CN103993078A - 一种对细胞内端粒酶活性原位成像的纳米探针及其制备方法 - Google Patents
一种对细胞内端粒酶活性原位成像的纳米探针及其制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103993078A CN103993078A CN201410193997.7A CN201410193997A CN103993078A CN 103993078 A CN103993078 A CN 103993078A CN 201410193997 A CN201410193997 A CN 201410193997A CN 103993078 A CN103993078 A CN 103993078A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- telomerase
- fluorescence
- cell
- aunp
- probe
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 108010017842 Telomerase Proteins 0.000 title claims abstract description 64
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 title claims abstract description 17
- 230000000694 effects Effects 0.000 title claims abstract description 16
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 title claims abstract description 15
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title abstract description 7
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims abstract description 40
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 8
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 claims abstract description 6
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims description 26
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 11
- 230000000857 drug effect Effects 0.000 claims description 4
- 238000000799 fluorescence microscopy Methods 0.000 claims description 4
- CWHJIJJSDGEHNS-MYLFLSLOSA-N Senegenin Chemical compound C1[C@H](O)[C@H](O)[C@@](C)(C(O)=O)[C@@H]2CC[C@@]3(C)C(CC[C@]4(CCC(C[C@H]44)(C)C)C(O)=O)=C4[C@@H](CCl)C[C@@H]3[C@]21C CWHJIJJSDGEHNS-MYLFLSLOSA-N 0.000 claims description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 claims description 3
- 230000004043 responsiveness Effects 0.000 claims description 3
- 239000009871 tenuigenin Substances 0.000 claims description 3
- 238000004624 confocal microscopy Methods 0.000 claims description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 claims 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 claims 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 claims 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 abstract description 50
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 abstract description 8
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 5
- 238000002866 fluorescence resonance energy transfer Methods 0.000 abstract description 3
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 abstract description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 abstract 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 abstract 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 abstract 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 abstract 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 abstract 1
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 abstract 1
- 238000000034 method Methods 0.000 description 7
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 5
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 5
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 4
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 108091035539 telomere Proteins 0.000 description 3
- 210000003411 telomere Anatomy 0.000 description 3
- 102000055501 telomere Human genes 0.000 description 3
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 description 2
- 238000007334 copolymerization reaction Methods 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- PFTAWBLQPZVEMU-DZGCQCFKSA-N (+)-catechin Chemical compound C1([C@H]2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C[C@@H]2O)=CC=C(O)C(O)=C1 PFTAWBLQPZVEMU-DZGCQCFKSA-N 0.000 description 1
- 230000004544 DNA amplification Effects 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- 108010081734 Ribonucleoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000004389 Ribonucleoproteins Human genes 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- ADRVNXBAWSRFAJ-UHFFFAOYSA-N catechin Natural products OC1Cc2cc(O)cc(O)c2OC1c3ccc(O)c(O)c3 ADRVNXBAWSRFAJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000005487 catechin Nutrition 0.000 description 1
- 230000032677 cell aging Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 229950001002 cianidanol Drugs 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000000994 depressogenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000002086 nanomaterial Substances 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 1
- 238000010791 quenching Methods 0.000 description 1
- 230000000171 quenching effect Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6813—Hybridisation assays
- C12Q1/6816—Hybridisation assays characterised by the detection means
- C12Q1/6818—Hybridisation assays characterised by the detection means involving interaction of two or more labels, e.g. resonant energy transfer
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
Abstract
本发明涉及一种可对细胞内端粒酶活性进行原位成像检测的纳米探针及其制备方法。纳米探针以金纳米粒子(AuNP)为载体，负载特殊设计的DNA分子信标(MB)。该MB为茎-环结构，并带有一个缺口，将整个DNA序列分为两段：较短的一段是端粒酶引物序列(TSP)；较长的一段(1-MB)含环状结构，其茎部3’端的巯基可共价连接AuNP，5’端修饰荧光分子Cy5。由于荧光共振能量转移，Cy5的荧光被AuNP猝灭，纳米探针的荧光状态为“关”。将探针与细胞温育，探针进入细胞后，在细胞质内端粒酶的作用下，TSP被延长并发生内部链取代，使1-MB环被打开，导致Cy5离开AuNP表面，将荧光状态转换为“开”，进而利用激光共聚焦荧光显微镜观察Cy5的荧光，可实现细胞内端粒酶活性的原位成像分析。该探针可区分肿瘤和正常细胞，还可用于监测细胞内端粒酶活性在端粒酶抑制药物作用下的变化，因此该发明具有良好的应用前景。
Description
一、技术领域
本发明涉及一种可对细胞内端粒酶活性原位成像的纳米探针及其制备方法。
二、背景技术
人端粒酶是一种核糖核蛋白的复合体，通过其内部的RNA模板，可将长度为六个碱基的DNA重复片段合成到端粒末端。在正常细胞内，端粒的长度随着细胞复制周期的进行而不断缩短，最终导致细胞衰老和凋亡。然而在多种肿瘤细胞中，由于端粒酶的激活，端粒的长度得以维持，导致肿瘤细胞的无限繁殖。肿瘤转移组织中，端粒酶活性通常也是高度表达的。因此，端粒酶被认为是一种很有前景的肿瘤标志物，端粒酶活性的检测对肿瘤的诊断，治疗和监测具有重要的意义。
自从1985年端粒酶被发现以来，一大批检测端粒酶活性的方法被提出，主要分为三类：基于聚合酶链反应(PCR)的端粒重复扩增方法(TRAP)，等温DNA扩增或DNA酶方法，以及基于纳米材料的生物传感检测方法。这些方法具有令人满意的灵敏度和检测限，但是大部分都是利用细胞提取液进行端粒酶检测，无法提供活细胞内端粒酶活性的直接信息。
金纳米粒子(AuNP)作为固定DNA的良好底物，可通过金-巯基共价键将DNA连接到表面上，还可以保护DNA在细胞内环境的影响下不被降解。因此AuNP特别适合作为进入细胞的载体运输识别和信号分子。
为了简化细胞内端粒酶检测的步骤，提高检测灵敏度，该专利制备的纳米探针为端粒酶响应的荧光“关-开”结构，只有在端粒酶的作用下才会发光，实现细胞酶端粒酶活性的原位成像和检测。通过比较不同细胞内荧光信号的强弱，可区分肿瘤和正常细胞，利用药物作用后细胞内荧光的变化，可实现细胞内端粒酶活性对药物响应的动态检测。
三、发明内容
本发明的目的是：基于端粒酶的催化作用，设计包含端粒酶引物和荧光分子的分子信标，共价组装在AuNP表面，得到对细胞内端粒酶活性原位成像检测的纳米探针。利用分子信标在端粒酶作用下的延长打开环结构，改变荧光分子与AuNP表面的距离，实现纳米探针荧光的端粒酶响应性恢复。以Hela宫颈癌细胞系为模型，制备的探针实现了细胞内端粒酶活性的原位“关-开”荧光成像和检测，以及端粒酶抑制药物作用后细胞内端粒酶活性变化的动态监测。通过对多种细胞进行成像，证实探针可用于区分肿瘤和正常细胞。
本发明提出的可对细胞内端粒酶活性进行原位成像的纳米探针如图1所示。以AuNP为载体，在其表面负载带一个缺口、含TSP序列和茎环结构的MB，得到该纳米探针。
本发明通过以下技术方案来实现：
1)具有端粒酶响应性的带一个缺口的MB由两个部分组成：较短的一段是TSP；较长的一段(1-MB)可形成环状结构，在茎部3’端有可共价连接AuNP的巯基，在5’端修饰有Cy5，3’端的茎可以与TSP的延长产物互补杂交。
2)纳米探针以AuNP为载体，将TSP，1-MB与AuNP混合后，TSP与1-MB杂交形成的MB通过金-巯基共价键组装在金纳米粒子表面，如图1所示。
本发明的工作原理：
本发明的工作原理如图2所示，所述的可对细胞内端粒酶活性进行原位成像的纳米探针以AuNP为载体，在其表面上组装含TSP并标记有Cy5的MB。在没有端粒酶存在时，由于MB的环状结构，Cy5靠近AuNP表面，其荧光被AuNP通过荧光共振能量转移而猝灭，纳米探针的荧光状态为“关”。将纳米探针与细胞共温育，探针进入细胞后，在细胞质内端粒酶的作用下，MB内部的TSP被延长，其延长部分与1-MB的3’端茎互补杂交而导致内部链取代，从而打开MB的环，使Cy5远离AuNP表面，荧光信号恢复。通过激光共聚焦荧光显微镜进行观察，可以实现细胞内端粒酶活性的原位成像和检测。利用所述的纳米探针对端粒酶抑制药物作用后的细胞进行端粒酶活性成像，可以分析药物对细胞内端粒酶活性的影响并对其进行动态监测。通过比较不同细胞在探针作用后的共聚焦荧光图像，可以区分肿瘤和正常细胞。
与现有技术相比，本发明具有以下特点：
本发明基于AuNP对DNA链的保护功能和易于修饰的特点，制备的MB纳米探针可被端粒酶特异性识别，实现了细胞内端粒酶活性的开关可控原位荧光成像和检测，并且可用于监测药物作用下细胞内端粒酶活性的变化，还可以区分肿瘤和正常细胞。与已有的端粒酶检测方法相比，本发明具备以下优点：
1.本发明所述的纳米探针制备方法简便，细胞毒性低，通过与细胞进行“一步温育”，即可实现细胞内端粒酶活性的原位荧光成像和检测。该方法无需细胞破碎及其它预处理步骤，与已有方法相比更有优势。
2.本发明涉及的MB为含端粒酶引物片段TSP、带缺口的茎环结构，TSP可在端粒酶作用下延长并导致MB内部发生链取代反应，使得MB的环被打开而发生构型变化，从而实现具有端粒酶响应特异性的结构转变。
3.本发明涉及的探针以AuNP为基底，结合荧光共振能量转移导致的荧光猝灭作用和端粒酶响应控制的MB构型改变，实现了由生物分子识别来控制的荧光从猝灭到恢复的转换机制。
4.本发明所述的纳米探针充分利用AuNP对DNA链的保护作用和金-巯基共价键的稳定性，使探针在细胞外和细胞内都具有很好的稳定性。
四、附图说明
图1.纳米探针的结构及合成示意图
图2.纳米探针对细胞内端粒酶原位成像检测的原理图
五、具体实施方式
实施例1：结合图1，合成可对细胞内端粒酶原位成像的纳米探针
将10μL1-MB(100μM)和10μL TSP(100μM)与1mLAuNP(13nm，5nM)混合后，在室温下搅拌过夜。然后将0.1mL含有2M NaCl的磷酸盐缓冲液(PBS，pH7.4)逐滴加入到上述混合液中稳定纳米探针。将上述溶液离心并用PBS洗涤后，重新分散在1mL PBS中，得到MB纳米探针，于4℃条件下保存。
实施例2：结合图2，利用纳米探针进行细胞内端粒酶活性的原位成像
以HeLa宫颈癌细胞系为基本模型，将HeLa细胞(0.5mL，1×106mL-1)种在20-mm共聚焦培养皿中，培养24h。然后将25μL探针加入培养皿并温育1.5h，利用激光共聚焦荧光显微镜进行观察。在端粒酶阳性的HeLa细胞中，探针表面的MB被打开，荧光恢复，因此在共聚焦显微图像上可以看到细胞质中的荧光信号。将端粒酶抑制药物儿茶素(125μg)与HeLa细胞(0.5mL，1×106mL-1)共温育48h，然后加入25μL探针并温育1.5h，用共聚焦显微镜观察，可看到细胞内荧光信号的明显降低，说明细胞内端粒酶活性受到药物的抑制。将探针分别与不同种类的肿瘤细胞(HeLa，BGC，MCF，BEL)和正常细胞(QSG)温育后进行荧光观察，肿瘤细胞内的荧光信号明显强于正常细胞，说明肿瘤细胞内端粒酶活性高表达。
Claims (5)
1.一种可对细胞内端粒酶活性进行原位成像检测的纳米探针，其特征为以金纳米粒子(AuNP)为载体，负载带有一个缺口的DNA分子信标(MB)。该MB为茎-环结构，并带有一个缺口，将MB分为两段：较短的一段是端粒酶引物序列(TSP)；较长的一段(1-MB)含环状结构，其茎部3’端的巯基可共价连接AuNP，5’端修饰荧光分子Cy5。
2.根据权利要求1所述的纳米探针，其特征在于可特异性响应端粒酶，对细胞内端粒酶活性实现“关-开”可控的原位荧光成像检测。同时还可以区分肿瘤和正常细胞，并动态监测细胞内端粒酶活性在端粒酶抑制药物作用下的变化。
3.根据权利要求1和2所述的纳米探针，其特征在于所用MB为茎-环结构，并带有一个缺口，将其分为两段：较短的一段是TSP序列；较长的一段1-MB含环状结构，其茎部3’端的巯基可共价连接AuNP，5’端修饰有Cy5。在端粒酶作用下，TSP被延长，导致内部链取代，从而打开1-MB的环，实现MB的响应性结构改变。所述TSP的核苷酸序列为：5’-AAT CCG TCG AGC AGA GTT-3’；1-MB的序列为：5’-Cy5-AGG GTT(AAA)7AAC CCTAAC TCT GCT CGA CGG ATT-SH-3’。
4.根据权利要求1和2所述的纳米探针，其特征在于其荧光“关-开”的转换是通过MB环状结构的“关-开”转换来实现的。当MB为环状关闭结构时，Cy5的荧光被AuNP猝灭，当环被打开时，Cy5远离AuNP表面，荧光恢复。
5.根据权利要求1和2所述的纳米探针，其特征在于在探针进入细胞后，在细胞质内端粒酶的作用下通过内部链取代打开MB环，从而恢复荧光，用共聚焦显微镜观察Cy5的荧光恢复情况来实现细胞内端粒酶活性的原位成像与检测。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410193997.7A CN103993078B (zh) | 2014-05-09 | 2014-05-09 | 一种对细胞内端粒酶活性原位成像的纳米探针及其制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410193997.7A CN103993078B (zh) | 2014-05-09 | 2014-05-09 | 一种对细胞内端粒酶活性原位成像的纳米探针及其制备方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN103993078A true CN103993078A (zh) | 2014-08-20 |
| CN103993078B CN103993078B (zh) | 2016-11-09 |
Family
ID=51307407
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201410193997.7A Active CN103993078B (zh) | 2014-05-09 | 2014-05-09 | 一种对细胞内端粒酶活性原位成像的纳米探针及其制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN103993078B (zh) |
Cited By (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105154563A (zh) * | 2015-09-30 | 2015-12-16 | 陕西师范大学 | 一种基于三重放大技术均相非标检测端粒酶活性的方法 |
| CN106591423A (zh) * | 2016-11-29 | 2017-04-26 | 山东大学 | 一种基于银纳米探针的端粒酶活性比色检测方法 |
| CN107177697A (zh) * | 2017-07-21 | 2017-09-19 | 深圳出入境检验检疫局食品检验检疫技术中心 | 食源性致病菌可视化检测探针及可视化检测方法 |
| CN107881218A (zh) * | 2017-11-23 | 2018-04-06 | 中国科学院合肥物质科学研究院 | 一种用于端粒酶活性检测的球形核酸荧光探针及其制备方法和用途 |
| CN109439318A (zh) * | 2018-12-12 | 2019-03-08 | 中国科学院合肥物质科学研究院 | 一种比率型粘性耀斑荧光探针及其制备方法和应用 |
| CN109504734A (zh) * | 2018-11-13 | 2019-03-22 | 西安交通大学 | 一种活细胞内原位加速的dna马达及其制备方法和应用 |
| CN109797200A (zh) * | 2019-02-13 | 2019-05-24 | 中国科学院苏州生物医学工程技术研究所 | 比率型端粒酶活性定量检测方法 |
| CN109897887A (zh) * | 2019-01-04 | 2019-06-18 | 中国科学院苏州生物医学工程技术研究所 | 基于fret的端粒酶活性检测方法 |
| CN110157774A (zh) * | 2019-05-23 | 2019-08-23 | 山东师范大学 | 一种dna功能化纳米金探针及其检测端粒酶的应用 |
| CN110333217A (zh) * | 2019-06-05 | 2019-10-15 | 青岛科技大学 | 一种新型的双光谱跷跷板式比率探针及构建方法 |
| CN110387416A (zh) * | 2018-04-16 | 2019-10-29 | 华东理工大学 | 可控聚合调控功能的纳米金双探针体系及其应用 |
| CN113368239A (zh) * | 2021-06-08 | 2021-09-10 | 青岛科技大学 | 一种新型端粒酶触发dna纳米机器及其构建方法 |
| CN113820298A (zh) * | 2021-09-03 | 2021-12-21 | 山东师范大学 | 自组装超猝灭金纳米颗粒纳米传感器及其制备方法与应用 |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2019116334A1 (en) * | 2017-12-15 | 2019-06-20 | University Of The Witwatersrand, Johannesburg | A nanoparticle-based telomerase assay |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1319675A (zh) * | 2000-01-28 | 2001-10-31 | 中国科学院上海细胞生物学研究所 | 端粒酶活性的定量测定方法 |
-
2014
- 2014-05-09 CN CN201410193997.7A patent/CN103993078B/zh active Active
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1319675A (zh) * | 2000-01-28 | 2001-10-31 | 中国科学院上海细胞生物学研究所 | 端粒酶活性的定量测定方法 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| DING C, ET AL.: "fluorescence detection of telomerase activity in cancer cells based on isothermal circular strand-displacement polymerization reaction", 《ANAL CHEM》 * |
| JIASI WANG ET AL.: "visualizing human telomerase activity with primer-modified Au nanoparticles", 《SMALL》 * |
| 钱若灿，丁霖，鞠熀先: "端粒酶响应的多孔硅纳米粒子用于细胞内端粒酶活性的荧光开关成像", 《第八届全国化学生物学学术会议论文摘要集》 * |
Cited By (22)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105154563A (zh) * | 2015-09-30 | 2015-12-16 | 陕西师范大学 | 一种基于三重放大技术均相非标检测端粒酶活性的方法 |
| CN105154563B (zh) * | 2015-09-30 | 2018-10-23 | 陕西师范大学 | 一种基于三重放大技术均相非标检测端粒酶活性的方法 |
| CN106591423A (zh) * | 2016-11-29 | 2017-04-26 | 山东大学 | 一种基于银纳米探针的端粒酶活性比色检测方法 |
| CN107177697A (zh) * | 2017-07-21 | 2017-09-19 | 深圳出入境检验检疫局食品检验检疫技术中心 | 食源性致病菌可视化检测探针及可视化检测方法 |
| CN107881218A (zh) * | 2017-11-23 | 2018-04-06 | 中国科学院合肥物质科学研究院 | 一种用于端粒酶活性检测的球形核酸荧光探针及其制备方法和用途 |
| CN107881218B (zh) * | 2017-11-23 | 2021-09-28 | 中国科学院合肥物质科学研究院 | 一种用于端粒酶活性检测的球形核酸荧光探针及其制备方法和用途 |
| CN110387416A (zh) * | 2018-04-16 | 2019-10-29 | 华东理工大学 | 可控聚合调控功能的纳米金双探针体系及其应用 |
| CN109504734B (zh) * | 2018-11-13 | 2020-07-28 | 西安交通大学 | 一种活细胞内原位加速的dna马达及其制备方法和应用 |
| CN109504734A (zh) * | 2018-11-13 | 2019-03-22 | 西安交通大学 | 一种活细胞内原位加速的dna马达及其制备方法和应用 |
| CN109439318A (zh) * | 2018-12-12 | 2019-03-08 | 中国科学院合肥物质科学研究院 | 一种比率型粘性耀斑荧光探针及其制备方法和应用 |
| CN109439318B (zh) * | 2018-12-12 | 2022-02-01 | 中国科学院合肥物质科学研究院 | 一种比率型粘性耀斑荧光探针及其制备方法 |
| CN109897887A (zh) * | 2019-01-04 | 2019-06-18 | 中国科学院苏州生物医学工程技术研究所 | 基于fret的端粒酶活性检测方法 |
| CN109897887B (zh) * | 2019-01-04 | 2023-03-14 | 中国科学院苏州生物医学工程技术研究所 | 基于fret的端粒酶活性检测方法 |
| CN109797200A (zh) * | 2019-02-13 | 2019-05-24 | 中国科学院苏州生物医学工程技术研究所 | 比率型端粒酶活性定量检测方法 |
| CN109797200B (zh) * | 2019-02-13 | 2022-07-19 | 中国科学院苏州生物医学工程技术研究所 | 比率型端粒酶活性定量检测方法 |
| CN110157774A (zh) * | 2019-05-23 | 2019-08-23 | 山东师范大学 | 一种dna功能化纳米金探针及其检测端粒酶的应用 |
| CN110157774B (zh) * | 2019-05-23 | 2023-04-11 | 山东师范大学 | 一种dna功能化纳米金探针及其检测端粒酶的应用 |
| CN110333217A (zh) * | 2019-06-05 | 2019-10-15 | 青岛科技大学 | 一种新型的双光谱跷跷板式比率探针及构建方法 |
| CN113368239B (zh) * | 2021-06-08 | 2022-11-15 | 青岛科技大学 | 一种新型端粒酶触发dna纳米机器及其构建方法 |
| CN113368239A (zh) * | 2021-06-08 | 2021-09-10 | 青岛科技大学 | 一种新型端粒酶触发dna纳米机器及其构建方法 |
| CN113820298A (zh) * | 2021-09-03 | 2021-12-21 | 山东师范大学 | 自组装超猝灭金纳米颗粒纳米传感器及其制备方法与应用 |
| CN113820298B (zh) * | 2021-09-03 | 2024-02-13 | 山东师范大学 | 自组装超猝灭金纳米颗粒纳米传感器及其制备方法与应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN103993078B (zh) | 2016-11-09 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN103993078A (zh) | 一种对细胞内端粒酶活性原位成像的纳米探针及其制备方法 | |
| Chu et al. | Labeling tumor cells with fluorescent nanocrystal–aptamer bioconjugates | |
| Akinfieva et al. | New directions in quantum dot-based cytometry detection of cancer serum markers and tumor cells | |
| EP2195457B1 (en) | Single cell based reporter assay to monitor gene expression patterns with high spatio-temporal resolution | |
| Li et al. | Bio-cleavable nanoprobes for target-triggered catalytic hairpin assembly amplification detection of microRNAs in live cancer cells | |
| CN102220431A (zh) | 一种检测活细胞内核酸的探针及其应用方法 | |
| CN104611416A (zh) | 基于signal-off的表面增强拉曼技术检测细胞内端粒酶活性 | |
| CN109439318B (zh) | 一种比率型粘性耀斑荧光探针及其制备方法 | |
| CN107881218A (zh) | 一种用于端粒酶活性检测的球形核酸荧光探针及其制备方法和用途 | |
| CN105385691A (zh) | 用于检测人高转移结肠癌细胞株LoVo的核酸适配体及检测试剂盒 | |
| CN107988351A (zh) | 一种环状dna在正义rna的检测、成像及基因治疗中的应用 | |
| CN103497997B (zh) | 一种用于端粒酶活性检测的量子点-核黄素分子信标 | |
| CN104250662B (zh) | 一种原位检测细胞内端粒酶活性的纳米探针及其制备方法 | |
| CN103276066A (zh) | 一种核酸检测试剂盒和多生物素信号放大检测核酸的方法 | |
| Ou et al. | Live‐Cell MicroRNA Imaging through MnO2 Nanosheet‐Mediated DD‐A Hybridization Chain Reaction | |
| Wang et al. | DNA nanolantern-mediated catalytic hairpin assembly nanoamplifiers for simultaneous detection of multiple microRNAs | |
| CN107236795A (zh) | 一种磁分离rca合成dna酶检测金黄色葡萄球菌的方法 | |
| JP2020072679A5 (zh) | ||
| CN105004703B (zh) | 利用dapi嵌入和释放模拟dna纳米折纸结构作为药物载体的方法 | |
| Wang et al. | A novel dual energy transfer probe for intracellular mRNA detection with high robustness and specificity | |
| JP2017506912A5 (zh) | ||
| CN101705277A (zh) | 一类用于端粒酶活性检测的引物 | |
| CN111413303B (zh) | 一种熵驱动的dna纳米回路及其应用 | |
| Liu et al. | In situ analysis of cancer cells based on DNA signal amplification and DNA nanodevices | |
| Zhang et al. | Ratiometric fluorescence resonance energy transfer for reliable and sensitive detection of intracellular telomerase RNA via strand displacement reaction amplification |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant |