CN104031841A - 一种丝状真菌培养基，其制备方法及利用该培养基培养丝状真菌的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及丝状真菌培养基，其制备方法及培养丝状真菌的方法，培养基包括碳源、氮源、七水硫酸镁、琼脂和水，其中：碳源为蔗糖或葡萄糖的一种或两种的组合，氮源为铵盐或五氯硝基或酵母膏的一种或多种的组合；丝状真菌培养基中各组分在500ml水中的含量分别为：碳源8~12g，氮源2~4g,七水硫酸镁0.2~0.4g，琼脂8.5~12.5g。本发明培养基可快速培养出具有绝对优势菌种的丝状真菌。
Description
技术领域
本发明属于丝状真菌培养技术领域，具体涉及一种适于培养用于恶臭气体的生物处理的丝状真菌的培养基，该培养基的制备方法以及利用该培养基培养丝状真菌的方法。
背景技术
恶臭气体是室内空气的常见污染物，尤其以硫系恶臭气体为代表。它不仅有刺激性气味、污染环境，同时也危害人类身心健康。对恶臭气体的研究、治理和评价已受到世界各国的广泛重视。
微生物处理恶臭气体（生物除臭）是目前最经济、实用且环保的方法。生物除臭法通过不断改进完善，已克服了物理、化学方法的缺陷，并保持了恶臭物质去除的高效率，是当前处理恶臭气体的重要方向和主要技术。
关于生物除臭法的报道最早见于1957年R.D.Paneray利用土壤微生物处理H2S废气的美国专利。在国外，随着对除臭微生物在臭气处理中作用的认识加深，为了提高恶臭生物处理效率已开始了高效除臭微生物的筛选、培养和研究工作。许多研究都是从不同生境中分离到能代谢硫系恶臭物质的菌种接种于生物除臭器中用于处理硫系恶臭气体。而目前我国主要集中在工艺选择、运行参数及处理效果的讨论，对除臭微生物的研究甚少。
降解臭味物质的微生物种类包括细菌和真菌。而微生物处理臭气的基本原理是利用微生物把溶解水中的恶臭物质吸收于微生物自身体内，通过微生物的代谢活动使其降解的一种过程。基本上分为三个阶段：①恶臭气体的溶解过程，即由气相转变为液相的传质过程；②溶于水中的臭气通过微生物的细胞壁和细胞膜被微生物吸收，不溶于水的臭气先附着在微生物体外，由微生物分泌的细胞外酶分解为可溶性物质，再渗入细胞；③臭气进入细胞后，在体内作为营养物质为微生物所分解、利用，使臭气得以去除。恶臭物质的生物降解是该过程的限速阶段，可见微生物处于生物除臭的核心地位。微生物消化吸收恶臭物质后产生的代谢物再作为其他微生物的养料，继续吸收、消化，如此循环使恶臭物质逐步降解。真菌生长速度快，形成的菌丝网可有效增大与气体的接触面积，适用于难溶性臭气。
微生物培养基则是人工合成供微生物等生长的人工配制的营养物质。微生物培养基一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐（包括微量元素）以及维生素和水等。不同营养类型的微生物需要采用不同的培养基。有的培养基还含有抗菌素和色素，用于单种微生物培养和鉴定。目前的一些常见培养基在进行丝状真菌培养时，丝状真菌的生长速度较慢，而且其他微生物如细菌等也常常会造成污染，从而影响丝状真菌的大规模快速生长。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种适合丝状真菌生长的特定培养基。
本发明同时提供一种丝状真菌培养基的制备方法和利用丝状真菌培养丝状真菌的方法。
为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：
一种丝状真菌培养基，包括碳源、氮源、七水硫酸镁、琼脂和水，其中：所述的碳源为蔗糖或葡萄糖的一种或两种的组合，所述的氮源为铵盐或五氯硝基或酵母膏的一种或多种的组合；所述的丝状真菌培养基中，各组分在500ml水中的含量分别为：碳源8~12g，氮源2~4g,七水硫酸镁0.2~0.4g，琼脂8.5~12.5g。
优选地，所述碳源为蔗糖。
优选地，所述的氮源为磷酸氢二铵。
本发明采取的又一技术方案是，一种上述的丝状真菌培养基的制备方法，具体如下：选用耐高温可加塞的容器，准确量取配方量的水加入，然后分别准确称量配方量的碳源、氮源、七水硫酸镁、琼脂，加入所述的容器，充分振荡均匀后，用透气棉线塞封口所述的容器，高温灭菌，即得所述丝状真菌培养基。
本发明还采取的方案是：一种上述的丝状真菌培养基培养丝状真菌的培养方法，取丝状真菌的新鲜斜面培养物，制备成真菌接种液，接种至所述的丝状真菌培养基中，在24~30℃下恒温培养5~8天，测定所述丝状真菌的繁殖和生长量。
优选地，所述的丝状真菌为用于恶臭气体的生物处理的丝状真菌。
由于上述技术方案的采用，本发明与现有技术相比具有如下特点：
本发明所采用的培养基原料容易获得，无需依赖进口，因此研究成本大大降低。利用本发明的培养基培养的丝状真菌生长速度快，生长繁殖量高。
具体实施方式：
实施例1
接种1毫升真菌接种液的培养基，
向500毫升容器倒入500毫升水，称取蔗糖10g、磷酸氢二铵2g、七水硫酸镁0.25g、琼脂10g分别置于容器中，充分振荡均匀后，用透气棉线塞封口容器，高温灭菌，即得所述丝状真菌培养基，倒入培养皿内。
接种1毫升真菌接种液。接种后在27℃培养8天。每天观察，记录菌落初出时间、生长速度、菌落大小、菌落数、色泽反应（包括最初颜色和最终颜色粘度）等生长情况。
具体结果如下：
表1
| 天数 | 菌落数（个） | 菌落平均直径(cm) | 菌落初颜色 | 菌落终颜色 |
| 1 | 10±2 | 0.8±0.2 | 无色 | 无色 |
| 2 | 25±4 | 1.5±0.4 | 无色 | 无色 |
| 3 | 75±5 | 2.2±0.44 | 无色 | 暗黄色 |
| 4 | 115±8 | 2.5±0.3 | 暗黄色 | 暗黄色 |
| 5 | 136±10 | 2.9±0.22 | 暗黄色 | 红褐色 |
| 6 | 184±12 | 3.5±0.4 | 红褐色 | 红褐色 |
| 7 | 227±16 | 4.2±0.45 | 红褐色 | 亮红色 |
| 8 | 374±15 | 5.1±0.5 | 亮红色 | 亮红色 |
实施例2
接种2毫升真菌接种液的培养基
向500毫升容器倒入500毫升水，称取蔗糖10g、磷酸氢二铵2g、七水硫酸镁0.25g、琼脂10g分别置于容器中，充分振荡均匀后，用透气棉线塞封口容器，高温灭菌，即得所述丝状真菌培养基，倒入培养皿内。
接种2毫升真菌接种液。接种后在27℃培养8天。每天观察，记录菌落初出时间、生长速度、菌落大小、菌落数、色泽反应（包括最初颜色和最终颜色粘度）等生长情况。
具体结果如下：
表2
| 天数 | 菌落数（个） | 菌落平均直径(cm) | 菌落初颜色 | 菌落终颜色 |
| 1 | 22±3 | 1.0±0.2 | 无色 | 无色 |
| 2 | 50±4 | 2.3±0.4 | 无色 | 淡黄色 |
| 3 | 84±5 | 3.4±0.44 | 淡黄色 | 暗黄色 |
| 4 | 125±10 | 4.5±0.3 | 暗黄色 | 暗黄色 |
| 5 | 154±10 | 4.9±0.22 | 暗黄色 | 红褐色 |
| 6 | 204±12 | 5.2±0.4 | 红褐色 | 亮红色 |
| 7 | 285±16 | 5.8±0.45 | 亮红色 | 红紫色 |
| 8 | 405±15 | 6.3±0.5 | 红紫色 | 红紫色 |
实施例3
接种5毫升接种液的培养基
向500毫升容器倒入500毫升水，称取蔗糖10g、磷酸氢二铵2g、七水硫酸镁0.25g、琼脂10g分别置于容器中，充分振荡均匀后，用透气棉线塞封口容器，高温灭菌，即得所述丝状真菌培养基，倒入培养皿内。
接种5毫升真菌接种液。接种后在27℃培养8天。每天观察，记录菌落初出时间、生长速度、菌落大小、菌落数、色泽反应（包括最初颜色和最终颜色粘度）等生长情况。
具体结果如下：
表3
| 天数 | 菌落数（个） | 菌落平均直径(cm) | 菌落初颜色 | 菌落终颜色 |
| 1 | 54±12 | 0.5±0.2 | 无色 | 淡黄色 |
| 2 | 102±15 | 1.3±0.4 | 淡黄色 | 暗黄色 |
| 3 | 128±12 | 2.2±0.45 | 暗黄色 | 深黄色 |
| 4 | 135±10 | 3.1±0.3 | 深黄色 | 深黄色 |
| 5 | 144±15 | 3.8±0.24 | 深黄色 | 红褐色 |
| 6 | 182±12 | 4.5±0.4 | 红褐色 | 亮红色 |
| 7 | 225±16 | 5.1±0.45 | 亮红色 | 红紫色 |
| 8 | 287±15 | 5.5±0.5 | 红紫色 | 红紫色 |
实施例4
接种1毫升真菌接种液的培养基，
向500毫升容器倒入500毫升水，称取蔗糖9g、磷酸氢二铵3g、七水硫酸镁0.2g、琼脂8.5g分别置于容器中，充分振荡均匀后，用透气棉线塞封口容器，高温灭菌，即得所述丝状真菌培养基，倒入培养皿内。
接种1毫升真菌接种液。接种后在27℃培养8天。每天观察，记录菌落初出时间、生长速度、菌落大小、菌落数、色泽反应（包括最初颜色和最终颜色粘度）等生长情况。
具体结果如下：
表4
| 天数 | 菌落数（个） | 菌落平均直径（cm） | 菌落初颜色 | 菌落终颜色 |
| 1 | 9±2 | 0.6±0.2 | 无色 | 无色 |
| 2 | 22±4 | 1.3±0.4 | 无色 | 无色 |
| 3 | 76±5 | 2.5±0.44 | 无色 | 暗黄色 |
| 4 | 108±8 | 2.6±0.3 | 暗黄色 | 暗黄色 |
| 5 | 137±10 | 3.1±0.22 | 暗黄色 | 红褐色 |
| 6 | 189±12 | 3.7±0.4 | 红褐色 | 红褐色 |
| 7 | 231±16 | 4.5±0.45 | 红褐色 | 亮红色 |
| 8 | 365±15 | 5.4±0.5 | 亮红色 | 亮红色 |
实施例5
接种2毫升真菌接种液的培养基
向500毫升容器倒入500毫升水，称取蔗糖9g、磷酸氢二铵3g、七水硫酸镁0.2g、琼脂8.5g分别置于容器中，充分振荡均匀后，用透气棉线塞封口容器，高温灭菌，即得所述丝状真菌培养基，倒入培养皿内。
接种2毫升真菌接种液。接种后在27℃培养8天。每天观察，记录菌落初出时间、生长速度、菌落大小、菌落数、色泽反应（包括最初颜色和最终颜色粘度）等生长情况。
具体结果如下：
表5
| 天数 | 菌落数（个） | 菌落平均直径（cm） | 菌落初颜色 | 菌落终颜色 |
| 1 | 20±3 | 0.9±0.2 | 无色 | 无色 |
| 2 | 45±4 | 2.2±0.4 | 无色 | 淡黄色 |
| 3 | 80±5 | 3.8±0.44 | 淡黄色 | 暗黄色 |
| 4 | 118±10 | 4.1±0.3 | 暗黄色 | 暗黄色 |
| 5 | 152±10 | 4.9±0.22 | 暗黄色 | 红褐色 |
| 6 | 206±12 | 5.4±0.4 | 红褐色 | 亮红色 |
| 7 | 291±16 | 5.5±0.45 | 亮红色 | 红紫色 |
| 8 | 415±15 | 6.5±0.5 | 红紫色 | 红紫色 |
实施例6
接种5毫升真菌接种液的培养基
向500毫升容器倒入500毫升水，称取蔗糖9g、磷酸氢二铵3g、七水硫酸镁0.2g、琼脂8.5g分别置于容器中，充分振荡均匀后，用透气棉线塞封口容器，高温灭菌，即得所述丝状真菌培养基，倒入培养皿内。
接种5毫升真菌接种液。接种后在27℃培养8天。每天观察，记录菌落初出时间、生长速度、菌落大小、菌落数、色泽反应（包括最初颜色和最终颜色粘度）等生长情况。
具体结果如下：
表6
| 天数 | 菌落数（个） | 菌落平均直径（cm） | 菌落初颜色 | 菌落终颜色 |
| 1 | 50±12 | 0.6±0.2 | 无色 | 淡黄色 |
| 2 | 99±15 | 1.4±0.4 | 淡黄色 | 暗黄色 |
| 3 | 118±12 | 2.3±0.45 | 暗黄色 | 深黄色 |
| 4 | 130±10 | 3.5±0.3 | 深黄色 | 深黄色 |
| 5 | 142±15 | 3.9±0.24 | 深黄色 | 红褐色 |
| 6 | 179±12 | 4.8±0.4 | 红褐色 | 亮红色 |
| 7 | 212±16 | 5.4±0.45 | 亮红色 | 红紫色 |
| 8 | 279±15 | 5.9±0.5 | 红紫色 | 红紫色 |
实施例7
培养基灵敏性试验
一、试验目的
比较本发明培养基与传统培养基的灵敏性
二、试验方法
在传统的沙氏培养基和本实验的丝状真菌培养基中分别接种2ml真菌接种液，27℃培养，每天观察，记录菌落初出时间、生长速度、菌落大小、菌落表面形态、菌落颜色、色泽反应（包括最初颜色和最终颜色粘度）等生长情况，进行比较。
三、试验结果
本发明的丝状真菌培养基对丝状真菌生长速度及颜色反应都比沙氏好。结果见表7.
表7 丝状真菌在两种培养基中生长情况对比
| 天数 | 菌总液计数（/ml） | 真菌生长情况 |
| 1 | 2.54×10-7 | 生长速度同步进行无差异 |
| 2 | 4.5×10-7 | 本发明比沙氏生长及反应颜色快 |
| 3 | 5.8×10-6 | 本发明比沙氏生长及反应颜色快 |
| 4 | 6.3×10-6 | 本发明比沙氏生长及反应颜色快 |
| 5 | 8.02×10-6 | 本发明比沙氏生长及反应颜色快 |
| 6 | 1.05×10-5 | 本发明比沙氏生长及反应颜色快 |
| 7 | 2.36×10-5 | 本发明比沙氏生长及反应颜色快 |
| 8 | 5.5×10-5 | 本发明比沙氏生长及反应颜色快 |
注：表中，“本发明”表示利用本实验所发明的丝状真菌培养基培养的真菌，沙氏表示利用传统的沙氏真菌培养基培养的真菌。
四、结论
本发明的丝状真菌培养基对丝状真菌培养效果较传统的沙氏真菌培养基灵敏性好，具体体现在，生长速度快、丝状真菌菌落数多、真菌繁殖量多等方面。
上述实施例只为说明本发明的技术构思及特点，其目的在于让熟悉此项技术的人士能够了解本发明的内容并据以实施，并不能以此限制本发明的保护范围。凡根据本发明精神实质所作的等效变化或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (6)
1.一种丝状真菌培养基，其特征在于：所述丝状真菌培养基包括碳源、氮源、七水硫酸镁、琼脂和水，其中：所述的碳源为蔗糖或葡萄糖的一种或两种的组合，所述的氮源为铵盐或五氯硝基或酵母膏的一种或多种的组合；所述的丝状真菌培养基中，各组分在500ml水中的含量分别为：碳源8~12g，氮源2~4g,七水硫酸镁0.2~0.4g，琼脂8.5~12.5g。
2.根据权利要求1所述的丝状真菌培养基，其特征在于：所述碳源为蔗糖。
3.根据权利要求1所述的丝状真菌培养基，其特征在于：所述的氮源为磷酸氢二铵。
4.一种如权利要求1至3中任一项权利要求所述的丝状真菌培养基的制备方法，其特征在于：选用耐高温可加塞的容器，准确量取配方量的水加入，然后分别准确称量配方量的碳源、氮源、七水硫酸镁、琼脂，加入所述的容器，充分振荡均匀后，用透气棉线塞封口所述的容器，高温灭菌，即得所述丝状真菌培养基。
5.一种如权利要求1至3中任一项权利要求所述的丝状真菌培养基培养丝状真菌的方法，其特征在于：取丝状真菌的新鲜斜面培养物，制备成真菌接种液，接种至所述的丝状真菌培养基中，在24~30℃下恒温培养5~8天，测定所述丝状真菌的繁殖和生长量。
6.根据权利要求5所述的，其特征在于：所述的丝状真菌为用于恶臭气体的生物处理的丝状真菌。
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