CN103933097A - 一种增强动物免疫力的药物组合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种增强动物免疫力的药物组合物，它是含有如下重量配比的原料药制备而成的剂型：紫锥菊根1～10份、刺五加1～10份。本发明药物组合物，配伍精当，各原料药配合使用发挥了协同增效作用，能够显著提高动物免疫力，增强疫苗活性，为兽用药物提供了新的选择。

Description

一种增强动物免疫力的药物组合物及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种增强动物免疫力的药物组合物及其制备方法。

背景技术

动物病毒性疾病严重危害畜牧业发展，某些人兽共患病还威胁着人类健康，包括猪蓝耳病、猪瘟、口蹄疫等，疫苗免疫失败，猪群免疫功能低下，猪群疾病越来越复杂，对我国养猪业的健康、快速、稳定发展造成了严重的影响。2004年以来，农业部取消了抗病毒类化药在兽医临床的使用，即目前尚无抗病毒类化学类药物在兽医临床上的应用，因此兽医临床主要靠采用中兽药来进行病毒性疾病的防控。我国具有丰富的中兽药资源优势和扎实的研究基础，其中包括如黄芪、人参等具有提高免疫功能的中兽药的研究。在实际养殖过程中，中兽药的使用，以提高猪的免疫功能为目的，可防治免疫抑制性疾病的困扰，提高疫苗免疫效果，是保证我国养猪业的健康、快速、稳定发展的首要选择，这些中草药通过提高机体的防御功能，从而使机体达到“正气内存，邪不可干”的作用，从而起到有效的间接抗病毒作用，该类中药在提高动物机体免疫力的同时，可改善动物的机体的适应能力，健脾开胃，提高动物食欲，从而促进畜禽的顺利生长。

超微粉碎技术是近30年来国际上迅速发展的一项新技术，它是利用机械或流体动力的方法将物料颗粒粉碎至微米甚至纳米级微粉的过程。中药材经超微粉碎后，可提高细胞的破壁率，增加药材的比表面积，使药物有效成分溶出增加，生物利用度提高，从而可减少临床用药量。因此，将该技术用于中药制剂中具有提高药物溶解度、改善制剂外观形态、促进药物吸收、增强临床疗效等作用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种增强动物免疫力的药物组合物。本发明的另一目的在于提供该药物组合物的制备方法及用途。

本发明提供了一种增强动物免疫力的药物组合物，它是含有如下重量配比的原料药制备而成的剂型：

紫锥菊根1～10份、刺五加1～10份。

进一步地，它是含有如下重量配比的原料药制备而成的剂型：

紫锥菊根1～2份、刺五加1～2份。

进一步地，它是由如下重量配比的原料药制备而成的剂型：

紫锥菊根1～10份、刺五加1～10份。

更近一步地，它是由如下重量配比的原料药制备而成的剂型：

紫锥菊根1～2份、刺五加1～2份；优选为紫锥菊根1份、刺五加2份。

紫锥菊根来源于菊科(Asteraceae)松果菊属(Echinacea Moench)紫花紫锥菊Echinacea purpurea(L)Moench的干燥的根和根状茎。

其中，它是由所述原料药的药粉、水提物或/和乙醇提取物为活性成分，加上兽药上常用的辅料或辅助性成分制备而成的剂型。

其中，所述剂型为经胃肠道吸收剂型。如散剂、颗粒剂、口服液、片剂、丸剂等。

水提物或以药粉入药，均是中药传统使用方式，水提后，由于水的溶解范围广，能够将大部分有效成分溶出，使药物更容易被人体吸收，起效更快，例如汤剂等给药形式；以原粉入药，药粉的表面积较大，也有利于药材中有效成分在体内的吸收，但药材未经提取，有效成分仍需在体内溶出再吸收，其起效相对水提物较慢，但也同时削弱了药材中有害成分对人体造成的毒副反应，适合于长期服用，如将原粉制备成丸剂等给药形式。目前在制药过程中，乙醇作为溶剂对药物进行提取，也是最为常见的提取方式之一，乙醇为半极性溶剂，溶解性能界于极性与非极性溶剂之间，可以溶解水溶性的某些成分，也能溶解非极性溶剂溶解的一些成分，通常用乙醇提取代替水煎，从而避免大量无效成分的溶出，提高有效成分的浓度和提取效率，不过乙醇的价格较水贵，在现代制药工业大生产中，为了节省生产成本，通常还是以水煎为主。在本发明已知组合物水提物具有生理活性的情况下，为了适应各种生产和使用时的需求，可以任选水提、原粉、醇提或它们的组合方式来制备具体的剂型。

本发明所述药学上可接受的辅料包括但不仅限于填充剂(稀释剂)、润滑剂(助流剂或抗粘着剂)、分散剂、湿润剂、粘合剂、调节剂、增溶剂、抗氧剂、抑菌剂、乳化剂、崩解剂等。粘合剂包含糖浆、阿拉伯胶、明胶、山梨醇、黄芪胶、纤维素及其衍生物(如微晶纤维素、羧甲基纤维素钠、乙基纤维素或羟丙甲基纤维素等)、明胶浆、糖浆、淀粉浆或聚乙烯吡咯烷酮等；填充剂包含乳糖、糖粉、糊精、淀粉及其衍生物、纤维素及其衍生物、无机钙盐(如硫酸钙、磷酸钙、磷酸氢钙、沉降碳酸钙等)、山梨醇或甘氨酸等；润滑剂包含微粉硅胶、硬脂酸镁、滑石粉、氢氧化铝、硼酸、氢化植物油、聚乙二醇等；崩解剂包含淀粉及其衍生物(如羧甲基淀粉钠、淀粉乙醇酸钠、预胶化淀粉、改良淀粉、羟丙基淀粉、玉米淀粉等)、聚乙烯吡咯烷酮或微晶纤维素等；湿润剂包含十二烷基硫酸钠、水或醇等；抗氧剂包含亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、二丁基苯酸等；抑菌剂包含0.5％苯酚、0.3％甲酚、0.5％三氯叔丁醇等；调节剂包含盐酸、枸橼酸、氢氧化钾(钠)、枸橼酸钠及缓冲剂(包括磷酸二氧钠和磷酸氢二钠)等；乳化剂包含聚山梨酯-80、没酸山梨坦、普流罗尼克F-68，卵磷酯、豆磷脂等；增溶剂包含吐温-80、胆汁、甘油等。

所述药学上可接受的辅助性成分，它具有一定生理活性，但该成分的加入不会改变上述药物组合物在疾病治疗过程中的主导地位，而仅仅发挥辅助功效，这些辅助功效仅仅是对该成分已知活性的利用，是医药领域惯用的辅助治疗方式。若将上述辅助性成分与本发明药物组合物配合使用，仍然应属于本发明保护的范围。

当然，本发明药物组合物，还包括上述各药材的提取物，通过上述配比和提取率换算得到的各提取物配伍使用的组合物。

本发明还提供了上述药物组合物的制备方法，它包括如下操作步骤：

(1)按配比称取原料药；

(2)取原料药的超微粉，加上兽药上常用的辅料或辅助性成分制备成剂型。

本发明还提供了上述药物组合物在制备提高动物免疫力的药物中的用途。

进一步地，所述药物是增强鸡新城疫疫苗活性的药物。

进一步地，所述动物为哺乳动物或禽类，如为鸡、鸭、猪、牛、羊或鼠。

本发明药物组合物，配伍精当，各原料药配合使用发挥了协同增效作用，能够显著提高动物免疫力，增强疫苗活性，为兽用药物提供了新的选择。

具体实施方式

实施例1本发明组合物的制备

紫锥菊根500g    刺五加1000g

(1)取刺五加、紫锥菊根药材，鼓风干燥使含水量为5％以下，常规粉碎过五号筛(80目)，得药材细粉混合物，将混合物置超微粉碎机中，于-20℃的低温条件下超微粉碎20分钟以上，过300目筛，得粒径小于50μm的超微粉。

(2)将超微粉分装、灭菌，得到提高畜禽免疫力的中兽药超微散剂。

实施例2本发明组合物的制备

紫锥菊根500g    刺五加500g

(1)取刺五加药材，加12倍量水煎煮提取4次，滤过，滤液浓缩至密度为1.10～1.12的浸膏，喷雾干燥(喷雾干燥条件：进风温度：150～170℃，出风温度：90～100℃)，制成刺五加浸膏粉。

(2)取紫锥菊根药材，鼓风干燥使含水量为5％以下，常规粉碎过五号筛(80目)，得药材细粉混合物，将混合物置超微粉碎机中，于-20℃的低温条件下超微粉碎20分钟以上，过300目筛，得粒径小于50μm的超微粉。

(3)将超微粉、刺五加浸膏粉混合均匀后，分装、灭菌，得到提高畜禽免疫力的中兽药超微散剂。

实施例3本发明组合物的制备

紫锥菊根500g    刺五加250g

(1)取紫锥菊根、刺五加药材，加15倍量水煎煮提取4次，滤过，滤液浓缩至密度为1.10～1.12的浸膏，喷雾干燥(喷雾干燥条件：进风温度：150～170℃，出风温度：90～100℃)，制成浸膏粉。

(2)将浸膏粉分装、灭菌，得到提高畜禽免疫力的中兽药超微散剂。

以下通过试验例具体说明本发明的有益效果。下述各试验例中，各中药实验组给药剂量均以生药量计。下述试验中，本发明药物组合物也称为紫刺超微散。

试验例1本发明药物组合物的药效活性研究

1动物分组

昆明小鼠140只，雌雄各半，随机分为7组；

正常对照组：灌服生理盐水0.5ml/只，连续7d；

环磷酰胺模型组：灌服生理盐水0.5ml/只，连续7d，于灌服第3天，腹腔注射环磷酰胺80mg/kg体重，连续2d；

刺五加+环磷酰胺组(3组)：灌服刺五加超微粉混悬液1000mg/kg体重，连续7d，于灌服第3天，腹腔注射环磷酰胺80mg/kg体重，连续2d；

紫锥菊根+环磷酰胺组(4组)：灌服紫锥菊根超微粉混悬液1000mgmg/kg体重，连续7d，于灌服第3天，腹腔注射环磷酰胺80mg/kg体重，连续2d；

紫刺超微散组+环磷酰胺组(给药1,2,3组)：灌服中药超微散1000mg/kg体重，连续7d，于灌服第3天，腹腔注射环磷酰胺80mg/kg体重，连续2d。(分别按表1比例进行组方，按制备方法1制备得到紫刺超微散。)

表1不同组方的药材比例

2小鼠免疫器官指数的测定

给药结束后称小鼠体重，颈椎脱臼处死小鼠，称其脾脏湿重，计算脾指数:

脾指数＝脾重量(mg)/体重(g)

3单核巨噬细胞吞噬功能(碳粒廓清速率)的测定

各组末次给药后1h，称体重，各鼠均按0.1ml/10g剂量由尾静脉注入印度墨汁(以生理盐水按1：5稀释)，注射后分别在1min(t₁)和5min(t₂)从小鼠眼眶静脉丛取血20μl，溶于2.0ml浓度0.1％Na₂CO₃溶液中，摇匀，放置20min后于680nm处测其吸光度值(A)，以浓度0.1％Na₂CO₃溶液作空白对照，将小鼠处死后取肝脏和脾脏，用滤纸吸干血迹后称重，根据公式计算廓清指数K值和校正廓清指数α值。计算公式:

K＝(logA₁-logA2)/(t₂-t₁)

α＝K^1/3х体重/(肝重+脾重)

4小鼠血清溶血素的检测

给药第3天，每鼠腹腔注射2％SRBC0.2ml致敏，并继续给药。致敏后第4天于末次给药后90min取小鼠眼球血，静置1h，2000r/min离心10min，取上层血清20μl，用NS稀释500倍，取该血清样1ml作为补体，37℃温浴1h，反应结束，将反应管立即移入冰浴中，以终止反应，以2000r/min离心10min，取1ml上清液盛于含3ml都氏试剂的试管摇匀，放置10min后，于540nm测其吸光度值(A)。计算小鼠的半数溶血值(HC₅₀)。

样品HC₅₀＝(样品的吸光度值/SRBC半数溶血时的吸光度值)х稀释倍数

5数据处理

利用SPSS13.0进行统计分析，显著性分析采用单因素方差分析和多重比较。

6结果及分析

表2不同比例中药超微散对小鼠免疫活性影响试验结果

注：a)，与正常组比，P<0.05；

b)，与模型组比，P<0.05；

由表1结果可知，正常小鼠腹腔注射环磷酰胺后，显著降低小鼠脾脏的重量,与正常对照组相比差异显著(P<0.05)，说明免疫抑制模型建立成功；刺五加组能提高免疫抑制小鼠相关免疫指标，但差异不显著；紫锥菊根组能显著提高免疫抑制小鼠廓清指数、吞噬指数、半数溶血值等指标(P<0.05)，而三组中药组合物超微散均能显著提高免疫抑制小鼠脾脏指数(P<0.05)；同时，三组中药超微散均能明显提高免疫抑制小鼠半数溶血值、吞噬指数、廓清指数等指标,与环磷酰胺组相比差异显著(P<0.05)，且疗效明显优于刺五加和紫锥菊根单味药超微粉组。

实验结果表明，三种比例组方均能提高免疫抑制小鼠的免疫活性,可对抗环磷酰胺引起的免疫抑制，不同比例的组方均优于刺五加和紫锥菊根单味药超微粉组。三种比例组方相比，以第一种组方疗效最优，即刺五加和紫锥菊根最佳组方比例为2:1。

试验例2临床验证试验

1材料与方法

试验用鸡:14日龄健康罗曼母雏90羽；紫锥菊根超微散；紫刺超微散(药材比例为刺五加：紫锥菊根＝2:1，按制备方法1制备)；疫苗:ND-Lasota弱毒冻干苗；鸡新城疫HI测试抗原由实验室自行配制。

2分组设计及试验方法

(1)分组设计

罗曼雏鸡90羽随机分成三组，每组30羽。1日龄注射马立克(MD)疫苗，14日龄测定各组鸡的ND母源抗体，并同时按分组设计要求进行免疫试验。

对照组:颈部皮下注射用生理盐水稀释的ND-Lasota弱毒冻干苗0.2mL/羽，正常饲养；

紫锥菊根超微散试验组：颈部皮下注射用生理盐水稀释的ND-Lasota弱毒冻干苗0.2mL/羽，以后每天拌料给与紫锥菊根超微散(1g/kg体重)，连续5天。

紫刺超微散试验组：颈部皮下注射用生理盐水稀释的ND-Lasota弱毒冻干苗0.2mL/羽，以后每天拌料给与紫刺超微散(1g/kg体重)，连续5天。(2)试验方法

试验后分别在第10、20、40天每组每次取10羽翅静脉采血,进行HI抗体检测。

3试验结果和结论

表3免疫后各组鸡HI抗体效价(n＝10)

注：a)，与正常组比，P<0.01；

试验结果见表3，由试验结果可知，实验前(14日龄)HI抗体效价差异不显著，表明免疫前各组别试验基础相同，免疫结果有效。对照组和给药组在免疫后第10天测定HI抗体效价，各组的抗体水平均较高，差异不显著(P>0.05)，免疫后第20天和40天测定HI抗体效价，试验组与对照组相比差异显著(P>0.05)，说明紫刺超微散组对鸡新城疫疫苗诱导的体液免疫有显著的增强作用，还可使血清抗体的维持时间延长，从而对保证抗体持续发挥疗效，延长疫苗免疫期具有很强的实践意义。

Claims (10)

1.一种增强动物免疫力的药物组合物，其特征在于：它是含有如下重量配比的原料药制备而成的剂型：

紫锥菊根1～10份、刺五加1～10份。

2.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于：它是含有如下重量配比的原料药制备而成的剂型：

紫锥菊根1～2份、刺五加1～2份。

3.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于：它是由如下重量配比的原料药制备而成的剂型：

紫锥菊根1～10份、刺五加1～10份。

4.根据权利要求3所述的药物组合物，其特征在于：它是由如下重量配比的原料药制备而成的剂型：

紫锥菊根1～2份、刺五加1～2份；优选为紫锥菊根1份、刺五加2份。

5.根据权利要求1～4任意一项所述的药物组合物，其特征在于：它是由所述原料药的药粉、水提物或/和乙醇提取物为活性成分，加上兽药上常用的辅料或辅助性成分制备而成的剂型。

6.根据权利要求1～5任意一项所述的药物组合物，其特征在于：所述剂型为经胃肠道吸收剂型。

7.权利要求1～6任意一项所述药物组合物的制备方法，其特征在于：它包括如下操作步骤：

(1)按配比称取原料药；

(2)取原料药的超微粉，加上兽药上常用的辅料或辅助性成分制备成剂型。

8.权利要求1～6任意一项所述药物组合物在制备提高动物免疫力的药物中的用途。

9.根据权利要求8所述的用途，其特征在于：所述药物是增强鸡新城疫疫苗活性的药物。

10.根据权利要求8所述的用途，其特征在于：所述动物为哺乳动物或禽类。