CN104095887A - 小春花提取物在制备治疗肺心病药物中的用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及小春花提取物在治疗肺心病药物中的用途及其制备方法。本发明公开了小春花提取物在制备治疗肺心病药物中的用途。肺心病具有高流行性、高患病率、高死亡率和高费用的特点，调查显示我国北方农村居住人群患病率为4.4‰，因此，开发疗效确定、费用合理、货源充足的肺心病中药治疗药物具有重要意义。同时，对传统中药艾叶进行进一步开发、研究，最后将其推向市场也是中药现代化的重要路径之一。

Description

小春花提取物在制备治疗肺心病药物中的用途

技术领域

本发明涉及小春花提取物的用途，尤其涉及小春花提取物在制备治疗肺心病药物中的用途。 

背景技术

肺源性心脏病(肺心病)是由肺组织、肺血管或胸廓慢性病变引起的肺组织结构和(或)功能改变，产生肺血管阻力增加，肺动脉压力升高，使右心室扩张或(肥厚)，伴或不伴右心功能衰竭的一类疾病。肺心病主要病理变化为肺心病肺动脉高压(PAH)和心脏病变两方面，其中PAH是肺心病发病过程中的中心环节和先决条件，心脏病变时肺心病的最终归宿和集中表现。主要治疗措施有改善呼吸功能、纠正缺氧和二氧化碳潴留、抗凝剂、血管扩张剂的应用等，但尚无成熟的治疗药物和措施，既能有效降低肺动脉高压、缓解及改善右心室重构，又无明显的不良反应。 

小春花为阴地蕨科植物阴地蕨sceptridium ternatum(Tlamb.)Luon。为浙江省常用中药材，具有清热解毒，平肝熄风，止咳，止血，明目祛翳等功效。民间用于治疗小儿高热惊搐、肺热咳嗽、咳血、百日咳、癫狂、痫疾、疮疡肿毒、瘰疬、毒蛇咬伤、目赤火眼、目生翳障等病。目前，对小春花治疗肺心病的机理研究未见报道。 

肺源性心脏病(肺心病)具有高流行性、高患病率、高死亡率和高费用的特点，严重威胁人类健康，主要病理变化为肺心病肺动脉高压(PAH)和右心室重构两方面。肺心病的防治，一直是医学上的一大难题，目前尚无成熟的治疗药物和措施，既能有效降低肺动脉高压、缓解及改善右心室重构，又无明显的不良反应。因此，开发疗效确定、费用合理、货源充足的肺心病治疗药物具有重要意义。 

发明内容

本发明的目的在于提供小春花及其提取物、有效部位、小春花单体(阴地蕨素)在制备治疗肺心病、肺动脉高压及右心室肥大药物中的用途。 

为了实现上述发明目的，本发明采用如下技术方案： 

小春花提取物在制备治疗肺心病药物中的用途。 

小春花提取物在制备治疗肺动脉高压药物中的用途。 

小春花提取物在制备治疗右心室肥大药物中的用途。 

本发明小春花提取物的制备方法：将小春花烘干、粉碎，取小春花粗粉加入8-10倍 量50-70％乙醇溶液加热回流提取2-3次，每次1.5-2小时，过滤，合并滤液，减压浓缩至无醇味即得。 

本发明小春花提取物的另一种制备方法：取小春花全草，晾干、粉碎，备用；回流提取时加入8-10倍量50％～70％提取溶媒，加热回流提取2-3次，每次1.5-2小时，合并提取液。提取液加入到吸附树脂柱上用水洗至淡黄色，用10％～90％的醇类洗下，回收醇，干燥得棕色粉末含总黄酮的部位。 

所述的提取溶媒是甲醇、丙酮和乙醇。 

所述的吸附树脂柱的吸附剂可以是聚酰胺、硅胶及氧化铝。 

本发明用现代药理学研究方法对传统中药小春花进行药效学研究，旨在阐明小春花提取物对肺心病的治疗作用，为进一步开发小春花中药新药制剂提供了实验基础。同时为广大肺心病人提供了新的治疗途径，丰富了浙产药材的研究基础，为繁荣浙江药材经济作出一定贡献。 

附图说明

图1：小春花对肺动脉高压大鼠肺病理的影响(HE×400) 

其中：A：正常对照组，B：模型对照组，C：小春花高剂量，D：小春花中剂量，E：小春花低剂量 

具体实施方式

为了证明小春花提取物对肺心病的治疗作用，申请人设计了科学的动物实验，以验证小春花提取物对肺心病有治疗作用。 

实施例1：制备小春花提取物 

将野生采集的小春花全草，晾干，粉碎。称取小春花粗粉80.0g，以10倍体积70％乙醇溶液加热回流提取3次，每次2小时，过滤，合并滤液，减压浓缩至无醇味即得。上述实施例制备得到的艾叶提取物可以进一步制备得到，艾叶提取物的药物制剂，如片剂、胶囊剂、颗粒剂等药剂学上可以接受的各种药物剂型。 

实施例2：制备小春花有效部位提取物 

取小春花全草，晾干、粉碎，备用；回流提取时加入8倍量70％醇溶液，加热回流提取2次，每次2小时，合并提取液。提取液加入到吸附树脂柱上用水西至淡黄色，用10％～90％的醇类洗下，回收醇，干燥得棕色粉末含总黄酮的部位 

试验例3：小春花对大鼠肺心病的实验治疗 

1实验材料 

1.1动物 健康成年SD大鼠100只，雌雄各半，体重(200±20)g，由上海西普尔-必凯实 验动物有限公司提供(实验动物生产许可证号：SCXK(沪)2008-0016)。 

1.2药物 小春花提取物(自制)；生理盐水，杭州民生药业有限公司。野百合碱，上海佰世凯化学科技有限公司，含量：98.39％。戊巴比妥钠，湖北兴银河化工有限公司，含量：99.03％。 

1.3仪器 METTLER TOLEDO AL104分析天平，BIOPAC MP150型16通道生理信号记录分析系统，德力西恒温手术台，OLYMPUS AD113B08114偏振光显微镜。 

2药物制备与模型的复制 

2.1小春花提取物的制备 将野生采集的小春花全草，晾干，粉碎。称取小春花粗粉80.0g，以10倍体积70％乙醇溶液加热回流提取3次，每次2小时，过滤，合并滤液，减压浓缩至无醇味，并加去离子水，使其浓度为500mg药材/ml，待用。 

2.2造模及给药 100只大鼠随机分为正常对照组、模型组、小春花高、中、低剂量组，每组20只。正常对照组大鼠皮下注射等量乙醇∶生理盐水＝2∶8的混合溶液；其余各组大鼠一次性皮下注射野百合碱(MCT，以乙醇∶生理盐水＝2∶8为溶剂)60mg/kg，造模后第2天开始灌胃，正常对照组、模型组每次生理盐水灌胃10mL/kg；小春花提取物高、中、低剂量组每次给药量分别为10、5、2.5g/kg(与生理盐水混合后给药)；每天1次，连续给药21天，末次给药后1h监测指标。 

3小春花对大鼠肺动脉高压的治疗实验研究 

3.1指标检测 

3.1.1试验期间，每周1次测定动物体重。 

3.1.2右心室压和肺动脉压检测 采用右心导管法。将特制好的PE50管预充满肝素生理盐水(避免管腔内存在气泡)后接三通管再经压力换能器和记录系统相连，压力校零备用。大鼠称重后，麻醉，取正中右侧纵向切口约0.5cm，分离暴露右颈外静脉，结扎远心端，在结扎处的血管壁上用眼科剪小心剪一“V”型小口，插管，并用手术线将血管和PE50管轻轻结扎，缓缓向前推进，使PE50管从右心房进入右心室，最后达到肺动脉，此过程需要在记录系统上密切观察压力大小和波形，根据导管插入的长度、肺动脉压力的波形和压力值判断导管是否已到达肺动脉，并做好相应的压力和波形记录，待稳定后记录平均肺动脉压(mPAP)、平均右心室压(mRVP)、右心室收缩压(Max RVP)。 

3.2实验结果 

3.2.1一般情况比较 正常组大鼠实验期间精神状态、进食和饮水情况正常，皮毛光泽发亮，行为活跃，反应灵敏，大小便正常；模型组大鼠实验前期精神状态、进食和饮水情况正常，第3周开始，精神较差，进食较前减少、饮水尚可，反应尚灵敏，皮毛光泽但抓取时易 脱落，实验末期该组多只大鼠表现呼吸急促；药物治疗各组大鼠实验期间精神状态、饮水情况正常，与其他组相比，进食较多，皮毛光泽但抓取时易脱落，行为较活跃，反应灵敏，大小便正常；另观察到在给予小春花灌胃后，精神一过性萎靡，蜷卧，行走时步态欠稳，持续约20分钟可缓解，进食正常。 

3.2.2不同组别实验大鼠体重变化 正常组、模型组、小春花高剂量组、小春花中剂量组、小春花低剂量组在造模前、药物干预前体重分别为：209.56±12.51g、217.98±8.97g、214.60±13.89g、217.02±10.40g，213.56±9.78g组间比较均无统计学意义(P>0.05)；模型组在15天时体重增加趋于缓慢，至19天时，体重均低于其他组，其中与正常组相比，差异具有统计学意义(P<0.05)；小春花高剂量组实验前期体重增加较为明显，均高于其余四组(P<0.05)，15天时体重增加趋缓，22天时体重较正常组减轻，但组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。(表1) 

表1不同组别大鼠体重变化比较(单位：g) 

同一天数，与正常组比较，◆P<0.05；与模型组相比，#P<0.05 

3.2.3右心室压和肺动脉压力、平均动脉压比较  SD大鼠使用野百合碱造模3周后，模型对照组大鼠的mPAP和mRVP、max RVP有显著的升高作用(P<0.001)。与模型组比较，小春花高、中剂量组大鼠mPAP、mRVP和max RVP均显著降低(P<0.001～0.05)。(表2) 

表2小春花对肺动脉高压大鼠右心室压和肺动脉压的影响 

注：模型组VS正常对照：###：P<0.001 

给药组VS模型组：*：P<0.05；**：P<0.01；***：P<0.001 

3.3实验小结 

综上所述，经不同剂量小春花提取物干预后的肺心病SD大鼠mPAP、mRVP和max RVP均显著降低(P<0.001～0.05)，表明小春花提取物对肺心病SD大鼠抗肺动脉高压具有治疗作用。同时能明显改善模型SD大鼠体重下降、精神差、进食减少、毛发脱落等情况。 

4小春花对大鼠右心室肥厚的治疗实验研究 

4.1检测指标 

4.1.1右心肥厚指数计算 处死动物，取出心脏，沿房室沟剪去心房及大血管根部，沿后室壁间沟将其分离成右心室和左心室加室间隔，滤纸吸干多余的血，用电子天平称量右心室游离壁(RV)及左心室加心室间隔(LV+S)的重量，并计算右心肥厚指数。右心肥厚指数(RVHI)＝[RV/(LV+S)]×100％ 

4.1.2肺指数 先向肺动脉内注入生理盐水，洗出肺内血液，剪去肺门，滤纸吸干表面水分，电子天平称量肺湿重量(wW)，计算肺指数。肺指数(LI)＝肺湿重量(wW)/体重(BW)×100％。 

4.1.3肺组织HE染色病理形态学观察  用4％多聚甲醛后固定肺48h，剪去肺门，沿肺门横切，取左肺组织块，经洗涤和脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、展片及HE染色处理，光学显微镜观察肺肌型小动脉。 

4.2实验结果 

4.2.1各组大鼠肺指数比较  SD大鼠使用野百合碱造模后，模型对照组大鼠湿肺重量(wW)、肺指数(LI)均显著大于正常对照组(P<0.001)。小春花高、中、低剂量组湿肺重量(wW)、肺指数(LI)均显著低于模型组(P<0.001～0.05)。(表3) 

表3小春花对肺动脉高压大鼠右心肥厚指数和肺指数的影响 

注：模型组VS正常对照：###：P<0.001 

给药组VS模型组：*：P<0.05；**：P<0.01；***：P<0.001 

4.2.2各组大鼠右心肥厚指数比较  SD大鼠使用野百合碱造模后，模型对照组大鼠右心室游离壁重量(RV)、左心室加心室间隔重量(LV+S)均显著大于正常对照组(P<0.001～0.05)。小春花高剂量组大鼠右心室游离壁重量(RV)、左心室加心室间隔重量(LV+S)显著低于模型组(P<0.01)；小春花中、低剂量组大鼠左心室加心室间隔(LV+S)重量显著低于模型组(P<0.01～0.05)；见表4。 

表4小春花对肺动脉高压大鼠右心肥厚指数和肺指数的影响 

注：模型组VS正常对照：#：P<0.05；##：P<0.01；###：P<0.001 

给药组VS模型组：*：P<0.05；**：P<0.01；***：P<0.001 

4.2.3肺病理形态结构的比较 见图1，光镜下HE染色观察：正常对照组肺小动脉壁较薄且规则，无肺间质炎症；模型组肺小动脉中膜平滑肌细胞明显增生，有明显的肺间质炎症，浆细胞为主，少量淋巴细胞浸润；小春花高、中、低剂量组与模型组比较：肺小动脉厚度肺小动脉厚度有下降趋势，肺间质炎症明显减轻，炎症细胞主要局限在肺小动脉周围(图1)。 

4.3实验小结 

综上所述，经不同剂量小春花提取物干预后的肺心病SD大鼠湿肺重量(wW)、肺指数(LI)均显著低于模型组(P<0.001～0.05)；小春花高剂量组大鼠右心室游离壁重量(RV)、左心室加心室间隔重量(LV+S)显著低于模型组(P<0.01)；小春花中、低剂量组大鼠左心室加心室间隔(LV+S)重量显著低于模型组(P<0.01～0.05)。表明小春花能减少SD大鼠心肺重量以及右心肥厚指数，从而起到治疗右心室肥厚的作用。 

5统计方法 

所有计量数据，各剂量组间及对照组作方差齐性检验，若方差齐(P>0.05)，则做单因素方差分析；若方差不齐(P<0.05)，则进行非参数检验(Kruskal-Wallis H检验)，有统计学差异(P<0.05)，则各剂量组与对照组间做Mann-Whitney U检验。 

6实验结论 

肺心病主要病理变化为肺心病肺动脉高压和心脏病变两方面。肺动脉高压是肺心病发生发展的病理生理学基础，持续的肺动脉高压，最终将导致右心室肥厚、扩大，甚至右心衰竭，肺动脉压越高，其预后越差。 

本实验通过建立野百合碱诱导肺心病大鼠模型，并以小春花提取物对肺心病模型大鼠进行药物干预。实验表明小春花提取物对模型大鼠肺动脉高压、右心室肥厚的治疗作用，进而表明小春花具有治疗肺心病的作用。 

Claims (8)

1.小春花提取物在制备治疗肺心病药物中的用途。

2.小春花提取物在制备治疗肺动脉高压药物中的用途。

3.小春花提取物在制备治疗右心室肥大药物中的用途。

4.一种小春花提取物的制备方法，其特征在于是通过以下方法制备的：将小春花烘干、粉碎，取小春花粗粉加入8-10倍量70％乙醇溶液加热回流提取2-3次，每次1.5-2小时，过滤，合并滤液，减压浓缩至无醇味即得。

5.一种小春花提取物的制备方法，其特征在于是通过以下方法制备的：取小春花全草，晾干、粉碎，备用；回流提取时加入8-10倍量50％～70％提取溶媒，加热回流提取2-3次，每次1.5-2小时，合并提取液；提取液加入到吸附树脂柱上用水洗至淡黄色，用10％～90％的洗脱溶媒洗下，回收醇，干燥得棕色粉末含总黄酮的部位。

6.根据权利要求5所述的小春花提取物的制备方法，其特征在于所述的提取溶媒是甲醇、丙酮或乙醇。

7.根据权利要求5所述的小春花提取物的制备方法，其特征在于所述的洗脱溶媒是10～90％的乙醇。

8.根据权利要求5所述的小春花提取物的制备方法，其特征在于所述的吸附树脂柱的吸附剂是聚酰胺、硅胶或氧化铝。