CN104045690B

CN104045690B - 生长抑素受体激动剂多肽及其应用

Info

Publication number: CN104045690B
Application number: CN201410286781.5A
Authority: CN
Inventors: 马海洁; 张国强; 彭敏霞; 胡晓斐; 吴丽萍; 竺王玉
Original assignee: Zhoushan hospital
Current assignee: Zhoushan Hospital
Priority date: 2014-06-25
Filing date: 2014-06-25
Publication date: 2016-06-08
Anticipated expiration: 2034-06-25
Also published as: CN104045690A

Abstract

本发明涉及药物领域，具体涉及具有抑制生长抑素表达，治疗肝癌的多肽。其序列为GGLGLPFLATQNAAS是全新的序列，体外促进生长抑素结合，并在体内试验中提高荷瘤小鼠生存率，具有潜在的新药开发价值。

Description

生长抑素受体激动剂多肽及其应用

技术领域

本发明涉及生长抑素受体激动剂多肽及其应用，具体涉及具有促进生长抑素受体活性，治疗肝癌的多肽。

背景技术

肝癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，20世纪90年代以来，我国肝癌死亡率已上升到恶性肿瘤的第2位，每年约有13万人死于肝癌。原发性肝癌病情发展快，若不经治疗，自然生存期平均为4.3个月，即使手术切除预后也不理想，5年生存率为37.2％，小肝癌手术后5年生存率也仅为53.5％。影响肝癌患者手术治疗效果的主要原因是复发和转移。肝癌术后复发率可高达60％以上，即使小肝癌术后复发率亦高达40％。目前生物靶向治疗肿瘤是非常有前景的，靶向治疗是针对肿瘤发生过程中阻断某个或多个信号通路，达到治疗肿瘤的目的。

生长抑素除了具有抑制消化道激素分泌外，还有抑制消化道肿瘤如胃癌、胰腺癌、肝癌等肿瘤细胞增生的作用，因而生长抑素成为潜在的治疗肿瘤的药物，尤其是对于肝癌，它具有抑制肿瘤生长，诱导细胞凋亡等作用。目前已有文献报道，将人工合成的长效生长抑素类似物用于晚期肝癌的治疗并取得一定效果。药理学研究证实，生长抑素与肿瘤组织中的生长抑素受体(SSTR)特异结合才能发挥抑制肿瘤生长的作用。包括肝癌在内的许多实体肿瘤均存在SSTR的表达，而且体外受体放射自显影和放射配体结合研究也发现肝癌组织存在SSTR。因此，生长抑素受体激动剂，可以促进SSTR的活性，抑制肿瘤的生长，是预防和治疗肝癌复发的新靶点。但是，尚未有开发成熟的生长抑素受体激动剂多肽的治疗肝癌的药物。

本专利中的生长抑素受体激动剂多肽2已证明在肝癌中有效，具有在其他肿瘤模型中开发的前景。

发明内容

发明目的

本发明提供全新的序列，该序列生长抑素受体激动剂，对预防和治疗肝癌复发具有很好的疗效。

技术方案

生长抑素受体激动剂多肽，其特征在于其序列为GGLGLPFLATQNAAS。

生长抑素受体激动剂多肽对预防和治疗肝癌复发药物中的应用。

有益效果

利用固相合成法化学合成生长抑素受体激动剂多肽，该多肽具有全新的序列，该多肽可促进生长抑素受体的活性，预防和治疗肝癌复发。在1微摩尔水平上体外促进生长抑素结合，并在体内试验中提高荷瘤小鼠生存率，具有潜在的新药开发价值。

附图说明

具体实施方式

本发明涉及多肽由吉尔生化(上海)合成。

实施例1

生长抑素受体激动剂多肽对体外生长抑素受体与生长抑素亲和力的影响。

将对数生长的HepG2细胞，以1.0×10⁵加入96孔培养板中，培养24h，实验孔、阳性药物对照孔分别加入不同浓度的实验药物生长抑素受体激动剂多肽2和阳性对照药物长春新碱；空白组加入相同体积的溶剂，同时，加入¹²⁵I标记的生长抑素。每孔设五个复孔，培养48h。洗去上清液，用γ-液体闪烁计数器计算放射强度，判断生长抑素受体与生长抑素的结合力，放射强度强度越强，结合越多，反之，放射强度强度越弱，结合越少。结果表明，随生长抑素受体激动剂多肽2浓度增加，与生长抑素结合逐渐增加，说明与生长抑素结合能力随药物浓度的增加而不断减加。

表1多肽对HepG2对体外生长抑素受体与生长抑素亲和力的影响

实施例2

生长抑素受体激动剂多肽2对体外培养肿瘤细胞的生长和存活IC50。

采用MTT比色法。将对数生长的HepG2细胞，以1.0×105加入96孔培养板中，培养24h，实验孔、阳性药物对照孔分别加入不同浓度的实验药物生长抑素受体激动剂多肽2和阳性对照药物长春新碱；空白组加入相同体积的溶剂。每孔设五个复孔，培养48h，分别在0h、2h、8h、14h、20h、24h、36h、，48h每孔加入MTT，作用4h后，加入DMSO，孵育30min，在酶标仪620nm处测定吸光度A值，按公式肿瘤细胞生长抑制率＝(1-实验组吸光值/对照组吸光值)×100％。计算出实验药物的IC50为7.49μM。

实施例3

生长抑素受体激动剂多肽对HepG2细胞迁移的作用。

将10mg/mlMatrigel(BD公司，USA)用无血清的细胞培养液以1:3稀释，涂布于Transwell小室(Greiner公司，USA)膜上，室温风干。将培养到对数生长期的HepG2细胞用胰蛋白酶消化，收集，用无血清细胞培养液重悬，于显微镜下计数，将细胞浓度调整到1×105个/ml。配制各组试验用液，分组如下：空白对照组：为不含药物的无血清细胞培养液；恩度组：用不含药物的无血清细胞培养液将5mg/ml的恩度储液稀释到预定浓度；生长抑素受体激动剂多肽组：用不含药物的无血清细胞培养液将生长抑素受体激动剂多肽稀释到各个预定浓度。将细胞接种到Transwell小室中，每孔100μl，并将各组试验用液加入小室中。24孔板中加入0.6ml含5％胎牛血清和1％内皮细胞生长因子(ECGS)的细胞培养液刺激细胞迁移，于5％CO2，37℃孵育24小时。弃去孔中培液，用无水乙醇常温固定30分钟，0.1％结晶紫常温染色10分钟，清水漂净，用棉签轻轻擦掉上层未迁移细胞，显微镜下观察并随机选择四个视野拍照计数。按照公式计算迁移抑制率(migrationinhibition,MI)：

MI(％)＝(1-Ntest/Ncontrol)×100％

其中Ntest为测试组的细胞迁移数，Ncontrol为空白对照组的细胞迁移数。试验得到的结果以mean±SD表示，并进行统计T检验，^*P<0.05为显著性差异，^**P<0.01为极显著性差异。

表2多肽对HepG2细胞迁移抑制作用

结果：在多肽的作用下，迁移的HepG2细胞数显著减少。与空白对照组相比，多肽能抑制5％胎牛血清及1％ECGS诱导的HUVEC的迁移作用。在0.5μg/ml和1μg/ml两个剂量下，多肽对细胞迁移的抑制作用与空白对照相比有极显著性差异，当多肽的剂量为0.5μg/ml时，对HepG2细胞迁移的抑制率达到最大。

实施例4

多肽对HepG2细胞裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制试验

取对数生长期的HepG2细胞细胞株，在无菌条件下制备成5×107/ml细胞悬液，以0.1ml接种于裸鼠右侧腋窝皮下。用游标卡尺测量裸鼠移植瘤直径，待肿瘤生长至100-200mm3后将动物随机分组。使用测量瘤径的方法，动态观察被试多肽的抗肿瘤效果。肿瘤直径的测量次数为每2天测1次。给药方式均采用尾静脉注射。阴性对照组注射等量生理盐水，每天1次；紫杉醇组10mg/kg，每周给药1次；恩度组2.5mg/kg，每天给药1次；多肽高中低组分别以20mg/kg、10mg/kg、5mg/kg，每天给药1次。试验结束后，小鼠处死，手术剥取瘤块称重。

表3多肽对HepG2细胞裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制作用

因此，多肽对HepG2细胞裸鼠移植瘤生长抑制试验结果表明，与阴性对照组相比，多肽20mg/kg组对HepG2细胞移植瘤的生长有极显著性的抑制作用，多肽10mg/kg组对HepG2细胞移植瘤的生长有显著性的抑制作用。与阳性对照组紫杉醇相比，多肽对实验动物的体重没有明显影响，未见明显的毒副反应。

SEQUENCELISTING

<110>苏州普罗达生物科技有限公司

<120>生长抑素受体激动剂多肽及其应用

<130>

<160>1

<170>PatentInversion3.3

<210>1

<211>15

<212>PRT

<213>人工序列

<400>1

GlyGlyLeuGlyLeuProPheLeuAlaThrGlnAsnAlaAlaSer

151015

Claims

1.生长抑素受体激动剂多肽，其特征在于其序列为GGLGLPFLATQNAAS。

2.一种药物组合物，其特征在于其包含如权利要求1所述多肽与一种以上药学上可接受的赋形剂、填充剂、粘合剂、润滑剂、崩解剂、或稳定剂。

3.如权利要求2所述的药物组合物，其特征在于，所述组合物为注射剂。

4.如权利要求1所述的多肽，其特征在于有效剂量为10mg/kg。

5.如权利要求1所述的生长抑素受体激动剂多肽在制备治疗肝癌药物中的应用。