CN104694521A - 水解纤维蛋白溶酶原多肽及其应用 - Google Patents

水解纤维蛋白溶酶原多肽及其应用 Download PDF

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    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
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    • C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
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Abstract

水解纤维蛋白溶酶原多肽及其应用。本发明涉及药物领域，具体涉及具有促进纤维蛋白溶酶原水解成血管抑素，治疗恶性肿瘤的多肽。其序列为EMQKTVDRLKALNHFDENMW是全新的序列，它们可以在体外促进纤维蛋白溶酶原水解，抑制血管内皮细胞增殖，并在体内试验中提高荷瘤小鼠生存率，具有潜在的新药开发价值。

Description

水解纤维蛋白溶酶原多肽及其应用
技术领域
本发明涉及水解纤维蛋白溶酶原多肽及其应用，具体涉及具有促进纤维蛋白溶酶原水解成血管抑素，治疗恶性肿瘤的多肽。
背景技术
1971年Folkman提出肿瘤生长和转移依赖新生血管生成。并认为实体瘤形成后，其发展可分为无血管期和血管期两个阶段。无血管期，微小肿瘤的存在依靠周围间质弥散供血，生长速度呈线性，肿瘤限制在1mm～2mm之内，瘤细胞数少于105～106个，迫使肿瘤处于“休眠状态”；进入血管期后，肿瘤组织为灌注性供血，瘤体呈指数性生长，2周后可增大1.6万倍。新生血管不仅提供肿瘤所需要的营养和氧气，排除代谢产物，而且是远处转移的途径。因此，阻断肿瘤新生血管形成就可能阻止肿瘤生长和转移，抗新生血管疗法也成为肿瘤治疗的手段之一。
血管抑素是纤维蛋白溶酶原的水解产物，有较强的血管生成抑制活性。大量研究证实血管抑素在体外能抑制内皮细胞的生长和迁移，在体内试验中可抑制新生血管形成，从而诱导肿瘤细胞凋亡，抑制肿瘤生长，使肿瘤处于“休眠状态”。
因此，促进纤维蛋白溶酶原水解，形成血管抑素，可以有效抑制体内血管内皮细胞增殖，抑制肿瘤的生长。从而，达到治疗肿瘤的效果。
目前，没有成熟开发的水解纤维蛋白溶酶原多肽问世，用于治疗恶性肿瘤。
本专利中的水解纤维蛋白溶酶原多肽已证明在治疗子宫癌中有效，具有在其他肿瘤模型中开发的前景。
发明内容
发明目的
本发明提供全新的序列，该序列为水解纤维蛋白溶酶原多肽，对恶性肿瘤具有很好的疗效。
技术方案
水解纤维蛋白溶酶原多肽，其特征在于其序列为EMQKTVDRLKALNHFDENMW。
水解纤维蛋白溶酶原多肽在治疗恶性肿瘤，如子宫癌药物中的应用。
有益效果
利用固相合成法化学合成水解纤维蛋白溶酶原多肽，该多肽具有全新的序列，该多肽可体外促进纤维蛋白溶酶原水解，治疗恶性肿瘤，如子宫癌。我们发现的水解纤维蛋白溶酶原多肽可以同时抑制血管内皮细胞增殖活力，并在体内试验中提高荷瘤小鼠生存率，具有潜在的新药开发价值。
具体实施方式
实施例1
水解纤维蛋白溶酶原多肽对体外水解纤维蛋白溶酶原的活性。
采用ELISA法检测纤维蛋白溶酶原水解产物——血管抑素。将1ml的1mg/ml的纤维蛋白溶酶为底物，分别在底物溶液中加入0.75、1.5、3.0μg的水解纤维蛋白溶酶原多肽(上海生工合成)和阳性对照药金属蛋白酶6μg，在37℃，反应5min后，离心，取上清，用ELISA法反应后溶液中血管抑素的含量，结果显示，0.75、1.5、3.0μg的水解纤维蛋白溶酶原多肽和金属蛋白酶产生的血管抑素分别为14.76、43.98、63.98nM。
实施例2
水解纤维蛋白溶酶原多肽对体外培养人血管内皮细胞的生长和存活IC50。
采用MTT比色法。将对数生长的人血管内皮细胞HUVEC，以1.0×105加入96孔培养板中，培养24h，实验孔、阳性药物对照孔分别加入不同浓度的实验药物水解纤维蛋白溶酶原多肽(上海生工合成)和阳性对照药物紫杉醇；空白组加入相同体积的溶剂。每孔设五个复孔，培养48h，分别在0h、2h、8h、 14h、20h、24h、36h、，48h每孔加入MTT，作用4h后，加入DMSO，孵育30min，在酶标仪620nm处测定吸光度A值，按公式HUVEC生长抑制率＝(1-实验组吸光值/对照组吸光值)×100％。计算出实验药物的IC50为5.08μM。
实施例3
用肿瘤模型检测水解纤维蛋白溶酶原多肽的体内活力。
建立子宫癌肿瘤模型，阳性对照药物紫杉醇；空白组加入相同体积的溶剂，实验组多肽(上海生工合成)设3个剂量：0.75、1.5、3μM/Kg。21天后，观察小鼠存活数量，计算存活率。结果显示，水解纤维蛋白溶酶原多肽可有效地保护小白鼠，提高荷瘤小鼠的生存率，生存率达到87.5％。
实施例4
水解纤维蛋白溶酶原多肽对人宫颈癌细胞HeLa裸鼠异种移植肿瘤生长抑制试验
取对数生长期的人宫颈癌细胞HeLa细胞株，在无菌条件下制备成5×106/ml细胞悬液，以0.1ml接种于裸鼠右侧腋窝皮下。用游标卡尺测量裸鼠移植瘤直径，待肿瘤生长至100-200mm3后动物随机分组。使用测量瘤径的方法，动态观察被试多肽的抗肿瘤效果。肿瘤直径的测量次数为每2天1次，每次测量同时还需称量鼠重。给药方式均采用尾静脉注射。阴性对照组注射等量生理盐水，每天1次；顺铂组10mg/kg，每周给药1次；每天给药1次；多肽以20mg/kg每天给药1次。肿瘤体积计算公式：
TV＝0.52×a×b2
其中a、b分别表示长宽。根据测量的结果计算出相对肿瘤体积。抗肿瘤活性的评价指标为相对肿瘤增殖率T/C(％)，计算公式如下：
T/C(％)＝TRTV/CRTV×100％
TRTV：治疗组RTV；CRTV：阴性对照组RTV
表1.多肽对人宫颈癌细胞HeLa裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制作用
多肽对人宫颈癌细胞HeLa裸鼠移植瘤生长抑制试验结果表明，与阴性对照组相比，多肽组对人宫颈癌细胞HeLa移植瘤的生长具有极显著性的抑制作用与阳性对照顺铂相比，多肽对实验动物的体重无明显影响，未见明显的毒副反应。
                         SEQUENCE LISTING
 
<110>  苏州普罗达生物科技有限公司
 
<120>  水解纤维蛋白溶酶原多肽及其应用
 
<130> 
 
<160>  1    
 
<170>  PatentIn version 3.3
 
<210>  1
<211>  20
<212>  PRT
<213>  人工序列
 
<400>  1
 
Glu Met Gln Lys Thr Val Asp Arg Leu Lys Ala Leu Asn His Phe Asp
1               5                   10                  15     
 
 
Glu Asn Met Trp
            20 

Claims (3)

1.水解纤维蛋白溶酶原多肽，其特征在于其序列为EMQKTVDRLKALNHFDENMW。
2.如权利要求1所述的水解纤维蛋白溶酶原多肽在治疗恶性肿瘤药物中的应用。
3.如权利要求2所述的水解纤维蛋白溶酶原多肽在治疗子宫癌药物中的应用。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105039294A (zh) * 2015-08-20 2015-11-11 顾彩霞 水解纤维蛋白溶酶原多肽

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1680430A (zh) * 2005-01-12 2005-10-12 复旦大学 人纤溶酶原激活剂模拟肽及其制备方法
CN101948509A (zh) * 2010-09-30 2011-01-19 浙江大学 组织型纤溶酶原激活剂及其片段的亲和肽及其用途

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1680430A (zh) * 2005-01-12 2005-10-12 复旦大学 人纤溶酶原激活剂模拟肽及其制备方法
CN101948509A (zh) * 2010-09-30 2011-01-19 浙江大学 组织型纤溶酶原激活剂及其片段的亲和肽及其用途

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
LEVI S. DOWNS JR.等: "Thalidomide and angiostatin inhibit tumor growth in a murine xenograft model of human cervical cancer", 《GYNECOLOGIC ONCOLOGY》 *
S. GATELY等: "The mechanism of cancer-mediated conversion of plasminogen to the angiogenesis inhibitor angiostatin", 《PROCEEDINGS OF THE NATIONAL ACADEMY OF SCIENCES》 *
刘晓军等: "血管生成抑制素和人血纤维蛋白溶酶原K5环的研究进展", 《中国药物与临床》 *
王聪聪等: "计算机辅助多肽设计", 《中国科技论文在线》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105039294A (zh) * 2015-08-20 2015-11-11 顾彩霞 水解纤维蛋白溶酶原多肽

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