率最高的一个引物组合，由3对引物组成(PSSR1、PSSR2和PSSR3，引物序列如Seq ID No.1‑6所示)，可将124个杏品种一一区别开来。本发明的利用SSR分子标记鉴定杏品种的方法具有快速、准确、低成本、操作简单、节约人力、物力及土地资源等优点，具有十分广阔的应用前景。

Description

利用SSR分子标记鉴定杏品种的方法
技术领域
本发明涉及分子生物学领域，具体地说，涉及一种利用SSR分子标记鉴定杏品种的方法。
背景技术
杏原产于中国，据不完全统计，我国已有2000余个品种和类型，近几年又育成和引进许多新品种。由于品种对不同产区的适应性和市场对品种多样性的需求，不同产地也就形成了不同的主栽品种。杏品种间在植物学形态上差异较小，有许多品种必须靠果实性状才能进行鉴别，而杏树定植后3～4年才能结果，这大大限制了生产上对优良品种的准确有效地选择，进而影响优良品种的增产潜力。
分子标记技术的发展，为品种的早期鉴定提供了可能。SSR(Simple SequenceRepeats)分子标记具有数量丰、分布于整个基因组、等位变异高、共显性、检测简单、结果稳定可靠等优点。目前，杏(Prunus armeniaca L.)植物材料中也开发了一些SSR引物，并已应用于遗传多样性、品种进化分析和遗传图谱的构建等方面，但利用SSR标记构建杏品种指纹图谱和品种鉴定的研究还未见报道。
选择合适的SSR引物是该项工作得以顺利开展的前提和关键之一。从理论上讲，任一SSR标记都可进行杏种质鉴定，但在实际操作中，有一些SSR引物不够稳定，容易出现杂带或扩增效果差。因此，开发合适的用于杏品种鉴定的SSR分子标记成为亟待解决的问题。
发明内容
本发明的目的是提供一种利用SSR分子标记鉴定杏品种的方法。
为了实现本发明目的，本发明首先利用生物学特征差别较大的5个杏品种进行了大量引物的筛选，从已发表的在桃、杏、樱桃等核果类果树材料上开发出的190对SSR引物中筛选出38对多态性好、主带清晰的引物对样品进行PCR扩增，再对扩增产物进行聚丙烯酰胺凝胶分析，最后又从6％聚丙烯酰氨凝胶电泳胶图中选出特异带清晰、非特异带少、多态性高的10个SSR标记的图谱进行读带分析。通过对读带数据的分析，最终筛选出鉴别效率最高的一个引物组合，由3对引物组成(PSSR1、PSSR2和PSSR3，引物序列如Seq ID No.1-6所示)，可将124个杏品种一一区别开来。
杏品种SSR分子标记PSSR1，用于PCR扩增分子标记PSSR1的引物对为：
上游引物PSSR1F：5'-CAGAGTGCCCTCAGAGATTTG-3'和
下游引物PSSR1R：5'-TCCGTCGTCTTCACTGATTT-3'。
杏品种SSR分子标记PSSR2，用于PCR扩增分子标记PSSR2的引物对为：
上游引物PSSR2F：5'-CATGAACAGGGTCAAAAGCA-3'和
下游引物PSSR2R：5'-TATATCCTTACGCGGCCTCA-3'。
杏品种SSR分子标记PSSR3，用于PCR扩增分子标记PSSR3的引物对为：
上游引物PSSR3F：5'-CTGCTCTCACTCAACTCAATGC-3'和
下游引物PSSR3R：5'-CTCCCCTACCCCTCTGTATCTC-3'。
本发明还提供所述分子标记在杏品种鉴定、植物材料遗传多样性分析、指纹图谱构建及分子标记辅助育种中的应用。
本发明还提供一种利用SSR分子标记鉴定杏品种的方法，包括以下步骤：
1)提取待测植物的基因组DNA；
2)以待测植物的基因组DNA为模板，分别利用权利要求1所述的用于PCR扩增分子标记PSSR1的引物对、权利要求2所述的用于PCR扩增分子标记PSSR2的引物对以及权利要求3所述的用于PCR扩增分子标记PSSR3的引物对进行PCR扩增；
3)检测PCR扩增产物。
其中，PCR反应体系按20μL计为：10μmol/L上、下游引物各0.4μL，5U/μL Taq DNA聚合酶0.2μL，10mmol/L dNTPs0.4μL，25mmol/L Mg2+1.6μL，40ng/μL模板3μL，10×PCR反应缓冲液2μL，用ddH2O补足至20μL。
PCR扩增程序为：94℃预变性3min；94℃变性45s，55～58℃退火30s，72℃延伸45s，共35个循环；最后72℃延伸8min，保存于15℃。
本发明还提供用于鉴定杏品种的引物组合，所述引物组合包括上述用于PCR扩增分子标记PSSR1的引物对、用于PCR扩增分子标记PSSR2的引物对以及用于PCR扩增分子标记PSSR3的引物对。
本发明进一步提供含有上述引物组合的用于鉴定杏品种的试剂盒。所述试剂盒还包括dNTPs、Taq DNA聚合酶、Mg2+、PCR反应缓冲液及标准阳性模板等中的至少一种。
本发明利用上述扩增SSR分子标记的引物组合，首次建立了我国主栽优良杏品种的指纹图谱库，可用来对杏优良品种在种子或幼苗期进行早期鉴定，保证品种的真实性和纯度，从而较好地维护生产者和育种者的利益，并为我国杏种质资源和新品种的有效保护提供技术支撑。即可以利用该引物组合对未知杏品种进行鉴定；也可以对单靠表观性状无法准确鉴定的杏品种进行鉴定。本发明的利用SSR分子标记鉴定杏品种的方法具有快速、准确、低成本、操作简单、节约人力、物力及土地资源等优点，具有十分广阔的应用前景。
附图说明
图1为利用本发明的3对SSR引物对130个杏品种基因组扩增结果的聚丙烯酰胺凝胶电泳图；其中，A为用于PCR扩增分子标记PSSR1的引物对，B为用于PCR扩增分子标记PSSR2的引物对，C为用于PCR扩增分子标记PSSR3的引物对。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。若未特别指明，实施例均按照常规实验条件，如Sambrook等分子克隆实验手册(Sambrook J&Russell DW,Molecular cloning:a laboratory manual,2001)，或按照制造厂商说明书建议的条件。
实施例1 杏品种SSR分子标记PSSR1、PSSR2和PSSR3的获得
首先利用生物学特征差别较大的5个杏品种(大优佳、龙王帽、东宁2号、青密沙、红荷包)进行了大量引物的筛选，从已发表的在桃、杏、樱桃等核果类果树材料上开发出的190对SSR引物中筛选出38对多态性好、主带清晰的引物对样品进行PCR扩增，再对扩增产物进行聚丙烯酰胺凝胶分析，最后从6％聚丙烯酰氨凝胶电泳胶图中选出特异带清晰、非特异带少、多态性高的10个SSR标记的图谱进行读带分析。通过对读带数据的分析，最终筛选出鉴别效率最高的引物组合，由3对引物组成(PSSR1、PSSR2和PSSR3)，可将124个杏品种一一区别开来。用于PCR扩增分子标记PSSR1的引物对为：
上游引物PSSR1F：5'-CAGAGTGCCCTCAGAGATTTG-3'和
下游引物PSSR1R：5'-TCCGTCGTCTTCACTGATTT-3'。
用于PCR扩增分子标记PSSR2的引物对为：
上游引物PSSR2F：5'-CATGAACAGGGTCAAAAGCA-3'和
下游引物PSSR2R：5'-TATATCCTTACGCGGCCTCA-3'。
用于PCR扩增分子标记PSSR3的引物对为：
上游引物PSSR3F：5'-CTGCTCTCACTCAACTCAATGC-3'和
下游引物PSSR3R：5'-CTCCCCTACCCCTCTGTATCTC-3'。
实施例2 利用分子标记PSSR1、PSSR2和PSSR3进行杏品种鉴定
1材料与方法
1.1供试材料：供试杏品种共130份，均为生产中常见的优良品种，叶片材料取自北京市农林科学院林业果树研究所杏资源圃。
1.2DNA的提取：采用改良CTAB法提取叶片基因组DNA。
1.3PCR扩增：
PCR反应体系(20μL)：10μmol/L上、下游引物各0.4μL，5U/μL Taq DNA聚合酶0.2μL，10mmol/L dNTPs0.4μL，25mmol/L Mg2+1.6μL，40ng/μL模板3μL，10×PCR反应缓冲液2μL，用ddH2O补足至20μL。
PCR扩增程序为：94℃预变性3min；94℃变性45s，55～58℃退火30s，72℃延伸45s，共35个循环；最后72℃延伸8min，保存于15℃。
PCR仪为MyCyclerTM PTC-200(Bio-Rad Laboratories,Inc.USA)。
1.4电泳检测
PCR反应产物在6％变性聚丙稀酰胺凝胶电泳分离，50w恒功率电泳90min，常规银染技术进行显色反应。为了减小读带的人为误差，以提高试验的准确性，电泳时严格控制电泳时间和电压。
1.5数据赋值及数据库建立
根据每个杏DNA样品的电泳条带结果进行赋值，对肉眼可辨且清晰的电泳条带进行统计，同一位置有带赋值为1，无带赋值为0。将SSR图谱转换为由1和0组成的字符串，即构成数字指纹。
将3对SSR引物产生的33个多态位点(每对引物有11个等位基因)依次排序(表1)，建立品种计算机化的DNA指纹，以区分供试的每个杏品种(表2)。
表1 3对SSR引物扩增的33个多态性位点
表2 130个杏品种计算机化的SSR指纹
品种编号 品种名 共33位由0、1数字构成的分子身份证
1 猪皮水 100010000000000001010000001000000
2 红火了梅子 000001000000000101000000010010000
3 木瓜杏 000000100010000110000000001001000
4 大杏核 000001000000000100000000010001000
5 大白杏 000100000000000010000000010000010
6 白玉扁 001000000000000000000000000000010
7 早甜核 000100100000001000000001000000000
8 崂山红 000000000000000101000000100000000
9 东宁2号 000010010000000000010000010000000
10 青岛大红 000011000000000010000000010000000
11 蜜陀螺 000010100000000001000000000000110
12 早甜核 000100000000000000100000000100100
13 早香白 000010000000000010000000001000010
14 山白杏 000100000000000000010000000000010
15 平顶榛 000010000000000000010000001010000
16 马串铃 000100000000000000010000100000100
17 仰韶黄2号 000000100000000010000000001001000
18 柿子杏 000000010000000000010000000000000
19 西农25 000000010000000010000000001000000
20 大偏头 000010100000000000100000001010000
21 关老爷脸 000001000000000000000000001000000
22 晚香白 000000110000000010000000001000010
23 山杏 000000010000000001000000001001000
24 北寨红 000000010000000010000000001001000
25 天鹅蛋 000010100000000101000000001010000
26 曹杏 000000010000000000100000001010000
27 房山红杏 000001000000000000100000000001000
28 张公园 000010000000000010000000000110000
29 骆驼黄 000000001000000000100000000000010
30 葫芦杏 000010000000000001000010000010000
31 蜜香杏 000010010000000010000000100000010
32 金太阳 000010001000000000100000001010000
33 重瓣山杏 000001000000000000010000011000000
34 苹果红 000000101000000010000000001000000
35 龙泉务 000001000000000000010000000101000
36 山甜 000010010000000000010000000000100
37 大优佳 000100010000000000100000000100000
38 新疆沙杏 000001000000000010000000010000010
39 礼泉二转子 000000000100010000000000000001000
40 银香白 000000010000000010000000010000010
41 山黄杏 000000100000001000000000010000000
42 邢台红接杏 000100000000010000000000010000000
43 海红榛 000010000000000000010000100100000
44 龙王帽 000100100000000000010000100000000
45 二红杏 000000010000010000100000000101000
46 红荷包 000000100000000000010000100000000
47 仰韶黄1号 000110000000000010000001000000000
48 北山大扁 000000100000000000010000000010000
49 串芽变1 000100000000000100000001000000100
50 一窝蜂 001000100000000000010000000001010
51 串枝红 000000000000000000000000100000000
52 兰珠红 000000000000000000000000100000000
53 鸡蛋杏 000000000000001000000000010000000
54 红金榛 000000000000001000100000100000000
55 京佳1号 000010100000001000000000001000000
56 大杏梅 000001000000001000000000100000000
57 房山香白 000100100000001000010000010000000
58 红八达 010000000000000100010000010000000
59 豫早冠 000010000000000000100000001000000
60 早红杏 001010000000000000010000010000000
61 冀光 000010000000010000000000001000010
62 次扁 010000000000000000000010000000100
63 曹丕杏 000101000000000000010000000010010
64 垂枝山杏 000100000000001000000000000100000
65 杨继元 000011000000001000000000000100000
66 凯特杏 010000000000000000110000100000000
67 陝梅杏 000100100000000000010000001000000
68 牛角黄 000101000000000001000000000010010
69 优1 001001000000000000100000010000000
70 九道眉 001001000000001000010000000100000
71 辣椒杏 001000000000001000000000000001010
72 丰仁 001001000000000000010000000000100
73 绿萼山杏 000110000000000000100000000000010
74 克拉拉 000100100000000010000000000001000
75 黄尖嘴 000001000000000000000000000001010
76 超仁 000100100000000000010000000000010
77 辽梅 000110000000100000000000000000001
78 包天一串铃 000001000000000010000000000010010
79 媳妇杏 000001000000000100000000000000110
80 华县迟梆子 000000100000000001000000000001010
81 黑叶杏 001001000000000010100000001010000
82 沙金红 000000000000000010000000000001100
83 熊岳桃杏 000100000000001100000000000000110
84 孤山杏梅 000101000000000010000000000001100
85 红玉 000001000000000010000000000001000
86 石片黄 000001000000000010100000000001000
87 铁八达 000010000000000010000000000001010
88 晚熟杏1号 000001000000000010000000000001000
89 华县接杏 000101000000000010000000000100010
90 豫寒魁 000101000000000000100000000100001
91 黄口外 000001000000000000000000000001000
92 串枝白杏 000100000000000000010000000100000
93 龙泉务香白 000000101000000010000000000000001
94 大叶杏 001010000000000001010000000000010
95 英吉沙 000001000000000000100000000100001
96 猪腰子 000001000000000010100001000000000
97 四川酸梅子杏 010001000000000010000000000000010
98 二窝接杏 010001000000000000010000100000100
99 云南甜杏 010000100000000010010000000000001
100 软核杏 000001010000000000000000010001000
101 双仁杏 000000100000000000000000001000100
102 房山桃杏 000010000000000110000000000000110
103 克孜克西米西 010100000000001000100000000001100
104 青密沙 010000000000000001010000001000010
105 兰州金妈妈 000001010000000110000000000001100
106 北安河苹果白 001000000000000010000000010000100
107 宁夏桃杏 000100000000001000010000000010100
108 兰州大接杏 100010000000000100000000010000100
109 北安河大黄杏 000001000000001000000000000100100
110 拳杏 010001000001000000010000000101000
111 头窝接 000001000000001000000000100000100
112 京早红 001010000000000010000000001000100
113 辽杏 010010000000000101000000000000110
114 银川桃杏 000000100000000000100000010000100
115 胭脂红 000001000000001000010000001000100
116 临潼红杏 001000000000000010000000001010000
117 昌黎大白杏 000000100000000000010000010010000
118 房山白桃杏 001000000000000010000000000000100
119 晚熟李光杏 010001000000001000100000000101000
120 李光杏 010001000000001000100000000000000
121 软条京杏 010000100000000000100000001010000
122 硬条京杏 000011000000000000100000001010000
123 临潼菜籽黄 000001000000000100000000010000100
124 大荔菜籽黄 000000100000000000001000100000100
125 小白玉巴达 000110000000000000000100010000000
126 大白玉巴达 000001000000000000100000001001000
127 水晶杏(北京) 001000000000000100000000010001000
128 水晶杏(昌黎) 001000000000000100000000010001000
129 银杏 010000000000000010000010010000000
130 临潼银杏 010001000000000100000001000001000
1.6鉴别效率评价
以“1”和“0”分别表示扩增产物的有无，建立数据矩阵，通过自编软件统计分析，3对SSR引物可将130个品种中的124个两两区分开来。仅有6个品种不能用此指纹鉴别，见表2中反显标记出来的品种。鉴别效率高于SSR标记在甜樱桃和苹果上的应用效果，前者用10个SSR标记将24份甜樱桃样品区分开，后者利用3个微卫星标记区分21个苹果品种。
利用本发明的3对SSR引物对130个杏品种基因组扩增结果的聚丙烯酰胺凝胶电泳图见图1。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (7)

1.用于鉴定杏品种的引物组合，其特征在于，所述引物组合包括用于PCR扩增杏品种SSR分子标记PSSR1、PSSR2和PSSR3的引物对；
其中，用于PCR扩增分子标记PSSR1的引物对分别为：
上游引物PSSR1F：5'-CAGAGTGCCCTCAGAGATTTG-3'和
下游引物PSSR1R：5'-TCCGTCGTCTTCACTGATTT-3'
用于PCR扩增分子标记PSSR2的引物对为：
上游引物PSSR2F：5'-CATGAACAGGGTCAAAAGCA-3'和
下游引物PSSR2R：5'-TATATCCTTACGCGGCCTCA-3'
用于PCR扩增分子标记PSSR3的引物对为：
上游引物PSSR3F：5'-CTGCTCTCACTCAACTCAATGC-3'和
下游引物PSSR3R：5'-CTCCCCTACCCCTCTGTATCTC-3'。
2.权利要求1所述引物组合在杏品种鉴定、植物材料遗传多样性分析、指纹图谱构建及分子标记辅助育种中的应用。
3.一种利用SSR分子标记组合鉴定杏品种的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)提取待测植物的基因组DNA；
2)以待测植物的基因组DNA为模板，分别利用用于PCR扩增杏品种SSR分子标记PSSR1、PSSR2和PSSR3的引物对进行PCR扩增；
3)检测PCR扩增产物；
其中，步骤2)中所述引物对的定义同权利要求1中所述。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤2)中PCR反应体系按20μL计为：10μmol/L上、下游引物各0.4μL，5U/μL Taq DNA聚合酶0.2μL，10mmol/L dNTPs 0.4μL，25mmol/L Mg2+1.6μL，40ng/μL模板3μL，10×PCR反应缓冲液2μL，用ddH2O补足至20μL。
5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤2)中PCR扩增程序为：94℃预变性3min；94℃变性45s，55～58℃退火30s，72℃延伸45s，共35个循环；最后72℃延伸8min，保存于15℃。
6.含有权利要求1所述引物组合的用于鉴定杏品种的试剂盒。
7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括dNTPs、Taq DNA聚合酶、Mg2+、PCR反应缓冲液及标准阳性模板中的至少一种。
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CN105400777B (zh) * 2015-09-18 2018-06-29 山东省花生研究所 栽培花生ssr分子标记引物组及其在品种鉴定中的应用
CN106282341A (zh) * 2016-08-11 2017-01-04 广东省农业科学院作物研究所 用于甘薯亲子鉴定的引物体系及其筛选方法与试剂盒
CN106957914B (zh) * 2017-04-08 2020-12-01 中国农业科学院郑州果树研究所 樱桃品种的鉴定方法
CN107130034B (zh) * 2017-05-26 2020-08-28 中国林业科学研究院林业研究所 一种利用ssr标记鉴定平欧杂种榛品种的方法
CN108504762B (zh) * 2018-05-24 2021-02-19 内蒙古农业大学 一种鉴别大扁杏、西伯利亚杏和鲜食杏的分子标记引物及方法
CN109355422A (zh) * 2018-12-05 2019-02-19 河北省农林科学院经济作物研究所 一种鉴定紫苏种质的ssr标记引物及其应用
CN110257551B (zh) * 2019-07-30 2022-03-22 中国农业科学院郑州果树研究所 一套用于构建桃dna指纹图谱的ssr引物、应用及构建方法
CN111218522A (zh) * 2020-02-20 2020-06-02 山西省农业科学院生物技术研究中心 一种用荧光ssr分子标记构建苹果新品种‘赤霞’分子身份证的方法及应用

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Genomic and cDNA microsatellites from apricot (Prunus armeniaca L.);L.S.HAGEN等;《Molecular Ecology Notes》;20041231;第4卷;742–745 *
普通杏品种SSR遗传多样性分析;张淑青等;《园艺学报》;20101231;第37卷(第1期);23-30 *
杏SSR反应体系的优化研究;宁宁;《北方园艺》;20091231;12-15 *

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