CN103954615A

CN103954615A - 基于牛血清白蛋白-铂复合纳米材料测定胆碱的方法

Info

Publication number: CN103954615A
Application number: CN201410200127.8A
Authority: CN
Inventors: 陈伟; 何少斌; 李光文; 邓豪华; 刘爱林
Original assignee: Fujian Medical University
Current assignee: Fujian Medical University
Priority date: 2014-05-13
Filing date: 2014-05-13
Publication date: 2014-07-30
Anticipated expiration: 2034-05-13
Also published as: CN103954615B

Abstract

本发明公开一种基于牛血清白蛋白-铂复合纳米材料测定胆碱的方法，其特征是将Tris-盐酸缓冲液、胆碱、胆碱氧化酶、N-乙基-N-（3-磺丙基）-3-甲基苯胺钠盐、4-氨基安替比林和牛血清白蛋白-铂复合纳米材料混合温浴。显色体系中胆碱氧化酶催化氧化胆碱生成过氧化氢，牛血清白蛋白-铂复合纳米材料催化过氧化氢氧化N-乙基-N-（3-磺丙基）-3-甲基苯胺钠盐与4-氨基安替比林形成紫色产物，该显色产物的最大吸收峰为550nm。显色产物在550nm处吸光度与胆碱浓度在6～400μmol/L范围内呈线性关系，检测限为2.5μmol/L。该方法可用于婴儿奶粉中胆碱的测定。

Description

基于牛血清白蛋白-铂复合纳米材料测定胆碱的方法

技术领域

本发明涉及以牛血清白蛋白-铂复合纳米材料作为模拟过氧化物酶，催化过氧化氢氧化N-乙基-N-（3-磺丙基）-3-甲基苯胺钠盐与4-氨基安替比林，形成稳定的紫色显色产物，测定胆碱的紫外可见分析方法，属于分析化学和纳米技术领域。

背景技术

胆碱在人体内拥有促进脑发育提高记忆力，保证信息传递，调控细胞凋亡，促进体内转甲基代谢等重要作用，是构成生物膜的重要组成成分，是卵磷脂的关键组成成分，是机体可变甲基的来源而作用于合成甲基的产物，同时又是乙酰胆碱的前体。膳食中的胆碱能增加神经传递介质乙酰胆碱的形成，有助于脑神经信号的传递，因此胆碱也常作为营养成分添加到如婴儿奶粉等食品中。

胆碱常见的检测方法为利用胆碱氧化酶催化氧化胆碱，所生成的过氧化氢在过氧化物酶催化下氧化过氧化物酶底物显色。本发明以生物蛋白分子牛血清白蛋白为模板，通过生物矿化作用，制备出具有模拟过氧化物酶活性的铂纳米粒子-牛血清白蛋白核壳结构。与天然过氧化物酶相比，牛血清白蛋白-铂复合纳米材料具有制备简单、经济、快捷、耐高温、耐酸碱、性质稳定等诸多优势，可替代天然过氧化物酶用于胆碱的测定。

本发明基于牛血清白蛋白-铂复合纳米材料良好的模拟过氧化物酶活性，结合胆碱氧化酶催化氧化胆碱生成过氧化氢的过程，提供了一种基于牛血清白蛋白-铂复合纳米材料催化过氧化氢氧化N-乙基-N-（3-磺丙基）-3-甲基苯胺钠盐与4-氨基安替比林形成紫色显色产物，并通过紫外可见分光光度法测定550 nm处吸光度定量检测胆碱的新方法。

发明内容

本发明的目的是基于牛血清白蛋白-铂复合纳米材料良好的模拟过氧化物酶活性，结合胆碱氧化酶氧化胆碱生成过氧化氢的过程，提供了一种基于牛血清白蛋白-铂复合纳米材料测定胆碱的方法，尤其提供一种牛血清白蛋白-铂复合纳米材料催化过氧化氢氧化N-乙基-N-（3-磺丙基）-3-甲基苯胺钠盐与4-氨基安替比林形成紫色显色产物，并通过紫外可见分光光度法测定550 nm处吸光度定量检测胆碱的新方法。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：所述的基于牛血清白蛋白-铂复合纳米材料测定胆碱的方法，其特征是利用胆碱氧化酶催化胆碱氧化生成过氧化氢，牛血清白蛋白-铂复合纳米材料催化过氧化氢氧化N-乙基-N-（3-磺丙基）-3-甲基苯胺钠盐）与4-氨基安替比林形成紫色产物以鉴定胆碱。

所述的基于牛血清白蛋白-铂复合纳米材料测定胆碱的方法，其特征是在EP管中依次加入Tris-盐酸缓冲溶液、胆碱、胆碱氧化酶、N-乙基-N-（3-磺丙基）-3-甲基苯胺钠盐、4-氨基安替比林和牛血清白蛋白-铂复合纳米材料，将混合液放入恒温水浴中反应，生成紫色产物，用紫外可见分光光度计测定反应产物的吸光度以测定胆碱。

所述的基于牛血清白蛋白-铂复合纳米材料测定胆碱的方法，其特征是反应生成紫色产物的最大吸收峰为550 nm。

所述的基于牛血清白蛋白-铂复合纳米材料测定胆碱的方法，其特征是牛血清白蛋白-铂复合纳米材料采用以下制备方法制得：在5 mL浓度为50 mg/mL 牛血清白蛋白水溶液中加入5 mL浓度为16 mmol/L的氯铂酸水溶液，混匀后加入0.5 mL浓度为1.5 mol/L氢氧化钠水溶液，80 ℃水浴加热2小时，所得溶液经过超滤并水洗，得到牛血清白蛋白-铂复合纳米材料水溶液，反应后溶液装入截止分子量为3k的超滤离心管，6000 r/min离心超滤，并水洗3次。

所述的基于牛血清白蛋白-铂复合纳米材料测定胆碱的方法，其特征是恒温水浴中反应体系的pH值为7.5。

所述的基于牛血清白蛋白-铂复合纳米材料测定胆碱的方法，其特征是恒温水浴中反应体系中N-乙基-N-（3-磺丙基）-3-甲基苯胺钠盐的浓度为0.2 mmol/L，4-氨基安替比林的浓度为4.2 mmol/L，牛血清白蛋白-铂复合纳米材料的浓度为9 μmol/L，胆碱氧化酶的浓度为0.125 U/mL。

所述的基于牛血清白蛋白-铂复合纳米材料测定胆碱的方法，其特征是恒温水浴中反应体系的反应温度为30 ℃，反应时间为80分钟。

本发明所述的基于牛血清白蛋白-铂复合纳米材料测定胆碱的方法，其特征是将0.8 mL不同浓度的胆碱，0.25 mL浓度为2 U/mL的胆碱氧化酶，1 mL浓度为0.8 mmol/L的N-乙基-N-（3-磺丙基）-3-甲基苯胺钠盐，0.8 mL浓度为21 mmol/L的4-氨基安替比林，0.1 mL浓度为0.36 mmol/L的牛血清白蛋白-铂复合纳米材料依次加入到1.05 mL浓度为50 mmol/L、pH=7.5的Tris-盐酸缓冲液中，摇匀后置于30 ℃温浴，80分钟后测定显色产物在550 nm的吸光度，以吸光度对胆碱浓度作图得到标准曲线，吸光度与胆碱浓度在6~400 μmol/L范围内呈线性关系，检测限为2.5 μmol/L。

本发明所述的基于牛血清白蛋白-铂复合纳米材料测定婴儿奶粉中胆碱的方法，其特征是在EP管中依次加入Tris-盐酸缓冲溶液、前处理后的婴儿奶粉样品、胆碱氧化酶、N-乙基-N-（3-磺丙基）-3-甲基苯胺钠盐、4-氨基安替比林和牛血清白蛋白-铂复合纳米材料形成混合液，将混合液放入恒温水浴中反应，用紫外可见分光光度计测定在550 nm的紫外吸收，根据胆碱标准曲线计算婴儿奶粉中胆碱含量。

所述的基于牛血清白蛋白-铂复合纳米材料测定婴儿奶粉中胆碱的方法，其特征是婴儿奶粉样品的前处理方法为：将在6 g 婴儿奶粉样品中加入10 mL浓度为1.0 mol/L的盐酸溶液，摇匀后70 ℃水浴回流5小时，过滤，滤液用氢氧化钠调节至pH 5~5.5，用水定量稀释至15 mL；依次取上述前处理后的婴儿奶粉样品溶液0.8 mL、浓度为2 U/mL的胆碱氧化酶0.25 mL、浓度为0.8 mmol/L的N-乙基-N-（3-磺丙基）-3-甲基苯胺钠盐1 mL、浓度为21 mmol/L的4-氨基安替比林0.8 mL和浓度为0.36 mmol/L的牛血清白蛋白-铂复合纳米材料0.1 mL加入到1.05 mL浓度为50 mmol/L、 pH=7.5的Tris-盐酸缓冲液中，摇匀后置于30 ℃温浴，80分钟后测定其在550 nm的吸光度，根据胆碱标准曲线计算婴儿奶粉中的胆碱含量。

具体地说，本发明采用以下技术方案：（一）牛血清白蛋白-铂复合纳米材料的制备：

在50 mg/mL 牛血清白蛋白水溶液中加入16 mmol/L的氯铂酸水溶液，混匀后加入1.5 mol/L氢氧化钠水溶液，80 ℃水浴加热2小时。所得溶液经过超滤并水洗，得到牛血清白蛋白-铂复合纳米材料水溶液。反应后溶液装入截止分子量为3k的超滤离心管，6000 r/min离心超滤，并水洗3次。以上过程中使用的所有玻璃器皿均经过王水浸泡，并用双蒸水彻底清洗，晾干。

（二）胆碱的测定

在EP管中依次加入Tris-盐酸缓冲溶液、胆碱、胆碱氧化酶、N-乙基-N-（3-磺丙基）-3-甲基苯胺钠盐、4-氨基安替比林和牛血清白蛋白-铂复合纳米材料，将混合液放入30 ℃恒温水浴中反应80分钟。用紫外可见分光光度计测定反应产物在550 nm处的吸光度，以吸光度对胆碱浓度作图得到标准曲线。

（三）婴儿奶粉中胆碱的测定

将胆碱替换为前处理后的婴儿奶粉样品重复步骤二，将所得吸光度代入标准曲线计算婴儿奶粉中胆碱的含量。

本发明的优点：

本发明利用牛血清白蛋白-铂复合纳米材料良好的模拟过氧化物酶活性，结合胆碱氧化酶氧化胆碱生成过氧化氢的过程，提供了一种牛血清白蛋白-铂复合纳米材料催化过氧化氢氧化N-乙基-N-（3-磺丙基）-3-甲基苯胺钠盐与4-氨基安替比林形成稳定的紫色产物，并通过紫外可见分光光度法测定显色产物在550 nm的吸光度，从而定量检测胆碱的新方法。该技术测定胆碱的线性范围为6~400 μmol/L，检测限为2.5 μmol/L。本发明方法具有稳定性好，灵敏度高，样品需求量少，重现性好，成本低等优点，可应用于婴儿奶粉等样品中胆碱的测定。

附图说明

图1为显色体系的外观对比图，其中A图是在没有牛血清白蛋白-铂复合纳米材料存在时，不发生显色反应，溶液为透明无色，其中B图是在牛血清白蛋白-铂复合纳米材料存在时，发生显色反应，溶液为紫色。

图2为显色体系的紫外吸收光谱图。

图3为pH值对显色体系的影响图。

图4为N-乙基-N-（3-磺丙基）-3-甲基苯胺钠盐浓度对显色体系的影响图。

图5为4-氨基安替比林浓度对显色体系的影响图。

图6为牛血清白蛋白-铂复合纳米材料浓度对显色体系的影响图。

图7为胆碱氧化酶浓度对显色体系的影响图。

图8为反应温度对显色体系的影响图。

图9为反应时间对显色体系的影响图。

图10为胆碱的标准曲线图。

具体实施方式

实例1：

牛血清白蛋白-铂复合纳米材料的制备：在5 mL 浓度为50 mg/mL 牛血清白蛋白水溶液中加入5 mL浓度为16 mmol/L的氯铂酸水溶液，混匀后加入0.5 mL浓度为1.5 mol/L氢氧化钠水溶液，80 ℃水浴加热2小时。反应后溶液装入截止分子量为3k的超滤离心管，6000 r/min离心超滤，并水洗3次。

实例2：

将0.8 mL浓度为1 mmol/L的胆碱，0.25 mL浓度为2 U/mL的胆碱氧化酶，1 mL浓度为0.8 mmol/L的N-乙基-N-（3-磺丙基）-3-甲基苯胺钠盐，0.8 mL浓度为21 mmol/L的4-氨基安替比林，0.1 mL浓度为0.36 mmol/L的牛血清白蛋白-铂复合纳米材料依次加入到1.05 mL浓度为50 mmol/L 的Tris-盐酸缓冲溶液（pH=7.5）中，摇匀后置于30 ℃温浴，80分钟后测定观察显色体系的颜色变化。如图1所示，A图为在没有牛血清白蛋白-铂复合纳米材料存在时，不发生显色反应，溶液为透明无色，B图为在牛血清白蛋白-铂复合纳米材料存在时，发生显色反应，溶液为紫色。

实例3：

将0.8 mL浓度为1 mmol/L的胆碱，0.25 mL浓度为2 U/mL的胆碱氧化酶，1 mL浓度为0.8 mmol/L的N-乙基-N-（3-磺丙基）-3-甲基苯胺钠盐，0.8 mL浓度为21 mmol/L的4-氨基安替比林，0.1 mL浓度为0.36 mmol/L的牛血清白蛋白-铂复合纳米材料依次加入到1.05 mL浓度为50 mmol/L 的Tris-盐酸缓冲液（pH=7.5）中，摇匀后置于30 ℃温浴，80分钟后测定显色产物的紫外可见吸收光谱。如图2所示，显色产物的最大吸收峰为550 nm。

实例4：

将0.8 mL浓度为1.5 mmol/L的胆碱，0.25 mL浓度为2 U/mL的胆碱氧化酶，1 mL浓度为0.8 mmol/L的N-乙基-N-（3-磺丙基）-3-甲基苯胺钠盐，0.8 mL浓度为21 mmol/L的4-氨基安替比林，0.1 mL浓度为0.36 mmol/L的牛血清白蛋白-铂复合纳米材料依次加入到1.05 mL浓度为50 mmol/L的不同pH的Tris-盐酸缓冲液（pH4.0~9.0）中，摇匀后置于30 ℃温浴，80分钟后测定显色产物在550 nm处的吸光度。如图3所示，吸光度在pH为7.0~8.0达到最大值。

实例5：

将0.8 mL浓度为1.5 mmol/L的胆碱，0.25 mL浓度为2 U/mL的胆碱氧化酶，1 mL不同浓度（0.1~2.0 mmol/L）的N-乙基-N-（3-磺丙基）-3-甲基苯胺钠盐，0.8 mL浓度为21 mmol/L的4-氨基安替比林，0.1 mL浓度为0.36 mmol/L的牛血清白蛋白-铂复合纳米材料依次加入到1.05 mL浓度为50 mmol/L 的Tris-盐酸缓冲液（pH=7.5）中，摇匀后置于30 ℃温浴，80分钟后测定显色产物在550 nm处的吸光度。如图4所示，吸光度随着N-乙基-N-（3-磺丙基）-3-甲基苯胺钠盐浓度的增大而增大，并在N-乙基-N-（3-磺丙基）-3-甲基苯胺钠盐的终浓度为0.2 mmol/L之后达到最大值。

实例6：

将0.8 mL浓度为1.5 mmol/L的胆碱，0.25 mL浓度为2 U/mL的胆碱氧化酶，1 mL浓度为0.8 mmol/L的N-乙基-N-（3-磺丙基）-3-甲基苯胺钠盐，0.8 mL不同浓度（0.13~26.25 mmol/L）的4-氨基安替比林，0.1 mL浓度为0.36 mmol/L的牛血清白蛋白-铂复合纳米材料依次加入到1.05 mL浓度为50 mmol/L 的Tris-盐酸缓冲液（pH=7.5）中，摇匀后置于30 ℃温浴，80分钟后测定显色产物在550 nm处的吸光度。如图5所示，吸光度随着4-氨基安替比林浓度的增大而增大，并在4-氨基安替比林的终浓度为4.2 mmol/L之后达到最大值。

实例7：

将0.8 mL浓度为1.5 mmol/L的胆碱，0.25 mL浓度为2 U/mL的胆碱氧化酶，1 mL浓度为0.8 mmol/L的N-乙基-N-（3-磺丙基）-3-甲基苯胺钠盐，0.8 mL浓度为21 mmol/L的4-氨基安替比林，0.1 mL不同浓度（0.072~0.576 mmol/L）的牛血清白蛋白-铂复合纳米材料依次加入到1.05 mL浓度为50 mmol/L 的Tris-盐酸缓冲液（pH=7.5）中，摇匀后置于30 ℃温浴，80分钟后测定显色产物在550 nm处的吸光度。如图6所示，吸光度随牛血清白蛋白-铂复合纳米材料浓度的增大而增大，并在牛血清白蛋白-铂复合纳米材料的终浓度为9 μmol/L之后达到最大值。

实例8：

将0.8 mL浓度为1.5 mmol/L的胆碱，0.25 mL不同浓度（4~2.8 U/mL）的胆碱氧化酶，1 mL浓度为0.8 mmol/L的N-乙基-N-（3-磺丙基）-3-甲基苯胺钠盐，0.8 mL浓度为21 mmol/L的4-氨基安替比林，0.1 mL浓度为0.36 mmol/L的的牛血清白蛋白-铂复合纳米材料依次加入到1.05 mL浓度为50 mmol/L 的Tris-盐酸缓冲液（pH=7.5）中，摇匀后置于30 ℃温浴，80分钟后测定显色产物在550 nm处的吸光度。如图7所示，吸光度随胆碱氧化酶浓度的增大而增大，并在胆碱氧化酶的终浓度为0.125 U/mL之后达到最大值。

实例9：

将0.8 mL浓度为1.5 mmol/L的胆碱，0.25 mL浓度为2 U/mL的胆碱氧化酶，1 mL浓度为0.8 mmol/L的N-乙基-N-（3-磺丙基）-3-甲基苯胺钠盐，0.8 mL浓度为21 mmol/L的4-氨基安替比林，0.1 mL浓度为0.36 mmol/L的牛血清白蛋白-铂复合纳米材料依次加入到1.05 mL浓度为50 mmol/L 的Tris-盐酸缓冲液（pH=7.5）中，摇匀后分别置于不同温度（20~50 ℃）下温浴，80分钟后测定显色产物在550 nm处的吸光度。如图8所示，吸光度在反应温度为30 ℃时达到最大值。

实例10：

将0.8 mL浓度为3 mmol/L的胆碱，0.25 mL浓度为2 U/mL的胆碱氧化酶，1 mL浓度为0.8 mmol/L的N-乙基-N-（3-磺丙基）-3-甲基苯胺钠盐，0.8 mL浓度为21 mmol/L的4-氨基安替比林，0.1 mL浓度为0.36 mmol/L的牛血清白蛋白-铂复合纳米材料依次加入到1.05 mL浓度为50 mmol/L 的Tris-盐酸缓冲液（pH=7.5）中，摇匀后置于30 ℃温浴，不同反应时间（0~90分钟）后测定显色产物在550 nm处的吸光度。如图9所示，吸光度随着反应时间的延长而增大，并在反应时间为80分钟之后达到最大值。

实例11：

将0.8 mL不同浓度的胆碱，0.25 mL浓度为2 U/mL的胆碱氧化酶，1 mL浓度为0.8 mmol/L的N-乙基-N-（3-磺丙基）-3-甲基苯胺钠盐，0.8 mL浓度为21 mmol/L的4-氨基安替比林，实例1制备的0.1 mL浓度为0.36 mmol/L的牛血清白蛋白-铂复合纳米材料依次加入到1.05 mL浓度为50 mmol/L 的Tris-盐酸缓冲液（pH=7.5）中，摇匀后置于30 ℃温浴，80分钟后测定显色产物在550 nm处的吸光度。以吸光度对胆碱浓度作图得到标准曲线，如图10所示，吸光度与胆碱浓度在6~400 μmol/L范围内呈线性关系，检测限为2.5 μmol/L。

实例12：

在6 g 婴儿奶粉样品中加入10 mL浓度为1.0 mol/L的盐酸溶液，摇匀后70 ℃水浴回流5小时。过滤，滤液用氢氧化钠调节至pH 5~5.5，用水定量稀释至15 mL。

实例13：

将0.8 mL经实例12前处理后的婴儿奶粉样品，0.25 mL浓度为2 U/mL的胆碱氧化酶，1 mL浓度为0.8 mmol/L的N-乙基-N-（3-磺丙基）-3-甲基苯胺钠盐，0.8 mL浓度为21 mmol/L的4-氨基安替比林，实例1制备的0.1 mL浓度为0.36 mmol/L的牛血清白蛋白-铂复合纳米材料依次加入到1.05 mL浓度为50 mmol/L 的Tris-盐酸缓冲液（pH=7.5）中，摇匀后置于30 ℃温浴，80分钟后测定显色产物在550 nm的吸光度。经实例11所得的标准曲线计算出胆碱的含量，此数值与国家标准检测婴儿奶粉中胆碱的方法（GB/T 5413.20-1997）检测出的数值一致（F_0.05, 2, 2=19.00, t_0.05, 4=2.776）。样品的测定回收率为96.5%~102.1%，相对标准偏差为2.0~3.0%。

Claims

1.一种基于牛血清白蛋白-铂复合纳米材料测定胆碱的方法，其特征是利用胆碱氧化酶催化胆碱氧化生成过氧化氢，牛血清白蛋白-铂复合纳米材料催化过氧化氢氧化N-乙基-N-（3-磺丙基）-3-甲基苯胺钠盐）与4-氨基安替比林形成紫色产物以鉴定胆碱。

2.一种基于牛血清白蛋白-铂复合纳米材料测定胆碱的方法，其特征是在EP管中依次加入Tris-盐酸缓冲溶液、胆碱、胆碱氧化酶、N-乙基-N-（3-磺丙基）-3-甲基苯胺钠盐、4-氨基安替比林和牛血清白蛋白-铂复合纳米材料，将混合液放入恒温水浴中反应，生成紫色产物，用紫外可见分光光度计测定反应产物的吸光度以测定胆碱。

3.根据权利要求1或2所述的基于牛血清白蛋白-铂复合纳米材料测定胆碱的方法，其特征是反应生成紫色产物的最大吸收峰为550 nm。

4.根据权利要求1或2所述的基于牛血清白蛋白-铂复合纳米材料测定胆碱的方法，其特征是牛血清白蛋白-铂复合纳米材料采用以下制备方法制得：在5 mL浓度为50 mg/mL 牛血清白蛋白水溶液中加入5 mL浓度为16 mmol/L的氯铂酸水溶液，混匀后加入0.5 mL浓度为1.5 mol/L氢氧化钠水溶液，80 ℃水浴加热2小时，所得溶液经过超滤并水洗，得到牛血清白蛋白-铂复合纳米材料水溶液，反应后溶液装入截止分子量为3k的超滤离心管，6000 r/min离心超滤，并水洗3次。

5.根据权利要求1或2所述的基于牛血清白蛋白-铂复合纳米材料测定胆碱的方法，其特征是恒温水浴中反应体系的pH值为7.5。

6.根据权利要求1和2所述的基于牛血清白蛋白-铂复合纳米材料测定胆碱的方法，其特征是恒温水浴中反应体系中N-乙基-N-（3-磺丙基）-3-甲基苯胺钠盐的浓度为0.2 mmol/L，4-氨基安替比林的浓度为4.2 mmol/L，牛血清白蛋白-铂复合纳米材料的浓度为9 μmol/L，胆碱氧化酶的浓度为0.125 U/mL。

7.根据权利要求1和2所述的基于牛血清白蛋白-铂复合纳米材料测定胆碱的方法，其特征是恒温水浴中反应体系的反应温度为30 ℃，反应时间为80分钟。

8.一种基于牛血清白蛋白-铂复合纳米材料测定胆碱的方法，其特征是将0.8 mL不同浓度的胆碱，0.25 mL浓度为2 U/mL的胆碱氧化酶，1 mL浓度为0.8 mmol/L的N-乙基-N-（3-磺丙基）-3-甲基苯胺钠盐，0.8 mL浓度为21 mmol/L的4-氨基安替比林，0.1 mL浓度为0.36 mmol/L的牛血清白蛋白-铂复合纳米材料依次加入到1.05 mL浓度为50 mmol/L、pH=7.5的Tris-盐酸缓冲液中，摇匀后置于30 ℃温浴，80分钟后测定显色产物在550 nm的吸光度，以吸光度对胆碱浓度作图得到标准曲线，吸光度与胆碱浓度在6~400 μmol/L范围内呈线性关系，检测限为2.5 μmol/L。

9.一种基于牛血清白蛋白-铂复合纳米材料测定婴儿奶粉中胆碱的方法，其特征是在EP管中依次加入Tris-盐酸缓冲溶液、前处理后的婴儿奶粉样品、胆碱氧化酶、N-乙基-N-（3-磺丙基）-3-甲基苯胺钠盐、4-氨基安替比林和牛血清白蛋白-铂复合纳米材料形成混合液，将混合液放入恒温水浴中反应，用紫外可见分光光度计测定在550 nm的紫外吸收，根据胆碱标准曲线计算婴儿奶粉中胆碱含量。

10.根据权利要求9所述的基于牛血清白蛋白-铂复合纳米材料测定婴儿奶粉中胆碱的方法，其特征是婴儿奶粉样品的前处理方法为：将在6 g 婴儿奶粉样品中加入10 mL浓度为1.0 mol/L的盐酸溶液，摇匀后70 ℃水浴回流5小时，过滤，滤液用氢氧化钠调节至pH 5~5.5，用水定量稀释至15 mL；依次取上述前处理后的婴儿奶粉样品溶液0.8 mL、浓度为2 U/mL的胆碱氧化酶0.25 mL、浓度为0.8 mmol/L的N-乙基-N-（3-磺丙基）-3-甲基苯胺钠盐1 mL、浓度为21 mmol/L的4-氨基安替比林0.8 mL和浓度为0.36 mmol/L的牛血清白蛋白-铂复合纳米材料0.1 mL加入到1.05 mL浓度为50 mmol/L、 pH=7.5的Tris-盐酸缓冲液中，摇匀后置于30 ℃温浴，80分钟后测定其在550 nm的吸光度，根据胆碱标准曲线计算婴儿奶粉中的胆碱含量。