CN103881947A - 一株形成生物膜的缺陷短波单胞菌及其在含氰废水处理中的应用 - Google Patents

Abstract

一株形成生物膜的缺陷短波单胞菌及其在含氰废水处理中的应用属于生物修复技术；该缺陷短波单胞菌(Brevundimonas diminuta)N5，已于2013年04月07日保藏于“中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心”，其保藏号为CGMCCNo.7412。所述缺陷短波单胞菌(Brevundimonas diminuta)N5可以产生生物膜，当接种量为1.1％，30.6℃时，在含800mg·L^-1乙腈的合成废水中培养24h后，菌株的成膜量OD_570nm值为0.632。应用该菌株处理含氰废水，能够将乙腈降解菌对800mg·L^-1乙腈的降解率从24％-43％提升至30％-53％；该菌株与乙腈降解菌联合培养所形成的生物膜在反应器运行30d后可将800mg·L^-1乙腈完全去除并可降低出水COD值；本发明提供的菌株能够与高效乙腈降解菌混合挂膜，提高乙腈的去除效率，可以应用于含氰废水的生物膜法处理。

Description

一株形成生物膜的缺陷短波单胞菌及其在含氰废水处理中的应用

技术领域

本发明属于生物修复技术，主要涉及一株可产生物膜的缺陷短波单胞菌及其在含氰废水处理中的应用。

背景技术

生物膜是具有一定结构性和功能性的高度组织化的微生物群体，是微生物为其自身创造的独特生存方式。生物膜以其营养需求低，对水流剪切力的忍受度强，适应的pH范围广以及对抗生素的抗性能力强等优势被广泛应用于环境修复领域。生物膜法凭借其成本低、效率高、不会造成二次污染、稳定性强、环境条件要求低等诸多化学方法无法比拟的优点，成为污水治理领域的优势方法之一。

含氰废水是由氰化物的使用而产生的一种具有较高生物毒性的工业废水，是电镀、金属加工、炼钢、采矿、摄影、制药、炼焦及塑料工业等生产过程的副产物，其大量排放不仅会造成严重的环境污染，而且危及人类与动植物健康。乙腈是一种含氰基(R-CN)的有机化工原料，广泛用于制药、合成纤维、石油化工等领域，是含氰废水中的主要成分之一。随着乙腈产量和用量的迅速增加，含氰废水的排放量亦逐年增大。乙腈可由吸入、食入及皮肤吸收而进入体内，在生物体内转化为剧毒物质——氰化氢和乙醛，威胁人畜健康。含氰废水中的乙腈进入自然水域后会引起鱼类等水生生物大批死亡，对生态环境造成严重的破坏。

利用生物膜法处理含氰废水可以为含氰废水的生物治理提供一个新的途径。形成生物膜有利于提高细菌对有毒物质的承受能力和降解能力。向生物膜反应器中投加高效降解菌进行生物强化是生物法处理含氰废水的有效手段，然而在实际的污水处理过程中，降解菌株往往难以附着于载体表面，形成生物膜能力较弱。有研究表明，一些细菌能够发挥桥梁作用，将多种无亲缘关系的细菌组合进生物膜中，故在废水的处理中投加生物膜形成菌辅助降解菌挂膜是更可行的方法。因此，筛选出能够耐受高浓度氰化物的生物膜形成菌株，对于开展含氰废水的生物膜法处理具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一株形成生物膜能力强并且可以耐受高浓度乙腈的缺陷短波单胞菌，该菌产生的生物膜能够应用于含氰废水的处理中。

本发明的目的是通过如下技术方案实现的：

本发明所提供的生物膜形成菌为缺陷短波单胞菌(Brevundimonas diminuta)N5，已于2013年04月07日保藏于“中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC)”，其保藏号为CGMCCNo.7412。地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮政编码：100101。上述的缺陷短波单胞菌(Brevundimonas diminuta)N5可以产生生物膜，最适生物膜形成条件为：当培养液中添加5g·L^-1的蔗糖时，接种量1.1％，培养温度30.6℃，pH7.6，培养时间37.0h，菌株的成膜量OD_570nm值为3.062。

缺陷短波单胞菌(Brevundimonas diminuta)N5可耐受高浓度的乙腈：当接种量为1.1％，30.6℃时，在含800mg·L^-1乙腈的合成废水中培养24h后，菌株的成膜量OD_570nm值为0.632。因此，高浓度乙腈对生物膜形成菌的生长没有明显抑制作用。

缺陷短波单胞菌(Brevundimonas diminuta)N5可以提高乙腈降解菌的抗乙腈冲击能力：投加N5后，能够提高乙腈降解菌BX2单独培养所形成的生物膜的抗冲击水平，在12小时内将BX2对含有800mg·L^-1乙腈的合成废水连续降解率从24％-43％提升至30％-53％。

上述缺陷短波单胞菌(Brevundimonas diminuta)N5在含氰废水中的应用：缺陷短波单胞菌(Brevundimonas diminuta)N5能够促使乙腈降解菌BX2在生物膜内大量增殖并发挥其降解作用，投加N5后MBBR反应器运行30d，出水乙腈的浓度0mg·L^-1，COD浓度为38.5mg·L^-1。

所述的乙腈降解菌BX2为紫红色红球菌(Rhodococcus rhodochrous)，已于2013年04月07日保藏于“中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC)，其保藏号为CGMCCNo.7411。当乙腈浓度为800mg·L^-1时，在35℃，环境pH为7.5的条件下，16h时Rhodococcus sp.BX2对乙腈的降解率为95.98％。见于孙晶，熊明华，成小松Rhodococcus sp.BX2菌对乙腈的降解特性及其降解途径研究[J].环境科学学报，2012，32(5)：1041-1048.

生物膜反应器装置见于Chunyan Li，Immobilization of Rhodococcus rhodochrous BX2(anacetonitriledegrading bacterium)with biofilm-forming bacteria for wastewater treatment，Bioresource Technology131(2013)390-396.

本发明提供的菌株，丰富了生物膜形成菌的多样性，为细菌生物膜结构及机理研究提供重要菌株资源，该生物膜形成菌为生物膜法处理含氰废水奠定了基础。应用该菌株与高效乙腈降解菌联合培养产生的生物膜处理含氰废水，能够提高乙腈的去除效，率降低出水COD值，可以应用于含氰废水的生物膜法处理。

附图说明

图1缺陷短波单胞菌(Brevundimonas diminuta)N5在不同外加碳源条件下的生物膜形成量。

图2缺陷短波单胞菌(Brevundimonas diminuta)N5在不同蔗糖添加浓度下的生物膜形成量。

图3缺陷短波单胞菌(Brevundimonas diminuta)N5对乙腈的耐受及利用情况。

图4缺陷短波单胞菌(Brevundimonas diminuta)N5与乙腈降解菌联合培养时生物膜形成量。

图5乙腈降解菌单独培养对乙腈的生物降解能力。

图6缺陷短波单胞菌(Brevundimonas diminuta)N5与乙腈降解菌联合培养时对乙腈的生物降解能力。

图7MBBR生物膜反应器模拟含氰废水处理过程中，出水乙腈残留量变化曲线。

图8MBBR生物膜反应器模拟含氰废水处理过程中，出水COD变化曲线。

具体实施方式

实例1、缺陷短波单胞菌(Brevundimonas diminuta)N5的分离、纯化及鉴定

(1)缺陷短波单胞菌(Brevundimonas diminuta)N5的分离纯化

本发明提供的缺陷短波单胞菌(Brevundimonas diminuta)N5，分离于腈纶废水和污泥培养的生物膜，腈纶废水和污泥样品采集自大庆某腈纶废水处理厂，其具体分离和纯化过程如下：

采用MBBR(Moving Bed Biofilm Reactor)生物膜反应器，对污泥和废水样品进行生物膜培养。反应器由透明的聚苯乙烯材料制成，有效容积10L，反应器中添加聚乙烯材料制成的工业用生物膜载体和载玻片载体。将污泥样品和腈纶废水投加到反应器中，以连续流方式从底部进水上部排水，于25℃条件下培养，每12h曝气6h，水力停留时间24h连续培养20-30d。

采集运行了20-30d的生物膜反应器中载体，运用扫描电子显微镜观察载体上生物膜的形成状态，并对生物膜上的细菌进行分离和纯化。具体操作步骤如下：在无菌条件下，将附有生物膜的载体放入无菌三角瓶中，加入20mL无菌生理盐水，在漩涡混合器上振荡30min，洗下生物膜上的细菌。取50μL经梯度稀释后的菌悬液涂布LB平板和含1％乙腈的LB平板，于30℃恒温培养箱中倒置培养过夜，挑取菌落形态差异较大的单菌落，进一步分离纯化3-4次。经反复纯化后的菌株放-80℃和4℃保存备用。

所述的培养基配制方法如下，LB培养基：酵母膏5.0g，蛋白胨10.0g，NaCl 10.0g，蒸馏水1000mL，按2％的比例添加琼脂，pH调至7.0～7.2，115℃灭菌20min；含1％乙腈的LB培养基：在LB培养基中按1％体积比例添加乙腈。

(2)生物膜的定性及定量检测

参考Srdjan Stepanovic等描述的试管检测法和96孔细胞培养板检测方法分别对分离得到的细菌进行生物膜形成定性及定量检测。(Stepanovic S，Vukovic′D，Dakic I，et al.A modified microtiter-plate test forquantification of staphylococcal biofilm formation[J].Journal of Microbiological Methods，2000，40：175-179.)

(3)缺陷短波单胞菌(Brevundimonas diminuta)N5的鉴定

参照《常见细菌系统鉴定手册》(东秀珠等，2001)，微生物学试验(第三版)对生物膜形成菌株进行形态学及生理生化指标检测。

缺陷短波单胞菌(Brevundimonas diminuta)N5的分子生物学鉴定：以SDS法提取细菌的总DNA为模板，采用细菌16S rDNA通用引物BSF8／27：5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′和BSR1510／1492：5′-GGTTACCTTCTTACGACTT-3′；对强成膜细菌16S rDNA的保守区进行PCR扩增。采用细菌gyrB基因引物UP1：GAAGTCATCATGACCGTTCTGCAYGCNGGNGGNA和UP-2r：AGCAGGGTACGGATGTGCGAGCCRTCNACRTCNGCRTCNGTCAT对强成膜细菌的gyrB基因进行PCR扩增。

PCR反应体系均为：dNTP4μL(2.5mmol／L)，10×buffer5μL，上下游引物各2μL(50μmol／L)，rTaq酶0.5μL，模板DNA1μL，加ddH₂O至50μL。反应条件依次为：94℃5min，94℃45s，55℃1.5min，72℃2.0min，变性、退火、延伸共35个循环，72℃延伸10min；94℃5min，94℃30s，60℃30s，72℃1.0min，变性、退火、延伸共35个循环，72℃延伸10min。PCR反应产物经1.0％琼脂糖凝胶电泳检测，并采用凝胶成像系统观察分析。PCR反应产物纯化及测序由上海生工生物技术有限公司完成。

以试管培养法分离得到的菌株N5所形成的生物膜沿液面紧贴试管壁向下生长，同时在液面形成一层较薄的膜，液面膜与试管结合，管壁上的膜与试管的粘附性较高。以96孔细胞培养板孔内洗脱液在570nm处的OD值作为生物膜形成量的评价指标，生物膜定量检测结果为OD_570nm大于2.3。

分离得到的生物膜形成菌N5的形态特征和生长特点：单一菌落为圆形，表面凸起，边缘整齐，不透明，湿润，粘稠，不易挑起，牛肉膏琼脂平板上菌落淡黄色；菌株个体椭圆形或球形，无芽孢，有鞭毛，大小约为300-500×600-900nm革兰氏阴性；静置培养时培养液体表面形成较薄菌膜，贴壁处有菌膜，菌液均匀混浊。

分离得到的生物膜形成菌N5部分生理生化特征如表1所示：

表1生物膜形成菌N5生理生化特征

试验项目	结果	试验项目	结果
				运动性	+	柠檬酸盐利用试验	-
过氧化氢酶试验	+	甲基红试验	-
				硝酸盐还原试验	-	吲哚试验	-
硫化氢产生试验	-	丙二酸盐利用试验	-
				45℃生长	+	乳糖	-
明胶液化试验	-	蔗糖	+
				酯酶试验	-	葡萄糖	+
淀粉水解试验	-	麦芽糖	-
				脲酶试验	-	氧化酶	+

注：阳性+；阴性-

通过扩增该菌株的16S rDNA基因序列及gyrB基因序列得到长度分别为1368bp和1194bp的基因序列。两段基因序列均已提交到Genebank，登录号为分别为JN003651和JQ653053。通过Blast软件对Genebank上的其他序列进行同源性比对，发现成膜菌株N5的16S rDNA核酸序列与短波单胞菌属(Brevundimonassp.)的相似性极高，与该属下的Brevundimonas diminuta(T)IAM12691T(AB021415)和Brevundimonas terrae(T)KSL-145(DQ335215)相似性分别达到98.10％和97.37％。16S rDNA基因是目前公认的用于细菌分类鉴定的基因，但依据16S rDNA基因核酸序列的比对分析结果仅能将各细菌鉴定到属，不能进一步区分其与同属内各种间的差异。因此，将菌株N5的gyrB基因的核酸序列提交到GenBank，在核酸数据库中进行BLAST比对分析，经过比对分析发现，菌株N5与短波单胞菌属(Brevundimonas sp.)内的Brevundimonasdiminuta(AB014907)相似性极高，达到98.66％。根据上述对gyrB基因核酸序列的相似性比较结果，结合16S rDNA的鉴定结果及生理生化特征，可确定该菌株为缺陷短波单胞菌(Brevundimonas diminuta)，将其命名为Brevundimonas diminuta N5.

实例2缺陷短波单胞菌(Brevundimonas diminuta)N5成膜条件的测定

考查成膜菌N5再形成生物膜时，对外源有机碳源的需求状况，选择不同的外加碳源及并设定其浓度条件验证生物膜生成量是否提高。试验过程如下，分别以葡萄糖，蔗糖，乳糖，麦芽糖，甘油为外加碳源配制含不同碳源的TSB培养液(不同碳源的初始添加浓度为0.1％)，在96孔细胞培养板的各孔中依次加入200μL上述各培养基，将菌悬液以1％的接种量分别接种于各孔内，于30℃恒温培养箱中静置培养24h，定量检测生物膜。每试验设3个孔平行，重复3次，同时设置不加菌悬液组作为对照。以优化得到的最佳碳源为外加碳源，设定其添加浓度依次为1g·L^-1、3g·L^-1、5g·L^-1、7g·L^-1、9g·L^-1，将菌悬液以1％接种量分别接种到200μL含不同浓度碳源的TSB培养液中，于30℃恒温培养箱中静置培养24h。定量检测生物膜。每试验设3个孔平行，重复3次，同时设置不加菌悬液组作为对照。

所述的TSB培养液是按下述比例配制的：大豆蛋白胨5.0g，胰蛋白胨15.0g，NaCl 5.0g，蒸馏水1000mL，pH调至7.0～7.2。

当不同碳源分别以0.1％比例加入到TSB培养液后，菌株N5在含蔗糖的培养基中成膜量最大，其OD₅₇₀为2.24(图1所示)。经数据分析得知成膜量的P<0.05差异显著，表明添加必要的碳源能够提高菌株N5的生物膜生成量。蔗糖的添加浓度在5g·L^-1时，生物膜形成量最大OD₅₇₀为2.437(图2所示)。

依据最适碳源及浓度，菌株N5以接种量1.1％，培养温度30.6℃，pH7.6，培养时间37.0h时，生物膜形成量OD₅₇₀为3.062。上述实验证实，菌株N5生物膜形成能力较强，成膜条件也与自然环境较为接近，表明该菌株在生物膜法治理污水领域中具有较高的应用潜力。

实例3缺陷短波单胞菌(Brevundimonas diminuta)N5应用于含氰废水的处理

(1)缺陷短波单胞菌(Brevundimonas diminuta)N5对乙腈的耐受性及利用情况考查

接种50μL生物膜形成菌N5的菌悬液于5mL含800mg·L^-1乙腈的合成废水中，另接种不加乙腈的合成废水作对照，35℃180rpm摇床振荡培养24h，测定600nm处的吸光值，考查生物膜形成菌N5生长状况；另接种50μL生物膜形成菌N5的菌悬液于5mL含800mg·L^-1乙腈的无机盐基础培养基中，以不接种的培养基为对照，35℃180rpm摇床振荡培养24h，测定600nm处的吸光值，检测生物膜形成菌是否能利用乙腈为唯一碳氮源生长。

所述的合成废水是按下述比例配制的：葡萄糖0.3g·L^-1，NH₄Cl 0.0401g·L^-1，KH₂PO₄ 0.0092g·L^-1，CaCl₂ 0.0107g·L^-1，MgSO₄ 0.008g·L^-1，FeSO₄ 0.00011g·L^-1，溶于自来水，乙腈添加量为800mg·L^-1。

所述的无机盐基础培养基是按下述比例配制的：KH₂PO₄ 1.7g·L^-1，Na₂HPO₄ 9.8g·L^-1，MgSO₄·7H₂O 0.1g·L^-1，CaCO₃ 0.002g·L^-1，ZnSO₄·7H₂O 0.00144g·L^-1，FeSO₄·7H₂O 0.0009g·L^-1，CuSO₄·5H₂O 0.00025g·L^-1，H₃BO₃ 0.00006g·L^-1，自然pH7.2。

在含有800mg·L^-1乙腈的合成废水中35℃培养24小时菌株的生长情况如图4所示，菌株N5在合成废水中生长良好，600nm处吸光值为0.878，与不含乙腈的对照组生物量无明显差异。这说明浓度为800mg·L^-1的乙腈对生物膜形成菌的生长无明显抑制作用。

菌株N5在含有800mg·L^-1乙腈的无机盐基础培养基中35℃培养24小时几乎没有生长，600nm值仅为0.061(见图3)。表明生物膜形成菌N5虽然可以耐受浓度为800mg·L^-1乙腈，但是不能够利用乙腈为唯一碳氮源，即不能够通过自身代谢而降解乙腈。

(2)缺陷短波单胞菌(Brevundimonas diminuta)N5在合成废水(乙腈冲击条件下)中成膜能力考查

试验过程如下，在96孔细胞培养板的各孔中依次加入200μL合成废水，将菌悬液以1.1％的接种量分别接种于各孔内，于30.6℃恒温培养箱中静置培养24h，定量检测生物膜。每试验设3个孔平行，重复3次，同时设置不加菌悬液组作为对照。

培养24h后，成膜细菌N5形成生物膜量OD_570nm为0.632。结果表明，菌株N5不仅在营养培养液中能够形成生物膜，在高浓度乙腈的冲击下也能形成生物膜。

(3)缺陷短波单胞菌(Brevundimonas diminuta)N5与乙腈降解菌联合处理含氰废水

①缺陷短波单胞菌(Brevundimonas diminuta)N5与乙腈降解菌BX2混合培养时生物膜形成量

生物膜培养装置如下，150mL三角瓶，内含50mL合成废水，20颗聚氯乙烯填料。每个装置中接种1mL菌悬液(BX2∶N5＝1∶1)，同时将BX2和N5单独接种作为对照。在相同的条件下做三个平行样，取其平均值。35℃，60rpm振荡培养。培养24小时后，弃去含有悬浮细胞的合成废水。然后用蒸馏水漂洗两次，其余粘附细菌用50毫升0.1％(w／v)结晶紫染色30分钟。彻底清洗三角瓶，干燥过夜。将残存结晶紫溶解于10毫升的乙醇-丙酮(4∶1，v／v)中，测定570nm处的吸光度。培养24小时后，生物膜量如图4所示。结果表明，生物膜形成菌N5与BX2混合培养的生物膜形成量为OD_570mm为0.714，略高于N5单独培养时生物膜量(OD_570nm＝0.641)表明降解菌的加入，在一定程度上促进了合成废水中生物膜的形成。

②生物膜形成菌N5与BX2混合形成生物膜的抗冲击能力考查

反应装置及培养方法：150mL三角瓶，内含50mL合成废水，20颗聚氯乙烯填料。每个装置中接种1mL菌悬液(BX2∶N5＝1∶1)，同时将BX2单独接种，另设一个不接菌的空白对照，以确定乙腈的自然挥发量。在相同的条件下做三个平行样，取其平均值。35℃，60rpm振荡培养24h。培养24h后，弃去瓶中含有浮游细菌的合成废水，用灭菌水漂洗2次，以去除填料和瓶壁上未吸附于生物膜的细菌，再次加入合成废水50mL继续培养，每12h更换一次合成废水，连续冲击7次，以气谱法测定生物膜对乙腈的连续降解能力。每次添加的合成废水乙腈浓度均为800mg·L^-1。

乙腈残留量的测定：气相色谱检测条件：GC-14C型气相色谱仪，FID检测器；色谱柱：内涂14％OV-1701大口径毛细管柱(30m×0.53mm)；温度条件：进样口200℃，FID检测器200℃，柱温110℃；气体流量：载气为高纯N₂，流量300kPa，分压50kPa，氢气50kPa，空气50kPa；进样量为1μL，以外标法定量.降解率计算公式为：

X＝(C_cK-C_X)／C_cK×100％式中，X为乙腈的生物降解率，C_X为接菌处理培养液中乙腈浓度(mg·L^-1)，C_CK为未接菌对照中乙腈浓度(mg·L^-1)。

抗冲击试验的结果见图5和图6。其中图5表示BX2单独培养时对乙腈的降解能力，图6表示BX2及N5按1∶1混合培养时对乙腈的降解能力。从两幅图显示的结果可以得出，两组生物膜对乙腈的降解率均有上升趋势。在连续冲击过程中，仅接种BX2的对照组乙腈浓度始终高于接种混合菌的实验组，在12小时内对合成废水中乙腈的降解率约为24-43％，N5与BX2形成的生物膜，12小时对乙腈的降解率约为30-53％。表明BX2单独培养所形成的生物膜抗冲击负荷水平较低，而加入生物膜形成菌能够使BX2固定于生物膜内有利于提高乙腈的连续降解率。

③生物膜反应器模拟含氰废水处理

采用移动床生物膜反应器(Moving Bed Biofilm Reactor，MBBR)，接种污泥混合液与填料同时放入反应器中，静态曝气24h，曝气量调整到刚好使填料完全流化即可。然后排掉上清液和悬浮污泥，第2d开始间歇进水，水力停留时间为24h，运行温度为20℃-25℃。定时取样采用气谱法及重铬酸钾法测定水中乙腈含量和COD值。

所述的移动床生物膜反应器有效容积为10L，污泥为好氧活性污泥，取自哈尔滨太平污水处理厂A／O(Anoxic／Oxic)池给氧段；填料为改性聚乙烯，真密度接近于水，挂膜前为0.94-0.98g·cm^-3，挂膜后约等于1g·cm^-3，其填充率为30％，流入合成废水初始COD浓度为400mg·L^-1，乙腈初始浓度为800mg·L^-1。

为考查生物膜形成菌N5的作用，应用3个生物膜反应器，每个反应器中投加生物总量为3000mg／L，具体处理如下1号反应器接种活性污泥(30g)，2号反应器接种活性污泥、BX2(30g，6g)，3号反应器接种活性污泥、BX2、N5(18g，6g，6g)。

COD采用标准方法测定见于APHA，AWWA，WEF，2005.Standard Methods for the Examination of Waterand Wastewater，21st ed.American Public Health Association，Washington，DC.

MBBR生物膜反应器模拟含氰废水处理过程中，出水的乙腈浓度和COD值变化如图7和图8所示(图7为乙腈浓度变化曲线，图8为出水COD变化曲线)。从图7的显示的结果可以看出，仅投加活性污泥的1号反应器在运行前期出水乙腈浓度较高，闷曝前15d乙腈浓度，可能经过长时间的驯化，反应器中出现了能够分解利用乙腈的微生物，在反应器运行30d时乙腈浓度降至73.3mg·L^-1。2号和3号反应器在闷曝24h后乙腈浓度均降至500mg·L^-1以下，约运行10d后，两个反应器中乙腈浓度先后出现大幅下降，此时生物膜逐渐成熟，降解菌在生物膜内大量增殖并发挥其降解作用。与2号反应器相比，3号反应器由于加入了生物膜形成菌，乙腈浓度和COD下降趋势出现较早(运行1周出现明显下降)，在运行30d时，2号和3号反应器出水乙腈浓度分别为8.78mg·L^-1、0mg·L^-1。从图8的显示的结果可以看出，在反应器运行30d后，3个反应器的出水COD浓度分别为98.6mg·L^-1、49.6mg·L^-1和38.5mg·L^-1，此结果说明投加生物膜形成菌不仅提高了乙腈降解率还降低了出水COD值。

菌株N5有辅助乙腈降解菌BX2在生物膜上定殖的能力，可以通过生物膜形成菌附着于载体表面的微生物自固定方法使降解菌与生物膜形成菌混合挂膜强化含氰废水的处理。

Claims (3)

1.一株缺陷短波单胞菌(Brevundimonas diminuta)N5，该菌株已于2013年04月07日保藏于“中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC)”，保藏号为CGMCCNo.7412。

2.如权利要求1所述的一株缺陷短波单胞菌(Brevundimonas diminuta)N5产生生物膜。

3.如权利要求1所述的一株缺陷短波单胞菌(Brevundimonas diminuta)N5在含氰废水处理中的应用。

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