CN104072578A - 天然产物Tubulysin U的制备方法 - Google Patents

天然产物Tubulysin U的制备方法 Download PDF

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CN104072578A CN201310106134.7A CN201310106134A CN104072578A CN 104072578 A CN104072578 A CN 104072578A CN 201310106134 A CN201310106134 A CN 201310106134A CN 104072578 A CN104072578 A CN 104072578A
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Abstract

本发明涉及一种式(1)结构的天然产物Tubulysin U的制备方法。

Description

天然产物Tubulysin U的制备方法
技术领域
本发明属于药物技术领域，具体地说，涉及Tubulysin U的制备方法。 
背景技术
2000年，等人首次报导了一种从粘细菌中分离提取的线性四肽小分子。由于它们主要作用在细胞的微管蛋白细胞骨架(tubulin cytoskeleto)上，因此把这一类化合物命名为Tubulysins。 
研究发现，Tubulysins不仅具有很高的抗癌活性(Tubulysin D的IC50约为紫杉醇的100-5000倍，为埃博霉素B的10倍以上)，而且能够有效地抑制耐药性癌细胞的生长，但它的具体作用机理却是与埃博霉素和紫杉醇相反，即促进微管蛋白的聚合。长春碱的作用机理虽与其相似，但活性差很多。另外，Kaur等人还发现Tubulysins还具有抑制血管新生的作用。这些都说明了Tubulysins作为抗癌药的巨大潜力。 
通过粘细菌发酵来实现生物合成，但只能合成很少量的Tubulysins，不到4毫克/升，而且还需要几个非常繁琐的纯化步骤，因而不利于工业化生产。 
发明内容
本发明提供了一条合成天然产物Tubulysin U(1)的路线。为了实现本发明的上述目的，本发明提供如下的技术方案： 
Tubulysin U的制备，该方法包括如下步骤： 
其中Tuv片段2的制备方法如下： 
孔p片段7的制备方法如下： 
具体实施方式
为了理解本发明，下面以实施例进一步说明本发明，但不意于限制本发明的保护范围。 
实施例1：TubulysinU(1)的制备 
化合物4的合成 
向化合物2(0.57g，1.6mmol)的甲醇(10mL)溶液中加入3.5N盐酸溶液(4.57mL，16mmol)，并使反应液在室温下搅拌3小时。减压蒸掉溶剂后，得到淡黄色固体。将该固体溶于DMF(16mL)中，并依次加入DIEA(1.39mL，8mmol)和活化酯3(0.7g，2mmol)，然后使反应混合液在室温下搅拌40小时。减压蒸掉溶剂，粗品经硅胶层析柱(流动相：乙酸乙酯∶石油醚1∶1)分离纯化得到化合物4(白色固体，0.61g，产率：81％)。M.p.：169-170℃.[α]25D＝+7.8(c＝1.0inCH2Cl2).IR3343，3285，1732，1690，1653，1520，1216，1097cm-1.1H NMR(CDCl3，400MHz)δ0.89-0.96(m，12H)，1.08-1.17(m，1H)，1.44(s，9H)，1.45-1.57(m，1H)，1.74-1.86(m，2H)，1.91-2.01(m，1H)，2.16-2.23(m，1H)，3.90-3.99(m，2H)，3.93(s，3H)，4.85-4.89(m，1H)，5.47(d，J＝3.9Hz，1H)，6.27(d，J＝9.1Hz，1H)，8.14(s，1H).13C NMR(CDCl3，100MHz)δ10.1，14.9，17.3，18.5，23.7，27.3，31.0，34.5，39.7，50.7，51.3，58.7，67.8，79.2，126.7，145.5，155.0，161.0，173.0，176.0.HRMS(ESI)for[C22H38N3O6S]+：calcd.472.2476，found472.2483. 
化合物5的合成 
向化合物4(0.57g，1.2mmol)的甲醇(7.5mL)溶液中加入3.5N盐酸溶液(3.43mL，12mmol)，并使反应液在室温下搅拌3小时。减压蒸掉溶剂后，得到淡黄色固体。向D-N-甲基哌啶酸(0.26g，1.8mmol)的乙酸乙酯(4mL)溶液中依次加入五氟苯酚(0.37g，2mmol)和DCC(0.41g，2mmol)，室温下搅拌24小时，然后过滤掉沉淀物，并用乙酸乙酯(2mL)冲洗滤饼，所得滤液不需纯化，直接用于下一步。把该活化酯的滤液加入到上述淡黄色固体中，接着加入DIEA(1mL，6mmol)，然后使反应混合液在室温下搅拌30小时。减压蒸掉溶剂，粗品经硅胶层析柱(流动相：甲醇∶二氯甲烷1∶25)分离纯化得到化合物5(淡黄色固体，0.47g，产率：79％)。M.p.：193-194℃.[α]25D＝+39.0(c＝1.0in CH2Cl2).IR 3277，2412，1730，1643，1502，1459，1232，989cm-1.1H NMR(CD3OD，400MHz)δ0.89-0.92(m，9H)，0.99(d，J＝6.7Hz，3H)，1.19-1.27(m，1H)，1.28-1.37(m，1H)，1.56-1.70(m，4H)，1.77-1.83(m，3H)，1.86-1.92(m，2H)，2.01-2.09(m，1H)，2.23-2.28(m，1H)，2.31(s，3H)，2.80(dd，J＝11.2，2.4Hz，1H)，3.03(d，J＝11.5Hz，1H)，3.91(s，3H)，4.06-4.09(m，1H)，4.25(d，J＝8.9Hz，1H)，4.77-4.89(m，1H)，8.31(s，1H).13C NMR(CD3OD，100MHz)δ10.9，16.1，18.5，19.4，23.9，25.7，26.0，31.3，33.9，37.4，40.9，44.4，52.4，52.7，56.5，59.4，69.7，70.2，129.0，147.4，163.1，174.0，174.4，181.0.HRMS(ESI)for[C24H41N4O5S]+：calcd.497.2792，found497.2796. 
化合物6的合成 
向化合物5(0.05g，0.1mmol)的无水乙醚(5mL)溶液中加入KOSiMe3(0.02g，0.15mmol)，搅拌0.5小时后，有白色絮状沉淀物生成。反应液在室温下搅拌3小时后，减压蒸掉溶剂。粗品经过乙醚洗涤后，得到白色固体。把该固体溶于吡啶(1mL)，并降温至0℃，接着加入Ac2O(0.095mL，1mmol)。反应混合液在室温下搅拌过夜后，减压蒸掉溶剂，所得粗品经硅胶层析柱(流动相：甲醇/二氯甲烷/氨水10∶90∶1)分离纯化得到化合物6(淡黄色固体，0.044g，产率：83％)。M.p.：161-163℃.[α]20D＝-10.0(c＝0.5in MeOH).IR3276，2958，1747，1672，1533，1365，1225，1037，770cm-1.1H NMR(CD3OD，400MHz)δ0.89-0.93(m，9H)，0.98(d，J＝6.8Hz，3H)，1.14-1.29(m，1H)，1.46-1.60(m，2H)，1.68-1.84(m，5H)，1.87-1.91(m，2H)，2.01-2.04(m，1H)，2.10-2.17(m，1H)，2.13(s，3H)，2.57(s，3H)，2.66-2.75(m，1H)，3.26-3.33(m，1H)，3.34-3.47(m，1H)，3.92-3.97(m，1H)，4.29(d，J＝8.2Hz，1H)，5.95-6.00(m，1H)，7.99(s，1H).13C NMR(CD3OD，100MHz)δ11.2，16.3，18.7，19.5，20.9，23.1，24.9，25.9，30.8，34.0，37.9，38.3，43.8，52.3，56.2，60.0，69.0，71.8，124.9，155.4，169.0，171.8，171.9，173.8.HRMS(ESI)for[C25H41N4O6S]+：calcd.525.2741，found525.2742. 
Tubulysin U(1)的合成 
向化合物6(0.052g，0.1mmol)的二氯甲烷(0.5mL)溶液中依次加入五氟苯酚(0.028g，0.15mmol)和DIC(0.017mL，0.11mmol)，并在室温下搅拌24小时。减压旋掉溶剂，然后向反应瓶中加入乙酸乙酯。过滤掉沉淀物，并用乙酸乙酯冲洗滤饼。所得滤液经减压蒸干后得到活化酯粗品。将该粗品溶于DMF(0.4mL)中，并依次加入化合物7(0.073g，0.3mmol)和DIEA(0.087mL，0.5mmol)。反应混合液在室温下搅拌24小时后，减压蒸掉溶剂，所得粗品经硅胶层析柱(流动相：甲醇∶二氯甲烷1∶10)分离纯化得到化合物Tubulysin U(白色固体，0.061g，产率：86％)。[α]20 D＝-4.8(c＝0.5in MeOH)IR3274，2998，1750，1665，1541，1499，1225cm-1.1H NMR(CD3OD，400MHz)δ0.89-0.95(m，9H)，0.98(d，J＝6.7Hz，3H)，1.15(d，J＝5.8Hz，3H)，1.16-1.24(m，1H)，1.36-1.47(m，1H)，1.53-1.71(m，5H)，1.78-1.93(m，4H)，1.96-2.01(m，1H)，2.07-2.12(m，1H)，2.14(s，3H)，2.21-2.28(m，1H)，2.45(s，3H)，2.41-2.59(m，2H)，2.90(d，J＝4.1Hz，2H)，3.15-3.18(m，2H)，3.92-4.00(m，1H)，4.21(d，J＝8.3Hz，1H)，4.32-4.40(m，1H)，5.90(dd，J＝10.7，2.5Hz，1H)，7.11-7.16(m，1H)，7.21(d，J＝4.1Hz，4H)，8.07(s，1H).13C NMR(CD3OD，100MHz)δ11.1，16.2，18.6，18.9，19.6，20.7，23.4，25.3，25.9，30.9，33.8，37.6，38.0，39.1，39.2，41.8，43.9，51.1，52.0，56.3，59.7，69.5，71.3，125.0，127.3，129.3，130.5，139.6，151.0，162.7，171.7，173.0，173.7，181.9.HRMS(ESI)for[C37H56N5O7S]+：calcd.714.3895，found 714.3897. 
实施例2：Tuv片段(2)的制备 
化合物10的合成 
向降温至-78℃的化合物8(2.58g，8.38mmol)的四氢呋喃(80mL)溶液中滴加正丁基锂四氢呋喃(2.5M，0.37mL，9.3mmol)溶液。在该温度下继续搅拌1.5小时后，化合物9(1.34mL，12.6mmol)逐滴加入到反应混合液中。在-78℃下搅拌1小时后，反应液在2小时内缓慢升至0℃。加入饱和碳酸氢钠溶液终止反应，然后加入乙醚稀释，静置，分出有机相，水相再用乙醚萃取。合并有机相， 用无水硫酸钠干燥，过滤，溶液旋干，粗品经硅胶层析柱(流动相：乙酸乙酯∶石油醚1∶20)分离纯化得到化合物10(淡黄色固体，2.07g，产率：91％)。M.p.：44-45℃.IR2933，2888，2860，1680，1510，1464，1440，1257，842，785cm-1. 1H NMR(CDCl3，400MHz)δ0.06(s，6H)，0.88(s，9H)，2.61(s，3H)，4.84(s，2H)，7.48(s，1H).13C NMR(CDCl3，100MHz)δ-6.4，17.4，24.9，25.0，61.1，120.4，158.7，165.7，190.7.HRMS(ESI)for[C12H22NO2SSi]+：calcd.272.1135，found272.1140. 
化合物12的合成 
向降温至-78℃的KHMDS(0.66M，0.73mL，0.48mmol)的四氢呋喃(6mL)溶液中缓慢滴加化合物10(0.11g，0.4mmol)的四氢呋喃(1mL)溶液。在该温度下继续搅拌1小时后，化合物11(0.13g，0.6mmol)的四氢呋喃(1mL)溶液逐滴加入到反应混合液中。在-78℃下搅拌4小时后，加入饱和氯化铵溶液终止反应。反应混合液升至室温，然后用乙酸乙酯萃取。合并有机相，用无水硫酸镁干燥，过滤，溶液旋干，粗品经硅胶层析柱(流动相：乙酸乙酯∶石油醚1∶9)分离纯化得到化合物12(无色油状液体，0.16g，产率：81％)。[α]20 D＝+84.8(c＝1.0 in CHCl3).IR3204，1683，1462，1256，1092，842cm-1.1H NMR([D6]DMSO，400MHz)δ0.09(s，3H)，0.10(s，3H)，0.85(d，J＝6.8Hz，3H)，0.92(d，J＝6.8Hz，3H)，0.90(s，9H)，1.90-1.98(m，1H)，2.29(s，3H)，2.98(dd，J＝15.9，7.9Hz，1H)，3.17(dd，J＝15.9，5.2Hz，1H)，3.65-3.72(m，1H)，4.75(s，2H)，6.62(d，J＝9.1Hz，3H)，7.19(d，J＝8.1Hz，1H)，7.36(d，J＝8.1Hz，1H)，7.89(s，1H).13C NMR(CDCl3，100MHz)δ-6.4，17.3，17.6，20.3，24.9，31.6，40.5，56.9，61.0，120.6，124.4，128.4，140.1，141.4，158.6，165.5，191.3.HRMS(ESI)for[C23H37N2O3S2Si]+：calcd.481.2009，found481.2016. 
化合物13的合成 
向降温至-78℃的化合物12(0.06g，0.125mmol)的二氯甲烷(12.5mL)溶液 中滴加LiBHEt3四氢呋喃(1M，0.63mL，0.63mmol)溶液。在该温度下继续搅拌2.5小时后，加入饱和氯化铵溶液终止反应。分出有机相，水相再用二氯甲烷萃取。合并有机相，用无水硫酸镁干燥，过滤，溶液旋干，粗品经硅胶层析柱(流动相：乙酸乙酯∶石油醚1∶6)分离纯化得到化合物13(无色油状液体，0.052g，产率：86％)。[α]20 D＝+102.6(c＝1.0in CHCl3).IR3198，2994，1257，1090，840cm-1.1H NMR(CDCl3，400MHz)δ0.08(s，6H)，0.92(s，9H)，0.93(d，J＝6.7Hz，3H)，1.01(d，J＝6.7Hz，3H)，1.75-1.83(m，1H)，1.89-1.96(m，1H)，2.01-2.08(m，1H)，2.40(s，3H)，3.55-3.62(m，1H)，4.13(d，J＝8.8Hz，1H)，4.77(s，2H)，5.16-5.22(m，2H)，7.08(s，1H)，7.28(d，J＝8.0Hz，1H)，7.61(d，J＝8.2Hz，1H).13C NMR(CDCl3，100MHz)δ-6.4，16.7，17.3，18.5，20.4，24.9，32.9，40.0，57.3，61.2，66.9，112.2，124.3，128.6，140.7，140.9，155.8，175.6.HRMS(ESI)for[C23H39N2O3S2Si]+：calcd.483.2166，found483.2167. 
化合物14的合成 
在0℃下，三氟乙酸(0.1mL，1.2mmol)逐滴加入到化合物13(0.1g，0.2mmol)的甲醇(3mL)溶液中，并在该温度下继续搅拌6小时。减压蒸掉溶剂后，得到淡黄色的泡沫状固体。将该固体溶于四氢呋喃(3mL)，并使反应液降至0℃，然后依次加入Boc2(0.052g，0.24mmol)和Et3N(0.061mL，0.44mmol)。反应混合液在室温下搅拌过在后，减压蒸掉溶剂，粗品经硅胶层析柱(流动相：乙酸乙酯∶石油醚2∶3)分离纯化得到化合物14(白色固体，0.04g，产率：60％)。M.p.：137-138℃.[α]20 D＝+7.8(c＝1.0in CHCl3).IR3306，3100，2966，2934，1689，1539，1269，1170，1038，795cm-1.1H NMR(CDCl3，400MHz)δ0.93(d，J＝2.5Hz，3H)，0.95(d，J＝2.5Hz，3H)，1.43(s，9H)，1.69-1.83(m，2H)，1.91-1.98(m，1H)，3.00(br s，1H)，3.70-3.76(m，1H)，4.65-4.78(m，1H)，4.72(s，2H)，4.93(d，J＝10.9Hz，1H)，5.18(d，J＝3.9Hz，1H)，7.12(s，1H). 13C NMR(CDCl3，100MHz)δ17.3，18.2，27.4，31.4，40.7，51.5，59.3，67.8， 78.9，113.7，155.0，156.7，176.1.HRMS(ESI)for[C15H27N2O4S]+：calcd.331.1686，found331.1692. 
化合物15的合成 
向化合物14(0.33g，1.0mmol)的二氯甲烷(10mL)溶液中依次加入TEMPO(0.015g，0.1mmol)和BAIB(0.39g，1.2mmol)，并使反应液在室温下搅拌6小时，然后加入硫代硫酸钠溶液终止反应。分出有机相，水相再用二氯甲烷萃取。合并后的有机相用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，过滤，溶液旋干，粗品经硅胶层析柱(流动相：乙酸乙酯∶石油醚1∶4)分离纯化得到化合物15(白色固体，0.28g，产率：85％)。M.p.：118-119℃.[α]20 D＝+0.2(c＝1.0inCHCl3).IR3359，3083，2961，2926，1678，1531，1368，1263，1173，1087，1021，804cm-1.1H NMR(CDCl3，400MHz)δ0.97(d，J＝6.8Hz，6H)，1.45(s，9H)，1.72-1.85(m，2H)，2.04-2.11(m，1H)，3.69-3.77(m，1H)，4.58(d，J＝9.5Hz，1H)，4.96-5.01(m，1H)，5.31(d，J＝4.3Hz，6H)，8.14(s，1H)，9.97(s，1H).13C NMR(CDCl3，100MHz)δ17.4，18.3，27.3，31.2，40.6，51.3，68.0，79.4，128.1，153.8，157.0，176.7，183.4.HRMS(ESI)for[C15H25N2O4S]+：calcd.329.1530，found329.1526. 
Tuv片段(2)的合成 
向化合物15(0.13g，0.4mmol)的叔丁醇(10mL)溶液中加入2-甲基-2-丁烯四氢呋喃(2M，1.5mL，3mmol)溶液，然后逐滴加入NaClO2(0.20g，2.15mmol)和NaH2PO4(0.67g，5mmol)的混合水溶液(5.0mL)。反应混合液在室温下反应6小时后，加入盐酸溶液稀释(0.1N，50mL)。分出有机相，水相再用乙酸乙酯萃取。合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，溶液旋干后得白色固体。将该固体溶于DMF(4mL)中，并依次加入K2CO3(0.11g，0.8mmol)和MeI(0.034mL，0.6mmol)。反应混合液在室温下搅拌过夜后，加入乙酸乙酯稀释，并依次用稀盐酸和饱和碳酸氢钠溶液洗涤。然后有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，溶液旋干，粗品经硅胶层析柱(流动相：乙酸乙酯∶石油醚3∶7)分离纯化得到化合物2(白 色卧体，0.11g，产率：80％)。M.p.：160-161℃.[α]20 D＝+8.6(c＝1.0in CHCl3).IR3334，3049，2961，2926，1712，1665，1536，1464，1365，1246，1171，1088，1023，800cm-1.1H NMR(CDCl3，400MHz)δ0.87(d，J＝2.1Hz，3H)，0.89(d，J＝2.0Hz，3H)，1.37(s，9H)，1.63-1.77(m，2H)，1.96-2.03(m，1H)，3.62-3.70(m，1H)，4.50(d，J＝9.5Hz，1H)，4.90-4.99(m，1H)，5.18(d，J＝4.0Hz，1H)，8.08(s，1H).13C NMR(CDCl3，100MHz)δ17.3，18.4，27.3，31.2，40.9，51.3，51.4，68.0，79.4，126.5，145.4，157.0，161.0，175.7.HRMS(ESI)for[C16H27N2O5S]+：calcd.359.1635，found 359.1636. 
实施例3：Tup片段(7)的制备 
化合物17的合成 
在-78℃下向化合物16(8.77g，28.1mmol)的二氯甲烷(300mL)溶液中鼓入臭氧至反应液变蓝，然后吹氩气至蓝色消失，加入三苯基磷(8.12g，31mmol)，缓慢升至室温，搅拌10小时。反应液旋干，粗品经硅胶层析柱(流动相：乙酸乙酯∶石油醚1∶4)分离纯化得到化合物17(白色固体，7.36g，产率：88％)。M.p.：122-124℃.[α]25 D＝-64.4(c＝1 in CHCl3).IR2962，2893，1725，1683，1460，1406，1324，1280，1239，1065cm-1.1H NMR(CDCl3，400MHz)δ0.98(s，3H)，1.23(d，J＝6.8Hz，3H)，1.28(s，3H)，1.32-1.44(m，2H)，1.87-2.13(m，5H)，2.62(dd，J＝18.1，5.3，1H)，2.98(dd，J＝18.1，8.5Hz，1H)，3.43-3.55(m，3H)，3.68-3.73(m，1H)，3.89(dd，J＝7.5，5.1Hz，1H)，9.70(s，1H).13C NMR(CDCl3，100MHz)δ16.8，20.1，20.7，26.6，33.0，34.2，38.2，44.7，47.9，48.6，49.0，53.2，65.4，174.7，199.8.HRMS(ESI)for[C15H24NO4S]+：calcd.314.1426，found314.1430. 
化合物19的合成 
向化合物18(6g，50mmol)的二氯甲烷(40mL)溶液中依次加入无水硫酸镁(14.4g，120mmol)，PPTS(251mg，1mmol)和化合物17(6.26g，20mmol)，并在室温下搅拌20小时。反应液滤过一层硅藻土，滤饼用CH2Cl2冲洗，有机相加 入饱和亚硫酸钠溶液搅拌2小时，静置分液，水相再用CH2Cl2萃取，合并有机相，无水硫酸镁干燥，过滤，溶液旋干，粗品经硅胶层析柱(流动相：乙酸乙酯∶石油醚1∶3)分离纯化得到化合物19(白色固体，6.92g，产率：85％)。M.p.：97-98℃.[α]25 D＝+90.4(c＝1.0in CHCl3).IR3019，2965，2884，1696，1625，1330，1075cm-1.1H NMR(CDCl3，400MHz)δ0.95(s，3H)，1.12(s，3H)，1.18(s，9H)，1.24(d，J＝6.6Hz，3H)，1.32-1.43(m，1H)，1.81-1.95(m，3H)，2.04-2.06(m，2H)，2.66(ddd，J＝15.9，7.8，5.2Hz，1H)，2.90(ddd，J＝15.9，5.4，3.9Hz，1H)，3.46(q，J＝13.8Hz，2H)，3.53-3.58(m，1H)，3.89(t，J＝6.3Hz，1H)，8.02(dd，J＝5.1，3.9Hz，1H).13C NMR(CDCl3，100MHz)δ16.1，19.7，20.8，22.2，26.3，32.7，36.6，38.3，40.6，44.4，47.6，48.3，52.9，56.7，65.0，166.1，174.3.HRMS(ESI)for[C19H33N2O4S2]+：calcd.417.1876，found417.1880. 
化合物20的合成 
在-78℃下，将苄基氯化镁乙醚溶液(0.5-0.8M，5mmol)缓慢滴入化合物19(0.42g，1mmol)的乙醚和二氯甲烷的混合溶液中(最后反应液中二氯甲烷∶乙醚＝1∶3，并保证反应浓度为0.04M)，搅拌6小时，然后在5至7小时内升至-20℃，TLC检测反应完全，加入饱和氯化铵终止反应。加水稀释，静置，分出有机相，水相用二氯甲烷萃取，合并有机相，用无水硫酸镁干燥。过滤，溶液旋干，粗品经硅胶层析柱(流动相：乙酸乙酯∶石油醚1∶4)分离纯化得到非对映异构体混合物(白色固体，0.17g，产率：90％)。在二氯甲烷中重结晶后，得到化合物20(白色固体，0.085g，产率：45％)。[α]25 D＝-63.2(c＝1.0in CHCl3)for6.6：1dr.IR3236，2967，2931，2874，1696，1455，1300，1260cm-1.1H NMR(CDCl3，400MHz)δ1.17(d，J＝7.2Hz，3H)，1.84-1.94(m，1H)，2.11(ddd，J＝12.2，8.8，3.2Hz，1H)，2.39-2.47(m，1H)，2.71(dd，J＝13.4，7.8Hz，1H)，2.80(dd，J＝13.4，5.9Hz，1H)，3.78-3.84(m，1H)，6.04(br s，1H)，7.15-7.19(m，2H)，7.21-7.26(m，1H)，7.28-7.34(m，2H).13C NMR(CDCl3，100MHz) δ16.2，34.7，35.0，42.5，53.4，126.7，128.6，129.2，137.6，180.8.HRMS(ESI)for[C12H16NO]+：calcd.190.1226，found190.1226. 
Tup片段(7)的合成 
将化合物20(0.19g，1mmol)溶于6N盐酸(15mL)中，加热至115℃，回流8小时。旋蒸除去溶剂，用乙醚将产物沉淀出来即可得到化合物7(白色固体，0.24g，产率97％)。[α]25 D＝+4.4(c＝1.0 in MeOH).1H NMR(D2O，400MHz)δ1.14(d，J＝7.0Hz，3H)，1.66-1.73(m，1H)，1.95-2.02(m，1H)，2.61-2.70(m，1H)，2.87(dd，J＝14.1，7.7Hz，1H)，2.99(dd，J＝14.2，6.6Hz，1H)，3.53-3.60(m，1H)，7.26-7.39(m，5H).13C NMR(D2O，100MHz)δ16.6，35.4，35.8，38.3，51.2，127.5，129.1，129.4，135.4，180.0. 
本发明的化合物、用途和方法已经通过具体的实施例进行了描述。本领域技术人员可以借鉴本发明的内容适当改变原料、工艺条件等环节来实现相应的其它目的，其相关改变都没有脱离本发明的内容，所有类似的替换和改动对于本领域技术人员来说是显而易见的，都被视为包括在本发明的范围之内。 

Claims (3)

1.一种制备天然产物Tubulysin U的方法，具体包括如下步骤：
2.一种制备Tuv片段2的方法，该方法包括如下步骤：
3.一种制备Tup片段7的方法，该方法包括如下步骤：
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