CN103520245A - 艾叶提取物在治疗肺心病药物中的用途及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及艾叶提取物的用途,尤其涉及艾叶提取物在治疗肺心病药物中的用途及其制备方法。本发明公开了艾叶提取物在制备治疗肺心病药物中的用途。肺心病具有高流行性、高患病率、高死亡率和高费用的特点,调查显示我国北方农村居住人群患病率为4.4‰,因此,开发疗效确定、费用合理、货源充足的肺心病中药治疗药物具有重要意义。同时,对传统中药艾叶进行进一步开发、研究,最后将其推向市场也是中药现代化的重要路径之一。
Description
技术领域
本发明涉及艾叶提取物的用途,尤其涉及艾叶提取物在治疗肺心病药物中的用途及其制备方法。
背景技术
肺源性心脏病(肺心病)是由肺组织、肺血管或胸廓慢性病变引起的肺组织结构和(或)功能改变,产生肺血管阻力增加,肺动脉压力升高,使右心室扩张或(肥厚),伴或不伴右心功能衰竭的一类疾病。肺心病主要病理变化为肺心病肺动脉高压(PAH)和心脏病变两方面,其中PAH是肺心病发病过程中的中心环节和先决条件,心脏病变时肺心病的最终归宿和集中表现。主要治疗措施有改善呼吸功能、纠正缺氧和二氧化碳潴留、抗凝剂、血管扩张剂的应用等,但尚无成熟的治疗药物和措施,既能有效降低肺动脉高压、缓解及改善右心室重构,又无明显的不良反应。
艾叶为菊科植物艾蒿Artemisia argyi levl.et Vant.的干燥叶。传统医学将艾叶归类为祛寒药,具有温经止血,散寒除湿之功效。《本草汇言》有记载:“艾叶,暖血温经,行气开郁之药也。若气血、痰饮、积聚为病,哮喘逆气,骨蒸痞结,瘫痪痈疽等疾,灸之立起沉疴。”近些年对艾叶开展的研究如火如荼,主要涉及炮制工艺、化学成分提取及药理作用。其中药理作用研究包括抗菌、抗病毒活性,止血与抗凝作用,中枢神经系统作用,平喘作用,通过抑制NF-κB通路抗肿瘤,抗炎作用等等。同时,在肺组织改变及右心室重构方面未有相关研究的文献报道,因此对艾叶提取物治疗肺心病肺动脉高压和右心室重构的药效学研究颇有意义。
肺心病具有高流行性、高患病率、高死亡率和高费用的特点,调查显示我国北方农村居住人群患病率为4.4‰,因此,开发疗效确定、费用合理、货源充足的肺心病中药治疗药物具有重要意义。同时,对传统中药艾叶进行进一步开发、研究,最后将其推向市场也是中药现代化的重要路径之一。
发明内容
本发明的目的在于提供艾叶提取物在制备治疗肺心病药物中的用途。
本发明的另一目的在于提供艾叶提取物的制备方法。
为了实现上述发明目的,本发明采用如下技术方案:
艾叶提取物在制备治疗肺心病药物中的用途。
本发明还提供了艾叶提取物的制备方法,将艾叶粉碎后,放置于烧瓶中,加入艾叶质量5~10倍量的纯水,浸泡1~3小时后,采用水蒸气蒸馏法提取得到挥发油。
本发明公开了另一种艾叶提取物的制备方法,将艾叶粉碎后置于萃取釜中,密封,待萃取釜及分离灌温度达到预定温度后,加压至适当压力进行CO2超临界萃取,得艾叶提取物,超临界萃取压力为10-20MPa,温度为28-40℃,流量为15—30kg/h,萃取时间为60-120min。
肺心病具有患病率高、治疗费用高的特点。本发明用现代药理学研究方法对传统中药艾叶的进行药效学研究,以期待通过扩大艾叶的临床适应症,提高对艾叶的资源利用,同时为临床治疗提供价格合理、疗效确切的药物选择,降低患者的就医成本。
具体实施方式
为了证明艾叶提取物对肺心病的治疗作用,申请人设计了科学的动物实验,以验证艾叶提取物对肺心病有治疗作用。
实施例1:制备艾叶提取物
取100g干燥的艾叶,粉碎,置于烧瓶中,加入8倍量的纯水,浸泡2小时,然后采用水蒸气蒸馏法提取得到挥发油。
上述实施例制备得到的艾叶提取物可以进一步制备得到,艾叶提取物的药物制剂,如片剂、胶囊剂、颗粒剂等药剂学上可以接受的各种药物剂型。
实施例2:制备艾叶提取物
取1000g干燥的艾叶,粉碎后加入到萃取釜中,密封,待萃取釜及分离灌温度达到40℃后,加压至适当压力进行CO2超临界萃取,得艾叶提取物,超临界萃取压力为15MPa,温度为35℃,流量为20kg/h,萃取时间为100min。
实施例3:艾叶提取物β-环糊精包合物的制备
1)取实施例1,2制备所得的艾叶提取物加质量体积比1:1的乙醇溶解,制备成溶液;在40℃水温下,将β-环糊精溶于水,制成β-环糊精的饱和水溶液。再用滴管将挥发油乙醇溶液缓缓滴入β-环糊精饱和水溶液中,保温,持续搅拌10min,滴速为1ml/min,艾叶提取物与β-环糊精比例为1:5-1:20。包合溶液置冰箱中冷藏过夜,抽滤,包合物用少量乙醚洗涤,置恒温烘箱中40℃干燥,即得。
2)取β-环糊精加水制成饱和水溶液;将实施例1,2制备所得的艾叶提取物溶解于少量乙醇中,制成乙醇溶液,在超声条件下缓慢加入β-环糊精水溶液中,超声30min;包合溶液置冰箱中冷藏过夜,抽滤,包合物用少量乙醚洗涤,置恒温烘箱中40℃干燥,即得。
3)取β-环糊精加水制成饱和水溶液;将实施例1,2制备所得的艾叶提取物溶解于少量乙醇中,制成乙醇溶液,在搅拌下缓慢加入加热至50℃的β-环糊精水溶液中,用均质机处理30s,;包合溶液置冰箱中冷藏过夜,抽滤,包合物用少量乙醚洗涤,置恒温烘箱中40℃干燥,即得。
实施例4:艾叶提取物脂质体制备
称取豆磷脂适量,加入磷酸盐缓冲溶液(pH6.8)搅拌使溶解,另外称取胆固醇适量,用少量乙醚溶解后,用滴管将其滴入60-70℃保温的豆磷脂溶液中,搅拌使混合均匀,超声处理30min,用磷酸盐缓冲液调整提及至适当量,再将混悬液通过高压均质机,过滤,即得艾叶提取物脂质体。
试验例5:艾叶提取物对大鼠肺动脉高压实验治疗
1试验目的
观察艾叶提取物对肺动脉高压模型大鼠的治疗作用研究。
2仪器与试剂
2.1仪器
METTLER TOLEDO AL104分析天平
BIOPAC MP150型16通道生理信号记录分析系统
恒温手术台,德力西电气有限公司
2.2试剂
氯化钠注射液,四川科伦药业股份有限公司。
野百合碱,上海惠诚生物科技有限公司。
戊巴比妥钠,德国分装。
3给药剂量、给药途径、给药容量、配制方法
3.1艾叶提取物的剂量设为0.2、1.8g/kg。
3.2给药途径:灌胃。
表1.动物分组及剂量设置表
4试验系统
4.1实验动物
动物种系:SD大鼠。
动物数量:50只。
动物体重:180-220g。
性别:雌雄各半。
等级:SPF级。
提供单位:上海西普尔-必凯实验动物有限公司。
实验动物生产许可证号:SCXK(沪)2008-0016。
实验动物使用许可证号:SYXK(浙)2007-0098。
动物检疫时间:5-7天。选择健康大鼠进行试验。
4.2动物标识
适应期动物用记号笔在动物尾巴上以横杠标记,分组后用苦味酸标记。
4.3饲养条件及适应性饲养时间
SD大鼠购入后饲养于屏障系统饲养室中。屏障系统符合SPF级实验室要求,温度20~26℃,湿度40%~70%,控制光照12小时/黑暗12小时昼夜交替(8:00-20:00光照时间)。大鼠饲养于不锈钢铁丝笼中(体积500×350×200mm),每笼5只,雌雄分开饲养,自由摄食和饮水,饲料为大小鼠辐照繁殖料,饮用水为城市居民饮用水经高压灭菌后使用。
4.4饲料名称及饮用水
饲料名称:大小鼠辐照繁殖料。
提供单位:上海斯莱克实验动物有限责任公司。
饲料合格证号:沪饲审(2008)04002。
饮用水:城市饮用水经高温灭菌后引用。
饮用水提供单位:杭州祥符水厂
5试验方法
5.1动物分组
将50只SD大鼠按体重随机分为5组,即正常对照组(等量蒸馏水)、模型对照组(等量蒸馏水)、阳性对照Bosentan0.1g/kg、艾叶提取物高剂量组(1.8g/kg)、低剂量组(0.2g/kg)。
5.2模型的建立与给药
除正常对照组外,其它各组一次性皮下注射野百合碱(MCT,以乙醇:生理盐水=2:8为溶剂)60mg/kg,正常对照组皮下注射等量乙醇:生理盐水=2:8的溶液。各组于注射后1周开始灌胃给予相应剂量的溶剂或药物,每天一次,连续给药21天后,动物处死测定相应指标。
6观察指标
6.1体重
试验期间,每周1次测定动物的体重。
6.2右心室压和肺动脉压力的检测
采用右心导管法。将特制好的PE50管预充满肝素生理盐水(避免管腔内存在气泡)后接三通管再经压力换能器和记录系统相连,压力校零备用。大鼠称重后,麻醉,取正中右侧纵向切口约0.5cm,分离暴露右颈外静脉,结扎远心端,在结扎处的血管壁上用眼科剪小心剪一“V”型小口,插管,并用手术线将血管和PE50管轻轻结扎,缓缓向前推进,使PE50管从右心房进入右心室,最后达到肺动脉,此过程需要在记录系统上密切观察压力大小和波形,根据导管插入的长度、肺动脉压力的波形和压力值判断导管是否已到达肺动脉,并做好相应的压力和波形记录,待稳定后记录平均肺动脉压(mPAP)。
6.3右心肥厚指数
开胸处死动物,取出心脏,沿房室沟剪去心房及大血管根部,沿后室壁间沟将其分离成右心室和左心室加室间隔,滤纸吸干多余的血,用电子天平称量右心室游离壁(RV)及左心室加心室间隔(LV+S)的重量,并计算右心肥厚指数。
右心肥厚指数(RVHI)=[RV/(LV+S)]×100%
6.4肺指数
先向肺动脉内注入生理盐水,洗出肺内血液,剪去肺门,滤纸吸干表面水分,电子天平称量肺湿重量(wW),并计算肺指数。
肺指数(LI)=肺湿重量(wW)/体重(BW)×100%
7统计方法
所有计量数据,各剂量组间及对照组作方差齐性检验,若方差齐(P>0.05),则做单因素方差分析;若方差不齐(P<0.05),则进行非参数检验(Kruskal-Wsllis H检验),有统计学差异(P<0.05),则各剂量组与对照组间做Mann—Whitney U检验。
8实验结果
8.1动物体重
大鼠野百合碱造模后,体重显著轻于正常对照组,而艾叶提取物给药组未见升高大鼠体重的作用。
表2.艾叶提取物对肺动脉高压大鼠体重的影响
8.2右心室压和肺动脉压力、平均动脉压
SD大鼠使用野百合碱造模后,模型对照组大鼠的右心室压(mPAP)和肺动脉压力(mRVP)、最大肺动脉压力(mRVP max)有显著的升高作用(P≤0.001),而艾叶提取物对肺动脉压力和右心室压,均有显著的降低作用(P≤0.001-0.05)见表3。
表3.艾叶提取物对肺动脉高压大鼠右心房压和肺动脉压的影响
与模型相比,*P<0.05;**P<0.01;***P<0.001
与正常对照相比,###P<0.001
8.3右心肥厚指数及肺指数
SD大鼠使用野百合碱造模后,模型对照组大鼠右心室游离壁重量、湿肺重量、右心肥厚指数及肺指数均显著大于正常对照组,而艾叶提取物低剂量对大鼠湿肺重量及肺指数有显著的降低作用,表现出一定的治疗作用。见表4。
表4.艾叶提取物对肺动脉高压大鼠右心肥厚指数和肺指数的影响
组别 | RV | LV+S | wW | RV/LV+S | LI |
正常对照 | 0.218±0.026 | 0.893±0.064 | 1.31±0.09 | 24.4±2.0 | 0.348±0.025 |
模型对照 | 0.327±0.060 | 0.839±0.062 | 2.00±0.26 | 39.3±8.0 | 0.590±0.085 |
Bosentan阳性对照 | 0.310±0.065 | 0.837±0.046 | 2.02±0.34 | 37.1±7.6 | 0.599±0.110 |
艾叶提取物低剂量 | 0.319±0.081 | 0.782±0.073* | 1.77±0.20** | 40.5±8.2 | 0.51±0.047** |
艾叶提取物高剂量 | 0.328±0.064 | 0.770±0.053*** | 1.92±0.23 | 42.6±7.3 | 0.572±0.070 |
给药组VS模型组:*P<0.05;**P<0.01;***P<0.001
9实验结论
艾叶提取物对野百合碱诱导的大鼠肺动脉高压及右心肥厚有较好的实验治疗作用。
Claims (7)
1.艾叶提取物在制备治疗肺心病药物中的用途。
2.根据权利要求1所述的艾叶提取物的制备方法,其特征在于将艾叶粉碎后,放置于烧瓶中,加入艾叶质量5~10倍量的纯水,浸泡1~3小时后,采用共水蒸馏法提取得到挥发油。
3.根据权利要求1所述的艾叶提取物的制备方法,其特征在于将艾叶粉碎后置于萃取釜中,密封,待萃取釜及分离灌温度达到预定温度后,加压至适当压力进行C02超临界萃取,得艾叶油,超临界萃取压力为10-20MPa,温度为28-40℃,流量为15-30kg/h,萃取时间为60—120min。
4.一种艾叶提取物β-环糊精包合物,其特征在于由下述制备方法制备得到:
取艾叶提取物加质量体积比1:1的乙醇溶解,制备成挥发油乙醇溶液;将1β-环糊精溶于水,制成β-环糊精的饱和水溶液;再用滴管将挥发油乙醇溶液缓缓滴入β-环糊精饱和水溶液中,保温;艾叶提取物与β-环糊精比例为1:5一1:20;包合溶液置冰箱中冷藏过夜,抽滤,包合物用少量乙醚洗涤,置恒温烘箱中干燥,即得。
5.一种艾叶提取物β-环糊精包合物,其特征在于由下述制备方法制备得到:
取β-环糊精加水制成饱和水溶液;将艾叶提取物溶解于少量乙醇中,制成乙醇溶液,在超声条件下缓慢加入β-环糊精水溶液中,超声30~60min;包合溶液置冰箱中冷藏过夜,抽滤,包合物用少量乙醚洗涤,置恒温烘箱中干燥,即得。
6.一种艾叶提取物β-环糊精包合物,其特征在于由下述制备方法制备得到:
取β-环糊精加水制成饱和水溶液;将艾叶提取物溶解于少量乙醇中,制成乙醇溶液,在搅拌下缓慢加入加热至40℃--60℃的β-环糊精水溶液中,用均质机处理20s~60s;包合溶液置冰箱中冷藏过夜,抽滤,包合物用乙醚洗涤,置恒温烘箱中干燥,即得。
7.一种艾叶提取物脂质体,其特征在于由下述制备方法制备得到:
称取豆磷脂适量,加入磷酸盐缓冲溶液搅拌使溶解,另外称取胆固醇,用乙醚溶解后,用滴管将其滴入60-70℃保温的豆磷脂溶液中,搅拌使混合均匀,超声处理20min~40min,用磷酸盐缓冲液调整后,再将混悬液通过高压均质机,过滤,即得艾叶提取物脂质体。
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