具体实施方法:
本发明公开了一种化合物及其制备方法、该化合物的中间体及其制备方法,及其该化合物作为Hedgehog信号通路抑制剂的应用,本领域技术人员可以借鉴本文内容,适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是,所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的,它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述,相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合,来实现和应用本发明技术。
下面结合实施例,进一步阐述本发明:
实施例1
化合物1的制备
1-氨基-2-氰基-1H-吡咯(中间体1-a)的制备
氯化亚铵的制备:向乙醚(195ml)中加入氯化铵(5.35g,0.1mol),浓氨水(8.3ml,25%)。降温至-10℃反应30min。反应液分层,醚层经饱和氯化钠溶液洗涤两次,无水硫酸镁干燥供下步使用。
室温下,将2-氰基吡咯(10)(1.8g,19mmol)溶于DMF(10ml),分批加入NaH(60%,1.37g)反应1小时。向反应液中滴加氯化亚铵溶液(自制,195ml)反映过夜。停止反应后,将反应液过滤,滤液浓缩除去大部分乙醚,加入冰水,乙酸乙酯萃取(30ml*4),无水硫酸钠干燥,浓缩干经柱层析分离纯化(石油醚:乙酸乙酯8:1)得到产物(1.122g,53.7%)。MS(ESI)m/z:[M+H]+=108.2.1H-NMR(400M,DMSO-d6)δ6.98(m,1H,ArH),6.85(m,1H,ArH),6.05(m,1H,ArH),5.02(s,2H,NH2)ppm.
1-氨基-1H-吡咯-2-甲酰胺(中间体1-b)的制备
称取氢氧化钾(5.87g,100mmol)溶于水(30ml)制成碱溶液,加入中间体1-a(1.12g)反应过夜。停止反应,反应液经1N盐酸调节pH至6~7,过滤得到白色固体,干燥得到中间体1-b(0.38g)。MS(ESI)m/z:[M+H]+=126.1.
1-(乙氧基甲酰胺基)-1H-吡咯-2-甲酰胺(中间体1-c)的制备
称取中间体1-b(250mg,2mmol)溶于二氧六环(5ml),加入吡啶(0.51ml)。向溶液中缓慢滴加氯甲酸乙酯,滴加完成后,升温至110℃回流反应1小时。待反应完全后,浓缩掉溶剂得粗品中间体1-c(0.37g)。
吡咯并[2,1-f][1,2,4]三氮嗪-2,4(1H,3H)-二酮(中间体1-d)的制备
将(2-氨基甲酰基-1H-吡咯-1-氨基)甲酸乙酯(中间体1-c)(粗品,250mg)溶于乙醇,并加入乙醇钠(182mg,2mmol)升温至回流反应2小时。得到白色固体169mg,收率56%。MS(ESI)m/z:[M-H]-=150.1.1H-NMR(400M,DMSO-d6)δ12.99(brs,1H,NH),11.18(brs,1H,NH),7.12(m,1H,ArH),6.75(m,1H,ArH),6.33(m,1H,ArH)ppm.
2,4-二氯吡咯并[2,1-f][1,2,4]三氮嗪(中间体1-e)的制备
将中间体1-d(190mg)加入烧瓶中,并加入三氯氧磷(2ml)和二异丙基乙胺(2ml)。反应液升温至120℃,氮气保护反应48h。停止反应,反应液冷却至室温后,将反应液倾入冰中,搅拌5min。乙酸乙酯(20ml*3)萃取,并用无水硫酸钠干燥乙酸乙酯层,浓缩至干燥。经柱层析分离(石油醚:乙酸乙酯8:1)得到淡黄色固体(80mg,38.3%)。MS(ESI)m/z:[M+H]+=187.9.1H-NMR(400M,DMSO-d6)δ7.88(d,1H,ArH),7.07(d,1H,ArH),6.99(dd,1H,ArH)ppm.
2-氯-4-(4-三氟甲氧基苯基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三氮嗪(中间体1-f)的制备
称取化合物5(80mg,0.424mmol),对三氟甲氧基苯硼酸(90mg,0.44mmol),三乙胺(121mg,1.2mmol),双(三苯基膦)合氯化钯(II)(30mg,0.042mmol),DMF(28.5ml),水(0.5ml)加入烧瓶中升温至80℃反应4h。停止反应后,向反应液中加入水100ml,搅拌,乙酸乙酯(20ml*4)萃取,无水硫酸钠干燥酯层,浓缩,经柱层析分离(石油醚:乙酸乙酯=20:1)得到黄色固体(97mg,77.6%)。1H-NMR(400M,DMSO-d6)δ8.33(m,1H,ArH),8.27(d,2H,ArH),7.64(d,2H,ArH),7.55(m,1H,ArH),7.40(m,1H,ArH),7.21(m,1H,ArH)ppm.
4-(4-(4-三氟甲氧基苯基)-吡咯并[2,1-f][1,2,4]三氮嗪-2-基氨基)苯甲酸甲酯(中间体1-g)的制备
称取1-f(100mg,1eq)、对氨基苯甲酸甲酯(53mg,1.1eq)、醋酸钯(14mg,0.2eq)、BINAP(80mg,0.4eq)、碳酸铯(208mg,2eq),加入二氧六环(2mL)溶解,微波150°C反应3h,冷却,加水,乙酸乙酯萃取,干燥,过滤,滤液浓缩干,经柱层析(石油醚:乙酸乙酯=40:1)洗脱得黄色固体(80mg,58%)。MS(ESI)m/z:[M+H]+=429.2.1H-NMR(400M,DMSO-d6)δ10.04(s,1H,NH),8.29(d,2H,ArH),8.05(s,1H,ArH),7.96(m,4H,ArH),7.64(d,2H,ArH),7.10(d,1H,ArH),6.93(m,1H,ArH),3.83(s,3H,OCH3)ppm.
4-(4-(4-三氟甲氧基苯基)-吡咯并[2,1-f][1,2,4]三氮嗪-2-基氨基)苯甲酸(中间体1-h)的制备
称取1-f(80mg,1eq),加入丙酮(5mL)和水(1mL)溶解,加入氢氧化钠(20mg,2.5eq),升温至回流反应5h,冷却,倒入冰水中,1N盐酸调节PH至6-7,过滤,水洗,干燥得黄色固体(54mg,70%)。MS(ESI)m/z:[M+H]+=415.1.
N-(2,6-二甲基苯基)-4-(4-(4-(三氟甲氧基)苯基)-吡咯并[2,1-f][1,2,4]三氮嗪-2-基氨基)苯甲酰胺(1)的制备
称取1-g(100mg,1eq)和2,6-二甲基苯胺(73mg,2.5eq),加入DMF(5mL)溶解,再加入TEA(92mg,3.8eq),HATU(228mg,2.5eq),室温反应16h,冷却,倒入水中,乙酸乙酯萃取,干燥,过滤,滤液浓缩干,经柱层析(石油醚:乙酸乙酯=20:1)洗脱得黄色固体化合物1(40mg,32%)。MS(ESI)m/z:[M+H]+=518.2.1H-NMR(400M,CDCl3)δ8.14(d,2H,ArH),7.97(d,2H,ArH),7.81(d,2H,ArH),7.42(d,2H,ArH),7.36(s,1H,ArH),7.26(s,1H,CONH),7.13(s,4H,ArH*3+NH),6.95(d,1H,ArH),6.83(s,1H,ArH),2.30(s,6H,2*CH3)ppm,HPLC:90.00%.
实施例2
化合物2的制备
N-(5-(羟甲基)-2-甲基苯基)-4-(4-(4-(三氟甲氧基)苯基)-吡咯并[2,1-f][1,2,4]三氮嗪-2-基氨基)苯甲酰胺(中间体2-a)的制备
称取1-h(100mg,1eq)和3-氨基-4-甲基苄醇(40mg,1.2eq),加入DMF(5mL)溶解,在加入TEA(92mg,3.8eq),HATU(228mg,2.5eq),80℃反应16h,冷却,倒入水中,乙酸乙酯萃取,干燥,过滤,滤液浓缩干,经柱层析(二氯甲烷:甲醇=20:1)洗脱得淡黄色固体(80mg,61%)。MS(ESI)m/z:[M+H]+=534.2.1H-NMR(400M,DMSO-d6)δ9.91(s,1H,CONH),9.68(s,1H,NH),8.29(d,2H,ArH),8.05(s,1H,ArH),7.97(m,4H,ArH),7.65(d,2H,ArH),7.33(s,1H,ArH),7.23(d,1H,ArH),7.11(d,1H,ArH),7.08(d,1H,ArH),6.91(m,1H,ArH),5.17(m,1H,OH),4.49(d,2H,CH 2 OH),2.22(s,3H,ArCH3)ppm.
N-(5-(氯甲基)-2-甲基苯基)-4-(4-(4-(三氟甲氧基)苯基)-吡咯并[2,1-f][1,2,4]三氮嗪-2-基氨基)苯甲酰胺(中间体2-b)的制备
称取2-a(80mg,1eq)加入二氯甲烷(10mL)悬浮,再加入氯化亚砜(5ml),室温反应5h,倒入分液漏斗中,加入饱和碳酸氢钠水溶液振摇,分液,干燥,过滤,滤液浓缩干,经柱层析(石油醚:乙酸乙酯=2:1)洗脱得黄色固体(80mg,97%)。MS(ESI)m/z:[M+H]+=552.2.1H-NMR(400M,DMSO-d6)δ9.93(s,1H,CONH),9.72(s,1H,NH),8.32(d,2H,ArH),8.07(s,1H,ArH),7.98(m,4H,ArH),7.68(d,2H,ArH),7.33(s,1H,ArH),7.23(d,1H,ArH),7.11(d,1H,ArH),7.08(d,1H,ArH),6.91(m,1H,ArH),4.76(d,2H,CH 2 Cl),2.23(s,3H,ArCH3)ppm.
N-(2-甲基-5-((吗啉基)甲基)苯基)-4-(4-(4-(三氟甲氧基)苯基)-吡咯并[2,1-f][1,2,4]三氮嗪-2-基氨基)苯甲酰胺(2)的制备
称取2-b(40mg,1eq)加入乙腈(10mL)溶解,随后加入吗啉(20mg,3eq),碳酸钾(30mg,3eq),回流反应6h,倒入水中,乙酸乙酯萃取,干燥,过滤,滤液浓缩干,经柱层析(二氯甲烷:甲醇=20:1)洗脱得黄色固体(26mg,59%)。MS(ESI)m/z:[M+H]+=603.3.1H-NMR(400M,DMSO-d6)δ9.92(s,1H,CONH),9.68(s,1H,NH),8.29(d,2H,ArH),8.05(s,1H,ArH),7.96(m,4H,ArH),7.65(d,2H,ArH),7.32(s,1H,ArH),7.23(d,1H,ArH),7.08(d,2H,ArH),6.90(m,1H,ArH),3.57(s,4H,morpholine-H),3.44(s,2H,ArCH 2 ),2.36(s,4H,morpholine-H),2.23(s,3H,ArCH3)ppm,HPLC:93.87%.
实施例3
化合物3的制备
N-(2-甲基-5-((4-甲基哌嗪基)甲基)苯基)-4-(4-(4-(三氟甲氧基)苯基)-吡咯并[2,1-f][1,2,4]三氮嗪-2-基氨基)苯甲酰胺(3)的制备
称取2-b(85mg,1eq)加入乙腈(10mL)溶解,随后加入甲基哌嗪(37mg,2.5eq),碳酸钾(51mg,2.5eq),回流反应6h,倒入水中,乙酸乙酯萃取,干燥,过滤,滤液浓缩干,经柱层析(二氯甲烷:甲醇=20:1)洗脱得黄色固体(40mg,42%)。MS(ESI)m/z:[M+H]+=616.3.1H-NMR(400M,CDCl3)δ8.13(d,2H,ArH),7.93(m,3H,ArH),7.82(m,2H,ArH),7.65(s,1H,CONH),7.43(d,2H,ArH),7.20(d,1H,ArH),7.10(s,1H,NH),7.07(d,1H,ArH),6.96(d,1H,ArH),6.84(m,1H,ArH),3.53(s,2H,ArCH 2 ),2.52(s,8H,piperazine-H),2.24(s,3H,ArCH3),2.23(s,3H,NCH3)ppm.
实施例4
化合物4的制备
N-(5-(2-氧代-6-氮杂螺[3,3]庚烷-6-基甲基)-2-甲基苯基)-4-(4-(4-(三氟甲氧基)苯基)-吡咯并[2,1-f][1,2,4]三氮嗪-2-基氨基)苯甲酰胺(4)的制备
称取2-b(21mg,1eq)加入乙腈(10mL)溶解,随后加入2-氧代-6-氮杂螺[3,3]庚烷(12mg,2.5eq),碳酸钾(15mg,2.5eq),回流反应6h,倒入水中,乙酸乙酯萃取,干燥,过滤,滤液浓缩干,经柱层析(二氯甲烷:甲醇=20:1)洗脱得黄色固体(3mg,23%)。LC-MS(ESI)m/z:[M+H]+=615.3,HPLC:91.03%.
实施例5
化合物5的制备
N-(2-甲基-5-((哌啶基)甲基)苯基)-4-(4-(4-(三氟甲氧基)苯基)-吡咯并[2,1-f][1,2,4]三氮嗪-2-基氨基)苯甲酰胺(5)的制备
采用制备化合物2相类似的方法可制得化合物5,黄色固体(18mg,38%)。MS(ESI)m/z:[M+H]+=601.3.1H-NMR(400M,DMSO-d6)δ9.93(s,1H,CONH),9.70(s,1H,NH),8.30(d,2H,ArH),8.06(s,1H,ArH),7.98(m,4H,ArH),7.66(d,2H,ArH),7.32(s,1H,ArH),7.24(d,1H,ArH),7.10(d,2H,ArH),6.93(m,1H,ArH),3.46(s,2H,ArCH 2 ),2.38(s,4H,piperidine-H),2.24(s,3H,ArCH3),1.52(s,4H,piperidine-H),1.23(s,2H,piperidine-H)ppm,HPLC:92.65%.
实施例6
化合物6的制备
N-(2-甲基-5-((吡咯烷基)甲基)苯基)-4-(4-(4-(三氟甲氧基)苯基)-吡咯并[2,1-f][1,2,4]三氮嗪-2-基氨基)苯甲酰胺(6)的制备
采用制备化合物2相类似的方法可制得化合物6,黄色固体(21mg,39%)。MS(ESI)m/z:[M+H]+=587.3.1H-NMR(400M,DMSO-d6)δ9.91(s,1H,CONH),9.67(s,1H,NH),8.29(d,2H,ArH),8.05(s,1H,ArH),7.96(s,4H,ArH),7.65(d,2H,ArH),7.31(s,1H,ArH),7.21(d,1H,ArH),7.09(d,2H,ArH),6.91(s,1H,ArH),3.54(s,2H,ArCH 2 ),2.43(s,4H,pyrolidine-H),2.22(s,3H,ArCH3),1.69(s,4H,pyrolidine-H)ppm,HPLC:94.00%.
实施例7
化合物7的制备
2-氯-4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-吡咯并[2,1-f][1,2,4]三氮嗪(中间体7-a)的制备
称取中间体1-e(50mg,0.27mmol),1-甲基-1H-吡唑-4-硼酸频哪醇酯(55mg,0.27mmol),2N的Na2CO3水溶液(0.27ml,0.54mmol),双(三苯基膦)合氯化钯(II)(19mg,0.027mmol),二氧六环(5ml)加入烧瓶中升温至70℃反应16h。停止反应后,向反应液中加入水100ml,搅拌,乙酸乙酯(20ml*4)萃取,无水硫酸钠干燥酯层,浓缩,经柱层析分离(石油醚:乙酸乙酯=5:1),得到黄色固体(55mg,88%)。MS(ESI)m/z:[M+H]+=234.1.1H-NMR(400M,DMSO-d6)δ8.87(s,1H,ArH),8.38(s,1H,ArH),8.14(s,1H,ArH),7.53(d,1H,ArH),7.10(dd,1H,ArH),3.98(s,3H,ArCH3)ppm.
4-(4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-吡咯并[2,1-f][1,2,4]三氮嗪-2-基氨基)苯甲酸(中间体7-b)的制备
称取中间体7-a(50mg,0.21mmol)、对氨基苯甲酸(25mg,0.18mmol)、醋酸钯(4mg,0.018mmol)、BINAP(22mg,0.036mmol)、碳酸铯(176mg,0.54mmol),加入二氧六环(5mL)溶解,回流反应16h,冷却,过滤,滤液加入水,调pH至5-6,有固体析出,过滤,干燥得黄色固体(52mg,81%)。MS(ESI)m/z:[M+H]+=335.2.1H-NMR(400M,DMSO-d6)δ12.50(s,1H,COOH),9.74(s,1H,NH),8.76(s,1H,ArH),8.31(s,1H,ArH),7.89(s,5H,ArH),7.26(d,1H,ArH),6.84(dd,1H,ArH),4.00(s,3H,ArCH3)ppm.
N-(5-(羟甲基)-2-甲基苯基)-4-(4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-吡咯并[2,1-f][1,2,4]三氮嗪-2-基氨基)苯甲酰胺(中间体7-c)的制备
称取7-b(280mg,0.84mmol)和3-氨基-4-甲基苄醇(115mg,0.84mmol),加入DMF(5mL)溶解,在加入DIPEA(293mg,1.68mmol),HATU(384mg,1mmol),80℃反应15h,冷却,倒入水中,乙酸乙酯萃取,干燥,过滤,滤液浓缩干,经柱层析(二氯甲烷:甲醇=100:1)洗脱得淡黄色固体(200mg,55%)。MS(ESI)m/z:[M+H]+=454.2.1H-NMR(400M,DMSO-d6)δ9.66(s,2H,CONH+NH),8.76(s,1H,ArH),8.31(s,1H,ArH),7.97(m,4H,ArH),7.91(d,1H,ArH),7.33(s,1H,ArH),7.26(d,1H,ArH),7.22(d,1H,ArH),7.11(d,1H,ArH),6.84(dd,1H,ArH),5.76(m,1H,OH),4.49(d,2H,CH 2 OH),4.00(s,3H,ArCH3),2.23(s,3H,ArCH3)ppm.
N-(5-(氯甲基)-2-甲基苯基)-4-(4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-吡咯并[2,1-f][1,2,4]三氮嗪-2-基氨基)苯甲酰胺(中间体7-d)的制备
称取7-c(200mg,0.44mmol)加入二氯甲烷(10mL)悬浮,再加入氯化亚砜(520mg,4.4mmol),室温反应5h,倒入分液漏斗中,加入饱和碳酸氢钠水溶液振摇,分液,干燥,过滤,滤液浓缩干,得黄色固体(180mg,91%)。MS(ESI)m/z:[M+H]+=472.2.1H-NMR(400M,DMSO-d6)δ9.73(s,1H,CONH),9.69(s,1H,NH),8.78(s,1H,ArH),8.32(s,1H,ArH),7.99(m,4H,ArH),7.92(d,1H,ArH),7.48(s,1H,ArH),7.31(m,3H,ArH),6.85(dd,1H,ArH),4.78(d,2H,CH 2 Cl),4.01(s,3H,ArCH3),2.26(s,3H,ArCH3)ppm.
N-(2-甲基-5-(吡咯烷基)甲基)苯基)-4-(4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-吡咯并[2,1-f][1,2,4]三氮嗪-2-基氨基)苯甲酰胺(7)的制备
称取7-d(80mg,0.17mmol)加入DMF(2mL)溶解,随后加入吡咯烷(60mg,0.85mmol),碳酸钾(70mg,0.51mmol),室温反应18h,倒入水中,乙酸乙酯萃取,干燥,过滤,滤液浓缩干,经柱层析(二氯甲烷:甲醇=20:1)洗脱得黄色固体(50mg,61%)。MS(ESI)m/z:[M+H]+=507.3.1H-NMR(400M,DMSO-d6)δ9.68(d,2H,CONH+NH),8.77(s,1H,ArH),8.31(s,1H,ArH),8.00(m,4H,ArH),7.92(d,1H,ArH),7.34(s,1H,ArH),7.26(d,1H,ArH),7.22(d,1H,ArH),7.11(d,1H,ArH),6.84(dd,1H,ArH),4.04(s,3H,ArCH3),3.61(s,2H,ArCH 2 ),3.34(s,4H,pyrolidine-H),2.23(s,3H,ArCH3),1.72(s,4H,pyrolidine-H)ppm,HPLC:95.65%.
实施例8
化合物8的制备
N-(2-甲基-5-(4-(哌啶基)甲基)苯基)-4-(4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-吡咯并[2,1-f][1,2,4]三氮嗪-2-基氨基)苯甲酰胺(8)的制备
采用制备化合物7相类似的方法可制得化合物8(55mg,72%)。MS(ESI)m/z:[M+H]+=521.3.1H-NMR(400M,DMSO-d6)δ9.76(s,1H,CONH),9.71(s,1H,NH),8.79(s,1H,ArH),8.32(s,1H,ArH),8.02(m,4H,ArH),7.93(d,1H,ArH),7.39(s,1H,ArH),7.28(m,2H,ArH),7.19(s,1H,ArH),6.85(dd,1H,ArH),4.01(s,3H,ArCH3),3.39(s,2H,ArCH 2 ),3.06(s,4H,piperidine-H),2.25(s,3H,ArCH3),1.58(s,4H,piperidine-H),1.43(s,2H,piperidine-H)ppm,HPLC:96.34%.
实施例9
化合物9的制备
N-(2-甲基-5-(4-(甲基哌嗪基)甲基)苯基)-4-(4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-吡咯并[2,1-f][1,2,4]三氮嗪-2-基氨基)苯甲酰胺(9)的制备
采用制备化合物7相类似的方法可制得化合物9(40mg,89%)。MS(ESI)m/z:[M+H]+=536.3.1H-NMR(400M,DMSO-d6)δ9.67(d,2H,CONH+NH),8.77(s,1H,ArH),8.32(s,1H,ArH),7.97(m,4H,ArH),7.92(d,1H,ArH),7.29(s,1H,ArH),7.26(d,1H,ArH),7.22(d,1H,ArH),7.08(s,1H,ArH),6.84(dd,1H,ArH),4.02(s,3H,ArCH3),3.43(s,2H,ArCH 2 ),2.38(s,8H,piperazine-H),2.22(s,3H,ArCH3),2.17(s,3H,NCH3)ppm,HPLC:98.85%.
实施例10
化合物10的制备
N-(5-(2-氧杂-6-氮杂螺[3.5]壬-6-基甲基)-2-甲基苯基)-4-(4-(4-(三氟甲氧基)苯基)-吡咯并[2,1-f][1,2,4]三氮嗪-2-基氨基)苯甲酰胺(10)的制备
采用制备化合物2相类似的方法可制得化合物6,黄色固体(3mg,23%)。LC-MS(ESI)m/z:[M+H]+=643.3,HPLC:89.57%.
实施例11
化合物11的制备
N-(2-甲基-5-(4-(吗啉基)甲基)苯基)-4-(4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-吡咯并[2,1-f][1,2,4]三氮嗪-2-基氨基)苯甲酰胺(11)的制备
采用制备化合物7相类似的方法可制得化合物11(41mg,82%)。MS(ESI)m/z:[M+H]+=536.3.1H-NMR(400M,CDCl3)δ8.26(s,1H,CONH),8.18(s,1H,NH),7.97(s,1H,ArH),7.92(d,2H,ArH),7.81(d,2H,ArH),7.71(s,1H,ArH),7.66(s,1H,ArH),7.20(d,1H,ArH),7.11(d,1H,ArH),7.01(s,1H,ArH),6.97(m,1H,ArH),6.80(dd,1H,ArH),4.03(s,3H,ArCH3),3.73(m,4H,morpholine-H),3.52(s,2H,ArCH 2 ),2.48(s,4H,morpholine-H),2.34(s,3H,ArCH3)ppm,HPLC:95.43%.
实施例12
化合物12的制备
N-(2-甲基-5-(吗啉代甲基)苯基)-4-硝基苯甲酰胺(12-a)制备
将N-(5-(氯甲基)-2-甲基苯基)-4-硝基苯甲酰胺(597mg,1eq)、吗啉(342mg,2eq)加至40ml乙腈中,80℃反应5h。反应液浓缩加水,二氯甲烷萃取3次,有机层水洗3次后合并,浓缩干燥得黄色液体(618mg,89%)。MS(ESI)m/z:[M+H]+=356.2。
4-氨基-N-(2-甲基-5-(吗啉代甲基)苯基)苯甲酰胺(12-b)制备
将N-(2-甲基-5-(吗啉代甲基)苯基)-4-硝基苯甲酰胺(618mg)、钯碳(20mg)加至30ml甲醇中,通氢气,室温反应2h。反应液过滤,滤液制砂,柱层析(二氯甲烷/甲醇=40:1)得白色固体(300mg,53%)。MS(ESI)m/z:[M+H]+=326.2。
2-氯-4-(吡啶-3-基)-吡咯并[2,1-f][1,2,4]三氮嗪(中间体12-c)的制备
采用制备1-f相类似的方法可得到黄色固体12-c(258mg,22.4%)。MS(ESI)m/z:[M+H]+=231.1.1H-NMR(400M,DMSO-d6)δ9.28(d,1H,ArH),8.74(d,1H,ArH),8.52(d,1H,ArH),8.35(d,1H,ArH),7.70(m,1H,ArH),7.43(d,1H,ArH),7.23(m,1H,ArH)ppm.
N-(2-甲基-5-(4-(吗啉基)甲基)苯基)-4-(4-(吡啶-3-基)-吡咯并[2,1-f][1,2,4]三氮嗪-2-基氨基)苯甲酰胺(12)的制备
采用制备化合物7-b相类似的方法可制得化合物12(40mg,38.5%)。MS(ESI)m/z:[M+H]+=520.3.1H-NMR(400M,DMSO-d6)δ9.99(s,1H,CONH),9.72(s,1H,NH),9.30(s,1H,ArH),8.87(d,1H,ArH),8.53(d,1H,ArH),8.09(d,1H,ArH),7.98(s,4H,ArH),7.71(m,1H,ArH),7.32(s,1H,ArH),7.24(d,1H,ArH),7.11(s,2H,ArH),6.93(s,1H,ArH),3.58(s,4H,morpholine-H),3.45(s,2H,ArCH 2 ),2.52(s,4H,morpholine-H),2.24(s,3H,ArCH3)ppm,HPLC:98.85%.
实施例13
化合物13的制备
N-(5-(7-氮杂双环[2.2.1]庚-7-基甲基)-2-甲基苯基)-4-(4-(4-(三氟甲氧基)苯基)-吡咯并[2,1-f][1,2,4]三氮嗪-2-基氨基)苯甲酰胺(13)的制备
采用制备化合物2相类似的方法可制得化合物13,黄色固体(5mg,17%)。LC-MS(ESI)m/z:[M+H]+=613.3,HPLC:90.75%.
实施例14
化合物14的制备
2-氯-4-(吡啶-2-基)-吡咯并[2,1-f][1,2,4]三氮嗪(中间体14-a)的制备
称取1-e(500mg,1eq),2-吡啶基三丁基锡试剂(1g,1eq)和四三苯基磷钯(300mg,0.1eq)加入至甲苯溶液中,氮气氛围中,加热回流反应7h,停止反应,冷至室温,加入水,乙酸乙酯萃取,浓缩,柱层析得到黄色固体14-a(190mg,30%)。MS(ESI)m/z:[M+H]+=231.1.1H-NMR(400M,CDCl3)δ8.85(d,1H,ArH),8.58(d,1H,ArH),7.96(d,1H,ArH),7.92(m,2H,ArH),7.51(m,1H,ArH),7.06(m,1H,ArH)ppm.
N-(2-甲基-5-(4-(吗啉基)甲基)苯基)-4-(4-(吡啶-2-基)-吡咯并[2,1-f][1,2,4]三氮嗪-2-基氨基)苯甲酰胺(14)的制备
采用制备化合物7-b相类似的方法可制得黄色固体化合物14(46mg,55%)。MS(ESI)m/z:[M+H]+=520.3.1H-NMR(400M,CDCl3)δ8.86(d,1H,ArH),8.46(d,1H,ArH),7.97(s,1H,CONH),7.94(m,3H,ArH),7.84(m,1H,ArH),7.80(d,2H,ArH),7.70(d,1H,ArH),7.67(s,1H,NH),7.51(m,1H,ArH),7.21(d,1H,ArH),7.15(s,1H,ArH),7.12(d,1H,ArH),6.88(m,1H,ArH),3.74(t,4H,morpholine-H),3.53(s,2H,ArCH 2 ),2.49(s,4H,morpholine-H),2.35(s,3H,ArCH3)ppm,HPLC:99.51%.
实施例15
化合物15的制备
5-((4-(吡啶-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三氮嗪-2-基)氨基)-2-吡啶羧酸(中间体15-a)的制备
采用制备1-g相类似的合成方法,可直接制得所甲酯的羧酸物15-a(136mg,52%)。MS(ESI)m/z:[M+H]+=333.1.1H-NMR(400M,DMSO-d6)δ10.18(s,1H,NH),9.10(d,1H,ArH),8.89(d,1H,ArH),8.55(m,2H,ArH),8.20(m,3H,ArH),7.69(d,2H,ArH),6.94(m,1H,ArH)ppm.
N-(5-(羟甲基)-2-甲基苯基)-5-((4-(吡啶-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三氮嗪-2-基)氨基)吡啶-2-甲酰胺(中间体15-b)的制备
采用制备2-a相类似的合成步骤可得到15-b(64mg,38%)。MS(ESI)m/z:[M+H]+=452.2.1H-NMR(400M,DMSO-d6)δ10.26(s,1H,CONH),10.08(s,1H,NH),9.14(d,1H,ArH),8.90(d,1H,ArH),8.55(m,2H,ArH),8.16(m,2H,ArH),8.12(m,1H,ArH),7.94(d,1H,ArH),7.71(m,2H,ArH),7.24(d,1H,ArH),7.06(d,1H,ArH),6.95(m,1H,ArH),5.20(m,1H,OH),4.48(d,2H,CH 2 OH),2.32(s,3H,ArCH3)ppm.
N-(5-(氯甲基)-2-甲基苯基)-5-((4-(吡啶-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三氮嗪-2-基)氨基)吡啶-2-甲酰胺(中间体15-c)的制备
采用制备2-b相类似的合成步骤可得到15-c(64mg,98%)。MS(ESI)m/z:[M+H]+=470.2.
N-(2-甲基-5-((吗啉基)甲基)苯基)-5-((4-(吡啶-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三氮嗪-2-基)氨基)吡啶-2-甲酰胺(15)的制备
采用制备2相类似的合成步骤可得到黄色固体目标化合物15(35mg,70%)。MS(ESI)m/z:[M+H]+=520.3.1H-NMR(400M,CDCl3)δ9.95(s,1H,CONH),8.87(m,2H,ArH),8.43(m,2H,ArH),8.33(d,1H,ArH),8.27(s,1H,NH),7.95(m,1H,ArH),7.84(d,1H,ArH),7.74(m,1H,ArH),7.51(m,1H,ArH),7.21(d,1H,ArH),7.18(d,1H,ArH),7.08(d,1H,ArH),6.90(m,1H,ArH),3.74(t,4H,morpholine-H),3.54(s,2H,ArCH 2 ),2.50(s,4H,morpholine-H),2.43(s,3H,ArCH3)ppm,HPLC:91.44%.
实施例16
化合物16的制备
3-氟-4-((4-(吡啶-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三氮嗪-2-基)氨基)苯甲酸(中间体16-a)的制备
采用制备15-a相类似的合成方法制得16-a(168mg,55%)。MS(ESI)m/z:[M+H]+=350.1.1H-NMR(400M,DMSO-d6)δ9.25(s,1H,COOH),8.88(s,1H,NH),8.55(d,1H,ArH),8.29(m,1H,ArH),8.10(m,1H,ArH),7.99(s,1H,ArH),7.82(d,1H,ArH),7.68(m,3H,ArH),6.92(s,1H,ArH)ppm.
N-(5-(羟甲基)-2-甲基苯基)-3-氟-4-((4-(吡啶-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三氮嗪-2-基)氨基)苯甲酰胺(中间体16-b)的制备
采用制备15-b相类似的合成步骤可得到16-b(200mg,89%)。MS(ESI)m/z:[M+H]+=469.2.1H-NMR(400M,DMSO-d6)δ9.87(s,1H,CONH),9.22(s,1H,NH),8.89(d,1H,ArH),8.56(d,1H,ArH),8.27(m,1H,ArH),8.11(m,1H,ArH),7.98(s,1H,ArH),7.90(d,2H,ArH),7.71(m,2H,ArH),7.31(s,1H,ArH),7.24(d,1H,ArH),7.13(d,1H,ArH),6.92(m,1H,ArH),5.21(m,1H,OH),4.50(d,2H,CH 2 OH),2.23(s,3H,ArCH3)ppm.
N-(5-(氯甲基)-2-甲基苯基)-3-氟-4-((4-(吡啶-2-基)吡咯并[2,1-f]1,2,4]三氮嗪-2-基)氨基)苯甲酰胺(中间体16-c)的制备
采用制备15-c相类似的合成步骤可得到16-c(100mg,47%)。MS(ESI)m/z:[M+H]+=487.2.1H-NMR(400M,CDCl3)δ8.86(d,1H,ArH),8.76(m,1H,ArH),8.50(d,1H,ArH),8.09(s,1H,CONH),7.95(m,1H,ArH),7.81(s,1H,NH),7.76(m,2H,ArH),7.71(d,1H,ArH),7.67(d,1H,ArH),7.51(m,1H,ArH),7.36(d,1H,ArH),7.25(d,1H,ArH),7.18(d,1H,ArH),6.90(m,1H,ArH),4.61(s,2H,CH 2 Cl),2.33(s,3H,ArCH3)ppm.
N-(2-甲基-5-((吗啉基)甲基)苯基)-3-氟-4-((4-(吡啶-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三氮嗪-2-基)氨基)苯甲酰胺(16)的制备
采用制备15相类似的合成步骤可得到黄色固体目标化合物16(41mg,41%)。MS(ESI)m/z:[M+H]+=538.3.1H-NMR(400M,CDCl3)δ8.86(d,1H,ArH),8.76(m,1H,ArH),8.50(d,1H,ArH),7.95(m,2H,ArH),7.82(s,1H,CONH),7.73(m,3H,ArH),7.65(s,1H,NH),7.51(m,1H,ArH),7.36(d,1H,ArH),7.21(d,1H,ArH),7.12(d,1H,ArH),6.90(m,1H,ArH),3.72(t,4H,morpholine-H),3.51(s,2H,ArCH 2 ),2.47(s,4H,morpholine-H),2.35(s,3H,ArCH3)ppm,HPLC:91.48%.
实施例17
化合物17的制备
N-(5-羟基-2-甲基苯基)-4-(4-(4-(三氟甲氧基)苯基)-吡咯并[2,1-f][1,2,4]三氮嗪-2-基氨基)苯甲酰胺(中间体17-a)的制备
称取1-h(100mg,1eq)和3-氨基-4-甲基苯酚(38mg,1.2eq),加入DMF(5mL)溶解,在加入TEA(92mg,3.8eq),HATU(228mg,2.5eq),80℃反应16h,冷却,倒入水中,乙酸乙酯萃取,干燥,过滤,滤液浓缩干,经柱层析(二氯甲烷:甲醇=20:1)洗脱得淡黄色固体(72mg,58%)。MS(ESI)m/z:[M+H]+=520.2.
N-(2-甲基-5-((2-吗啉基)乙氧基)苯基)-4-(4-(4-(三氟甲氧基)苯基)-吡咯并[2,1-f][1,2,4]三氮嗪-2-基氨基)苯甲酰胺(17)的制备
称取17-a(40mg,1eq)加入乙腈(10mL)溶解,随后加入氯乙基吗啉盐酸盐(40mg,3eq),碳酸钾(30mg,3eq),回流反应6h,倒入水中,乙酸乙酯萃取,干燥,过滤,滤液浓缩干,经柱层析(二氯甲烷:甲醇=20:1)洗脱得黄色固体17(3mg,8%)。MS(ESI)m/z:[M+H]+=633.3,HPLC:91.78%.
实施例18
化合物18的制备
5-((4-(4-(三氟甲氧基)苯基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三氮嗪-2-基)氨基)-2-吡啶羧酸(中间体18-a)的制备
采用制备1-g相类似的合成方法制备得到18-a(415mg,57%)。MS(ESI)m/z:[M+H]+=416.1.1H-NMR(400M,DMSO-d6)δ12.82(brs,1H,COOH),10.25(s,1H,NH),9.07(s,1H,ArH),8.43(d,1H,ArH),8.29(d,2H,ArH),8.09(m,2H,ArH),7.66(d,2H,ArH),7.13(d,1H,ArH),6.95(m,1H,ArH)ppm.
N-(5-(羟甲基)-2-甲基苯基)-5-((4-(4-(三氟甲氧基)苯基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三氮嗪-2-基)氨基)吡啶-2-甲酰胺(中间体18-b)的制备
采用制备15-b相类似的合成步骤可得到18-b(150mg,65%)。MS(ESI)m/z:[M+H]+=535.2.1H-NMR(400M,DMSO-d6)δ10.28(s,1H,CONH),10.07(s,1H,NH),9.13(d,1H,ArH),8.52(m,1H,ArH),8.30(d,2H,ArH),8.13(m,2H,ArH),7.91(s,1H,ArH),7.66(d,2H,ArH),7.23(m,1H,ArH),7.13(d,1H,ArH),7.06(d,1H,ArH),6.96(m,1H,ArH),5.20(m,1H,OH),4.49(d,2H,CH 2 OH),2.32(s,3H,ArCH3)ppm.
N-(5-(氯甲基)-2-甲基苯基)-5-((4-(4-(三氟甲氧基)苯基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三氮嗪-2-基)氨基)吡啶-2-甲酰胺(中间体18-c)的制备
采用制备15-c相类似的合成步骤可得到18-c(127mg,100%)。MS(ESI)m/z:[M+H]+=553.2.
N-(2-甲基-5-((吗啉基)甲基)苯基)-5-((4-(4-(三氟甲氧基)苯基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三氮嗪-2-基)氨基)吡啶-2-甲酰胺(18)的制备
采用制备15相类似的合成步骤可得到黄色固体目标化合物18(108mg,78%)。MS(ESI)m/z:[M+H]+=604.3.1H-NMR(400M,DMSO-d6)δ10.30(s,1H,CONH),10.08(s,1H,NH),9.12(s,1H,ArH),8.52(m,1H,ArH),8.30(d,2H,ArH),8.15(m,2H,ArH),7.93(s,1H,ArH),7.66(d,2H,ArH),7.23(d,1H,ArH),7.14(d,1H,ArH),7.04(d,1H,ArH),6.95(s,1H,ArH),3.59(s,4H,morpholine-H),3.45(s,2H,ArCH 2 ),2.37(s,4H,morpholine-H),2.32(s,3H,ArCH3)ppm,HPLC:96.80%.
实施例19
化合物19的制备
N-(3-(羟甲基)苯基)-5-((4-(4-(三氟甲氧基)苯基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三氮嗪-2-基)氨基)吡啶-2-甲酰胺(中间体19-a)的制备
采用制备15-b相类似的合成步骤可得到19-a(163mg,65%)。MS(ESI)m/z:[M+H]+=521.2.1H-NMR(400M,DMSO-d6)δ10.42(s,1H,CONH),10.27(s,1H,NH),9.16(s,1H,ArH),8.50(d,1H,ArH),8.30(d,2H,ArH),8.15(d,1H,ArH),8.09(s,1H,ArH),7.91(s,1H,ArH),7.73(d,1H,ArH),7.66(d,2H,ArH),7.33(m,1H,ArH),7.14(d,1H,ArH),7.08(d,1H,ArH),6.96(s,1H,ArH),5.23(m,1H,OH),4.51(d,2H,CH 2 OH)ppm.
N-(3-(氯甲基)苯基)-5-((4-(4-(三氟甲氧基)苯基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三氮嗪-2-基)氨基)吡啶-2-甲酰胺(中间体19-b)的制备
采用制备15-c相类似的合成步骤可得到19-b(106mg,62%)。MS(ESI)m/z:[M+H]+=539.2.
N-(3-((吗啉基)甲基)苯基)-5-((4-(4-(三氟甲氧基)苯基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三氮嗪-2-基)氨基)吡啶-2-甲酰胺(19)的制备
采用制备15相类似的合成步骤可得到黄色固体目标化合物19(89mg,76%)。MS(ESI)m/z:[M+H]+=590.3.1H-NMR(400M,DMSO-d6)δ10.46(s,1H,CONH),10.28(s,1H,NH),9.16(s,1H,ArH),8.50(dd,1H,ArH),8.30(d,2H,ArH),8.15(d,1H,ArH),8.09(s,1H,ArH),7.91(s,1H,ArH),7.79(d,1H,ArH),7.66(d,2H,ArH),7.33(m,1H,ArH),7.14(d,1H,ArH),7.06(d,1H,ArH),6.96(s,1H,ArH),3.60(s,4H,morpholine-H),3.47(s,2H,ArCH 2 ),2.38(s,4H,morpholine-H)ppm,HPLC:97.27%.
实施例20
化合物20的制备
6-((4-(4-(三氟甲氧基)苯基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三氮嗪-2-基)氨基)-3-吡啶羧酸(中间体20-a)的制备
采用制备1-g相类似的合成方法制备得到20-a(41mg,57%)。MS(ESI)m/z:[M+H]+=416.1.
N-(5-(羟甲基)-2-甲基苯基)-6-((4-(4-(三氟甲氧基)苯基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三氮嗪-2-基)氨基)吡啶-3-甲酰胺(中间体20-b)的制备
采用制备15-b相类似的合成步骤可得到20-b(35mg,65%)。
N-(5-(氯甲基)-2-甲基苯基)-6-((4-(4-(三氟甲氧基)苯基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三氮嗪-2-基)氨基)吡啶-3-甲酰胺(中间体20-c)的制备
采用制备15-c相类似的合成步骤可得到20-c(27mg,100%)。MS(ESI)m/z:[M+H]+=553.2.
N-(2-甲基-5-((吗啉基)甲基)苯基)-6-((4-(4-(三氟甲氧基)苯基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三氮嗪-2-基)氨基)吡啶-3-甲酰胺(20)的制备
采用制备15相类似的合成步骤可得到黄色固体目标化合物20(18mg,75%)。MS(ESI)m/z:[M+H]+=604.3.1H-NMR(400M,DMSO-d6)δ10.32(s,1H,CONH),9.93(s,1H,NH),9.28(s,1H,ArH),8.64(m,1H,ArH),8.38(d,2H,ArH),8.25(m,2H,ArH),8.03(s,1H,ArH),7.76(d,2H,ArH),7.34(d,1H,ArH),7.24(d,1H,ArH),7.14(d,1H,ArH),7.04(s,1H,ArH),3.59(s,4H,morpholine-H),3.46(s,2H,ArCH 2 ),2.38(s,4H,morpholine-H),2.25(s,3H,ArCH3)ppm,HPLC:95.58%.
实施例21
化合物21的制备
2-氯-4-(4-氟苯基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三氮嗪(中间体21-a)的制备
采用制备1-f相类似的合成方法制备得到21-a(57mg,87%)。MS(ESI)m/z:[M+H]+=248.1.
4-((4-(4-氟苯基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三氮嗪-2-基)氨基)苯甲酸甲酯(中间体21-b)的制备
采用制备1-g相类似的合成方法制备得到21-b(47mg,69%)。MS(ESI)m/z:[M+H]+=363.1.
4-((4-(4-氟苯基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三氮嗪-2-基)氨基)苯甲酸(中间体21-c)的制备
采用制备1-h相类似的合成步骤可得到21-c(40mg,96%)。MS(ESI)m/z:[M+H]+=349.1.
4-((4-(4-氟苯基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三氮嗪-2-基)氨基)-N-(5-(羟甲基)-2-甲基苯基)苯甲酰胺(中间体21-d)的制备
采用制备2-a相类似的合成步骤可得到21-d(27mg,56%)。MS(ESI)m/z:[M+H]+=468.2.
N-(5-(氯甲基)-2-甲基苯基)-4-((4-(4-氟苯基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三氮嗪-2-基)氨基)苯甲酰胺(中间体21-e)的制备
采用制备2-b相类似的合成步骤可得到21-e(19mg,73%)。MS(ESI)m/z:[M+H]+=486.2.
4-((4-(4-氟苯基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三氮嗪-2-基)氨基)-N-(2-甲基-5-(吗啉基甲基)苯基)苯甲酰胺(21)的制备
采用制备2相类似的合成步骤可得到黄色固体目标化合物21(9mg,36%)。MS(ESI)m/z:[M+H]+=537.3.HPLC:97.63%.
实施例22
化合物22的制备
6-((4-(吡啶-3-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三氮嗪-2-基)氨基)吡啶-3-甲酸甲酯(中间体22-a)的制备
采用制备1-g相类似的合成方法,可制得22-a(175mg,56%)。MS(ESI)m/z:[M+H]+=347.1.1H-NMR(400M,DMSO-d6)δ10.47(s,1H,NH),9.32(s,1H,ArH),8.88(m,2H,ArH),8.55(d,1H,ArH),8.30(d,2H,ArH),8.11(d,1H,ArH),7.70(m,1H,ArH),7.21(d,1H,ArH),6.99(s,1H,ArH),3.86(s,3H,OCH3)ppm.
6-((4-(吡啶-3-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三氮嗪-2-基)氨基)吡啶-3-甲酸(中间体22-b)的制备
采用制备1-h相类似的合成步骤可得到22-b(150mg,92%)。MS(ESI)m/z:[M+H]+=333.1.
N-(5-(羟甲基)-2-甲基苯基)-6-((4-(吡啶-3-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三氮嗪-2-基)氨基)吡啶-3-甲酰胺(中间体22-c)的制备
采用制备2-a相类似的合成步骤可得到22-c(150mg,92%)。MS(ESI)m/z:[M+H]+=452.2.
N-(5-(氯甲基)-2-甲基苯基)-6-((4-(吡啶-3-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三氮嗪-2-基)氨基)吡啶-3-甲酰胺(中间体22-d)的制备
采用制备2-b相类似的合成步骤可得到22-d(120mg,89%)。MS(ESI)m/z:[M+H]+=470.2.
N-(2-甲基-5-((吗啉基)甲基)苯基)-6-((4-(吡啶-3-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三氮嗪-2-基)氨基)吡啶-3-甲酰胺(22)的制备
采用制备2相类似的合成步骤可得到黄色固体目标化合物22(78mg,73%)。MS(ESI)m/z:[M+H]+=520.3.1H-NMR(400M,DMSO-d6)δ10.32(s,1H,CONH),9.93(s,1H,NH),9.35(s,1H,ArH),8.94(d,2H,ArH),8.56(s,1H,ArH),8.33(s,2H,ArH),8.14(s,1H,ArH),7.70(s,1H,ArH),7.33(m,4H,ArH),7.00(s,1H,ArH),3.59(t,4H,morpholine-H),3.46(s,2H,ArCH 2 ),2.38(s,4H,morpholine-H),2.25(s,3H,ArCH3)ppm,HPLC:94.46%.
实施例23
化合物23的制备
5-((4-(吡啶-3-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三氮嗪-2-基)氨基)吡啶-2-甲酸甲酯(中间体23-a)的制备
采用制备1-g相类似的合成方法,可制得23-a(235mg,52%)。MS(ESI)m/z:[M+H]+=347.1.
5-((4-(吡啶-3-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三氮嗪-2-基)氨基)吡啶-2-甲酸(中间体23-b)的制备
采用制备1-h相类似的合成步骤可得到23-b(205mg,91%)。MS(ESI)m/z:[M+H]+=333.1.
N-(5-(羟甲基)-2-甲基苯基)-5-((4-(吡啶-3-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三氮嗪-2-基)氨基)吡啶-2-甲酰胺(中间体23-c)的制备
采用制备2-a相类似的合成步骤可得到23-c(160mg,47%)。MS(ESI)m/z:[M+H]+=452.2.
N-(5-(氯甲基)-2-甲基苯基)-5-((4-(吡啶-3-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三氮嗪-2-基)氨基)吡啶-2-甲酰胺(中间体23-d)的制备
采用制备2-b相类似的合成步骤可得到23-d(100mg,64%)。MS(ESI)m/z:[M+H]+=470.2.
N-(2-甲基-5-((吗啉基)甲基)苯基)-5-((4-(吡啶-3-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三氮嗪-2-基)氨基)吡啶-2-甲酰胺(23)的制备
采用制备2相类似的合成步骤可得到黄色固体目标化合物23(53mg,49%)。MS(ESI)m/z:[M+H]+=520.3.HPLC:84%.
实施例24
化合物24的制备
2-氯-4-苯基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三氮嗪(中间体24-a)的制备
采用制备1-f相类似的合成方法,可制得24-a(48mg,56%)。MS(ESI)m/z:[M+H]+=230.1.
4-((4-苯基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三氮嗪-2-基)氨基)苯甲酸甲酯(中间体24-b)的制备
采用制备1-g相类似的合成方法,可制得24-b(40mg,56%)。MS(ESI)m/z:[M+H]+=345.1.
4-((4-苯基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三氮嗪-2-基)氨基)苯甲酸(中间体24-c)的制备
采用制备1-h相类似的合成步骤可得到24-c(38mg,99%)。MS(ESI)m/z:[M+H]+=330.1.1H-NMR(400M,DMSO-d6)δ9.69(s,1H,NH),8.14(d,2H,ArH),7.98(s,1H,ArH),7.87(m,4H,ArH),7.67(m,3H,ArH),7.02(d,1H,ArH),6.85(s,1H,ArH)ppm.
N-(5-(羟甲基)-2-甲基苯基)-4-((4-苯基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三氮嗪-2-基)氨基)苯甲酰胺(中间体24-d)的制备
采用制备2-a相类似的合成步骤可得到24-d(28mg,54%)。MS(ESI)m/z:[M+H]+=450.2.
N-(5-(氯甲基)-2-甲基苯基)-4-((4-苯基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三氮嗪-2-基)氨基)苯甲酰胺(中间体24-e)的制备
采用制备2-b相类似的合成步骤可得到24-e(28mg,96%)。MS(ESI)m/z:[M+H]+=468.2.
N-(2-甲基-5-(吗啉基甲基)苯基)-4-((4-苯基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三氮嗪-2-基)氨基)苯甲酰胺(24)的制备
采用制备2相类似的合成步骤可得到黄色固体目标化合物24(30mg,97%)。MS(ESI)m/z:[M+H]+=519.3.1H-NMR(400M,DMSO-d6)δ9.88(s,1H,CONH),9.68(s,1H,NH),8.15(d,2H,ArH),8.02(s,1H,ArH),7.96(s,4H,ArH),7.68(m,3H,ArH),7.31(s,1H,ArH),7.23(d,1H,ArH),7.10(d,1H,ArH),7.06(d,1H,ArH),6.89(m,1H,ArH),3.58(t,4H,morpholine-H),3.44(s,2H,ArCH 2 ),2.37(m,4H,morpholine-H),2.23(s,3H,ArCH3)ppm,HPLC:90%.
实施例25
化合物生物活性筛选试验:(Hedgehog信号传导通路Gli-luciferase报道基因试验)
检验本发明提供的化合物对于Hedgehog通路抑制水平,通过Hedgehog信号传导通路的Gli-luciferase报道基因试验来评价。Hedgehog蛋白结合于膜受体蛋白PTCH后激活Hedgehog通路,活化转录因子Gli-1从而诱导一系列Hedgehog通路基因表达。通过构建Gli-1 Reporter-NIH3T3稳定转染细胞株,其包含8×Gli-1响应的萤火虫荧光蛋白报告基因。通过荧光蛋白的表达强弱用于检测该类化合物对Hedgehog通路活性的抑制程度。
实验步骤:收集对数期生长的Gli Reporter-NIH3T3细胞,以2×104/孔接种于96孔板中,37°CO2培养箱孵育培养过夜。第二天,待细胞生长铺满96孔板后轻柔去除细胞培养液。配置含0.5%FBS、0.7μg/mL Sonic Hedgehog激动剂的培养基。阳性化合物以上述培养基配置,以300nM开始,三倍梯度稀释,设8个梯度浓度组,DMSO为0.1%。设一组含SHH,不含药物为阳性对照;设一组不含SHH,不含药物做阴性对照。继续培养于37CO2培养箱培养48h。使用Reporter Assay检测试剂盒检测Luciferase荧光。
数据处理:相对荧光倍数=SHH刺激组荧光值/非SHH刺激组荧光值
结果及计算:化合物的浓度和相对荧光倍数通过Prism5.0(GraphPad的软件)统计分析,基于此计算化合物的IC50值(达到抑制率最大值的50%所需的化合物的浓度)。IC50值越低,表示待测化合物活性越高。以GDC-0449为内标化合物,多次测试的化合物IC50取其平均值。
下表1表示根据上述程序采用Gli-luciferase reporter测得的具体化合物抑制hedgehog通路信号传导的平均IC50值(nM)。
A表示IC50<20nM;B表示IC50范围20-100nM;C表示IC50范围100-500nM;D表示IC50>500nM;-表示未测试
给出以上优选地实施方案以解释说明本发明的范围和实质。本文所提供的描述使得其他实施方案和实施例对于本领域的技术人员来说是显而易见的。这些其他实施方案和实施例也在本发明的考虑范围内。因此,本发明仅受所附权利要求的限制。