CN103987723A - Hcv ns5a的抑制剂 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了用于治疗丙型肝炎病毒(HCV)感染的化合物、组合物和方法。还公开了包含该类化合物的药物组合物和用这些化合物来治疗HCV感染的方法。

Description

HCV NS5A的抑制剂
本发明提供了式I-III的非核苷化合物以及其某些衍生物，其可用作丙型肝炎病毒(HCV)NS5A蛋白的抑制剂、HCV复制的抑制剂，以及用于治疗丙型肝炎感染。
丙型肝炎病毒(HCV)感染是导致许多受感染个体的慢性肝疾病如肝硬化和肝细胞癌的主要健康问题。目前HCV感染的治疗包括单独或与核苷类似物利巴韦林联合使用的用重组干扰素-α进行的免疫疗法。
许多病毒编码的酶是治疗干预的假定目标，包括金属蛋白酶(NS2-3)、丝氨酸蛋白酶(NS3，氨基酸残基1-180)、解旋酶(NS3，全长型)、NS3蛋白酶辅助因子(NS4A)、膜蛋白(NS4B)、锌金属蛋白(NS5A)和RNA-依赖性RNA聚合酶(NS5B)。
一种确定了的治疗干预目标是HCV NS5A非结构蛋白。非结构蛋白NS5A是一种病毒复制和装配的必需组分。NS5A中已知的磷酸化部位上或其附近的突变可影响细胞培养物系统中高水平复制的能力，表明NS5A磷酸化在病毒复制效率中起着重要作用。NS5A磷酸化的抑制剂可导致病毒RNA复制减少。
开发用于治疗HCV感染的有效治疗剂是一个明确并且长期的需求。特别是需要开发可用于治疗HCV感染患者的化合物和选择性抑制HCV病毒复制的化合物。
发明概述
本申请提供了式I-III的化合物或其可药用的盐
其中:
各A独立地选自
各R1和R2独立地选自H、低级烷基或芳基；
各R3独立地选自H、低级烷基或C(＝O)OR4；
R4是低级烷基；
各X独立地选自H和Cl；并且
各Y1和Y2独立地选自H或F。
本申请提供了一种治疗丙型肝炎病毒(HCV)感染的方法，其包括给需要其的患者施用治疗有效量的式I-III中任意一种的化合物。
本申请提供了一种包含式I-III中任意一种的化合物和可药用赋形剂的组合物。
发明详细说明
定义
本文所用的短语“一种”实体是指一个或多个该类实体；例如，一种化合物是指一种或多种化合物或至少一种化合物。就此而言，术语“一种”、“一种或多种”和“至少一种”在本文中可互换使用。
短语“如本文上面所定义”是指如本发明概述中或范围最大的权利要求中所提供的各基团的范围最宽的定义。在下面提供的所有其它实施方案中，可存在于各实施方案中并且没有被清楚定义的取代基保留了本发明概述中提供的范围最宽的定义。
如本说明书中所用的那样，不管是在连接短语中还是在权利要求中，术语“包含/包括”应被解释为具有一种开放的含义。即，该术语应被解释为与“至少具有”或“至少包括”同义。当用于一种方法的上下文中时，术语“包括”意指该方法至少包括所列举的步骤，但也可以包括另外的步骤。当用于化合物或组合物的上下文中时，术语“包括”意指该化合物或组合物至少包括所列举的特征或组分，但是也可以包括其他特征或组分。
除非另外清楚说明，否则本文所用的措辞“或”是以“和/或”的“非排他性”含义而非“之一/或”的“排他性”含义进行应用的。
本文所用的术语“独立地”是指一个变量可用于任何一种情形而不考虑在相同的化合物中是否存在具有相同或不同定义的变量。因此，在其中R"出现两次并且被定义为“独立地是碳或氮”的化合物中，两个R"可以均是碳、两个R"可以均是氮，或者一个R"可以是碳且另一个是氮。
当任何变量在描绘和描述本发明所用的或所要求保护的化合物的任何部分或结构式中出现一次以上时，其在每次出现时的定义与其每次在其它时候出现时的定义是独立的。此外，只有当该化合物产生稳定的化合物时，取代基和/或变量的组合才是允许的。
在键的末端的符号“＊”或穿过键的符号“------”各自是指官能团或其它化学部分与包含其作为一部分的分子的其余部分的连接点。因此，例如：
MeC(＝O)OR4其中
画到环系内的键(与连接到明确的顶点的键不同)表示该键可以连接在任何适宜的环原子上。
本文中使用的术语“任选的”或“任选地”表示随后所述的事件或情况可以但不是必需发生，并且该表述包括其中事件或情况发生的情形和其中它们不发生的情形。例如，“任选的被取代的”表示任选被取代的部分可以掺入氢原子或取代基。
短语“任选的键”意指该键可存在或不存在，并且该描述包括单键、双键或三键。如果一种取代基被称为一种“键”或“不存在”，则与该取代基相连的原子直接进行连接。
本文所用的术语“约”用来表示近似地、在一定区域内、大约地或左右。当术语“约”与数值范围一起使用时，其通过使边界值由所给出的数值向上和或向下扩展来对该范围进行修饰。通常，本文所用的术语“约”在数值上以20％的偏离值向上和向下修饰所述的数值。
某些化合物可表现出互变异构现象。互变异构的化合物可以以两种或多种可相互转化的物质的形式存在。质子移变互变异构体源于两个原子之间共价键合的氢原子的迁移。互变异构体一般以平衡形式存在，尝试分离单一互变异构体时通常产生一种化学和物理性质与化合物的混合物一致的混合物。平衡的位置取决于分子内的化学特征。例如，在很多脂族醛和酮如乙醛中，酮型占优势；而在酚中，烯醇型占优势。常见的质子移变互变异构体包括酮/烯醇(-C(＝O)-CH-D-C(-OH)＝CH-)、酰胺/亚胺酸(-C(＝O)-NH-D-C(-OH)＝N-)和脒(-C(＝NR)-NH-D-C(-NHR)＝N-)互变异构体。后两种在杂芳基和杂环中特别常见，本发明包含化合物的所有互变异构形式。
除非另外定义，否则本文中使用的技术和科学术语具有本发明所属领域技术人员通常所理解的含义。可以参考本领域技术人员已知的各种方法和材料。解释药理学基本原理的标准参考著作包括Goodman和Gilman的The Pharmacological Basis of Therapeutics,第10版,McGraw HillCompanies Inc.,纽约(2001)。可以用本领域技术人员已知的任何适宜材料和/或方法来实施本发明。然而，对优选的材料和方法进行了描述。除非特别说明，否则在以下描述和实施例中所提到的材料、试剂等可以得自商业来源。
可对本文所述的定义进行附加从而形成化学相关的组合，如“杂烷基芳基”、“卤代烷基杂芳基”、“芳基烷基杂环基”、“烷基羰基”、“烷氧基烷基”等。当术语“烷基”在另一个术语后用作后缀时，如在“苯基烷基”或“羟基烷基”中，其意指被一至两个选自具体指明的其它基团的取代基取代的如上面所定义的烷基。因此，例如，“苯基烷基”是指具有一至两个苯基取代基的烷基，因此包括苄基、苯基乙基和联苯基。“烷基氨基烷基”是具有一至两个烷基氨基取代基的烷基。“羟基烷基”包括2-羟基乙基、2-羟基丙基、1-(羟基甲基)-2-甲基丙基、2-羟基丁基、2,3-二羟基丁基、2-(羟基甲基)、3-羟基丙基等。因此，如本文所用的那样，用术语“羟基烷基”来定义下面所定义的杂烷基的子集。术语-(芳)烷基是指未被取代的烷基或芳烷基。术语(杂)芳基是指芳基或杂芳基。
本文所用的术语“螺环烷基”意指一种螺环的环烷基，例如，螺环[3.3]庚烷。本文所用的术语螺杂环烷基是指螺环的杂环烷基，例如，2,6-二氮杂螺环[3.3]庚烷。
本文所用的术语“酰基”是指式-C(＝O)R的基团，其中R是氢或如本文所定义的低级烷基。本文所用的术语“烷基羰基”表示式C(＝O)R的基团，其中R是本文所定义的烷基。术语C1-6酰基是指包含6个碳原子的-C(＝O)R基团。本文所用的术语“芳基羰基”是指式C(＝O)R的基团，其中R是芳基；本文所用的术语“苯甲酰基”是指其中R是苯基的“芳基羰基”。
本文所用的术语“酯”表示式-C(＝O)OR的基团，其中R是本文所定义的低级烷基。
本文所用的术语“烷基”表示包含1至10个碳原子的、无支链或有支链的饱和单价烃残基。术语“低级烷基”表示包含1至6个碳原子的直链或支链烃残基。本文所用的“C1-10烷基”是指由1至10个碳组成的烷基。烷基的实例非限制性地包括低级烷基，包括甲基、乙基、丙基、异-丙基、正-丁基、异-丁基、叔-丁基或戊基、异戊基、新戊基、己基、庚基和辛基。
当术语“烷基”在另一个术语后用作后缀时，如在“苯基烷基”或“羟基烷基”中，其意指被一至两个选自具体指明的其它基团的取代基取代的如上面所定义的烷基。因此，例如，“苯基烷基”表示基团R'R"-，其中R'是苯基，R"是如本文所定义的亚烷基，应当清楚的是，该苯基烷基的连接点将位于亚烷基上。芳基烷基的实例非限制性地包括苄基、苯基乙基、3-苯基丙基。术语“芳基烷基”或“芳烷基”具有类似解释，只是R'是芳基。术语“(杂)芳基烷基”或“(杂)芳烷基”具有类似解释，只是R'任选地是芳基或杂芳基。
术语“卤代烷基”或“卤代-低级烷基”或“低级卤代烷基”是指其中一个或多个碳原子被一个或多个卤素原子取代的包含1至6个碳原子的直链或支链烃残基。
除非特别说明，否则本文所用的术语“亚烷基”表示一种1至10个碳原子的二价饱和直链烃基(例如，(CH2)n)或2至10个碳原子的支链饱和二价烃基(例如，-CHMe-或-CH2CH(i-Pr)CH2-)。除亚甲基外，亚烷基的开放价键不连接在同一个原子上。亚烷基的实例非限制性地包括亚甲基、亚乙基、亚丙基、2-甲基-亚丙基、1,1-二甲基-亚乙基、亚丁基、2-乙基亚丁基。
本文所用的术语“烷氧基”意指其中烷基如上面所定义的-O-烷基，如甲氧基、乙氧基、正-丙氧基、异-丙氧基、正-丁氧基、异-丁氧基、叔-丁氧基、戊氧基、己氧基，包括它们的异构体。本文所用的“低级烷氧基”表示具有如前面所定义的“低级烷基”的烷氧基。本文所用的“C1-10烷氧基”是指其中烷基是C1-10的-O-烷基。
术语“PCy3”是指被三个环状部分三取代的膦。
术语“卤代烷氧基”或“卤代-低级烷氧基”或“低级卤代烷氧基”是指其中一个或多个碳原子被一个或多个卤素原子取代的低级烷氧基。
本文所用的术语“羟基烷基”表示其中一至三个位于不同碳原子上的氢原子被羟基替代的如本文所定义的烷基。
本文所用的术语“烷基磺酰基”和“芳基磺酰基”是指式-S(＝O)2R的基团，其中R分别是烷基或芳基并且烷基和芳基如本文所定义。本文所用的术语“杂烷基磺酰基”表示其中R是本文所定义的“杂烷基”的式-S(＝O)2R的基团。
本文所用的术语“烷基磺酰基氨基”和“芳基磺酰基氨基”是指式-NR'S(＝O)2R的基团，其中R分别是烷基或芳基，R'是氢或C1-3烷基，且烷基和芳基如本文所定义。
本文所用的术语“环烷基”是指包含3至8个碳原子的饱和碳环，即，环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基或环辛基。本文所用的“C3-7环烷基”是指在碳环中包含3至7个碳的环烷基。
本文所用的术语羧基-烷基是指其中一个氢原子被羧基替代的烷基部分，应当清楚的是，该杂烷基通过碳原子来进行连接。术语“羧基”是指–CO2H部分。
本文所用的术语“杂芳基”或“杂芳族的”意指一种具有至少一个芳族环或部分不饱和的环、每个环包含4至8个原子的混有一个或多个N、O或S杂原子、其余的环原子为碳的5至12个环原子的单环或二环基团，应当清楚的是，该杂芳基的连接点位于芳族环或部分不饱和环上。如本领域技术人员众所周知的那样，杂芳基环比其全碳的类似物的芳族特性低。因此，对于本发明的目的而言，杂芳基仅需要具有一定程度的芳族特性。杂芳基部分的实例包括具有5至6个环原子和1至3个杂原子的单环的芳族杂环，非限制性地包括吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、嗪基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、唑基、4,5-二氢-唑基、5,6-二氢-4H-[1,3]唑基、异唑、噻唑、异噻唑、三唑啉、噻二唑和oxadiaxoline，它们可任选地被一个或多个，优选一或两个选自羟基、氰基、烷基、烷氧基、硫代、低级卤代烷氧基、烷硫基、卤代、低级卤代烷基、烷基亚硫酰基、烷基磺酰基、卤素、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、氨基烷基、烷基氨基烷基和二烷基氨基烷基、硝基、烷氧基羰基和氨基甲酰基、烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、芳基氨基甲酰基、烷基羰基氨基和芳基羰基氨基的取代基取代。二环部分的实例非限制性地包括喹啉基、异喹啉基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并唑、苯并异唑、苯并噻唑、萘啶基、5,6,7,8-四氢-[1,6]萘啶基和苯并异噻唑。二环部分可任选地在任何一个环上被取代，但连接点位于包含杂原子的环上。
除非另外指明，否则本文所用的术语“杂环基”、“杂环烷基”或“杂环”表示由每环3至8个原子的一个或多个环、优选一至两个环(包括螺环环系)组成的混有一个或多个环杂原子(选自N、O或S(O)0-2)的单价饱和环状基团，其可任选地独立地被一个或多个、优选一或两个选自羟基、氧代、氰基、低级烷基、低级烷氧基、低级卤代烷氧基、烷硫基、卤素、低级卤代烷基、羟基烷基、硝基、烷氧基羰基、氨基、烷基氨基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、烷基氨基磺酰基、芳基氨基磺酰基、烷基磺酰基氨基、芳基磺酰基氨基、烷基氨基羰基、芳基氨基羰基、烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、以及其离子形式的取代基所取代。杂环基团的实例非限制性地包括吗啉基、哌嗪基、哌啶基、氮杂环丁烷基、吡咯烷基、六氢氮杂环庚三烯基、氧杂环丁烷基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、唑烷基、噻唑烷基、异唑烷基、四氢吡喃基、硫代吗啉基、奎宁环基和咪唑啉基、以及其离子形式。其实例还可以是二环，例如3,8-二氮杂-二环[3.2.1]辛烷、2,5-二氮杂-二环[2.2.2]辛烷或八氢-吡嗪并[2,1-c][1,4]嗪。
HCV NS5A的抑制剂
本申请提供了式I-III的化合物或其可药用的盐
其中:
各A独立地选自
各R1和R2独立地选自H、低级烷基或芳基；
各R3独立地选自H、低级烷基或C(＝O)OR4；
R4是低级烷基；
各X独立地选自H和Cl；和
各Y1和Y2独立地选自H或F。
本申请提供了其中A是联苯基的式I-III的化合物。
本申请提供了其中X是H的式I-III的化合物。
本申请提供了其中X是Cl的式I-III的化合物。
本申请提供了其中X是H且A是联苯基的式I-III的化合物。
本申请提供了其中X是Cl且A是联苯基的式I-III的化合物。
本申请提供了其中各R2是H的式I-III的化合物。
本申请提供了其中各R3是C(＝O)OCH3的式I-III的化合物。
本申请提供了其中各R2是H且各R3是C(＝O)OCH3的式I-III的化合物。
本申请提供了其中X是H，A是联苯基，各R2是H，且各R3是C(＝O)OCH3的式I-III的化合物。
本申请提供了其中R是甲基的式I-III的化合物。
本申请提供了其中X是H，A是联苯基，各R2是H，且各R3是C(＝O)OCH3的式I-III的化合物。
本申请提供了其中R1是异丙基的式I-III的化合物。
本申请提供了其中两个R1都是异丙基的式III化合物。
本申请提供了其中一个R1是异丙基且另一个是苯基的式III化合物。
本申请提供了其中两个R1都是苯基的式III化合物。
本申请提供了其中X是H，A是联苯基，各R2是H，各R3是C(＝O)OCH3且R1是异丙基的式I-III的化合物。
本申请提供了其中Y1是H的式I-III的化合物。
本申请提供了其中X是H，A是联苯基，各R2是H，各R3是C(＝O)OCH3，Y1是H，且R1是异丙基的式I-III的化合物。
本申请提供了其中Y2是H的式I-III的化合物。
本申请提供了其中X是H，A是联苯基，各R2是H，各R3是C(＝O)OCH3，Y1是H，Y2是H，且R1是异丙基的式I-III的化合物。
本申请提供了其中Y1是F的式I-III的化合物。
本申请提供了其中X是H，A是联苯基，各R2是H，各R3是C(＝O)OCH3，Y1是F，且R1是异丙基的式I-III的化合物。
本申请提供了其中X是H，A是联苯基，各R2是H，各R3是C(＝O)OCH3，Y1是F，Y2是H，且R1是异丙基的式I-III的化合物。
本申请提供了其中Y2是F的式I-III的化合物。
本申请提供了其中X是H，A是联苯基，各R2是H，各R3是C(＝O)OCH3，Y1是F，Y2是F，且R1是异丙基的式I-III的化合物。
本申请提供了选自下列的化合物:
{(2S,5S)-2-[(S)-2-(4'-{2-[(S)-1-((S)-2-甲氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-吡咯烷-2-基]-3H-咪唑-4-基}-联苯-4-基氨基甲酰基)-吡咯烷-1-羰基]-4-氧代-1,2,4,5,6,7-六氢-氮杂环庚三烯并[3,2,1-hi]吲哚-5-基}-氨基甲酸甲酯；
{(4S,7S)-4-[(S)-2-(4'-{2-[(S)-1-((S)-2-甲氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-吡咯烷-2-基]-3H-咪唑-4-基}-联苯-4-基氨基甲酰基)-吡咯烷-1-羰基]-6,10-二氧代-八氢-哒嗪并[1,2-a][1,2]二氮杂环庚三烯-7-基}-氨基甲酸甲酯；
{(2S,5S)-2-[(S)-2-(4'-{2-[(S)-1-((S)-2-甲氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-4,4-二氟吡咯烷-2-基]-3H-咪唑-4-基}-联苯-4-基氨基甲酰基)-吡咯烷-1-羰基]-4-氧代-1,2,4,5,6,7-六氢-氮杂环庚三烯并[3,2,1-hi]吲哚-5-基}-氨基甲酸甲酯；和
{(2S,5S)-2-[(S)-2-(4'-{5-氯-2-[(S)-1-((S)-2-甲氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-吡咯烷-2-基]-3H-咪唑-4-基}-联苯-4-基氨基甲酰基)-吡咯烷-1-羰基]-4-氧代-1,2,4,5,6,7-六氢-氮杂环庚三烯并[3,2,1-hi]吲哚-5-基}-氨基甲酸甲酯。
本申请提供了一种治疗丙型肝炎病毒(HCV)感染的方法，其包括给需要其的患者施用治疗有效量的式I-III中任意一种的化合物。
本申请提供了上面的方法，进一步包括施用一种免疫系统调节剂或抑制HCV复制的抗病毒剂或其组合。
本申请提供了上面的方法，其中所述免疫系统调节剂是干扰素或化学衍生的干扰素。
本申请提供了上面的方法，其中所述抗病毒剂选自HCV蛋白酶抑制剂、HCV聚合酶抑制剂、HCV解旋酶抑制剂、HCV引发酶抑制剂、HCV融合抑制剂及其组合。
本申请提供了一种抑制细胞中HCV复制的方法，其包括施用式I-III中任意一种的化合物。
本申请提供了一种包含式I-III中任意一种的化合物和可药用赋形剂的组合物。
本申请提供了式I-III中任意一种的化合物在制备用于治疗HCV的药物中的用途。
本申请提供了如本文所述的化合物、组合物或方法。
化合物
在下表中提供了本发明所包括的在本发明范围内的代表性化合物的实例。以下所提供的这些实施例和制备例使得本领域技术人员能够更清楚地理解和实施本发明。不应将它们理解为对本发明范围的限制，它们仅仅是本发明的说明性和代表性的实例。
本申请所用的命名法通常是基于AUTONOMTM4.0版，一种用于生成IUPAC系统命名的Beilstein Institute计算机化系统。如果所画的结构和命名给出的结构存在不一致时，以所画的结构为重。此外，如果结构式或结构式的一部分的立体化学未用例如粗线或虚线指明时，结构式或结构式的一部分应理解为包括其所有的立体异构体。
表I描述了通式I-III的化合物的一些实例。
表I.
合成
一般流程
其中A可独立地选自
各R1和R2可独立地选自H、低级烷基或芳基，各R3可独立地选自H、低级烷基或C(＝O)OR4，R4可以是低级烷基，各X可独立地选自H和Cl且各Y1和Y2可独立地选自H或F的如本文所述的式I-III的化合物通常可以根据下面所画和描述的一般流程来进行合成。
其中位于咪唑上的变量X可以是Cl、咪唑可以是氯代-咪唑部分，A独立地是联苯基、喹啉基、萘基、喹唑啉基或喹喔啉基或之前定义的其它联芳基部分，且结构1和2中的B可以是六氢-哒嗪并[1,2-a][1,2]二氮杂环庚三烯-6,10-二酮或1,2,6,7-四氢-5H-氮杂环庚三烯并[3,2,1-hi]吲哚-4-酮或N-酰基吡咯烷的式I-III的化合物可以由相应的咪唑1，用例如Journal ofMedicinal Chemistry(1986),29(6),1065-80；Journal of the ChemicalSociety,Perkin Transactions1:Organic and Bio-Organic Chemistry(1972-1999)(1983)(4),809-11；Eur.Pat.Appl.(1990)EP365030A119900425；Journal of Heterocyclic Chemistry(1994),31(5),1121-3；PCTInt.Appl.(2007),WO2007070433中所述的咪唑衍生物氯化的标准反应条件来进行制备。(流程1)。
流程2
式1的化合物可以通过标准的肽键形成反应，由胺2和羧酸3的偶联来进行制备。式2的化合物可通过胺基团的去保护，容易地由式4的化合物来进制备。(流程3)。
流程3
式4的化合物可以由式5和6化合物的偶联来进行制备，所得化合物可在溶剂如甲苯中、在醋酸铵的存在进行加热(流程4)。
流程4
式5的化合物可由脯氨酸衍生物开始容易地获得。式6的化合物可得自相应的羧酸，其可由所示一般反应流程(流程5)来进行制备。
流程5
其中“B”是三环的六氢-哒嗪并[1,2-a][1,2]二氮杂环庚三烯-6,10-二酮的式3化合物可以由可商业获得的FMOC-保护的中间体7开始，通过制备式8的中间体来进行制备(流程6)。可以将中间体8与容易获得的进行了适当保护的脯氨酸衍生物进行偶联，从而得到中间体3。
流程6
其中“B”是二环的1,2,6,7-四氢-5H-氮杂环庚三烯并[3,2,1-hi]吲哚-4-酮的式3的化合物可以由9开始(Attwood,M.R等,Journal of the ChemicalSociety,Perkin Transactions1:Organic and Bio-Organic Chemistry(1972-1999)1986,1011-19)，通过将其转化成衍生物10来进行制备，可以通过涉及进行了适当保护的脯氨酸衍生物的标准反应序列将衍生物10转化成式3的化合物(流程7)。其中“B”是N-酰基吡咯烷的式3的化合物可容易地由相应的脯氨酸衍生物获得。
流程7
药物组合物和给药
根据本实施例所述制备用于通过多种途径给药的主题化合物的药物组合物。
口服给药的组合物(A)
将这些成分混合，分装到胶囊中，每粒胶囊含有约100mg；一粒胶囊接近于一个总的日剂量。
口服给药的组合物(B)
将这些成分合并，用溶剂(如甲醇)制粒。然后将该制剂干燥，用适当的压片机制成片剂(含有约20mg活性化合物)。
口服给药的组合物(C)
将这些成分混合，制成用于口服给药的混悬液。
胃肠外制剂(D)
将活性成分溶于一部分注射用水中。然后，在搅拌下加入足量的氯化钠以使该溶液等渗。向该溶液中加入剩余的注射用水至所需重量，用0.2微米滤膜过滤，在无菌条件下进行包装。
剂量和给药:
本发明化合物可以配制在多种口服给药剂型和载体中。口服给药可以是片剂、包衣片、锭剂、硬和软明胶胶囊、溶液、乳剂、糖浆或混悬液的形式。本发明化合物在通过其它给药途径给药时也是有效的，包括连续(静脉内滴注)、局部、胃肠外、肌内、静脉内、皮下、经皮(可以含有渗透增强剂)、颊、鼻、吸入和栓剂给药。优选的给药方式通常是采用方便的日给药方案的口服方式，其可以根据疾病程度和患者对活性成分的响应来调节。
本发明化合物以及它们的可药用盐与一种或多种常规赋形剂、载体或稀释剂一起可以被制成药物组合物和单位剂量的形式。该药物组合物和单位剂量形式可以包含常规比例的常规成分，可以含有或不含另外的活性化合物或成分，并且单位剂量形式可以含有任何适宜的与所采用的预期日剂量范围相称的有效量的活性成分。该药物组合物可以以如下形式应用：用于口服使用的固体，如片剂或填充胶囊、半固体、粉剂、缓释制剂，或液体，例如溶液、混悬液、乳剂、酏剂或填充胶囊；或者供直肠或阴道给药的栓剂；或者供胃肠外使用的无菌可注射溶液。典型的制剂含有约5％至约95％的活性化合物(w/w)。术语“制剂”或“剂型”意欲包括活性化合物的固体和液体制剂，本领域技术人员可以理解，根据靶器官或组织和所需的剂量以及药代动力学参数，活性成分可以存在于不同的制剂中。
本文所用的术语“赋形剂”是指可用于制备药物组合物的化合物，其通常是安全无毒的，既非生物学也非其它方面所不期望的，并且包括对于兽医学用途以及人类药用而言可接受的赋形剂。本发明的化合物可以单独给药，但是通常与一种或多种根据预期给药途径和标准药学实践选择的适宜药用赋形剂、稀释剂或载体一起给药。
“可药用的”是指可以用于制备药用组合物的物质，它们通常是安全、无毒的并且既非生物学也非其它方面所不期望的，并且包括对于兽用和人类药用可接受的物质。
活性成分的“可药用盐”形式还可以赋予活性成分其非盐形式所不存在的所需药代动力学性质，并且甚至可以就其体内治疗活性而言积极地影响活性成分的药效学。措辞化合物的“可药用盐”表示可药用的、并且具备母体化合物的所需药理活性的盐。此类盐包括：(1)与无机酸或有机酸形成的酸加成盐，所述无机酸例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等；所述有机酸例如醋酸、丙酸、己酸、环戊烷丙酸、乙醇酸、丙酮酸、乳酸、丙二酸、琥珀酸、苹果酸、马来酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、3-(4-羟基苯甲酰基)苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、1,2-乙烷-二磺酸、2-羟基乙磺酸、苯磺酸、4-氯苯磺酸、2-萘磺酸、4-甲苯磺酸、樟脑磺酸、4-甲基二环[2.2.2]辛-2-烯-1-甲酸、葡庚糖酸、3-苯基丙酸、三甲基乙酸、叔丁基乙酸、月桂基硫酸、葡糖酸、谷氨酸、羟基萘甲酸、水杨酸、硬脂酸、粘康酸等；或者(2)当母体化合物中存在的酸性质子被金属离子(例如碱金属离子、碱土金属离子或铝离子)替代时形成的盐；或者当与有机碱例如乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、氨基丁三醇、N-甲基葡糖胺等配位时形成的盐。
固体形式制剂包括粉剂、片剂、丸剂、胶囊、扁囊剂、栓剂和可分散颗粒剂。固体载体可以是一种或多种还可以作为稀释剂、矫味剂、增溶剂、润滑剂、助悬剂、粘合剂、防腐剂、片剂崩解剂或包囊材料的物质。在粉剂中，载体通常为细分的固体，其是与细分的活性组分的混合物。在片剂中，活性组分通常与具有所需粘合能力的载体按适宜比例混合并被压制成所需的形状和大小。适宜的载体非限制性地包括碳酸镁、硬脂酸镁、滑石粉、糖、乳糖、果胶、糊精、淀粉、明胶、西黄蓍胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、低熔点蜡、可可脂等。除活性组分外，固体形式的制剂还可以包含着色剂、矫味剂、稳定剂、缓冲剂、人工和天然甜味剂、分散剂、增稠剂、增溶剂等。
液体制剂也适宜于口服给药，包括乳剂、糖浆剂、酏剂、水溶液、水性混悬液。它们包括意欲在临用前转化为液体形式制剂的固体形式制剂。乳剂可以在溶液(例如丙二醇水溶液)中制备，或者可以含有乳化剂，例如卵磷脂、脱水山梨醇单油酸酯或阿拉伯胶。水溶液可以通过将活性组分溶于水中并加入适宜的着色剂、矫味剂、稳定剂和增稠剂来制备。水性混悬液可以通过将细分的活性组分分散在具有粘性材料的水中来制备，所述粘性材料如天然或合成树胶、树脂、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和其它众所周知的助悬剂。
本发明化合物可以被制成胃肠外给药(例如通过注射，例如推注或连续输注)的形式，并且可以以在安瓿、预填充注射器、小体积输液或添加有防腐剂的多剂量容器中的单位剂量形式存在。该组合物可以采取诸如位于油性或水性载体中的混悬液、溶液或乳剂的形式，例如位于含水聚乙二醇中的溶液。油性或非水性载体、稀释剂、溶剂或赋形剂的实例包括丙二醇、聚乙二醇、植物油(例如橄榄油)和可注射的有机酯(例如油酸乙酯)，并且可含有制剂用物质，如防腐剂、润湿剂、乳化剂或助悬剂、稳定剂和/或分散剂。或者，活性成分可以为通过无菌分装被灭菌的固体或者通过将溶液冷冻干燥而得的、用于在临用前用适宜的载体如无菌无热原的水进行复溶的粉末形式。
本发明化合物可以制备成局部给药于表皮的形式如软膏、霜剂或洗剂或者经皮贴剂。软膏和霜剂可以例如采用加有适当的增稠剂和/或凝胶剂的水性或油性基质配制。洗剂可以采用水性或油性基质制备，并且通常还包含一或多种乳化剂、稳定剂、分散剂、助悬剂、增稠剂或着色剂。适用于在口腔内局部给药的制剂包括在矫味基质(通常为蔗糖和阿拉伯胶或西黄蓍胶)中含有活性成分的锭剂；在惰性基质(如明胶和甘油或蔗糖和阿拉伯胶)中含有活性成分的软锭剂；在适当的液体载体中含有活性成分的漱口剂。
本发明的化合物还可被制备成以栓剂形式进行给药。首先，将低熔点蜡(如脂肪酸甘油酯的混合物或可可脂)熔化并将活性成分通过例如搅拌均匀分散。然后将熔化的均匀混合物倾至适宜大小的模具中，冷却并固化。
本发明的化合物可以制备成用于阴道给药的形式。除活性成分以外还含有本领域已知的载体的阴道栓剂、棉塞、霜剂、凝胶剂、糊剂、泡沫剂或喷雾剂是适宜的。
本发明化合物可以制成鼻腔给药的形式。溶液剂或混悬液可以通过常规方法直接应用于鼻腔，例如，采用滴管、吸管或喷雾的形式。该制剂可以是单剂量或多剂量形式。在滴管或吸管的情况下，可以通过给予患者适当的、预定体积的溶液或混悬液来实现。在喷雾的情况下，这可以例如通过计量雾化喷雾泵来实现。
本发明化合物可以制备为气雾剂给药的形式，特别是应用于呼吸道，包括鼻腔内给药。该化合物通常具有较小的粒度，例如5微米或更小的粒度。该粒度可以用本领域已知的方法获得，例如用微粉化获得。活性成分可以在含有适当抛射剂的加压容器中提供，所述抛射剂如氯氟烃类(CFC)，例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷或二氯四氟乙烷或二氧化碳或其它适宜的气体。气雾剂也可以方便地含有表面活性剂如卵磷脂。药物的剂量可以用计量阀控制。或者，活性成分可以以干粉的形式提供，例如化合物在适当的粉末基质如乳糖、淀粉、淀粉衍生物(如羟丙基甲基纤维素)和聚乙烯吡咯烷(PVP)中的粉末混合物。粉末载体将在鼻腔中形成凝胶。粉末组合物可以以单位剂型存在，例如位于例如明胶胶囊或药筒或者泡罩包装中，粉末可以从其中通过吸入器进行给药。
当需要时，可以采用适用于活性成分缓释或控释给药的肠包衣材料制备制剂。例如，可以将本发明化合物配制到经皮或皮下药物传递装置中。当需要化合物缓释并且患者对治疗方案的依从性至关重要时，这些传递系统是有利的。经皮传递系统中的化合物通常附着在皮肤粘着性固体支撑物上。也可以将感兴趣的化合物与渗透促进剂例如氮酮(1-十二基氮杂环庚烷-2-酮)合用。可以通过手术或注射将缓释传递系统皮下插入到皮下层。皮下植入物将化合物包封在脂溶性膜例如硅橡胶或者生物可降解聚合物如聚乳酸中。
在Remington：The Science and Practice of Pharmacy1995.E.W.Martin编辑,Mack Publishing Company,第19版,Easton,Pennsylvania中对适宜的制剂以及药物载体、稀释剂和赋形剂进行了描述。制剂领域技术人员可以在说明书的教导范围内改变制剂，从而提供大量用于特定给药途径且不会使得本发明的组合物不稳定或者损害它们的治疗活性的制剂。
为了使本发明化合物在水或其它载体中具有更大的溶解性而对其进行的修饰可以容易地通过较小的修饰(成盐、酯化等)来完成，这些完全在本领域的普通技能范围内。同样完全在本领域普通技能范围内的是改变特定化合物的给药途径和剂量方案以便控制本发明化合物的药代动力学，从而在患者中达到最大的有益效果。
本文所用的术语“治疗有效量”是指减轻个体疾病症状所需的量。剂量在各具体病例中可以根据个体需要进行调节。该剂量可以在较宽范围内根据各种因素进行改变，例如所治疗疾病的严重性、患者的年龄与一般健康状况、正用于治疗患者的其它药物、给药途径和形式以及参与的医务人员的偏爱与经验。就口服给药而言，在单一疗法和/或在组合疗法中，约0.01至约1000mg/kg体重/天的日剂量应当是适当的。优选的日剂量为约0.1至约500mg/kg体重/天，更优选为0.1至约100mg/kg体重/天，最优选1.0至约10mg/kg体重/天。因而，对于70kg的人的给药而言，剂量范围将为约7mg至0.7g/天。日剂量可以以单一剂量或者分剂量形式进行给药，通常每天1至5次剂量。一般而言，以低于化合物的最佳剂量的较小剂量开始治疗。然后，以较小增量逐渐增加剂量，直至达到个体患者的最佳效果。普通技术人员在治疗本文所述疾病时，无需过多的实验，根据个人的知识、经验以及本申请的公开内容即能够确定本发明化合物对于特定疾病和患者而言的治疗有效量。
药物制剂优选为单位剂型。在该类形式中，制剂被细分为包含适宜量活性组分的单位剂量。该单位剂型可以是进行了包装的制剂、包含离散数量制剂的包装如进行了包装的片剂、胶囊和位于小瓶或安瓿中的粉剂。单位剂型也可以是胶囊、片剂、扁囊或锭剂本身，或者其可以是适宜数量的包装形式的这些形式中的任何一种。
适应症和治疗方法
适应症
本发明的化合物以及其异构形式和可药用盐可用于治疗和预防HCV感染。
本申请提供了一种治疗丙型肝炎病毒(HCV)感染的方法，其包括给需要其的患者施用治疗有效量的式I-IIII中任意一种的化合物。
本申请提供了一种抑制细胞中HCV复制的方法，其包括施用式I-IIII中任意一种的化合物。
联合治疗
本发明的化合物及其异构形式和可药用盐可单独或者与靶向于HCV生命周期中涉及的病毒或细胞元素的其它化合物联合用于治疗和预防HCV感染。可用于本发明的化合物类别非限制性地包括所有类别的HCV抗病毒剂。
对于联合治疗而言，可用于与本发明化合物联合使用的活性剂的机理类型包括例如HCV聚合酶的核苷和非-核苷抑制剂、蛋白酶抑制剂、解旋酶抑制剂、NS4B抑制剂和功能性抑制内部核糖体进入位点(IRES)的药学活性剂以及抑制HCV细胞附着或病毒进入、HCV RNA翻译、HCV RNA转录、复制或HCV成熟、装配或病毒释放的其它药物。这些类别中的可用于本发明的具体化合物非限制性地包括大环、杂环和线型HCV蛋白酶抑制剂如特拉普韦(VX-950)、波西普韦(SCH-503034)、纳拉普韦(narlaprevir)(SCH-900518)、ITMN-191(R-7227)、TMC-435350(a.k.a.TMC-435)、MK-7009、BI-201335、BI-2061(西鲁普韦(ciluprevir))、BMS-650032、ACH-1625、ACH-1095(HCV NS4A蛋白酶辅因子抑制剂)、VX-500、VX-813、PHX-1766、PHX2054、IDX-136、IDX-316、ABT-450EP-013420(和同类物质)和VBY-376；可用于本发明的核苷类HCV聚合酶(复制酶)抑制剂非限制性地包括R7128、PSI-7851、IDX-184、IDX-102、R1479、UNX-08189、PSI-6130、PSI-938和PSI-879以及各种其它核苷和核苷类似物和HCV抑制剂，包括(但不限于)以2'-C-甲基修饰的核苷(酸)、4'-氮杂修饰的核苷(酸)和7'-去氮杂修饰的核苷(酸)形式衍生出来的那些物质。可用于本发明的非核苷类HCV聚合酶(复制酶)抑制剂非限制性地包括HCV-796、HCV-371、VCH-759、VCH-916、VCH-222、ANA-598、MK-3281、ABT-333、ABT-072、PF-00868554、BI-207127、GS-9190、A-837093、JKT-109、GL-59728和GL-60667。
此外，本发明化合物还可以与下列物质联合：环菲林(cyclophyllin)和亲免素(immunophyllin)拮抗剂(例如但不限于，DEBIO化合物、NM-811以及环孢菌素及其衍生物)、激酶抑制剂、热休克蛋白抑制剂(例如，HSP90和HSP70)、其它免疫调节剂，非限制性地包括干扰素(-α、-β、-ω、-γ、-λ或合成的)如Intron A、Roferon-A、Canferon-A300、Advaferon、Infergen、Humoferon、Sumiferon MP、Alfaferone、IFN-β、Feron等；聚乙二醇衍生的(PEG化)干扰素化合物，如PEG干扰素-α-2a(Pegasys)、PEG干扰素-α-2b(PEGIntron)、PEG化IFN-α-con1等；干扰素化合物的长效制剂和衍生物如白蛋白-融合的干扰素、Albuferon、Locteron,等；使用各类受控传递系统的干扰素(例如，ITCA-638，由DUROS皮下传递系统传递的ω-干扰素)；刺激细胞中干扰素合成的化合物，如雷西莫特等；白介素类；增强1型辅助T细胞响应的化合物，如SCV-07等；TOLL-样受体激动剂如CpG-10101(actilon)、isotorabine、ANA773等；胸腺素α-1；ANA-245和ANA-246；组胺二盐酸盐；丙帕锗(propagermanium)；Tetrachlorodecaoxide；安普利近；IMP-321；KRN-7000；抗体,如civacir、XTL-6865等以及预防和治疗性疫苗如InnoVac C、HCV E1E2/MF59等。此外，可通过施用有效量TNF-α拮抗剂来增强涉及施用NS5A抑制剂、I型干扰素受体激动剂(例如，IFN-α)和II型干扰素受体激动剂(例如，IFN-γ)的上述方法中的任何一种。适用于该类联合治疗的非限制的TNF-α拮抗剂的例子包括ENBREL、REMICADE和HUMIRA。
此外，本发明化合物也可与抗原虫药和认为可有效治疗HCV感染的其它抗病毒剂、例如但不限于前药硝唑尼特联用。硝唑尼特可以以与本发明化合物联合的活性剂以及与用于治疗HCV感染的其它活性剂如peg干扰素α-2a和利巴韦林联合的活性剂的形式进行应用。
本发明化合物还可以与下列物质一起使用：干扰素和PEG化干扰素的其它形式、利巴韦林或其类似物(例如，tarabavarin、levoviron)、microRNA、小干扰RNA化合物(例如，SIRPLEX-140-N等)、核苷酸或核苷类似物、免疫球蛋白、肝脏保护剂、抗炎剂和其它NS5A抑制剂。HCV生命周期的其它靶点的抑制剂包括NS3解旋酶抑制剂；NS4A辅因子抑制剂；反义寡核苷酸抑制剂,如ISIS-14803、AVI-4065等；载体编码的短发卡RNA(shRNA)；HCV特异性核糖酶如heptazyme、RPI、13919等；进入抑制剂如HepeX-C、HuMax-HepC等；α葡糖苷酶抑制剂如西戈斯韦、UT-231B等；KPE-02003002和BIVN401以及IMPDH抑制剂。其它示例性HCV抑制剂化合物包括在下面公开物中公开的那些化合物:US专利号5,807,876；6,498,178；6,344,465和6,054,472；PCT专利申请公开号WO97/40028；WO98/40381；WO00/56331,WO02/04425；WO03/007945；WO03/010141；WO03/000254；WO01/32153；WO00/06529；WO00/18231；WO00/10573；WO00/13708；WO01/85172；WO03/037893；WO03/037894；WO03/037895；WO02/100851；WO02/100846；WO99/01582；WO00/09543；WO02/18369；WO98/17679,WO00/056331；WO98/22496；WO99/07734；WO05/073216、WO05/073195和WO08/021927。
此外，例如利巴韦林和干扰素的组合可以以与至少一种本发明化合物一起使用的多重联合治疗的形式进行施用。本发明并不限于上述类型的化合物，而是考虑已知的和新化合物以及生物活性剂的组合。本发明的联合治疗还包括本发明化合物与本发明其它化合物或除本发明化合物外的其它化合物的任何化学可相容的组合，只要该组合不会消除本发明化合物的抗病毒活性或该药物组合物本身的抗病毒活性即可。
组合治疗可以是顺序进行的，即首先用一种活性剂来进行治疗，然后使用第二种活性剂来进行治疗(例如，在各治疗包含不同本发明化合物的情况中，或者在一种治疗包含本发明化合物而另一种治疗包含一种或多种生物学活性剂的情况中)，或者，可以同时用两种活性剂来进行治疗(同时的)。顺序治疗在第一种治疗结束后、第二种治疗开始前，可以包括一段合理的时间。用两种活性剂同时进行治疗可以以相同的日剂量或分开的剂量进行。联合治疗不限于两种活性剂，可以包括三种或更多种活性剂。用于同时或顺序联合治疗的剂量都将取决于联合治疗组分的吸收、分布、代谢和排泄速率以及本领域技术人员已知的其它因素。剂量值还将根据所缓解情况的严重程度来变化。应进一步理解的是，对于任何特定个体而言，可以根据个体的需要和施用该联合治疗或监督该联合治疗的施用的本领域技术人员的判断，随着时间的进行调整具体的剂量方案和时间表。
本申请提供了一种治疗丙型肝炎病毒(HCV)感染的方法，其包括给需要其的患者施用治疗有效量的式I-III中任意一种的化合物。
本申请提供了上面的方法，进一步包括施用一种免疫系统调节剂或抑制HCV复制的抗病毒剂、或其组合。
本申请提供了上面的方法，其中所述免疫系统调节剂是干扰素或进行了化学衍生的干扰素。
本申请提供了上面的方法，其中所述抗病毒剂选自HCV蛋白酶抑制剂、HCV聚合酶抑制剂、HCV解旋酶抑制剂、HCV引发酶抑制剂、HCV融合抑制剂、及其组合。
实施例
缩写
常用的缩写包括:乙酰基(Ac)、偶氮二异丁腈(AIBN)、大气压(Atm)、9-硼杂二环[3.3.1]壬烷(9-BBN或BBN)、2,2'-双(二苯基膦基)-1,1'-联萘(BINAP)、叔-丁氧基羰基(Boc)、二-叔-丁基焦碳酸酯或boc酐(BOC2O)、苄基(Bn)、丁基(Bu)、化学文摘登记号(CASRN)、苄氧基羰基(CBZ或Z)、羰基二咪唑(CDI)、1,4-二氮杂二环[2.2.2]辛烷(DABCO)、三氟化二乙基氨基硫(DAST)、二亚苄基丙酮(dba)、1,5-二氮杂二环[4.3.0]壬-5-烯(DBN)、1,8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯(DBU)、N,N'-二环己基碳二亚胺(DCC)、1,2-二氯乙烷(DCE)、二氯甲烷(DCM)、2,3-二氯-5,6-二氰基-1,4-苯醌(DDQ)、偶氮二甲酸二乙酯(DEAD)、偶氮二甲酸二异丙酯(DIAD)、氢化二-异丁基铝(DIBAL或DIBAL-H)、二-异丙基乙基胺(DIPEA)、N,N-二甲基乙酰胺(DMA)、4-N,N-二甲基氨基吡啶(DMAP)、N,N-二甲基甲酰胺(DMF)、二甲基亚砜(DMSO)、1,1'-二-(二苯基膦基)乙烷(dppe)、1,1'-bis-(二苯基膦基)二茂铁(dppf)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDCI)、2-乙氧基-1-乙氧基羰基-1,2-二氢喹啉(EEDQ)、乙基(Et)、乙酸乙酯(EtOAc)、乙醇(EtOH)、2-乙氧基-2H-喹啉-1-甲酸乙酯(EEDQ)、乙醚(Et2O)、乙基异丙基醚(EtOiPr)、O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N’N’-四甲基脲六氟磷酸盐醋酸(HATU)、醋酸(HOAc)、1-N-羟基苯并三唑(HOBt)、高压液相色谱法(HPLC)、异丙醇(IPA)、异丙基氯化镁(iPrMgCl)、六甲基二硅烷胺(HMDS)、液相色谱-质谱(LCMS)、六甲基二硅烷胺化锂(LiHMDS)、间-氯过氧苯甲酸(m-CPBA)、甲醇(MeOH)、熔点(mp)、MeSO2-(甲磺酰基或Ms)、甲基(Me)、乙腈(MeCN)、间-氯过苯甲酸(MCPBA)、质谱(ms)、甲基叔-丁基醚(MTBE)、甲基四氢呋喃(MeTHF)、N-溴琥珀酰亚胺(NBS)、正-丁基锂(nBuLi)、N-羧基酐(NCA)、N-氯琥珀酰亚胺(NCS)、N-甲基吗啉(NMM)、N-甲基吡咯烷酮(NMP)、吡啶氯铬酸盐(PCC)、二氯-((双-二苯基膦基)二茂铁基)钯(II)(Pd(dppf)Cl2)、醋酸钯(II)(Pd(OAc)2)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(Pd2(dba)3)、吡啶重铬酸盐(PDC)、苯基(Ph)、丙基(Pr)、异-丙基(i-Pr)、磅/平方英寸(psi)、吡啶(pyr)、1,2,3,4,5-五苯基-1'-(二-叔-丁基膦基)二茂铁(Q-Phos)、室温(环境温度、rt或RT)、仲-丁基锂(sBuLi)、叔-丁基二甲基甲硅烷基或叔-BuMe2Si(TBDMS)、氟化四正丁基铵(TBAF)、三乙胺(TEA或Et3N)、2,2,6,6-四甲基哌啶1-氧基(TEMPO)、三氟甲磺酸盐或CF3SO2-(Tf)、三氟醋酸(TFA)、1,1'-二-2,2,6,6-四甲基庚烷-2,6-二酮(TMHD)、O-苯并三唑-1-基-N,N,N',N'-四甲基脲四氟磷酸盐(TBTU)、薄层色谱法(TLC)、四氢呋喃(THF)、三甲基甲硅烷基或Me3Si(TMS)、对-甲苯磺酸单水合物(TsOH或pTsOH)、4-Me-C6H4SO2-或甲苯磺酰基(Ts)和N-尿烷-N-羧基酐(UNCA)。当与烷基部分一起使用时，包括前缀正(n)、异(i-)、仲(sec-)、叔(tert-)和新(neo)在内的常规命名法具有其常规含义。(J.Rigaudy和D.P.Klesney,有机化学命名法(Nomenclature in Organic Chemistry),IUPAC1979Pergamon Press,牛津大学)。
一般条件
本发明化合物可以用下面实施例部分所述的说明性合成反应中所述的多种方法来进行制备。
在制备这些化合物时所用的起始材料和试剂通常可容易地从供应商如Aldrich Chemical Co.获得，或者按照文献中所述的操作用本领域技术人员已知的方法来进行制备，所述文献如Fieser and Fieser's Reagents forOrganic Synthesis；Wiley&Sons:纽约,1991,第1-15卷；Rodd'sChemistry of Carbon Compounds,Elsevier Science Publishers,1989,第1-5卷和增刊；和Organic Reactions,Wiley&Sons:纽约,1991,第1-40卷。应当意识到，在实施例部分所示的合成反应流程仅是可由其合成本发明化合物的一些方法的示例，可以对这些合成反应流程进行各种修改，参阅本申请包含的公开内容的本领域技术人员将能意识到这些修改。
如果需要，可以用常规技术对合成反应流程的起始材料和中间体进行分离和纯化，包括但不限于过滤、蒸馏、结晶、色谱法等。可以用包括物理常数和光谱数据在内的常规手段对该类物质进行定性。
除非特别作出相反说明，否则本文所述的反应通常是在惰性气氛下、在大气压下、在约-78℃至约150℃，通常约0℃至约125℃，更通常和方便地在约室温(或环境温度)，例如约20℃的反应温度下进行的。
本发明化合物上的各种取代基可以存在于起始化合物中、被加入到任何一种中间体上或者在终产物形成后用已知的取代方法或转化反应加入。如果取代基本身有反应性，则可以用本领域已知的技术对取代基本身进行保护。各种保护基团是现有技术中已知的，且都可以被使用。在“有机合成中的保护基团(Protective Groups in Organic Synthesis)”，Green等,JohnWiley和Sons,1999中可以找到许多可能基团的实例。例如，可以通过硝化来引入硝基，并且硝基可被转换成其它基团，例如通过还原被转换成氨基，通过氨基的重氮化和用卤素替代重氮基来引入卤素。可以通过Friedel-Crafts酰化来引入酰基。然后，可以用各种方法将酰基转换成相应的烷基，所述方法包括Wolff-Kishner还原和Clemmenson还原。可以将氨基烷基化从而形成单-和二-烷基氨基；可以将巯基和羟基烷基化，从而形成相应的醚。可以用本领域已知的氧化剂对伯醇进行氧化从而形成羧酸或醛，并且可以将仲醇氧化形成酮。因此，可以用取代或变更反应来在包括分离产物在内的起始材料、中间体或终产物分子中提供各种取代基。
制备实施例
实施例1
{(2S,5S)-2-[(S)-2-(4'-{2-[(S)-1-((S)-2-甲氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-吡咯烷-2-基]-3H-咪唑-4-基}-联苯-4-基氨基甲酰基)-吡咯烷-1-羰基]-4-氧代-1,2,4,5,6,7-六氢-氮杂环庚三烯并[3,2,1-hi]吲哚-5-基}-氨基甲酸甲酯
将N,N’-二异丙基乙基胺(3.60g,27.90mmol)在室温下滴加到(S)-1-(叔-丁氧基羰基)吡咯烷-2-甲酸(2.00g,9.29mmol)、4-溴苯胺(1.60g,9.29mmol)、HATU(3.53g,9.29mmol)和DMF(15ml)的多相混合物中。在完全加入后，将该反应在室温下搅拌16小时。将该反应混合物用乙酸乙酯稀释并用水、1N盐酸、饱和碳酸氢钠溶液、饱和氯化钠溶液洗涤并用硫酸镁干燥、过滤、浓缩，从而以米白色固体形式得到(S)-叔-丁基2-(4-溴苯基氨基甲酰基)吡咯烷-1-甲酸酯，(3.40g,99％):ESI-LRMS m/e计算值:C16H21BrN2O3[M+]369，实测值：370[M+H+]。
将(S)-叔-丁基2-(4-溴苯基氨基甲酰基)吡咯烷-1-甲酸酯(3.40g,9.21mmol)和4.0M HCl/二恶烷溶液(15ml)在甲醇(20ml)中的混合物在室温下搅拌4小时。将该反应真空浓缩，以淡褐色固体形式得到(S)-N-(4-溴苯基)吡咯烷-2-甲酰胺盐酸盐(2.78g,99％):ESI-LRMS m/e计算值:C11H13BrN2O HCl[M+]305.5，实测值：270[M+H+](游离碱)。
将N,N’-二异丙基乙基胺(248mg,1.92mmol)在室温下滴加到(2S,5S)-5-(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基氨基)-4-氧代-1,2,4,5,6,7-六氢氮杂环庚三烯并[3,2,1-hi]吲哚-2-甲酸(300mg,640mmol)、(S)-N-(4-溴苯基)吡咯烷-2-甲酰胺盐酸盐(196mg,640mmol)、HATU(243mg,640mmol)和DMF(15ml)的多相混合物中。在完全加入后，将该反应在室温下搅拌16小时。将该反应混合物用乙酸乙酯稀释，用水、1N盐酸、饱和碳酸氢钠溶液、饱和氯化钠溶液洗涤并用硫酸镁干燥、过滤、浓缩，以淡褐色固体形式得到(9H-芴-9-基)甲基(2S,5S)-2-((S)-2-(4-溴苯基氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)-4-氧代-1,2,4,5,6,7-六氢氮杂环庚三烯并[3,2,1-hi]吲哚-5-基氨基甲酸酯(438mg,95％):ESI-LRMS m/e计算值:C39H35BrN4O5[M+]719，实测值：720[M+H+]。
将(9H-芴-9-基)甲基(2S,5S)-2-((S)-2-(4-溴苯基氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)-4-氧代-1,2,4,5,6,7-六氢氮杂环庚三烯并[3,2,1-hi]吲哚-5-基氨基甲酸酯在20％哌啶/DMF(10ml)中的溶液在室温下搅拌1小时。将该反应真空浓缩，从而以黄色固体形式得到(S)-1-((2S,5S)-5-氨基-4-氧代-1,2,4,5,6,7-六氢氮杂环庚三烯并[3,2,1-hi]吲哚-2-羰基)-N-(4-溴苯基)吡咯烷-2-甲酰胺(170mg,57％):ESI-LRMS m/e计算值:C24H25BrN4O3[M+]497，实测值：498[M+H+]。
向冰冷的(S)-1-((2S,5S)-5-氨基-4-氧代-1,2,4,5,6,7-六氢氮杂环庚三烯并[3,2,1-hi]吲哚-2-羰基)-N-(4-溴苯基)吡咯烷-2-甲酰胺(160mg,322mmol)在DMF(10ml)中的溶液中加入碳酸钠(41mg,386mmol)和氯甲酸甲酯(33mg,354mmol)。在完全加入后，除去冰浴并将该反应在室温下搅拌1小时。将该反应混合物用乙酸乙酯稀释，用水和饱和氯化钠溶液洗涤并用硫酸镁干燥、过滤并浓缩。将所得粗品用ISCO闪柱色谱进行纯化(Teledyne IscoRediSep Flash Column40g；(0％至100％乙酸乙酯/己烷)，以白色固体形式得到(2S,5S)-2-((S)-2-(4-溴苯基氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)-4-氧代-1,2,4,5,6,7-六氢氮杂环庚三烯并[3,2,1-hi]吲哚-5-基氨基甲酸甲酯(64mg,36％):ESI-LRMS m/e计算值：C26H27BrN4O5[M+]555，实测值：556[M+H+]。
在一根密封管中，将1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁-钯(II)二氯化物(26mg,36μmol)加入到(2S,5S)-2-((S)-2-(4-溴苯基氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)-4-氧代-1,2,4,5,6,7-六氢氮杂环庚三烯并[3,2,1-hi]吲哚-5-基氨基甲酸甲酯(200mg,360mmol)、(S)-3-甲基-1-氧代-1-((S)-2-(5-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-基)丁烷-2-基氨基甲酸甲酯(179mg,360mmol)和碳酸氢钠(91mg,1.08mmol)在1,2-二甲氧基乙烷(6ml)和水(1ml)的混合物中。将该反应混合物用氮气充溢，封盖并在油浴(80℃)中加热16小时。将该反应混合物浓缩，在20％甲醇/二氯甲烷和水之间进行分配，并用20％甲醇/二氯甲烷对水相进行萃取。将所合并的有机相用饱和氯化钠溶液洗涤并用硫酸镁干燥、过滤并浓缩。将所得粗品用使用50gPolaris C18A柱的反相HPLC进行纯化，用乙腈/水(30％至100％)进行洗脱，从而以白色固体形式得到{(2S,5S)-2-[(S)-2-(4'-{2-[(S)-1-((S)-2-甲氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-吡咯烷-2-基]-3H-咪唑-4-基}-联苯-4-基氨基甲酰基)-吡咯烷-1-羰基]-4-氧代-1,2,4,5,6,7-六氢-氮杂环庚三烯并[3,2,1-hi]吲哚-5-基}-氨基甲酸甲酯(65mg,21％):ESI-LRMS m/e计算值：C46H52N8O8[M+]844，实测值：845[M+H+]；1H NMR(DMSO-d6)d:11.76(br.s.,1H),10.08(br.s.,1H),7.75(d,J＝6.8Hz,2H),7.60-7.70(m,5H),7.43-7.53(m,2H),7.21-7.33(m,1H),6.91-7.15(m,3H),5.32(d,J＝8.0Hz,1H),5.07–5.25(m,1H),4.43-4.75(m.,1H),4.02-4.14(m,1H),3.32-3.80(m,8H),2.89-3.17(m,6H),1.85-2.30(m,12H),0.79-0.96(m,6H)。
实施例2
{(4S,7S)-4-[(S)-2-(4'-{2-[(S)-1-((S)-2-甲氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-吡咯烷-2-基]-3H-咪唑-4-基}-联苯-4-基氨基甲酰基)-吡咯烷-1-羰基]-6,10-二氧代-八氢-哒嗪并[1,2-a][1,2]二氮杂环庚三烯-7-基}-氨基甲酸甲酯
向(1S,9S)-叔-丁基9-(1,3-二氧代异二氢吲哚-2-基)-6,10-二氧代八氢-1H-哒嗪并[1,2-a][1,2]二氮杂环庚三烯-1-甲酸酯(2.00g,4.68mmol)在乙醇(10ml)中的溶液中加入肼(180mg,5.61mmol)。将该反应在室温下搅拌3小时。然后将乙醇和过量的肼真空浓缩并将残余物与乙醇一起共蒸发，从而以白色粉末形式得到(1S,9S)-叔-丁基9-氨基-6,10-二氧代八氢-1H-哒嗪并[1,2-a][1,2]二氮杂环庚三烯-1-甲酸酯(1.63g,100％):ESI-LRMS m/e计算值:C14H23N3O4[M+]297，实测值：298[M+H+]。
向冰冷的(1S,9S)-叔-丁基9-氨基-6,10-二氧代八氢-1H-哒嗪并[1,2-a][1,2]二氮杂环庚三烯-1-甲酸酯(1.50g,5.04mmol)在DMF(15ml)中的溶液中加入碳酸钠(642mg,6.05mmol)，然后加入氯甲酸甲酯(524mg,5.55mmol)。在完全加入后，除去冰浴并将该反应在室温下搅拌2小时。将该反应混合物用乙酸乙酯稀释，用水、2N盐酸溶液、饱和氯化钠溶液洗涤并用硫酸镁干燥，过滤并浓缩，从而以白色固体形式得到(1S,9S)-叔-丁基9-(甲氧基羰基氨基)-6,10-二氧代八氢-1H-哒嗪并[1,2-a][1,2]二氮杂环庚三烯-1-甲酸酯(1.28g,71％):ESI-LRMS m/e计算值:C16H25N3O6[M+]355，实测值：356[M+H+]。
向溶解于二氯甲烷(10ml)中的(1S,9S)-叔-丁基9-(甲氧基羰基氨基)-6,10-二氧代八氢-1H-哒嗪并[1,2-a][1,2]二氮杂环庚三烯-1-甲酸酯(1.25g,3.52mmol)溶液中加入三氟醋酸(10ml)。将该反应在室温下搅拌1小时并真空浓缩。加入甲苯(5ml)并将该反应真空浓缩，从而以白色固体形式得到(1S,9S)-9-(甲氧基羰基氨基)-6,10-二氧代八氢-1H-哒嗪并[1,2-a][1,2]二氮杂环庚三烯-1-甲酸(587mg,68％):ESI-LRMS m/e计算值:C12H17N3O6[M+]299，实测值：300[M+H+]。
将N,N-二异丙基乙基胺(254mg,1.96mmol)在室温下滴加到(S)-N-(4-溴苯基)吡咯烷-2-甲酰胺盐酸盐(200mg,654mmol)、(1S,9S)-9-(甲氧基羰基氨基)-6,10-二氧代八氢-1H-哒嗪并[1,2-a][1,2]二氮杂环庚三烯-1-甲酸(196mg,654mmol)、HATU(249mg,654mmol)和DMF(10ml)的多相混合物中。在完全加入后，将该反应混合物在室温下搅拌16小时。将该反应混合物用乙酸乙酯稀释，用水、1N盐酸、饱和碳酸氢钠溶液、饱和氯化钠溶液洗涤并用硫酸镁干燥，过滤并浓缩，从而以白色固体形式得到(4S,7S)-4-((S)-2-(4-溴苯基氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)-6,10-二氧代八氢-1H-哒嗪并[1,2-a][1,2]二氮杂环庚三烯-7-基氨基甲酸甲酯(150mg,42％):ESI-LRMS m/e计算值:C23H28BrN5O6[M+]550，实测值：551[M+H+]。
在一根密封管中，将1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁-钯(II)二氯化物(20mg,27μmol)加入到(4S,7S)-4-((S)-2-(4-溴苯基氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)-6,10-二氧代八氢-1H-哒嗪并[1,2-a][1,2]二氮杂环庚三烯-7-基氨基甲酸甲酯(150mg,273mmol)、(S)-3-甲基-1-氧代-1-((S)-2-(5-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-基)丁烷-2-基氨基甲酸甲酯(135mg,273mmol)和碳酸氢钠(69mg,818mmol)在1,2-二甲氧基乙烷(6ml)和水(1ml)的混合物中。将该反应混合物用氮气充溢，封盖并在油浴(80℃)中加热16小时。将反应混合物浓缩，在20％甲醇/二氯甲烷和水之间进行分配，并用20％甲醇/二氯甲烷对水相进行萃取。将所合并的有机相用饱和氯化钠溶液洗涤并用硫酸镁干燥，过滤并浓缩。将所得粗品用使用50g Polaris C18A柱的反相HPLC进行纯化，用乙腈/水(30％至100％)进行洗脱，从而以白色固体形式得到{(4S,7S)-4-[(S)-2-(4'-{2-[(S)-1-((S)-2-甲氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-吡咯烷-2-基]-3H-咪唑-4-基}-联苯-4-基氨基甲酰基)-吡咯烷-1-羰基]-6,10-二氧代-八氢-哒嗪并[1,2-a][1,2]二氮杂环庚三烯-7-基}-氨基甲酸甲酯(58mg,25％):ESI-LRMS m/e计算值：C43H53N9O9[M+]839，实测值：840[M+H+]；1H NMR(DMSO-d6)d:11.75(br.s.,1H),10.07(s,1H),7.75(br.s.,2H),7.59-7.66(m,6H),7.40(d,J＝8.0Hz,1H),7.25(d,J＝8.3Hz,1H),5.26(t,J＝5.5Hz,1H),5.08(d,J＝3.5Hz,1H),4.27-4.51(m,4H),4.07(t,J＝8.3Hz,1H),3.60-3.85(m,2H),3.54(s,3H),3.30(s,3H),2.89-3.17(m,2H),1.53-2.35(m,18H),0.87(dd,J＝18.9,6.4Hz,6H)
实施例3
{(2S,5S)-2-[(S)-2-(4'-{2-[(S)-1-((S)-2-甲氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-4,4-二氟吡咯烷-2-基]-3H-咪唑-4-基}-联苯-4-基氨基甲酰基)-吡咯烷-1-羰基]-4-氧代-1,2,4,5,6,7-六氢-氮杂环庚三烯并[3,2,1-hi]吲哚-5-基}-氨基甲酸甲酯
将N,N-二异丙基乙基胺(3.17g,24.5mmol)在室温下滴加到(2S,5S)-5-(甲氧基羰基氨基)-4-氧代-1,2,4,5,6,7-六氢氮杂环庚三烯并[3,2,1-hi]吲哚-2-甲酸(2.49g,8.18mmol)、(S)-N-(4-溴苯基)吡咯烷-2-甲酰胺盐酸盐(2.50g,8.18mmol)、HATU(3.11g,8.18mmol)和DMF(10ml)的多相混合物中。在完全加入后，将该反应混合物在室温下搅拌4小时。将该反应混合物用乙酸乙酯稀释，用水、1N盐酸、饱和碳酸氢钠溶液、饱和氯化钠溶液洗涤并用硫酸镁干燥，过滤并浓缩。将所得粗品用ISCO闪柱色谱进行纯化(Teledyne Isco RediSep Flash Column80g；(0％至100％甲醇/二氯甲烷)，从而以淡褐色固体形式得到(2S,5S)-2-((S)-2-(4-溴苯基氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)-4-氧代-1,2,4,5,6,7-六氢氮杂环庚三烯并[3,2,1-hi]吲哚-5-基氨基甲酸甲酯(3.40g,75％):ESI-LRMS m/e计算值:C26H27BrN4O6[M+]555，实测值：556[M+H+]。
在一根密封管中，将1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁-钯(II)二氯化物(46mg,63μmol)加入到(S)-叔-丁基4,4-二氟-2-(5-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸酯(300mg,631mmol)、(2S,5S)-2-((S)-2-(4-溴苯基氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)-4-氧代-1,2,4,5,6,7-六氢氮杂环庚三烯并[3,2,1-hi]吲哚-5-基氨基甲酸甲酯(351mg,631mmol)和碳酸氢钠(159mg,1.89mmol)在1,2-二甲氧基乙烷(6ml)和水(1ml)中的混合物中。将该反应混合物用氮气充溢，封盖并在油浴(80℃)中加热16小时。将该反应混合物浓缩，在20％甲醇/二氯甲烷和水之间进行分配，并用20％甲醇/二氯甲烷对水相进行萃取。将所合并的有机相用饱和氯化钠溶液洗涤并用硫酸镁干燥，过滤并浓缩。将所得粗品用ISCO闪柱色谱进行纯化(Teledyne Isco RediSep Flash Column40g；(0％至100％甲醇/二氯甲烷)，从而以白色固体形式得到(S)-叔-丁基4,4-二氟-2-(5-(4'-((S)-1-((2S,5S)-5-(甲氧基羰基氨基)-4-氧代-1,2,4,5,6,7-六氢氮杂环庚三烯并[3,2,1-hi]吲哚-2-羰基)吡咯烷-2-氨基甲酰基)联苯-4-基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸酯(150mg,29％):ESI-LRMS m/e计算值:C44H47F2N7O7[M+]823，实测值：824[M+H+]。
将(S)-叔-丁基4,4-二氟-2-(5-(4'-((S)-1-((2S,5S)-5-(甲氧基羰基氨基)-4-氧代-1,2,4,5,6,7-六氢氮杂环庚三烯并[3,2,1-hi]吲哚-2-羰基)吡咯烷-2-氨基甲酰基)联苯-4-基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸酯(150mg,182mmol)和4.0M HCl/二恶烷溶液(10ml)在甲醇(15ml)中的混合物在室温下搅拌3小时。将该反应真空浓缩，从而以淡黄色固体形式得到(2S,5S)-2-((S)-2-(4'-(2-((S)-4,4-二氟吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)联苯-4-基氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)-4-氧代-1,2,4,5,6,7-六氢氮杂环庚三烯并[3,2,1-hi]吲哚-5-基氨基甲酸甲酯盐酸盐(135mg,98％):ESI-LRMS m/e计算值:C39H39F2N7O5HCl[M+]760.5，实测值：724[M+H+](游离碱)。
将N,N-二异丙基乙基胺(69mg,533mmol)在室温下滴加到(2S,5S)-2-((S)-2-(4'-(2-((S)-4,4-二氟吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)联苯-4-基氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)-4-氧代-1,2,4,5,6,7-六氢氮杂环庚三烯并[3,2,1-hi]吲哚-5-基氨基甲酸甲酯盐酸盐(135mg,178mmol)、(S)-2-(甲氧基羰基氨基)-3-甲基丁酸(31mg,178mmol)、HATU(68mg,178mmol)和DMF(5ml)的多相混合物中。在完全加入后，将该反应混合物在室温下搅拌4小时。将反应混合物用乙酸乙酯稀释，用水、1N盐酸、饱和碳酸氢钠溶液、饱和氯化钠溶液洗涤并用硫酸镁干燥，过滤并浓缩。将所得粗品用使用50gPolaris C18A柱的反相HPLC进行纯化，用乙腈/水(30％至100％)进行洗脱，从而以白色固体形式得到{(2S,5S)-2-[(S)-2-(4'-{2-[(S)-1-((S)-2-甲氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-4,4-二氟吡咯烷-2-基]-3H-咪唑-4-基}-联苯-4-基氨基甲酰基)-吡咯烷-1-羰基]-4-氧代-1,2,4,5,6,7-六氢-氮杂环庚三烯并[3,2,1-hi]吲哚-5-基}-氨基甲酸甲酯(42mg,27％):ESI-LRMS m/e计算值:C46H50F2N8O8[M+]880，实测值：881[M+H+]；1H NMR(DMSO-d6)d:11.96(br.s.,1H),10.09(s,1H),7.36-7.81(m,10H),7.12(d,J＝7.0Hz,1H),7.03(d,J＝7.8Hz,1H),6.90-6.98(m,1H),5.23-5.35(m,1H),4.39-4.57(m,2H),4.05-4.29(m,2H),3.93(t,J＝8.3Hz,1H),3.74-3.84(m,1H),3.55(s,6H),2.87-3.17(m,6H),1.82-2.28(m,10H),0.73-0.90(m,6H)
实施例4
{(2S,5S)-2-[(S)-2-(4'-{5-氯-2-[(S)-1-((S)-2-甲氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-吡咯烷-2-基]-3H-咪唑-4-基}-联苯-4-基氨基甲酰基)-吡咯烷-1-羰基]-4-氧代-1,2,4,5,6,7-六氢-氮杂环庚三烯并[3,2,1-hi]吲哚-5-基}-氨基甲酸甲酯
向溶解于DMF(5ml)中的{(2S,5S)-2-[(S)-2-(4'-{2-[(S)-1-((S)-2-甲氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-吡咯烷-2-基]-3H-咪唑-4-基}-联苯-4-基氨基甲酰基)-吡咯烷-1-羰基]-4-氧代-1,2,4,5,6,7-六氢-氮杂环庚三烯并[3,2,1-hi]吲哚-5-基}-氨基甲酸甲酯(200mg,237mmol)溶液中加入N-氯琥珀酰亚胺(38mg,284mmol)。将该反应在50℃下搅拌16小时。将该反应混合物用乙酸乙酯稀释，用水和饱和氯化钠溶液洗涤并用硫酸镁干燥，过滤并浓缩。将所得粗品用ISCO闪柱色谱进行纯化(Teledyne Isco RediSep Flash Column40g；(0％至100％甲醇/二氯甲烷)，从而以米白色固体形式得到{(2S,5S)-2-[(S)-2-(4'-{5-氯-2-[(S)-1-((S)-2-甲氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-吡咯烷-2-基]-3H-咪唑-4-基}-联苯-4-基氨基甲酰基)-吡咯烷-1-羰基]-4-氧代-1,2,4,5,6,7-六氢-氮杂环庚三烯并[3,2,1-hi]吲哚-5-基}-氨基甲酸甲酯(152mg,73％):ESI-LRMS m/e计算值：C46H51ClN8O8[M+]879，实测值：880[M+H+]；1H NMR(DMSO-d6)d:12.55(s,1H),10.12(s,1H),7.74(s,4H),7.64(d,J＝3.0Hz,4H),7.44(dd,J＝16.4,8.2Hz,1H),7.30(d,J＝8.3Hz,1H),7.12(d,J＝7.3Hz,1H),7.03(d,J＝7.5Hz,1H),6.92-6.98(m,1H),6.84(d,J＝8.8Hz,1H),5.32(dd,J＝10.9,2.9Hz,1H),4.95-5.04(m,1H),4.44(dd,J＝8.0,4.5Hz,1H),4.00-4.15(m,2H),3.78(d,J＝5.3Hz,3H),3.58-3.71(m,1H),3.54(d,J＝7.3Hz,7H),2.90-3.18(m,3H),1.88-2.26(m,10H),0.81-0.90(m,6H)
实施例5
((S)-1-{(S)-2-[(S)-2-(4'-{2-[(S)-1-((S)-2-甲氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-吡咯烷-2-基]-3H-咪唑-4-基}-联苯-4-基氨基甲酰基)-吡咯烷-1-羰基]-吡咯烷-1-羰基}-2-甲基-丙基)-氨基甲酸甲酯
在一根密封管中，将1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁-钯(II)二氯化物(30mg,40μmol)加入到(S)-1-((S)-2-((S)-2-(4-溴苯基氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)吡咯烷-1-基)-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基氨基甲酸甲酯(211mg,403mmol)、(S)-3-甲基-1-氧代-1-((S)-2-(5-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-基)丁烷-2-基氨基甲酸甲酯(200mg,403mmol)和碳酸氢钠(102mg,1.21mmol)在1,2-二甲氧基乙烷(6ml)和水(1ml)中的混合物中。将该反应混合物用氮气充溢，封盖并在油浴(80℃)中加热16小时。将该反应混合物浓缩，在20％甲醇/二氯甲烷和水之间进行分配，并用20％甲醇/二氯甲烷对水相进行萃取。将所合并的有机相用饱和氯化钠溶液洗涤并用硫酸镁干燥，过滤并浓缩。将所得粗品用使用50g Polaris C18A柱的反相HPLC进行纯化，用乙腈/水(30％至100％)进行洗脱，从而以米白色固体形式得到((S)-1-{(S)-2-[(S)-2-(4'-{2-[(S)-1-((S)-2-甲氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-吡咯烷-2-基]-3H-咪唑-4-基}-联苯-4-基氨基甲酰基)-吡咯烷-1-羰基]-吡咯烷-1-羰基}-2-甲基-丙基)-氨基甲酸甲酯(83mg,25％):ESI-LRMS m/e计算值：C43H56N8O8[M+]812，实测值：813[M+H+]；1HNMR(DMSO-d6)d:11.70(s,1H),10.30(s,1H),7.65–7.95(m,9H),7.35–7.45(m,2H),5.20–5.30(m,1H),4.55-4.65(m,1H),4.10-4.30(m,3H),3.70–3.85(m,4H),3.60(s,6H),3.30–3.50(m,2H),1.60-2.35(m,14H),0.80–0.95(m,12H)
实施例6
[(S)-1-((S)-2-{5-[4'-({(S)-1-[(S)-1-((R)-2-甲氧基羰基氨基-2-苯基-乙酰基)-吡咯烷-2-羰基]-吡咯烷-2-羰基}-氨基)-联苯-4-基]-1H-咪唑-2-基}-吡咯烷-1-羰基)-2-甲基-丙基]-氨基甲酸甲酯
将碳酸钠(2.10g,19.80mmol)加入到氢氧化钠(1.32g,33.10mmol)和(R)-2-氨基-2-苯基乙酸(5.00g,33.10mmol)在水(25ml)中的溶液中。将该溶液在冰浴上冷却并历经15分钟向其中滴加氯甲酸甲酯(3.44g,36.40mmol)。在完全加入后，除去冰浴并将该反应在室温下搅拌3小时。将该反应混合物用醚洗涤并用浓HCl将水相酸化至pH1-2。将水相用二氯甲烷萃取，用水和饱和氯化钠溶液洗涤并用硫酸镁干燥，过滤，浓缩，从而以白色固体形式得到(R)-2-(甲氧基羰基氨基)-2-苯基乙酸(4.35g,63％):ESI-LRMS m/e计算值:C10H11NO4[M+]209，实测值：210[M+H+]。
将N,N-二异丙基乙基胺(481mg,3.72mmol)在室温下滴加到(S)-N-(4-溴苯基)-1-((S)-吡咯烷-2-羰基)吡咯烷-2-甲酰胺盐酸盐(500mg,1.24mmol)、(R)-2-(甲氧基羰基氨基)-2-苯基乙酸(260mg,1.24mmol)、HATU(472mg,1.24mmol)和DMF(10ml)的多相混合物中。在完全加入后，将该反应混合物在室温下搅拌3小时。将反应混合物用乙酸乙酯稀释，用水、1N盐酸、饱和碳酸氢钠溶液、饱和氯化钠溶液洗涤并用硫酸镁干燥，过滤，浓缩，从而以黄色固体形式得到(R)-2-((S)-2-((S)-2-(4-溴苯基氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)吡咯烷-1-基)-2-氧代-1-苯基乙基氨基甲酸甲酯(640mg,93％):ESI-LRMS m/e计算值:C26H29BrN4O5[M+]557，实测值：558[M+H+]。
在一根密封管中，将1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁-钯(II)二氯化物(30mg,40μmol)加入到(R)-2-((S)-2-((S)-2-(4-溴苯基氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)吡咯烷-1-基)-2-氧代-1-苯基乙基氨基甲酸甲酯(225mg,403mmol)、(S)-3-甲基-1-氧代-1-((S)-2-(5-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-基)丁烷-2-基氨基甲酸甲酯(200mg,403mmol)和碳酸氢钠(102mg,1.21mmol)在1,2-二甲氧基乙烷(6ml)和水(1ml)中的混合物中。将该反应混合物用氮气充溢，封盖并在油浴(80℃)中加热16小时。将反应混合物浓缩，在20％甲醇/二氯甲烷和水之间进行分配，并用20％甲醇/二氯甲烷对水相进行萃取。将所合并的有机相用饱和氯化钠溶液洗涤并用硫酸镁干燥，过滤，浓缩。将所得粗品用使用50g Polaris C18A柱的反相HPLC进行纯化，用乙腈/水(30％至100％)进行洗脱，从而以米白色固体形式得到[(S)-1-((S)-2-{5-[4'-({(S)-1-[(S)-1-((R)-2-甲氧基羰基氨基-2-苯基-乙酰基)-吡咯烷-2-羰基]-吡咯烷-2-羰基}-氨基)-联苯-4-基]-1H-咪唑-2-基}-吡咯烷-1-羰基)-2-甲基-丙基]-氨基甲酸甲酯(120mg,31％):ESI-LRMSm/e计算值：C46H54N8O8[M+]846，实测值：847[M+H+]；1H NMR(DMSO-d6)d:11.70(s,1H),10.30(s,1H),7.25–8.25(m,14H),5.20–5.30(m,2H),4.55-4.65(m,1H),4.10-4.30(m,2H),3.70–3.85(m,5H),3.60(s,6H),3.30–3.50(m,2H),1.60-2.35(m,14H),0.80–0.95(m,6H)
生物学实施例
用复制子荧光素酶报告基因试验测定化合物的HCV GT1b抑制复制子活性
如之前所述的那样，在Roche通过用GT-1b Con1亚基因组双顺反子复制子稳定转染肝瘤细胞系Huh-7来建立2209-23细胞系。在得自R.Bartenschlager(J Virol.2003Mar；77(5):3007-19)的治愈Huh7细胞中建立亚基因组复制子细胞系。通过用H77株中的非结构区域替代GT-1bCon1亚基因组复制子的非结构区域(GT-1b Con1株的NS3蛋白的前75个氨基酸除外)来产生GT-1a H77亚基因组复制子载体pRLuc H771b75S/I(J Virol.200177:5352-59)。在得自R.Bartenschlager的治愈Huh7细胞中建立GT-1a pRLuc H771b75S/I亚基因组复制子细胞系(J Virol.2003Mar；77(5):3007-19)。
将所有的亚基因组复制子细胞系在Dulbecco’s改良的伊格尔培养基(DMEM-GlutamaxTM-I；Invitrogen Cat#10569-010)中进行培养。向该培养基补加10％胎牛血清(Invitrogen Cat#10082-147)、1％青霉素/链霉素(Mediatech Cat#30-002-CI)和500μg/ml G418(Mediatech Cat#30-234-CI)。将细胞在37℃下维持在潮湿的5％CO2气氛中。
将2209-23细胞以每孔5000个细胞的细胞密度涂镀到96孔板(BectonDickinson,Cat#353296)中。将细胞涂镀到90μl Dulbecco’s改良的伊格尔培养基(DMEM-GlutamaxTM-I),(Invitrogen Cat#10569-010)中，该培养基补加有5％胎牛血清(Invitrogen Cat#10082-147)、1％青霉素/链霉素(Mediatech Cat#30-002-CI)。将pRluc H771b75S/I细胞以3000个细胞/孔涂镀到96-孔板中在90μl的终体积中包含5％FBS和1％青霉素/链霉素的DMEM-GlutamaxTM-I中。使这些细胞在37℃和5％CO2下平衡24小时，然后加入化合物。以10μl体积以3倍稀释液的形式在涂镀24小时后加入化合物(或作为对照的培养基)，DMSO的终浓度为1％。在加入化合物后72小时，用Renilla荧光素酶试验系统(Promega,cat#E2820)对Renilla荧光素酶报告基因信号进行读数。EC50值被定义为在其下观察到与不存在化合物的对照样品相比，Renilla荧光素酶报告基因水平降低50％的化合物浓度，其是通过化合物剂量-响应数据的非线性拟合来测定的。如果最大抑制百分比低于90％且高于70％，则EC50是近似值。
利用HCV GT1b复制子细胞系测定来检测化合物的细胞毒性
将WST12209-23细胞以每孔5000个细胞的细胞密度涂镀到用于进行细胞活力研究的透明的平底96孔板(Becton Dickinson,Cat#353075)中。用WST-1细胞增殖试验(Roche Diagnostic,Cat#11644807001)来测定细胞活力。试验板的格式被设定为与复制子试验中相同。在与化合物培养3天后，按照制造商的说明向各孔中加入10μl WST-1试剂并在37℃和5％CO2下培养2小时。用MRX Revelation微量滴定板读数器(Lab System)测定450nm下的吸收读数(参考滤光器位于650nm)。CC50值被定义为与不存在化合物的未处理对照相比，使细胞活力降低50％所需的化合物浓度，其是通过化合物剂量-响应数据的非线性拟合来测定的。在下面的表II中可以找到代表性的试验数据:
表II.
出于清楚和理解的目的，已经通过说明和实施例的方式对本发明进行了详细描述。对本领域技术人员而言显而易见的是，可以在所附权利要求所要求保护的范围内进行改变和变通。因此，可以理解，上述说明是说明性的而非限制性的。本发明的范围因此不应当取决于上述说明，而应当由随后所附的权利要求以及这些权利要求的等同方式的全部范围来确定。
本申请所引用的所有专利、专利申请和出版物都被全部引入本文作为参考用于所有的目的，其程度如同每一篇专利、专利申请或出版物被单独指明引入本文作为参考一样。

Claims (17)

1.式I-III的化合物或其可药用的盐
其中:
各A独立地选自
各R1和R2独立地选自H、低级烷基或芳基；
各R3独立地选自H、低级烷基或C(＝O)OR4；
R4是低级烷基；
各X独立地选自H和Cl；并且
各Y1和Y2独立地选自H或F。
2.权利要求1的化合物，其中X是H，各R2是H，并且各R3是C(＝O)OCH3。
3.权利要求2的化合物，其中A是联苯基。
4.权利要求3的化合物，其中R1是异丙基。
5.权利要求4的化合物，其中Y1是H。
6.权利要求5的化合物，其中Y2是H。
7.权利要求4的化合物，其中Y1是F。
8.权利要求7的化合物，其中Y2是H。
9.权利要求4的化合物，其中Y1是F。
10.权利要求9的化合物，其中Y2是F。
11.选自下列的化合物:
{(2S,5S)-2-[(S)-2-(4'-{2-[(S)-1-((S)-2-甲氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-吡咯烷-2-基]-3H-咪唑-4-基}-联苯-4-基氨基甲酰基)-吡咯烷-1-羰基]-4-氧代-1,2,4,5,6,7-六氢-氮杂环庚三烯并[3,2,1-hi]吲哚-5-基}-氨基甲酸甲酯；
{(4S,7S)-4-[(S)-2-(4'-{2-[(S)-1-((S)-2-甲氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-吡咯烷-2-基]-3H-咪唑-4-基}-联苯-4-基氨基甲酰基)-吡咯烷-1-羰基]-6,10-二氧代-八氢-哒嗪并[1,2-a][1,2]二氮杂环庚三烯-7-基}-氨基甲酸甲酯；
{(2S,5S)-2-[(S)-2-(4'-{2-[(S)-1-((S)-2-甲氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-4,4-二氟吡咯烷-2-基]-3H-咪唑-4-基}-联苯-4-基氨基甲酰基)-吡咯烷-1-羰基]-4-氧代-1,2,4,5,6,7-六氢-氮杂环庚三烯并[3,2,1-hi]吲哚-5-基}-氨基甲酸甲酯；和
{(2S,5S)-2-[(S)-2-(4'-{5-氯-2-[(S)-1-((S)-2-甲氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-吡咯烷-2-基]-3H-咪唑-4-基}-联苯-4-基氨基甲酰基)-吡咯烷-1-羰基]-4-氧代-1,2,4,5,6,7-六氢-氮杂环庚三烯并[3,2,1-hi]吲哚-5-基}-氨基甲酸甲酯。
12.一种治疗丙型肝炎病毒(HCV)感染的方法，其包括给需要其的患者施用治疗有效量的权利要求1-11中任意一项的化合物。
13.权利要求12的方法，其进一步包括施用免疫系统调节剂或抑制HCV复制的抗病毒剂或其组合。
14.权利要求13的方法，其中所述免疫系统调节剂是干扰素或化学衍生的干扰素。
15.权利要求13的方法，其中所述抗病毒剂选自HCV蛋白酶抑制剂、HCV聚合酶抑制剂、HCV解旋酶抑制剂、HCV引发酶抑制剂、HCV融合抑制剂及其组合。
16.一种抑制细胞中HCV复制的方法，其包括施用权利要求1-11中任意一项的化合物。
17.一种包含权利要求1-11中任意一项的化合物和可药用载体的组合物。
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