CN103965159A - 醚类芳基哌嗪衍生物及其盐、制备方法和用途 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了醚类芳基哌嗪衍生物及其盐、制备方法和用途。具体涉及一类醚类芳基哌嗪衍生物（Ⅰ）。其中：m、n、o、X、Y、Z、R、R1–R5的定义见说明书。本发明还公开了这些醚类芳基哌嗪衍生物的制备方法以及使用这些新型衍生物用于抗良性前列腺增生和抗肿瘤的用途。本发明所述的化合物经初步药效学研究，通过双荧光素酶报告基因及体外抗肿瘤实验，结果显示：一些化合物表现较好的α1-AR亚型选择性及良好的抗肿瘤活性，可研制开发为新型抗良性前列腺增生和抗肿瘤药物。

Description

醚类芳基哌嗪衍生物及其盐、制备方法和用途
技术领域
本发明涉及药物化学、药物先导化合物的发现领域，具体涉及一类新型醚类芳基哌嗪衍生物、其制备方法和在制备抗良性前列腺增生药物及抗肿瘤药物中的用途。
背景技术
良性前列腺增生(Benign prostatic hyperplasia,BPH)，是一种常见的老年男性泌尿障碍症，BPH主要临床表现为下尿路症状(LUTS)：尿频、尿急、尿等待、夜尿增多、尿无力，严重可导致并发症如急性尿潴留、尿失禁、反复发作的尿路感染、血尿、肾衰竭、膀胱结石等。随着疾病的进展同时伴随复杂的并发症。因此，BPH的治疗药物研究已成为老年疾病研究的新热点(J.Med.Chem.1988,31,1087-1093；Br.J.Pharmacol.2000,129,653-660；Pharmacol.Ther.2000,88,281-309)。近年来，随着国民生活水平的提高,人口平均寿命的延长及人口老龄化的加速，其发病率有逐渐增加的趋势。据全球多数国家统计其组织学上的发生增生的概率与年龄成正相关，BPH一般从40岁开始出现，其患病率50-60岁为50％，61-70岁为60％，71-80岁为70％，80岁以上为80％-100％(饶向荣，张亚强。老年病中西医诊疗丛书：老年泌尿系统疾病[M]，人民军医出版社，2008)。
α1adrenergic receptors(α1-ARs)，是G蛋白偶联受体(GPCRs)家族的重要成员之一，其具有调节心血管系统和中枢神经系统活动的功能，这类7次跨膜受体在药物研发中占据核心的位置。按照其生理调节特点可分为α1A，α1B和α1D三种亚型。病理生理学研究表明：膀胱颈、前列腺包膜及增生的前列腺基质中的平滑肌细胞以α1-AR为主(The Atlas of Clinical Urology.1990,17,641-649)。α1-AR引起的平滑肌收缩是引发BPH的主要原因(Reviews in urology.2005.7(Suppl8):p.S34～42)。研究表明拮抗α1A-AR可以缓解尿路梗阻，拮抗α1D-AR对逼尿肌功能失调的刺激性和灌注性排泄症状有改善作用。而α1B与小阻力血管控制有关，拮抗α1B将产生低体位性低血压、心悸、昏厥等副作用。选择性作用于α1A及α1D亚型是公认的有效治疗BPH有效靶标(Curr.Med.Chem.2006,13,3395-3416；B.J.U International.2000,86Suppl2:p.23-8,discussion28-30)。
治疗BPH的肾上腺素受体拮抗剂药物主要经历了3个阶段，即：非选择性的α1受体拮抗剂、选择性的α1受体拮抗剂及高选择性的α1A受体拮抗剂。
第一代为非选择性的α1受体拮抗剂如苯苄胺等治疗BPH效果良好，但是患者使用后出现一些副反应，例如：头晕、头痛、心悸、直立性低血压、射精障碍等症状，这些不良反应的产生限制了其推广和使用。
第二代是以阿呋唑嗪，多沙唑嗪，特拉唑嗪等为代表的选择性α1受体拮抗剂。这类药物产生副反应较非选择性α1受体拮抗剂小，且有作用时间短，起效快，半衰期长，缓解BPH症状效果明显等特点。但是这个类α1受体拮抗剂对α1受体亚型选择性较差，所以临床用于治疗BPH的α1受体拮抗剂普遍存在心血管系统(CVS)不良反应。
第三代治疗BPH的药物为高选择性的α1受体拮抗剂，如临床上正在使用且疗效良好的坦索罗辛，临床试验表明：与非亚型选择性α1-AR拮抗剂相比，坦索罗辛对血压及直立性低血压影响较小，但是产生一系列副作用，例如：射精异常、心血管症状、性功能障碍及头晕(Eur.Urol,1999,36,1–13).
然而，目前应用的α1-AR拮抗剂主要困难在于大多数拮抗剂对α1-AR三种亚型存在普遍拮抗性(Eur.J.Pharmacol.1999,374,495–502)，难以区分血管和尿路α肾上腺素受体。因此，导致患者产生一系列心血管副作用。因而，开发出新一代的高效、低毒、高选择性的α1-AR拮抗剂具有重大意义。
发明内容
本发明的目的是提供一种新型的醚类芳基哌嗪衍生物及其盐。
本发明的另一目的是提供上述新型的醚类芳基哌嗪衍生物及其盐的制备方法。
本发明的再一目的是提供新型的醚类芳基哌嗪衍生物在制备抗良性前列腺增
生药物和抗肿瘤药物中的用途。
本发明新型的醚类芳基哌嗪衍生物具有下述通式(Ⅰ)的结构：
其中：
R＝
m＝1、2；
n＝2、3、4；
o＝0、1；
p＝1、2；
X＝C或N；Y＝C或N；Z＝C或N；
R1＝H、直连或支链烷基、不饱和的烷基、取代或未取代苯基、取代或未取代苄基、芳烷基、直连或支链烷氧基、不饱和的烷氧基、F、Cl、Br、I、CF3、CN、NO2、OH、CHO、SR11、烷基砜基、取代或未取代芳基砜基、氨基、酰基、酯基；
R2＝H、直连或支链烷基、不饱和的烷基、取代或未取代苯基、取代或未取代苄基、芳烷基、直连或支链烷氧基、不饱和的烷氧基、F、Cl、Br、I、CF3、CN、NO2、OH、CHO、SR11、烷基砜基、取代或未取代芳基砜基、氨基、酰基、酯基；
R3＝H、直连或支链烷基、不饱和的烷基、取代或未取代苯基、取代或未取代苄基、芳烷基、直连或支链烷氧基、不饱和的烷氧基、F、Cl、Br、I、CF3、CN、NO2、OH、CHO、SR11、烷基砜基、取代或未取代芳基砜基、氨基、酰基、酯基；
R4＝H、直连或支链烷基、不饱和的烷基、取代或未取代苯基、取代或未取代苄基、芳烷基、直连或支链烷氧基、不饱和的烷氧基、F、Cl、Br、I、CF3、CN、NO2、OH、CHO、SR11、烷基砜基、取代或未取代芳基砜基、氨基、酰基、酯基；
R5＝H、直连或支链烷基、不饱和的烷基、取代或未取代苯基、取代或未取代苄基、芳烷基、直连或支链烷氧基、不饱和的烷氧基、F、Cl、Br、I、CF3、CN、NO2、OH、CHO、SR11、烷基砜基、取代或未取代芳基砜基、氨基、酰基、酯基；
R6＝H、直连或支链烷基、不饱和的烷基、取代或未取代苯基、取代或未取代苄基、芳烷基、直连或支链烷氧基、不饱和的烷氧基、F、Cl、Br、I、CF3、CN、NO2、OH、CHO、SR11、烷基砜基、取代或未取代芳基砜基、氨基、酰基、酯基；
R7＝H、直连或支链烷基、不饱和的烷基、取代或未取代苯基、取代或未取代苄基、芳烷基、直连或支链烷氧基、不饱和的烷氧基、F、Cl、Br、I、CF3、CN、NO2、OH、CHO、SR11、烷基砜基、取代或未取代芳基砜基、氨基、酰基、酯基；
R8＝H、直连或支链烷基、不饱和的烷基、取代或未取代苯基、取代或未取代苄基、芳烷基、直连或支链烷氧基、不饱和的烷氧基、F、Cl、Br、I、CF3、CN、NO2、OH、CHO、SR11、烷基砜基、取代或未取代芳基砜基、氨基、酰基、酯基；
R9＝H、直连或支链烷基、不饱和的烷基、取代或未取代苯基、取代或未取代苄基、芳烷基、直连或支链烷氧基、不饱和的烷氧基、F、Cl、Br、I、CF3、CN、NO2、OH、CHO、SR11、烷基砜基、取代或未取代芳基砜基、氨基、酰基、酯基；
R10＝H、直连或支链烷基、不饱和的烷基、取代或未取代苯基、取代或未取代苄基、芳烷基、直连或支链烷氧基、不饱和的烷氧基、F、Cl、Br、I、CF3、CN、NO2、OH、CHO、SR11、烷基砜基、取代或未取代芳基砜基、氨基、酰基、酯基；
R11＝H、直连或支链烷基、不饱和的烷基、取代或未取代苯基、取代或未取代苄基、芳烷基；
本发明所述的醚类芳基哌嗪衍生物通过下述方法制备：首先原料4-(溴乙烷)苯乙酸(1)被硼烷二甲基硫醚络合物(BMS)还原成中间体2，其次中间体2在碱催化下与芝麻酚反应得到中间体3，再次中间体3在碱催化下与对甲苯磺酰氯(TsCl)反应生成羟基保护的中间体4。最后中间体4与相应芳基哌嗪类化合物或芳基哌啶类化合物发生亲核取代反应得到相应的化合物5-29。
本发明上述化合物经初步药理学研究，通过双荧光素酶报告基因及体外抗肿瘤实验，结果显示：一些化合物表现较好的α1-AR亚型选择性及良好的抗肿瘤活性，可研制开发为新型抗良性前列腺增生药物和抗肿瘤药物。
本发明的优选化合物具有下述化合物5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29的结构:
本发明中间体2的制备过程如下：
中间体2的制备工艺包括：
4-(溴乙烷)苯乙酸在常温下与硼烷二甲基硫醚络合物(BMS)反应得到2-(4-(bromomethyl)-phenyl)ethanol(中间体2)。
本发明中间体3的制备过程如下：
中间体3的制备工艺包括：
2-(4-(bromomethyl)phenyl)ethanol(中间体2)在碳酸钾催化下，与芝麻酚反应得到2-(4-(2-hydroxyethyl)benzyl)isoindoline-1,3-dione(中间体3)。
本发明中间体4的制备过程如下：
中间体4的制备工艺包括：
2-(4-(2-hydroxyethyl)benzyl)isoindoline-1,3-dione(中间体3)在三乙胺催化下，与对甲苯磺酰氯反应得到(中间体4)。
本发明化合物5-29的制备过程如下：
化合物5-29的制备工艺包括：
中间体4与相应芳基哌嗪类化合物或芳基哌啶类化合物反应得到化合物5-29
本发明所述醚类芳基哌嗪衍生物的盐由下列Ⅱ表示：
其中HX为生理上可接受的无机盐类或有机盐类
本发明所述的醚类芳基哌嗪衍生物的盐主要包括氢溴酸盐、氢碘酸盐、盐酸盐、高氯酸盐、硫酸盐、马来酸盐、富马酸盐、苹果酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、苯甲酸盐、杏仁酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、草酸盐、磷酸盐、琥珀酸盐、墟泊酸盐、乳酸盐中的一种
本发明所述的醚类芳基哌嗪衍生物可药用盐的制备方法，其特征是：将醚类芳基哌嗪衍生物溶于有机溶剂中，然后加入HX酸，常温下搅拌，析出的固体为醚类芳基哌嗪衍生物的无机酸盐或有机酸盐。
本发明所涉及的醚类芳基哌嗪衍生物，初步药理学研究(双荧光素酶报告基因和体外抗肿瘤细胞测试)，结果显示：一些化合物表现较好的α1-AR亚型选择性及良好的抗肿瘤活性，可进一步研制开发为新型抗良性前列腺增生和抗肿瘤药物。
具体实施方式：
下面通过实施例进一步说明本发明。实施例给出了代表性新化合物的合成、相关结构鉴定数据及化合物活性数据。必须说明，下述实施例是用于说明本发明而不是对本发明的限制。根据本发明的实质对本发明进行的简单改进都属于本发明要求保护的范围。
熔点测定用a Fisher Johns hot-stage测定仪(温度计未校正)。
所有目标化合物(盐酸盐)的1HNMR，13C NMR用瑞士Bruker AVANCEAV-400NB测定，TMS做内标。
低分辨质谱(EI)用Thremo DSQ质谱仪测定。
元素分析(C,H,N)用Elementar Vario EL元素分析仪测定。
实施例1：中间体2的制备
在250mL圆底烧瓶中加入5g(0.021mol)4-(溴乙烷)苯乙酸，100mL四氢呋喃，在0℃下缓慢加入21.9mL硼烷二甲基硫醚络合物(BMS，2M in THF)。反应混合物在0℃下反应1h后，然后逐渐恢复常温。反应结束后缓慢加入水终止反应，用乙酸乙酯萃取(100mL×3)，合并有机相，有机相分别用水和饱和食盐水洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，浓缩。粗产物没有纯化直接用于下一步反应。
实施例2：中间体3的制备
在250mL圆底烧瓶中加入4g(18.7mmol)中间体2，2.58g(18.7mmol)芝麻酚，10.32g(74.8mmol)碳酸钾，150mL丙酮，在60℃下反应16h。TLC显示原料反应完全。停止反应，过滤，浓缩。粗产物经硅胶柱层析纯化，洗脱剂：V(乙酸乙酯):V(石油醚)＝1:10，得4.06g白色固体，收率：67％(以原料4-(溴乙烷)苯乙酸计算)。M.p.:102-103℃；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δin ppm:7.32(d,J＝8.0Hz,2H),7.22(d,J＝8.0Hz,2H),6.79(d,J＝8.5Hz,1H),6.68(d,J＝2.5Hz,1H),6.43(dd,J＝8.5,2.5Hz,1H),5.94(s,2H),4.97(s,2H),4.60(t,J＝5.2Hz,1H),3.60(td,J＝7.0,5.2Hz,2H),2.72(t,J＝7.0Hz,2H)；13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δin ppm:154.25,148.34,141.64,139.65,135.07,129.33,128.09,108.46,106.64,101.42,98.55,70.39,62.57；MS(EI,m/z):272(M+),167,149,135(100％),117,105,97,79.
实施例3：中间体4的制备
在250mL圆底烧瓶中加入4g(14.7mmol)中间体3，5.94g(58.8mmol)三乙胺，0.18g4-(N,N-二甲基)氨基吡啶(催化量)，100mL二氯甲烷，在0℃下缓慢加入4.19g(22.1mmol)对甲苯磺酰氯(TsCl)的二氯甲烷溶液。反应混合物在0℃下反应16h，TLC显示原料反应完全。缓慢加入水终止反应，用二氯甲烷萃取(100mL×3)，合并有机相，有机相分别用水和饱和食盐水洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，浓缩。粗产物经硅胶柱层析纯化，洗脱剂：V(乙酸乙酯):V(石油醚)＝1:15，得5.76g白色固体，收率：95％。M.p.:90-91℃；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δin ppm:7.65(d,J＝8.0Hz,2H),7.40(d,J＝8.0Hz,2H),7.30(d,J＝8.0Hz,2H),7.15(d,J＝8.0Hz,2H),6.80(d,J＝8.5Hz,1H),6.69(d,J＝2.5Hz,1H),6.44(dd,J＝8.5,2.5Hz,1H),5.95(s,2H),4.98(s,2H),4.23(t,J＝6.4Hz,2H),2.89(t,J＝6.4Hz,2H),2.40(s,3H)；13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δinppm:154.22,148.36,145.23,141.68,136.78,135.90,132.78,130.52,129.28,128.21,127.89,108.47,106.64,101.44,98.55,71.43,70.27,34.55,21.53；MS(EI,m/z):426(M+),289,254,155,137,117(100％),104,91.
实施例4：化合物5的制备
在25mL圆底烧瓶中加入100mg(0.23mmol)中间体4，44.7mg(0.28mmol)N-苯基哌嗪，190.4mg(1.38mmol)碳酸钾，15mL乙腈，在85℃下反应16h，TLC显示原料反应完全。停止反应，过滤，浓缩。粗产物经硅胶柱层析纯化，洗脱剂：V(乙酸乙酯):V(石油醚)＝1:4，得62.2mg白色固体，收率：65％。M.p.:195-196℃(HCl salt)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δin ppm:11.51(s,1H),7.40(d,J＝8.0Hz,2H),7.30(d,J＝8.0Hz,2H),7.27(dd,J＝8.0,7.3Hz,2H),7.02(d,J＝8.0Hz,2H),6.87(t,J＝7.3Hz,1H),6.80(d,J＝8.5Hz,1H),6.68(d,J＝2.5Hz,1H),6.43(dd,J＝8.5,2.5Hz,1H),5.95(s,2H),5.00(s,2H),3.82(d,J＝10.4Hz,2H),3.62(d,J＝10.4Hz,2H),3.40-3.09(m,8H)；13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δin ppm:154.07,149.87,148.26,141.60,137.07,136.08,129.49,129.09,128.40,120.45,116.40,108.38,106.61,101.36,98.49,70.13,56.36,50.92,45.80,29.33；Anal.Calcd for C26H28N2O3.2HCl:C,63.80；H,6.18；N,5.72.Found:C,63.64；H,6.12；N,5.58.
实施例5：化合物6的制备
中间体4与1-苄基哌嗪的反应，合成过程同实施例4。得79.1mg白色固体，收率：80％。m.p.:177-178℃(HCl salt)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δin ppm:12.00(s,1H),7.71-7.42(m,5H),7.39(d,J＝8.0Hz,2H),7.30(d,J＝8.30Hz,2H),6.80(d,J＝8.5Hz,1H),6.68(d,J＝2.5Hz,1H),6.43(dd,J＝8.5,2.5Hz,1H),5.95(s,2H),5.00(s,2H),4.34(s,2H),3.94-2.93(m,12H)；Anal.Calcd forC27H30N2O3.2HCl:C,64.41；H,6.41；N,5.56.found:C,63.98；H,6.45；N,5.31.
实施例6：化合物7的制备
中间体4与1-(2-吡啶基)哌嗪的反应，合成过程同实施例4。得67.1mg白色固体，收率：70％。M.p.:185-186℃(HCl salt)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δinppm:11.92(s,1H),8.13(dd,J＝5.6,1.2Hz,1H),7.96(t,J＝7.6Hz,1H),7.41-7.30(m,5H),6.98(t,J＝6.4Hz,1H),6.80(d,J＝8.5Hz,1H),6.69(d,J＝2.5Hz,1H),6.44(dd,J＝8.5,2.5Hz,1H),5.95(s,2H),5.00(s,2H),4.54(d,J＝10.6Hz,2H),3.78-3.09(m,10H)；13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δin ppm:154.16,148.35,141.69,137.09,136.19,129.17,128.50,114.40,108.47,106.69,101.45,98.58,70.22,56.47,50.38,43.40,40.66,29.38；Anal.Calcd for C25H27N3O3.2.8HCl:C,57.79；H,5.78；N,8.09.found:C,57.78；H,6.06；N,7.86.
实施例7：化合物8的制备
中间体4与1-(2-嘧啶基)哌嗪的反应，合成过程同实施例4。得62.5mg淡黄色固体，收率：65％。M.p.:181-182℃(HCl salt)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δin ppm:11.36(s,1H),8.45(d,J＝4.4Hz,2H),7.39(d,J＝7.5Hz,2H),7.29(d,J＝7.5Hz,2H),6.85-6.37(m,4H),5.94(s,2H),5.00(s,2H),4.70(d,J＝11.4Hz,2H),3.64-3.05(m,10H)；13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δin ppm:161.07,158.61,154.14,145.81,141.68,137.02,136.20,129.16,128.49,111.79,108.46,106.69,101.45,98.57,70.20,56.59,50.85,29.41；Anal.Calcd for C24H26N4O3.1.5HCl:C,60.92；H,5.86；N,11.84.found:C,60.67；H,5.98；N,11.61.
实施例8：化合物9的制备
中间体4与1-(2-甲基苯基)哌嗪的反应，合成过程同实施例4。得79.1mg白色固体，收率：80％。M.p.:202-203℃(HCl salt)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δin ppm:11.16(s,1H),7.42(d,J＝8.1Hz,2H),7.32(d,J＝8.1Hz,2H),7.10(m,4H),6.81(d,J＝8.5Hz,1H),6.69(d,J＝2.5Hz,1H),6.44(dd,J＝8.5,2.5Hz,1H),5.96(s,2H),5.01(s,2H),3.62(d,J＝10.9Hz,2H),3.43-3.08(m,10H),2.28(s,3H)；13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δin ppm:155.55,151.59,149.74,143.08,138.51,137.58,133.84,132.86,130.58,129.89,128.55,125.62,120.84,109.85,108.08,102.83,99.96,71.59,57.99,53.31,50.02,30.88,19.26；Anal.Calcd forC27H30N2O3.2HCl:C,64.41；H,6.41；N,5.56.Found:64.63；H,6.45；N,5.44.
实施例9：化合物10的制备
中间体4与1-(4-甲基苯基)哌嗪的反应，合成过程同实施例4。得69.2mg白色固体，收率：70％。M.p.:184-185℃(HCl salt)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δin ppm:11.30(s,1H),7.40(d,J＝8.0Hz,2H),7.30(d,J＝8.0Hz,2H),7.08(d,J＝8.3Hz,2H),6.92(d,J＝8.3Hz,2H),6.79(d,J＝8.5Hz,1H),6.68(d,J＝2.5Hz,1H),6.43(dd,J＝8.5,2.5Hz,1H),5.94(s,2H),5.00(s,2H),3.75(d,J＝9.2Hz,2H),3.62(d,J＝9.2Hz,2H),3.40-3.07(m,8H),2.22(s,3H)；13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δin ppm:154.15,148.34,147.73,141.69,137.12,136.17,130.02,129.62,129.18,128.49,116.79,108.47,106.71,101.45,98.58,70.22,56.48,51.05,46.41,29.44,20.51；Anal.Calcd for C27H30N2O3.2HCl:C,64.41；H,6.41；N,5.56.found:C,64.40；H,6.43；N,5.36.
实施例10：化合物11的制备
中间体4与1-(3-甲基苯基)哌嗪的反应，合成过程同实施例4。得81.0mg白色固体，收率：82％。m.p.:171-172℃(HCl salt)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δin ppm:11.61(s,1H),7.40(d,J＝8.0Hz,2H),7.30(d,J＝8.0Hz,2H),7.15(t,J＝7.6Hz,1H),6.93-6.62(m,5H),6.43(dd,J＝8.5,2.5Hz,1H),5.95(s,2H),5.00(s,2H),3.80(d,J＝11.2Hz,2H),3.62(d,J＝11.2Hz,2H),3.41-3.06(m,8H),2.27(s,3H)；13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δin ppm:154.17,149.89,148.35,141.69,138.78,137.18,136.15,129.42,129.17,128.49,121.45,117.19,113.80,108.47,106.70,101.45,98.58,70.23,56.45,50.97,46.01,29.41,21.80；Anal.Calcd forC27H30N2O3.2HCl:C,64.41；H,6.41；N,5.56.found:C,64.54；H,6.44；N,5.44.
实施例11：化合物12的制备
中间体4与1-(2-甲氧苯基)哌嗪的反应，合成过程同实施例4。得76.9mg白色固体，
收率：75％。M.p.:173-174℃(HCl salt)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δin ppm:11.50(s,1H),7.40(d,J＝8.0Hz,2H),7.31(d,J＝8.0Hz,2H),7.07-6.88(m,4H),6.80(d,J＝8.5Hz,1H),6.69(d,J＝2.5Hz,1H),6.43(dd,J＝8.5,2.5Hz,1H),5.95(s,2H),5.01(s,2H),3.80(s,3H),3.62(d,J＝10.8Hz,2H),3.51(d,J＝10.8Hz,2H),3.39-3.10(m,8H)；13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δin ppm:154.16,152.31,148.35,141.69,139.69,137.17,136.17,129.18,128.49,124.06,121.33,118.80,112.50,108.47,106.70,101.45,98.58,70.22,56.62,55.88,51.52,47.36,29.43；Anal.Calcdfor C27H30N2O4.2HCl:C,62.43；H,6.21；N,5.39.found:C,62.37；H,6.19；N,5.25.
实施例12：化合物13的制备
中间体4与1-(4-甲氧苯基)哌嗪的反应，合成过程同实施例4。得71.8mg白色固体，收率：70％。M.p.:174-175℃(HCl salt)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δin ppm:11.62(s,1H),7.40(d,J＝8.0Hz,2H),7.31(d,J＝8.0Hz,2H),7.05(d,J＝9.0Hz,2H),6.89(d,J＝9.0Hz,2H),6.80(d,J＝8.5Hz,1H),6.68(d,J＝2.5Hz,1H),6.43(dd,J＝8.5,2.5Hz,1H),5.95(s,2H),5.00(s,2H),3.71(s,3H),3.66(t,J＝9.0Hz,4H),3.40-3.10(m,8H)；13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δin ppm:154.30,153.66,147.84,142.69,141.19,136.63,135.66,128.68,127.98,118.48,114.47,107.96,106.19,100.95,98.08,69.72,55.88,55.25,50.41,47.06,28.93；Anal.Calcdfor C27H30N2O4.1.9HCl:C,62.87；H,6.23；N,5.43.found:C,62.90；H,6.20；N,5.25.
实施例13：化合物14的制备
中间体4与1-(3-甲氧苯基)哌嗪的反应，合成过程同实施例4。73.9mg白色固体，收率：72％。m.p.:171-172℃(HCl salt)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δinppm:11.56(s,1H),7.40(d,J＝8.0Hz,2H),7.30(d,J＝8.0Hz,2H),7.17(t,J＝8.0Hz,1H),6.80(d,J＝8.4Hz,1H),6.69(d,J＝2.4Hz,1H),6.60(dd,J＝8.4,2.0Hz,1H),6.55(t,J＝2.0Hz,1H),6.50-6.37(m,2H),5.95(s,2H),5.00(s,2H),3.83(d,J＝11.2Hz,2H),3.74(s,3H),3.61(d,J＝11.2Hz,2H),3.41-3.06(m,8H)；13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δin ppm:160.46,153.86,151.00,148.05,141.39,136.88,135.86,130.03,128.87,128.19,108.60,108.17,106.40,105.53,102.39,101.15,98.28,69.93,56.15,55.18,50.65,45.51,29.11；Anal.Calcd for C27H30N2O4.2HCl:C,62.43；H,6.21；N,5.39.found:C,62.41；H,6.19；N,5.27.
实施例14：化合物15的制备
中间体4与1-(2-氟苯基)哌嗪的反应，合成过程同实施例4。得64.9mg白色固体，收率：65％。M.p.:187-188℃(HCl salt)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δinppm:11.46(s,1H),7.40(d,J＝8.0Hz,2H),7.30(d,J＝8.0Hz,2H),7.23-6.96(m,4H),6.79(d,J＝8.5Hz,1H),6.68(d,J＝2.5Hz,1H),6.43(dd,J＝8.5,2.5Hz,1H),5.94(s,2H),5.00(s,2H),3.63(d,J＝9.7Hz,2H),3.50(d,J＝9.7Hz,2H),3.42-3.09(m,8H)；13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δin ppm:156.27,153.89,148.08,141.42,138.50,138.42,136.83,135.91,128.91,128.22,125.18,125.16,123.65,123.58,119.80,116.44,116.24,108.20,106.44,101.18,98.31,69.95,56.31,51.05,47.16,29.13；Anal.Calcd for C26H27FN2O3.2HCl:C,61.54；H,5.76；N,5.52.found:C,61.38；H,5.56；N,5.33.
实施例15：化合物16的制备
中间体4与1-(4-氟苯基)哌嗪的反应，合成过程同实施例4。得59.9mg白色固体，收率：60％。M.p.:196-197℃(HCl salt)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δinppm:11.55(s,1H),7.40(d,J＝7.9Hz,2H),7.30(d,J＝7.9Hz,2H),7.15-7.00(m,4H),6.79(d,J＝8.5Hz,1H),6.68(d,J＝2.5Hz,1H),6.43(dd,J＝8.5,2.5Hz,1H),5.94(s,2H),5.00(s,2H),3.74(d,J＝8.8Hz,2H),3.62(d,J＝8.8Hz,2H),3.40-3.08(m,8H)；13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δin ppm:157.75,155.40,153.64,147.83,146.32,141.17,136.65,135.64,128.65,127.97,117.90,117.82,115.55,115.33,107.95,106.18,100.94,98.06,69.71,55.90,50.51,46.07,28.90；Anal.Calcd forC26H27FN2O3.1.9HCl:C,61.99；H,5.78；N,5.56.found:C,62.02；H,5.77；N,5.41.
实施例16：化合物17的制备
中间体4与1-(2,4-二氟苯基)哌嗪的反应，合成过程同实施例4。得69.6mg白色固体，收率：67％。M.p.:169-170℃(HCl salt)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δin ppm:11.42(s,1H),7.40(d,J＝8.0Hz,2H),7.30(d,J＝8.0Hz,2H),7.28-7.00(m,3H),6.80(d,J＝8.5Hz,1H),6.68(d,J＝2.5Hz,1H),6.43(dd,J＝8.5,2.5Hz,1H),5.95(s,2H),5.00(s,2H),3.63(d,J＝8.6Hz,2H),3.43(d,J＝8.6Hz,2H),3.40-3.09(m,8H)；13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δin ppm:158.98,158.93,158.86,156.58,156.47,156.24,156.12,153.84,148.04,141.38,136.77,135.88,135.37,135.34,135.28,135.25,128.86,128.18,120.82,120.80,120.74,120.70,111.50,111.47,111.28,111.26,108.15,106.38,105.24,104.98,104.73,101.14,98.26,69.90,56.23,51.03,47.44,29.10；Anal.Calcd for C26H26F2N2O3.1.25HCl:C,62.70；H,5.51；N,5.62.found:C,62.85；H,5.61；N,5.42.
实施例17：化合物18的制备
中间体4与3-氟-4-(1-哌嗪基)苯腈的反应，合成过程同实施例4。得79.2mg白色固体，收率：75％。M.p.:182-183℃(HCl salt)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δin ppm:11.54(s,1H),7.77(dd,J＝13.1,1.2Hz,1H),7.63(dd,J＝8.4,1.2Hz,1H),7.40(d,J＝8.0Hz,2H),7.30(d,J＝8.0Hz,2H),7.25(t,J＝8.4Hz,1H),6.80(d,J＝8.5Hz,1H),6.68(d,J＝2.5Hz,1H),6.43(dd,J＝8.5,2.5Hz,1H),5.95(s,2H),5.00(s,2H),3.72(d,J＝12.0Hz,2H),3.64(d,J＝12.0Hz,2H),3.45-3.09(m,8H)；13CNMR(101MHz,DMSO-d6)δin ppm:154.39,153.64,151.94,147.83,142.35,141.17,136.53,135.68,129.90,128.65,127.98,120.02,119.92,119.77,118.07,107.95,106.17,103.59,100.94,98.06,69.69,56.02,50.43,46.10,28.88；Anal.Calcdfor C27H26FN3O3.1HCl:C,65.38；H,5.49；N,8.47.found:C,65.12；H,5.45；N,8.24.
实施例18：化合物19的制备
中间体4与1-(2-氯苯基)哌嗪的反应，合成过程同实施例4。得80.7g白色固体，收率：78％。M.p.:176-177℃(HCl salt)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δinppm:11.27(s,1H),7.46(dd,J＝8.0,1.6Hz,1H),7.41(d,J＝8.0Hz,2H),7.35(td,J＝8.0,1.6Hz,1H),7.31(d,J＝8.0Hz,2H),7.23(dd,J＝8.0,1.2Hz,1H),7.12(td,J＝8.0,1.2Hz,1H),6.80(d,J＝8.5Hz,1H),6.69(d,J＝2.5Hz,1H),6.43(dd,J＝8.5,2.5Hz,1H),5.95(s,2H),5.01(s,2H),3.66(d,J＝8.4Hz,2H),3.44(d,J＝8.4Hz,2H),3.41-3.08(m,8H)；13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δin ppm:154.16,148.35,147.88,141.70,137.08,136.20,130.93,129.20,128.72,128.50,128.04,125.29,121.52,108.47,106.70,101.46,98.58,70.22,56.59,51.66,48.15,29.51；Anal.Calcdfor C26H27ClN2O3.1.25HCl:C,62.89；H,5.73；N,5.64.found:C,62.95；H,5.70；N,5.47.
实施例19：化合物20的制备
中间体4与1-(4-氯苯基)哌嗪的反应，合成过程同实施例4。得72.4mg白色固体，收率：70％。M.p.:164-165℃(HCl salt)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δinppm:11.64(s,1H),7.40(d,J＝8.0Hz,2H),7.33-7.26(m,4H),7.03(d,J＝9.0Hz,2H),6.80(d,J＝8.5Hz,1H),6.69(d,J＝2.5Hz,1H),6.43(dd,J＝8.5,2.5Hz,1H),5.95(s,2H),5.00(s,2H),3.83(d,J＝11.4Hz,2H),3.62(d,J＝11.4Hz,2H),3.40-3.09(m,8H)；13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δin ppm:153.66,148.37,147.84,141.19,136.66,135.65,128.76,128.66,127.98,123.52,117.47,107.96,106.19,100.95,98.08,69.72,55.91,50.33,45.16,28.89；Anal.Calcd for C26H27ClN2O3.2HCl:C,59.61；H,5.58；N,5.35.found:C,59.66；H,5.59；N,5.19.
实施例20：化合物21的制备
中间体4与1-(3-氯苯基)哌嗪的反应，合成过程同实施例4。得67.2mg白色固体，收率：65％。M.p.:177-178℃(HCl salt)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δin ppm:11.60(s,1H),7.40(d,J＝8.0Hz,2H),7.30(d,J＝8.0Hz,2H),7.25(t,J＝8.4Hz,1H),7.06(t,J＝2.4Hz,1H),6.97(dd,J＝8.4,2.4Hz,1H),6.87(dd,J＝7.6,1.2Hz,1H),6.80(d,J＝8.5Hz,1H),6.68(d,J＝2.5Hz,1H),6.43(dd,J＝8.5,2.5Hz,1H),5.95(s,2H),5.00(s,2H),3.90(d,J＝11.6Hz,2H),3.60(d,J＝11.6Hz,2H),3.40-3.07(m,8H)；13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δin ppm:154.16,151.27,148.35,141.69,137.16,136.16,134.42,131.08,129.17,128.49,119.66,115.76,114.64,108.47,106.70,101.45,98.58,70.22,56.42,50.77,45.31,29.40；Anal.Calcdfor C26H27ClN2O3.2HCl:C,59.61；H,5.58；N,5.35.found:C,59.55；H,5.58；N,5.18.实施例21：化合物22的制备
中间体4与1-(2,4-二氯苯基)哌嗪的反应，合成过程同实施例4。得66.8mg白色固体，收率：60％。M.p.:177-178℃(HCl salt)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δin ppm:10.78(s,1H),7.40(d,J＝8.0Hz,2H),7.36(m,2H),7.31(d,J＝8.0Hz,2H),7.22(dd,J＝7.2,2.8Hz,1H),6.79(d,J＝8.5Hz,1H),6.68(d,J＝2.5Hz,1H),6.43(dd,J＝8.5,2.5Hz,1H),5.94(s,2H),5.00(s,2H),3.66(d,J＝10.0Hz,2H),3.27-3.04(m,10H)；13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δin ppm:155.53,151.34,149.73,143.08,140.49,137.62,134.60,130.60,130.50,129.89,127.95,127.19,121.74,109.86,108.09,102.83,99.95,71.58,57.99,53.07,49.66,30.95；Anal.Calcdfor C26H26Cl2N2O3.1HCl:C,59.84；H,5.21；N,5.37.found:C,60.04；H,5.27；N,5.16.
实施例22：化合物23的制备
中间体4与1-(5-氯-2-甲氧苯基)哌嗪的反应，合成过程同实施例4。得71.8mg白色固体，收率：65％。M.p.:177-178℃(HCl salt)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δin ppm:11.46(s,1H),7.40(d,J＝8.0Hz,2H),7.30(d,J＝8.0Hz,2H),7.05(dd,J＝8.7,2.4Hz,1H),6.99(d,J＝8.7Hz,1H),6.94(d,J＝2.4Hz,1H),6.80(d,J＝8.5Hz,1H),6.68(d,J＝2.5Hz,1H),6.43(dd,J＝8.5,2.5Hz,1H),5.95(s,2H),5.00(s,2H),3.80(s,3H),3.60(d,J＝10.8Hz,2H),3.55(d,J＝10.8Hz,2H),3.39-3.08(m,8H)；13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δin ppm:154.16,151.12,148.35,141.69,141.14,137.14,136.18,129.18,128.49,124.99,122.98,118.68,113.74,108.47,106.70,101.45,98.58,70.22,56.55,56.27,51.37,47.01,29.43；Anal.Calcd forC27H29ClN2O4.1.8HCl:C,59.33；H,5.68；N,5.12.found:C,59.26；H,5.79；N,4.87.
实施例23：化合物24的制备
中间体4与1-(4-溴苯基)哌嗪的反应，合成过程同实施例4。得81.8mg白色固体，收率：72％。m.p.:173-174℃(HCl salt)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δinppm:11.62(s,1H),7.43-7.35(m,4H),7.29(d,J＝8.0Hz,2H),6.97(d,J＝9.0Hz,2H),6.79(d,J＝8.5Hz,1H),6.67(d,J＝2.5Hz,1H),6.42(dd,J＝8.5,2.5Hz,1H),5.94(s,2H),4.99(s,2H),3.82(d,J＝11.3Hz,2H),3.60(d,J＝11.3Hz,2H),3.38-3.07(m,8H)；13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δin ppm:154.16,149.23,148.35,141.69,137.17,136.16,132.14,129.17,128.49,118.40,111.72,108.47,106.70,101.45,98.58,70.22,56.42,50.79,45.53,29.40；Anal.Calcd for C26H27BrN2O3.2HCl:C,54.95；H,5.14；N,4.93.found:C,54.93；H,5.15；N,4.76.
实施例24：化合物25的制备
中间体4与1-(2-三氟甲基苯基)哌嗪的反应，合成过程同实施例4。得83.5mg白色固体，收率：75％。M.p.:171-172℃(HCl salt)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δin ppm:11.35(s,1H),7.57(m,6H),7.31(d,J＝8.0Hz,2H),6.80(d,J＝8.5Hz,1H),6.69(d,J＝2.5Hz,1H),6.43(dd,J＝8.5,2.5Hz,1H),5.95(s,2H),5.01(s,2H),3.63(d,J＝11.2Hz,2H),3.45-3.34(m,4H),3.23-3.07(m,6H)；13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δin ppm:154.17,150.95,148.35,141.69,137.11,136.18,134.37,129.21,128.49,127.59,127.54,126.58,124.91,108.47,106.70,101.45,98.58,70.22,56.49,51.95,50.22,29.55；Anal.Calcd for C27H27F3N2O3.1HCl:C,62.25；H,5.42；N,5.38.found:C,62.41；H,5.40；N,5.24.
实施例25：化合物26的制备
中间体4与1-(4-三氟甲基苯基)哌嗪的反应，合成过程同实施例4。得61.2mg白色固体，收率：55％。M.p.:176-177℃(HCl salt)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δin ppm:11.45(s,1H),7.57(d,J＝8.8Hz,2H),7.40(d,J＝8.0Hz,2H),7.30(d,J＝8.0Hz,2H),7.17(d,J＝8.8Hz,2H),6.80(d,J＝8.5Hz,1H),6.69(d,J＝2.5Hz,1H),6.43(dd,J＝8.5,2.5Hz,1H),5.95(s,2H),5.00(s,2H),4.03(d,J＝11.6Hz,2H),3.64(d,J＝11.6Hz,2H),3.43-3.06(m,8H)；13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δin ppm:153.64,151.95,147.83,141.18,136.60,135.66,128.66,127.98,126.28,114.88,107.95,106.18,100.94,98.06,69.70,55.94,50.19,44.21,28.93；Anal.Calcdfor C27H27F3N2O3.1.25HCl:C,61.18；H,5.37；N,5.28.found:C,61.49；H,5.42；N,5.19.
实施例26：化合物27的制备
中间体4与对呱嗪苯乙酰的反应，合成过程同实施例4。得62.3mg白色固体，收率：60％。m.p.:183-184℃(HCl salt)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δin ppm:11.22(s,1H),7.86(d,J＝8.8Hz,2H),7.40(d,J＝8.0Hz,2H),7.30(d,J＝8.0Hz,2H),7.08(d,J＝8.8Hz,2H),6.80(d,J＝8.5Hz,1H),6.68(d,J＝2.5Hz,1H),6.43(dd,J＝8.4,2.5Hz,1H),5.95(s,2H),5.00(s,2H),4.09(d,J＝11.6Hz,2H),3.64(d,J＝11.6Hz,2H),3.36-3.10(m,8H),2.48(s,3H)；13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δin ppm:195.72,153.63,152.54,147.82,141.17,136.52,135.67,130.00,128.65,127.97,127.78,113.87,107.94,106.17,100.93,98.05,69.68,55.94,50.25,43.92,28.94,26.13；Anal.Calcd for C28H30N2O4.1.5HCl:C,65.52；H,6.19；N,5.46.found:C,65.78；H,6.47；N,5.31.
实施例27：化合物28的制备
中间体4与4-苯基哌啶的反应，合成过程同实施例4。得71.6mg白色固体，收率：75％。M.p.:183-184℃(HCl salt)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δin ppm:11.04(s,1H),7.59-7.08(m,9H),6.80(d,J＝8.5Hz,1H),6.69(d,J＝2.5Hz,1H),6.44(dd,J＝8.5,2.5Hz,1H),5.95(s,2H),5.01(s,2H),3.64(d,J＝11.6Hz,2H),3.30-3.00(m,6H),2.90-2.78(m,1H),2.09(m,4H)；13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δin ppm:153.85,148.04,144.41,141.38,136.98,135.83,128.86,128.70,128.18,126.71,108.16,106.39,101.14,98.27,69.91,56.73,52.08,29.93,29.26；Anal.Calcdfor C27H29NO3.1HCl:C,71.75；H,6.69；N,3.10.found:C,71.25；H,6.69；N,2.98.
实施例28：化合物29的制备
中间体4与4-苯基-4-羟基哌啶的反应，合成过程同实施例4。得79.3mg白色固体，收率：80％。M.p.:194-195℃(HCl salt)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δinppm:11.11(s,1H),7.55-7.20(m,9H),6.80(d,J＝8.5Hz,1H),6.69(d,J＝2.5Hz,1H),6.43(dd,J＝8.5,2.5Hz,1H),5.95(s,2H),5.47(s,1H),5.00(s,2H),3.49(d,J＝11.0Hz,2H),3.43-3.06(m,8H),1.82(d,J＝11.0Hz,2H)；13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δin ppm:153.65,147.88,147.83,141.17,136.77,135.61,128.67,128.03,127.95,126.77,124.51,107.95,106.18,100.93,98.07,69.71,68.00,56.32,48.25,34.96,29.17；Anal.Calcd for C27H29NO4.1HCl:C,69.29；H,6.46；N,2.99.found:C,69.20；H,6.45；N,2.85.
实施例29：α1-AR亚型受体的拮抗作用
α1-AR亚型选择性拮抗剂高通量筛选模型的建立：
1.质粒(pGL4.29[luc2P/CRE/Hygro],pGL4.74[hRluc/TK],EX-A0967-M29,EX-Y3321-M29,
EX-Y2008-M29)的保存和提取。
1.1质粒转化保存：将1μL上述质粒转到1.5mL离心管底部冰浴，加入200μL感受态
细胞(DH5α)中，充分混匀后，冰浴30min。于42℃热激40s，冰浴3min。加入400μL S.O.C培养基，37℃震荡培养1h后，取50μL涂布到含有100μg/mL氨芐青霉素的固体培养基平板表面。37℃培养过夜，挑取单克隆接种到500μL LB液体培养基中，37℃摇床培养6h，加入含有100μg/mL氨芐青霉素的抗性甘油中，甘油终浓度为15-25％。
1.2菌株培养和质粒提取：将含有对应质粒的菌株，加入到LB液体培养基中培养过夜。
采用质粒提取试剂盒(QIAprep Spin Miniprep Kit)的方法提取质粒。并用微型核酸蛋白定量仪(Gene Company Limited,ND-100)测定质粒浓度。
2.待筛选的化合物样品的制备：化合物样品：将2-3mg纯品化合物溶于适量的二甲基亚砜(DMSO)中，配制成浓度为2mmol/L的储备液，取0.5μL作用于99μL含瞬转细胞的培养基中，使药物终浓度为10μmol/L。
3.细胞培养、铺板：从液氮罐取出HEK293细胞，细胞复苏后，转入50mL细胞培养瓶中，加入含10％胎牛血清，1％双抗的DMEM高糖培养基，37℃培养，每天换液，当细胞汇合度达90％时，用PBS缓冲液清洗细胞瓶两次后胰酶消化，10倍体积培养基稀释，离心弃上清。加入适量DMEM培养基(10％胎牛血清，1％双抗)吹散。用细胞计数板数细胞浓度按105个/mL，铺96孔板。置于37℃恒温培养过夜。
4.瞬时转染：铺板24h后，在显微镜下观察细胞板孔中的细胞，如果各孔总体汇合度达到90％以上，则可进行瞬转。用于细胞转染的混合液需临时配制，由A和B组成，其中，A由质粒α1A/α1B/α1D、报告基因luc2p-CRE和hRluc-TK以及无血清双抗的高糖培养基DMEM配制而成，B由脂质体和DMEM配制而成。
A液和B液所需所有成分的体积都需经过计算得出。其中α1-AR亚型真核表达质粒：报告基因：内参＝1：1：1。对于96孔板，每孔要求加入DNA的量为0.2μg/25μL，要求加入脂质体的量为0.5μL/25μL。操作时，首先按上述计算量分别配制A和B液，静置5-10min，然后将A与B混溶，用移液枪混匀后，静置20-30min。最后，从恒温箱中取出细胞培养板，用PBS清洗2次后弃去废液，在每孔中分别加入DMEM培养基50μL，待A+B作用完毕后，从中吸取50μL至每孔中，摇匀，放入恒温箱中进行培养。转染完毕后，经过4h培养后取出细胞培养板，将细胞液置换为含血清和双抗的DMEM高糖培养基培养18-22h。
5.化合物活性检测：共转染后，取出细胞培养板，用PBS清洗2次。在每孔中加入99μL含10％胎牛血清和1％双抗的DMEM高糖培养基中。将待测化合物和激动剂(苯肾上腺素，Phenylephrine hydrochloride，PE)配制浓度2mmol/L，分别取0.5μL加入到每孔含99μL培养基的平板中(使药物终浓度为10μmol/L)。顺序是优先添加拮抗剂和空白对照试剂，作用30min后再添加激动剂。添加完毕后混匀细胞液，37℃培养8h。为了对转染质量进行监控，每块板按照以下分组进行操作。空白对照组：1μL DMSO于99μL含10％血清、1％双抗的培养基中。阴性对照组：加入0.5μL DMSO于99μL含10％血清、1％双抗的培养基中作用30min中后再添加0.5μL激动剂PE(2mmol/L)。阴性对照组和空白对照组的比值表示在激动剂的刺激下相对于背景的诱导倍增发光数即信噪比，当信噪比大于2时，表示该微孔板的转染和肾上腺素诱导是有效的，也就是说该板进行的筛选有效的。对照组：进行转染时待测试化合物对α1-ARs的三个亚型：α1A-,α1B-,和α1D-AR的拮抗活性同时进行，采用非选择性拮抗剂哌唑嗪(Prazosin)作为阳性对照。具体方法如下：加入0.5μL哌唑嗪(2mmol/L)于每孔99μL含10％血清、1％双抗的培养基中，作用30min后，添加刺激因素苯肾上腺素0.5μL(2mmol/L)。样品组：待筛选样品用DMSO溶解，添加终浓度上限设定为10μmol/L，测试结果反映待测样品对苯肾上腺素受体的结合抑制程度。
6.细胞裂解冻存：加药完毕8h后，取出培养板，用PBS清洗2次，加入1*passivelysis buffer，每孔35μL。将细胞培养板置于脱色摇床上充分裂解30min。置于-80℃过夜保存。
7.测定每个细胞孔中的相对荧光酶含量并得出相对比：将冻存于低温环境下的细胞培养板取出，待细胞液融化后，置于脱色摇床上摇荡15min左右取下，从每孔中吸取5μL细胞液分别注入到96孔白板中的指定孔中，加入25μL终止测试液(采用Dual-Luciferase Reproter Assay System(Promega，USA)双报告基因试剂盒)。利用荧光检测分析仪(GloMaxTM96MicroplateLuminometer(Promega公司))测试萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶活性的比值(RLU,relative light units)。测试化合物的RLU与阳性对照哌唑嗪RLU数值之比[测试化合物(RLU)/哌唑嗪(RLU)]，即：该化合物相对于哌唑嗪的拮抗活性强弱，数值越小表示拮抗活性越高。
表1是测试化合物的RLU与阳性对照哌唑嗪RLU数值之比
表1
实施例30：体外抗肿瘤细胞活性测试
1.材料：
1.1CCK-8试剂盒购于日本同仁化学研究所。
1.2靶细胞的制备：人前列腺癌细胞系PC-3、LNCaP、DU145以及正常的前列腺上皮细胞RWPE-1的复苏与培养。
a.分别从液氮罐中取出人前列腺癌细胞系PC-3、LNCaP、DU145以及正常的前列腺上皮细胞RWPE-1的冷存管，迅速置入37℃水浴箱中，不停摇动使之迅速溶化，无菌操作移入离心管中；
b.分别加DMEM完全培养液到PC-3细胞及RWPE-1细胞的离心管至10mL，F12完全培养基到LNCaP细胞的离心管至10mL，1640完全培养基到DU145细胞的离心管至10mL，1000rmp离心5min，弃上清。
c.PC-3、RWPE-1细胞分别加DMEM完全培养基3-4mL吹打使细胞混匀后移入培养瓶中，LNCaP细胞加3-4mL的F12完全培养基吹打使细胞混匀后移入培养瓶中，DU145细胞加3-4mL的1640完全培养基吹打使细胞混匀后移入培养瓶中，5％CO2，37℃培养；
d.观察细胞生长情况，及时更换培养液，分瓶。
1.3细胞计数：
a.选取对数生长期细胞，胰酶消化，分别对应的完全培养基终止，移入离心管中，加相应的完全培养基至10mL；
b.取10μL细胞悬液滴入计数板一侧凹槽中，显微镜下计数四个大格的细胞总数、除以4，乘104，即为每毫升培养液所含细胞数；
c.调整细胞数至1×105cells/mL。
1.4醚类芳基哌嗪衍生物溶液配置：
取醚类芳基哌嗪衍生物加入DMSO溶剂，调整初浓度为10mmol，配置浓度为1mmol待用，4℃保存。
2.试验方法
2.196孔板各孔加入人前列腺癌细胞系PC-3、LNCaP、DU145以及正常的前列腺上皮细胞RWPE-1100μL(1×105cells/mL)，37℃培养过夜。
2.2弃液，加入不同浓度的受试对象100μL，对照加DMEM完全培养基100μL，继续培养24h。.
2.3各孔加入CCK-8检测试剂10μL，继续培养20min至1h。
2.4酶标仪450nm下测定每孔OD值。
2.5计算抑制率：
肿瘤细胞抑制率％＝[(对照组测定的平均OD值—加药组测定的平均OD值)/对照组测定的平均OD值]×100％。
2.6以抑制率对药物浓度的对数作图，求得IC50值：
以lgc为横坐标，抑制率为纵坐标，求得IC50值。
表2是本发明化合物的体外抗肿瘤细胞活性结果。
表2

Claims (10)

1.醚类芳基哌嗪衍生物，其特征是具有通式(Ⅰ)的结构，
其中：
R＝
m＝1、2；
n＝2、3、4；
o＝0、1；
p＝1、2；
X＝C或N；Y＝C或N；Z＝C或N；
R1＝H、直连或支链烷基、不饱和的烷基、取代或未取代苯基、取代或未取代苄基、芳烷基、直连或支链烷氧基、不饱和的烷氧基、F、Cl、Br、I、CF3、CN、NO2、OH、CHO、SR11、烷基砜基、取代或未取代芳基砜基、氨基、酰基、酯基；
R2＝H、直连或支链烷基、不饱和的烷基、取代或未取代苯基、取代或未取代苄基、芳烷基、直连或支链烷氧基、不饱和的烷氧基、F、Cl、Br、I、CF3、CN、NO2、OH、CHO、SR11、烷基砜基、取代或未取代芳基砜基、氨基、酰基、酯基；
R3＝H、直连或支链烷基、不饱和的烷基、取代或未取代苯基、取代或未取代苄基、芳烷基、直连或支链烷氧基、不饱和的烷氧基、F、Cl、Br、I、CF3、CN、NO2、OH、CHO、SR11、烷基砜基、取代或未取代芳基砜基、氨基、酰基、酯基；
R4＝H、直连或支链烷基、不饱和的烷基、取代或未取代苯基、取代或未取代苄基、芳烷基、直连或支链烷氧基、不饱和的烷氧基、F、Cl、Br、I、CF3、CN、NO2、OH、CHO、SR11、烷基砜基、取代或未取代芳基砜基、氨基、酰基、酯基；
R5＝H、直连或支链烷基、不饱和的烷基、取代或未取代苯基、取代或未取代苄基、芳烷基、直连或支链烷氧基、不饱和的烷氧基、F、Cl、Br、I、CF3、CN、NO2、OH、CHO、SR11、烷基砜基、取代或未取代芳基砜基、氨基、酰基、酯基；
R6＝H、直连或支链烷基、不饱和的烷基、取代或未取代苯基、取代或未取代苄基、芳烷基、直连或支链烷氧基、不饱和的烷氧基、F、Cl、Br、I、CF3、CN、NO2、OH、CHO、SR11、烷基砜基、取代或未取代芳基砜基、氨基、酰基、酯基；
R7＝H、直连或支链烷基、不饱和的烷基、取代或未取代苯基、取代或未取代苄基、芳烷基、直连或支链烷氧基、不饱和的烷氧基、F、Cl、Br、I、CF3、CN、NO2、OH、CHO、SR11、烷基砜基、取代或未取代芳基砜基、氨基、酰基、酯基；
R8＝H、直连或支链烷基、不饱和的烷基、取代或未取代苯基、取代或未取代苄基、芳烷基、直连或支链烷氧基、不饱和的烷氧基、F、Cl、Br、I、CF3、CN、NO2、OH、CHO、SR11、烷基砜基、取代或未取代芳基砜基、氨基、酰基、酯基；
R9＝H、直连或支链烷基、不饱和的烷基、取代或未取代苯基、取代或未取代苄基、芳烷基、直连或支链烷氧基、不饱和的烷氧基、F、Cl、Br、I、CF3、CN、NO2、OH、CHO、SR11、烷基砜基、取代或未取代芳基砜基、氨基、酰基、酯基；
R10＝H、直连或支链烷基、不饱和的烷基、取代或未取代苯基、取代或未取代苄基、芳烷基、直连或支链烷氧基、不饱和的烷氧基、F、Cl、Br、I、CF3、CN、NO2、OH、CHO、SR11、烷基砜基、取代或未取代芳基砜基、氨基、酰基、酯基；
R11＝H、直连或支链烷基、不饱和的烷基、取代或未取代苯基、取代或未取代苄基、芳烷基。
2.根据权利要求1所述的醚类芳基哌嗪衍生物，其特征是具有下述结构的化合物5-29，
3.权利要求1或2所述的醚类芳基哌嗪衍生物的制备方法，其特征在于包括如下步骤：首先原料4-(溴乙烷)苯乙酸(1)被硼烷二甲基硫醚络合物还原成中间体2，其次中间体2在碱催化下与芝麻酚反应得到中间体3，再次中间体3在碱催化下与对甲苯磺酰氯反应生成羟基保护的中间体4；最后中间体4与相应芳基哌嗪类化合物或芳基哌啶类化合物发生亲核取代反应得到相应的化合物5-29；
4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述中间体2与芝麻酚反应所用到的碱是碳酸钾；中间体3与对甲苯磺酰氯反应所用到的碱是三乙胺或4-(N,N-二甲基)氨基吡啶。
5.权利要求1所述醚类芳基哌嗪衍生物的盐，如式(Ⅱ)所示：
其中HX为生理上可接受的无机盐类或有机盐类。
6.如权利要求5所述的醚类芳基哌嗪衍生物的盐，其特征在于为氢溴酸盐、氢碘酸盐、盐酸盐、高氯酸盐、硫酸盐、马来酸盐、富马酸盐、苹果酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、苯甲酸盐、杏仁酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、草酸盐、磷酸盐、琥珀酸盐、墟泊酸盐或乳酸盐。
7.权利要求5所述的醚类芳基哌嗪衍生物的盐的制备方法，其特征是：将醚类芳基哌嗪衍生物溶于有机溶剂中，然后加入HX酸，析出的固体为醚类芳基哌嗪衍生物的无机酸盐或有机酸盐。
8.权利要求1所述醚类芳基哌嗪衍生物在制备抗良性前列腺增生药物中的用途。
9.权利要求1所述醚类芳基哌嗪衍生物在制备抗肿瘤药物中的用途。
10.如权利要求9所述的用途，其特征在于所述抗肿瘤是指抗前列腺癌。
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