CN104041910A - 一种长裙竹荪液体发酵制备绿色防腐剂的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种长裙竹荪液体发酵法制备绿色防腐剂的方法，该方法包括如下步骤：步骤1，制备长裙竹荪液体发酵培养基；步骤2，培养液体发酵培养基；步骤3，收集长裙竹荪发酵液，后进行干燥，浓缩至原有体积的1/10，用3倍体积的乙醇溶液沉淀多糖及蛋白质，离心后弃去沉淀，所得上清液减压浓缩至原体积后加3倍体积的无水乙醇沉淀未除尽的多糖及蛋白质，重复2次；步骤4，将步骤3所得上清液减压浓缩至无乙醇为，将浓缩液进行喷雾干燥，得到竹笋防腐剂颗粒。本发明利用长裙竹荪深层发酵液开发的天然防腐剂是一种理想的绿色防腐剂，可作为人工化学合成防腐剂的替代产品。
Description
技术领域
本发明提供一种竹笋液体发酵法制备绿色防腐剂的方法，属于生物技术领域。
背景技术
长裙竹荪学名Dictyophora indusiata (Vent.ex Pers) Fisch, 俗名有竹参、竹笙、面纱菌、网纱菌、竹姑娘。长裙竹荪隶属于腹菌纲、鬼笔目、鬼笔科、长裙竹荪属。长裙竹荪是寄生在枯竹根部的一种隐花菌类，稀有珍贵，故有“真菌之花”、“京果之王”等美称。长裙竹荪营养丰富，香味浓郁，滋味鲜美，自古就被列为“草八珍”之一。
据测定，干长裙竹荪中含粗蛋白19.4%、粗脂肪2.6%，可溶性无氮倾倒物总量60.4%，其中菌糖4.2%、粗纤维8.4%，灰分9.3%。长裙竹荪游离氨基酸含量比较低，约占干品重量的0.5%：有95%以上的氨基酸是以菌体蛋白形态存在着。蛋白质含量较高，干品种含有13-17%的蛋白质，是优越的植物蛋白和营养源。其中以天冬氨酸、谷氨酸和亮氨酸居多，三者约占氨基酸总量的三分之一。
发明内容
本发明研究的长裙竹荪深层发酵液萃取物对引起食品腐败的常见的金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、霉菌和酵母菌等具有显著的抑菌活性，抑制效果显著优于几种常见的化学食品防腐剂。因此，利用长裙竹荪深层发酵液开发的天然防腐剂是一种理想的绿色防腐剂，可作为人工化学合成防腐剂的替代产品。
实现上述目的的技术解决方案如下：
一种长裙竹荪液体发酵制备绿色防腐剂的方法，包括：
步骤1，制备长裙竹荪液体发酵培养基，所述液体发酵培养基原材料包括玉米淀粉、黄豆粉、葡萄糖、酵母膏、磷酸二氢钾、硫酸镁、维生素B1；
步骤2，培养液体发酵培养基，包括如下步骤：将装有液体发酵培养基的三角瓶在0.1MPa，121℃条件下灭菌20min，接长裙竹荪斜面菌种两块，接着在28℃条件下摇床静止培养5天，再将转速调整到180r/min，在28℃条件下摇床培养5天后，终止发酵，用8层纱布过滤，发酵液离心后收集上清液备用；
步骤3，收集长裙竹荪发酵液，干燥后浓缩至原有体积的1/10，用3倍体积的乙醇溶液沉淀多糖及蛋白质，离心后弃去沉淀，所得上清液减压浓缩至原体积后加3倍体积的无水乙醇沉淀未除尽的多糖及蛋白质，重复2次；
步骤4，将步骤3所得上清液减压浓缩除去无水乙醇得浓缩液，将浓缩液进行喷雾干燥，得到竹笋防腐剂颗粒。
所述步骤1中所述液体发酵培养基原材料按下列配比：玉米淀粉20g,黄豆粉10g，葡萄糖20g，酵母膏5g，磷酸二氢钾3g，硫酸镁1.5g,维生素B150mg/L。
所述步骤2中的长裙竹荪斜面菌种面积为1cm×1cm，离心速度控制在5000r/min。
所述步骤3中采用真空冷冻干燥法干燥所收集的长裙竹荪发酵液。
所述步骤3中用于沉淀干燥浓缩后长裙竹荪发酵液的乙醇为浓度95%的乙醇溶液。
所述步骤3中喷雾干燥后的长裙竹荪发酵液在8000r/min的条件下离心10min。
所述步骤4中的喷雾干燥，将干燥温度控制在180℃~192℃。
本发明具有以下优点：本发明中的长裙竹荪深层发酵液萃取物对引起食品腐败的常见的金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、霉菌和酵母菌等具有显著的抑菌活性，抑制效果显著优于几种常见的化学食品防腐剂，本发明利用长裙竹荪深层发酵液开发的天然防腐剂是一种理想的绿色防腐剂，可作为人工化学合成防腐剂的替代产品。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。
本发明公开一种长裙竹荪液体发酵制备绿色防腐剂的方法，包括：
步骤1，制备长裙竹荪液体发酵培养基，所述液体发酵培养基原材料包括玉米淀粉、黄豆粉、葡萄糖、酵母膏、磷酸二氢钾、硫酸镁、维生素B1；
步骤2，培养液体发酵培养基，包括如下步骤：将装有液体发酵培养基的三角瓶在0.1MPa，121℃条件下灭菌20min，接长裙竹荪斜面菌种两块，接着在28℃条件下摇床静止培养5天，再将转速调整到180r/min，在28℃条件下摇床培养5天后，终止发酵，用8层纱布过滤，发酵液离心后收集上清液备用；
步骤3，收集长裙竹荪发酵液，干燥后浓缩至原有体积的1/10，用3倍体积的乙醇溶液沉淀多糖及蛋白质，离心后弃去沉淀，所得上清液减压浓缩至原体积后加3倍体积的无水乙醇沉淀未除尽的多糖及蛋白质，重复2次；
步骤4，将步骤3所得上清液减压浓缩除去无水乙醇得浓缩液，将浓缩液进行喷雾干燥，得到竹笋防腐剂颗粒。
所述步骤1中所述液体发酵培养基原材料按下列配比：玉米淀粉20g,黄豆粉10g，葡萄糖20g，酵母膏5g，磷酸二氢钾3g，硫酸镁1.5g,维生素B150mg/L。
所述步骤2中的长裙竹荪斜面菌种面积为1cm×1cm，离心速度控制在5000r/min。
所述步骤3中采用真空冷冻干燥法干燥所收集的长裙竹荪发酵液。
所述步骤3中用于沉淀干燥浓缩后长裙竹荪发酵液的乙醇为浓度95%的乙醇溶液。
所述步骤3中喷雾干燥后的长裙竹荪发酵液在8000r/min的条件下离心10min。
所述步骤4中的喷雾干燥，将干燥温度控制在180℃~192℃。
竹荪防腐剂颗粒抑制活性实验
将竹笋防腐剂颗粒稀释成100mg/mL的溶液进行试验，以食品中常用的同等浓度的苯甲酸钠、山梨酸钾等防腐剂作为阳性对照，以无菌注射用水作为空白对照。
实施例1 抑制细菌活性试验（圆形制片扩散法）
试验证明100 mg/mL的竹荪防腐剂对引起食品腐败的常见的芽孢杆菌（嗜热脂肪芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、嗜热解糖梭状芽孢杆菌）、非芽孢细菌（液化链球菌、粪链球菌和嗜热链球菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌）等具有明显的抑制作用，可延长食品保质期一倍以上。
实施例2抑制细菌活性试验（菌丝生长速率法）
试验证明100 mg/mL的竹荪防腐剂对引起食品变质的霉菌（灰缘曲霉、匍匐曲霉、咖啡色串孢霉、乳卵孢霉）等具有明显的抑制作用，可延长食品保质期一倍以上。
实施例3抑制细菌活性试验（菌落计数法）
试验证明100 mg/mL的竹荪防腐剂对引起食品变质的霉酵母菌（鲁氏酵母、罗氏酵母、蜂蜜酵母、炼乳球拟酵母）等具有明显的抑制作用，可延长食品保质期一倍以上。
本发明中的长裙竹荪深层发酵液萃取物对引起食品腐败的常见的金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、霉菌和酵母菌等具有显著的抑菌活性，抑制效果显著优于几种常见的化学食品防腐剂，本发明利用长裙竹荪深层发酵液开发的天然防腐剂是一种理想的绿色防腐剂，可作为人工化学合成防腐剂的替代产品。
Claims (7)
1.一种长裙竹荪液体发酵制备绿色防腐剂的方法，其特征在于：包括：
步骤1，制备长裙竹荪液体发酵培养基，所述液体发酵培养基原材料包括玉米淀粉、黄豆粉、葡萄糖、酵母膏、磷酸二氢钾、硫酸镁、维生素B1；
步骤2，培养液体发酵培养基，包括如下步骤：将装有液体发酵培养基的三角瓶在0.1MPa，121℃条件下灭菌20min，接长裙竹荪斜面菌种两块，接着在28℃条件下摇床静止培养5天，再将转速调整到180r/min，在28℃条件下摇床培养5天后，终止发酵，用8层纱布过滤，发酵液离心后收集上清液备用；
步骤3，收集长裙竹荪发酵液，干燥后浓缩至原有体积的1/10，用3倍体积的乙醇溶液沉淀多糖及蛋白质，离心后弃去沉淀，所得上清液减压浓缩至原体积后加3倍体积的无水乙醇沉淀未除尽的多糖及蛋白质，重复2次；
步骤4，将步骤3所得上清液减压浓缩除去无水乙醇得浓缩液，将浓缩液进行喷雾干燥，得到竹笋防腐剂颗粒。
2.根据权利要求1所述的一种长裙竹荪液体发酵制备绿色防腐剂的方法，其特征在于：所述步骤1中所述液体发酵培养基原材料按下列配比：玉米淀粉20g,黄豆粉10g，葡萄糖20g，酵母膏5g，磷酸二氢钾3g，硫酸镁1.5g,维生素B150mg/L。
3.根据权利要求2所述的一种长裙竹荪液体发酵制备绿色防腐剂的方法，其特征在于：所述步骤2中的长裙竹荪斜面菌种面积为1cm×1cm，离心速度控制在5000r/min。
4.根据权利要求3所述的一种长裙竹荪液体发酵制备绿色防腐剂的方法，其特征在于：所述步骤3中采用真空冷冻干燥法干燥所收集的长裙竹荪发酵液。
5.根据权利要求4所述的一种长裙竹荪液体发酵制备绿色防腐剂的方法，其特征在于：所述步骤3中用于沉淀干燥浓缩后长裙竹荪发酵液的乙醇为浓度95%的乙醇溶液。
6.根据权利要求5所述的一种长裙竹荪液体发酵制备绿色防腐剂的方法，其特征在于：所述步骤3中喷雾干燥后的长裙竹荪发酵液在8000r/min的条件下离心10min。
7.根据权利要求6所述的一种长裙竹荪液体发酵制备绿色防腐剂的方法，其特征在于：所述步骤4中的喷雾干燥，将干燥温度控制在180℃~192℃。
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