CN103911347A - 抗单核细胞增生李斯特菌单克隆抗体及应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了抗单核细胞增生李斯特菌单克隆抗体杂交瘤细胞株，解决了可靠的LM单克隆抗体不易获得的问题，经多年多次传代，能稳定分泌单克隆抗体，它分泌的单克隆抗体，应用于液相芯片和胶体金法检测食品中单核细胞增生李斯特氏菌，具有良好的灵敏性、特异性、稳定性和可重复性等优点。病原在浓度很低的情况下也能被检出，进一步提高检测灵敏度和检出率，严防漏检和误检。

Description

抗单核细胞增生李斯特菌单克隆抗体及应用

技术领域

本发明属于生物技术领域，确切地说是抗单核细胞增生李斯特菌单克隆抗体及应用。 

背景技术

单核细胞增生李斯特菌（Listeria monocytogenes，LM）是最常见的食源性致病菌之一，WHO 将其与大肠杆菌 O157:H7、沙门氏菌以及金黄色葡萄球菌并列为20世纪90年代四大食源性致病菌。LM是李斯特菌属中致病力最强的细菌，也是唯一对人致病的、典型的胞内寄生菌，可穿越宿主三道屏障，从而导致严重的人畜共患传染病，如胃肠炎、脑膜炎、败血症、流产等。孕妇、新生儿、老年人以及免疫功能缺陷者感染该菌后致死率达20-30%，新生儿等免疫力低下者的致死率高达70%。牛、马、羊、兔、鸡、猪等畜禽感染该菌后会造成严重的脑膜炎、坏死性心肌炎及坏死性肝炎，致死率为 52-100%。近年来，食品感染 LM 而引起的召回或销毁事件也不断发生，给食品行业和国民经济造成了重大损失，已报道的2011年期间全球范围内的食品召回事件高达17起。为此在三十三届食品法典委员会会议上专门设立了《食品中产单核李斯特菌控制守则》等三个议题，许多国家将 LM 列为严重的食品污染菌和零检出项目。 

目前，我国对 LM 的检测主要采用传统的分离培养检测及鉴定、PCR、ELISA 和全自动鉴定系统等检测技术，传统的分离培养与生化鉴定一般需要 3-7 天，检测周期长，操作繁琐；PCR 技术需要提取核酸后进行扩增，DNA 提取过程中易受到外源核酸的影响，同时食品中的杂质和杂菌均会抑制 PCR 扩增，造成假阴性的出现；国内市场没有专门针对 LM 的 ELISA 试剂盒，所以 LM 的 ELISA 检测均需购买国外进口试剂盒，这无疑增加了检测成本，限制了 ELISA 的广泛应用；全自动鉴定系统价格高昂，很难在基层实验室普及。而且以上检测都存在一个共同的问题——在实际样品的实测中，均需要对食品进行预培养，以期通过增菌过程来提高 LM 的数量，但这样无疑延长了检测时间，不适合食源性致病菌的快速检测。针对这一实际情况，建立一套专门针对食品中微量 LM的灵敏、准确、特异、快速的检测技术，以保证病原在浓度很低的情况下也能被检出，进一步提高检测灵敏度和检出率，严防漏检和误检，是食品中微量致病菌检测亟待解决的问题之一。 

发明内容

本发明的目的是为了提高检测食品中微量 LM的灵敏性、准确性、特异性问题，而提供一株抗单核细胞增生李斯特菌单克隆抗体杂交瘤细胞株及其分泌的单克隆抗体和应用。 

抗单核细胞增生李斯特菌单克隆抗体杂交瘤细胞株，它的保藏编号为：CGMCC No.6252； 

抗单核细胞增生李斯特菌单克隆抗体，它是由上述的抗单核细胞增生李斯特菌单克隆抗体杂交瘤细胞株分泌的；

一种液相芯片检测单增生李斯特氏菌的试剂盒，它的检测抗体为上述的抗单核细胞增生李斯特菌单克隆抗体；

一种胶体金检测单增生李斯特氏菌的试纸条，它的检测抗体为上述的抗单核细胞增生李斯特菌单克隆抗体。

本发明提供了抗单核细胞增生李斯特菌单克隆抗体杂交瘤细胞株，解决了可靠的LM单克隆抗体不易获得的问题，经多年多次传代，能稳定分泌单克隆抗体，它分泌的单克隆抗体，应用于液相芯片和胶体金法检测食品中单核细胞增生李斯特氏菌，具有良好的灵敏性、特异性、稳定性和可重复性等优点。病原在浓度很低的情况下也能被检出，进一步提高检测灵敏度和检出率，严防漏检和误检。 

附图说明

图1 融合10天后倒置显微镜观察及染色体计数结果； 

图2 单克隆抗体柱纯化蛋白含量测定结果；

图3 单克隆抗体SDS-PAGE电泳检测结果；

图4 多克隆抗体的SDS-PAGE检测结果；

图5 捕获抗体最佳工作浓度的确定；

图6 灵敏度检测结果；

图7 特异性检测结果；

图8 重复性检测结果；

图9 胶体金试纸条的组装顺序。

具体实施方式

实施例1单核细胞增生李斯特菌抗原菌液的制备和BALB/c小鼠免疫

取本室-80℃保存的单核细胞增生李斯特菌（ATCC19111），划线法接种于胰酪胨大豆酵母浸膏琼脂（TSA）培养基（pH7.3 ± 0.1）上培养，常规方法增菌培养，6000r/min离心10min，收集菌体沉淀，用灭菌生理盐水重复离洗三次后进行菌落计数（2.4×10⁹ CFU/mL），加入终浓度为0.3%的甲醛4℃过夜使菌体灭活。次日将洗脱好的菌液在20KHZ、150W的冰浴条件下进行超声波使菌体细胞破碎，每次破碎10s，间隔10s，总用时20min。采用BCA蛋白测定试剂盒测定菌体蛋白含量，结果为2.548 mg/mL。

取8周龄雌性BALB/c小鼠进行免疫。首免采用上述灭活菌液（2×10⁸CFU/mL）与等量弗氏完全佐剂混合后腹腔注射50μL，皮下注射50μL，以后每隔2周免疫1次，换用弗氏不完全佐剂，剂量同前，共免3次。 

实施例2免疫小鼠血清抗体效价的测定

3免后，小鼠断尾采血，用常规间接ELISA方法检测血清效价。其中，包被抗原是实施例1所制备的单核细胞增生李斯特菌菌液，稀释度为1:40，阳性血清稀释度1:1600，酶标二抗为HRP(辣根过氧化物酶)标记的兔抗小鼠IgG（稀释度为1:15000）。测定结果表明，抗体效价为1:12800。

实施例3单核细胞增生李斯特菌单克隆抗体的制备

（1）杂交瘤细胞株的建立

①饲养细胞的制备：正常BABL/C小鼠断颈处死，将8mL HAT培养液注入腹腔，轻轻摇动小鼠身体数下后抽出培养液，调整细胞浓度至10⁵，按每孔100μL加入96孔细胞培养板，置37℃，5%CO₂细胞培养箱中培养过夜备用，此即为饲养细胞。

②骨髓瘤细胞的培养与细胞悬液的制备：融合前一周复苏骨髓瘤细胞（SP2/0），隔1天传代1次，融合选在传代后1天进行。融合前取约4瓶（25cm²）SP2/0细胞，用RPMI-1640培养液吹下各瓶细胞，1200r/min离心10min，重复2-3次，使用细胞计数板计数。 

③脾细胞悬液的制备：免疫小鼠摘眼球采血，4℃过夜后2500r/min离心10min，取血清于-20℃保存备用。小鼠处死后，常规方法取脾并用RPMI-1640培养液制备脾细胞悬液，计数。 

④细胞融合：调整上述制备SP2/0细胞与脾细胞数量比为1:5～1:10。1200r/min离心10min，弃上清液。轻弹离心瓶底，使细胞松散。在30s内逐滴缓慢加入37℃预热的PEG 0.8mL，静置60s。逐滴加入RPMI1640培养液，稀释离心瓶内PEG浓度，逐渐加快滴加速度，共加入RPMI1640培养液30mL。融合过程在8min内完成。1200r/min离心10min，弃上清液，加入40mL预热的HAT培养液，静置15min，滴到前一天制备的饲养细胞板中，每孔100μL。置于37℃，5%的CO₂培养箱中培养。融合后3-4天，在倒置显微镜下观察融合成功的细胞团出现，计算克隆数。第3-4天，6-7天用HAT培养液进行半量换液，第9-10天起用HT培养液进行半量换液。 

⑤ 阳性杂交瘤细胞株的筛选：待融合细胞生长至1/2视野（100倍镜下）以上时，如图1所示，可以进行上清效价检测，方法为常规间接ELISA法（阴性对照用SP2/0培养上清）。结果表明，筛出阳性杂交瘤细胞三孔，分别为3-B9、4-C3、5-B3。在亚克隆过程中，3-B9、4-C3两株细胞分泌抗体不稳定，阳性逐渐消失，仅5-B3经四次亚克隆筛选，分泌抗体稳定，阳性率100%，如表1所示。其中：抗单核细胞增生性李斯特菌单克隆抗体杂交瘤细胞株,5B3B5A2H9H7，已于2012年06月20日送中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（北京市北辰西路1号院3号）保藏，保藏编号为CGMCC  No.6252。 

（2）5B3B5A2H9H7杂交瘤细胞株亚克隆及扩大培养 

①杂交瘤细胞的亚克隆：用HT完全培养液将检测阳性孔中的融合细胞轻轻吹打至1.5mL EP管中，计数细胞后取出100个细胞至10mL HT中。将此细胞悬液滴至前一天制备的饲养细胞板中，每孔100μL。放入37℃，5%CO₂的培养箱中培养。第4天起观察细胞生长状况及进行半量换液。第1次换液前纪录每孔克隆数，待克隆细胞生长至1/2视野（100倍镜下）以上时，常规间接ELISA法检测上清抗体效价，选取单克隆阳性孔进行再次克隆，直到所有的克隆细胞孔都为阳性。

②杂交瘤细胞的扩大培养：将进行3-4次阳性亚克隆后达到阳性率100%，长满视野80%以上的孔中细胞吹起，移至24孔板中，进行传代和移至6孔板及细胞培养瓶中。 

（3）单克隆抗的大量制备（腹水法） 

接种杂交瘤细胞前一周将降植烷打入小鼠腹腔，每只0.1mL。用RPMI-1640培养液将细胞吹下，1000r/min离心10min，重悬后计数，调整细胞浓度为10⁶个/mL，每只鼠腹腔注射0.5mL。观察小鼠腹腔变化，至腹部明显明显膨大，行动不便时，在腹部插入5mL注射器，抽取淡黄色腹水。一般可抽取2-3次。并用SP2/0细胞打入另外小鼠腹腔制备阴性对照腹水。

（4）腹水的纯化与保存 

①粗提腹水IgG：腹水3000r/min离心20min，吸弃表层脂肪，上层几乎透明的液体为未纯化腹水。腹水中加入4倍体积的醋酸缓冲液（0.06mol/L，pH4.0），逐滴加入辛酸（33μl/mL腹水）边加边搅，加完后水浴震荡10min，全速漩涡震荡30s，重复3次后4℃静止2h顾，6000r/min，离心30min，去沉淀。取上清加入1/10体积的PBS（0.1mol/L），依次加入终浓度为33%、50%的饱和硫酸铵，每次加完后4℃静置2h或过夜，6000r/min，离心15min，弃上清，将沉淀溶于少量0.01mol/L PBS中。

② ProtienG柱纯化腹水IgG：粗提后的腹水经0.22μm过滤，使用AKTA蛋白纯化系统进行过滤。选用IgG纯化柱洗脱得到纯化后的小鼠腹水IgG。用PBS对得到的单克隆抗体进行超滤离心（超滤离心管为30KD），6000r/min，30min，重复4-5次，去除盐离子及浓缩。纯化后的单克隆抗体中可加入0.03%叠氮纳，于-20℃保存。 

实施例4单克隆抗体性质的鉴定

（1）单克隆抗体效价的测定

间接ELISA法测定抗体效价，方法同实施例2。收集的细胞培养上清或腹水分别从10倍和1000倍开始梯度稀释，以SP2/0细胞及阴性腹水相应稀释度为对照。结果表明，单核细胞增生李斯特菌杂交瘤细胞上清效价1:8000，腹水单抗效价大于1:128000，如表2所示。

（2）单克隆抗体亚型的鉴定 

应用Sigma抗体亚型鉴定试纸条对收集的腹水和细胞上清进行单抗亚型的鉴定，结果表明，单抗的亚型为IgM，如表3所示。

（3）单克隆抗体特异性的鉴定 

分别用沙门氏菌、阴沟肠杆菌、变形杆菌、克雷伯杆菌、粪肠球菌、坂崎肠杆菌、粘质沙雷杆菌、奇异变形杆菌、志贺菌、韦氏柠檬酸杆菌、白痢杆菌、空弯、沙门氏菌、霍乱杆菌、绿脓杆菌灭活菌液包板，常规间接ELISA方法测定单抗腹水与上述菌液反应的OD₄₅₀值，以单核细胞增生李斯特菌液做阳性对照，以阴性腹水做阴性对照。结果表明，制备的单抗与单核细胞增生李斯特菌具有较高的特异性，P/N为12.4366。

（4）单克隆抗体蛋白含量测定 

用BCA蛋白含量测定试剂盒按说明书操作，进行单抗蛋白浓度的测定。结果表明，蛋白含量为785.7μg/mL。如图2所示。

（5）单克隆抗体亲和力测定 

利用非竞争性酶免疫法测定抗体亲和力。用包被抗原蛋白浓度为1、0.5、0.25、0.125μg/mL进行包板，每孔100μL，37℃，2h。封闭后将单抗从5μg/mL开始进行倍比稀释，按间接ELISA方法测定四种包被浓度下不同抗体浓度的OD₄₅₀值。以抗体浓度为横坐标，以相应的吸光度值为纵坐标，可得到四条S形曲线。将S形的顶部设定为ODmax，分别找出四条曲线中50% ODmax对应的抗体浓度。将4个浓度两两一组，根据公式计算单抗的亲和常数。

Ka=(n-1)/2(n[Ab`]t-[Ab]t) 

注：n为每组中两个包被浓度的倍数，[Ab`]t和[Ab]t分别为每组中两个50% ODmax对应的抗体浓度（mol/L）。得到的6个Ka的平均值为1.20×10⁸ M^-1。

（6单克隆抗体分子量测定 

使用SDS-PAGE试剂盒按说明书操作，配制分离胶（12%）与浓缩胶（5%），上样电泳后，测定单克隆抗体蛋白的分子量，如图3所示。

实施例5生物素标记的单核细胞增生李斯特菌多克隆抗体的制备

（1）抗原的制备

抗原菌液的制备方法同实施例1所述。

（2）动物免疫及多抗效价测定 

取体重为2kg的新西兰大耳兔进行首免，免疫剂量为1mL/只，皮下多点注射。每隔2周进行1次免疫，免疫前耳缘静脉采血，-20℃保存。4次免疫后应用常规间接ELISA法测定血清多抗效价。结果表明，血清抗体效价为1:6400。

（3）血清IgG的分离 

兔麻醉后心脏采血，4℃倾斜放置过夜后，3000r/min离心30min，收集血清，按照辛酸-饱和硫酸铵法粗提及AKTA蛋白纯化系统纯化多克隆抗体。应用30KD超滤离心管离洗多抗，3000r/min，离心30min，重复3-4次。-20℃保存多抗。

（4）多克隆抗体性质鉴定 

多抗蛋白含量测定方法同实施例4中（5）所述，结果表明蛋白含量为50.778Ng/mL。

多抗效价测定采用常规间接ELISA方法，结果表明，纯化后多抗效价为1:12800。 

多抗特异性测定同实施例4中（4）所述，结果表明，与单核细胞增生李斯特菌反应的P/N值为9.981。 

多抗分子量测定同实施例4中（7）所述，结果如图4所示。 

（5）生物素用量计算及标记多抗反应 

所需生物素量（mmol）=标记蛋白体积×标记蛋白含量×(20/标记蛋白分子量)

所需生物素溶液体积（μL）=所需生物素量×433×500/2.2

生物素标记多抗反应采用常规方法进行。

（6）生物素标记水平的测定 

①试剂：1.94mLPBS中加入10mg生物素（Avidin）和10mmol/L的4’-羟基偶氮苯-2-羧酸(HABA) 100μL，配制成HABA/Avidin溶液。

②微孔板模式测定标记水平：每孔中加入180μL HABA/Avidin溶液，测500nm处吸光度值，记为A₅₀₀HABA/Avidin。再加入20μL生物素标记蛋白，混匀后测定500nm处吸光度值，记为A₅₀₀HABA/Avidin/Biotin-sample。 

③计算标记水平： 

光度变化值（△A500）=A₅₀₀HABA/Avidin-A₅₀₀HABA/Avidin/Biotin-sample。

反应混合物中生物素浓度（mmol/mL）=△A500/34000 

实施例6捕获抗体与微球偶联形成偶联体的制备及工作浓度测定

取微球原液室温恢复30min，用超声波清洗机进行超声10min，漩涡震荡30s，使微球均匀分布。用无菌水分别配制50mg/mL的EDC和NHS。然后取200μL的微球原液置于1.5mL的离心管中，14000 r/min，离心5min。取出后弃上清，加入NHS和EDC各10μL，再加入80μL的活化缓冲液。混匀后，用铝箔纸包好，置于37℃摇床120 r/min，20min，然后14000 r/min，离心5min，小心移去上清。加入500μL稀释至250μg/mL的捕获抗体，重悬混匀，置于37℃摇床120 r/min，孵育2h。取出后离心弃上清，用500μL的PBS进行洗涤，洗涤后加入500μL 1％BSA的 PBS溶液，重悬微球，37℃水浴摇床孵育两个小时进行封闭。封闭后4℃保存。

检测结果表明，当单抗浓度为225μg/mL时，其MFI值达到最大，故单抗最佳的工作浓度为225μg/mL，如图5所示。 

实施例7应用液相芯片检测单增生李斯特氏菌的方法

将已偶联的微球混合液室温恢复10min，漩涡振荡器震荡约3min。取约5000个微球，加入10⁸ CFU/mL 的单核细胞增生李斯特氏菌10μL，用PBS-TBN补足体积到100μL。置于37℃摇床120r/min，1h。取出后离心弃上清，用200μL PBS-TBN洗两次。加入已稀释的检测抗体10μL，用PBS-TBN补足体积到100μL。 置于37℃摇床120 r/min，1h。取出后离心，弃上清，用PBS-TBN洗两次。然后加入已稀释的生物素标记的羊抗兔IgG 10μL，用PBS-TBN补足体积到100μL。 置于37℃摇床反应1h。取出后离心弃上清，用PBS-TBN洗两次。再加入SA-PE，用PBS-TBN补足体积到100μL，置于37℃摇床反应，取出后离心弃上清，用PBS-TBN洗涤两次。重悬于100μL PBS-TBN中，上机进行检测。

灵敏度检测结果表明，所建立方法在菌液浓度达到10³CFU/mL时仍可被检出。因此本方法的灵敏度较高，如图6所示。 

用建立的液相芯片检测单核细胞增生性李斯特氏菌的方法与其他细菌包括产气荚膜梭菌（ATCC13124）、肠炎沙门氏菌（50041-14）、金黄色葡萄球菌（26001-25）、单增李斯特氏菌（ATCC19111）、伤寒沙门氏菌（50071-7）、英诺克李斯特氏菌（ATCC19119）、大肠埃希菌（44102-20）、蜡样芽胞杆菌（63301-14）、大肠杆菌O157（ATCC11229）、空肠弯曲杆菌（33560）进行交叉试验，从图7可看出此方法特异性良好，与其它的菌无交叉反应。 

重复性检测结果表明，在1d，5d，7d用所建立的方法分别检测阳性菌和阴性菌，由图8所示，可见阳性菌和阴性菌MFI值上下浮动都不大，由此证明本方法重复性较好。 

将单核细胞增生李斯特标准菌株稀释到一定浓度加入鸡肉、兔肉中，经过6 h增菌培养，其检测灵敏度可达到10CFU/mL即在样品中若含有10CFU/mL的单核细胞增生李斯特菌在经过6h增菌后即可被检出，见表4。 

应用已建立的液相芯片方法和GB1789.30方法检测200份实际样品（鸡肉130份、牛肉20份、兔肉50份），检测结果如表5所示，两种方法检测结果基本相符，液相芯片法检测各种样品的假阳性率低于0.77％，说明所建立的方法检测结果准确。 

实施例8 单核细胞增生李斯特菌胶体金试纸条的制备

（1）胶体金探针的制备

取0.01%氯金酸水溶液100mL于洁净的锥形瓶中，加热至沸腾，磁力搅拌器下准确加入1.5mL新鲜配制的1%柠檬酸三钠水溶液，煮沸2-3min，溶液颜色由黄色变为紫红色，继续煮沸15min，冷却至室温后以蒸馏水恢复到原体积，4℃避光保存。

采用0.1mol/L的K₂CO₃溶液调节上述处理胶体金溶液pH值为8.0-8.5，优选8.3，将纯化的单核细胞增生李斯特菌单克隆抗体用5mM PB（pH8.0）稀释至28.5 μg/mL。 

（2）胶体金的抗体标记 

 取20mL胶体金溶液（pH8.3），在室温磁力搅拌下缓慢加入0.2mL待标记的单克隆抗体（终浓度为28.5μg/mL），搅拌20-30min。加入一定量的10%的BSA，使之终浓度为0.1%，搅拌5min。继续加入一定量的10%的PEG2000，使之终浓度为0.2%，搅拌5min。14000 r/min离心50rnin，小心吸除上清液，加2mL保存液悬浮沉淀，用0.45μm滤膜过滤，获得胶体金标记的单克隆抗体，4℃保存备用。

（3）金标垫的制备 

取上述金标抗体原液1mL，加入工作液2-5mL稀释，混匀后均匀地喷涂在玻璃纤维素膜上，制成金标抗体玻璃纤维素膜，自然干燥后密封保存子4℃冰箱中备用。

（4）包被抗体硝酸纤维素膜的制备 

用10mM pH7.6的PBS分别稀释单核细胞增生李斯特菌多克隆抗体（2.0 mg/mL）和羊抗鼠IgG（1.0 mg/mL），采用隔流金划线机以50mm/s的速度喷膜包被到硝酸纤维素膜上，分别作为检测线和对照线，检测线与对照线平行，室温自然干燥。

（5）胶体金试纸条的组装 

以PVC为基础底板，分别将样品垫、金标垫、包被有多抗和羊抗鼠IgG硝酸纤维素膜及吸水垫按图9顺序组装。

实施例9单核细胞增生李斯特菌胶体金试纸条的使用方法

将待检样品检测液滴在试纸条上的样品垫上或将试纸条的样品垫插入样品检测液中，然后平放1-5min，判定结果。检测线和对照线均出现红色或棕红色为阳性，仅对照线显色为阴性，若二者均不显色，表明操作有误或试纸条失效。

实施例10单核细胞增生李斯特菌胶体金试纸条的检验

（1）特异性

产气荚膜梭菌（ATCC13124）、肠炎沙门氏菌（50041-14）、金黄色葡萄球菌（26001-25）、单增李斯特氏菌（ATCC19111）、伤寒沙门氏菌（50071-7）、英诺克李斯特氏菌（ATCC19119）、大肠埃希菌（44102-20）、蜡样芽胞杆菌（63301-14）、大肠杆菌O157（ATCC11229）、空肠弯曲杆菌（33560）等10种细菌培养物用无菌PBS稀释至10⁹CFU/mL，用检测试纸条检验其特异性，结果表明，仅单增李斯特氏菌为阳性，其他均为阴性。

（2）敏感性 

将单增李斯特氏菌培养物用无菌PBS分别稀释至10⁴-10⁹ CFU/mL，用胶体金免疫层析检测试纸条检测其敏感度，结果表明，敏感性为10⁵ CFU/mL。

（3）实用性 

分别在奶粉、面粉、自来水、饮料、饼干、蛋糕和牛肉等食品样品中加入终浓度为10⁴-10⁹CFU/mL的单增李斯特氏菌，制成模拟现场检测样品，用检测试纸条检测其实用性，结果表明，单增李斯特氏菌的检出数为10⁵ CFU/mL，在1-5min内得出检测结果，适用于现场样品的检测。

（4）重复性 

用制备的10个批次试纸条，分别对10种各10份样品进行检测，其检测结果完全一致，即10份单核细胞增生李斯特菌样品全为阳性，其他受试样品均为阴性。

（5）稳定性 

用置于4℃和25℃存放不同时间的试纸条与新制备的试纸条平行检测阳性和阴性样本，结果表明，4℃保存有效期为18个月，25℃保存有效期为12个月。

Claims (4)

1.抗单核细胞增生李斯特菌单克隆抗体杂交瘤细胞株，它的保藏编号为：CGMCC No.6252。

2.抗单核细胞增生李斯特菌单克隆抗体，它是权利要求1所述的抗单核细胞增生李斯特菌单克隆抗体杂交瘤细胞株分泌的。

3.一种液相芯片检测单增生李斯特氏菌的试剂盒，它的检测抗体为权利要求2所述的抗单核细胞增生李斯特菌单克隆抗体。

4.一种胶体金检测单增生李斯特氏菌的试纸条，它的检测抗体为权利要求2所述的抗单核细胞增生李斯特菌单克隆抗体。