CN104004038B - 一种从江南星蕨中提取黄酮单体的方法 - Google Patents

Abstract

本发明主要公开一种从江南星蕨中提取黄酮单体的方法，具体是一种从江南星蕨中提取槲皮素-3-甲氧基-7-O-α-L-阿拉伯(1→6)-β-D-葡萄糖苷的方法，该方法包括江南星蕨原料有效成分超声提取和浸泡提取，树脂分离得到黄酮粗品和黄酮产品纯化等步骤。本发明提供的提取方法简便、快捷，得到的产品纯度高，可以达到96%左右，收率高，可以用于从江南星蕨中较大规模的制备槲皮素-3-甲氧基-7-<i>O</i>-<i>α</i>-<i>L</i>-阿拉伯(1→6)-<i>β</i>-<i>D</i>-葡萄糖苷，为该化合物今后的研究开发奠定了基础。

Description

一种从江南星蕨中提取黄酮单体的方法

技术领域

本发明属于天然药物有效成分提取及分离技术领域，具体涉及药物有效成分提取及分离技术领域，具体涉及一种从江南星蕨中提取黄酮单体的方法，也是一种从江南星蕨中提取槲皮素-3-甲氧基-7-O-α-L-阿拉伯(1→6)-β-D-葡萄糖苷的方法。

背景技术

槲皮素-3-甲氧基-7-O-α-L-阿拉伯(1→6)-β-D-葡萄糖苷，英文名：Quercetin-3-methylether-7-O-α-L-arabinofuranosyl(1→6)-β-D-glucopyranoside，黄色无定形粉末，是一种黄酮苷类化合物，mp：181～183℃，分子量：594，分子式：C27H30O15，盐酸镁粉反应呈阳性，Molish反应呈阳性，盐酸水解后纸色谱检出葡萄糖和阿拉伯糖，UV365下有强烈的紫外吸收。结构式如下：

江南星蕨Microsorumfortunei(T.Moore)Ching，又名大叶骨牌草、七星剑，旋鸡尾，为水龙骨科星蕨属植物，产于我国江南广大地区，陕西等地也有。分布于西南及陕西、江苏、安徽、浙江、江西、福建、台湾、湖北、湖南、海南、广西等地。附生、土生均可，野外多生于海拔200-1800m的山坡林下、溪谷边树干或岩石上。在民间全草及根状茎均可入药，具有清热利湿、凉血止血、消肿止痛功效。可治疗流行性感冒、哮喘、支气管炎、黄疸、小儿惊风、肺痨咳嗽、痢疾、尿路感染、白带、风湿关节痛、吐血、便血、外伤出血、跌打损伤、蛇虫咬伤等症。目前，从江南星蕨全草中分离得到的化合物有：9(11)-羊齿烯，24-亚甲基环木菠萝烷醇乙酸酯和24-亚甲基环木菠萝烷酮，尿嘧啶，尿甙，马栗树皮素-3-羧酸，β-谷甾醇、谷甾醇β-D-吡喃葡萄糖苷、松脂素、槲皮素、槲皮素3-O-β-D-吡喃半乳糖苷，瓦利苷和蕨素A。[周虹云，徐润生，程存归.江南星蕨的化学成分研究.中国现代应用药学杂志.2009，26(2):119-122]。

发明内容

本发明的目的是提供一种从江南星蕨中提取高纯度槲皮素-3-甲氧基-7-O-α-L-阿拉伯(1→6)-β-D-葡萄糖苷黄酮单体的方法。

本发明实现上述目的采用的技术方案是：一种从江南星蕨中提取黄酮单体的方法，包括以下步骤：

1）取粉碎过的干燥江南星蕨原料，置于超声提取器内，用体积浓度为60-90%的乙醇溶液在40-60℃条件下超声提取0.5-2h，提取结束后过滤，收集提取液，将过滤得到的滤渣加入体积浓度为60-90%的乙醇溶液浸泡3-24h，浸泡结束后过滤，收集滤液，再次向滤渣中加入体积浓度为60-90%的乙醇溶液，重复浸泡提取操作1-4次，合并所有提取液和滤液，并进行真空减压浓缩，得提取浸膏，备用；

2）向步骤1）得到的提取浸膏中加入其重量30-60倍的乙醇进行溶解，过滤，将得到的滤液用树脂吸附、装柱，依次用体积浓度为10%、20%、30%、40%、50%、60%、80%和95%的乙醇水溶液进行梯度洗脱，收集体积浓度为40-50%乙醇水溶液洗脱馏分，减压浓缩成浸膏，并将得到的浸膏在50-60℃下真空减压干燥，即得到黄酮粗品，备用；

3）将步骤2）得到的黄酮粗品研碎，并置于烧杯中，加入蒸馏水后加热至60-80℃，用质量浓度为20%的NaOH调节pH值为弱碱性使粗品完全溶解，静置后过滤，将得到的滤液用浓HCl调节pH值为酸性，再次静置，冷却至不再产生沉淀，过滤，将得到的沉淀用水洗涤至中性，干燥即得到的黄酮中间品，备用；

4）将步骤3）得到的黄酮中间品用甲醇在温度为50℃超声波条件下溶解，溶解完毕后趁热用活性炭过滤，将得到的滤液在5℃条件下静置，析出淡黄色结晶物，干燥即得到黄酮单体纯品。

步骤1）所述的超声提取用的体积浓度为60-90%的乙醇溶液的添加量为江南星蕨原料重量的10-20倍；浸泡提取用的体积浓度为60-90%的乙醇溶液的添加量为滤渣重量的10-20倍。

所述的步骤2）中不同浓度的乙醇水溶液的洗脱体积为2-4倍柱体积。

所述的步骤2）中的树脂为D101或AB-8型大孔吸附树脂，或聚酰胺树脂。

步骤3）所述的溶解黄酮粗品的蒸馏水的加入量为其重量的10-15倍。

步骤3）所述的用质量浓度为20%的NaOH调节pH值为弱碱性时，pH值为7.2-8.5；用浓HCl调节pH值为酸性时，pH值为2.0-3.2.

步骤4）所述的甲醇的添加量为黄酮中间品重量的20-30倍。

本发明的有益效果

本发明提供的提取方法简便、快捷，得到的产品纯度高，可以达到96%左右，收率高，可以用于从江南星蕨中较大规模的制备槲皮素-3-甲氧基-7-O-α-L-阿拉伯(1→6)-β-D-葡萄糖苷，为该化合物今后的研究开发奠定了基础。

附图说明

图1为本发明提取得到的槲皮素-3-甲氧基-7-O-α-L-阿拉伯(1→6)-β-D-葡萄糖苷的¹HNMR图谱；

图2为本发明提取得到的槲皮素-3-甲氧基-7-O-α-L-阿拉伯(1→6)-β-D-葡萄糖苷的¹³CNMR图谱；

图3为槲皮素-3-甲氧基-7-O-α-L-阿拉伯(1→6)-β-D-葡萄糖苷对照品HPLC图谱；

图4为槲皮素-3-甲氧基-7-O-α-L-阿拉伯(1→6)-β-D-葡萄糖苷测试样品HPLC图谱。

具体实施方式

一种从江南星蕨中提取黄酮单体的方法，包括以下步骤：

1）取粉碎过的干燥江南星蕨原料，置于超声提取器内，用体积浓度为60-90%的乙醇溶液在40-60℃条件下超声提取0.5-2h，提取结束后过滤，收集提取液，将过滤得到的滤渣加入体积浓度为60-90%的乙醇溶液浸泡3-24h，浸泡结束后过滤，收集滤液，再次向滤渣中加入体积浓度为60-90%的乙醇溶液，重复浸泡提取操作1-4次，合并所有提取液和滤液，并进行真空减压浓缩，得提取浸膏，备用；

2）向步骤1）得到的提取浸膏中加入其重量30-60倍的乙醇进行溶解，过滤，将得到的滤液用树脂吸附、装柱，依次用体积浓度为10%、20%、30%、40%、50%、60%、80%和95%的乙醇水溶液进行梯度洗脱，收集体积浓度为40-50%乙醇水溶液洗脱馏分，减压浓缩成浸膏，并将得到的浸膏在50-60℃下真空减压干燥，即得到黄酮粗品，备用；

3）将步骤2）得到的黄酮粗品研碎，并置于烧杯中，加入蒸馏水后加热至60-80℃，用质量浓度为20%的NaOH调节pH值为弱碱性使粗品完全溶解，静置后过滤，将得到的滤液用浓HCl调节pH值为酸性，再次静置，冷却至不再产生沉淀，过滤，将得到的沉淀用水洗涤至中性，干燥即得到的黄酮中间品，备用；

4）将步骤3）得到的黄酮中间品用甲醇在温度为50℃超声波条件下溶解，溶解完毕后趁热用活性炭过滤，将得到的滤液在5℃条件下静置，析出淡黄色结晶物，干燥即得到黄酮单体纯品。

步骤1）所述的超声提取用的体积浓度为60-90%的乙醇溶液的添加量为江南星蕨原料重量的10-20倍；浸泡提取用的体积浓度为60-90%的乙醇溶液的添加量为滤渣重量的10-20倍。

所述的步骤2）中不同浓度的乙醇水溶液的洗脱体积为2-4倍柱体积。

所述的步骤2）中的树脂为D101或AB-8型大孔吸附树脂，或聚酰胺树脂。

步骤3）所述的溶解黄酮粗品的蒸馏水的加入量为其重量的10-15倍。

步骤3）所述的用质量浓度为20%的NaOH调节pH值为弱碱性时，pH值为7.2-8.5；用浓HCl调节pH值为酸性时，pH值为2.0-3.2.

步骤4）所述的甲醇的添加量为黄酮中间品重量的20-30倍。

槲皮素-3-甲氧基-7-O-α-L-阿拉伯(1→6)-β-D-葡萄糖苷含量的测定：色谱柱：AgilentZorbaxSBC18色谱柱(4.6×250mm，5um)；流动相：甲醇-乙腈-0.4%磷酸(15:5:80)；流速：1.0mL/min；柱温：25℃；检测波长：360nm。

所得到的槲皮素-3-甲氧基-7-O-α-L-阿拉伯(1→6)-β-D-葡萄糖苷经HPLC、NMR、HR-MS测定化合物的结构，波谱图如图1-4所示，波谱数据如下：

黄色无定形粉末，mp181~183℃，盐酸镁粉反应呈阳性，molish反应呈阳性，盐酸水解后纸色谱检出葡糖糖和阿拉伯糖。ESI-MSm/z:593[M-H]-(分子式为C27H30O15)。

如图1所示：1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.72(5-OH),7.61(IH,d,J=2.0Hz,2'-H),7.49(1H,dd,J=8.4Hz,2.0Hz,6'-H),6.95(1H,d,J=8.4Hz,5'-H),6.76(1H,d,J=2.0Hz,8-H),6.46(1H,d,J=2.0Hz,6-H),5.11(IH,d,J=7.6Hz,1"-H),4.74(1H,d,J=2.0Hz,1"'-H),3.81(3H,s,3-OCH3).

如图2所示：13CNMR(100MHz,DMSO-dr):δ：156.2(C-2),138.1(C-3),178.3(C-4),161.2(C-5),99.4(C-6),163.1(C-7),94.6(C-8),156.2(C-9),106.1(C-10),121.0(C-1'),115.9(C-2'),145.4(C-3'),1491(C-4'),116.1(C-5'),120.9(C-6'),100.0(C-1''),73.3(C-2"),76.4(C-3"),70.0(C-4"),75.7(C-5"),67.1(C-6"),108.7(C-1'''),82.23(C-2"'),77.4(C-3"'),84.2(C-4"'),61.5(C-5"')。

以下结合具体实施例对本发明做进一步说明：

实施例1：

一种从江南星蕨中提取黄酮单体的方法，包括以下步骤：

1）取粉碎过的干燥江南星蕨原料1㎏，置于超声提取器内，用用其重量10倍的体积浓度为60%的乙醇溶液在40℃条件下超声提取2h，提取结束后过滤，收集提取液，将过滤得到的滤渣加入体积浓度为60%的乙醇溶液浸泡3h，乙醇溶液的添加量为滤渣重量的10倍，浸泡结束后过滤，收集滤液，再次向滤渣中加入体积浓度为60%的乙醇溶液，重复浸泡提取操作4次，合并所有提取液和滤液，并进行真空减压浓缩，得提取浸膏，备用；

2）向步骤1）得到的提取浸膏中加入其重量30倍的乙醇进行溶解，过滤，将得到的滤液用D101型大孔吸附树脂吸附、装柱，依次用体积浓度为10%、20%、30%、40%、50%、60%、80%和95%的乙醇水溶液进行梯度洗脱，不同浓度的乙醇水溶液的洗脱体积为4倍柱体积，收集体积浓度为40-50%乙醇水溶液洗脱馏分，减压浓缩成浸膏，并将得到的浸膏在50-60℃下真空减压干燥，即得到黄酮粗品，共34g，备用；

3）将步骤2）得到的黄酮粗品研碎，并置于烧杯中，加入其重量15倍的蒸馏水后加热至80℃，用质量浓度为20%的NaOH调节pH值为8.5使粗品完全溶解，静置后过滤，将得到的滤液用浓HCl调节pH值为2.0，再次静置，冷却至不再产生沉淀，过滤，将得到的沉淀用水洗涤至中性，干燥即得到的黄酮中间品，共16.5g，备用；

4）将步骤3）得到的黄酮中间品用其重量30倍的甲醇在温度为50℃超声波条件下溶解，溶解完毕后趁热用活性炭过滤，将得到的滤液在5℃条件下静置，析出淡黄色结晶物，干燥即得到黄酮单体纯品，共12.3g。

经测定，得到的产品中，槲皮素-3-甲氧基-7-O-α-L-阿拉伯(1→6)-β-D-葡萄糖苷单体的含量为96.8%。

实施例2：

1）取粉碎过的干燥江南星蕨原料1㎏，置于超声提取器内，用体积浓度为90%的乙醇溶液在40℃条件下超声提取0.5h，乙醇溶液的添加量为江南星蕨原料重量的20倍，提取结束后过滤，收集提取液，将过滤得到的滤渣加入体积浓度为90%的乙醇溶液浸泡24h，乙醇溶液的添加量为滤渣重量的20倍，浸泡结束后过滤，收集滤液，再次向滤渣中加入体积浓度为90%的乙醇溶液，重复浸泡提取操作1次，合并所有提取液和滤液，并进行真空减压浓缩，得提取浸膏，备用；

2）向步骤1）得到的提取浸膏中加入其重量60倍的乙醇进行溶解，过滤，将得到的滤液用AB-8型大孔吸附树脂吸附、装柱，依次用体积浓度为10%、20%、30%、40%、50%、60%、80%和95%的乙醇水溶液进行梯度洗脱，不同浓度的乙醇水溶液的洗脱体积为2倍柱体积，收集体积浓度为40-50%乙醇水溶液洗脱馏分，减压浓缩成浸膏，并将得到的浸膏在50-60℃下真空减压干燥，即得到黄酮粗品，共30.8g，备用；

3）将步骤2）得到的黄酮粗品研碎，并置于烧杯中，加入其重量10倍的蒸馏水后加热至60℃，用质量浓度为20%的NaOH调节pH值为7.2使粗品完全溶解，静置后过滤，将得到的滤液用浓HCl调节pH值为3.2，再次静置，冷却至不再产生沉淀，过滤，将得到的沉淀用水洗涤至中性，干燥即得到的黄酮中间品，共14.6g，备用；

4）将步骤3）得到的黄酮中间品用其重量20倍的甲醇在温度为50℃超声波条件下溶解，溶解完毕后趁热用活性炭过滤，将得到的滤液在5℃条件下静置，析出淡黄色结晶物，干燥即得到黄酮单体纯品，共11.2g。

经测定，得到的产品中，槲皮素-3-甲氧基-7-O-α-L-阿拉伯(1→6)-β-D-葡萄糖苷单体的含量为95.7%。

活性测试

一.抗氧化活性研究

1．试验材料

槲皮素-3-甲氧基-7-O-α-L-阿拉伯(1→6)-β-D-葡萄糖苷(由实施例1制备得到)。

亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、1,1-二苯基-2-苦基苯肼(DPPH)、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)、吩嗪甲酯硫酸盐(PMS)、氯化硝基四氮唑(NBT)、无水乙醇、双氧水、抗坏血酸(VC)、水杨酸、三羟甲基氨基甲烷(Tris)、三氯乙酸(TCA)、硫代巴比妥酸(TBA)、盐酸(HC1)均为分析纯，大豆卵磷脂（>90%）。

2.方法

(1)清除超氧阴离子自由基(O-2·)的测定方法

用pH8.0、浓度50mol/L的Tris-HCl缓冲液将槲皮素-3-甲氧基-7-O-α-L-阿拉伯(1→6)-β-D-葡萄糖苷稀释成不同的浓度梯度，各取1.5mL不同梯度溶液，然后依次加入0.5mLNBT(300μmol/L，以pH8.0的Tris-HCl缓冲液配制)，0.5mLNADH(468μmol/L，以pH8.0的Tris-HCl缓冲液配制)，0.5mLPMS(60μmol/L，以pH8.0的Tris-HCl缓冲液配制)，混匀后在25℃中水浴5分钟，取出在波长560nm处测定吸光度，空白对照组以缓冲液代替样品溶液。

E(O-2·)(%)=(1－A1/A0)×100(1)

式中：E(O-2·)为样品O-2·的清除率(%)；A1为样品吸光度；A0为空白吸光度。

(2)清除DPPH自由基的测定方法

将槲皮素-3-甲氧基-7-O-α-L-阿拉伯(1→6)-β-D-葡萄糖苷样品稀释成不同的浓度梯度，各取2mL上述浓度的溶液于试管中，再加入2mL浓度为0.04mg/mL的DPPH溶液，混合均匀，反应20分钟，3500r/min离心分离10分钟，取上清液在波长517nm处测其吸光度为Ai；另各取2mL上述浓度的溶液于试管中，分别加入无水乙醇2mL，反应20分钟，3500r/min离心分离10分钟，取上清液在波长517nm处测其吸光度为Aj；以2mL0.04mg/mLDPPH和2mL无水乙醇反应作为参比，其吸光度记为A0。

E(DPPH)(%)=[1－(Ai-Aj)/A0]×100(2)

式中：E(DPPH)为样品对DPPH自由基的清除率(%)；A0为2mLDPPH溶液+2mL无水乙醇的吸光度；Ai为2mLDPPH溶液+2mL样品溶液的吸光度；Aj为2mL无水乙醇+2mL样品的吸光度。

(3)清除羟自由基(·OH)的测定方法

将槲皮素-3-甲氧基-7-O-α-L-阿拉伯(1→6)-β-D-葡萄糖苷用双蒸水配制成不同浓度梯度，各取2mL上述浓度的溶液，依次加入2mL6mmol/L的FeSO4、2mL6mmol/L的H2O2，混匀后静置10分钟，再加入2mL6mmol/L水杨酸，混匀，静置30分钟，在波长510nm处测其吸光度记为Ai，当用双蒸水代替水杨酸时的吸光度记为Aj。空白对照组以双蒸水代替样品溶液吸光度记为A0。

E(·OH)(%)=[1－(Ai-Aj)/A0]×100

式中：E(·OH)为羟自由基的清除率(%)；Ai为槲皮素-3-甲氧基-7-O-α-L-阿拉伯(1→6)-β-D-葡萄糖苷反应的吸光度；A0为空白吸光度；Aj为无水杨酸参加反应时槲皮素-3-甲氧基-7-O-α-L-阿拉伯(1→6)-β-D-葡萄糖苷的吸光度。

(4)抗脂质体过氧化活性的测定

在10mL比色管中加入不同质量浓度的样品溶液1.00mL，卵磷脂溶液1.0mL，0.4mmol/LFeSO₄1.0mL，混匀，于37℃水浴中放置60分钟，再加入三氯乙酸(TCA)-硫代巴比妥酸(TBA)-盐酸(HC1)混合2.0mL，100℃水浴15分钟后急速冷却，以3000r/min离心10分钟，取上清液在波长532nm处测定吸光度，以蒸馏水作参比，VC为对照，计算抑制率。

抑制率/%＝[1-(Ax-Ax0)/A0]×100

式中：A0为空白对照液的吸光度；Ax为加入样品溶液后的吸光度；Ax0为不加卵磷脂的样品溶液吸光度。

3.结果

(1)清除超氧阴离子自由基(O2-·)

在所选质量浓度范围内，槲皮素-3-甲氧基-7-O-α-L-阿拉伯(1→6)-β-D-葡萄糖苷具有清除超氧阴离子自由基的能力。随着质量浓度的增大，对超氧阴离子自由基的清除作用增强，呈现量效关系。虽然槲皮素-3-甲氧基-7-O-α-L-阿拉伯(1→6)-β-D-葡萄糖苷的清除O-2·效果不如VC强，但其已经表现出很强的清除O-2·的效果。

(2)清除DPPH自由基

DPPH自由基是一种很稳定的以氮为中心的自由基，对其清除的效果表明受试药物具有降低羟自由基、烷自由基或过氧自由基的有效浓度和打断脂质过氧化链反应的作用。槲皮素-3-甲氧基-7-O-α-L-阿拉伯(1→6)-β-D-葡萄糖苷表现出很强的清除DPPH自由基的能力。

(3)清除羟自由基(·OH)

羟基自由基是最强的氧化剂，在生物体内几乎可以和所有细胞成分发生反应，对机体危害很大。槲皮素-3-甲氧基-7-O-α-L-阿拉伯(1→6)-β-D-葡萄糖苷和VC相比有类似的清楚羟基自由基效果。

(4)抗脂质体过氧化活性

脂质过氧化损伤与许多疾病的发生有关，如肿瘤、衰老、心脑血管、自身免疫疾病等。槲皮素-3-甲氧基-7-O-α-L-阿拉伯(1→6)-β-D-葡萄糖苷对Fe2+引发的卵磷脂脂质体过氧化有抑制作用，随着样品质量浓度的增加抑制率增强。

二、慢性酒精性肝损伤修复实验

1.实验材料

供试样品：槲皮素-3-甲氧基-7-O-α-L-阿拉伯(1→6)-β-D-葡萄糖苷(实施例1制备得到)。

酒精（分析纯，天津市福晨化学试剂厂）造模，采用水飞蓟素（由德国马博士药厂生产）作为阳性对照，SD级Wistar大鼠，雌雄各半，体重190-250g，随机分组，标准饲料喂养，自由进水（河南科技大学实验动物中心提供）。

血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）试剂盒、血清冬氨酸氨基转移酶（AST）试剂盒、血清白蛋白（ALB）试剂盒和血清球蛋白（GLB）试剂盒（中生北控生物科技股份有限公司）。

2.试验方法

将大鼠随机分组，分为：（1）正常对照组：以蒸馏水灌胃，1次/天，皮下注射植物油，2次/周，并持续6周；（2）模型组：10％酒精+蒸馏水灌胃，1次/天，持续6周；（3）阳性对照组：10％酒精+蒸馏水灌胃，1次/天，按1:1的比例皮下注射水飞蓟素+植物油，2次/周，持续6周；（4）剂量组：10％酒精，灌胃，同时划分高、中、低剂量组，并分别按200mg/kg/天、100mg/kg/天、50mg/kg/天的量给高、中、低剂量组予供试样品，持续6周。

3.实验数据与结果分析

表5槲皮素-3-甲氧基-7-O-α-L-阿拉伯(1→6)-β-D-葡萄糖苷对酒精所致小鼠慢性肝损伤血清TG、ALT、AST的影响

样品对小鼠慢性酒精性肝损伤的保护作用分析：与正常对照组比较，#p<0.05；与模型对照组比较*p<0.05。实验结果表明：与空白对照组比较，模型对照组小鼠血清ALT、AST、TG含量显著升高(p<0.05)，肝组织中TG、MDA含量显著升高；样品高、中、低剂量组可显著降低小鼠血清ALT、AST、TG含量和肝组织中MDA含量，呈剂量依赖性，说明槲皮素-3-甲氧基-7-O-α-L-阿拉伯(1→6)-β-D-葡萄糖苷具有一定的肝损伤修复作用。

Claims (7)

1.一种从江南星蕨中提取黄酮单体的方法，其特征在于：包括以下步骤：

1）取粉碎过的干燥江南星蕨原料，置于超声提取器内，用体积浓度为60-90%的乙醇溶液在40-60℃条件下超声提取0.5-2h，提取结束后过滤，收集提取液，将过滤得到的滤渣加入体积浓度为60-90%的乙醇溶液浸泡3-24h，浸泡结束后过滤，收集滤液，再次向滤渣中加入体积浓度为60-90%的乙醇溶液，重复浸泡提取操作1-4次，合并所有提取液和滤液，并进行真空减压浓缩，得提取浸膏，备用；

2）向步骤1）得到的提取浸膏中加入其重量30-60倍的乙醇进行溶解，过滤，将得到的滤液用树脂吸附、装柱，依次用体积浓度为10%、20%、30%、40%、50%、60%、80%和95%的乙醇水溶液进行梯度洗脱，收集体积浓度为40-50%乙醇水溶液洗脱馏分，减压浓缩成浸膏，并将得到的浸膏在50-60℃下真空减压干燥，即得到黄酮粗品，备用；

3）将步骤2）得到的黄酮粗品研碎，并置于烧杯中，加入蒸馏水后加热至60-80℃，用质量浓度为20%的NaOH调节pH值为弱碱性使粗品完全溶解，静置后过滤，将得到的滤液用浓HCl调节pH值为酸性，再次静置，冷却至不再产生沉淀，过滤，将得到的沉淀用水洗涤至中性，干燥即得到的黄酮中间品，备用；

4）将步骤3）得到的黄酮中间品用甲醇在温度为50℃超声波条件下溶解，溶解完毕后趁热用活性炭过滤，将得到的滤液在5℃条件下静置，析出淡黄色结晶物，干燥即得到黄酮单体纯品，其中黄酮单体是指槲皮素-3-甲氧基-7-O-α-L-阿拉伯(1→6)-β-D-葡萄糖苷。

2.如权利要求1所述的一种从江南星蕨中提取黄酮单体的方法，其特征在于：步骤1）所述的超声提取用的体积浓度为60-90%的乙醇溶液的添加量为江南星蕨原料重量的10-20倍；浸泡提取用的体积浓度为60-90%的乙醇溶液的添加量为滤渣重量的10-20倍。

3.如权利要求1所述的一种从江南星蕨中提取黄酮单体的方法，其特征在于：所述的步骤2）中不同浓度的乙醇水溶液的洗脱体积为2-4倍柱体积。

4.如权利要求1所述的一种从江南星蕨中提取黄酮单体的方法，其特征在于：所述的步骤2）中的树脂为D101或AB-8型大孔吸附树脂，或者聚酰胺树脂。

5.如权利要求1所述的一种从江南星蕨中提取黄酮单体的方法，其特征在于：步骤3）所述的溶解黄酮粗品的蒸馏水的加入量为其重量的10-15倍。

6.如权利要求1所述的一种从江南星蕨中提取黄酮单体的方法，其特征在于：步骤3）所述的用质量浓度为20%的NaOH调节pH值为弱碱性时，pH值为7.2-8.5；用浓HCl调节pH值为酸性时，pH值为2.0-3.2。

7.如权利要求1所述的一种从江南星蕨中提取黄酮单体的方法，其特征在于：步骤4）所述的甲醇的添加量为黄酮中间品重量的20-30倍。