CN103881933A - ω-氨基脂肪酸的生产 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及全细胞催化剂,其表达重组α-双加氧酶、或重组脂肪酸还原酶和将所述脂肪酸还原酶进行磷酸泛酰巯基乙胺化的磷酸泛酰巯基乙胺基转移酶的组合,且其除了表达α-双加氧酶和/或脂肪酸还原酶和磷酸泛酰巯基乙胺基转移酶的组合以外还表达转氨酶,其中,所述磷酸泛酰巯基乙胺基转移酶和/或转氨酶优选地为重组体;还涉及用于将脂肪酸、ω-羟基脂肪酸、ω-氧代脂肪酸或其单酯转化成胺的方法,所述方法包括下述步骤:通过与烷烃羟化酶和/或醇脱氢酶接触,将脂肪酸、ω-羟基脂肪酸、ω-氧代脂肪酸或其单酯氧化成氧化产物,使所述氧化产物与磷酸泛酰巯基乙胺基化的脂肪酸还原酶或α-双加氧酶接触以产生醛,和使所述醛与转氨酶接触。

Description

ω-氨基脂肪酸的生产
本发明涉及全细胞催化剂,其表达重组α-双加氧酶、或重组脂肪酸还原酶和将所述脂肪酸还原酶进行磷酸泛酰巯基乙胺化的磷酸泛酰巯基乙胺基转移酶的组合,且其另外表达转氨酶,其中,所述磷酸泛酰巯基乙胺基转移酶和/或转氨酶优选地为重组体;还涉及用于将脂肪酸、ω-羟基脂肪酸、ω-氧代脂肪酸或其单酯转化成胺的方法,所述方法包括下述步骤:通过与烷烃羟化酶和/或醇脱氢酶接触,将脂肪酸、ω-羟基脂肪酸、ω-氧代脂肪酸或其单酯氧化成氧化产物,使所述氧化产物与磷酸泛酰巯基乙胺基化的脂肪酸还原酶或α-双加氧酶接触以产生醛,和使所述醛与转氨酶接触。
聚酰胺是一类以重复的酰胺基为特征的聚合物。术语“聚酰胺”不同于化学上有关的蛋白,通常涉及合成的、商购可得的热塑性塑料。聚酰胺源自伯胺或仲胺,所述伯胺或仲胺常规地在烃裂化中得到。但是,衍生物(更精确地讲,氨基羧酸、内酰胺和二胺)也可以用于聚合物生产。也感兴趣的是作为起始物(Edukt)的短链气态烷烃,其可以通过生物技术方法从可再生原料开始得到。
许多具有巨大商业需求的聚酰胺从内酰胺生产。例如“聚酰胺6”可以通过ε-己内酰胺的聚合得到,“聚酰胺12”可以通过月桂内酰胺的聚合得到。其它商业上感兴趣的产物包括内酰胺的共聚物,例如ε-己内酰胺和月桂内酰胺的共聚物。
胺的常规工业化学生产依赖于化石原料的供给,且是低效的,并且在该过程中,形成大量不希望的副产物,在许多合成步骤中,多达80%。这样的过程的一个例子是月桂内酰胺的生产。常规地,这通过多级过程来实现,所述多级过程不仅提供低产率,而且同时需要提供昂贵的基础设施。
考虑到这些缺点,开发了使用生物催化剂从可再生原料得到胺的方法。可能的可再生原料具体地是脂肪酸源,其可以以下述形式得到:菜油、大球花蓟油、棕榈坚果油、椰子油、葵花子油和得自许多生物学来源(尤其是植物)的类似天然产物。
PCT/EP2008/067447描述了使用细胞来生产化学上有关的产物(更精确讲,ω-氨基羧酸)的生物技术系统,所述细胞具有许多合适的酶活性,且能够将羧酸转化成对应的ω-氨基羧酸。所述方法包括一系列酶促催化的反应,尤其是将末端碳原子处的脂肪酸氧化为醛,随后使用转氨酶和作为胺供体的氨基酸进行胺化,所述胺供体可以通过氨基酸脱氢酶再生。
但是,在其中使用的得自恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)GPO1的AlkBGT氧化酶系统的已知缺点在于,它不能执行脂族烷烃至伯醇的选择性氧化。相反,形成大量氧化产物,尤其是,更高度氧化的产物(诸如对应的醛、酮或对应的羧酸)的比例随着反应时间增加而增加(C. Grant, J. M. Woodley和F. Baganz (2011), Enzyme and Microbial Technology 48, 480-486),这会相应地降低期望的胺的产率。
形成的氧化产物在结构上非常类似的事实,会加重相对非选择性氧化的问题。这意味着,非常难以有效地和在没有显著产率损失下将它们与期望的氧化产物分离。
该方法的另一个缺点在于,过度氧化的副产物(例如用作起始物的脂肪酸的二羧酸)、疏水溶剂和疏水液体阳离子交换剂(根据PCT/EP2011/071491,其可以用于从水性反应混合物中分离产物)的重复利用是以资源利用效率为代价。
在这方面,应当强调的是,如PCT/EP2008/067447所述的具有一系列反应(其中的每个单独反应由一种特定酶催化)的生物技术系统的复杂性使得难以优化反应条件。因此,在基本上以反应性的ω-氨基脂肪酸作为产物的情况下,存在从细胞内部的某种临界浓度起它们将与生物体的必需组分反应的可能性,并因而具有毒性效应。如果这是事实,那么生物体的生长和合成能力会受损,甚至导致细胞的死亡,而开发者不能直接识别毒性或甚至将它归因于特定起始物、中间体或产物。也难以预测何种生物体耐受化学反应性物质的何种浓度。
也关于要提高的产物产率和要减少的副产物形成,本领域技术人员常规地不能鉴别系统(诸如在PCT/EP2008/067447中描述的系统)中的限制性因素和决定性因素。如果产物产率过低,那么这可能是因为酶之一以过低的浓度存在,而不知道这是可能的酶中的哪一种,即由于合成能力不足,在预测的时间段中或在被竞争酶降解之前,起始物未被转化。可替换地,完全可能的是,酶实际上在细胞中以多肽的形式是可检测的,但是在该特定细胞中,不具有为活性必需的折叠,或者缺乏迄今未知的、但是为活性所必需的辅因子。同样地,如已提及的,代谢产物可以是对细胞有毒的,或者被降解。最后,必须考虑与内源酶(即在用作全细胞催化剂的细胞中天然存在的那些)的干扰性相互作用。
因此,需要从脂肪酸生产ω-氨基脂肪酸的方法,其中酶促催化的反应更选择性地进行,并且使不希望的副产物的形成最小化。
在该背景下,作为本发明的基础的问题是,提供就产率、碳和/或氮平衡和/或纯度而言尽可能有效的生产ω-氨基脂肪酸的生物技术方法。
作为本发明的基础的另一个问题是,提供就产率、碳和/或氮平衡、使用的试剂的可复用性和/或产物的纯度而言尽可能有效的将羧酸酯转化成胺化的羧酸酯的生物技术方法。在此方面下,有效的碳和/或氮平衡优选地被理解为是指,在期望的终产物中重现用于转化合适底物形式的羧酸酯而供料到细胞的尽可能高的碳和/或氮含量,而不是例如转化成不期望的产物。
作为本发明的基础的另一个问题是,提高得自羧酸酯转化的多相反应混合物的可处理性,尤其是就用于处理使用的疏水溶剂和液体阳离子交换剂的可复用性而言,和就两相系统中的相形成和相分离而言,所述两相系统包含水相(在其中进行羧酸酯的转化)和有机相(含有有机溶剂和/或液体阳离子交换剂)。
本申请的主题和尤其是附带的独立权利要求的主题解决了这些和其它问题,其中实施方案来自从属权利要求。
在第一方面,全细胞催化剂解决了作为本发明的基础的问题,所述全细胞催化剂表达重组α-双加氧酶、或重组脂肪酸还原酶和将所述脂肪酸还原酶进行磷酸泛酰巯基乙胺化的磷酸泛酰巯基乙胺基转移酶的组合,且其另外表达转氨酶,其中所述磷酸泛酰巯基乙胺基转移酶和/或转氨酶优选地为重组体。
在第一方面的第一个实施方案中,全细胞催化剂解决了所述问题,所述全细胞催化剂另外表达优选地为重组体的氨基酸脱氢酶。
在也是第一个实施方案的一个实施方案的第二个实施方案中,全细胞催化剂解决了所述问题,所述全细胞催化剂另外表达优选地为重组体的烷烃羟化酶。
在也是第一至第二个实施方案的一个实施方案的第三个实施方案中,全细胞催化剂解决了所述问题,所述全细胞催化剂另外表达优选地为重组体的AlkL家族的多肽。
在也是第一至第三个实施方案的一个实施方案的第四个实施方案中,全细胞催化剂解决了所述问题,所述全细胞催化剂另外表达优选地为重组体的醇脱氢酶。
在也是第一至第四个实施方案的一个实施方案的第五个实施方案中,全细胞催化剂解决了所述问题,其中与全细胞催化剂的野生型相比,在β-氧化中涉及的至少一种酶的活性降低。
在也是第一至第五个实施方案的一个实施方案的第六个实施方案中,全细胞催化剂解决了所述问题,其中与全细胞催化剂的野生型相比,BioH或其变体的活性降低。
在也是第一至第六个实施方案的一个实施方案的第七个实施方案中,全细胞催化剂解决了所述问题,其中与全细胞催化剂的野生型相比,FadL或其变体的活性增加。
在第二方面,一种用于将脂肪酸、ω-羟基脂肪酸、ω-氧代脂肪酸或其单酯转化成胺的方法解决了作为本发明的基础的问题,所述方法包括下述步骤
a) 通过与烷烃羟化酶和/或醇脱氢酶接触,将脂肪酸、ω-羟基脂肪酸、ω-氧代脂肪酸或其单酯氧化成氧化产物,
b) 使所述氧化产物与磷酸泛酰巯基乙胺基化的脂肪酸还原酶或α-双加氧酶接触以产生醛,和
c) 使所述醛与转氨酶接触。
在第二方面,一种方法解决了作为本发明的基础的问题,其中在步骤c)中,存在氨基酸脱氢酶。
在第二方面的第一个实施方案中,一种方法解决了所述问题,其中以根据本发明的第一方面的全细胞催化剂的形式,提供选自磷酸泛酰巯基乙胺基化的脂肪酸还原酶、α-双加氧酶、转氨酶、氨基酸脱氢酶和烷烃羟化酶的至少一种酶,优选得自该组的使用的所有酶。
在也是第一个实施方案的一个实施方案的第二个实施方案中,一种方法解决了所述问题,其中所述脂肪酸、ω-羟基脂肪酸、ω-氧代脂肪酸或其单酯是式(I)的化合物
R1 - A - COOR2 (I)
其中R1选自-H、-CHO、-OH和COOR3
其中R2和R3各自且彼此独立地选自H、甲基、乙基和丙基,
前提条件是,残基R2和R3中的至少一个是H,且
其中A代表无分支的、支链、直链、环状、被取代的或未被取代的、具有至少4个碳原子的烃基。
在也是第一至第二个实施方案的一个实施方案的第三个实施方案中,一种方法解决了所述问题,其中A具有式- (CH2)n -,其中n是至少4,优选至少10。
在第三方面,通过使用根据第一方面的全细胞催化剂或根据第二方面的方法用于将脂肪酸、ω-羟基脂肪酸、ω-氧代脂肪酸或其单酯胺化,解决了作为本发明的基础的问题。
在第四方面,一种反应混合物解决了作为本发明的基础的问题,所述反应混合物包含在水溶液中的根据第一方面的全细胞催化剂和式(I)的脂肪酸、ω-羟基脂肪酸、ω-氧代脂肪酸或其单酯
R1 - A - COOR2 (I),
其中R1选自-H、-CHO、-OH和COOR3
其中R2和R3各自且彼此独立地选自H、甲基、乙基和丙基,
前提条件是,残基R2和R3中的至少一个是H,且
其中A代表无分支的、支链、直链、环状、被取代的或未被取代的、具有至少4个碳原子的烃基,优选式- (CH2)n -,其中n是至少4,特别优选至少10。
本发明是基于发明人的以下发现:用于从脂肪酸生产ω-氨基脂肪酸且具有适当酶组合物(Ausstattung)的全细胞催化剂中的在功能上共表达的重组脂肪酸还原酶或α-双加氧酶会令人惊讶地增加ω-氨基脂肪酸的产率。
此外,本发明是基于发明人的以下发现:用于从脂肪酸生产ω-氨基脂肪酸且具有适当酶组合物的全细胞催化剂中的在功能上共表达的重组脂肪酸还原酶或α-双加氧酶会令人惊讶地降低得到的产物中的干扰性副产物(尤其是二羧酸及其酯形式的过度氧化的脂肪酸)的浓度。
此外,本发明是基于发明人的以下发现:用于从脂肪酸生产ω-氨基脂肪酸且具有适当酶组合物的全细胞催化剂中的在功能上共表达的重组脂肪酸还原酶或α-双加氧酶会提高液体阳离子交换剂(诸如油酸)的纯度和可复用性,所述液体阳离子交换剂用于从含有全细胞催化剂的发酵溶液中除去ω-氨基脂肪酸。
本发明涉及一种改进的将脂肪酸、ω-羟基脂肪酸、ω-氧代脂肪酸或其单酯转化成胺的方法,其特征在于,除催化脂肪酸经由它的多个氧化阶段转化为胺的反应的酶外,也存在至少一种脂肪酸还原酶或α-双加氧酶、或者两种酶的组合,优选地,当将全细胞催化剂用于执行所述方法时。在一个优选的实施方案中,本文中使用的术语“脂肪酸还原酶”被理解为是指这样的酶:其在消耗ATP和NAD(P)H下催化ω-羧基酸(也被描述为二羧酸或ω-羧基脂肪酸)向对应的ω-氧代脂肪酸的转化。在现有技术中,例如在WO/2010/135624中,描述了用于生产ω-羟基脂肪酸的脂肪酸还原酶,但是不是作为用于生产ω-氨基脂肪酸的系统的一部分。在一个更优选的实施方案中,所述脂肪酸还原酶选自含有以下氨基酸序列及其变体的脂肪酸还原酶:YP_887275.1、ZP_11001941.1、ZP_06852401.1、NP_959974.1、YP_001070587.1、ZP_05217435.1、YP_882653.1、YP_639435.1、ZP_10800193.1、YP_006452763.1、YP_006730440.1、ZP_11196216.1、YP_005349252.1、ZP_05224908.1、YP_005338837.1、YP_006307000.1、YP_005343991.1、ZP_11001942.1、ZP_09979565.1、YP_005003162.1、YP_953393.1、YP_001850422.1、ZP_11011489.1、ZP_12689264.1、YP_905678.1、ZP_09976919.1、YP_004746059.1、NP_217106.1、YP_004525443.1、NP_337166.1、ZP_09685823.1、YP_978699.1、ZP_06437984.1、ZP_06514086.1、NP_856267.1、CAA19077.1、NP_301424.1、ZP_06522140.1、ZP_06518098.1、ZP_11008938.1、ZP_07432374.2、AAR91681.1、YP_006808747.1、YP_001851230.1、ZP_15327751.1、ZP_15455857.1、ZP_12874284.1、ZP_15332534.1、ZP_15512956.1、ZP_14244106.1、ZP_15470899.1、ZP_11439367.1、YP_001703694.1、ZP_15446742.1、YP_006808978.1、ZP_07964926.1、YP_006521379.1、WP_007769435.1、ZP_15512957.1、ZP_12874283.1、YP_005350955.1、ZP_14243341.1、YP_001705436.1、ZP_15329649.1、YP_006522325.1、YP_006732197.1、YP_003658971.1、ZP_05227804.1、YP_001703695.1、YP_006308707.1、ZP_15342047.1、YP_006521380.1、ZP_15327752.1、YP_005340557.1、ZP_11439578.1、ZP_15392943.1、ZP_15514789.1、ZP_12996178.1、ZP_09412214.1、ZP_06849686.1、YP_889972.1、YP_006570321.1、ZP_15375693.1、YP_006308219.1、YP_006521600.1、YP_005340029.1、YP_005350457.1、ZP_11439836.1、ZP_12994664.1、ZP_14240588.1、ZP_14236860.1、ZP_09410830.1、YP_006731697.1、YP_005264225.1、YP_001704097.1、ZP_15328186.1、ZP_09402885.1、ZP_12690463.1、AFO59871.1、ZP_07966879.1、YP_118225.1、YP_001828302.1、YP_006566873.1、YP_003660169.1、ZP_15337407.1、ZP_08240521.1、ZP_10456477.1、YP_001537947.1、YP_004016539.1、ZP_07664024.1、ZP_14244107.1、ZP_09794557.1、ZP_09274211.1、ZP_05224899.1、ZP_15484175.1、AAA17105.1、ZP_11437924.1、ZP_15446621.1、YP_003646340.1、ZP_15382134.1、ZP_14237669.1、ZP_09165547.1、YP_004019203.1、ZP_14240225.1、YP_001220863.1、CBA74242.1、ZP_12994240.1、EIE27140.1、ZP_15354547.1、ZP_15432557.1、ZP_15500132.1、ZP_15478632.1、ZP_06846978.1、AAA17108.1、ZP_15333767.1、ZP_05217205.1、AAD44234.1、YP_005348984.1、YP_006306749.1、ZP_05224611.1、YP_005343772.1、YP_006730188.1、YP_882425.1、ZP_10799956.1、ZP_05045132.1、NP_960176.1、ZP_12398880.1、ZP_11192735.1、ZP_11440091.1、ZP_05217203.1、ZP_06846979.1、ZP_10800936.1、ZP_06523596.1、YP_882421.1、YP_006306748.1、YP_006522017.1、ZP_15432556.1、ZP_15354095.1、ZP_05227781.1、ZP_09684639.1、YP_006730187.1、YP_005343770.1、YP_005338616.1、YP_005348983.1、ZP_15472813.1、ZP_15457007.1、ZP_15421152.1、ZP_15488933.1、ZP_14240030.1、YP_001704825.1、ZP_15328982.1、YP_005911512.1、ZP_09411638.1、ZP_12876400.1、ZP_12995435.1、ZP_07667680.1、YP_001281387.1、EIE21044.1、ZP_15375054.1、NP_334518.1、4DQV_A、ZP_06435375.1、YP_003030020.1、YP_976237.1、ZP_04926822.1、YP_004998149.1、YP_004743589.1、YP_005907921.1、NP_214615.1、YP_001286047.1、ZP_06515541.1、ZP_05139482.1、YP_888016.1、ZP_06452908.1、ZP_06519578.1、YP_004721827.1、CAJ77696.1、ZP_09680854.1、ZP_09686453.1、YP_884815.1、YP_884815.1、CAB55600.1、ZP_09081423.1、YP_006521568.1、ZP_11440626.1、ZP_15513309.1、ZP_09410778.1、ZP_15374248.1、ZP_15405954.1、YP_001704047.1、ZP_14236911.1、ZP_12873916.1、ZP_14242094.1、ZP_12994610.1、ZP_07664023.1、ZP_15446620.1、ZP_15484174.1、ZP_14240245.1、YP_005358845.1和XP_002669159.1,尤其是YP_006731697.1, ZP_09839660.1, YP_001704097.1, YP_889972.1, ZP_05045132.1, NP_959974.1, ZP_10456477.1, YP_118225.1, YP_905678.1, YP_887275.1, ZP_11001941.1, WP_007769435.1和YP_005349252.1。
脂肪酸还原酶是一组这样的酶:它们的活性需要磷酸泛酰巯基乙胺化,即磷酸泛酰巯基乙胺基辅因子在所述酶上的共价结合。因此,根据本发明使用的脂肪酸还原酶是磷酸泛酰巯基乙胺基化的,且表达所述脂肪酸还原酶的全细胞催化剂会表达将所述脂肪酸还原酶进行磷酸泛酰巯基乙胺化的磷酸泛酰巯基乙胺基转移酶,作为它的内源表达的酶的组合物的一部分或者呈重组形式。在一个优选的实施方案中,本文中使用的术语“磷酸泛酰巯基乙胺基转移酶”被理解为是指这样的酶:其将磷酸泛酰巯基乙胺基残基从磷酸泛酰巯基乙胺基辅酶A转移至酶,优选地转移至脂肪酸还原酶上。在一个特别优选的实施方案中,所述磷酸泛酰巯基乙胺基转移酶选自含有以下氨基酸序列及其变体的磷酸泛酰巯基乙胺基转移酶:ABI83656.1、YP_006811024.1、YP_120266.1、YP_005265173.1、YP_004006671.1、ZP_08152482.1、ZP_11104141.1、ZP_14482198.1、YP_706581.1、ZP_10002626.1、ZP_09308410.1、YP_002783881.1、ZP_18276502.1、ZP_09271851.1、ZP_08204640.1、YP_002766085.1、ZP_09788717.1、ZP_09799863.1、ZP_10961877.1、YP_003273299.1、GAB86168.1、YP_006668875.1、ZP_08766535.1、ZP_09793386.1、ZP_09212827.1、ZP_09276344.1、ZP_09213870.1、ZP_09081490.1、ZP_10947586.1、YP_003658841.1、ZP_06852853.1、YP_953148.1、ZP_11011170.1、YP_639258.1、YP_886985.1、ZP_11194383.1、ZP_09681094.1、ZP_06455719.1、NP_337369.1、YP_004077819.1、NP_217310.1、YP_006452521.1、YP_005339056.1、ZP_05226335.1、ZP_07965127.1、ZP_07419314.2、NP_302077.1、YP_005003342.1、YP_005349465.1、ZP_10800435.1、ZP_06564430.1、YP_882860.1、YP_001135287.1、YP_001850220.1、ZP_05217634.1、YP_003646683.1、YP_004746246.1、ZP_15327906.1、ZP_09979035.1、YP_001703848.1、YP_906028.1、ZP_15395499.1、ZP_11438833.1、ZP_11005955.1、ZP_09410582.1、NP_961833.1、YP_001106197.1、ZP_14237113.1、YP_004085491.1、YP_003835595.1、ZP_12994399.1、YP_004523804.1、ZP_12690887.1、YP_003339468.1、ZP_06589331.1、YP_004801334.1、ZP_09974565.1、ZP_04608379.1、ZP_13037142.1、YP_712537.1、ZP_11236665.1、NP_630748.1、ZP_06527138.1、YP_003835167.1、CCH33620.1、ZP_10309401.1、ZP_08881396.1、YP_003102953.1、YP_003487252.1、ZP_08881565.1、YP_006263961.1、NP_822924.1、YP_004914569.1、ZP_09400366.1、AFV71333.1、ZP_07309518.1、ZP_09172171.1、ZP_06710898.1、CAN89630.1、ZP_06921116.1、ZP_08804003.1、ZP_19189663.1、ZP_10545589.1、YP_006248725.1、ZP_10455557.1、YP_004015869.1、ZP_08801530.1、ZP_10550999.1、YP_004492879.1、ZP_09958730.1、ZP_08286666.1、ZP_11212856.1、AAL15597.1、AAZ94407.1、ZP_19188802.1、AFF18625.1、ZP_06575404.1、AAK06801.1、ADC79635.1、YP_004080528.1、YP_004921314.1、ACY01405.1、YP_004584022.1、YP_003114157.1、YP_003203177.1、AFB69911.1、YP_006876460.1、ZP_08024798.1、YP_006269867.1、YP_006881814.1、CCK26150.1、ZP_07307765.1、ZP_07315112.1、YP_005466392.1、NP_824081.1、YP_003493882.1、ZP_06412387.1、ZP_10068239.1、ZP_08234258.1、YP_001822177.1、ZP_03979107.1、ZP_07979043.1、BAA22407.1、ZP_09402950.1、YP_003112617.1、NP_738483.1、YP_480609.1、EKX90208.1、BAE93744.1、BAB69186.1、ZP_04713061.1、YP_006881735.1、ZP_07274901.1、ZP_11379052.1、ZP_06581115.1、YP_006437406.1、ZP_12871839.1、NP_601186.1、ZP_08451808.1、YP_005057339.1、YP_005303909.1、ZP_07090824.1、YP_003783676.1、YP_004630011.1、ZP_06588772.1、AAX98203.1、AFK80329.1、ZP_08124665.1、ZP_03710365.1、AAB17877.1、ZP_07403633.1、ZP_11268660.1、ZP_07288841.1、ABV83217.1、ZP_16178576.1、AAG43513.1、ZP_09155938.1、YP_004605750.1、ZP_03918977.1、AAF71762.1、ZP_05007864.1、ZP_06836265.1、ZP_03934882.1、YP_001508477.1、ZP_06043756.1、ZP_05366306.1、YP_002835056.1、ZP_03933464.1、ZP_07469321.1、ZP_07713507.1、YP_005160553.1、NP_939820.1、AAU93794.1、ZP_14659796.1、ZP_14383679.1、YP_005058606.1、YP_001221073.1、ZP_08231568.1、YP_250920.1、ZP_11383249.1、YP_003916320.1、ZP_08681170.1、YP_001800249.1、YP_001157632.1、YP_166099.1、ZP_10088015.1、YP_004760065.1、ZP_07947675.1、YP_001603066.1、YP_003812683.1、YP_004403402.1、ZP_08292153.1、ZP_09471260.1、YP_004018108.1、ZP_05115352.1、AAD13565.1、ZP_09295321.1、YP_001535629.1、ZP_04607273.1、YP_006561753.1、ZP_00960958.1、YP_006571985.1、ZP_08862188.1、YP_002906426.1、CCK30433.1、ZP_13042493.1、ZP_09090153.1、YP_614397.1、ZP_11163860.1、YP_003983492.1、YP_004080668.1、ZP_09420475.1、ZP_05914565.1、ZP_01101149.1、ZP_14743088.1、YP_001239694.1、ZP_09127532.1、YP_003833873.1、ZP_08516197.1、ZP_10160483.1、ZP_01987188.1、ZP_01755304.1、ZP_08825027.1、ZP_05077116.1、YP_001444606.1、ZP_03392800.1、ZP_01057781.1、AFB69889.1、ZP_08815097.1和AAO17175.1。在这里的一个特别优选的实施方案中,它是具有数据库代码ABI83656.1的磷酸泛酰巯基乙胺基转移酶或其变体。
可替换地或除了脂肪酸还原酶和磷酸泛酰巯基乙胺基转移酶的组合以外,所述全细胞催化剂还可以含有α-双加氧酶。在一个优选的实施方案中,本文中使用的术语“α-双加氧酶”被理解为是指这样的酶,其消耗1个氧分子并裂解掉1个二氧化碳分子,催化脂肪酸转化为这样的脂肪酸:与用作起始物的脂肪酸相比,其在末端ω碳原子处缩短了1个碳原子,且在末端ω碳原子上携带醛基。在一个特别优选的实施方案中,所述α-双加氧酶选自含有以下氨基酸序列及其变体的α-双加氧酶:NP_001066718.1、EAY82977.1、BAH79993.1、ABG22011.1、BAJ90503.1、AFD04418.1、AFD04417.1、BAJ87736.1、AFW75180.1、ABG22012.1、XP_002311389.1、CAH05011.1、XP_002279884.1、CBI34957.3、AAG59584.1、NP_001234414.1、NP_001234410.1、XP_003553942.1、XP_002275161.1、XP_003553937.1、CBI34960.3、CAA07589.1、XP_003543402.1、XP_002517402.1、XP_002882184.1、NP_186791.1、AAK85133.1、CAN77070.1、XP_002529555.1、CAH64542.1、NP_001234061.1、XP_002281357.1、ADM21465.1、XP_002318527.1、NP_177509.1、CAN74266.1、XP_002888940.1、NP_001185393.1、XP_003631072.1、BAJ33800.1、XP_002517377.1、XP_003530944.1、BAJ34623.1、ABG22013.1、ABP02610.1、XP_001773135.1、XP_002960339.1、ABK95279.1、ABD73303.1、ABD73304.1、YP_001805721.1、ZP_08971815.1、ZP_08430366.1、YP_823013.1、ZP_05026427.1、ZP_11003953.1、YP_007064484.1、YP_007113008.1、YP_633369.1、ZP_18906570.1、ZP_09251410.1、ZP_10050808.1、ZP_01306662.1、YP_001516886.1、ZP_05042862.1、AAC49625.1、ZP_09648375.1、ZP_09792714.1、ZP_09788527.1、XP_001728273.1、AAC83355.1、YP_890542.1、ZP_11000891.1、XP_002605323.1、EGO58341.1、YP_006249145.1、YP_001507004.1、YP_001704637.1、ZP_12876141.1、ZP_11150830.1、ZP_14236257.1、ZP_09411385.1、ZP_14243118.1、EKD16664.1、ZP_15416799.1、ZP_15338016.1、ZP_10080295.1、ZP_11438929.1、ZP_12995210.1、ZP_10946648.1、YP_003409541.1、XP_001637870.1、YP_005451221.1、XP_001212758.1、ZP_07290489.1、ZP_05781329.1、ZP_19187748.1、ZP_06574534.1、XP_002605322.1、NP_822950.1、YP_006366425.1、EJP63377.1、EKD21217.1、XP_001795927.1、XP_003042615.1、ZP_06566152.1、EGU88116.1、EFY94417.1、XP_388327.1、EKJ68934.1、ZP_07290463.1、CCC10458.1、YP_001107201.1、XP_003348248.1、T49753、CAD31840.1、XP_001229975.1、CBN77040.1、YP_004813753.1、XP_002513273.1、XP_001627136.1、AFG52858.1、AFG52857.1、AEW08450.1、NP_841291.1、YP_004512343.1、ACG75701.1和ZP_03500906.1。在一个特别优选的实施方案中,它是具有数据库代码NP_001066718.1的α-双加氧酶或其变体。
除α-双加氧酶、或脂肪酸还原酶和磷酸泛酰巯基乙胺基转移酶的组合外,根据本发明的全细胞催化剂必然地含有将ω-氧代脂肪酸胺化的转氨酶。在一个优选的实施方案中,本文中使用的术语“转氨酶”被理解为是指这样的酶:其催化α氨基从供体分子(优选氨基酸)转移至受体分子(优选α-酮基羧酸)。在一个特别优选的实施方案中,所述转氨酶选自含有以下氨基酸序列及其变体的转氨酶:3HMU_A、AAD41041.1、AAK15486.1、ABE03917.1、ADR60699.1、ADR61066.1、ADR62525.1、AEL07495.1、CAZ86955.1、EFW82310.1、EFW87681.1、EGC99983.1、EGD03176.1、EGE58369.1、EGH06681.1、EGH08331.1、EGH24301.1、EGH32343.1、EGH46412.1、EGH55033.1、EGH62152.1、EGH67339.1、EGH70821.1、EGH71404.1、EGH78772.1、EGH85312.1、EGH97105.1、EGP57596.1、NP_102850.1、NP_106560.1、NP_248912.1、NP_248990.1、NP_354026.2、NP_421926.1、NP_637699.1、NP_642792.1、NP_744329.1、NP_744732.1、NP_747283.1、NP_795039.1、NP_901695.1 (、XP_002943905.1、YP_001021095.1、YP_001059677.1、YP_001061726.1、YP_001066961.1、YP_001074671.1、YP_001120907.1、YP_001140117.1、YP_001170616.1、YP_001185848.1、YP_001188121.1、YP_001233688.1、YP_001268866.1、YP_001270391.1、YP_001345703.1、YP_001412573.1、YP_001417624.1、YP_001526058.1、YP_001579295.1、YP_001581170.1、YP_001668026.1、YP_001669478.1、YP_001671460.1、YP_001685569.1、YP_001747156.1、YP_001749732.1、YP_001765463.1、YP_001766294.1、YP_001790770.1、YP_001808775.1、YP_001809596.1、YP_001859758.1、YP_001888405.1、YP_001903233.1、YP_001977571.1、YP_002229759.1、YP_002231363.1、YP_002280472.1、YP_002297678.1、YP_002543874.1、YP_002549011.1、YP_002796201.1、YP_002801960.1、YP_002875335.1、YP_002897523.1、YP_002912290.1、YP_002974935.1、YP_003060891.1、YP_003264235.1、YP_003552364.1、YP_003578319.1、YP_003591946.1、YP_003607814.1、YP_003641922.1、YP_003674025.1、YP_003692877.1、YP_003755112.1、YP_003896973.1、YP_003907026.1、YP_003912421.1、YP_004086766.1、YP_004142571.1、YP_004147141.1、YP_004228105.1、YP_004278247.1、YP_004305252.1、YP_004356916.1、YP_004361407.1、YP_004378186.1、YP_004379856.1、YP_004390782.1、YP_004472442.1、YP_004590892.1、YP_004612414.1、YP_004676537.1、YP_004693233.1、YP_004701580.1、YP_004701637.1、YP_004704442.1、YP_108931.1、YP_110490.1、YP_168667.1、YP_237931.1、YP_260624.1、YP_262985.1、YP_271307.1、YP_276987.1、YP_334171.1、YP_337172.1、YP_350660.1、YP_351134.1、YP_364386.1、YP_366340.1、YP_369710.1、YP_370582.1、YP_426342.1、YP_440141.1、YP_442361.1、YP_468848.1、YP_521636.1、YP_554363.1、YP_608454.1、YP_610700.1、YP_614980.1、YP_622254.1、YP_625753.1、YP_680590.1、YP_751687.1、YP_767071.1、YP_774090.1、YP_774932.1、YP_788372.1、YP_858562.1、YP_928515.1、YP_983084.1、YP_995622.1、ZP_00948889.1、ZP_00954344.1、ZP_00959736.1、ZP_00998881.1、ZP_01011725.1、ZP_01037109.1、ZP_01058030.1、ZP_01076707.1、ZP_01103959.1、ZP_01167926.1、ZP_01224713.1、ZP_01442907.1、ZP_01446892.1、ZP_01550953.1、ZP_01625518.1、ZP_01745731.1、ZP_01750280.1、ZP_01754305.1、ZP_01763880.1、ZP_01769626.1、ZP_01865961.1、ZP_01881393.1、ZP_01901558.1、ZP_02145337.1、ZP_02151268.1、ZP_02152332.1、ZP_02167267.1、ZP_02190082.1、ZP_02242934.1、ZP_02360937.1、ZP_02367056.1、ZP_02385477.1、ZP_02456487.1、ZP_02883670.1、ZP_03263915.1、ZP_03263990.1、ZP_03400081.1、ZP_03452573.1、ZP_03456092.1、ZP_03517291.1、ZP_03529055.1、ZP_03571515.1、ZP_03572809.1、ZP_03587785.1、ZP_03588560.1、ZP_03697266.1、ZP_03697962.1、ZP_04521092.1、ZP_04590693.1、ZP_04890914.1、ZP_04891982.1、ZP_04893793.1、ZP_04902131.1、ZP_04905327.1、ZP_04941068.1、ZP_04944536.1、ZP_04945255.1、ZP_04959332.1、ZP_04964181.1、ZP_05053721.1、ZP_05063588.1、ZP_05073059.1、ZP_05077806.1、ZP_05082750.1、ZP_05091128.1、ZP_05095488.1、ZP_05101701.1、ZP_05116783.1、ZP_05121836.1、ZP_05127756.1、ZP_05637806.1、ZP_05742087.1、ZP_05783548.1、ZP_05786246.1、ZP_05843149.1、ZP_05945960.1、ZP_06459045.1、ZP_06487195.1、ZP_06492453.1、ZP_06493162.1、ZP_06703644.1、ZP_06731146.1、ZP_06839371.1、ZP_07007312.1、ZP_07266194.1、ZP_07374050.1、ZP_07662787.1、ZP_07778196.1、ZP_07797983.1、ZP_08099459.1、ZP_08138203.1、ZP_08141719.1、ZP_08142973.1、ZP_08177102.1、ZP_08185821.1、ZP_08186468.1、ZP_08208888.1、ZP_08266590.1、ZP_08402041.1、ZP_08406891.1、ZP_08522175.1、ZP_08527488.1、ZP_08631252.1、ZP_08636687。
根据本发明使用的脂肪酸还原酶、以及优选地根据本发明使用的其它酶是重组酶。在一个优选的实施方案中,本文中使用的术语“重组体”被理解为是指,编码对应酶的核酸分子不存在于天然细胞中,和/或它利用基因工程方法来生产。在一个优选的实施方案中,当对应的多肽由重组核酸编码时,使用术语重组蛋白。在一个优选的实施方案中,本文中使用的重组细胞被理解为,至少含有一种重组核酸或一种重组多肽的细胞。适合用于生产重组分子或细胞的方法是本领域技术人员已知的,例如在下述文献中描述的那些:Sambrook/Fritsch/Maniatis (1989): Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 第2版。优选地过表达重组酶,例如利用本领域技术人员已知的pET或pGEX载体系统。
关于生物体的选择,根据本发明可用的全细胞催化剂没有限制,前提条件是,它是可培养的、稳定的,并且如果必要的话,可以实现可通过基因工程引入的修饰,例如用于减弱酶活性的方法,例如敲除。因此,它同样可以为原核或真核细胞。在真核细胞的情况下,单细胞的真核生物是特别优选的,特别是酵母诸如酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、热带假丝酵母(Candida tropicalis)、白色假丝酵母(Candida albicans)和巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)。在原核细胞的情况下,它可以是例如选自以下的细菌:MagnetococcusMariprofundus、醋杆菌属(Acetobacter)、醋酸杆菌属(Acetobacterium)、嗜酸菌属(Acidiphilium)、阿菲彼亚杆菌属(Afipia)、Ahrensia、不粘柄菌属(Asticcacaulis)、橙单胞菌属(Aurantimonas)、固氮根瘤菌属(Azorhizobium)、固氮螺菌属(Azospirillum)、芽孢杆菌属(Bacillus)、巴尔通体(Bartonella tribocorum)、拜叶林克氏菌属(Beijerinckia)、Bradyrhizobium、近弧状短波单胞杆菌(Brevundimonas subvibrioides)、布鲁杆菌属(Brucella)、柄杆菌属(Caulobacter)、ChelativoransCitreicellaCitromicrobium、梭状芽孢杆菌属(Clostridium)、棒杆菌属(Corynebacterium)、Dino玫瑰杆菌属(Dinoroseobacter)、赤杆菌属(Erythrobacter)、Fulvimarina、葡糖醋杆菌属(Gluconacetobacter)、GranulibacterHirschiaHoeflea、丝状细菌属(Hyphomicrobium)、生丝单胞菌属(Hyphomonas)、KetogulonicigeniumLabrenziaLoktanella、磁螺菌属(Magnetospirillum)、MaricaulisMaritimibacterMesorhizobium、甲基杆菌属(Methylobacterium)、甲基孢囊菌属(Methylocystis)、甲基窦菌属(Methylosinus)、硝化杆菌属(Nitrobacter)、NovosphingobiumOceanibulbusOceanicaulisOceanicola、苍白杆菌属(Ochrobactrum)、OctadecabacterOligotropha、副球菌属(Paracoccus)、ParvibaculumParvularcula、短小盒菌属(Pelagibaca)、PhaeobacterPhenylobacteriumPolymorphumPseudo弧菌属(Pseudovibrio)、红杆菌属(Rhodobacter)、红微菌属(Rhodomicrobium)、红假单胞菌属(Rhodopseudomonas)、红螺菌属(Rhodospirillum)、Roseibium、玫瑰杆菌属(Roseobacter)、RoseomonasRoseovariusRuegeriaSagittula、硅杆菌属(Silicibacter)、Sphingobium、假平胞菌属(Sphingomonas)、SphingopyxisStarkeyaSulfitobacterThalassiobium、茁平胞菌属(Xanthobacter)、发酵单胞菌属(Zymomonas)、土壤杆菌(Agrobacterium)、根瘤菌属(Rhizobium)、大豆根瘤菌属(Sinorhizobium)、微粒孢子虫属(Anaplasma)、埃里希体属(Ehrlichia)、新立克次体属(Neorickettsia)、东方体属(Orientia)、立克次体属(Rickettsia)、沃尔巴克体属(Wolbachia)、博德特菌属(Bordetella)、伯霍尔德杆菌属(Burkholderia)、贪铜菌属(Cupriavidus)、TaiwanensisLautropiaLimnobacterPolynucleobacter、罗尔斯通氏菌属(Ralstonia)、色杆菌属(Chromobacterium)、Eikenella corrodensBasfia、金氏杆菌属(Kingella)、海鸥形菌属(Laribacter)、Lutiella、奈瑟球菌属(Neisseria)、西蒙斯氏菌(Simonsiella)、无色杆菌属(Achromobacter)、食酸菌属(Acidovorax)、AlicycliphilusAromatoleum、固氮弧菌属(Azoarcus)、丛毛平胞菌属(Comamonas)、Dechloromonas、代尔夫特菌属(Delftia)、加立昂菌属(Gallionella)、草螺菌属(Herbaspirillum)、HerminiimonasHylemonella、詹森菌属(Janthinobacterium)、纤毛菌属(Leptothrix)、Methylibium、甲基芽孢杆菌属(Methylobacillus)、嗜甲基菌目(Methylophilales)、MethyloversatilisMethylovorus、亚硝化单胞菌属(Nitrosomonas)、亚硝化螺菌属(Nitrosospira)、草酸杆菌属(Oxalobacter)、Parasutterella、极地单胞菌(Polaromonas)、极地单胞菌(Polaromonas)、PusillimonasRhodoferax、红长命菌属(Rubrivivax)、SideroxydansSutterella wadsworthensis、泰勒菌属(Taylorella)、需氧去氮菌属(Thauera)、硫杆菌属(Thiobacillus)、硫单胞菌属(Thiomonas)、贪噬菌属(Variovorax)、VerminephrobacterAnaeromyxobacter、食菌蛭弧菌(Bdellovibrio bacteriovorus)、嗜胆菌属(Bilophila)、脱硫盒菌属(Desulfarculus)、DesulfatibacillumDesulfobaccaDesulfobacterium、脱硫葱球菌属(Desulfobulbus)、脱硫球菌属(Desulfococcus)、Desulfohalobium、脱硫杆菌属(Desulfitobacterium)、脱硫微菌属(Desulfomicrobium)、DesulfonatronospiraDesulfotalea、脱硫弧菌属(Desulfovibrio)、脱硫单胞菌属(Desulfuromonas)、地杆菌属(Geobacter)、HaliangiumHippea、散沫花属(Lawsonia)、粘球菌属(Myxococcus)、PelobacterPlesiocystis、堆囊粘细菌属(Sorangium)、眼点粘球菌属(Stigmatella)、互营杆菌属(Syntrophobacter)、Syntrophus、弓形杆菌属(Arcobacter)、Caminibacter、弯曲杆菌属(Campylobacter)、螺杆菌属(Helicobacter)、NitratifractorNitratiruptorSulfuricurvumSulfurimonasSulfurospirillumSulfurovum、类杆菌属(Wolinella)、BuchneraBlochmanniaHamiltonellaRegiellaRiesia、柠檬酸杆菌属(Citrobacter)、CronobacterDickeya、爱德华菌属(Edwardsiella)、肠杆菌属(Enterobacter)、欧文氏菌属(Erwinia)、埃希氏菌属(Escherichia)、克雷伯菌属(Klebsiella)、成团泛菌属(Pantoea)、果胶杆菌属(Pectobacterium)、变形杆菌(Proteus)、普罗威登斯菌属(Providencia)、拉恩菌属(Rahnella)、沙门氏菌属(Salmonella)、沙雷氏菌属(Serratia)、志贺氏菌属(Shigella)、Sodalis、蠕动杆菌属(Wigglesworthia)、Glossina、致病杆菌属(Xenorhabdus)、耶尔森菌属(Yersinia)、酸硫杆状菌属(Acidithiobacillus)、不动杆菌属(Acinetobacter)、气单胞菌属(Aeromonas)、AlcanivoraxAlkalilimnicolaAllochromatium、交替单胞菌目(Alteromonadales)、互生平胞菌属(Alteromonas)、Baumannia、贝日阿托菌属(Beggiatoa)、BermanellaCarsonellaRuthiaVesicomyosocius、心杆菌属(Cardiobacterium)、色盐杆菌属(Chromohalobacter)、ColwelliaCongregibacter、考克斯体属(Coxiella)、DichelobacterEndoriftiaEnhydrobacterFerrimonas、弗朗西丝菌属(Francisella)、GlaciecolaHahella、嗜盐菌属(Halomonas)、盐红螺旋菌属(Halorhodospira)、盐硫杆菌属(Halothiobacillus)、IdiomarinaKangiella、军团病杆菌属(Legionella)、海杆菌属(Marinobacter)、海单胞菌属(Marinomonas)、Methylobacter、甲基球菌属(Methylococcus)、MethylomicrobiumMethylophaga、莫拉菌属(Moraxella)、嗜冷菌属(Moritella)、Neptuniibacter、硝化球菌属(Nitrococcus)、假交替单胞菌属(Pseudoalteromonas)、嗜冷杆菌属(Psychrobacter)、PsychromonasReinekea、小立克次体属(Rickettsiella)、Saccharophagus、斯瓦尼菌属(Shewanella)、SuccinatimonasTeredinibacterThioalkalimicrobiumThioalkali弧菌属(Thioalkalivibrio)、ThiomicrospiraTolumonas、弧菌目(Vibrionales)、放线杆菌属(Actinobacillus)、AggregatibacterGallibacterium、嗜血杆菌属(Haemophilus)、嗜组织菌属(Histophilus)、曼氏杆菌属(Mannheimia)、巴斯德菌属(Pasteurella)、固氮菌属(Azotobacter)、纤维弧菌属(Cellvibrio)、假单胞菌属(Pseudomonas)、AliivibrioGrimontia、发光细菌属(Photobacterium)、发光细菌属(Photobacterium)、弧菌属(Vibrio)、假黄单胞菌属(Pseudoxanthomonas)、狭长平胞属(Stenotrophomonas)、黄单胞菌属(Xanthomonas)、木杆菌属(Xylella)、疏螺旋体属(Borrelia)、短螺旋体属(Brachyspira)、钩端螺旋体属(Leptospira)、螺旋体属(Spirochaeta)、密螺旋体属(Treponema)、HodgkiniaPuniceispirillumLiberibacterPelagibacterOdyssellaAccumulibacter,尤其是枯草芽孢杆菌(B. subtilis)、巨大芽孢杆菌(巨大芽孢杆菌)、谷氨酸棒杆菌(C. glutamicum)、大肠杆菌(E. coli)、假单胞菌属(Pseudomonas sp.)、荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)、恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)、施氏假单胞菌(Pseudomonas stutzeri)、不动杆菌属(Acinetobacter sp.)、伯霍尔德杆菌属(Burkholderia sp.)、Burkholderia thailandensis、蓝细菌(cyanobacteria)、克雷伯菌属(Klebsiella sp.)、产酸克雷伯菌(Klebsiella oxytoca)、沙门氏菌属(Salmonella sp.)、根瘤菌属(Rhizobium sp.)和苜蓿根瘤菌(Rhizobium meliloti)。在一个特别优选的实施方案中,它是肠细菌,最优选大肠杆菌。
有利的是,根据本发明的全细胞催化剂除脂肪酸还原酶、磷酸泛酰巯基乙胺基转移酶和转氨酶外也含有丙氨酸脱氢酶,以便从无机含氮分子再生在ω-氧代脂肪酸的胺化过程中被转氨酶消耗的丙氨酸。在一个优选的实施方案中,本文中使用的术语“丙氨酸脱氢酶”被理解为是指这样的酶:其在消耗水和NAD+下催化L-丙氨酸向丙酮酸盐、氨和NADH的转化和逆反应。在一个特别优选的实施方案中,所述丙氨酸脱氢酶选自包括以下丙氨酸脱氢酶的氨基酸序列及其变体的丙氨酸脱氢酶:得自枯草芽孢杆菌(数据库代码L20916)、豌豆根瘤菌(数据库代码CP001622)、溶蛋白弧菌(数据库代码AF070716)、结核分枝杆菌(数据库代码X63069)、产气肠杆菌(数据库代码AB013821)的丙氨酸脱氢酶的氨基酸序列,EGR93259.1, YP_003654745.1, YP_003651439.1, YP_003637111.1, YP_003631815.1, YP_001327051.1, YP_001262560.1, YP_886996.1, YP_882850.1, YP_704410.1, YP_703508.1, ZP_08624689.1, YP_001230376.1, P17557.1, P17556.1, CCB94892.1, CCB73698.1, YP_001168635.1, YP_004668736.1, YP_004569425.1, YP_003513168.1, YP_004561169.1, ZP_08554945.1, YP_400777.1, ZP_08311476.1, ZP_08310170.1, ZP_08267322.1, ZP_08263846.1, ZP_07898723.1, YP_149301.1, YP_148605.1, YP_004340432.1, EFT09946.1, EFS80513.1, EFS51332.1, EFS42459.1, YP_003060895.1, YP_003059033.1, ZP_03305373.1, YP_847214.1, YP_004095847.1, YP_003338282.1, YP_003337256.1, YP_355846.1, YP_253131.1, ZP_08197563.1, ZP_08196283.1, ADW06447.1, YP_734091.1, NP_372233.1, NP_102173.1, ZP_08170259.1, EGD36706.1, EGD32748.1, ZP_08155540.1, YP_004142849.1, YP_002417649.1, YP_001301040.1, YP_002992892.1, YP_081348.1, YP_080482.1, YP_002476349.1, ZP_08115025.1, ZP_08114403.1, YP_003552869.1, YP_002358112.1, YP_575010.1, YP_477594.1, YP_474564.1, YP_130399.1, YP_129373.1, YP_123314.1, NP_810467.1, NP_646469.1, NP_626044.1, NP_391071.1, ZP_08086822.1, ZP_08084776.1, ZP_08083119.1, ZP_08020768.1, ZP_08013590.1, ZP_08011832.1, YP_003783744.1, YP_002781576.1, YP_002780533.1, ZP_02195873.1, NP_797482.1, ZP_07645051.1, ZP_07643260.1, ZP_06611917.1, AAT40119.1, ZP_07864946.1, YP_004068409.1, YP_002796203.1, YP_002774420.1, YP_003600348.1, YP_003599946.1, YP_003565624.1, YP_003565223.1, YP_335198.1, YP_423850.1, YP_155059.1, ZP_07843538.1, ZP_07841226.1, ZP_06928932.1, ZP_05692073.1, ZP_05687006.1, ZP_04867480.1, YP_775531.1, CBE70214.1, ZP_07721182.1, ZP_04302850.1, ZP_04298961.1, ZP_04287684.1, ZP_04277177.1, ZP_04248389.1, ZP_04235899.1, ZP_02159718.1, ZP_02152178.1, YP_003974610.1, YP_003546595.1, YP_002317127.1, ZP_07313778.1, ZP_07302778.1, ZP_07298850.1, CBK69442.1, YP_003413835.1, YP_003595089.1, ZP_06807811.1, YP_003582455.1, YP_003464731.1, YP_003496397.1, YP_003421918.1, CBL07274.1, CBK64956.1, YP_003508515.1, AAL87460.1, AAC23579.1, AAC23578.1, AAC23577.1, ACU78652.1, YP_003471439.1, YP_003452777.1, ZP_06384971.1, ACY25368.1, ABC26869.1, AAP44334.1, EEZ80018.1, ZP_05110458.1, 1PJB_A, ZP_04717201.1, ZP_04689103.1, CAO90307.1, CAM75354.1, CAA44791.1, BAA77513.1, EGR96638.1, EGL90046.1, YP_004510847.1, ZP_08450330.1, YP_003387804.1, YP_003058152.1, EFS74272.1, EFS67128.1, ZP_06844564.1, YP_826658.1, YP_001195249.1, YP_003095978.1, YP_469292.1, YP_004442054.1, YP_004461174.1, YP_004055616.1, YP_003576656.1, YP_003094537.1, YP_001295973.1, AEE71143.1, YP_004447480.1, YP_003761844.1, YP_040853.1, YP_003154888.1, YP_003142045.1, YP_002280953.1, NP_371963.1, NP_422368.1, EGC98966.1, EGC76398.1, YP_004263661.1, YP_004252039.1, YP_679036.1, YP_499973.1, ZP_08054972.1, ZP_08053009.1, ZP_04067276.1, ZP_03968868.1, ZP_03963857.1, ZP_03933079.1, ZP_03497046.1, ZP_06668924.1, ZP_06667106.1, ZP_06324464.1, ZP_06196777.1, ZP_05114159.1, ZP_05083968.1, ZP_05070370.1, ZP_05030022.1, ZP_04673064.1, ZP_03517011.1, ZP_03505783.1, XP_001310698.1, ABK27691.1和CAB59281.2。就被丙氨酸脱氢酶催化的反应而言,必要的是,不仅存在丙酮酸盐(其形成为可能作为全细胞催化剂的任何细胞的主要代谢的一部分),而且存在铵。所述铵通常以无机氮盐的形式提供,例如铵盐、硝酸盐等。优选地,将铵盐(例如氯化铵)加入水性反应介质中。
此外,有利的是,根据本发明的全细胞催化剂表达烷烃羟化酶,并任选地表达烷烃羟化酶的活性所必需的其它酶,尤其是对于下述情况而言:使用在其末端ω碳原子处的氧化水平低于醛的氧化水平的脂肪酸作为生产ω-氨基脂肪酸的底物。烷烃羟化酶和/或额外表达的醇脱氢酶然后将末端碳原子氧化为醛基,所述醛基然后可以被转氨酶胺化。在一个优选的实施方案中,本文中使用的术语“烷烃羟化酶”被理解为是指这样的酶:其催化未被取代的含有至少6个、优选12个烃残基的直链烷基残基的羟基化。
作为烷烃羟化酶,许多氧化系统根据本发明是合适的,例如尤其是描述在PCT/EP2008/067447中。在一个优选的实施方案中,所述烷烃羟化酶是CYP153家族的细胞色素P450单加氧酶。在一个优选的实施方案中,术语“CYP153家族的细胞色素P450单加氧酶”被理解为是指这样的细胞溶质氧化酶:其是另外含有铁氧还蛋白和铁氧还蛋白还原酶的3-组分系统的一部分,具有烷烃结合位点和将烷烃羟基化的能力。在一个特别优选的实施方案中,它是:与得自Alcanivorax borkumensis SK2的CYP153家族的细胞色素P450单加氧酶(数据库代码YP_691921)具有多达至少80%、优选90%、最优选95%或99 %序列同一性的酶,或者含有特定多肽序列且另外具有烷烃羟化酶活性的酶,所述多肽序列与得自Alcanivorax borkumensis SK2的CYP153家族的细胞色素P450单加氧酶(数据库代码YP_691921)具有至少80%、优选90%、最优选95%或99 %序列同一性。如贯穿本申请,在这里,所述数据库代码在这里是基于NCBI (国家生物技术信息中心, Bethesda, USA) 数据库,更精确讲,2012年11月21日可在线获得的版本。在一个优选的实施方案中,术语“CYP153家族的细胞色素P450单加氧酶”被理解为是指非膜结合的氧化酶,其包括用于烷烃、未被取代的直链烷基残基(包括至少5个、优选12个烃残基)或单次羟基化的烷烃的结合位点,且其多肽链含有基序LL(I/L)(V/I)GGNDTTRN。在一个优选的实施方案中,本文中使用的“CYP153家族的细胞色素P450单加氧酶”是得自Alcanivorax borkumensis SK2的CYP153家族的细胞色素P450单加氧酶(数据库代码YP_691921)或其变体,其优选地具有烷烃羟化酶活性。
为了给CYP153家族的细胞色素P450单加氧酶最佳地供给来自还原剂(优选NADH)的电子,优选的是,所述细胞表达单加氧酶以及在功能上与它相互作用的铁氧还蛋白还原酶和在功能上与它相互作用的铁氧还蛋白。在这里,这些可以是分离的多肽,或在使用全细胞催化剂的过程中是共表达的多肽,或是在N-或C-端与CYP153家族的细胞色素P450单加氧酶融合的多肽。本领域技术人员可以如下容易地确定铁氧还蛋白还原酶或铁氧还蛋白与给定的CYP153家族的细胞色素P450单加氧酶是否在功能上彼此相互作用:与缺少所述3种物质中的至少一种的情况相比,在有烷烃底物和所述3种多肽存在下是否会更有效地氧化还原剂。可替换地,可以使用Scheps, D., Malca, H., Hoffmann, B., Nestl, B. M., 和Hauer, B. (2011) Org. Biomol. Chem., 9, 6727描述的酶试验,在功能上相互作用多肽的情况下,该试验显示出反应速率的显著增加。在一个特别优选的实施方案中,CYP153家族的细胞色素P450单加氧酶、铁氧还蛋白和铁氧还蛋白还原酶来自相同生物体。在一个特别优选的实施方案中,它们是得自Alcanivorax borkumensis SK2的铁氧还蛋白还原酶(数据库代码YP_691923)或其变体、得自Alcanivorax borkumensis SK2的铁氧还蛋白(数据库代码YP_691920)或其变体、和得自Alcanivorax borkumensis SK2的CYP153家族的细胞色素P450单加氧酶(数据库代码YP_691921)或其变体。
在另一个优选的实施方案中,所述烷烃羟化酶是AlkB单加氧酶。AlkB是首先从得自恶臭假单胞菌Gpo1的AlkBGT系统已知的氧化还原酶,其依赖于另外2种多肽AlkG和AlkT。AlkT被表征为FAD依赖性的红素氧还蛋白还原酶,其将电子从NADH传递至AlkG。AlkG是一种红素氧还蛋白(含铁的氧化还原蛋白),其作为AlkB的直接电子供体起作用。在一个优选的实施方案中,术语“AlkB单加氧酶”被理解为是指这样的多肽:其与得自恶臭假单胞菌Gpo1的AlkB的序列(数据库代码: CAB54050.1;象在本申请中使用的所有其它数据库代码一样,该数据库代码源自现有技术,即源自NCBI数据库,更精确讲,在2012年10月15日可在线得到的版本) 具有至少75%、80%、85%、90%、92%、94%、96%、98%或99%的序列同源性(按照递增优选次序阐述),且具有氧化烷烃的能力。在一个特别优选的实施方案中,所述AlkB单加氧酶是氧化烷烃的氧化还原酶,其在功能上与得自恶臭假单胞菌Gpo1的AlkG (CAB54052.1)和AlkT (CAB54063.1) 多肽相互作用。为了给AlkB烷烃羟化酶最佳地供给电子,优选的是,所述细胞表达单加氧酶以及在功能上与它相互作用的辅助蛋白,优选AlkG和/或AlkT或它们各自的变体,其中在一个特别优选的实施方案中,这些再次是得自恶臭假单胞菌Gpo1的AlkG (CAB54052.1)和AlkT (CAB54063.1) 多肽。
在全细胞催化剂的使用中,问题可以源自:必须使底物与位于细胞内的酶接触,从而发生期望的反应。在长链烷烃及其衍生物的情况下,优选的是,全细胞催化剂含有AlkL家族的多肽。AlkL是得自恶臭假单胞菌的膜蛋白,其可以将长链脂肪酸及其衍生物输入细菌细胞中。在一个优选的实施方案中,本文中使用的“AlkL家族的多肽”是这样的多肽:其在230个连续氨基酸的长度上与得自恶臭假单胞菌的AlkL (数据库代码CAB69081)或得自恶臭假单胞菌的AlkL的变体具有至少80%、优选90%、更优选90%序列同一性,且优选地具有促进长链烷烃向细胞内部输入的能力。在另一个实施方案中,本文中使用的“AlkL家族的多肽”是位于革兰氏阴性细菌的外膜中的多肽,其具有序列基序DXWAPAXQ(V/A)GXR,其中X代表形成蛋白的氨基酸,且优选地另外是得自恶臭假单胞菌的AlkL (数据库代码CAB69081)或其变体。AlkL家族的成员的例子包括得自恶臭假单胞菌(数据库代码CAB69081)、水油海杆菌(Marinobacter aquaeolei)VT8 (数据库代码YP_957722)、Oceanicaulis alexandrii HTCC2633 (数据库代码ZP_00953584)、Marinobacter manganoxydans MnI7-9 (数据库代码ZP_09158756)、柄杆菌K31 (数据库代码YP_001672217)、食油假单胞菌(Pseudomonas oleovorans)(数据库代码Q00595) 的AlkL及其变体。
本发明的教导不仅可以利用具有正确氨基酸或核酸序列的大分子(在本文中引用)来实现,或者不仅可以利用其具有正确氨基酸序列的多肽活性与各种野生型相比降低的细胞(在本文中引用)来实现,而且可以利用这样的大分子的变体、或与各个细胞的各种野生型相比具有降低的多肽变体活性的细胞(其可以通过一个或超过一个氨基酸或核酸的删除、添加或置换而得到)来实现。在一个优选的实施方案中,本文中使用的术语核酸序列或氨基酸序列的“变体”(在下面与术语“同系物”等效地且可交换地使用)是指另一种核酸或氨基酸序列,其包括或者是这样的序列:其相对于对应的原始野生型核酸或氨基酸序列,具有70%、75%、80%、85%、90%、92%、94%、96%、98%、99%或更高百分比的同源性(在这里与同一性等效使用),其中优选地,除了形成催化活性中心以外的氨基酸或者为结构或折叠所必需的那些氨基酸被删除或置换,或者它们仅仅被保守地置换,例如用谷氨酸替换天冬氨酸,或用亮氨酸替换缬氨酸。现有技术描述了可以用于计算2个序列的同源性程度的算法,例如Arthur Lesk (2008), Introduction to bioinformatics, 第3版。在本发明的另一个更优选的实施方案中,优选地除了前述序列同源性以外,氨基酸或核酸序列的变体基本上具有野生型分子或原始分子的相同酶活性。例如,具有蛋白酶酶活性的多肽变体具有与多肽酶相同的或基本上相同的蛋白水解活性,即催化肽键水解的能力。在一个特定实施方案中,术语“基本上相同的酶活性”是指,关于野生型多肽的底物的活性,其可以显著高于背景活性,或/和与野生型多肽关于相同底物表现出的KM和/或kcat值相差小于3个、更优选2个、更优选1个数量级。在另一个优选的实施方案中,术语核酸或氨基酸序列的“变体”包含所述核酸或氨基酸序列的至少一个活性部分或片段。在另一个优选的实施方案中,本文中使用的术语“活性部分”是指这样的氨基酸序列或核酸序列:其具有小于全长的氨基酸序列或编码小于全长的氨基酸序列,其中具有比野生型氨基酸序列更小长度的氨基酸序列或编码的氨基酸序列具有与野生型多肽或其变体(例如蛋白酶)基本上相同的酶活性。在一个特定实施方案中,术语核酸的“变体”包括这样的核酸:其互补链结合野生型核酸,优选地在严谨条件下。对于本领域技术人员而言,杂交反应的严谨性是容易确定的,且通常取决于探针的长度、洗涤过程中的温度和盐浓度。一般而言,较长的探针需要较高的杂交温度,而较短的探针与较低温度一起使用。杂交是否发生,通常取决于变性的DNA与在它们附近存在的互补链对合的能力,并且这低于解链温度。杂交反应的严谨性和对应的条件更详细地描述在:F. M. Ausubel (1995), Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, Inc.。本领域技术人员会找到关于通过杂交来鉴别DNA序列的说明书,尤其是在手册“The DIG system User’s Guide for Filter Hybridization”from the firm Boehringer Mannheim GmbH (曼海姆, 德国, 1993)中和在Liebl等人(International Journal of Systematic Bacteriology 41: 255-260 (1991))中。在一个优选的实施方案中,所述杂交在严谨条件下进行,也就是说,仅形成这样的杂交体:其中探针和靶序列(即用探针处理的多核苷酸)具有至少70%同一性。已知的是,缓冲液组成、温度和盐浓度的变化会影响或决定包括洗涤步骤的杂交的严谨性。一般而言,与洗涤步骤相比,在相对低严谨性下进行杂交反应(Hybaid Hybridisation Guide, Hybaid Limited, Teddington, UK, 1996)。例如,在约50℃-68℃的温度,与5x SSC缓冲液对应的缓冲液可以用于杂交反应。在该过程中,探针还可以与这样的多核苷酸杂交:所述多核苷酸与所述探针的序列具有小于70%同一性。这样的杂交体具有更低的稳定性,并且通过在严谨条件下的洗涤来除去。这可以例如如下实现:将盐浓度降低至2x SSC,且如果必要的话,随后降低至0.5x SSC (The DIG System User’s Guide for Filter Hybridization, Boehringer Mannheim, 曼海姆, 德国, 1995),其中按照递增优选次序,建立约50℃-68℃、约52℃-68℃、约54℃-68℃、约56℃-68℃、约58℃-68℃、约60℃-68℃、约62℃-68℃、约64℃-68℃、约66℃-68℃的温度。约64℃-68℃或约66℃-68℃的温度范围是优选的。如果必要的话,还可能将盐浓度降低至与0.2x SSC或0.1x SSC对应的浓度。通过使杂交温度以约1-2℃的步长从50℃逐步升高至68℃,可以分离这样的多核苷酸片段:例如,按照递增优选次序,其与使用的核酸分子的序列具有至少70%、或至少80%、或至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%同一性。关于杂交的其它说明,可以在市场上以所谓的试剂盒(例如DIG Easy Hyb,得自公司Roche Diagnostics GmbH, 曼海姆, 德国, 目录号1603558)的形式得到。在一个优选的实施方案中,本文中使用的术语核酸的“变体”包括这样的任意核酸序列:其在遗传密码简并性的背景下,编码与原始核酸相同的氨基酸序列或该氨基酸序列的变体。
在一个优选的实施方案中,根据本发明使用的细胞具有与其野生型相比降低活性的至少一种酶,所述酶催化脂肪酸的β-氧化反应之一,其中这优选地为选自以下的酶:脂肪酸辅酶A连接酶、酰基辅酶A脱氢酶、2,4-二烯酰辅酶A还原酶、烯酰辅酶A水合酶和3-酮酰基辅酶A硫解酶、脂肪酸输入酶或其变体。脂肪酸的β-氧化是普遍的代谢途径,其允许原核和真核生物等氧化脂肪酸和使得其中所含的化学能可用于代谢。在更宽的含义上,它从脂肪酸向细胞中的摄取开始。在条件需要它的范围内,在大肠杆菌FadE的情况下,脂肪酸首先在辅酶A脂肪酸酯的β位置处被酰基辅酶A脱氢酶氧化。可替换地,在大肠杆菌FadH中,通过2,4-二烯酰辅酶A还原酶的还原,还可以从双不饱和脂肪酸形成类似的分子。在大肠杆菌FadB中,多功能的酶烯酰辅酶A水合酶/3-羟基酰基辅酶A脱氢酶然后催化水合,并形成仲醇,随后将它氧化为酮。在最后一步中,在大肠杆菌FadA的情况下,3-酮酰基辅酶A硫解酶催化酮酰基辅酶A的裂解,结果是,释放出乙酰辅酶A和与起始分子相比缩短了2个碳原子的脂肪酸的辅酶A酯。在它也不是乙酰辅酶A的前提条件下,后者可以重新进入β氧化循环,并通过氧化而缩短。FadR也参与脂肪酸的β氧化的调节,所述FadR是Fad操纵子的调节剂,所述Fad操纵子包含脂肪酸的降解所必需的基因,但是FadR不会催化β氧化反应。在一个优选的实施方案中,术语“催化脂肪酸的β氧化反应之一的酶”被理解为是指这样的任意酶:其与脂肪酸底物或在通向乙酰辅酶A的途径上的从所述脂肪酸底物形成的分子直接相互作用,优选地将它识别为底物,并催化它转化为在该降解途径上更接近乙酰辅酶A的代谢产物,优选地包括实现脂肪酸向细胞中的摄取的脂肪酸输入酶。例如,酰基辅酶A脱氢酶属于根据前述定义的这些酶,因为它与脂肪酸辅酶A酯相互作用,并催化它向烯酰辅酶A的转化,所述烯酰辅酶A在β氧化的代谢途径上比脂肪酸辅酶A酯更接近乙酰辅酶A。在一个特别优选的实施方案中,本文中使用的术语“催化脂肪酸的β氧化反应之一的酶”被理解为是指这样的任意酶:其选自得自大肠杆菌的基因产物FadA、FadB、FadD、FadL和FadE,和/或得自其它生物体的它们的变体或同系物。得自大肠杆菌的基因产物FadA、FadB、FadD、FadL和FadE,以及许多其它生物技术上有用的生物体的变体和同系物,和它们的核酸和多肽序列,被描述在现有技术中,例如在登录号AP009048.1下的FadA、在登录号BAE77457.1下的FadB、在登录号BAA15609.1下的FadD、和在登录号BAA77891.2下的FadE。现有技术公开了许多特别适合用于测量酶的活性的试验,所述酶催化脂肪酸的β氧化反应之一,例如在下述文献中:K Kameda & W D Nunn (1981) J. Biol. Chem. 256, 5702-5707, H Marrakchi, W E DeWolf, C Quinn, J West, B J Polizzi, C Y So等人(2003) Biochem. J. 370, 1055-1062, Lobo等人(2001)和X Yu, T Liu, F Zhu,和C Khosla (2011) PNAS, 印刷前的电子出版物。
就根据本发明的全细胞催化剂的有效性而言,有利的是,要转化的底物、优选脂肪酸、ω-羟基脂肪酸或ω-氧代脂肪酸可以容易地接触根据本发明必需的酶,所述酶位于全细胞催化剂的内部。因此,至关重要的是,所述底物可以到达细胞的内部。为了促进这方面,优选的是,在细菌、尤其是革兰氏阴性全细胞催化剂的情况下,所述全细胞催化剂表达脂肪酸输入酶,特别优选脂肪酸输入酶FadL (数据库代码: BAA16205.1)或变体,优选地其浓度和活性与对应的全细胞催化剂的野生型的活性相比增加。通过本领域技术人员常规地可接近的多种途径,可以实现多肽活性与细胞的野生型相比的增加,所述途径例如:掺入在功能上与启动子连接的编码多肽的核苷酸序列的额外拷贝,或将天然启动子更换为更强的启动子。
已经发现,在下述情况下,根据本发明以更高产率和纯度生产ω-氨基脂肪酸:优化在全细胞催化剂中内源性地表达的酶的背景,从而降低或关闭内源酶的活性,所述内源酶在代谢途径中降解根据本发明的方法或利用根据本发明的细胞的起始物、中间产物或产物(优选ω-氨基脂肪酸),或者以偏离期望产物的形成的其它方式修饰它们。在该背景下,有利的是,根据本发明的全细胞催化剂是这样的细胞,其具有与它的野生型相比降低的酯酶BioH [数据库代码YP_492020.1]或其变体的活性。这样的具有降低的BioH活性的细胞、它们的生产和活性确定试验描述于欧洲专利申请EP12007663.3中。
根据本发明的全细胞催化剂可以用在脂肪酸、ω-羟基脂肪酸或ω-氧代脂肪酸向对应胺、优选ω-氨基脂肪酸转化的方法中,其中所述脂肪酸、ω-羟基脂肪酸、ω-氧代脂肪酸或其单酯是式(I)的化合物
R1 - A - COOR2 (I)
其中R1选自-H、-CHO、-OH和COOR3,其中R2和R3各自且彼此独立地选自H、甲基、乙基和丙基,前提条件是,残基R2和R3中的至少一个是H,且其中A代表无分支的、支链、直链、环状、被取代的或未被取代的、具有至少4个碳原子的烃基。在一个优选的实施方案中,A是式-(CH2)n-的结构,其中n是4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30。在一个最优选的实施方案中,所述脂肪酸、ω-羟基脂肪酸或ω-氧代脂肪酸是月桂酸、ω-羟基月桂酸或ω-氧代月桂酸。在另一个最优选的实施方案中,所述脂肪酸、ω-羟基脂肪酸或ω-氧代脂肪酸是己酸、ω-羟基己酸或者ω-氧代己酸。在另一个最优选的实施方案中,所述脂肪酸、ω-羟基脂肪酸或ω-氧代脂肪酸是癸酸、ω-羟基癸酸或ω-氧代癸酸。
就与在本申请中描述的每种化学化合物有关的脂肪酸而言,所述的各个式包括各种化合物的所有盐(质子化的或去质子化的)。例如,月桂酸不仅包含质子化形式,而且包含具有所有阳离子的月桂酸盐,例如月桂酸钠。
根据本发明的方法要求,在水溶液中使根据本发明的方法使用的酶(任选地,以根据本发明的全细胞催化剂的形式提供)与脂肪酸、ω-羟基脂肪酸或ω-氧代脂肪酸接触。在一个优选的实施方案中,本文中使用的术语“接触”被理解为是指,各酶与它的底物直接接触,在二者之间没有插入物理屏障诸如不透性膜等。在最简单的情况下,通过将底物加入酶或全细胞催化剂所在的水溶液中来进行所述接触。
适合用于实现根据本发明的教导的是这样的反应混合物,其包含水溶液中的根据本发明的全细胞催化剂和式(I)的脂肪酸、ω-羟基脂肪酸、ω-氧代脂肪酸或其单酯,其中R1选自-H、-CHO、-OH和COOR3,其中R2和R3各自且彼此独立地选自H、甲基、乙基和丙基,前提条件是,残基R2和R3中的至少一个是H,其中A代表无分支的、支链、直链、环状、被取代的或未被取代的、具有至少4个碳原子的烃基,优选式- (CH2)n -,且其中n是至少4,特别优选至少10。这里的水溶液例如就组成、pH和温度而言,必须构造成使得它支持全细胞催化剂的生存力或至少催化能力至少一定时间。本领域技术人员已知许多适合作为水溶液的水性培养基,它们适合用于维持或培养细胞,尤其是在生物技术上重要的细胞。这些包括完全培养基诸如LB培养基、基本培养基诸如M9培养基和选择性培养基,例如含有高盐浓度且因此仅能够用于培养嗜盐的或至少耐盐的生物体的那些。在一个优选的实施方案中,本文中使用的术语“水性培养基”被理解为是指基于水的反应介质,其就所有有关的因素(尤其是pH、盐含量和温度)而言,被构造成使得它会维持或促进其中所含的细胞(优选微生物)的生存力,并且水性培养基以及疏水有机相都以液体形式存在。从微生物学和分子生物学教科书(例如Fuchs/Schlegl, 2008),可以推知不同的在生物技术上重要的细胞的温度需求。在一个优选的实施方案中,在接触时,水性培养基的pH是在4-9之间,更优选在4.5至8.5之间,且最优选在6.5至7.5之间。在另一个优选的实施方案中,所述温度是在0-45℃之间,更优选15-40℃之间,且最优选在20-37℃之间。所述反应混合物通常被容纳在发酵罐中。可以被灭菌(优选高压灭菌)并允许培养全细胞催化剂、充气和控制反应条件(例如氧含量和温度)的任何反应容器可以充当发酵罐。
在一个优选的实施方案中,所述反应混合物除了包括水溶液以外还包括疏水有机相。这可以包含有机溶剂和/或疏水液体阳离子交换剂,所述阳离子交换剂用于从水溶液中除去ω-氨基脂肪酸。合适的溶剂和阳离子交换剂描述于EP11191520.3中。
下述简图和非限制性实施例进一步解释了本发明,从其中可以推知本发明的其它特征、实施方案、方面和优点。
实施例 1
具有得自诺卡氏菌属的npt的、用于共表达编码脂肪酸还原酶的基因的表达载体的制备
为了制备用于共表达编码脂肪酸还原酶的基因的载体,所述载体含有得自诺卡氏菌属的npt (SEQ ID No.1,编码ABI83656.1),其编码磷酸泛酰巯基乙胺基转移酶,针对在大肠杆菌中的表达对所述基因进行密码子优化,并与lacuv5启动子(SEQ ID No.2)一起合成,同时,在上游和下游引入限制切割位点。使用下述脂肪酸还原酶基因:
● 得自耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis)的MSMEG_2956 (carA, SEQ ID No.3,编码YP_887275.1)
● 得自耻垢分枝杆菌的MSMEG_5739 (carB, SEQ ID No.4,编码YP_889972.1)
● 得自细胞内分枝杆菌(Mycobacterium intracellulare)MOTT-64的FadD9 (car_Mint, SEQ ID No.5,编码YP_005349252.1)
● 得自偶发分枝杆菌偶发亚种(Mycobacterium fortuitum subsp. fortuitum)DSM 46621的MFORT_07381 (car_Mfort, SEQ ID No.6,编码ZP_11001941.1)
● 得自鸟分枝杆菌副结核亚种(Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis)K-10的FadD9 (car_Mavi, SEQ ID No.7,编码NP_959974.1)
● 得自蓝菌属(Cyanobium sp.)PCC 7001的CPCC7001_1320 (car_Cs, SEQ ID No.8,编码ZP_05045132.1)
● 得自脓肿分枝杆菌属(Mycobacterium abscessus)ATCC 19977的MAB_3367 (car_Mab, SEQ ID No.9,编码YP_001704097.1)
● 得自巴西诺卡菌(Nocardia brasiliensis)ATCC 700358的FadD9 (car_nbr, SEQ ID No.10,编码ZP_09839660.1)
● 得自Mycobacterium indicus pranii MTCC 9506的MIP_06852 (car_Mip, SEQ ID No.11,编码YP_006731697.1)
● 得自皮疽诺卡菌(Nocardia farcinica)IFM 10152的nfa20150 (car_nfa, SEQ ID No.12,编码YP_118225.1)
● 得自溃疡分枝杆菌(Mycobacterium ulcerans)Agy99的MUL_1722 (car_Mul, SEQ ID No.13,编码YP_905678.1)
● 得自酸疮痂链霉菌(Streptomyces acidiscabies)84-104的Saci8_010100039603 (car_Sac, SEQ ID No.14,编码ZP_10456477.1)
● 得自Mycobacterium colombiense CECT 3035的MCOL_V203220 (car_Mcol, SEQ ID No.15,编码WP_007769435.1)
用限制性内切核酸酶NdeI和AvrII消化合成的DNA片段,并连接进相应切割的载体pSC101 (SEQ ID No.16)中。所述载体pSC101是非常低拷贝载体,其介导四环素抗性,且具有每个细胞约4个拷贝的低拷贝数。以此方式,可以制备下述表达载体:
● pSC101{Placuv5}[carA_Ms(co_Ec)-npt_Noc(co_Ec)] (SEQ ID No.17)
● pSC101{Placuv5}[carB_Ms(co_Ec)-npt_Noc(co_Ec)] (SEQ ID No.18)
● pSC101{Placuv5}[car_Mint(co_Ec)-npt_Noc(co_Ec)] (SEQ ID No.19)
● pSC101{Placuv5}[car_Mfort(co_Ec)-npt_Noc(co_Ec)] (SEQ ID No.20)
● pSC101{Placuv5}[car_Mavi(co_Ec)-npt_Noc(co_Ec)] (SEQ ID No.21)
● pSC101{Placuv5}[car_Csp(co_Ec)-npt_Noc(co_Ec)] (SEQ ID No.22)
● pSC101{Placuv5}[car_Mab(co_Ec)-npt_Noc(co_Ec)] (SEQ ID No.23)
● pSC101{Placuv5}[car_nbr(co_Ec)-npt_Noc(co_Ec)] (SEQ ID No.24)
● pSC101{Placuv5}[car_Mip(co_Ec)-npt_Noc(co_Ec)] (SEQ ID No.25)
● pSC101{Placuv5}[car_nfa(co_Ec)-npt_Noc(co_Ec)] (SEQ ID No.26)
● pSC101{Placuv5}[car_Mul(co_Ec)-npt_Noc(co_Ec)] (SEQ ID No.27)
● pSC101{Placuv5}[car_Sac(co_Ec)-npt_Noc(co_Ec)] (SEQ ID No.28)
● pSC101{Placuv5}[car_Mcol(co_Ec)-npt_Noc(co_Ec)] (SEQ ID No.29)
就脂肪酸还原酶的活化而言,基因产物npt将磷酸泛酰巯基乙胺基残基从辅酶A转移至脂肪酸还原酶。
实施例 2
用于从月桂酸甲酯生产氨基月桂酸甲酯的、具有增强的脂肪酸还原酶和磷酸泛酰巯基乙胺基转移酶活性的、具有在基因bioH中的缺失的大肠杆菌菌株的制备
为了制备用于生产氨基月桂酸甲酯的、具有在基因bioH(其编码酯酶)中的缺失和增强的脂肪酸还原酶活性的大肠杆菌菌株,通过电穿孔,用质粒pBT10_alkL (序列和制备:WO/2011/131420的对比实施例1和其中列出的Seq ID No.8)、pJ294_alaDH_B.s._TA_C.v.(Ct) (WO/2013/024114的对比实施例1和其中列出的SEQ ID No.17)和在实施例1中建立的用于表达脂肪酸还原酶的载体之一转化大肠杆菌菌株W3110∆bioH (制备:参见EP12007663),并铺板在含有卡那霉素(50µg/ml)、氨苄西林(100µg/ml)和四环素(5µg/ml)的LB琼脂平板上。通过质粒制备和限制性分析,针对正确质粒的存在来试验转化体。从而建立了下述菌株:
● 大肠杆菌W3110∆bioH pBT10_alkL/pJ294_alaDH_B.s._TA_C.v.(Ct)/pSC101{Placuv5}[carA_Ms(co_Ec)-npt_Noc(co_Ec)]
● 大肠杆菌W3110∆bioH pBT10_alkL/pJ294_alaDH_B.s._TA_C.v.(Ct)/pSC101{Placuv5}[carB_Ms(co_Ec)-npt_Noc(co_Ec)]
● 大肠杆菌W3110∆bioH pBT10_alkL/pJ294_alaDH_B.s._TA_C.v.(Ct)/pSC101{Placuv5}[car_Mint(co_Ec)-npt_Noc(co_Ec)]
● 大肠杆菌W3110∆bioH pBT10_alkL/pJ294_alaDH_B.s._TA_C.v.(Ct)/pSC101{Placuv5}[car_Mfort(co_Ec)-npt_Noc(co_Ec)]
● 大肠杆菌W3110∆bioH pBT10_alkL/pJ294_alaDH_B.s._TA_C.v.(Ct)/pSC101{Placuv5}[car_Mavi(co_Ec)-npt_Noc(co_Ec)]
● 大肠杆菌W3110∆bioH pBT10_alkL/pJ294_alaDH_B.s._TA_C.v.(Ct)/pSC101{Placuv5}[car_Csp(co_Ec)-npt_Noc(co_Ec)]
● 大肠杆菌W3110∆bioH pBT10_alkL/pJ294_alaDH_B.s._TA_C.v.(Ct)/pSC101{Placuv5}[car_Mab(co_Ec)-npt_Noc(co_Ec)]
● 大肠杆菌W3110∆bioH pBT10_alkL/pJ294_alaDH_B.s._TA_C.v.(Ct)/pSC101{Placuv5}[car_nbr(co_Ec)-npt_Noc(co_Ec)]
● 大肠杆菌W3110∆bioH pBT10_alkL/pJ294_alaDH_B.s._TA_C.v.(Ct)/pSC101{Placuv5}[car_Mip(co_Ec)-npt_Noc(co_Ec)]
● 大肠杆菌W3110∆bioH pBT10_alkL/pJ294_alaDH_B.s._TA_C.v.(Ct)/pSC101{Placuv5}[car_nfa(co_Ec)-npt_Noc(co_Ec)]
● 大肠杆菌W3110∆bioH pBT10_alkL/pJ294_alaDH_B.s._TA_C.v.(Ct)/pSC101{Placuv5}[car_Mul(co_Ec)-npt_Noc(co_Ec)]
● 大肠杆菌W3110∆bioH pBT10_alkL/pJ294_alaDH_B.s._TA_C.v.(Ct)/pSC101{Placuv5}[car_Sac(co_Ec)-npt_Noc(co_Ec)]
● 大肠杆菌W3110∆bioH pBT10_alkL/pJ294_alaDH_B.s._TA_C.v.(Ct)/pSC101{Placuv5}[car_Mcol(co_Ec)-npt_Noc(co_Ec)]
将这些菌株用于研究它们的从月桂酸甲酯开始生产氨基月桂酸甲酯的能力。
表达载体pBT10_alkL含有得自恶臭假单胞菌的alk操纵子的基因alkBalkGalkTalkSalkL。基因产物催化底物月桂酸甲酯经由羟基月桂酸甲酯向氧代月桂酸甲酯的氧化。载体pJ294_alaDH_B.s._TA_C.v.(Ct) 含有得自枯草芽孢杆菌的基因ald (编码丙氨酸脱氢酶, NP_391071.1)和得自青紫色素杆菌的Cv_2505 (编码ω-转氨酶, NP_901695.1)。基因产物Cv_2505能够将氧代月桂酸甲酯转化成氨基月桂酸甲酯,并且基因产物ald使得该转化所需的氨基供体丙氨酸可从丙酮酸盐得到。基于额外表达的脂肪酸还原酶(其被同样过表达的磷酸泛酰巯基乙胺基转移酶npt活化),将会减少在氨基月桂酸甲酯的生产中产生的副产物,尤其是十二烷二酸甲酯,以便增加氨基月桂酸甲酯与十二烷二酸甲酯之比。
实施例 3
用于从月桂酸甲酯生产氨基月桂酸甲酯的、具有增加的脂肪酸还原酶和磷酸泛酰巯基乙胺基转移酶活性的大肠杆菌菌株的制备
通过电穿孔,用表达载体pBT10_alkL (序列和制备:WO/2011/131420的对比实施例1和其中列出的Seq ID No.8)、pJ294_alaDH_B.s._TA_C.v.(Ct) (WO/2013/024114的对比实施例1和其中列出的SEQ ID No.17)和pSC101{Placuv5}[carB_Ms(co_Ec)-npt_Noc(co_Ec)]或pSC101、空载体转化使用的宿主大肠杆菌菌株W3110,并铺板在含有卡那霉素(50µg/ml)、氨苄西林(100µg/ml)和四环素(5µg/ml)的LB琼脂平板上。通过质粒制备和限制性分析,针对正确质粒的存在来试验转化体。从而建立了菌株:大肠杆菌W3110 pBT10_alkL/pJ294_alaDH_B.s._TA_C.v.(Ct)/pSC101{Placuv5}[carB_Ms(co_Ec)-npt_Noc(co_Ec)]和大肠杆菌W3110 pBT10_alkL/pJ294_alaDH_B.s._TA_C.v.(Ct)/pSC101。
实施例 4
用大肠杆菌菌株生产氨基月桂酸,所述大肠杆菌菌株具有:脂肪酸还原酶基因和得自诺卡氏菌属的基因npt的表达载体,得自枯草芽孢杆菌的基因ald、得自青紫色素杆菌的Cv_2025的表达载体,以及得自恶臭假单胞菌的alk操纵子的基因alkBalkGalkTalkL的表达载体。
将在实施例2和3中建立的菌株用于研究它们的生产氨基月桂酸甲酯的能力。
在DASGIP的8倍平行发酵系统中,进行月桂酸甲酯向氨基月桂酸甲酯的生物转化。该过程的操作如下:
使用1 L反应器进行发酵。使用pH 4.0和pH 7.0的标准溶液,通过2点校准法来校准pH探头。给反应器装入300 mL饮用水,并在121℃高压灭菌20分钟,以便确保无菌度。接着,将pO2探头在DASGIP系统上极化过夜(至少6小时)。次日早晨,在洁净台下取出水,并用300 mL含有100 mg/L氨苄西林、50 mg/L卡那霉素和5 mg/L四环素的高细胞密度培养基替换。随后,用1点校准法校准pO2探头(搅拌器: 400 rpm/充气: 10 sL空气/小时),并通过原位清洁(Clean-in-Place)来清洁补料、校正培养基和诱导培养基管线。为此,将管道用70% 乙醇冲洗,然后用1 M NaOH冲洗,然后用无菌的脱矿质水冲洗,最后装入各自的介质。
首先,在含有100 mg/L氨苄西林的LB培养基(25 mL,在100 mL挡板烧瓶中)中在37℃和200 rpm将生产ALS和ALSME的大肠杆菌菌株从各自的冷冻培养物扩增过夜约18小时。接着,将2 mL每种培养物接种进含有100 mg/L氨苄西林、50 mg/L卡那霉素和5 mg/L四环素的高密度细胞培养基(15 g/L的葡萄糖(30 mL/L的单独高压灭菌的500 g/L储备溶液,其含有1% MgSO4*7H2O和2.2% NH4Cl)、1.76 g/L的(NH4)2SO4、19.08 g/L的K2HPO4、12.5 g/L的KH2PO4、6.66 g/L的酵母浸出物、2.24 g/L的柠檬酸三钠二水合物、17 mL/L的柠檬酸铁铵溶液的单独高压灭菌的1% 储备溶液,5 mL/L的痕量元素溶液的单独高压灭菌的储备溶液(36.50 g/L的HCl (37%)、1.91 g/L的MnCl2*4H2O、1.87 g/L的ZnSO4*7H2O、0.84 g/L的乙二胺四乙酸二水合物、0.30 g/L的H3BO3 0.25 g/L的Na2MoO4*2H2O、4.70 g/L的CaCl2*2H2O、17.80 g/L的FeSO4*7H2O、0.15 g/L的CuCl2*2H2O)) (每种菌株25 mL,在100 mL挡板烧瓶中),并在37℃/200 rpm培养另外5.5小时。
如下以0.1的光密度接种反应器:将适当体积的预培养物吸入5 mL注射器中(在无菌条件下),并经由插管通过涂有70% 乙醇的隔膜接种反应器。
使用下述标准程序:
Figure 775555DEST_PATH_IMAGE001
Figure 505745DEST_PATH_IMAGE002
注解
精确触发器 31% DO (1/60小时)
诱导IPTG 补料开始后2小时
补料触发器 50% DO
补料速率 3 [mL/h]
进行的实验可以细分成2个阶段:生长,其中细胞将达到确定的光密度,和随后的生物转化,其中在加入底物月桂酸甲酯以后,将发生由在表达过程中形成的酶实现的向氨基月桂酸酯的转化。用氨(12.5%)将pH值单向地调节至pH 6.8。在生长和生物转化过程中,通过搅拌器旋转速率和充气速率将培养物中的溶解氧(DO)调节在30%。以补料分批方式进行发酵,其中通过DO峰触发补料开始,5 g/Lhr葡萄糖补料(500 g/L葡萄糖,含有1% MgSO4*7H2O和2.2% NH4Cl)。在补料开始时,温度也从以前的37℃降低至30℃。在补料开始以后2小时,通过自动加入IPTG (1 mM)来诱导转氨酶、丙氨酸脱氢酶和脂肪酸还原酶的表达。在补料开始以后10小时,通过手工加入DCPK (0.025% v/v),实现alk基因的诱导。在开始生物转化之前,确定培养液的光密度。
在补料开始以后14小时,开始生物转化阶段。为此,将150 mL月桂酸甲酯和离子交换剂油酸(工业级90%)的混合物作为一批加入发酵液中。为了使转氨酶可得到氨基供体,在生物转化开始之前半小时,将5 mL 3M硫酸铵溶液加入发酵液中。关于取样,从发酵罐中取出2 mL发酵液,并将其一部分在丙酮-HCl混合物(c(HCl) = 0.1 mol/L)中1/20稀释,并萃取。在生物转化开始以后1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、7.5小时、10.5小时、19.5小时和21小时,从所有反应器取出样品。在发酵过程中,通过在DASGIP系统上的排出气体分析,确定氧(OTR = 氧传递速率)和碳(CTR =碳传递速率)的转化速率。在生物转化开始以后21小时,结束发酵。关闭搅拌器、充气、温度调节和pH调节,并将容器静置5-10分钟。
为了定量发酵样品中的DDS (C12-二羧酸)、DDSME (C12-二羧酸甲酯)、LS (月桂酸)、LSME (月桂酸甲酯)、HLS (ω-羟基月桂酸)、HLSME (ω-羟基月桂酸甲酯)、OLS (ω-氧代月桂酸)、OLSME OLS (ω-氧代月桂酸甲酯)、ALS (ω-氨基月桂酸)和ALSME (ω-氨基月桂酸甲酯),在培养过程中取出样品。将这些样品准备用于分析(参见基于LC-ESI/MS2的产物定量)。
基于 LC-ESI/MS2 的产物定量
基于所有分析物的外部校准(0.1 - 50 mg/L),并利用内部标准品氨基十一烷酸(AUD用于HLS、DDS、OLS、HLSME、OLSME)、d4-ALSME (用于ALSME)、13C-DDSME (用于DDSME)、d3-LS (用于LS)和d3-LSME (用于LSME),通过LC-ESI/MS2,定量发酵样品中的ALS、ALSME、DDS、DDSME、LS、LSME、HLS、HLSME、OLS和OLSME。
在该过程中,使用下述仪器:
● HPLC系统1260 (Agilent; Böblingen),其具有自动采样器(G1367E)、二元泵(G1312B)和柱保温箱(G1316A)
● 质谱仪TripelQuad 6410 (Agilent; Böblingen),其具有ESI源
● HPLC柱:Kinetex C18,100 x 2.1 mm,粒度:2.6µm,孔径100Å(Phenomenex; Aschaffenburg)
● 前置柱:KrudKatcher Ultra HPLC线内过滤器;0.5µm过滤器深度和0.004 mm内径(Phenomenex;Aschaffenburg)
通过将1900µL溶剂(80% (v/v) ACN、20% 重蒸馏水(v/v)、+ 0.1% 甲酸)和100µL样品移入2 mL反应容器中,制备样品。将混合物涡旋10秒,然后在约13000 rpm离心5分钟。用移液器取出澄清的上清液,并在用稀释剂(80% (v/v) ACN、20% 重蒸馏水(v/v)、+ 0.1% 甲酸)适当稀释以后进行分析。将100µL ISTD移入每个900µL样品(10µL,样品体积为90µL)。
用前述柱和前置柱进行HPLC分离。注射体积为0.7µL,柱温度为50℃,流速为0.6 mL/min。流动相由洗脱液A (0.1% (v/v) 甲酸水溶液)和洗脱液B (含有0.1% (v/v) 甲酸的乙腈)组成。使用下述梯度方案:
Figure 285482DEST_PATH_IMAGE003
使用下述ESI源参数,以正模式进行ESI-MS2分析:
● 气体温度 280℃
● 气体流速 11 L/min
● 喷雾器压力 50 psi
● 毛细管电压 4000 V。
使用下述MRM参数,实现化合物ALS、ALSME、DDS、DDSME、HLS、HLSME、OLS、OLSME的检测和定量,其中在每种情况下,使用一种产物离子作为定性器(Qualifier),并使用一种产物离子作为定量器(Quantifier):
以SIM模式(m/z 201和215)检测分析物LS和LSME。
证实了所述菌株能够从月桂酸甲酯经由中间阶段羟基月桂酸甲酯和氧代月桂酸甲酯生产氨基月桂酸甲酯,并且同时借助于脂肪酸还原酶活性而减少形成的副产物诸如十二烷二酸甲酯和十二烷二酸,并从而再次将它们引入代谢中用于形成氨基月桂酸甲酯(表1和2)。进一步证实,通过引入不同的脂肪酸还原酶,期望产物(氨基月桂酸甲酯和氨基月桂酸) 与副产物(十二烷二酸甲酯和十二烷二酸)之比增加(表1和2)。还证实,通过引入不同的脂肪酸还原酶,氨基月桂酸甲酯的终产物浓度增加(表1和2)。最后,证实了通过引入脂肪酸还原酶,氨基月桂酸甲酯形成的时空产率(在生物转化开始以后1-19小时之间测量)增加,并且有关的产物特异性的葡萄糖消耗减少(表2)。
表1:与不具有脂肪酸还原酶活性的菌株相比,在实施例2中制备的具有过表达的脂肪酸还原酶和得自诺卡氏菌属的基因npt的菌株的产物和副产物形成
菌株 相对ALSME形成[%] 相对DDSME形成[%] ALSME/DDSME比率
大肠杆菌W3110ΔbioH pBT10_alkL / pJ294_alaDH_B.s._TA_C.v.(Ct) 100 100 4.5
大肠杆菌W3110ΔbioH pBT10_alkL / pJ294_alaDH_B.s._TA_C.v.(Ct) / pSC101{Placuv5}[carA_Ms(co_Ec)-npt_Noc(co_Ec)] 103 12 38.8
大肠杆菌W3110ΔbioH pBT10_alkL / pJ294_alaDH_B.s._TA_C.v.(Ct) / pSC101{Placuv5}[carB_Ms(co_Ec)-npt_Noc(co_Ec)] 105 26 18.9
大肠杆菌W3110ΔbioH pBT10_alkL / pJ294_alaDH_B.s._TA_C.v.(Ct) / pSC101{Placuv5}[car_Mint(co_Ec)-npt_Noc(co_Ec)] 106 27 17.7
大肠杆菌W3110ΔbioH pBT10_alkL / pJ294_alaDH_B.s._TA_C.v.(Ct) / pSC101{Placuv5}[car_Mfort(co_Ec)-npt_Noc(co_Ec)] 103 37 12.3
大肠杆菌W3110ΔbioH pBT10_alkL / pJ294_alaDH_B.s._TA_C.v.(Ct) / pSC101{Placuv5}[car_Mavi(co_Ec)-npt_Noc(co_Ec)] 112 21 23.3
大肠杆菌W3110ΔbioH pBT10_alkL / pJ294_alaDH_B.s._TA_C.v.(Ct) / pSC101{Placuv5}[car_Csp(co_Ec)-npt_Noc(co_Ec)] 101 87 5.2
大肠杆菌W3110ΔbioH pBT10_alkL / pJ294_alaDH_B.s._TA_C.v.(Ct) / pSC101{Placuv5}[car_Mab(co_Ec)-npt_Noc(co_Ec)] 111 20 24.9
大肠杆菌W3110ΔbioH pBT10_alkL / pJ294_alaDH_B.s._TA_C.v.(Ct) / pSC101{Placuv5}[car_nbr(co_Ec)-npt_Noc(co_Ec)] 109 24 20.4
大肠杆菌W3110ΔbioH pBT10_alkL / pJ294_alaDH_B.s._TA_C.v.(Ct) / pSC101{Placuv5}[car_Mip(co_Ec)-npt_Noc(co_Ec)] 101 66 6.8
大肠杆菌W3110ΔbioH pBT10_alkL / pJ294_alaDH_B.s._TA_C.v.(Ct) / pSC101{Placuv5}[car_nfa(co_Ec)-npt_Noc(co_Ec)] 110 25 19.6
大肠杆菌W3110ΔbioH pBT10_alkL / pJ294_alaDH_B.s._TA_C.v.(Ct) / pSC101{Placuv5}[car_Mul(co_Ec)-npt_Noc(co_Ec)] 107 35 13.6
大肠杆菌W3110ΔbioH pBT10_alkL / pJ294_alaDH_B.s._TA_C.v.(Ct) / pSC101{Placuv5}[car_Sac(co_Ec)-npt_Noc(co_Ec)] 102 87 5.3
大肠杆菌W3110ΔbioH pBT10_alkL / pJ294_alaDH_B.s._TA_C.v.(Ct) / pSC101{Placuv5}[car_Mcol(co_Ec)-npt_Noc(co_Ec)] 107 31 15.4
表2:与不具有脂肪酸还原酶活性的菌株相比,在实施例3中制备的过表达脂肪酸还原酶和得自诺卡氏菌属的基因npt的菌株的产物和副产物形成、产物形成速率和产率
菌株 相对ALS(ME) 形成[%] 相对DDS(ME) 形成[%] ALS(ME)/ DDS(ME)比率 相对时空产率[%] 相对产率ALS(ME)/ 葡萄糖[%]
E.coli W3110 pBT10_alkL / pJ294_alaDH_B.s._TA_C.v.(Ct) / pSC101{Placuv5}[carB_Ms(co_Ec)-npt_Noc(co_Ec)] 121 40 37.02 133 123
E.coli W3110 pBT10_alkL / pJ294_alaDH_B.s._TA_C.v.(Ct) / pSC101 100 100 12.15 100 100
序列表
<110> Evonik Industries AG
<120> ω-氨基脂肪酸的生产
<130> 201200202
<160> 29
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 669
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成基因
<400> 1
atgattgaaa ccatcttacc agccggcgtc gaatcagcag agttacttga gtaccctgaa 60
gatctgaagg cgcatccggc tgaagagcat ctgatcgcaa agagcgtaga gaagcgtcgt 120
cgcgacttca ttggcgcacg tcattgcgcc cgtctggcac tggcggagct gggtgaaccg 180
ccggttgcga ttggcaaggg tgaacgtggt gcgccgattt ggccgcgtgg tgtcgtgggc 240
tctctgaccc attgcgatgg ctatcgcgca gcggcggttg ctcacaaaat gcgttttcgc 300
agcatcggca tcgacgccga accgcacgcg accctgccgg aaggtgtcct ggattcggtt 360
agcctgccgc ctgagcgtga gtggctgaaa accaccgaca gcgcactgca cctggaccgt 420
ttgctgtttt gtgcgaaaga agcaacttac aaagcgtggt ggccgctgac ggcacgttgg 480
ctgggtttcg aagaagcgca cattaccttc gaaatcgagg atggtagcgc cgactctggt 540
aatggcacgt ttcacagcga actgctggtg ccgggtcaga ccaatgacgg tggtaccccg 600
ctgctgtctt tcgacggtcg ctggctgatc gctgatggct tcatcctgac ggcgattgca 660
tacgcatga 669
<210> 2
<211> 153
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 启动子
<400> 2
ggcagtgagc gcaacgcaat taatgtaagt tagctcactc attaggcacc ccaggcttga 60
cactttatgc ttccggctcg tataatgtgt ggaattgtga gcggataaca ataacaattt 120
cacacaggat ctaggaacca aggagagtgg cat 153
<210> 3
<211> 3507
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成基因
<400> 3
atgacaattg aaacgcgcga agatagattt aacagacgta ttgatcacct ttttgaaaca 60
gacccgcagt tcgcagcggc acgtccggac gaagctatta gcgctgcagc agccgatccg 120
gagctgcgcc tgccagccgc agtcaagcag attctggccg gttatgcgga ccgtccggcc 180
ctgggtaagc gtgctgtgga gttcgttacg gacgaagaag gccgtaccac cgcaaagttg 240
ctgccgcgtt tcgatacgat cacctaccgt caattggcag gtcgtattca ggcggtgact 300
aacgcgtggc acaatcaccc ggtgaatgcg ggtgaccgtg tcgcaatttt gggcttcacg 360
agcgttgact atacgaccat cgatatcgca ctgctggaac tgggtgctgt tagcgttccg 420
ttgcaaacgt ctgctccggt tgcgcagctg caaccgattg tggccgaaac cgagccgaag 480
gtcattgcga gcagcgtcga tttcctggca gatgcggtcg cactggttga gagcggtcca 540
gccccgagcc gtctggtcgt ttttgattat agccacgagg tcgacgatca gcgtgaggcc 600
ttcgaagcgg ccaagggtaa actggcgggt accggtgttg tggtggaaac gattacggat 660
gtcttggatc gcggtcgcag cctggctgat gcgccgctgt atgtcccaga cgaaacggac 720
ccgctgaccc tgctgatcta taccagcggt agcaccggta cgccgaaggg tgctatgtat 780
ccggaatcca agaccgcgac gatgtggcaa gctggtagca aggcgcgttg ggatgaaacc 840
ctgggcgtta tgccgagcat caccctgaac ttcatgccaa tgtcccacgt gatgggtcgc 900
ggcatcctgt gtagcaccct ggcgagcggc ggtactgcgt attttgccgc acgtagcgac 960
ttgtctacct ttctggagga cctggcgttg gtccgcccga cccaactgaa tttcgtccct 1020
cgcatctggg atatgctgtt ccaagagtat cagagccgtc tggacaatcg tcgtgccgag 1080
ggtagcgagg atcgcgcgga agcggccgta ctggaagagg ttcgtaccca attgctgggc 1140
ggtcgtttcg tttccgctct gaccggtagc gctccaatca gcgcggaaat gaaaagctgg 1200
gtcgaggacc tgctggacat gcatttgctg gaaggttacg gttccaccga ggcgggtgcc 1260
gtgttcattg acggtcaaat ccaacgtcca cctgttatcg attacaaact ggttgatgtt 1320
ccggacttgg gttactttgc gaccgatcgt ccataccctc gcggcgagct gctggtgaag 1380
agcgagcaga tgttcccggg ctactataag cgtccggaga ttacggcgga gatgtttgac 1440
gaggacggtt attaccgtac cggcgacatc gtggccgaac tgggtccgga tcatctggag 1500
tatctggacc gccgtaacaa cgtcctgaag ctgagccagg gtgagtttgt taccgtttcc 1560
aaactggaag cggtctttgg cgatagccca ctggtgcgcc agatttatgt ctacggtaac 1620
tctgcacgca gctatctgct ggcggttgtc gttccgaccg aagaggcact gagccgctgg 1680
gacggcgatg aactgaagag ccgcatcagc gacagcttgc aagatgcggc acgtgccgca 1740
ggtttgcaaa gctatgagat cccgcgtgac tttctggttg aaaccacgcc gttcacgttg 1800
gagaacggtc tgctgaccgg cattcgcaaa ctggcgcgtc cgaagctgaa agcgcattat 1860
ggcgaacgtc tggaacaact gtacacggat ctggctgaag gccaagccaa tgagctgcgt 1920
gaactgcgcc gtaatggtgc ggatcgtccg gttgttgaaa cggtttcgcg tgccgcggtc 1980
gccttgctgg gtgcgtctgt gacggacctg cgttctgacg cccactttac ggacctgggc 2040
ggtgattccc tgagcgccct gagcttcagc aacctgctgc acgagatttt tgacgtcgat 2100
gtcccggtgg gcgtgattgt cagcccggca accgacctgg ccggtgttgc cgcctatatt 2160
gagggtgagc tgcgtggtag caaacgtccg acctacgcaa gcgtccacgg tcgtgacgca 2220
accgaggtgc gtgctcgcga tctggcgctg ggcaaattca tcgacgcaaa aacgctgagc 2280
gcagcaccgg gtctgccgcg ctccggtacg gagatccgta cggtgctgct gacgggtgcg 2340
accggttttc tgggtcgcta cttggccttg gagtggctgg aacgtatgga cctggttgac 2400
ggcaaggtga tctgtttggt tcgtgcgcgt agcgacgacg aagcacgtgc gcgtctggac 2460
gcaaccttcg ataccggcga tgctaccttg ctggagcact accgtgccct ggcggctgac 2520
catctggaag ttattgcggg tgataagggt gaagccgact tgggcctgga tcacgatacc 2580
tggcagcgtc tggcagatac ggtcgacctg atcgttgacc cggctgcgct ggttaaccac 2640
gttttgccgt acagccagat gttcggccca aacgctctgg gcactgcaga gctgattcgc 2700
attgcactga ccaccaccat taaaccgtac gtctacgtga gcaccattgg tgttggtcag 2760
ggcatcagcc cagaagcctt tgttgaagat gcggacatcc gcgaaatcag cgccacgcgt 2820
cgcgttgacg acagctacgc gaatggttat ggtaacagca aatgggcagg tgaggttctg 2880
ctgcgcgaag cgcacgactg gtgcggcctg ccggtgagcg tgtttcgttg tgacatgatc 2940
ttggccgaca ccacctactc cggccagctg aatctgccgg atatgttcac ccgtctgatg 3000
ttgagcctgg tggcaactgg catcgcaccg ggcagctttt atgagctgga cgcggacggt 3060
aatcgtcaac gtgcacatta tgatggtctg ccggtggagt ttatcgcgga agcaatcagc 3120
acgatcggct ctcaagtgac tgacggtttc gaaacgttcc atgtcatgaa tccttatgat 3180
gatggtatcg gcctggacga gtacgtcgac tggctgattg aggctggcta cccggttcac 3240
cgtgttgatg attatgcgac gtggttgagc cgttttgaaa ccgccttgcg tgcgctgccg 3300
gagcgtcaac gtcaggcatc cctgctgccg ctgttgcaca actaccagca gccttctccg 3360
ccggtttgcg gtgctatggc tcctaccgac cgtttccgtg cagctgtcca ggacgccaaa 3420
attggcccag ataaagacat cccacatgta acggcggacg tgatcgtgaa atacattagc 3480
aacttgcaga tgctgggtct gctgtaa 3507
<210> 4
<211> 3525
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成基因
<400> 4
atgactagcg atgtacatga cgcgactgac ggtgtgacag agacagcatt agatgacgag 60
caaagcaccc gtcgcattgc ggaactgtat gcaacggatc cggagtttgc agctgccgca 120
ccgctgccgg ctgttgtcga cgctgcacat aaaccgggtc tgcgtctggc ggagattctg 180
cagaccctgt ttaccggtta cggcgatcgt ccggccctgg gctaccgtgc tcgtgaactg 240
gcgacggatg agggtggccg taccgtgacc cgtttgttgc cgcgttttga cacgctgacg 300
tacgcgcaag tctggagccg tgtccaggct gtggcagcag cgctgcgcca taacttcgcg 360
cagcctatct atccaggtga cgcggttgcg accatcggct ttgcaagccc agactatctg 420
acgctggatc tggtctgcgc gtatttgggc ctggtcagcg tgccactgca gcacaacgct 480
cctgtgagcc gtttggcgcc gattctggcc gaggttgagc cgcgtatcct gacggtcagc 540
gccgaatacc tggacctggc ggtcgagagc gtgcgtgatg tgaattctgt ctcgcaattg 600
gtcgttttcg accaccaccc ggaagtcgat gaccaccgcg atgcgctggc acgcgcacgt 660
gaacagctgg ccggtaaagg tattgccgtt acgactctgg acgcgattgc ggacgaaggc 720
gctggtctgc cagcggagcc gatctatacc gccgatcacg atcaacgcct ggcgatgatc 780
ctgtacacca gcggttctac cggcgctccg aagggtgcga tgtatactga ggccatgctg 840
gcgcgtctgt ggaccatgtc ctttatcacc ggcgacccga ctcctgtgat taatgtgaac 900
tttatgccgc tgaatcacct gggtggtcgt attccgatta gcaccgcggt ccagaacggc 960
ggtacgagct acttcgttcc ggagagcgac atgtctaccc tgtttgagga cctggccttg 1020
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<223> 合成基因
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<213> 人工序列
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<223> 合成基因
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<211> 3525
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<213> 人工序列
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<223> 合成基因
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cctgatgtat cccctggaac tccgccatcg catcgttaac aagggactga agatcgattt 3120
cttcctgtat atccttcatg gcatcactga ccagtgcgtt cagcttgtca ggctcttttt 3180
caaaatcaaa cgttctgccg gaatgggatt cctgctcagg ctctgacttc agctcctgtt 3240
ttagcgtcag agtatccctc tcgctgaggg cttcccgtaa cgaggtagtc acgtcaatta 3300
cgctgtcacg ttcatcacgg gactgctgca cctgcctttc agcctccctg cgctcaagaa 3360
tggcctgtag ctgctcagta tcgaatcgct gaacctgacc cgcgcccaga tgccgctcag 3420
gctcacggtc aatgccctgc gccttcaggg aacgggaatc aacccggtca gcgtgctgat 3480
accgttcaag gtgcttattc tggaggtcag cccagcgtct ccctctgggc aacaaggtat 3540
tctttgcgtt cggtcggtgt ttccccgaaa cgtgcctttt ttgcgccacc gcgtccggct 3600
ctttggtgtt agcccgttta aaatactgct cagggtcacg gtgaataccg tcattaatgc 3660
gttcagagaa catgatatgg gcgtggggct gctcgccacc ggctatcgct gctttcggat 3720
tatggatagc gaactgatag gcatggcggt cgccaatttc ctgttggaca aaatcgcgga 3780
caagctcaag acgttgttcg ggttttaact cacgcggcag ggcaatctcg atttcacggt 3840
aggtacagcc gttggcacgt tcagacgtgt cagcggcttt ccagaactcg gacggtttat 3900
gcgctgccca cgccggcata ttgccggact ccttgtgctc aaggtcggag tctttttcac 3960
gggcatactt tccctcacgc gcaatataat cggcatgagg agaggcactg ccttttccgc 4020
cggtttttac gctgagatga taggatgcca tcgtgtttta tcccgctgaa gggcgcacgt 4080
ttctgaacga agtgaagaaa gtctaagtgc gccctgataa ataaaagagt tatcagggat 4140
tgtagtggga tttgacctcc tctgccatca tgagcgtaat cattccgtta gcattcagga 4200
ggtaaacagc atgaataaaa gcgaaaaaac aggaacaatg ggcagcagaa agagtgcagt 4260
atattcgcgg cttaaagtcg ccgaatgagc aacagaaact tatgctgata ctgacggata 4320
aagcagataa aacagcacag gatatcaaaa cgctgtccct gctgatgaag gctgaacagg 4380
cagcagagaa agcgcaggaa gccagagcga aagtcatgaa cctgatacag gcagaaaagc 4440
gagccgaagc cagagccgcc cgtaaagccc gtgaccatgc tctgtaccag tctgccggat 4500
tgcttatcct ggcgggtctg gttgacagta agacgggtaa gcctgttgat gataccgctg 4560
ccttactggg tgcattagcc agtctgaatg acctgtcacg ggataatccg aagtggtcag 4620
actggaaaat cagagggcag gaactgctga acagcaaaaa gtcagatagc accacatagc 4680
agacccgcca taaaacgccc tgagaagccc gtgacgggct tttcttgtat tatgggtagt 4740
ttccttgcat gaatccataa aaggcgcctg tagtgccatt tacccccatt cactgccaga 4800
gccgtgagcg cagcgaactg aatgtcacga aaaagacagc gactcaggtg cctgatggtc 4860
ggagacaaaa ggaatattca gcgatttgcc cgagcttgcg agggtgctac ttaagccttt 4920
agggttttaa ggtctgtttt gtagaggagc aaacagcgtt tgcgacatcc ttttgtaata 4980
ctgcggaact gactaaagta gtgagttata cacagggctg ggatctattc tttttatctt 5040
tttttattct ttctttattc tataaattat aaccacttga atataaacaa aaaaaacaca 5100
caaaggtcta gcggaattta cagagggtct agcagaattt acaagttttc cagcaaaggt 5160
ctagcagaat ttacagatac ccacaactca aaggaaaagg actagtaatt atcattgact 5220
agcccatctc aattggtata gtgattaaaa tcacctagac caattgagat gtatgtctga 5280
attagttgtt ttcaaagcaa atgaactagc gattagtcgc tatgacttaa cggagcatga 5340
aaccaagcta attttatgct gtgtggcact actcaacccc acgattgaaa accctacaag 5400
gaaagaacgg acggtatcgt tcacttataa ccaatacgct cagatgatga acatcagtag 5460
ggaaaatgct tatggtgtat tagctaaagc aaccagagag ctgatgacga gaactgtgga 5520
aatcaggaat cctttggtta aaggctttga gattttccag tggacaaact atgccaagtt 5580
ctcaagcgaa aaattagaat tagtttttag tgaagagata ttgccttatc ttttccagtt 5640
aaaaaaattc ataaaatata atctggaaca tgttaagtct tttgaaaaca aatactctat 5700
gaggatttat gagtggttat taaaagaact aacacaaaag aaaactcaca aggcaaatat 5760
agagattagc cttgatgaat ttaagttcat gttaatgctt gaaaataact accatgagtt 5820
taaaaggctt aaccaatggg ttttgaaacc aataagtaaa gatttaaaca cttacagcaa 5880
tatgaaattg gtggttgata agcgaggccg cccgactgat acgttgattt tccaagttga 5940
actagataga caaatggatc tcgtaaccga acttgagaac aaccagataa aaatgaatgg 6000
tgacaaaata ccaacaacca ttacatcaga ttcctaccta cgtaacggac taagaaaaac 6060
actacacgat gctttaactg caaaaattca gctcaccagt tttgaggcaa aatttttgag 6120
tgacatgcaa agtaagcatg atctcaatgg ttcgttctca tggctcacgc aaaaacaacg 6180
aaccacacta gagaacatac tggctaaata cggaaggatc tgaggttctt atggctcttg 6240
tatctatcag tgaagcatca agactaacaa acaaaagtag aacaactgtt caccgttaga 6300
tatcaaaggg aaaactgtcc atatgcacag atgaaaacgg tgtaaaaaag atagatacat 6360
cagagctttt acgagttttt ggtgcattta aagctgttca ccatgaacag atcgacaatg 6420
taacagatga acagcatgta acacctaata gaacaggtga aaccagtaaa acaaagcaac 6480
tagaacatga aattgaacac ctgagacaac ttgttacagc tcaacagtca cacatagaca 6540
gcctgaaaca ggcgatgctg cttatcgaat caaagctgcc gacaacacgg gagccagtga 6600
cgcctcccgt ggggaaaaaa tcatggcaat tctggaagaa atagcgcttt cagccggcaa 6660
acctgaagcc ggatctgcga ttctgataac aaactagcaa caccagaaca gcccgtttgc 6720
gggcagcaaa acccgtactt ttggacgttc cggcggtttt ttgtggcgag tggtgttcgg 6780
gcggtgcgcg caagatccat tatgttaaac gggcgagttt acatctcaaa accgcccgct 6840
taacaccatc agaaatcctc agcgcgattt taagcaccaa cccccccccg taacacccaa 6900
atccatactg aaagtggctt tgttgaataa atcgaacttt tgctgagttg aaggatcaga 6960
tcacgcatcc tcccgacaac acagaccatt ccgtggcaaa gcaaaagttc agaatcacca 7020
actggtccac ctacaacaaa gctctcatca accgtggctc cctcactttc tggctggatg 7080
atgaggcgat tcaggcctgg tatgagtcgg caacaccttc atcacgagga aggccccagc 7140
gctattctga tctcgccatc accaccgttc tggtgattaa acgcgtattc cggctgaccc 7200
tgcgggctgc gcagggtttt attgattcca tttttgccct gatgaacgtt ccgttgcgct 7260
gcccggatta caccagtgtc agtaagcggg caaagtcggt taatgtcagt ttcaaaacgt 7320
ccacccgggg tgaaatcgca cacctggtga ttgattccac cgggctgaag gtctttggtg 7380
aaggcgaatg gaaagtcaga aagcacggca aagagcgccg tcgtatctgg cgaaagttgc 7440
atcttgctgt tgacagcaac acacatgaag ttgtctgtgc agacctgtcg ctgaataacg 7500
tcacggactc agaagccttc ccgggcctta tccggcagac tcacagaaaa atcagggcag 7560
ccgcggcaga cggggcttac gatacccggc tctgtcacga tgaactgcgc cgcaaaaaaa 7620
tcagcgcgct tattcctccc cgaaaaggtg cgggttactg gcccggtgaa tatgcagacc 7680
gtaaccgtgc agtggctaat cagcgaatga ccgggagtaa tgcgcggtgg aaatggacaa 7740
cagattacaa ccgtcgctcg atagcggaaa cggcgatgta ccgggtaaaa cagctgttcg 7800
ggggttcact gacgctgcgt gactacgatg gtcaggttgc ggaggctatg gccctggtac 7860
gagcgctgaa caaaatgacg aaagcaggta tgcctgaaag cgtgcgtatt gcctgaaaac 7920
acaacccgct acgggggaga cttacccgaa atctgattta ttcaacaaag ccgggtgtgg 7980
tgaactacaa agcagacccg ttgaggttat cagttcgatg cacaatcagc agcgcataaa 8040
atatgcacaa gaacaggagc acccttcgca ttaagctgtg gtggtaacaa gtagtgccgg 8100
gctaccatca gcgagcatga tgcgctccca cagcattcgc cttggcagta tggaagttcc 8160
tcgctccagt tcgggccggt atccacctcg agtggcagtg agcgcaacgc aattaatgta 8220
agttagctca ctcattaggc accccaggct tgacacttta tgcttccggc tcgtataatg 8280
tgtggaattg tgagcggata acaataacaa tttcacacag gatctaggaa ccaaggagag 8340
tggcatatga caattgaaac gcgcgaagat agatttaaca gacgtattga tcaccttttt 8400
gaaacagacc cgcagttcgc agcggcacgt ccggacgaag ctattagcgc tgcagcagcc 8460
gatccggagc tgcgcctgcc agccgcagtc aagcagattc tggccggtta tgcggaccgt 8520
ccggccctgg gtaagcgtgc tgtggagttc gttacggacg aagaaggccg taccaccgca 8580
aagttgctgc cgcgtttcga tacgatcacc taccgtcaat tggcaggtcg tattcaggcg 8640
gtgactaacg cgtggcacaa tcacccggtg aatgcgggtg accgtgtcgc aattttgggc 8700
ttcacgagcg ttgactatac gaccatcgat atcgcactgc tggaactggg tgctgttagc 8760
gttccgttgc aaacgtctgc tccggttgcg cagctgcaac cgattgtggc cgaaaccgag 8820
ccgaaggtca ttgcgagcag cgtcgatttc ctggcagatg cggtcgcact ggttgagagc 8880
ggtccagccc cgagccgtct ggtcgttttt gattatagcc acgaggtcga cgatcagcgt 8940
gaggccttcg aagcggccaa gggtaaactg gcgggtaccg gtgttgtggt ggaaacgatt 9000
acggatgtct tggatcgcgg tcgcagcctg gctgatgcgc cgctgtatgt cccagacgaa 9060
acggacccgc tgaccctgct gatctatacc agcggtagca ccggtacgcc gaagggtgct 9120
atgtatccgg aatccaagac cgcgacgatg tggcaagctg gtagcaaggc gcgttgggat 9180
gaaaccctgg gcgttatgcc gagcatcacc ctgaacttca tgccaatgtc ccacgtgatg 9240
ggtcgcggca tcctgtgtag caccctggcg agcggcggta ctgcgtattt tgccgcacgt 9300
agcgacttgt ctacctttct ggaggacctg gcgttggtcc gcccgaccca actgaatttc 9360
gtccctcgca tctgggatat gctgttccaa gagtatcaga gccgtctgga caatcgtcgt 9420
gccgagggta gcgaggatcg cgcggaagcg gccgtactgg aagaggttcg tacccaattg 9480
ctgggcggtc gtttcgtttc cgctctgacc ggtagcgctc caatcagcgc ggaaatgaaa 9540
agctgggtcg aggacctgct ggacatgcat ttgctggaag gttacggttc caccgaggcg 9600
ggtgccgtgt tcattgacgg tcaaatccaa cgtccacctg ttatcgatta caaactggtt 9660
gatgttccgg acttgggtta ctttgcgacc gatcgtccat accctcgcgg cgagctgctg 9720
gtgaagagcg agcagatgtt cccgggctac tataagcgtc cggagattac ggcggagatg 9780
tttgacgagg acggttatta ccgtaccggc gacatcgtgg ccgaactggg tccggatcat 9840
ctggagtatc tggaccgccg taacaacgtc ctgaagctga gccagggtga gtttgttacc 9900
gtttccaaac tggaagcggt ctttggcgat agcccactgg tgcgccagat ttatgtctac 9960
ggtaactctg cacgcagcta tctgctggcg gttgtcgttc cgaccgaaga ggcactgagc 10020
cgctgggacg gcgatgaact gaagagccgc atcagcgaca gcttgcaaga tgcggcacgt 10080
gccgcaggtt tgcaaagcta tgagatcccg cgtgactttc tggttgaaac cacgccgttc 10140
acgttggaga acggtctgct gaccggcatt cgcaaactgg cgcgtccgaa gctgaaagcg 10200
cattatggcg aacgtctgga acaactgtac acggatctgg ctgaaggcca agccaatgag 10260
ctgcgtgaac tgcgccgtaa tggtgcggat cgtccggttg ttgaaacggt ttcgcgtgcc 10320
gcggtcgcct tgctgggtgc gtctgtgacg gacctgcgtt ctgacgccca ctttacggac 10380
ctgggcggtg attccctgag cgccctgagc ttcagcaacc tgctgcacga gatttttgac 10440
gtcgatgtcc cggtgggcgt gattgtcagc ccggcaaccg acctggccgg tgttgccgcc 10500
tatattgagg gtgagctgcg tggtagcaaa cgtccgacct acgcaagcgt ccacggtcgt 10560
gacgcaaccg aggtgcgtgc tcgcgatctg gcgctgggca aattcatcga cgcaaaaacg 10620
ctgagcgcag caccgggtct gccgcgctcc ggtacggaga tccgtacggt gctgctgacg 10680
ggtgcgaccg gttttctggg tcgctacttg gccttggagt ggctggaacg tatggacctg 10740
gttgacggca aggtgatctg tttggttcgt gcgcgtagcg acgacgaagc acgtgcgcgt 10800
ctggacgcaa ccttcgatac cggcgatgct accttgctgg agcactaccg tgccctggcg 10860
gctgaccatc tggaagttat tgcgggtgat aagggtgaag ccgacttggg cctggatcac 10920
gatacctggc agcgtctggc agatacggtc gacctgatcg ttgacccggc tgcgctggtt 10980
aaccacgttt tgccgtacag ccagatgttc ggcccaaacg ctctgggcac tgcagagctg 11040
attcgcattg cactgaccac caccattaaa ccgtacgtct acgtgagcac cattggtgtt 11100
ggtcagggca tcagcccaga agcctttgtt gaagatgcgg acatccgcga aatcagcgcc 11160
acgcgtcgcg ttgacgacag ctacgcgaat ggttatggta acagcaaatg ggcaggtgag 11220
gttctgctgc gcgaagcgca cgactggtgc ggcctgccgg tgagcgtgtt tcgttgtgac 11280
atgatcttgg ccgacaccac ctactccggc cagctgaatc tgccggatat gttcacccgt 11340
ctgatgttga gcctggtggc aactggcatc gcaccgggca gcttttatga gctggacgcg 11400
gacggtaatc gtcaacgtgc acattatgat ggtctgccgg tggagtttat cgcggaagca 11460
atcagcacga tcggctctca agtgactgac ggtttcgaaa cgttccatgt catgaatcct 11520
tatgatgatg gtatcggcct ggacgagtac gtcgactggc tgattgaggc tggctacccg 11580
gttcaccgtg ttgatgatta tgcgacgtgg ttgagccgtt ttgaaaccgc cttgcgtgcg 11640
ctgccggagc gtcaacgtca ggcatccctg ctgccgctgt tgcacaacta ccagcagcct 11700
tctccgccgg tttgcggtgc tatggctcct accgaccgtt tccgtgcagc tgtccaggac 11760
gccaaaattg gcccagataa agacatccca catgtaacgg cggacgtgat cgtgaaatac 11820
attagcaact tgcagatgct gggtctgctg taagtctaag agaaggagtt ctatcgtcta 11880
tgattgaaac catcttacca gccggcgtcg aatcagcaga gttacttgag taccctgaag 11940
atctgaaggc gcatccggct gaagagcatc tgatcgcaaa gagcgtagag aagcgtcgtc 12000
gcgacttcat tggcgcacgt cattgcgccc gtctggcact ggcggagctg ggtgaaccgc 12060
cggttgcgat tggcaagggt gaacgtggtg cgccgatttg gccgcgtggt gtcgtgggct 12120
ctctgaccca ttgcgatggc tatcgcgcag cggcggttgc tcacaaaatg cgttttcgca 12180
gcatcggcat cgacgccgaa ccgcacgcga ccctgccgga aggtgtcctg gattcggtta 12240
gcctgccgcc tgagcgtgag tggctgaaaa ccaccgacag cgcactgcac ctggaccgtt 12300
tgctgttttg tgcgaaagaa gcaacttaca aagcgtggtg gccgctgacg gcacgttggc 12360
tgggtttcga agaagcgcac attaccttcg aaatcgagga tggtagcgcc gactctggta 12420
atggcacgtt tcacagcgaa ctgctggtgc cgggtcagac caatgacggt ggtaccccgc 12480
tgctgtcttt cgacggtcgc tggctgatcg ctgatggctt catcctgacg gcgattgcat 12540
acgcatgata atgataacct aggctgctgc caccgctgag caataactag cataacccct 12600
tggggcctct aaacgggtct tgaggggttt tttgcctcga gtgaccccag ccgcccctca 12660
tgccaaccga gcccattaag cgcagagtcg gccgcaacta tctcggggac gcataaacac 12720
gcagcgattt accaaggagt tcggctaggt caatccgcaa ttccctttgc ctggccggag 12780
atgccgcgag caaacaatgt gtccggtcgc taccagatgg actttgtggg cggaggattg 12840
caccagacgc ttcagcgcag cgtcgtacga tgaatcggaa ggcccggtaa gcaattgaag 12900
aaccgctgac cacctcccat ccgacaatgc aagggtgccc cgctcccagc gcgacacggt 12960
tgcctgatcc acacccatta attcagctag gtgactttgc ttcatatgac gaagcaaccg 13020
cgccctccgc acctgccgcc ccctgtcatt cgtcaacatt cttcagcacc tcaatgtcgt 13080
tcgtagtgag cctcattttt tcaagaccgc cgatgatgag agccaggcct cgctcgaatg 13140
ccgcgtccgg accgccttcg tagacgattt tcatcgcgct ctgtaggcgc gccggcatcg 13200
tagacgctga ggtggtcaac tgatcttcgc cccgctcctc ggcgtctgcc tcgctagctt 13260
gctgctcaag aacagcgccg acggtgaagt agctgattgc catcaacgca taggtcgcgt 13320
cacctgccga aaagccagca tcgcaaagga agcgaagctg cgcgtcggct ttttccatct 13380
gcggcgcggc tggccgcgtc ccggcatgaa tacgcgcgcc atcgcgataa gcgagcaacg 13440
cccgtcgaaa actgcatgca ttgcccttca ggaacgaacg ccagtcgtcg tcatcccttg 13500
gcgtcgaatg cgtgtgattt atcgtcagca tggcttcggc aagtgcgtcg agcaacgcac 13560
gcttgttctt gaaatgccag tagagcgctg gctgttgcac cccgaggcgc tcagccagtc 13620
ggcgcgtcgt tagaccttcc atgcccacgt cgttaagcag ttcgagcgcg gttcggatca 13680
cggcctcgcg ttggagcttg ttcattcgcg aa 13712
<210> 18
<211> 13719
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 载体
<400> 18
ttctcatgtt tgacagctta tcatcgataa gctttaatgc ggtagtttat cacagttaaa 60
ttgctaacgc agtcaggcac cgtgtatgaa atctaacaat gcgctcatcg tcatcctcgg 120
caccgtcacc ctggatgctg taggcatagg cttggttatg ccggtactgc cgggcctctt 180
gcgggatatc gtccattccg acagcatcgc cagtcactat ggcgtgctgc tagcgctata 240
tgcgttgatg caatttctat gcgcacccgt tctcggagca ctgtccgacc gctttggccg 300
ccgcccagtc ctgctcgctt cgctacttgg agccactatc gactacgcga tcatggcgac 360
cacacccgtc ctgtggatcc tctacgccgg acgcatcgtg gccggcatca ccggcgccac 420
aggtgcggtt gctggcgcct atatcgccga catcaccgat ggggaagatc gggctcgcca 480
cttcgggctc atgagcgctt gtttcggcgt gggtatggtg gcaggccccg tggccggggg 540
actgttgggc gccatctcct tgcatgcacc attccttgcg gcggcggtgc tcaacggcct 600
caacctacta ctgggctgct tcctaatgca ggagtcgcat aagggagagc gtcgaccgat 660
gcccttgaga gccttcaacc cagtcagctc cttccggtgg gcgcggggca tgactatcgt 720
cgccgcactt atgactgtct tctttatcat gcaactcgta ggacaggtgc cggcagcgct 780
ctgggtcatt ttcggcgagg accgctttcg ctggagcgcg acgatgatcg gcctgtcgct 840
tgcggtattc ggaatcttgc acgccctcgc tcaagccttc gtcactggtc ccgccaccaa 900
acgtttcggc gagaagcagg ccattatcgc cggcatggcg gccgacgcgc tgggctacgt 960
cttgctggcg ttcgcgacgc gaggctggat ggccttcccc attatgattc ttctcgcttc 1020
cggcggcatc gggatgcccg cgttgcaggc catgctgtcc aggcaggtag atgacgacca 1080
tcagggacag cttcaaggat cgctcgcggc tcttaccagc ctaacttcga tcactggacc 1140
gctgatcgtc acggcgattt atgccgcctc ggcgagcaca tggaacgggt tggcatggat 1200
tgtaggcgcc gccctatacc ttgtctgcct ccccgcgttg cgtcgcggtg catggagccg 1260
ggccacctcg acctgaatgg aagccggcgg cacctcgcta acggattcac cactccaaga 1320
attggagcca atcaattctt gcggagaact gtgaatgcgc aaaccaaccc ttggcagaac 1380
atatccatcg cgtccgccat ctccagcagc cgcacgcggc gcatctcggg cagcgttggg 1440
tcctggccac gggtgcgcat gatcgtgctc ctgtcgttga ggacccggct aggctggcgg 1500
ggttgcctta ctggttagca gaatgaatca ccgatacgcg agcgaacgtg aagcgactgc 1560
tgctgcaaaa cgtctgcgac ctgagcaaca acatgaatgg tcttcggttt ccgtgtttcg 1620
taaagtctgg aaacgcggaa gtcccctacg tgctgctgaa gttgcccgca acagagagtg 1680
gaaccaaccg gtgataccac gatactatga ctgagagtca acgccatgag cggcctcatt 1740
tcttattctg agttacaaca gtccgcaccg ctgccggtag ctacttgact atccggctgc 1800
actagccctg cgtcagatgg ctctgatcca aggcaaactg ccaaaatatc tgctggcacc 1860
ggaagtcagc gccctgcacc attatgttcc ggatctgcat cgcaggatgc tgctggctac 1920
cctgtggaac acctacatct gtattaacga agcgctggca ttgaccctga gtgatttttc 1980
tctggtgccg ccctatccct ttgtgcagct tgccacgctc aaaggggttt gaggtccaac 2040
cgtacgaaaa cgtacggtaa gaggaaaatt atcgtctgaa aaatcgatta gtagacaaga 2100
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tacattatgt ttcgatatat cagacagtta cttcactaac gtacgttttc gttctattgg 2220
ccttcagacc ccatatcctt aatgtccttt atttgctggg gttatcagat ccccccgaca 2280
cgtttaatta atgctttctc cgccggagat cgacgcacag gcttctgtgt ctatgatgtt 2340
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taacgcaggg ctttccgtca cagcgcgata tgtcagccag cggggctttc ttttgccaga 2460
ccgcttccat cctctgcatt tcagcaatct ggctataccc gtcattcata aaccacgtaa 2520
atgccgtcac gcaggaagcc aggacgaaga atatcgtcag tacaagataa atcgcggatt 2580
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gatgcccgat aagggcggca atttgtttaa tttcgtcgct catacaaaat cctgcctatc 2940
gtgagaatga ccagccttta tccggcttct gtcgtatctg ttcggcgagt cgctgtcgtt 3000
ctttctcctg ctgacgctgt ttttccgcca gacgttcgcg ctctctctgc ctttccatct 3060
cctgatgtat cccctggaac tccgccatcg catcgttaac aagggactga agatcgattt 3120
cttcctgtat atccttcatg gcatcactga ccagtgcgtt cagcttgtca ggctcttttt 3180
caaaatcaaa cgttctgccg gaatgggatt cctgctcagg ctctgacttc agctcctgtt 3240
ttagcgtcag agtatccctc tcgctgaggg cttcccgtaa cgaggtagtc acgtcaatta 3300
cgctgtcacg ttcatcacgg gactgctgca cctgcctttc agcctccctg cgctcaagaa 3360
tggcctgtag ctgctcagta tcgaatcgct gaacctgacc cgcgcccaga tgccgctcag 3420
gctcacggtc aatgccctgc gccttcaggg aacgggaatc aacccggtca gcgtgctgat 3480
accgttcaag gtgcttattc tggaggtcag cccagcgtct ccctctgggc aacaaggtat 3540
tctttgcgtt cggtcggtgt ttccccgaaa cgtgcctttt ttgcgccacc gcgtccggct 3600
ctttggtgtt agcccgttta aaatactgct cagggtcacg gtgaataccg tcattaatgc 3660
gttcagagaa catgatatgg gcgtggggct gctcgccacc ggctatcgct gctttcggat 3720
tatggatagc gaactgatag gcatggcggt cgccaatttc ctgttggaca aaatcgcgga 3780
caagctcaag acgttgttcg ggttttaact cacgcggcag ggcaatctcg atttcacggt 3840
aggtacagcc gttggcacgt tcagacgtgt cagcggcttt ccagaactcg gacggtttat 3900
gcgctgccca cgccggcata ttgccggact ccttgtgctc aaggtcggag tctttttcac 3960
gggcatactt tccctcacgc gcaatataat cggcatgagg agaggcactg ccttttccgc 4020
cggtttttac gctgagatga taggatgcca tcgtgtttta tcccgctgaa gggcgcacgt 4080
ttctgaacga agtgaagaaa gtctaagtgc gccctgataa ataaaagagt tatcagggat 4140
tgtagtggga tttgacctcc tctgccatca tgagcgtaat cattccgtta gcattcagga 4200
ggtaaacagc atgaataaaa gcgaaaaaac aggaacaatg ggcagcagaa agagtgcagt 4260
atattcgcgg cttaaagtcg ccgaatgagc aacagaaact tatgctgata ctgacggata 4320
aagcagataa aacagcacag gatatcaaaa cgctgtccct gctgatgaag gctgaacagg 4380
cagcagagaa agcgcaggaa gccagagcga aagtcatgaa cctgatacag gcagaaaagc 4440
gagccgaagc cagagccgcc cgtaaagccc gtgaccatgc tctgtaccag tctgccggat 4500
tgcttatcct ggcgggtctg gttgacagta agacgggtaa gcctgttgat gataccgctg 4560
ccttactggg tgcattagcc agtctgaatg acctgtcacg ggataatccg aagtggtcag 4620
actggaaaat cagagggcag gaactgctga acagcaaaaa gtcagatagc accacatagc 4680
agacccgcca taaaacgccc tgagaagccc gtgacgggct tttcttgtat tatgggtagt 4740
ttccttgcat gaatccataa aaggcgcctg tagtgccatt tacccccatt cactgccaga 4800
gccgtgagcg cagcgaactg aatgtcacga aaaagacagc gactcaggtg cctgatggtc 4860
ggagacaaaa ggaatattca gcgatttgcc cgagcttgcg agggtgctac ttaagccttt 4920
agggttttaa ggtctgtttt gtagaggagc aaacagcgtt tgcgacatcc ttttgtaata 4980
ctgcggaact gactaaagta gtgagttata cacagggctg ggatctattc tttttatctt 5040
tttttattct ttctttattc tataaattat aaccacttga atataaacaa aaaaaacaca 5100
caaaggtcta gcggaattta cagagggtct agcagaattt acaagttttc cagcaaaggt 5160
ctagcagaat ttacagatac ccacaactca aaggaaaagg actagtaatt atcattgact 5220
agcccatctc aattggtata gtgattaaaa tcacctagac caattgagat gtatgtctga 5280
attagttgtt ttcaaagcaa atgaactagc gattagtcgc tatgacttaa cggagcatga 5340
aaccaagcta attttatgct gtgtggcact actcaacccc acgattgaaa accctacaag 5400
gaaagaacgg acggtatcgt tcacttataa ccaatacgct cagatgatga acatcagtag 5460
ggaaaatgct tatggtgtat tagctaaagc aaccagagag ctgatgacga gaactgtgga 5520
aatcaggaat cctttggtta aaggctttga gattttccag tggacaaact atgccaagtt 5580
ctcaagcgaa aaattagaat tagtttttag tgaagagata ttgccttatc ttttccagtt 5640
aaaaaaattc ataaaatata atctggaaca tgttaagtct tttgaaaaca aatactctat 5700
gaggatttat gagtggttat taaaagaact aacacaaaag aaaactcaca aggcaaatat 5760
agagattagc cttgatgaat ttaagttcat gttaatgctt gaaaataact accatgagtt 5820
taaaaggctt aaccaatggg ttttgaaacc aataagtaaa gatttaaaca cttacagcaa 5880
tatgaaattg gtggttgata agcgaggccg cccgactgat acgttgattt tccaagttga 5940
actagataga caaatggatc tcgtaaccga acttgagaac aaccagataa aaatgaatgg 6000
tgacaaaata ccaacaacca ttacatcaga ttcctaccta cgtaacggac taagaaaaac 6060
actacacgat gctttaactg caaaaattca gctcaccagt tttgaggcaa aatttttgag 6120
tgacatgcaa agtaagcatg atctcaatgg ttcgttctca tggctcacgc aaaaacaacg 6180
aaccacacta gagaacatac tggctaaata cggaaggatc tgaggttctt atggctcttg 6240
tatctatcag tgaagcatca agactaacaa acaaaagtag aacaactgtt caccgttaga 6300
tatcaaaggg aaaactgtcc atatgcacag atgaaaacgg tgtaaaaaag atagatacat 6360
cagagctttt acgagttttt ggtgcattta aagctgttca ccatgaacag atcgacaatg 6420
taacagatga acagcatgta acacctaata gaacaggtga aaccagtaaa acaaagcaac 6480
tagaacatga aattgaacac ctgagacaac ttgttacagc tcaacagtca cacatagaca 6540
gcctgaaaca ggcgatgctg cttatcgaat caaagctgcc gacaacacgg gagccagtga 6600
cgcctcccgt ggggaaaaaa tcatggcaat tctggaagaa atagcgcttt cagccggcaa 6660
acctgaagcc ggatctgcga ttctgataac aaactagcaa caccagaaca gcccgtttgc 6720
gggcagcaaa acccgtactt ttggacgttc cggcggtttt ttgtggcgag tggtgttcgg 6780
gcggtgcgcg caagatccat tatgttaaac gggcgagttt acatctcaaa accgcccgct 6840
taacaccatc agaaatcctc agcgcgattt taagcaccaa cccccccccg taacacccaa 6900
atccatactg aaagtggctt tgttgaataa atcgaacttt tgctgagttg aaggatcaga 6960
tcacgcatcc tcccgacaac acagaccatt ccgtggcaaa gcaaaagttc agaatcacca 7020
actggtccac ctacaacaaa gctctcatca accgtggctc cctcactttc tggctggatg 7080
atgaggcgat tcaggcctgg tatgagtcgg caacaccttc atcacgagga aggccccagc 7140
gctattctga tctcgccatc accaccgttc tggtgattaa acgcgtattc cggctgaccc 7200
tgcgggctgc gcagggtttt attgattcca tttttgccct gatgaacgtt ccgttgcgct 7260
gcccggatta caccagtgtc agtaagcggg caaagtcggt taatgtcagt ttcaaaacgt 7320
ccacccgggg tgaaatcgca cacctggtga ttgattccac cgggctgaag gtctttggtg 7380
aaggcgaatg gaaagtcaga aagcacggca aagagcgccg tcgtatctgg cgaaagttgc 7440
atcttgctgt tgacagcaac acacatgaag ttgtctgtgc agacctgtcg ctgaataacg 7500
tcacggactc agaagccttc ccgggcctta tccggcagac tcacagaaaa atcagggcag 7560
ccgcggcaga cggggcttac gatacccggc tctgtcacga tgaactgcgc cgcaaaaaaa 7620
tcagcgcgct tattcctccc cgaaaaggtg cgggttactg gcccggtgaa tatgcagacc 7680
gtaaccgtgc agtggctaat cagcgaatga ccgggagtaa tgcgcggtgg aaatggacaa 7740
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ggggttcact gacgctgcgt gactacgatg gtcaggttgc ggaggctatg gccctggtac 7860
gagcgctgaa caaaatgacg aaagcaggta tgcctgaaag cgtgcgtatt gcctgaaaac 7920
acaacccgct acgggggaga cttacccgaa atctgattta ttcaacaaag ccgggtgtgg 7980
tgaactacaa agcagacccg ttgaggttat cagttcgatg cacaatcagc agcgcataaa 8040
atatgcacaa gaacaggagc acccttcgca ttaagctgtg gtggtaacaa gtagtgccgg 8100
gctaccatca gcgagcatga tgcgctccca cagcattcgc cttggcagta tggaagttcc 8160
tcgctccagt tcgggccggt atccacctcg agtggcagtg agcgcaacgc aattaatgta 8220
agttagctca ctcattaggc accccaggct tgacacttta tgcttccggc tcgtataatg 8280
tgtggaattg tgagcggata acaataacaa tttcacacag gatctaggaa ccaaggagag 8340
tggcatatga ctagcgatgt acatgacgcg actgacggtg tgacagagac agcattagat 8400
gacgagcaaa gcacccgtcg cattgcggaa ctgtatgcaa cggatccgga gtttgcagct 8460
gccgcaccgc tgccggctgt tgtcgacgct gcacataaac cgggtctgcg tctggcggag 8520
attctgcaga ccctgtttac cggttacggc gatcgtccgg ccctgggcta ccgtgctcgt 8580
gaactggcga cggatgaggg tggccgtacc gtgacccgtt tgttgccgcg ttttgacacg 8640
ctgacgtacg cgcaagtctg gagccgtgtc caggctgtgg cagcagcgct gcgccataac 8700
ttcgcgcagc ctatctatcc aggtgacgcg gttgcgacca tcggctttgc aagcccagac 8760
tatctgacgc tggatctggt ctgcgcgtat ttgggcctgg tcagcgtgcc actgcagcac 8820
aacgctcctg tgagccgttt ggcgccgatt ctggccgagg ttgagccgcg tatcctgacg 8880
gtcagcgccg aatacctgga cctggcggtc gagagcgtgc gtgatgtgaa ttctgtctcg 8940
caattggtcg ttttcgacca ccacccggaa gtcgatgacc accgcgatgc gctggcacgc 9000
gcacgtgaac agctggccgg taaaggtatt gccgttacga ctctggacgc gattgcggac 9060
gaaggcgctg gtctgccagc ggagccgatc tataccgccg atcacgatca acgcctggcg 9120
atgatcctgt acaccagcgg ttctaccggc gctccgaagg gtgcgatgta tactgaggcc 9180
atgctggcgc gtctgtggac catgtccttt atcaccggcg acccgactcc tgtgattaat 9240
gtgaacttta tgccgctgaa tcacctgggt ggtcgtattc cgattagcac cgcggtccag 9300
aacggcggta cgagctactt cgttccggag agcgacatgt ctaccctgtt tgaggacctg 9360
gccttggttc gcccgacgga actgggtctg gttccgcgtg tggcggacat gttgtaccag 9420
catcacctgg caactgttga ccgtctggtt acccagggcg cagacgagct gaccgcagag 9480
aagcaggcag gcgcagaact gcgtgaacag gtgctgggcg gtcgtgtgat taccggcttc 9540
gtgagcacgg cgccactggc ggctgagatg cgtgccttcc tggatatcac gctgggtgcc 9600
cacatcgttg atggttacgg tttgaccgaa accggtgcgg tgacgcgtga tggcgttatc 9660
gtccgtccgc cggtcattga ttacaagctg attgatgttc cagagctggg ctacttcagc 9720
accgataaac cgtacccacg tggcgaactg ttggttcgta gccaaacgtt gaccccgggt 9780
tactataaac gtccggaagt taccgcatcg gtgtttgatc gcgacggcta ttaccatacc 9840
ggtgacgtta tggcagaaac cgctccagat cacctggtat atgtggaccg ccgcaataac 9900
gttctgaaac tggcgcaggg tgaatttgtc gcagtcgcaa acctggaagc cgttttcagc 9960
ggtgccgcgc tggttcgcca aatcttcgtg tacggcaaca gcgagcgcag cttcctgttg 10020
gcggtggtgg tgccgacgcc agaagccctg gaacaatacg atccggcagc cctgaaggcg 10080
gccttggcag atagcctgca gcgcacggct cgtgatgcgg agctgcaatc gtatgaagtt 10140
ccggccgatt tcattgtgga aaccgagccg ttcagcgccg caaatggtct gttgagcggt 10200
gtcggcaagt tgctgcgtcc gaacctgaaa gatcgttatg gtcaacgtct ggagcaaatg 10260
tatgccgata ttgccgcgac ccaggcgaat cagctgcgcg agctgcgtcg tgccgcagcc 10320
acccagccgg tgattgatac cctgacgcag gctgctgcga cgattttggg taccggtagc 10380
gaagtggcgt ctgatgccca ctttacggat ctgggtggcg acagcctgtc cgctctgacc 10440
ttgtccaatt tgctgagcga tttctttggt tttgaggttc cggttggtac cattgttaac 10500
ccggcgacta atctggcgca gctggcacag cacatcgaag cacagcgcac cgccggtgac 10560
cgccgtccga gctttaccac ggtgcatggt gcggacgcga cggaaattcg tgcgagcgaa 10620
ctgaccctgg ataagtttat tgacgcagaa accctgcagg cagcaccagg cctgccgaag 10680
gtgaccaccg agccgcgcac cgtcctgctg agcggtgcca atggttggtt gggtcgcttc 10740
ctgaccctgc aatggctgga acgtctggcg cctgttggtg gtacgctgat caccattgtc 10800
cgcggtcgtg acgacgctgc ggctcgtgct cgcctgaccc aagcttacga caccgaccca 10860
gagttgtctc gccgcttcgc agaactggcg gaccgccatc tgcgtgttgt agcaggcgat 10920
atcggtgatc cgaatctggg cctgacccca gaaatctggc accgtctggc tgctgaggtg 10980
gatttggttg tgcatccagc ggcgttggtg aaccacgtct tgccgtatcg tcagctgttc 11040
ggcccgaacg tcgtgggcac cgccgaagtg attaagctgg cgctgacgga gcgcatcaag 11100
ccagttacct acctgagcac cgtcagcgtt gcaatgggta tcccggactt tgaagaggat 11160
ggtgatatcc gtaccgtttc ccctgttcgt ccgctggacg gcggctatgc taatggctac 11220
ggcaactcta agtgggctgg tgaggtcctg ctgcgtgagg cccacgacct gtgtggcctg 11280
ccggtggcca cgttccgtag cgacatgatt ttggcacacc cgcgctaccg tggtcaggtt 11340
aatgtgccgg atatgttcac tcgtctgttg ttgtcgctgc tgatcactgg cgtggctccg 11400
cgctctttct acattggtga tggtgaacgt cctcgtgcgc attatccggg tctgactgtc 11460
gactttgtgg ccgaggccgt gacgaccctg ggtgcacagc agcgtgaagg ctacgttagc 11520
tacgatgtca tgaacccgca tgacgatggc atcagcctgg atgttttcgt ggactggctg 11580
atccgcgcag gccatccgat tgaccgtgtg gacgattacg acgattgggt gcgtcgcttc 11640
gagactgcac tgacggcgct gccggaaaaa cgtcgcgcac aaaccgttct gccgttgctg 11700
cacgcgttcc gtgccccgca agcgccgctg cgtggtgccc cggagccaac cgaggttttc 11760
catgcggcgg ttcgtaccgc aaaagtcggt ccaggcgaca ttccgcactt ggatgaagcg 11820
ctgattgata agtacatccg tgatctgcgt gagtttggcc tgatctaata agagaaggag 11880
ttctatcatg attgaaacca tcttaccagc cggcgtcgaa tcagcagagt tacttgagta 11940
ccctgaagat ctgaaggcgc atccggctga agagcatctg atcgcaaaga gcgtagagaa 12000
gcgtcgtcgc gacttcattg gcgcacgtca ttgcgcccgt ctggcactgg cggagctggg 12060
tgaaccgccg gttgcgattg gcaagggtga acgtggtgcg ccgatttggc cgcgtggtgt 12120
cgtgggctct ctgacccatt gcgatggcta tcgcgcagcg gcggttgctc acaaaatgcg 12180
ttttcgcagc atcggcatcg acgccgaacc gcacgcgacc ctgccggaag gtgtcctgga 12240
ttcggttagc ctgccgcctg agcgtgagtg gctgaaaacc accgacagcg cactgcacct 12300
ggaccgtttg ctgttttgtg cgaaagaagc aacttacaaa gcgtggtggc cgctgacggc 12360
acgttggctg ggtttcgaag aagcgcacat taccttcgaa atcgaggatg gtagcgccga 12420
ctctggtaat ggcacgtttc acagcgaact gctggtgccg ggtcagacca atgacggtgg 12480
taccccgctg ctgtctttcg acggtcgctg gctgatcgct gatggcttca tcctgacggc 12540
gattgcatac gcatgataaa ttaacctagg ctgctgccac cgctgagcaa taactagcat 12600
aaccccttgg ggcctctaaa cgggtcttga ggggtttttt gcctcgagtg accccagccg 12660
cccctcatgc caaccgagcc cattaagcgc agagtcggcc gcaactatct cggggacgca 12720
taaacacgca gcgatttacc aaggagttcg gctaggtcaa tccgcaattc cctttgcctg 12780
gccggagatg ccgcgagcaa acaatgtgtc cggtcgctac cagatggact ttgtgggcgg 12840
aggattgcac cagacgcttc agcgcagcgt cgtacgatga atcggaaggc ccggtaagca 12900
attgaagaac cgctgaccac ctcccatccg acaatgcaag ggtgccccgc tcccagcgcg 12960
acacggttgc ctgatccaca cccattaatt cagctaggtg actttgcttc atatgacgaa 13020
gcaaccgcgc cctccgcacc tgccgccccc tgtcattcgt caacattctt cagcacctca 13080
atgtcgttcg tagtgagcct cattttttca agaccgccga tgatgagagc caggcctcgc 13140
tcgaatgccg cgtccggacc gccttcgtag acgattttca tcgcgctctg taggcgcgcc 13200
ggcatcgtag acgctgaggt ggtcaactga tcttcgcccc gctcctcggc gtctgcctcg 13260
ctagcttgct gctcaagaac agcgccgacg gtgaagtagc tgattgccat caacgcatag 13320
gtcgcgtcac ctgccgaaaa gccagcatcg caaaggaagc gaagctgcgc gtcggctttt 13380
tccatctgcg gcgcggctgg ccgcgtcccg gcatgaatac gcgcgccatc gcgataagcg 13440
agcaacgccc gtcgaaaact gcatgcattg cccttcagga acgaacgcca gtcgtcgtca 13500
tcccttggcg tcgaatgcgt gtgatttatc gtcagcatgg cttcggcaag tgcgtcgagc 13560
aacgcacgct tgttcttgaa atgccagtag agcgctggct gttgcacccc gaggcgctca 13620
gccagtcggc gcgtcgttag accttccatg cccacgtcgt taagcagttc gagcgcggtt 13680
cggatcacgg cctcgcgttg gagcttgttc attcgcgaa 13719
<210> 19
<211> 13785
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 载体
<400> 19
ttctcatgtt tgacagctta tcatcgataa gctttaatgc ggtagtttat cacagttaaa 60
ttgctaacgc agtcaggcac cgtgtatgaa atctaacaat gcgctcatcg tcatcctcgg 120
caccgtcacc ctggatgctg taggcatagg cttggttatg ccggtactgc cgggcctctt 180
gcgggatatc gtccattccg acagcatcgc cagtcactat ggcgtgctgc tagcgctata 240
tgcgttgatg caatttctat gcgcacccgt tctcggagca ctgtccgacc gctttggccg 300
ccgcccagtc ctgctcgctt cgctacttgg agccactatc gactacgcga tcatggcgac 360
cacacccgtc ctgtggatcc tctacgccgg acgcatcgtg gccggcatca ccggcgccac 420
aggtgcggtt gctggcgcct atatcgccga catcaccgat ggggaagatc gggctcgcca 480
cttcgggctc atgagcgctt gtttcggcgt gggtatggtg gcaggccccg tggccggggg 540
actgttgggc gccatctcct tgcatgcacc attccttgcg gcggcggtgc tcaacggcct 600
caacctacta ctgggctgct tcctaatgca ggagtcgcat aagggagagc gtcgaccgat 660
gcccttgaga gccttcaacc cagtcagctc cttccggtgg gcgcggggca tgactatcgt 720
cgccgcactt atgactgtct tctttatcat gcaactcgta ggacaggtgc cggcagcgct 780
ctgggtcatt ttcggcgagg accgctttcg ctggagcgcg acgatgatcg gcctgtcgct 840
tgcggtattc ggaatcttgc acgccctcgc tcaagccttc gtcactggtc ccgccaccaa 900
acgtttcggc gagaagcagg ccattatcgc cggcatggcg gccgacgcgc tgggctacgt 960
cttgctggcg ttcgcgacgc gaggctggat ggccttcccc attatgattc ttctcgcttc 1020
cggcggcatc gggatgcccg cgttgcaggc catgctgtcc aggcaggtag atgacgacca 1080
tcagggacag cttcaaggat cgctcgcggc tcttaccagc ctaacttcga tcactggacc 1140
gctgatcgtc acggcgattt atgccgcctc ggcgagcaca tggaacgggt tggcatggat 1200
tgtaggcgcc gccctatacc ttgtctgcct ccccgcgttg cgtcgcggtg catggagccg 1260
ggccacctcg acctgaatgg aagccggcgg cacctcgcta acggattcac cactccaaga 1320
attggagcca atcaattctt gcggagaact gtgaatgcgc aaaccaaccc ttggcagaac 1380
atatccatcg cgtccgccat ctccagcagc cgcacgcggc gcatctcggg cagcgttggg 1440
tcctggccac gggtgcgcat gatcgtgctc ctgtcgttga ggacccggct aggctggcgg 1500
ggttgcctta ctggttagca gaatgaatca ccgatacgcg agcgaacgtg aagcgactgc 1560
tgctgcaaaa cgtctgcgac ctgagcaaca acatgaatgg tcttcggttt ccgtgtttcg 1620
taaagtctgg aaacgcggaa gtcccctacg tgctgctgaa gttgcccgca acagagagtg 1680
gaaccaaccg gtgataccac gatactatga ctgagagtca acgccatgag cggcctcatt 1740
tcttattctg agttacaaca gtccgcaccg ctgccggtag ctacttgact atccggctgc 1800
actagccctg cgtcagatgg ctctgatcca aggcaaactg ccaaaatatc tgctggcacc 1860
ggaagtcagc gccctgcacc attatgttcc ggatctgcat cgcaggatgc tgctggctac 1920
cctgtggaac acctacatct gtattaacga agcgctggca ttgaccctga gtgatttttc 1980
tctggtgccg ccctatccct ttgtgcagct tgccacgctc aaaggggttt gaggtccaac 2040
cgtacgaaaa cgtacggtaa gaggaaaatt atcgtctgaa aaatcgatta gtagacaaga 2100
aagtccgtta agtgccaatt ttcgattaaa aagacaccgt tttgatggcg ttttccaatg 2160
tacattatgt ttcgatatat cagacagtta cttcactaac gtacgttttc gttctattgg 2220
ccttcagacc ccatatcctt aatgtccttt atttgctggg gttatcagat ccccccgaca 2280
cgtttaatta atgctttctc cgccggagat cgacgcacag gcttctgtgt ctatgatgtt 2340
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taacgcaggg ctttccgtca cagcgcgata tgtcagccag cggggctttc ttttgccaga 2460
ccgcttccat cctctgcatt tcagcaatct ggctataccc gtcattcata aaccacgtaa 2520
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tccacgtata gcgtgacatc tcacgacgca tttcatggat catcgctttc gccgtatcgg 2640
cagcctgatt cagcgcttct gtcgccggtt tctgctgtgc taatccggct tgtttcagtt 2700
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gtgatgaggc ggcctgaaac tgttctgtca gagaagtaac acgcttttcc agcgcctgat 2880
gatgcccgat aagggcggca atttgtttaa tttcgtcgct catacaaaat cctgcctatc 2940
gtgagaatga ccagccttta tccggcttct gtcgtatctg ttcggcgagt cgctgtcgtt 3000
ctttctcctg ctgacgctgt ttttccgcca gacgttcgcg ctctctctgc ctttccatct 3060
cctgatgtat cccctggaac tccgccatcg catcgttaac aagggactga agatcgattt 3120
cttcctgtat atccttcatg gcatcactga ccagtgcgtt cagcttgtca ggctcttttt 3180
caaaatcaaa cgttctgccg gaatgggatt cctgctcagg ctctgacttc agctcctgtt 3240
ttagcgtcag agtatccctc tcgctgaggg cttcccgtaa cgaggtagtc acgtcaatta 3300
cgctgtcacg ttcatcacgg gactgctgca cctgcctttc agcctccctg cgctcaagaa 3360
tggcctgtag ctgctcagta tcgaatcgct gaacctgacc cgcgcccaga tgccgctcag 3420
gctcacggtc aatgccctgc gccttcaggg aacgggaatc aacccggtca gcgtgctgat 3480
accgttcaag gtgcttattc tggaggtcag cccagcgtct ccctctgggc aacaaggtat 3540
tctttgcgtt cggtcggtgt ttccccgaaa cgtgcctttt ttgcgccacc gcgtccggct 3600
ctttggtgtt agcccgttta aaatactgct cagggtcacg gtgaataccg tcattaatgc 3660
gttcagagaa catgatatgg gcgtggggct gctcgccacc ggctatcgct gctttcggat 3720
tatggatagc gaactgatag gcatggcggt cgccaatttc ctgttggaca aaatcgcgga 3780
caagctcaag acgttgttcg ggttttaact cacgcggcag ggcaatctcg atttcacggt 3840
aggtacagcc gttggcacgt tcagacgtgt cagcggcttt ccagaactcg gacggtttat 3900
gcgctgccca cgccggcata ttgccggact ccttgtgctc aaggtcggag tctttttcac 3960
gggcatactt tccctcacgc gcaatataat cggcatgagg agaggcactg ccttttccgc 4020
cggtttttac gctgagatga taggatgcca tcgtgtttta tcccgctgaa gggcgcacgt 4080
ttctgaacga agtgaagaaa gtctaagtgc gccctgataa ataaaagagt tatcagggat 4140
tgtagtggga tttgacctcc tctgccatca tgagcgtaat cattccgtta gcattcagga 4200
ggtaaacagc atgaataaaa gcgaaaaaac aggaacaatg ggcagcagaa agagtgcagt 4260
atattcgcgg cttaaagtcg ccgaatgagc aacagaaact tatgctgata ctgacggata 4320
aagcagataa aacagcacag gatatcaaaa cgctgtccct gctgatgaag gctgaacagg 4380
cagcagagaa agcgcaggaa gccagagcga aagtcatgaa cctgatacag gcagaaaagc 4440
gagccgaagc cagagccgcc cgtaaagccc gtgaccatgc tctgtaccag tctgccggat 4500
tgcttatcct ggcgggtctg gttgacagta agacgggtaa gcctgttgat gataccgctg 4560
ccttactggg tgcattagcc agtctgaatg acctgtcacg ggataatccg aagtggtcag 4620
actggaaaat cagagggcag gaactgctga acagcaaaaa gtcagatagc accacatagc 4680
agacccgcca taaaacgccc tgagaagccc gtgacgggct tttcttgtat tatgggtagt 4740
ttccttgcat gaatccataa aaggcgcctg tagtgccatt tacccccatt cactgccaga 4800
gccgtgagcg cagcgaactg aatgtcacga aaaagacagc gactcaggtg cctgatggtc 4860
ggagacaaaa ggaatattca gcgatttgcc cgagcttgcg agggtgctac ttaagccttt 4920
agggttttaa ggtctgtttt gtagaggagc aaacagcgtt tgcgacatcc ttttgtaata 4980
ctgcggaact gactaaagta gtgagttata cacagggctg ggatctattc tttttatctt 5040
tttttattct ttctttattc tataaattat aaccacttga atataaacaa aaaaaacaca 5100
caaaggtcta gcggaattta cagagggtct agcagaattt acaagttttc cagcaaaggt 5160
ctagcagaat ttacagatac ccacaactca aaggaaaagg actagtaatt atcattgact 5220
agcccatctc aattggtata gtgattaaaa tcacctagac caattgagat gtatgtctga 5280
attagttgtt ttcaaagcaa atgaactagc gattagtcgc tatgacttaa cggagcatga 5340
aaccaagcta attttatgct gtgtggcact actcaacccc acgattgaaa accctacaag 5400
gaaagaacgg acggtatcgt tcacttataa ccaatacgct cagatgatga acatcagtag 5460
ggaaaatgct tatggtgtat tagctaaagc aaccagagag ctgatgacga gaactgtgga 5520
aatcaggaat cctttggtta aaggctttga gattttccag tggacaaact atgccaagtt 5580
ctcaagcgaa aaattagaat tagtttttag tgaagagata ttgccttatc ttttccagtt 5640
aaaaaaattc ataaaatata atctggaaca tgttaagtct tttgaaaaca aatactctat 5700
gaggatttat gagtggttat taaaagaact aacacaaaag aaaactcaca aggcaaatat 5760
agagattagc cttgatgaat ttaagttcat gttaatgctt gaaaataact accatgagtt 5820
taaaaggctt aaccaatggg ttttgaaacc aataagtaaa gatttaaaca cttacagcaa 5880
tatgaaattg gtggttgata agcgaggccg cccgactgat acgttgattt tccaagttga 5940
actagataga caaatggatc tcgtaaccga acttgagaac aaccagataa aaatgaatgg 6000
tgacaaaata ccaacaacca ttacatcaga ttcctaccta cgtaacggac taagaaaaac 6060
actacacgat gctttaactg caaaaattca gctcaccagt tttgaggcaa aatttttgag 6120
tgacatgcaa agtaagcatg atctcaatgg ttcgttctca tggctcacgc aaaaacaacg 6180
aaccacacta gagaacatac tggctaaata cggaaggatc tgaggttctt atggctcttg 6240
tatctatcag tgaagcatca agactaacaa acaaaagtag aacaactgtt caccgttaga 6300
tatcaaaggg aaaactgtcc atatgcacag atgaaaacgg tgtaaaaaag atagatacat 6360
cagagctttt acgagttttt ggtgcattta aagctgttca ccatgaacag atcgacaatg 6420
taacagatga acagcatgta acacctaata gaacaggtga aaccagtaaa acaaagcaac 6480
tagaacatga aattgaacac ctgagacaac ttgttacagc tcaacagtca cacatagaca 6540
gcctgaaaca ggcgatgctg cttatcgaat caaagctgcc gacaacacgg gagccagtga 6600
cgcctcccgt ggggaaaaaa tcatggcaat tctggaagaa atagcgcttt cagccggcaa 6660
acctgaagcc ggatctgcga ttctgataac aaactagcaa caccagaaca gcccgtttgc 6720
gggcagcaaa acccgtactt ttggacgttc cggcggtttt ttgtggcgag tggtgttcgg 6780
gcggtgcgcg caagatccat tatgttaaac gggcgagttt acatctcaaa accgcccgct 6840
taacaccatc agaaatcctc agcgcgattt taagcaccaa cccccccccg taacacccaa 6900
atccatactg aaagtggctt tgttgaataa atcgaacttt tgctgagttg aaggatcaga 6960
tcacgcatcc tcccgacaac acagaccatt ccgtggcaaa gcaaaagttc agaatcacca 7020
actggtccac ctacaacaaa gctctcatca accgtggctc cctcactttc tggctggatg 7080
atgaggcgat tcaggcctgg tatgagtcgg caacaccttc atcacgagga aggccccagc 7140
gctattctga tctcgccatc accaccgttc tggtgattaa acgcgtattc cggctgaccc 7200
tgcgggctgc gcagggtttt attgattcca tttttgccct gatgaacgtt ccgttgcgct 7260
gcccggatta caccagtgtc agtaagcggg caaagtcggt taatgtcagt ttcaaaacgt 7320
ccacccgggg tgaaatcgca cacctggtga ttgattccac cgggctgaag gtctttggtg 7380
aaggcgaatg gaaagtcaga aagcacggca aagagcgccg tcgtatctgg cgaaagttgc 7440
atcttgctgt tgacagcaac acacatgaag ttgtctgtgc agacctgtcg ctgaataacg 7500
tcacggactc agaagccttc ccgggcctta tccggcagac tcacagaaaa atcagggcag 7560
ccgcggcaga cggggcttac gatacccggc tctgtcacga tgaactgcgc cgcaaaaaaa 7620
tcagcgcgct tattcctccc cgaaaaggtg cgggttactg gcccggtgaa tatgcagacc 7680
gtaaccgtgc agtggctaat cagcgaatga ccgggagtaa tgcgcggtgg aaatggacaa 7740
cagattacaa ccgtcgctcg atagcggaaa cggcgatgta ccgggtaaaa cagctgttcg 7800
ggggttcact gacgctgcgt gactacgatg gtcaggttgc ggaggctatg gccctggtac 7860
gagcgctgaa caaaatgacg aaagcaggta tgcctgaaag cgtgcgtatt gcctgaaaac 7920
acaacccgct acgggggaga cttacccgaa atctgattta ttcaacaaag ccgggtgtgg 7980
tgaactacaa agcagacccg ttgaggttat cagttcgatg cacaatcagc agcgcataaa 8040
atatgcacaa gaacaggagc acccttcgca ttaagctgtg gtggtaacaa gtagtgccgg 8100
gctaccatca gcgagcatga tgcgctccca cagcattcgc cttggcagta tggaagttcc 8160
tcgctccagt tcgggccggt atccacctcg cacctggtgt ttaaacggat ttaaattgca 8220
ggggcagtga gcgcaacgca attaatgtaa gttagctcac tcattaggca ccccaggctt 8280
gacactttat gcttccggct cgtataatgt gtggaattgt gagcggataa caataacaat 8340
ttaaatcagg atctaggaac caaggagagt ggcatatgag cactgcaatt cacgatgaac 8400
acttggatcg ccgcattgaa gaactgattg caaacgatcc gcaattcgct gcggcacgcc 8460
cggacccggc gattaccgca gcgaccgagg ccccaggtct gcgtctgccg cagatcatcc 8520
gtacggtcct ggacggttat gccgatcgtc cggcgctggc gcaacgcgtg gttgaattcg 8580
ttaccgacgc caaaaccggt cgtaccaccg cagagttgct gccacgtttt gaaaccatca 8640
cgtacggtga gctgggtgag cgtgtgagcg cactgggtcg cgcatgggcc ggtgacgccg 8700
tgcgccctgg cgaccgcgtt tgcgtcctgg gtttcaactc cgtggattac gcgacgattg 8760
acatcgcgct gggtaccatc ggtgcggtga gcgtgccgct gcaaaccagc gcagcgatta 8820
gcagcctgca gccgattgtg gcggaaaccg agccgagcct gattgcgagc agcgtgaatc 8880
agctgccgga cgccgtcgag ctgattctgg caggtgacca tgttccgggt aagctggtcg 8940
tatttgatta tcaaccgcaa gttgatgacc agcgtgaggc ggttgaggca gcggctgcgc 9000
gcctggcaga cagcggcgtc gcagtggaag cgctggcgga tgttctgcgt cgtggtaaag 9060
acctgccggc agttgaaccg ccagcgtccg atgaggatag cctggctctg ttgatttaca 9120
cctctggcag caccggtgcg ccgaagggcg cgatgtaccc gcagagcaac gtgggtaaaa 9180
tgtggcgtcg cggtagcaag aactggtttg gtgagagcgc cgcaagcatc accctgaatt 9240
tcatgccgat gagccatgtt atgggtcgcg gtattttgta tggcacgttg ggtaacggcg 9300
gcaccgcgta tttcgcggct cgtagcgatt tgtctacgct gctggaagat ctggagttgg 9360
tgcgccctac ggagatgaat tttgtcccgc gtatttggga aacgctgtat ggtgagttcc 9420
agcgtcaggt ggagcgccgt ctggcggacg gtgacgctgg cccggaagcc cgtgaaaccg 9480
tcgaggcggc agtgctggaa gagcagcgtc aatatctgct gggtggccgt tttatcttcg 9540
ccatgaccgg ctctgcgccg acgagcccgg agctgaaagc atgggcggag agcttgctgc 9600
aaatgcacct gatggacggt tacggcagca ccgaggcggg catggtgctg ttcgacggtg 9660
agatccagcg tccgccggtc atcgattaca aactggtgga tgtcccggat ctgggttact 9720
tttcgacgga ccgtccgcat ccgcgtggtg agctgttgct gcgtaccgag aacatgttcc 9780
cgggttacta taaacgcgcg gaaaccaccg caaatgtttt cgacgaggat ggttactacc 9840
gcaccggcga tgtgttcgcg gagatcgcac cggaccgttt ggtttacgtc gatcgtcgca 9900
ataacgtctt gaaactggcc cagggtgagt ttgtaaccct ggccaaactg gaagcggttt 9960
tcggtaactc gccgctgatc cgccagatct acgtgtacgg caacagcagc cagccgtacc 10020
tgctggcggt ggtggtcccg accgaagagg cgctggccga taatgacttg gaaagcttga 10080
agccgaaaat cgcagactcc ctgcaaaaag ttgcaaaaga aactggcctg cagtcctatg 10140
aggttccgcg tgatttcatc atcgagacta cgccgttcac cctggagaac ggtttgctga 10200
ccggcattcg taagctggcg tggcctaagc tgaaggccca ctatggcgat cgtctggagc 10260
aaatgtacgc tgagctggct gcgggtcagg cgaatgagct ggcggagctg cgccgtagcg 10320
gtgcggcagc gccggtggcc cagaccgtgt cccgcgcagc agcggcgctg ctgggcgctg 10380
ctgctggtga tctgagcgcg gatgcccact ttactgacct gggtggtgat tccctgtccg 10440
cactgacctt tggtaacctg ctgcgtgaga tttttgacgt cgatgttccg gttggcgtta 10500
ttgtctcccc tgctaacgac ttggcgggca ttgccgcata cattgaagca gagcgtcaag 10560
gtagcaaacg tccgacgttc gcagcagtgc atggtcgcgg tgccacgatg gtgcatgcga 10620
gcgacttgac tctggataag tttctggacg aagccaccct ggcagcagcc ccaagcctgc 10680
cgaaaccggc gacggaagtt cgtacggttc tgctgaccgg tgcgacgggt tttctgggcc 10740
gttatctggc actggactgg ctggagcgca tggatatggt tgacggcaaa gttattgcgc 10800
tggtccgtgc gcgcaccgat gaagaagcgc gtgcgcgttt ggacaagacg tttgacagcg 10860
gcgacccgaa actgctggct cactaccaac gtctggcagc ggaccacttg gaagttatcg 10920
cgggtgacaa aggtgaggct aatctgggct tggacccgca aacctggcag cgtctggccg 10980
aagaagtgga cgtgatcgtt gacccggcag cgctggtgaa ccatgtcctg ccgtactctg 11040
aattgtttgg cccgaacgca ctgggcacgg ccgaactgat ccgcatcgcg ctgacctcta 11100
agcaaaaacc gtatacgtat gttagcacca ttggtgttgg cgatcagatt caaccgggtg 11160
agttcgttga aaatgctgat atccgtcaga tcagcgcgac gcgtgagatc aacgatggct 11220
acgctaatgg ttatggcaat agcaagtggg cgggtgaggt tctgctgcgc gaggcgcacg 11280
acctgtgtgg cctgccggtc accgtgttcc gttgcgatat gatcctggct gacaccacgt 11340
acgctggcca gctgaatctg ccggacatgt ttacccgttt gatgctgagc ctggtcgcga 11400
ccggtatcgc accgggcagc ttttacgaac tggacacgga tggcaatcgc cagcgtgtcc 11460
actatgatgg tctgccagtc gagttcattg ctgcggccat cagcaccctg ggcacccaaa 11520
tcacggatag cgacaccggt ttccagactt atcatgtaat gaatccatac gatgacggta 11580
ttggtctgga tgagtacatt gactggctga ttgaggctgg ttacagcatc gaacgtattg 11640
cggactatag cgaatggctg cgtcgcttcg aaacgtcgct gcgtgccctg cctgaccgtc 11700
aacgccagta ttcgctgctg ccgctgttgc acaattatca aaagccggag aagccgatta 11760
acggtagcat ggcgccaact gatgtctttc gtgcagccgt tcaagaagcg aagatcggtc 11820
cggataagga cattccgcac gtctctgcgc cggtgattgt caagtacatc accgacctgg 11880
agctgctggg tttgctgtaa taagtttaaa cagagaagga gttctatcat gattgaaacc 11940
atcttaccag ccggcgtcga atcagcagag ttacttgagt accctgaaga tctgaaggcg 12000
catccggctg aagagcatct gatcgcaaag agcgtagaga agcgtcgtcg cgacttcatt 12060
ggcgcacgtc attgcgcccg tctggcactg gcggagctgg gtgaaccgcc ggttgcgatt 12120
ggcaagggtg aacgtggtgc gccgatttgg ccgcgtggtg tcgtgggctc tctgacccat 12180
tgcgatggct atcgcgcagc ggcggttgct cacaaaatgc gttttcgcag catcggcatc 12240
gacgccgaac cgcacgcgac cctgccggaa ggtgtcctgg attcggttag cctgccgcct 12300
gagcgtgagt ggctgaaaac caccgacagc gcactgcacc tggaccgttt gctgttttgt 12360
gcgaaagaag caacttacaa agcgtggtgg ccgctgacgg cacgttggct gggtttcgaa 12420
gaagcgcaca ttaccttcga aatcgaggat ggtagcgccg actctggtaa tggcacgttt 12480
cacagcgaac tgctggtgcc gggtcagacc aatgacggtg gtaccccgct gctgtctttc 12540
gacggtcgct ggctgatcgc tgatggcttc atcctgacgg cgattgcata cgcatgataa 12600
attaacctag gctgctgcca ccgctgagca ataactagca taaccccttg gggcctctaa 12660
acgggtcttg aggggttttt tgctgaaacc tcaggcattt gagaagccct cgagtgaccc 12720
cagccgcccc tcatgccaac cgagcccatt aagcgcagag tcggccgcaa ctatctcggg 12780
gacgcataaa cacgcagcga tttaccaagg agttcggcta ggtcaatccg caattccctt 12840
tgcctggccg gagatgccgc gagcaaacaa tgtgtccggt cgctaccaga tggactttgt 12900
gggcggagga ttgcaccaga cgcttcagcg cagcgtcgta cgatgaatcg gaaggcccgg 12960
taagcaattg aagaaccgct gaccacctcc catccgacaa tgcaagggtg ccccgctccc 13020
agcgcgacac ggttgcctga tccacaccca ttaattcagc taggtgactt tgcttcatat 13080
gacgaagcaa ccgcgccctc cgcacctgcc gccccctgtc attcgtcaac attcttcagc 13140
acctcaatgt cgttcgtagt gagcctcatt ttttcaagac cgccgatgat gagagccagg 13200
cctcgctcga atgccgcgtc cggaccgcct tcgtagacga ttttcatcgc gctctgtagg 13260
cgcgccggca tcgtagacgc tgaggtggtc aactgatctt cgccccgctc ctcggcgtct 13320
gcctcgctag cttgctgctc aagaacagcg ccgacggtga agtagctgat tgccatcaac 13380
gcataggtcg cgtcacctgc cgaaaagcca gcatcgcaaa ggaagcgaag ctgcgcgtcg 13440
gctttttcca tctgcggcgc ggctggccgc gtcccggcat gaatacgcgc gccatcgcga 13500
taagcgagca acgcccgtcg aaaactgcat gcattgccct tcaggaacga acgccagtcg 13560
tcgtcatccc ttggcgtcga atgcgtgtga tttatcgtca gcatggcttc ggcaagtgcg 13620
tcgagcaacg cacgcttgtt cttgaaatgc cagtagagcg ctggctgttg caccccgagg 13680
cgctcagcca gtcggcgcgt cgttagacct tccatgccca cgtcgttaag cagttcgagc 13740
gcggttcgga tcacggcctc gcgttggagc ttgttcattc gcgaa 13785
<210> 20
<211> 13731
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 载体
<400> 20
ttctcatgtt tgacagctta tcatcgataa gctttaatgc ggtagtttat cacagttaaa 60
ttgctaacgc agtcaggcac cgtgtatgaa atctaacaat gcgctcatcg tcatcctcgg 120
caccgtcacc ctggatgctg taggcatagg cttggttatg ccggtactgc cgggcctctt 180
gcgggatatc gtccattccg acagcatcgc cagtcactat ggcgtgctgc tagcgctata 240
tgcgttgatg caatttctat gcgcacccgt tctcggagca ctgtccgacc gctttggccg 300
ccgcccagtc ctgctcgctt cgctacttgg agccactatc gactacgcga tcatggcgac 360
cacacccgtc ctgtggatcc tctacgccgg acgcatcgtg gccggcatca ccggcgccac 420
aggtgcggtt gctggcgcct atatcgccga catcaccgat ggggaagatc gggctcgcca 480
cttcgggctc atgagcgctt gtttcggcgt gggtatggtg gcaggccccg tggccggggg 540
actgttgggc gccatctcct tgcatgcacc attccttgcg gcggcggtgc tcaacggcct 600
caacctacta ctgggctgct tcctaatgca ggagtcgcat aagggagagc gtcgaccgat 660
gcccttgaga gccttcaacc cagtcagctc cttccggtgg gcgcggggca tgactatcgt 720
cgccgcactt atgactgtct tctttatcat gcaactcgta ggacaggtgc cggcagcgct 780
ctgggtcatt ttcggcgagg accgctttcg ctggagcgcg acgatgatcg gcctgtcgct 840
tgcggtattc ggaatcttgc acgccctcgc tcaagccttc gtcactggtc ccgccaccaa 900
acgtttcggc gagaagcagg ccattatcgc cggcatggcg gccgacgcgc tgggctacgt 960
cttgctggcg ttcgcgacgc gaggctggat ggccttcccc attatgattc ttctcgcttc 1020
cggcggcatc gggatgcccg cgttgcaggc catgctgtcc aggcaggtag atgacgacca 1080
tcagggacag cttcaaggat cgctcgcggc tcttaccagc ctaacttcga tcactggacc 1140
gctgatcgtc acggcgattt atgccgcctc ggcgagcaca tggaacgggt tggcatggat 1200
tgtaggcgcc gccctatacc ttgtctgcct ccccgcgttg cgtcgcggtg catggagccg 1260
ggccacctcg acctgaatgg aagccggcgg cacctcgcta acggattcac cactccaaga 1320
attggagcca atcaattctt gcggagaact gtgaatgcgc aaaccaaccc ttggcagaac 1380
atatccatcg cgtccgccat ctccagcagc cgcacgcggc gcatctcggg cagcgttggg 1440
tcctggccac gggtgcgcat gatcgtgctc ctgtcgttga ggacccggct aggctggcgg 1500
ggttgcctta ctggttagca gaatgaatca ccgatacgcg agcgaacgtg aagcgactgc 1560
tgctgcaaaa cgtctgcgac ctgagcaaca acatgaatgg tcttcggttt ccgtgtttcg 1620
taaagtctgg aaacgcggaa gtcccctacg tgctgctgaa gttgcccgca acagagagtg 1680
gaaccaaccg gtgataccac gatactatga ctgagagtca acgccatgag cggcctcatt 1740
tcttattctg agttacaaca gtccgcaccg ctgccggtag ctacttgact atccggctgc 1800
actagccctg cgtcagatgg ctctgatcca aggcaaactg ccaaaatatc tgctggcacc 1860
ggaagtcagc gccctgcacc attatgttcc ggatctgcat cgcaggatgc tgctggctac 1920
cctgtggaac acctacatct gtattaacga agcgctggca ttgaccctga gtgatttttc 1980
tctggtgccg ccctatccct ttgtgcagct tgccacgctc aaaggggttt gaggtccaac 2040
cgtacgaaaa cgtacggtaa gaggaaaatt atcgtctgaa aaatcgatta gtagacaaga 2100
aagtccgtta agtgccaatt ttcgattaaa aagacaccgt tttgatggcg ttttccaatg 2160
tacattatgt ttcgatatat cagacagtta cttcactaac gtacgttttc gttctattgg 2220
ccttcagacc ccatatcctt aatgtccttt atttgctggg gttatcagat ccccccgaca 2280
cgtttaatta atgctttctc cgccggagat cgacgcacag gcttctgtgt ctatgatgtt 2340
atttcttaat aatcatccag gtattctctt tatcaccata cgtagtgcga gtgtccacct 2400
taacgcaggg ctttccgtca cagcgcgata tgtcagccag cggggctttc ttttgccaga 2460
ccgcttccat cctctgcatt tcagcaatct ggctataccc gtcattcata aaccacgtaa 2520
atgccgtcac gcaggaagcc aggacgaaga atatcgtcag tacaagataa atcgcggatt 2580
tccacgtata gcgtgacatc tcacgacgca tttcatggat catcgctttc gccgtatcgg 2640
cagcctgatt cagcgcttct gtcgccggtt tctgctgtgc taatccggct tgtttcagtt 2700
ctttctcaac ctgagtgagc gcggaactca ccgatttcct gacggtgtca gtcatattac 2760
cggacgcgct gtccagctca cgaatgaccc tgctcagcgt ttcactttgc tgctgtaatt 2820
gtgatgaggc ggcctgaaac tgttctgtca gagaagtaac acgcttttcc agcgcctgat 2880
gatgcccgat aagggcggca atttgtttaa tttcgtcgct catacaaaat cctgcctatc 2940
gtgagaatga ccagccttta tccggcttct gtcgtatctg ttcggcgagt cgctgtcgtt 3000
ctttctcctg ctgacgctgt ttttccgcca gacgttcgcg ctctctctgc ctttccatct 3060
cctgatgtat cccctggaac tccgccatcg catcgttaac aagggactga agatcgattt 3120
cttcctgtat atccttcatg gcatcactga ccagtgcgtt cagcttgtca ggctcttttt 3180
caaaatcaaa cgttctgccg gaatgggatt cctgctcagg ctctgacttc agctcctgtt 3240
ttagcgtcag agtatccctc tcgctgaggg cttcccgtaa cgaggtagtc acgtcaatta 3300
cgctgtcacg ttcatcacgg gactgctgca cctgcctttc agcctccctg cgctcaagaa 3360
tggcctgtag ctgctcagta tcgaatcgct gaacctgacc cgcgcccaga tgccgctcag 3420
gctcacggtc aatgccctgc gccttcaggg aacgggaatc aacccggtca gcgtgctgat 3480
accgttcaag gtgcttattc tggaggtcag cccagcgtct ccctctgggc aacaaggtat 3540
tctttgcgtt cggtcggtgt ttccccgaaa cgtgcctttt ttgcgccacc gcgtccggct 3600
ctttggtgtt agcccgttta aaatactgct cagggtcacg gtgaataccg tcattaatgc 3660
gttcagagaa catgatatgg gcgtggggct gctcgccacc ggctatcgct gctttcggat 3720
tatggatagc gaactgatag gcatggcggt cgccaatttc ctgttggaca aaatcgcgga 3780
caagctcaag acgttgttcg ggttttaact cacgcggcag ggcaatctcg atttcacggt 3840
aggtacagcc gttggcacgt tcagacgtgt cagcggcttt ccagaactcg gacggtttat 3900
gcgctgccca cgccggcata ttgccggact ccttgtgctc aaggtcggag tctttttcac 3960
gggcatactt tccctcacgc gcaatataat cggcatgagg agaggcactg ccttttccgc 4020
cggtttttac gctgagatga taggatgcca tcgtgtttta tcccgctgaa gggcgcacgt 4080
ttctgaacga agtgaagaaa gtctaagtgc gccctgataa ataaaagagt tatcagggat 4140
tgtagtggga tttgacctcc tctgccatca tgagcgtaat cattccgtta gcattcagga 4200
ggtaaacagc atgaataaaa gcgaaaaaac aggaacaatg ggcagcagaa agagtgcagt 4260
atattcgcgg cttaaagtcg ccgaatgagc aacagaaact tatgctgata ctgacggata 4320
aagcagataa aacagcacag gatatcaaaa cgctgtccct gctgatgaag gctgaacagg 4380
cagcagagaa agcgcaggaa gccagagcga aagtcatgaa cctgatacag gcagaaaagc 4440
gagccgaagc cagagccgcc cgtaaagccc gtgaccatgc tctgtaccag tctgccggat 4500
tgcttatcct ggcgggtctg gttgacagta agacgggtaa gcctgttgat gataccgctg 4560
ccttactggg tgcattagcc agtctgaatg acctgtcacg ggataatccg aagtggtcag 4620
actggaaaat cagagggcag gaactgctga acagcaaaaa gtcagatagc accacatagc 4680
agacccgcca taaaacgccc tgagaagccc gtgacgggct tttcttgtat tatgggtagt 4740
ttccttgcat gaatccataa aaggcgcctg tagtgccatt tacccccatt cactgccaga 4800
gccgtgagcg cagcgaactg aatgtcacga aaaagacagc gactcaggtg cctgatggtc 4860
ggagacaaaa ggaatattca gcgatttgcc cgagcttgcg agggtgctac ttaagccttt 4920
agggttttaa ggtctgtttt gtagaggagc aaacagcgtt tgcgacatcc ttttgtaata 4980
ctgcggaact gactaaagta gtgagttata cacagggctg ggatctattc tttttatctt 5040
tttttattct ttctttattc tataaattat aaccacttga atataaacaa aaaaaacaca 5100
caaaggtcta gcggaattta cagagggtct agcagaattt acaagttttc cagcaaaggt 5160
ctagcagaat ttacagatac ccacaactca aaggaaaagg actagtaatt atcattgact 5220
agcccatctc aattggtata gtgattaaaa tcacctagac caattgagat gtatgtctga 5280
attagttgtt ttcaaagcaa atgaactagc gattagtcgc tatgacttaa cggagcatga 5340
aaccaagcta attttatgct gtgtggcact actcaacccc acgattgaaa accctacaag 5400
gaaagaacgg acggtatcgt tcacttataa ccaatacgct cagatgatga acatcagtag 5460
ggaaaatgct tatggtgtat tagctaaagc aaccagagag ctgatgacga gaactgtgga 5520
aatcaggaat cctttggtta aaggctttga gattttccag tggacaaact atgccaagtt 5580
ctcaagcgaa aaattagaat tagtttttag tgaagagata ttgccttatc ttttccagtt 5640
aaaaaaattc ataaaatata atctggaaca tgttaagtct tttgaaaaca aatactctat 5700
gaggatttat gagtggttat taaaagaact aacacaaaag aaaactcaca aggcaaatat 5760
agagattagc cttgatgaat ttaagttcat gttaatgctt gaaaataact accatgagtt 5820
taaaaggctt aaccaatggg ttttgaaacc aataagtaaa gatttaaaca cttacagcaa 5880
tatgaaattg gtggttgata agcgaggccg cccgactgat acgttgattt tccaagttga 5940
actagataga caaatggatc tcgtaaccga acttgagaac aaccagataa aaatgaatgg 6000
tgacaaaata ccaacaacca ttacatcaga ttcctaccta cgtaacggac taagaaaaac 6060
actacacgat gctttaactg caaaaattca gctcaccagt tttgaggcaa aatttttgag 6120
tgacatgcaa agtaagcatg atctcaatgg ttcgttctca tggctcacgc aaaaacaacg 6180
aaccacacta gagaacatac tggctaaata cggaaggatc tgaggttctt atggctcttg 6240
tatctatcag tgaagcatca agactaacaa acaaaagtag aacaactgtt caccgttaga 6300
tatcaaaggg aaaactgtcc atatgcacag atgaaaacgg tgtaaaaaag atagatacat 6360
cagagctttt acgagttttt ggtgcattta aagctgttca ccatgaacag atcgacaatg 6420
taacagatga acagcatgta acacctaata gaacaggtga aaccagtaaa acaaagcaac 6480
tagaacatga aattgaacac ctgagacaac ttgttacagc tcaacagtca cacatagaca 6540
gcctgaaaca ggcgatgctg cttatcgaat caaagctgcc gacaacacgg gagccagtga 6600
cgcctcccgt ggggaaaaaa tcatggcaat tctggaagaa atagcgcttt cagccggcaa 6660
acctgaagcc ggatctgcga ttctgataac aaactagcaa caccagaaca gcccgtttgc 6720
gggcagcaaa acccgtactt ttggacgttc cggcggtttt ttgtggcgag tggtgttcgg 6780
gcggtgcgcg caagatccat tatgttaaac gggcgagttt acatctcaaa accgcccgct 6840
taacaccatc agaaatcctc agcgcgattt taagcaccaa cccccccccg taacacccaa 6900
atccatactg aaagtggctt tgttgaataa atcgaacttt tgctgagttg aaggatcaga 6960
tcacgcatcc tcccgacaac acagaccatt ccgtggcaaa gcaaaagttc agaatcacca 7020
actggtccac ctacaacaaa gctctcatca accgtggctc cctcactttc tggctggatg 7080
atgaggcgat tcaggcctgg tatgagtcgg caacaccttc atcacgagga aggccccagc 7140
gctattctga tctcgccatc accaccgttc tggtgattaa acgcgtattc cggctgaccc 7200
tgcgggctgc gcagggtttt attgattcca tttttgccct gatgaacgtt ccgttgcgct 7260
gcccggatta caccagtgtc agtaagcggg caaagtcggt taatgtcagt ttcaaaacgt 7320
ccacccgggg tgaaatcgca cacctggtga ttgattccac cgggctgaag gtctttggtg 7380
aaggcgaatg gaaagtcaga aagcacggca aagagcgccg tcgtatctgg cgaaagttgc 7440
atcttgctgt tgacagcaac acacatgaag ttgtctgtgc agacctgtcg ctgaataacg 7500
tcacggactc agaagccttc ccgggcctta tccggcagac tcacagaaaa atcagggcag 7560
ccgcggcaga cggggcttac gatacccggc tctgtcacga tgaactgcgc cgcaaaaaaa 7620
tcagcgcgct tattcctccc cgaaaaggtg cgggttactg gcccggtgaa tatgcagacc 7680
gtaaccgtgc agtggctaat cagcgaatga ccgggagtaa tgcgcggtgg aaatggacaa 7740
cagattacaa ccgtcgctcg atagcggaaa cggcgatgta ccgggtaaaa cagctgttcg 7800
ggggttcact gacgctgcgt gactacgatg gtcaggttgc ggaggctatg gccctggtac 7860
gagcgctgaa caaaatgacg aaagcaggta tgcctgaaag cgtgcgtatt gcctgaaaac 7920
acaacccgct acgggggaga cttacccgaa atctgattta ttcaacaaag ccgggtgtgg 7980
tgaactacaa agcagacccg ttgaggttat cagttcgatg cacaatcagc agcgcataaa 8040
atatgcacaa gaacaggagc acccttcgca ttaagctgtg gtggtaacaa gtagtgccgg 8100
gctaccatca gcgagcatga tgcgctccca cagcattcgc cttggcagta tggaagttcc 8160
tcgctccagt tcgggccggt atccacctcg cacctggtgt ttaaacggat ttaaattgca 8220
ggggcagtga gcgcaacgca attaatgtaa gttagctcac tcattaggca ccccaggctt 8280
gacactttat gcttccggct cgtataatgt gtggaattgt gagcggataa caataacaat 8340
ttaaatcagg atctaggaac caaggagagt ggcatatgac gaccgaaacc agagaagatc 8400
gcttacagag acgcattgcc cacctgtacg aggcagacag ccaatttgcg gctgcgcgtc 8460
ctagcgaggc ggtgaatacc gccgtggcgg aaccagagct gcgtctgccg gctgtcgtca 8520
aaggtgtctt tgcgggctat gcggatcgtc cggcgctggg tcaacgcgcc gtggagtatg 8580
ttaccgacgc ggacggtcgt acctctgccc aattgctgcc gcgttttgac acgatcacgt 8640
accgtcaact gggtgaccgc gtccaagcag ttacgaacgc gtggcacaac catccggtca 8700
aacctggcga ccgtgtagcg atcctgggct ttactagcgt tgattacacc accgttgata 8760
cggccctgat cgaattgggc gctgtgagcg tcccgctgca gacttctgca ccggtcacca 8820
cgctgcgccc gatcgtcgca gagacggagc cgaccgtgat tgcggcttct attgatttcc 8880
tggatgatgc ggtggaactg gtcaaaagcg gtccggcacc gcgtcgtctg gttgtgttcg 8940
actaccgccc acgtgtcgac gcccagcgcg aggcatttga agcagccaaa gcggcactgg 9000
cgggtactga cgttgtagtt gagccgctgg cggatgtcct ggaccgcggt cgtagcttgg 9060
cggatgcgcc gctgtacacc ccgggtcagc cggacccgct gaccatgctg atttacacga 9120
gcggttccac gggcaccccg aagggtgcga tgtatccgga gagcaaagtc gctaacatgt 9180
ggcaactggc gacgaaggcg acgtgggatg agaaccaagc ggcgctgccg gccatcaccc 9240
tgaactttat gccgatgagc catgtgatgg gccgtggcat cctgattggt accctgagca 9300
gcggtggcac cgcatacttc gcggctcgca gcgatctgag caccttcctg gaagatctgg 9360
cattggttcg tccgacccag ttgagctttg ttccgcgtat ttgggatatg ctgttccagg 9420
aatatcagag ccgtctggac cgttctggtg cgccagagga cgaggtgctg gccgaggtcc 9480
gccaagacct gctgggcggt cgtttcgtga gcgcgatgac gggttctgcg ccgattagcg 9540
cggaaatgaa gaattgggtg gaacgtctgc tggacatgca tctgctggaa ggctatggtt 9600
ccaccgaagc aggctccgtg tttgtggacg gtcatattca acgtccgccg gttattgact 9660
ataaactggt tgatgtcccg gacctgggtt atttcttgac ggaccgtccg catccgcgtg 9720
gcgagctgct ggtgaagagc gagcaaatgt tcccaggtta ctacaagcgt ccggagatta 9780
ccgctgaaat gttcgatgag gatggctact accgcaccgg cgacatcgtg gcggaattgg 9840
gtccggatca agttgagtat ctggaccgtc gtaataacgt tctgaaattg tctcagggtg 9900
agtttgtgac ggttagcaaa ctggaagcgg tgttcggcga cagcccgctg gttcgtcaga 9960
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cgtcgctgag caagcaggcg atcggcgatt cgttgcagga cgcggcacgc gctgcaggtc 10080
tgcaatccta cgagattccg cgtgacttta tcgtcgaaac gacccctttt agcctggaga 10140
acggcctgct gacgggcatt cgcaaactgg ctcgcccaaa cctgaaggcc tactacggcg 10200
atcgtctgga gcagctgtac accgagctgg cagagggcca agcgaatgag ttgagcgagc 10260
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ttctgcctta tagcgaactg tttggtccga atgctctggg tactgccgag ctgatccgta 11040
ttgcgctgac cacccgtatc aaaccgttcg cgtacgtgag cacgatcggc gtgggtggtg 11100
gtatcgagcc gggtaagttc gtcgaggcgg gtgacattcg tgcgatctct cctgtccgtc 11160
gcgttgacga tggttacgca aatggctacg gcaacagcaa atgggccggt gaagtcctgc 11220
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tggccgacac cacctacgca ggtcagttga atctgcctga catgttcacg cgtatgatgt 11340
tttccctggt tgcgaccggt gtggcgccga agagctttaa tcaactggat gcagacggca 11400
accgccagcg tagccactat gacggtctgc cggtcgagtt tattgcagaa gctatcagca 11460
ccctgggcgc acacgttcag gacggcttcg aaacttatca cgttatgaat ccgcacgacg 11520
acggtattgg tatggatgag ttcgttgatt ggctgatcga agccggttac ccgattcagc 11580
gcgtcgagga ctatcaggag tggctggcgc gcttcgaaac caccctgcgt gccctgccgg 11640
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cggttaacgg cgccatggca ccgaccgacg ttttccgtac ggccgtccaa gacgcgaaaa 11760
ttggtccgga caaggatatt ccgcacgtca gccgtgaagt tattgtgaag tacatcagcg 11820
atttgaaact gctgggtttg ctgtaataag tttaaacaga gaaggagttc tatcatgatt 11880
gaaaccatct taccagccgg cgtcgaatca gcagagttac ttgagtaccc tgaagatctg 11940
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ttcattggcg cacgtcattg cgcccgtctg gcactggcgg agctgggtga accgccggtt 12060
gcgattggca agggtgaacg tggtgcgccg atttggccgc gtggtgtcgt gggctctctg 12120
acccattgcg atggctatcg cgcagcggcg gttgctcaca aaatgcgttt tcgcagcatc 12180
ggcatcgacg ccgaaccgca cgcgaccctg ccggaaggtg tcctggattc ggttagcctg 12240
ccgcctgagc gtgagtggct gaaaaccacc gacagcgcac tgcacctgga ccgtttgctg 12300
ttttgtgcga aagaagcaac ttacaaagcg tggtggccgc tgacggcacg ttggctgggt 12360
ttcgaagaag cgcacattac cttcgaaatc gaggatggta gcgccgactc tggtaatggc 12420
acgtttcaca gcgaactgct ggtgccgggt cagaccaatg acggtggtac cccgctgctg 12480
tctttcgacg gtcgctggct gatcgctgat ggcttcatcc tgacggcgat tgcatacgca 12540
tgataaatta acctaggctg ctgccaccgc tgagcaataa ctagcataac cccttggggc 12600
ctctaaacgg gtcttgaggg gttttttgct gaaacctcag gcatttgaga agccctcgag 12660
tgaccccagc cgcccctcat gccaaccgag cccattaagc gcagagtcgg ccgcaactat 12720
ctcggggacg cataaacacg cagcgattta ccaaggagtt cggctaggtc aatccgcaat 12780
tccctttgcc tggccggaga tgccgcgagc aaacaatgtg tccggtcgct accagatgga 12840
ctttgtgggc ggaggattgc accagacgct tcagcgcagc gtcgtacgat gaatcggaag 12900
gcccggtaag caattgaaga accgctgacc acctcccatc cgacaatgca agggtgcccc 12960
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ttcagcacct caatgtcgtt cgtagtgagc ctcatttttt caagaccgcc gatgatgaga 13140
gccaggcctc gctcgaatgc cgcgtccgga ccgccttcgt agacgatttt catcgcgctc 13200
tgtaggcgcg ccggcatcgt agacgctgag gtggtcaact gatcttcgcc ccgctcctcg 13260
gcgtctgcct cgctagcttg ctgctcaaga acagcgccga cggtgaagta gctgattgcc 13320
atcaacgcat aggtcgcgtc acctgccgaa aagccagcat cgcaaaggaa gcgaagctgc 13380
gcgtcggctt tttccatctg cggcgcggct ggccgcgtcc cggcatgaat acgcgcgcca 13440
tcgcgataag cgagcaacgc ccgtcgaaaa ctgcatgcat tgcccttcag gaacgaacgc 13500
cagtcgtcgt catcccttgg cgtcgaatgc gtgtgattta tcgtcagcat ggcttcggca 13560
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tcgagcgcgg ttcggatcac ggcctcgcgt tggagcttgt tcattcgcga a 13731
<210> 21
<211> 13782
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 载体
<400> 21
ttctcatgtt tgacagctta tcatcgataa gctttaatgc ggtagtttat cacagttaaa 60
ttgctaacgc agtcaggcac cgtgtatgaa atctaacaat gcgctcatcg tcatcctcgg 120
caccgtcacc ctggatgctg taggcatagg cttggttatg ccggtactgc cgggcctctt 180
gcgggatatc gtccattccg acagcatcgc cagtcactat ggcgtgctgc tagcgctata 240
tgcgttgatg caatttctat gcgcacccgt tctcggagca ctgtccgacc gctttggccg 300
ccgcccagtc ctgctcgctt cgctacttgg agccactatc gactacgcga tcatggcgac 360
cacacccgtc ctgtggatcc tctacgccgg acgcatcgtg gccggcatca ccggcgccac 420
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cttcgggctc atgagcgctt gtttcggcgt gggtatggtg gcaggccccg tggccggggg 540
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caacctacta ctgggctgct tcctaatgca ggagtcgcat aagggagagc gtcgaccgat 660
gcccttgaga gccttcaacc cagtcagctc cttccggtgg gcgcggggca tgactatcgt 720
cgccgcactt atgactgtct tctttatcat gcaactcgta ggacaggtgc cggcagcgct 780
ctgggtcatt ttcggcgagg accgctttcg ctggagcgcg acgatgatcg gcctgtcgct 840
tgcggtattc ggaatcttgc acgccctcgc tcaagccttc gtcactggtc ccgccaccaa 900
acgtttcggc gagaagcagg ccattatcgc cggcatggcg gccgacgcgc tgggctacgt 960
cttgctggcg ttcgcgacgc gaggctggat ggccttcccc attatgattc ttctcgcttc 1020
cggcggcatc gggatgcccg cgttgcaggc catgctgtcc aggcaggtag atgacgacca 1080
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gctgatcgtc acggcgattt atgccgcctc ggcgagcaca tggaacgggt tggcatggat 1200
tgtaggcgcc gccctatacc ttgtctgcct ccccgcgttg cgtcgcggtg catggagccg 1260
ggccacctcg acctgaatgg aagccggcgg cacctcgcta acggattcac cactccaaga 1320
attggagcca atcaattctt gcggagaact gtgaatgcgc aaaccaaccc ttggcagaac 1380
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tcctggccac gggtgcgcat gatcgtgctc ctgtcgttga ggacccggct aggctggcgg 1500
ggttgcctta ctggttagca gaatgaatca ccgatacgcg agcgaacgtg aagcgactgc 1560
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taaagtctgg aaacgcggaa gtcccctacg tgctgctgaa gttgcccgca acagagagtg 1680
gaaccaaccg gtgataccac gatactatga ctgagagtca acgccatgag cggcctcatt 1740
tcttattctg agttacaaca gtccgcaccg ctgccggtag ctacttgact atccggctgc 1800
actagccctg cgtcagatgg ctctgatcca aggcaaactg ccaaaatatc tgctggcacc 1860
ggaagtcagc gccctgcacc attatgttcc ggatctgcat cgcaggatgc tgctggctac 1920
cctgtggaac acctacatct gtattaacga agcgctggca ttgaccctga gtgatttttc 1980
tctggtgccg ccctatccct ttgtgcagct tgccacgctc aaaggggttt gaggtccaac 2040
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tacattatgt ttcgatatat cagacagtta cttcactaac gtacgttttc gttctattgg 2220
ccttcagacc ccatatcctt aatgtccttt atttgctggg gttatcagat ccccccgaca 2280
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taacgcaggg ctttccgtca cagcgcgata tgtcagccag cggggctttc ttttgccaga 2460
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ctttctcaac ctgagtgagc gcggaactca ccgatttcct gacggtgtca gtcatattac 2760
cggacgcgct gtccagctca cgaatgaccc tgctcagcgt ttcactttgc tgctgtaatt 2820
gtgatgaggc ggcctgaaac tgttctgtca gagaagtaac acgcttttcc agcgcctgat 2880
gatgcccgat aagggcggca atttgtttaa tttcgtcgct catacaaaat cctgcctatc 2940
gtgagaatga ccagccttta tccggcttct gtcgtatctg ttcggcgagt cgctgtcgtt 3000
ctttctcctg ctgacgctgt ttttccgcca gacgttcgcg ctctctctgc ctttccatct 3060
cctgatgtat cccctggaac tccgccatcg catcgttaac aagggactga agatcgattt 3120
cttcctgtat atccttcatg gcatcactga ccagtgcgtt cagcttgtca ggctcttttt 3180
caaaatcaaa cgttctgccg gaatgggatt cctgctcagg ctctgacttc agctcctgtt 3240
ttagcgtcag agtatccctc tcgctgaggg cttcccgtaa cgaggtagtc acgtcaatta 3300
cgctgtcacg ttcatcacgg gactgctgca cctgcctttc agcctccctg cgctcaagaa 3360
tggcctgtag ctgctcagta tcgaatcgct gaacctgacc cgcgcccaga tgccgctcag 3420
gctcacggtc aatgccctgc gccttcaggg aacgggaatc aacccggtca gcgtgctgat 3480
accgttcaag gtgcttattc tggaggtcag cccagcgtct ccctctgggc aacaaggtat 3540
tctttgcgtt cggtcggtgt ttccccgaaa cgtgcctttt ttgcgccacc gcgtccggct 3600
ctttggtgtt agcccgttta aaatactgct cagggtcacg gtgaataccg tcattaatgc 3660
gttcagagaa catgatatgg gcgtggggct gctcgccacc ggctatcgct gctttcggat 3720
tatggatagc gaactgatag gcatggcggt cgccaatttc ctgttggaca aaatcgcgga 3780
caagctcaag acgttgttcg ggttttaact cacgcggcag ggcaatctcg atttcacggt 3840
aggtacagcc gttggcacgt tcagacgtgt cagcggcttt ccagaactcg gacggtttat 3900
gcgctgccca cgccggcata ttgccggact ccttgtgctc aaggtcggag tctttttcac 3960
gggcatactt tccctcacgc gcaatataat cggcatgagg agaggcactg ccttttccgc 4020
cggtttttac gctgagatga taggatgcca tcgtgtttta tcccgctgaa gggcgcacgt 4080
ttctgaacga agtgaagaaa gtctaagtgc gccctgataa ataaaagagt tatcagggat 4140
tgtagtggga tttgacctcc tctgccatca tgagcgtaat cattccgtta gcattcagga 4200
ggtaaacagc atgaataaaa gcgaaaaaac aggaacaatg ggcagcagaa agagtgcagt 4260
atattcgcgg cttaaagtcg ccgaatgagc aacagaaact tatgctgata ctgacggata 4320
aagcagataa aacagcacag gatatcaaaa cgctgtccct gctgatgaag gctgaacagg 4380
cagcagagaa agcgcaggaa gccagagcga aagtcatgaa cctgatacag gcagaaaagc 4440
gagccgaagc cagagccgcc cgtaaagccc gtgaccatgc tctgtaccag tctgccggat 4500
tgcttatcct ggcgggtctg gttgacagta agacgggtaa gcctgttgat gataccgctg 4560
ccttactggg tgcattagcc agtctgaatg acctgtcacg ggataatccg aagtggtcag 4620
actggaaaat cagagggcag gaactgctga acagcaaaaa gtcagatagc accacatagc 4680
agacccgcca taaaacgccc tgagaagccc gtgacgggct tttcttgtat tatgggtagt 4740
ttccttgcat gaatccataa aaggcgcctg tagtgccatt tacccccatt cactgccaga 4800
gccgtgagcg cagcgaactg aatgtcacga aaaagacagc gactcaggtg cctgatggtc 4860
ggagacaaaa ggaatattca gcgatttgcc cgagcttgcg agggtgctac ttaagccttt 4920
agggttttaa ggtctgtttt gtagaggagc aaacagcgtt tgcgacatcc ttttgtaata 4980
ctgcggaact gactaaagta gtgagttata cacagggctg ggatctattc tttttatctt 5040
tttttattct ttctttattc tataaattat aaccacttga atataaacaa aaaaaacaca 5100
caaaggtcta gcggaattta cagagggtct agcagaattt acaagttttc cagcaaaggt 5160
ctagcagaat ttacagatac ccacaactca aaggaaaagg actagtaatt atcattgact 5220
agcccatctc aattggtata gtgattaaaa tcacctagac caattgagat gtatgtctga 5280
attagttgtt ttcaaagcaa atgaactagc gattagtcgc tatgacttaa cggagcatga 5340
aaccaagcta attttatgct gtgtggcact actcaacccc acgattgaaa accctacaag 5400
gaaagaacgg acggtatcgt tcacttataa ccaatacgct cagatgatga acatcagtag 5460
ggaaaatgct tatggtgtat tagctaaagc aaccagagag ctgatgacga gaactgtgga 5520
aatcaggaat cctttggtta aaggctttga gattttccag tggacaaact atgccaagtt 5580
ctcaagcgaa aaattagaat tagtttttag tgaagagata ttgccttatc ttttccagtt 5640
aaaaaaattc ataaaatata atctggaaca tgttaagtct tttgaaaaca aatactctat 5700
gaggatttat gagtggttat taaaagaact aacacaaaag aaaactcaca aggcaaatat 5760
agagattagc cttgatgaat ttaagttcat gttaatgctt gaaaataact accatgagtt 5820
taaaaggctt aaccaatggg ttttgaaacc aataagtaaa gatttaaaca cttacagcaa 5880
tatgaaattg gtggttgata agcgaggccg cccgactgat acgttgattt tccaagttga 5940
actagataga caaatggatc tcgtaaccga acttgagaac aaccagataa aaatgaatgg 6000
tgacaaaata ccaacaacca ttacatcaga ttcctaccta cgtaacggac taagaaaaac 6060
actacacgat gctttaactg caaaaattca gctcaccagt tttgaggcaa aatttttgag 6120
tgacatgcaa agtaagcatg atctcaatgg ttcgttctca tggctcacgc aaaaacaacg 6180
aaccacacta gagaacatac tggctaaata cggaaggatc tgaggttctt atggctcttg 6240
tatctatcag tgaagcatca agactaacaa acaaaagtag aacaactgtt caccgttaga 6300
tatcaaaggg aaaactgtcc atatgcacag atgaaaacgg tgtaaaaaag atagatacat 6360
cagagctttt acgagttttt ggtgcattta aagctgttca ccatgaacag atcgacaatg 6420
taacagatga acagcatgta acacctaata gaacaggtga aaccagtaaa acaaagcaac 6480
tagaacatga aattgaacac ctgagacaac ttgttacagc tcaacagtca cacatagaca 6540
gcctgaaaca ggcgatgctg cttatcgaat caaagctgcc gacaacacgg gagccagtga 6600
cgcctcccgt ggggaaaaaa tcatggcaat tctggaagaa atagcgcttt cagccggcaa 6660
acctgaagcc ggatctgcga ttctgataac aaactagcaa caccagaaca gcccgtttgc 6720
gggcagcaaa acccgtactt ttggacgttc cggcggtttt ttgtggcgag tggtgttcgg 6780
gcggtgcgcg caagatccat tatgttaaac gggcgagttt acatctcaaa accgcccgct 6840
taacaccatc agaaatcctc agcgcgattt taagcaccaa cccccccccg taacacccaa 6900
atccatactg aaagtggctt tgttgaataa atcgaacttt tgctgagttg aaggatcaga 6960
tcacgcatcc tcccgacaac acagaccatt ccgtggcaaa gcaaaagttc agaatcacca 7020
actggtccac ctacaacaaa gctctcatca accgtggctc cctcactttc tggctggatg 7080
atgaggcgat tcaggcctgg tatgagtcgg caacaccttc atcacgagga aggccccagc 7140
gctattctga tctcgccatc accaccgttc tggtgattaa acgcgtattc cggctgaccc 7200
tgcgggctgc gcagggtttt attgattcca tttttgccct gatgaacgtt ccgttgcgct 7260
gcccggatta caccagtgtc agtaagcggg caaagtcggt taatgtcagt ttcaaaacgt 7320
ccacccgggg tgaaatcgca cacctggtga ttgattccac cgggctgaag gtctttggtg 7380
aaggcgaatg gaaagtcaga aagcacggca aagagcgccg tcgtatctgg cgaaagttgc 7440
atcttgctgt tgacagcaac acacatgaag ttgtctgtgc agacctgtcg ctgaataacg 7500
tcacggactc agaagccttc ccgggcctta tccggcagac tcacagaaaa atcagggcag 7560
ccgcggcaga cggggcttac gatacccggc tctgtcacga tgaactgcgc cgcaaaaaaa 7620
tcagcgcgct tattcctccc cgaaaaggtg cgggttactg gcccggtgaa tatgcagacc 7680
gtaaccgtgc agtggctaat cagcgaatga ccgggagtaa tgcgcggtgg aaatggacaa 7740
cagattacaa ccgtcgctcg atagcggaaa cggcgatgta ccgggtaaaa cagctgttcg 7800
ggggttcact gacgctgcgt gactacgatg gtcaggttgc ggaggctatg gccctggtac 7860
gagcgctgaa caaaatgacg aaagcaggta tgcctgaaag cgtgcgtatt gcctgaaaac 7920
acaacccgct acgggggaga cttacccgaa atctgattta ttcaacaaag ccgggtgtgg 7980
tgaactacaa agcagacccg ttgaggttat cagttcgatg cacaatcagc agcgcataaa 8040
atatgcacaa gaacaggagc acccttcgca ttaagctgtg gtggtaacaa gtagtgccgg 8100
gctaccatca gcgagcatga tgcgctccca cagcattcgc cttggcagta tggaagttcc 8160
tcgctccagt tcgggccggt atccacctcg cacctggtgt ttaaacggat ttaaattgca 8220
ggggcagtga gcgcaacgca attaatgtaa gttagctcac tcattaggca ccccaggctt 8280
gacactttat gcttccggct cgtataatgt gtggaattgt gagcggataa caataacaat 8340
ttaaatcagg atctaggaac caaggagagt ggcatatgag cactgcaacg catgatgaga 8400
gactggatag acgcgtacat gaactgatcg caaccgaccc gcaatttgcg gcagcacagc 8460
cggacccggc tattacggcg gcattggagc aaccgggtct gcgtctgccg cagatcattc 8520
gtaccgtcct ggacggctat gcggatcgtc cggcgttggg tcaacgcgtc gttgagtttg 8580
ttaccgacgc gaaaaccggt cgcacgagcg cgcagctgct gccgcgtttt gaaaccatta 8640
cctactccga agtggcacaa cgcgttagcg cgctgggtcg tgcgctgtcc gacgacgcag 8700
ttcatccggg tgatcgtgtg tgtgtcctgg gttttaacag cgttgattac gcgaccatcg 8760
atatggcact gggtgcgatt ggcgcggtgt cggttccgct gcaaacctct gcagcgatta 8820
gctccctgca gcctattgtc gcggaaaccg aaccgacgct gatcgcgagc agcgttaatc 8880
agctgagcga tgccgtgcag ctgatcaccg gtgcagagca ggcccctacc cgtttggtgg 8940
tgttcgatta tcacccgcaa gtcgatgacc agcgcgaggc tgttcaggac gcggctgcgc 9000
gcttgtccag caccggcgtt gccgtgcaaa ccctggccga gctgctggag cgcggtaaag 9060
acctgccggc tgtggcggag ccgccagcgg atgaggacag cctggcgttg ctgatttaca 9120
ccagcggcag cacgggtgct ccgaaaggtg cgatgtaccc acagagcaat gttggtaaga 9180
tgtggcgtcg tggctctaaa aactggttcg gcgaaagcgc tgctagcatt accctgaact 9240
tcatgccgat gagccatgtg atgggccgta gcatcttgta cggcaccctg ggtaacggcg 9300
gtacggccta tttcgctgct cgtagcgatc tgagcaccct gctggaagat ctggagctgg 9360
tgcgtccgac ggaactgaat tttgttccac gcatttggga aaccttgtat ggtgagttcc 9420
aacgtcaagt ggaacgccgc ctgagcgagg ctggcgacgc gggtgagcgt cgtgctgtgg 9480
aagcggaagt gctggcggag cagcgccaat atctgctggg cggtcgtttc acctttgcga 9540
tgacgggcag cgcccctatt tcgcctgagc tgcgcaactg ggtcgagtcc ctgctggaga 9600
tgcatctgat ggatggttac ggtagcacgg aagcgggcat ggtcctgttt gacggtgaga 9660
tccaacgtcc gccggttatt gattacaagt tggtggacgt tccggatttg ggttacttta 9720
gcaccgatcg cccgcacccg cgtggtgagc tgctgctgcg tacggagaat atgttcccgg 9780
gttactataa gcgtgccgaa actaccgcgg gtgtttttga tgaggacggt tactaccgca 9840
cgggcgatgt gtttgccgaa atcgcaccgg atcgcctggt gtatgttgac cgtcgcaaca 9900
acgtattgaa actggcacaa ggcgagttcg tcacgttggc caagctggaa gcggtgtttg 9960
gtaattcccc gctgattcgt cagatctatg tctatggtaa cagcgcgcaa ccgtatctgc 10020
tggccgttgt cgttccgact gaagaagccc tggccagcgg tgatcctgag acgctgaagc 10080
cgaaaatcgc agatagcctg cagcaagtgg cgaaagaagc aggtctgcag agctacgaag 10140
ttccgcgcga ctttatcatc gagacgacgc cgtttagcct ggaaaacggc ctgttgacgg 10200
gcatccgcaa actggcttgg ccgaaactga agcaacacta cggcgagcgt ctggagcaaa 10260
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cgagcgattt gagcccagat gcgcacttca ccgacctggg tggtgacagc ctgtctgctc 10440
tgaccttcgg taacctgctg cgtgagatct tcgacgtcga tgtcccggtc ggcgtgatcg 10500
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agccggcgac cgaggttcgc accgttctgc tgaccggtgc tactggtttc ctgggtcgtt 10740
acctggctct ggagtggctg gagcgtatgg atatggttga cggtaaggtc attgcattgg 10800
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gtgacaaggg tgaggccaat ctgggtctgg gtcaggacgt gtggcaacgt ctggcggaca 10980
ccgttgatgt cattgtggac ccggcagcgc tggtgaacca cgtcctgccg tactccgaac 11040
tgttcggtcc gaatgcgttg ggcactgcag agctgatccg tctggcactg accagcaagc 11100
agaaaccgta tacttacgtt agcaccatcg gcgtcggcga ccaaatcgaa ccgggtaaat 11160
tcgttgaaaa tgcagatatt cgtcaaatgt cggcgacccg tgcgattaat gacagctacg 11220
cgaacggcta tggcaactcc aagtgggcgg gtgaggttct gctgcgcgag gcgcatgatc 11280
tgtgcggtct gccggtagcg gtgttccgtt gcgacatgat cctggcagac acgacctacg 11340
caggtcagtt gaatctgccg gatatgttca cgcgcctgat gttgagcctg gtagcgacgg 11400
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ccgatagcga taccggcttc cagacgtacc acgtcatgaa tccttacgac gacggcgtcg 11580
gcctggacga gtacgtcgac tggctggttg atgcgggtta ttcgattgag cgtattgccg 11640
actactctga atggttgcgt cgcttcgaaa ccagcctgcg tgcgctgccg gatcgtcaac 11700
gccagtatag cctgctgcca ctgttgcaca actaccgtac cccggagaaa ccgattaacg 11760
gcagcatcgc cccgacggat gttttccgtg cggcagtcca ggaagcgaag atcggtccag 11820
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tgttgggcct gctgtaataa gtttaaacag agaaggagtt ctatcatgat tgaaaccatc 11940
ttaccagccg gcgtcgaatc agcagagtta cttgagtacc ctgaagatct gaaggcgcat 12000
ccggctgaag agcatctgat cgcaaagagc gtagagaagc gtcgtcgcga cttcattggc 12060
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aagggtgaac gtggtgcgcc gatttggccg cgtggtgtcg tgggctctct gacccattgc 12180
gatggctatc gcgcagcggc ggttgctcac aaaatgcgtt ttcgcagcat cggcatcgac 12240
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cgtgagtggc tgaaaaccac cgacagcgca ctgcacctgg accgtttgct gttttgtgcg 12360
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gcgcacatta ccttcgaaat cgaggatggt agcgccgact ctggtaatgg cacgtttcac 12480
agcgaactgc tggtgccggg tcagaccaat gacggtggta ccccgctgct gtctttcgac 12540
ggtcgctggc tgatcgctga tggcttcatc ctgacggcga ttgcatacgc atgataaatt 12600
aacctaggct gctgccaccg ctgagcaata actagcataa ccccttgggg cctctaaacg 12660
ggtcttgagg ggttttttgc tgaaacctca ggcatttgag aagccctcga gtgaccccag 12720
ccgcccctca tgccaaccga gcccattaag cgcagagtcg gccgcaacta tctcggggac 12780
gcataaacac gcagcgattt accaaggagt tcggctaggt caatccgcaa ttccctttgc 12840
ctggccggag atgccgcgag caaacaatgt gtccggtcgc taccagatgg actttgtggg 12900
cggaggattg caccagacgc ttcagcgcag cgtcgtacga tgaatcggaa ggcccggtaa 12960
gcaattgaag aaccgctgac cacctcccat ccgacaatgc aagggtgccc cgctcccagc 13020
gcgacacggt tgcctgatcc acacccatta attcagctag gtgactttgc ttcatatgac 13080
gaagcaaccg cgccctccgc acctgccgcc ccctgtcatt cgtcaacatt cttcagcacc 13140
tcaatgtcgt tcgtagtgag cctcattttt tcaagaccgc cgatgatgag agccaggcct 13200
cgctcgaatg ccgcgtccgg accgccttcg tagacgattt tcatcgcgct ctgtaggcgc 13260
gccggcatcg tagacgctga ggtggtcaac tgatcttcgc cccgctcctc ggcgtctgcc 13320
tcgctagctt gctgctcaag aacagcgccg acggtgaagt agctgattgc catcaacgca 13380
taggtcgcgt cacctgccga aaagccagca tcgcaaagga agcgaagctg cgcgtcggct 13440
ttttccatct gcggcgcggc tggccgcgtc ccggcatgaa tacgcgcgcc atcgcgataa 13500
gcgagcaacg cccgtcgaaa actgcatgca ttgcccttca ggaacgaacg ccagtcgtcg 13560
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tcagccagtc ggcgcgtcgt tagaccttcc atgcccacgt cgttaagcag ttcgagcgcg 13740
gttcggatca cggcctcgcg ttggagcttg ttcattcgcg aa 13782
<210> 22
<211> 13695
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 载体
<400> 22
ttctcatgtt tgacagctta tcatcgataa gctttaatgc ggtagtttat cacagttaaa 60
ttgctaacgc agtcaggcac cgtgtatgaa atctaacaat gcgctcatcg tcatcctcgg 120
caccgtcacc ctggatgctg taggcatagg cttggttatg ccggtactgc cgggcctctt 180
gcgggatatc gtccattccg acagcatcgc cagtcactat ggcgtgctgc tagcgctata 240
tgcgttgatg caatttctat gcgcacccgt tctcggagca ctgtccgacc gctttggccg 300
ccgcccagtc ctgctcgctt cgctacttgg agccactatc gactacgcga tcatggcgac 360
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cttcgggctc atgagcgctt gtttcggcgt gggtatggtg gcaggccccg tggccggggg 540
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caacctacta ctgggctgct tcctaatgca ggagtcgcat aagggagagc gtcgaccgat 660
gcccttgaga gccttcaacc cagtcagctc cttccggtgg gcgcggggca tgactatcgt 720
cgccgcactt atgactgtct tctttatcat gcaactcgta ggacaggtgc cggcagcgct 780
ctgggtcatt ttcggcgagg accgctttcg ctggagcgcg acgatgatcg gcctgtcgct 840
tgcggtattc ggaatcttgc acgccctcgc tcaagccttc gtcactggtc ccgccaccaa 900
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ggccacctcg acctgaatgg aagccggcgg cacctcgcta acggattcac cactccaaga 1320
attggagcca atcaattctt gcggagaact gtgaatgcgc aaaccaaccc ttggcagaac 1380
atatccatcg cgtccgccat ctccagcagc cgcacgcggc gcatctcggg cagcgttggg 1440
tcctggccac gggtgcgcat gatcgtgctc ctgtcgttga ggacccggct aggctggcgg 1500
ggttgcctta ctggttagca gaatgaatca ccgatacgcg agcgaacgtg aagcgactgc 1560
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gaaccaaccg gtgataccac gatactatga ctgagagtca acgccatgag cggcctcatt 1740
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ggaagtcagc gccctgcacc attatgttcc ggatctgcat cgcaggatgc tgctggctac 1920
cctgtggaac acctacatct gtattaacga agcgctggca ttgaccctga gtgatttttc 1980
tctggtgccg ccctatccct ttgtgcagct tgccacgctc aaaggggttt gaggtccaac 2040
cgtacgaaaa cgtacggtaa gaggaaaatt atcgtctgaa aaatcgatta gtagacaaga 2100
aagtccgtta agtgccaatt ttcgattaaa aagacaccgt tttgatggcg ttttccaatg 2160
tacattatgt ttcgatatat cagacagtta cttcactaac gtacgttttc gttctattgg 2220
ccttcagacc ccatatcctt aatgtccttt atttgctggg gttatcagat ccccccgaca 2280
cgtttaatta atgctttctc cgccggagat cgacgcacag gcttctgtgt ctatgatgtt 2340
atttcttaat aatcatccag gtattctctt tatcaccata cgtagtgcga gtgtccacct 2400
taacgcaggg ctttccgtca cagcgcgata tgtcagccag cggggctttc ttttgccaga 2460
ccgcttccat cctctgcatt tcagcaatct ggctataccc gtcattcata aaccacgtaa 2520
atgccgtcac gcaggaagcc aggacgaaga atatcgtcag tacaagataa atcgcggatt 2580
tccacgtata gcgtgacatc tcacgacgca tttcatggat catcgctttc gccgtatcgg 2640
cagcctgatt cagcgcttct gtcgccggtt tctgctgtgc taatccggct tgtttcagtt 2700
ctttctcaac ctgagtgagc gcggaactca ccgatttcct gacggtgtca gtcatattac 2760
cggacgcgct gtccagctca cgaatgaccc tgctcagcgt ttcactttgc tgctgtaatt 2820
gtgatgaggc ggcctgaaac tgttctgtca gagaagtaac acgcttttcc agcgcctgat 2880
gatgcccgat aagggcggca atttgtttaa tttcgtcgct catacaaaat cctgcctatc 2940
gtgagaatga ccagccttta tccggcttct gtcgtatctg ttcggcgagt cgctgtcgtt 3000
ctttctcctg ctgacgctgt ttttccgcca gacgttcgcg ctctctctgc ctttccatct 3060
cctgatgtat cccctggaac tccgccatcg catcgttaac aagggactga agatcgattt 3120
cttcctgtat atccttcatg gcatcactga ccagtgcgtt cagcttgtca ggctcttttt 3180
caaaatcaaa cgttctgccg gaatgggatt cctgctcagg ctctgacttc agctcctgtt 3240
ttagcgtcag agtatccctc tcgctgaggg cttcccgtaa cgaggtagtc acgtcaatta 3300
cgctgtcacg ttcatcacgg gactgctgca cctgcctttc agcctccctg cgctcaagaa 3360
tggcctgtag ctgctcagta tcgaatcgct gaacctgacc cgcgcccaga tgccgctcag 3420
gctcacggtc aatgccctgc gccttcaggg aacgggaatc aacccggtca gcgtgctgat 3480
accgttcaag gtgcttattc tggaggtcag cccagcgtct ccctctgggc aacaaggtat 3540
tctttgcgtt cggtcggtgt ttccccgaaa cgtgcctttt ttgcgccacc gcgtccggct 3600
ctttggtgtt agcccgttta aaatactgct cagggtcacg gtgaataccg tcattaatgc 3660
gttcagagaa catgatatgg gcgtggggct gctcgccacc ggctatcgct gctttcggat 3720
tatggatagc gaactgatag gcatggcggt cgccaatttc ctgttggaca aaatcgcgga 3780
caagctcaag acgttgttcg ggttttaact cacgcggcag ggcaatctcg atttcacggt 3840
aggtacagcc gttggcacgt tcagacgtgt cagcggcttt ccagaactcg gacggtttat 3900
gcgctgccca cgccggcata ttgccggact ccttgtgctc aaggtcggag tctttttcac 3960
gggcatactt tccctcacgc gcaatataat cggcatgagg agaggcactg ccttttccgc 4020
cggtttttac gctgagatga taggatgcca tcgtgtttta tcccgctgaa gggcgcacgt 4080
ttctgaacga agtgaagaaa gtctaagtgc gccctgataa ataaaagagt tatcagggat 4140
tgtagtggga tttgacctcc tctgccatca tgagcgtaat cattccgtta gcattcagga 4200
ggtaaacagc atgaataaaa gcgaaaaaac aggaacaatg ggcagcagaa agagtgcagt 4260
atattcgcgg cttaaagtcg ccgaatgagc aacagaaact tatgctgata ctgacggata 4320
aagcagataa aacagcacag gatatcaaaa cgctgtccct gctgatgaag gctgaacagg 4380
cagcagagaa agcgcaggaa gccagagcga aagtcatgaa cctgatacag gcagaaaagc 4440
gagccgaagc cagagccgcc cgtaaagccc gtgaccatgc tctgtaccag tctgccggat 4500
tgcttatcct ggcgggtctg gttgacagta agacgggtaa gcctgttgat gataccgctg 4560
ccttactggg tgcattagcc agtctgaatg acctgtcacg ggataatccg aagtggtcag 4620
actggaaaat cagagggcag gaactgctga acagcaaaaa gtcagatagc accacatagc 4680
agacccgcca taaaacgccc tgagaagccc gtgacgggct tttcttgtat tatgggtagt 4740
ttccttgcat gaatccataa aaggcgcctg tagtgccatt tacccccatt cactgccaga 4800
gccgtgagcg cagcgaactg aatgtcacga aaaagacagc gactcaggtg cctgatggtc 4860
ggagacaaaa ggaatattca gcgatttgcc cgagcttgcg agggtgctac ttaagccttt 4920
agggttttaa ggtctgtttt gtagaggagc aaacagcgtt tgcgacatcc ttttgtaata 4980
ctgcggaact gactaaagta gtgagttata cacagggctg ggatctattc tttttatctt 5040
tttttattct ttctttattc tataaattat aaccacttga atataaacaa aaaaaacaca 5100
caaaggtcta gcggaattta cagagggtct agcagaattt acaagttttc cagcaaaggt 5160
ctagcagaat ttacagatac ccacaactca aaggaaaagg actagtaatt atcattgact 5220
agcccatctc aattggtata gtgattaaaa tcacctagac caattgagat gtatgtctga 5280
attagttgtt ttcaaagcaa atgaactagc gattagtcgc tatgacttaa cggagcatga 5340
aaccaagcta attttatgct gtgtggcact actcaacccc acgattgaaa accctacaag 5400
gaaagaacgg acggtatcgt tcacttataa ccaatacgct cagatgatga acatcagtag 5460
ggaaaatgct tatggtgtat tagctaaagc aaccagagag ctgatgacga gaactgtgga 5520
aatcaggaat cctttggtta aaggctttga gattttccag tggacaaact atgccaagtt 5580
ctcaagcgaa aaattagaat tagtttttag tgaagagata ttgccttatc ttttccagtt 5640
aaaaaaattc ataaaatata atctggaaca tgttaagtct tttgaaaaca aatactctat 5700
gaggatttat gagtggttat taaaagaact aacacaaaag aaaactcaca aggcaaatat 5760
agagattagc cttgatgaat ttaagttcat gttaatgctt gaaaataact accatgagtt 5820
taaaaggctt aaccaatggg ttttgaaacc aataagtaaa gatttaaaca cttacagcaa 5880
tatgaaattg gtggttgata agcgaggccg cccgactgat acgttgattt tccaagttga 5940
actagataga caaatggatc tcgtaaccga acttgagaac aaccagataa aaatgaatgg 6000
tgacaaaata ccaacaacca ttacatcaga ttcctaccta cgtaacggac taagaaaaac 6060
actacacgat gctttaactg caaaaattca gctcaccagt tttgaggcaa aatttttgag 6120
tgacatgcaa agtaagcatg atctcaatgg ttcgttctca tggctcacgc aaaaacaacg 6180
aaccacacta gagaacatac tggctaaata cggaaggatc tgaggttctt atggctcttg 6240
tatctatcag tgaagcatca agactaacaa acaaaagtag aacaactgtt caccgttaga 6300
tatcaaaggg aaaactgtcc atatgcacag atgaaaacgg tgtaaaaaag atagatacat 6360
cagagctttt acgagttttt ggtgcattta aagctgttca ccatgaacag atcgacaatg 6420
taacagatga acagcatgta acacctaata gaacaggtga aaccagtaaa acaaagcaac 6480
tagaacatga aattgaacac ctgagacaac ttgttacagc tcaacagtca cacatagaca 6540
gcctgaaaca ggcgatgctg cttatcgaat caaagctgcc gacaacacgg gagccagtga 6600
cgcctcccgt ggggaaaaaa tcatggcaat tctggaagaa atagcgcttt cagccggcaa 6660
acctgaagcc ggatctgcga ttctgataac aaactagcaa caccagaaca gcccgtttgc 6720
gggcagcaaa acccgtactt ttggacgttc cggcggtttt ttgtggcgag tggtgttcgg 6780
gcggtgcgcg caagatccat tatgttaaac gggcgagttt acatctcaaa accgcccgct 6840
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atccatactg aaagtggctt tgttgaataa atcgaacttt tgctgagttg aaggatcaga 6960
tcacgcatcc tcccgacaac acagaccatt ccgtggcaaa gcaaaagttc agaatcacca 7020
actggtccac ctacaacaaa gctctcatca accgtggctc cctcactttc tggctggatg 7080
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gctattctga tctcgccatc accaccgttc tggtgattaa acgcgtattc cggctgaccc 7200
tgcgggctgc gcagggtttt attgattcca tttttgccct gatgaacgtt ccgttgcgct 7260
gcccggatta caccagtgtc agtaagcggg caaagtcggt taatgtcagt ttcaaaacgt 7320
ccacccgggg tgaaatcgca cacctggtga ttgattccac cgggctgaag gtctttggtg 7380
aaggcgaatg gaaagtcaga aagcacggca aagagcgccg tcgtatctgg cgaaagttgc 7440
atcttgctgt tgacagcaac acacatgaag ttgtctgtgc agacctgtcg ctgaataacg 7500
tcacggactc agaagccttc ccgggcctta tccggcagac tcacagaaaa atcagggcag 7560
ccgcggcaga cggggcttac gatacccggc tctgtcacga tgaactgcgc cgcaaaaaaa 7620
tcagcgcgct tattcctccc cgaaaaggtg cgggttactg gcccggtgaa tatgcagacc 7680
gtaaccgtgc agtggctaat cagcgaatga ccgggagtaa tgcgcggtgg aaatggacaa 7740
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ggggttcact gacgctgcgt gactacgatg gtcaggttgc ggaggctatg gccctggtac 7860
gagcgctgaa caaaatgacg aaagcaggta tgcctgaaag cgtgcgtatt gcctgaaaac 7920
acaacccgct acgggggaga cttacccgaa atctgattta ttcaacaaag ccgggtgtgg 7980
tgaactacaa agcagacccg ttgaggttat cagttcgatg cacaatcagc agcgcataaa 8040
atatgcacaa gaacaggagc acccttcgca ttaagctgtg gtggtaacaa gtagtgccgg 8100
gctaccatca gcgagcatga tgcgctccca cagcattcgc cttggcagta tggaagttcc 8160
tcgctccagt tcgggccggt atccacctcg cacctggtgt ttaaacggat ttaaattgca 8220
ggggcagtga gcgcaacgca attaatgtaa gttagctcac tcattaggca ccccaggctt 8280
gacactttat gcttccggct cgtataatgt gtggaattgt gagcggataa caataacaat 8340
ttaaatcagg atctaggaac caaggagagt ggcatatgaa tgaaagcagc gcagaccaga 8400
gcagcggtaa tgtatcagag ggttggccgg acgcgagcgt caccgcgcgt gcgctgcaag 8460
cgcacctgcg ttacgaacag atcatcgacg ctatcctgag cggctatgcg gaacgtccgg 8520
cactggcgga gcgcagctac ctggtccgtc cagatccgag cacgggccaa accgttcgcg 8580
tccacgagca ggcgtttcgt tctatcagct accgtacgct gcaagaacgc gtccacgccc 8640
tgaccatggc gtggcgtctg cacccggact ccccggtaca agcgggtgca ttcgtcgtgc 8700
tggttggctt tgccagcatc gattatgcgg ttctggacct ggccctggcc tataccaagg 8760
gtgtcccggt tccgctgagc ccgaaccact ctagcgagga cgatgacgca atcttgggca 8820
ccgtgcaacc ggtgaccctg gccgtttcta tctctgagtt ctccggctgc gtggatctga 8880
ttgctcgtag caccagcatc cgtacggtta ttgtgtttga tttggatccg gcggtggatt 8940
gtgagcgtgc agccctggag tccggtattc gtgcgctgaa cgagaagggt agcgatgtcg 9000
ttgtgcaaac cctgcaagac ctgatcgatg tcggccgtga tgcggagttt agctttctgc 9060
ctattcaggc gcaagaccag gatgatttgg ctctgctgat tcataccagc ggtagcaccg 9120
gcacgccgaa gggcgcttgc atcagcagcc gtgccctgat caacacctgg cgtcacgtca 9180
gcggtccgta tcctaaagtg accgtcgttc tggcgccgtt tcaccacatg atgggtcgtg 9240
acagcatgat taccgccctg ggtgcaggcg gcaccgcgta cttcacgttg cgtccggatc 9300
tgagcactgt tattgaggac atccgcctgg cacgcccgac cggcctggtg ctgttcccgc 9360
gtctgtgcga ggtgatcgag caccatctga cgaccgctcc ggagtactct ggtaacgaga 9420
tcctgggtgg ccgtctgcag tccattgtcg tagcgagcgc tccgattact ccgcgtctga 9480
aagcgagctt ggagtgtttg ctgggcgttc cggtgagcga gggttattcc agcacggaga 9540
cggcaagcgg tggtttggca atgaacggcc tgttgaatcg caacaatatt ctggcgtacc 9600
gcttgcgtga cgttccggaa gcgggttact ctgttaacga ccgcccgttt ccgcgtggcg 9660
aactgtgtgt taagacgcgc tttggtatta gcggctattt tcgcaatccg gaagcgaccg 9720
cggaactgtt cgacgatgac ggtttctact gcacgggtga cattgttgaa gaacgtgcac 9780
cagatcagat cgcgatcatt gaccgccgca aaaacgtcat taaactggct cagggcgagt 9840
acgtggctgt gggtcgtctg gagcaattgt ttcaagaagg ctgcggttgc gtgcaacaga 9900
ttcatctgca tggtgacagc acccgtgcat acctgctggc ggtcgttgtt ccggaccgca 9960
ataccttggc gccacctggt tcgcgtcagg cgtctgaggc agagttgaaa gcgcgcgtcc 10020
gcgaagagat tctgaccctg gcaaatcagc gcgagctgcg tggctttgaa atcccgcgtg 10080
acctgattct ggcggaagaa ccgttcagcc aacagaatgg cctgctgagc agcttgggta 10140
aaccgatccg tccggctatc cgtgcacgct accgtagccg tctggaaagc ctgtatgcga 10200
gccatgaagc cacccgtggt accgagctgg aagcaatccg tgcgtccgca ggtgccgttg 10260
atgtggaaac cacgctgttg gccctgctgt ctagcactct gggcgtggtc tgtggtgccg 10320
cggatcgcca gacctctttt cgcgagctgg gtggcgacag cctggccgca gtgcagctgg 10380
ccatggagat caaaaagcag ttcggtgtgg gcctggaagg tagccaaatc ctgggtccgg 10440
gtggtacggt cgaggcgtgg gcccgtcgca tccacaccgc gagcattcag caggcaccgc 10500
accaacgcgt gggcagcccg ctggctgcaa ttccggccga aggctggctg aaaccggatc 10560
actatcgtct ggagaacttg atcggcattc cgattggtac cccgtccgca gaggttgctc 10620
gcccgactgg cggtccgccg accgtgctgc tgacgggtgc gactggtttc ttgggtggcc 10680
gcctgtgcct ggaatggctg caacgtctgg cgggtcaggg tggtcgcctg atctgtctgg 10740
tgcgtcctag caacagccac agcgcctggg aacgtctgcg caaccgcttc agccacctgg 10800
agccggagca ggttgcgcgt tttcgtgaac tggcaggccg ccatctggaa gttattccgg 10860
cagatatcgg cgagccgggt ttgggcctgg agcctggttg tcaagagcgt ctggccaccg 10920
aggtcgacgc gatctgtcat tgtgcagccg aggttaacca tcgtctgccg taccgtcacc 10980
tgtatcgtcc gaatgtgatt ggtaccgcag agatcattca tctggctatt actacccgtc 11040
tgaagagcgt ggacttcatt tcgagcatcg gtgtggcgag cctgccgcgt cgtccgggtg 11100
gctcgattcc ggtcgagggc ggttacgcac gcggctattt cgcttccaag tgggcgtgcg 11160
aacaactgct gcgtagcacc catgattgca ccggtgttcc ggtgcgtgtc attcgtccga 11220
gcctgattct gccagaccgt gtcctggccg gtgaaatgaa tcctgacgac ctgctgtctc 11280
gcttgctgta ctcgattctg gttacgggta tcgcgccagg ctgcttcggt gaagagagcc 11340
agaacagcgg tcgcagcggt ttcagcgttc aaggtctgcc ggtggatcag ctggcgcaga 11400
cgatcctggc actgggcgag gcacgcacgg aaggcttcca cgttttgaat ctgaatgcgg 11460
actccggtag cggtgtcccg ttggatgcga ttttgcaaga catcgcggcg aaaggtattc 11520
gtctgcgtcg tgtcgagggt tacgatctgt ggctggacgc aattaccacg cgcctgcgtc 11580
gtttgccagc ggaacagcgt gcgcgcagcc tgttggatgt ggcagaggcg tacgccggca 11640
gcgctggcca gacgacgcaa tccagcggtg agatgcaagc gggtagctcg tcctgcccag 11700
aagaaatcac cagcctgcag ccggacttca gccgtgccta tcgtcgtaag atcgttgacg 11760
atctggcgcg ctggggtctg atcgaaccac cgggtccggt tgatcagtaa taagtttaaa 11820
cagagaagga gttctatcat gattgaaacc atcttaccag ccggcgtcga atcagcagag 11880
ttacttgagt accctgaaga tctgaaggcg catccggctg aagagcatct gatcgcaaag 11940
agcgtagaga agcgtcgtcg cgacttcatt ggcgcacgtc attgcgcccg tctggcactg 12000
gcggagctgg gtgaaccgcc ggttgcgatt ggcaagggtg aacgtggtgc gccgatttgg 12060
ccgcgtggtg tcgtgggctc tctgacccat tgcgatggct atcgcgcagc ggcggttgct 12120
cacaaaatgc gttttcgcag catcggcatc gacgccgaac cgcacgcgac cctgccggaa 12180
ggtgtcctgg attcggttag cctgccgcct gagcgtgagt ggctgaaaac caccgacagc 12240
gcactgcacc tggaccgttt gctgttttgt gcgaaagaag caacttacaa agcgtggtgg 12300
ccgctgacgg cacgttggct gggtttcgaa gaagcgcaca ttaccttcga aatcgaggat 12360
ggtagcgccg actctggtaa tggcacgttt cacagcgaac tgctggtgcc gggtcagacc 12420
aatgacggtg gtaccccgct gctgtctttc gacggtcgct ggctgatcgc tgatggcttc 12480
atcctgacgg cgattgcata cgcatgataa attaacctag gctgctgcca ccgctgagca 12540
ataactagca taaccccttg gggcctctaa acgggtcttg aggggttttt tgctgaaacc 12600
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agttcggcta ggtcaatccg caattccctt tgcctggccg gagatgccgc gagcaaacaa 12780
tgtgtccggt cgctaccaga tggactttgt gggcggagga ttgcaccaga cgcttcagcg 12840
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catccgacaa tgcaagggtg ccccgctccc agcgcgacac ggttgcctga tccacaccca 12960
ttaattcagc taggtgactt tgcttcatat gacgaagcaa ccgcgccctc cgcacctgcc 13020
gccccctgtc attcgtcaac attcttcagc acctcaatgt cgttcgtagt gagcctcatt 13080
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tcgtagacga ttttcatcgc gctctgtagg cgcgccggca tcgtagacgc tgaggtggtc 13200
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ccgacggtga agtagctgat tgccatcaac gcataggtcg cgtcacctgc cgaaaagcca 13320
gcatcgcaaa ggaagcgaag ctgcgcgtcg gctttttcca tctgcggcgc ggctggccgc 13380
gtcccggcat gaatacgcgc gccatcgcga taagcgagca acgcccgtcg aaaactgcat 13440
gcattgccct tcaggaacga acgccagtcg tcgtcatccc ttggcgtcga atgcgtgtga 13500
tttatcgtca gcatggcttc ggcaagtgcg tcgagcaacg cacgcttgtt cttgaaatgc 13560
cagtagagcg ctggctgttg caccccgagg cgctcagcca gtcggcgcgt cgttagacct 13620
tccatgccca cgtcgttaag cagttcgagc gcggttcgga tcacggcctc gcgttggagc 13680
ttgttcattc gcgaa 13695
<210> 23
<211> 13728
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 载体
<400> 23
ttctcatgtt tgacagctta tcatcgataa gctttaatgc ggtagtttat cacagttaaa 60
ttgctaacgc agtcaggcac cgtgtatgaa atctaacaat gcgctcatcg tcatcctcgg 120
caccgtcacc ctggatgctg taggcatagg cttggttatg ccggtactgc cgggcctctt 180
gcgggatatc gtccattccg acagcatcgc cagtcactat ggcgtgctgc tagcgctata 240
tgcgttgatg caatttctat gcgcacccgt tctcggagca ctgtccgacc gctttggccg 300
ccgcccagtc ctgctcgctt cgctacttgg agccactatc gactacgcga tcatggcgac 360
cacacccgtc ctgtggatcc tctacgccgg acgcatcgtg gccggcatca ccggcgccac 420
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cttcgggctc atgagcgctt gtttcggcgt gggtatggtg gcaggccccg tggccggggg 540
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caacctacta ctgggctgct tcctaatgca ggagtcgcat aagggagagc gtcgaccgat 660
gcccttgaga gccttcaacc cagtcagctc cttccggtgg gcgcggggca tgactatcgt 720
cgccgcactt atgactgtct tctttatcat gcaactcgta ggacaggtgc cggcagcgct 780
ctgggtcatt ttcggcgagg accgctttcg ctggagcgcg acgatgatcg gcctgtcgct 840
tgcggtattc ggaatcttgc acgccctcgc tcaagccttc gtcactggtc ccgccaccaa 900
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cggcggcatc gggatgcccg cgttgcaggc catgctgtcc aggcaggtag atgacgacca 1080
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gctgatcgtc acggcgattt atgccgcctc ggcgagcaca tggaacgggt tggcatggat 1200
tgtaggcgcc gccctatacc ttgtctgcct ccccgcgttg cgtcgcggtg catggagccg 1260
ggccacctcg acctgaatgg aagccggcgg cacctcgcta acggattcac cactccaaga 1320
attggagcca atcaattctt gcggagaact gtgaatgcgc aaaccaaccc ttggcagaac 1380
atatccatcg cgtccgccat ctccagcagc cgcacgcggc gcatctcggg cagcgttggg 1440
tcctggccac gggtgcgcat gatcgtgctc ctgtcgttga ggacccggct aggctggcgg 1500
ggttgcctta ctggttagca gaatgaatca ccgatacgcg agcgaacgtg aagcgactgc 1560
tgctgcaaaa cgtctgcgac ctgagcaaca acatgaatgg tcttcggttt ccgtgtttcg 1620
taaagtctgg aaacgcggaa gtcccctacg tgctgctgaa gttgcccgca acagagagtg 1680
gaaccaaccg gtgataccac gatactatga ctgagagtca acgccatgag cggcctcatt 1740
tcttattctg agttacaaca gtccgcaccg ctgccggtag ctacttgact atccggctgc 1800
actagccctg cgtcagatgg ctctgatcca aggcaaactg ccaaaatatc tgctggcacc 1860
ggaagtcagc gccctgcacc attatgttcc ggatctgcat cgcaggatgc tgctggctac 1920
cctgtggaac acctacatct gtattaacga agcgctggca ttgaccctga gtgatttttc 1980
tctggtgccg ccctatccct ttgtgcagct tgccacgctc aaaggggttt gaggtccaac 2040
cgtacgaaaa cgtacggtaa gaggaaaatt atcgtctgaa aaatcgatta gtagacaaga 2100
aagtccgtta agtgccaatt ttcgattaaa aagacaccgt tttgatggcg ttttccaatg 2160
tacattatgt ttcgatatat cagacagtta cttcactaac gtacgttttc gttctattgg 2220
ccttcagacc ccatatcctt aatgtccttt atttgctggg gttatcagat ccccccgaca 2280
cgtttaatta atgctttctc cgccggagat cgacgcacag gcttctgtgt ctatgatgtt 2340
atttcttaat aatcatccag gtattctctt tatcaccata cgtagtgcga gtgtccacct 2400
taacgcaggg ctttccgtca cagcgcgata tgtcagccag cggggctttc ttttgccaga 2460
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atgccgtcac gcaggaagcc aggacgaaga atatcgtcag tacaagataa atcgcggatt 2580
tccacgtata gcgtgacatc tcacgacgca tttcatggat catcgctttc gccgtatcgg 2640
cagcctgatt cagcgcttct gtcgccggtt tctgctgtgc taatccggct tgtttcagtt 2700
ctttctcaac ctgagtgagc gcggaactca ccgatttcct gacggtgtca gtcatattac 2760
cggacgcgct gtccagctca cgaatgaccc tgctcagcgt ttcactttgc tgctgtaatt 2820
gtgatgaggc ggcctgaaac tgttctgtca gagaagtaac acgcttttcc agcgcctgat 2880
gatgcccgat aagggcggca atttgtttaa tttcgtcgct catacaaaat cctgcctatc 2940
gtgagaatga ccagccttta tccggcttct gtcgtatctg ttcggcgagt cgctgtcgtt 3000
ctttctcctg ctgacgctgt ttttccgcca gacgttcgcg ctctctctgc ctttccatct 3060
cctgatgtat cccctggaac tccgccatcg catcgttaac aagggactga agatcgattt 3120
cttcctgtat atccttcatg gcatcactga ccagtgcgtt cagcttgtca ggctcttttt 3180
caaaatcaaa cgttctgccg gaatgggatt cctgctcagg ctctgacttc agctcctgtt 3240
ttagcgtcag agtatccctc tcgctgaggg cttcccgtaa cgaggtagtc acgtcaatta 3300
cgctgtcacg ttcatcacgg gactgctgca cctgcctttc agcctccctg cgctcaagaa 3360
tggcctgtag ctgctcagta tcgaatcgct gaacctgacc cgcgcccaga tgccgctcag 3420
gctcacggtc aatgccctgc gccttcaggg aacgggaatc aacccggtca gcgtgctgat 3480
accgttcaag gtgcttattc tggaggtcag cccagcgtct ccctctgggc aacaaggtat 3540
tctttgcgtt cggtcggtgt ttccccgaaa cgtgcctttt ttgcgccacc gcgtccggct 3600
ctttggtgtt agcccgttta aaatactgct cagggtcacg gtgaataccg tcattaatgc 3660
gttcagagaa catgatatgg gcgtggggct gctcgccacc ggctatcgct gctttcggat 3720
tatggatagc gaactgatag gcatggcggt cgccaatttc ctgttggaca aaatcgcgga 3780
caagctcaag acgttgttcg ggttttaact cacgcggcag ggcaatctcg atttcacggt 3840
aggtacagcc gttggcacgt tcagacgtgt cagcggcttt ccagaactcg gacggtttat 3900
gcgctgccca cgccggcata ttgccggact ccttgtgctc aaggtcggag tctttttcac 3960
gggcatactt tccctcacgc gcaatataat cggcatgagg agaggcactg ccttttccgc 4020
cggtttttac gctgagatga taggatgcca tcgtgtttta tcccgctgaa gggcgcacgt 4080
ttctgaacga agtgaagaaa gtctaagtgc gccctgataa ataaaagagt tatcagggat 4140
tgtagtggga tttgacctcc tctgccatca tgagcgtaat cattccgtta gcattcagga 4200
ggtaaacagc atgaataaaa gcgaaaaaac aggaacaatg ggcagcagaa agagtgcagt 4260
atattcgcgg cttaaagtcg ccgaatgagc aacagaaact tatgctgata ctgacggata 4320
aagcagataa aacagcacag gatatcaaaa cgctgtccct gctgatgaag gctgaacagg 4380
cagcagagaa agcgcaggaa gccagagcga aagtcatgaa cctgatacag gcagaaaagc 4440
gagccgaagc cagagccgcc cgtaaagccc gtgaccatgc tctgtaccag tctgccggat 4500
tgcttatcct ggcgggtctg gttgacagta agacgggtaa gcctgttgat gataccgctg 4560
ccttactggg tgcattagcc agtctgaatg acctgtcacg ggataatccg aagtggtcag 4620
actggaaaat cagagggcag gaactgctga acagcaaaaa gtcagatagc accacatagc 4680
agacccgcca taaaacgccc tgagaagccc gtgacgggct tttcttgtat tatgggtagt 4740
ttccttgcat gaatccataa aaggcgcctg tagtgccatt tacccccatt cactgccaga 4800
gccgtgagcg cagcgaactg aatgtcacga aaaagacagc gactcaggtg cctgatggtc 4860
ggagacaaaa ggaatattca gcgatttgcc cgagcttgcg agggtgctac ttaagccttt 4920
agggttttaa ggtctgtttt gtagaggagc aaacagcgtt tgcgacatcc ttttgtaata 4980
ctgcggaact gactaaagta gtgagttata cacagggctg ggatctattc tttttatctt 5040
tttttattct ttctttattc tataaattat aaccacttga atataaacaa aaaaaacaca 5100
caaaggtcta gcggaattta cagagggtct agcagaattt acaagttttc cagcaaaggt 5160
ctagcagaat ttacagatac ccacaactca aaggaaaagg actagtaatt atcattgact 5220
agcccatctc aattggtata gtgattaaaa tcacctagac caattgagat gtatgtctga 5280
attagttgtt ttcaaagcaa atgaactagc gattagtcgc tatgacttaa cggagcatga 5340
aaccaagcta attttatgct gtgtggcact actcaacccc acgattgaaa accctacaag 5400
gaaagaacgg acggtatcgt tcacttataa ccaatacgct cagatgatga acatcagtag 5460
ggaaaatgct tatggtgtat tagctaaagc aaccagagag ctgatgacga gaactgtgga 5520
aatcaggaat cctttggtta aaggctttga gattttccag tggacaaact atgccaagtt 5580
ctcaagcgaa aaattagaat tagtttttag tgaagagata ttgccttatc ttttccagtt 5640
aaaaaaattc ataaaatata atctggaaca tgttaagtct tttgaaaaca aatactctat 5700
gaggatttat gagtggttat taaaagaact aacacaaaag aaaactcaca aggcaaatat 5760
agagattagc cttgatgaat ttaagttcat gttaatgctt gaaaataact accatgagtt 5820
taaaaggctt aaccaatggg ttttgaaacc aataagtaaa gatttaaaca cttacagcaa 5880
tatgaaattg gtggttgata agcgaggccg cccgactgat acgttgattt tccaagttga 5940
actagataga caaatggatc tcgtaaccga acttgagaac aaccagataa aaatgaatgg 6000
tgacaaaata ccaacaacca ttacatcaga ttcctaccta cgtaacggac taagaaaaac 6060
actacacgat gctttaactg caaaaattca gctcaccagt tttgaggcaa aatttttgag 6120
tgacatgcaa agtaagcatg atctcaatgg ttcgttctca tggctcacgc aaaaacaacg 6180
aaccacacta gagaacatac tggctaaata cggaaggatc tgaggttctt atggctcttg 6240
tatctatcag tgaagcatca agactaacaa acaaaagtag aacaactgtt caccgttaga 6300
tatcaaaggg aaaactgtcc atatgcacag atgaaaacgg tgtaaaaaag atagatacat 6360
cagagctttt acgagttttt ggtgcattta aagctgttca ccatgaacag atcgacaatg 6420
taacagatga acagcatgta acacctaata gaacaggtga aaccagtaaa acaaagcaac 6480
tagaacatga aattgaacac ctgagacaac ttgttacagc tcaacagtca cacatagaca 6540
gcctgaaaca ggcgatgctg cttatcgaat caaagctgcc gacaacacgg gagccagtga 6600
cgcctcccgt ggggaaaaaa tcatggcaat tctggaagaa atagcgcttt cagccggcaa 6660
acctgaagcc ggatctgcga ttctgataac aaactagcaa caccagaaca gcccgtttgc 6720
gggcagcaaa acccgtactt ttggacgttc cggcggtttt ttgtggcgag tggtgttcgg 6780
gcggtgcgcg caagatccat tatgttaaac gggcgagttt acatctcaaa accgcccgct 6840
taacaccatc agaaatcctc agcgcgattt taagcaccaa cccccccccg taacacccaa 6900
atccatactg aaagtggctt tgttgaataa atcgaacttt tgctgagttg aaggatcaga 6960
tcacgcatcc tcccgacaac acagaccatt ccgtggcaaa gcaaaagttc agaatcacca 7020
actggtccac ctacaacaaa gctctcatca accgtggctc cctcactttc tggctggatg 7080
atgaggcgat tcaggcctgg tatgagtcgg caacaccttc atcacgagga aggccccagc 7140
gctattctga tctcgccatc accaccgttc tggtgattaa acgcgtattc cggctgaccc 7200
tgcgggctgc gcagggtttt attgattcca tttttgccct gatgaacgtt ccgttgcgct 7260
gcccggatta caccagtgtc agtaagcggg caaagtcggt taatgtcagt ttcaaaacgt 7320
ccacccgggg tgaaatcgca cacctggtga ttgattccac cgggctgaag gtctttggtg 7380
aaggcgaatg gaaagtcaga aagcacggca aagagcgccg tcgtatctgg cgaaagttgc 7440
atcttgctgt tgacagcaac acacatgaag ttgtctgtgc agacctgtcg ctgaataacg 7500
tcacggactc agaagccttc ccgggcctta tccggcagac tcacagaaaa atcagggcag 7560
ccgcggcaga cggggcttac gatacccggc tctgtcacga tgaactgcgc cgcaaaaaaa 7620
tcagcgcgct tattcctccc cgaaaaggtg cgggttactg gcccggtgaa tatgcagacc 7680
gtaaccgtgc agtggctaat cagcgaatga ccgggagtaa tgcgcggtgg aaatggacaa 7740
cagattacaa ccgtcgctcg atagcggaaa cggcgatgta ccgggtaaaa cagctgttcg 7800
ggggttcact gacgctgcgt gactacgatg gtcaggttgc ggaggctatg gccctggtac 7860
gagcgctgaa caaaatgacg aaagcaggta tgcctgaaag cgtgcgtatt gcctgaaaac 7920
acaacccgct acgggggaga cttacccgaa atctgattta ttcaacaaag ccgggtgtgg 7980
tgaactacaa agcagacccg ttgaggttat cagttcgatg cacaatcagc agcgcataaa 8040
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gctaccatca gcgagcatga tgcgctccca cagcattcgc cttggcagta tggaagttcc 8160
tcgctccagt tcgggccggt atccaccgca cctggtgttt aaacggattt aaattgcagg 8220
ggcagtgagc gcaacgcaat taatgtaagt tagctcactc attaggcacc ccaggcttga 8280
cactttatgc ttccggctcg tataatgtgt ggaattgtga gcggataaca ataacaattt 8340
aaatcaggat ctaggaacca aggagagtgg catatgacgg caggcgcagc agcaagagtg 8400
gctaaattat ttgaatccga ccctcaattt cgtgcggcga tgccggaccc ggcagtgatg 8460
gatagcctgc tggcaccggg tttgcgcctg tcccaggtgc tgcacgccct gctgtcgggt 8520
tacgcggagc gtccggtgat gggtttccgt agccgtgaaa gcgttgtaga tacggccacc 8580
ggccgtactg tcgaccgtct gctgccggca tttgaaacga ttacgtatgg ccagttgctg 8640
gaagatatca gcgctatcct ggccgagtgg cagcacggtg atatcccgat gggtgctggt 8700
gacttcatcg cgacgattgg ctttagcagc ccggactatg tcactctgga cctggcgacc 8760
ctgatgaacg gcagcgtcag catcccgctg caacataaca ccagcgtcgc gcagctgcgt 8820
atgatgctgg aagagacgag cccgcgtctg gttgccgcga gcgcggactg tttggatttg 8880
gctgttgaag cggctgttgg cttgacggac ctgcgccgtg tggttgtgtt cgactaccgt 8940
gcggagacgg acgaccatcg tgagaaactg gcgaccgcgc gtgaacgtct gcacgcagcg 9000
ggtatggacg tggtcgtaga gccgctggcg gaagtcatcg gccgtggtcg cgatctgccg 9060
gagccggttc tgtacaccgc cggtgatgac caacgcacgg cgttgattat gtacacgagc 9120
ggttccacgg gtgccccgaa aggcgcgatg tttacggagt ggaccgttac ccgtttttgg 9180
agctccggtg cggcaccgaa ccgcgatacg ccgattatca atgtcaattt cctgccgctg 9240
aaccatctgg cgggtcgcgt cggtctgctg accgcgttca ttccgggtgg cacctgctac 9300
ttcgtcccgg agagcgattt gtccaccctg tttgaggatt ggcagctggc tcgcccgacg 9360
cacatgggcg tcgtgcctcg cgtcgtggac atgctgttcc agcactatca gacccgtgtg 9420
gacgcgctga tggccggtgg taccgatgtt gacaccgccg accgtctggc taagaccgaa 9480
ttgcgcgagg atgttttggg tggccgtgta gttgcgggta tgttggcgac cgctccgctg 9540
agccctgaga tgaaagcgtt cctggagtcc tcgttggact ttcacctgct ggacctgtat 9600
ggtttgaccg aggttggcgg cgttttccgt gatggcaaga tcagccgtcc gccggtgctg 9660
gattacaaac tggtcgacgt tccggaactg ggttactata cgacggataa accgcatcca 9720
cgtggcgaac tgctggtgaa gtctgcgacc gcgaccccag gctattacaa acgtccagac 9780
gttacggccg aggtctttga cgccgatggt tactatcgta ctggcgacgt gatggcagag 9840
gtcgcgccag accagctggt gtacgttgat cgtcgcaata atgtgattaa gttggctcag 9900
ggcgagttcg ttgcggttgc gaatctggag actgtttacg tgggtgcgcc gctggtgcgt 9960
cagatttttg tttacggtaa cagcgaacgt gcctatctgc tggccgttgt ggtgccgacc 10020
gaagaggcgc tgcgcgcaca cccggatccg gttgagctga agaacagcat tcgtgaatcc 10080
ctgcagcgta ccgcgcgtag caaccacctg cactcttatg agctgccggc agacttcatt 10140
attgaaacca ccccgttcac gatcgaaagc ggcatgctgg ctgcggtggg caaaccgatc 10200
cgcccgaaga tgattgaaca ttatggtgat cgcctggagc agctgtacgt ggatctggca 10260
gaggcccgtg ttcaggagtt gcgtcagctg cgtgacaccg cacaacaacg cccggttttg 10320
gataccgtta ctgaggcagc gcaggcactg ctgggcatga gcgccgacgc tgtgcgtccg 10380
gatcatcatt tcatcgatct gggtggtgac agcctgagcg cgctgacctt cagcaatctg 10440
ctgcgcgacc tgttcgacgt cgaggtgccg gtgggcgtga ttaccggtcc ggcagcggat 10500
ttgcgtaaac tggcggcgta tattcaacat gaacgcgaac actctaccgc taccgcagcg 10560
agcgttcacg gtttggacac taccgttatc agcgcaaccg agctgacgtt ggataagttc 10620
atcgatgctg aaaccttgca caacgcgagc caactggacg tccctgccgg tgcggtcgca 10680
acggtcctgc tgaccggtgc gaatggttat ctgggtcgct ttctgtgcct ggaatggctg 10740
cagcgcctga gccaaactgg tggtcaactg atctgtctgg ttcgtggtga caacgcggat 10800
caggccctgg cgcgtctggt cgcggcatat ggcgacaccg accgtaccct gctggaagaa 10860
tttcacaccc tggcacgtcg ccatctgcgt gttattgcgg cagacattgc gcaaccgcgt 10920
ttcggcgttg acgatgctac gtgggagcaa ctggcacgcg atgtggataa gatcgttcac 10980
ccggctgccc tggtgaatca cgtgctgccg tacaatcaat tgtttggccc aaacgtattt 11040
ggtaccgccg aggtgatccg tctggcgttg accacgcgca ttaagccggt tacgtacctg 11100
agcaccatgg ccgtggcgat gaccgtcccg gacttcgatg aggacggtga catccgcacg 11160
gtgtctccga cgcgtcatat cgacccgggc tatgccaatg gctacgcaaa ttcgaaatgg 11220
gcaggtgaag tcctgctgcg tgaggcacat gacatttgcg gcctgccggt tagcgttttt 11280
cgtagcgata tgattctgac ccaccgtcgt tatagcggtc agctgaacgt caccgatgcg 11340
tttacgcgta tgctgctgtc tctggttctg accggtatcg cccctcgcag cttttatcaa 11400
ggtgatggtt ccggtgcgcg tccacgcgcc cactacgaag gtctgccggt ggactttgtc 11460
accgaggcca ttaccagcct gggtctgagc agctccgagg gcttccgtag ctacgatgtc 11520
atgaatccgc acgatgatgg tattagcgtc gataccttcg tcgattggct gatggaagat 11580
ggtcacagca ttgacatcat tgacaactac gacgagtggc tgtctcgctt cgaaactgca 11640
ctgcgcggct tgccggatga gcaacgtcgc gcgagcgtcc tgccgttgct ggacgcgtac 11700
cgcattccgg gcaaccctcg ccgtgctgca gcgaccccga accacgtgtt ccgcaaggca 11760
gtgcaggaga acaatatcgg cggtgacggt gcagacatcc cgcaaattga tcgcgcgctg 11820
atcgcaaaat acatcgcgga tctgcgtgcg catcgtctgc tgtaataagt ttaaacgaga 11880
aggagttcta tcatgattga aaccatctta ccagccggcg tcgaatcagc agagttactt 11940
gagtaccctg aagatctgaa ggcgcatccg gctgaagagc atctgatcgc aaagagcgta 12000
gagaagcgtc gtcgcgactt cattggcgca cgtcattgcg cccgtctggc actggcggag 12060
ctgggtgaac cgccggttgc gattggcaag ggtgaacgtg gtgcgccgat ttggccgcgt 12120
ggtgtcgtgg gctctctgac ccattgcgat ggctatcgcg cagcggcggt tgctcacaaa 12180
atgcgttttc gcagcatcgg catcgacgcc gaaccgcacg cgaccctgcc ggaaggtgtc 12240
ctggattcgg ttagcctgcc gcctgagcgt gagtggctga aaaccaccga cagcgcactg 12300
cacctggacc gtttgctgtt ttgtgcgaaa gaagcaactt acaaagcgtg gtggccgctg 12360
acggcacgtt ggctgggttt cgaagaagcg cacattacct tcgaaatcga ggatggtagc 12420
gccgactctg gtaatggcac gtttcacagc gaactgctgg tgccgggtca gaccaatgac 12480
ggtggtaccc cgctgctgtc tttcgacggt cgctggctga tcgctgatgg cttcatcctg 12540
acggcgattg catacgcatg ataaattaac ctaggctgct gccaccgctg agcaataact 12600
agcataaccc cttggggcct ctaaacgggt cttgaggggt tttttgctga gctcgagtga 12660
ccccagccgc ccctcatgcc aaccgagccc attaagcgca gagtcggccg caactatctc 12720
ggggacgcat aaacacgcag cgatttacca aggagttcgg ctaggtcaat ccgcaattcc 12780
ctttgcctgg ccggagatgc cgcgagcaaa caatgtgtcc ggtcgctacc agatggactt 12840
tgtgggcgga ggattgcacc agacgcttca gcgcagcgtc gtacgatgaa tcggaaggcc 12900
cggtaagcaa ttgaagaacc gctgaccacc tcccatccga caatgcaagg gtgccccgct 12960
cccagcgcga cacggttgcc tgatccacac ccattaattc agctaggtga ctttgcttca 13020
tatgacgaag caaccgcgcc ctccgcacct gccgccccct gtcattcgtc aacattcttc 13080
agcacctcaa tgtcgttcgt agtgagcctc attttttcaa gaccgccgat gatgagagcc 13140
aggcctcgct cgaatgccgc gtccggaccg ccttcgtaga cgattttcat cgcgctctgt 13200
aggcgcgccg gcatcgtaga cgctgaggtg gtcaactgat cttcgccccg ctcctcggcg 13260
tctgcctcgc tagcttgctg ctcaagaaca gcgccgacgg tgaagtagct gattgccatc 13320
aacgcatagg tcgcgtcacc tgccgaaaag ccagcatcgc aaaggaagcg aagctgcgcg 13380
tcggcttttt ccatctgcgg cgcggctggc cgcgtcccgg catgaatacg cgcgccatcg 13440
cgataagcga gcaacgcccg tcgaaaactg catgcattgc ccttcaggaa cgaacgccag 13500
tcgtcgtcat cccttggcgt cgaatgcgtg tgatttatcg tcagcatggc ttcggcaagt 13560
gcgtcgagca acgcacgctt gttcttgaaa tgccagtaga gcgctggctg ttgcaccccg 13620
aggcgctcag ccagtcggcg cgtcgttaga ccttccatgc ccacgtcgtt aagcagttcg 13680
agcgcggttc ggatcacggc ctcgcgttgg agcttgttca ttcgcgaa 13728
<210> 24
<211> 13689
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 载体
<400> 24
ttctcatgtt tgacagctta tcatcgataa gctttaatgc ggtagtttat cacagttaaa 60
ttgctaacgc agtcaggcac cgtgtatgaa atctaacaat gcgctcatcg tcatcctcgg 120
caccgtcacc ctggatgctg taggcatagg cttggttatg ccggtactgc cgggcctctt 180
gcgggatatc gtccattccg acagcatcgc cagtcactat ggcgtgctgc tagcgctata 240
tgcgttgatg caatttctat gcgcacccgt tctcggagca ctgtccgacc gctttggccg 300
ccgcccagtc ctgctcgctt cgctacttgg agccactatc gactacgcga tcatggcgac 360
cacacccgtc ctgtggatcc tctacgccgg acgcatcgtg gccggcatca ccggcgccac 420
aggtgcggtt gctggcgcct atatcgccga catcaccgat ggggaagatc gggctcgcca 480
cttcgggctc atgagcgctt gtttcggcgt gggtatggtg gcaggccccg tggccggggg 540
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caacctacta ctgggctgct tcctaatgca ggagtcgcat aagggagagc gtcgaccgat 660
gcccttgaga gccttcaacc cagtcagctc cttccggtgg gcgcggggca tgactatcgt 720
cgccgcactt atgactgtct tctttatcat gcaactcgta ggacaggtgc cggcagcgct 780
ctgggtcatt ttcggcgagg accgctttcg ctggagcgcg acgatgatcg gcctgtcgct 840
tgcggtattc ggaatcttgc acgccctcgc tcaagccttc gtcactggtc ccgccaccaa 900
acgtttcggc gagaagcagg ccattatcgc cggcatggcg gccgacgcgc tgggctacgt 960
cttgctggcg ttcgcgacgc gaggctggat ggccttcccc attatgattc ttctcgcttc 1020
cggcggcatc gggatgcccg cgttgcaggc catgctgtcc aggcaggtag atgacgacca 1080
tcagggacag cttcaaggat cgctcgcggc tcttaccagc ctaacttcga tcactggacc 1140
gctgatcgtc acggcgattt atgccgcctc ggcgagcaca tggaacgggt tggcatggat 1200
tgtaggcgcc gccctatacc ttgtctgcct ccccgcgttg cgtcgcggtg catggagccg 1260
ggccacctcg acctgaatgg aagccggcgg cacctcgcta acggattcac cactccaaga 1320
attggagcca atcaattctt gcggagaact gtgaatgcgc aaaccaaccc ttggcagaac 1380
atatccatcg cgtccgccat ctccagcagc cgcacgcggc gcatctcggg cagcgttggg 1440
tcctggccac gggtgcgcat gatcgtgctc ctgtcgttga ggacccggct aggctggcgg 1500
ggttgcctta ctggttagca gaatgaatca ccgatacgcg agcgaacgtg aagcgactgc 1560
tgctgcaaaa cgtctgcgac ctgagcaaca acatgaatgg tcttcggttt ccgtgtttcg 1620
taaagtctgg aaacgcggaa gtcccctacg tgctgctgaa gttgcccgca acagagagtg 1680
gaaccaaccg gtgataccac gatactatga ctgagagtca acgccatgag cggcctcatt 1740
tcttattctg agttacaaca gtccgcaccg ctgccggtag ctacttgact atccggctgc 1800
actagccctg cgtcagatgg ctctgatcca aggcaaactg ccaaaatatc tgctggcacc 1860
ggaagtcagc gccctgcacc attatgttcc ggatctgcat cgcaggatgc tgctggctac 1920
cctgtggaac acctacatct gtattaacga agcgctggca ttgaccctga gtgatttttc 1980
tctggtgccg ccctatccct ttgtgcagct tgccacgctc aaaggggttt gaggtccaac 2040
cgtacgaaaa cgtacggtaa gaggaaaatt atcgtctgaa aaatcgatta gtagacaaga 2100
aagtccgtta agtgccaatt ttcgattaaa aagacaccgt tttgatggcg ttttccaatg 2160
tacattatgt ttcgatatat cagacagtta cttcactaac gtacgttttc gttctattgg 2220
ccttcagacc ccatatcctt aatgtccttt atttgctggg gttatcagat ccccccgaca 2280
cgtttaatta atgctttctc cgccggagat cgacgcacag gcttctgtgt ctatgatgtt 2340
atttcttaat aatcatccag gtattctctt tatcaccata cgtagtgcga gtgtccacct 2400
taacgcaggg ctttccgtca cagcgcgata tgtcagccag cggggctttc ttttgccaga 2460
ccgcttccat cctctgcatt tcagcaatct ggctataccc gtcattcata aaccacgtaa 2520
atgccgtcac gcaggaagcc aggacgaaga atatcgtcag tacaagataa atcgcggatt 2580
tccacgtata gcgtgacatc tcacgacgca tttcatggat catcgctttc gccgtatcgg 2640
cagcctgatt cagcgcttct gtcgccggtt tctgctgtgc taatccggct tgtttcagtt 2700
ctttctcaac ctgagtgagc gcggaactca ccgatttcct gacggtgtca gtcatattac 2760
cggacgcgct gtccagctca cgaatgaccc tgctcagcgt ttcactttgc tgctgtaatt 2820
gtgatgaggc ggcctgaaac tgttctgtca gagaagtaac acgcttttcc agcgcctgat 2880
gatgcccgat aagggcggca atttgtttaa tttcgtcgct catacaaaat cctgcctatc 2940
gtgagaatga ccagccttta tccggcttct gtcgtatctg ttcggcgagt cgctgtcgtt 3000
ctttctcctg ctgacgctgt ttttccgcca gacgttcgcg ctctctctgc ctttccatct 3060
cctgatgtat cccctggaac tccgccatcg catcgttaac aagggactga agatcgattt 3120
cttcctgtat atccttcatg gcatcactga ccagtgcgtt cagcttgtca ggctcttttt 3180
caaaatcaaa cgttctgccg gaatgggatt cctgctcagg ctctgacttc agctcctgtt 3240
ttagcgtcag agtatccctc tcgctgaggg cttcccgtaa cgaggtagtc acgtcaatta 3300
cgctgtcacg ttcatcacgg gactgctgca cctgcctttc agcctccctg cgctcaagaa 3360
tggcctgtag ctgctcagta tcgaatcgct gaacctgacc cgcgcccaga tgccgctcag 3420
gctcacggtc aatgccctgc gccttcaggg aacgggaatc aacccggtca gcgtgctgat 3480
accgttcaag gtgcttattc tggaggtcag cccagcgtct ccctctgggc aacaaggtat 3540
tctttgcgtt cggtcggtgt ttccccgaaa cgtgcctttt ttgcgccacc gcgtccggct 3600
ctttggtgtt agcccgttta aaatactgct cagggtcacg gtgaataccg tcattaatgc 3660
gttcagagaa catgatatgg gcgtggggct gctcgccacc ggctatcgct gctttcggat 3720
tatggatagc gaactgatag gcatggcggt cgccaatttc ctgttggaca aaatcgcgga 3780
caagctcaag acgttgttcg ggttttaact cacgcggcag ggcaatctcg atttcacggt 3840
aggtacagcc gttggcacgt tcagacgtgt cagcggcttt ccagaactcg gacggtttat 3900
gcgctgccca cgccggcata ttgccggact ccttgtgctc aaggtcggag tctttttcac 3960
gggcatactt tccctcacgc gcaatataat cggcatgagg agaggcactg ccttttccgc 4020
cggtttttac gctgagatga taggatgcca tcgtgtttta tcccgctgaa gggcgcacgt 4080
ttctgaacga agtgaagaaa gtctaagtgc gccctgataa ataaaagagt tatcagggat 4140
tgtagtggga tttgacctcc tctgccatca tgagcgtaat cattccgtta gcattcagga 4200
ggtaaacagc atgaataaaa gcgaaaaaac aggaacaatg ggcagcagaa agagtgcagt 4260
atattcgcgg cttaaagtcg ccgaatgagc aacagaaact tatgctgata ctgacggata 4320
aagcagataa aacagcacag gatatcaaaa cgctgtccct gctgatgaag gctgaacagg 4380
cagcagagaa agcgcaggaa gccagagcga aagtcatgaa cctgatacag gcagaaaagc 4440
gagccgaagc cagagccgcc cgtaaagccc gtgaccatgc tctgtaccag tctgccggat 4500
tgcttatcct ggcgggtctg gttgacagta agacgggtaa gcctgttgat gataccgctg 4560
ccttactggg tgcattagcc agtctgaatg acctgtcacg ggataatccg aagtggtcag 4620
actggaaaat cagagggcag gaactgctga acagcaaaaa gtcagatagc accacatagc 4680
agacccgcca taaaacgccc tgagaagccc gtgacgggct tttcttgtat tatgggtagt 4740
ttccttgcat gaatccataa aaggcgcctg tagtgccatt tacccccatt cactgccaga 4800
gccgtgagcg cagcgaactg aatgtcacga aaaagacagc gactcaggtg cctgatggtc 4860
ggagacaaaa ggaatattca gcgatttgcc cgagcttgcg agggtgctac ttaagccttt 4920
agggttttaa ggtctgtttt gtagaggagc aaacagcgtt tgcgacatcc ttttgtaata 4980
ctgcggaact gactaaagta gtgagttata cacagggctg ggatctattc tttttatctt 5040
tttttattct ttctttattc tataaattat aaccacttga atataaacaa aaaaaacaca 5100
caaaggtcta gcggaattta cagagggtct agcagaattt acaagttttc cagcaaaggt 5160
ctagcagaat ttacagatac ccacaactca aaggaaaagg actagtaatt atcattgact 5220
agcccatctc aattggtata gtgattaaaa tcacctagac caattgagat gtatgtctga 5280
attagttgtt ttcaaagcaa atgaactagc gattagtcgc tatgacttaa cggagcatga 5340
aaccaagcta attttatgct gtgtggcact actcaacccc acgattgaaa accctacaag 5400
gaaagaacgg acggtatcgt tcacttataa ccaatacgct cagatgatga acatcagtag 5460
ggaaaatgct tatggtgtat tagctaaagc aaccagagag ctgatgacga gaactgtgga 5520
aatcaggaat cctttggtta aaggctttga gattttccag tggacaaact atgccaagtt 5580
ctcaagcgaa aaattagaat tagtttttag tgaagagata ttgccttatc ttttccagtt 5640
aaaaaaattc ataaaatata atctggaaca tgttaagtct tttgaaaaca aatactctat 5700
gaggatttat gagtggttat taaaagaact aacacaaaag aaaactcaca aggcaaatat 5760
agagattagc cttgatgaat ttaagttcat gttaatgctt gaaaataact accatgagtt 5820
taaaaggctt aaccaatggg ttttgaaacc aataagtaaa gatttaaaca cttacagcaa 5880
tatgaaattg gtggttgata agcgaggccg cccgactgat acgttgattt tccaagttga 5940
actagataga caaatggatc tcgtaaccga acttgagaac aaccagataa aaatgaatgg 6000
tgacaaaata ccaacaacca ttacatcaga ttcctaccta cgtaacggac taagaaaaac 6060
actacacgat gctttaactg caaaaattca gctcaccagt tttgaggcaa aatttttgag 6120
tgacatgcaa agtaagcatg atctcaatgg ttcgttctca tggctcacgc aaaaacaacg 6180
aaccacacta gagaacatac tggctaaata cggaaggatc tgaggttctt atggctcttg 6240
tatctatcag tgaagcatca agactaacaa acaaaagtag aacaactgtt caccgttaga 6300
tatcaaaggg aaaactgtcc atatgcacag atgaaaacgg tgtaaaaaag atagatacat 6360
cagagctttt acgagttttt ggtgcattta aagctgttca ccatgaacag atcgacaatg 6420
taacagatga acagcatgta acacctaata gaacaggtga aaccagtaaa acaaagcaac 6480
tagaacatga aattgaacac ctgagacaac ttgttacagc tcaacagtca cacatagaca 6540
gcctgaaaca ggcgatgctg cttatcgaat caaagctgcc gacaacacgg gagccagtga 6600
cgcctcccgt ggggaaaaaa tcatggcaat tctggaagaa atagcgcttt cagccggcaa 6660
acctgaagcc ggatctgcga ttctgataac aaactagcaa caccagaaca gcccgtttgc 6720
gggcagcaaa acccgtactt ttggacgttc cggcggtttt ttgtggcgag tggtgttcgg 6780
gcggtgcgcg caagatccat tatgttaaac gggcgagttt acatctcaaa accgcccgct 6840
taacaccatc agaaatcctc agcgcgattt taagcaccaa cccccccccg taacacccaa 6900
atccatactg aaagtggctt tgttgaataa atcgaacttt tgctgagttg aaggatcaga 6960
tcacgcatcc tcccgacaac acagaccatt ccgtggcaaa gcaaaagttc agaatcacca 7020
actggtccac ctacaacaaa gctctcatca accgtggctc cctcactttc tggctggatg 7080
atgaggcgat tcaggcctgg tatgagtcgg caacaccttc atcacgagga aggccccagc 7140
gctattctga tctcgccatc accaccgttc tggtgattaa acgcgtattc cggctgaccc 7200
tgcgggctgc gcagggtttt attgattcca tttttgccct gatgaacgtt ccgttgcgct 7260
gcccggatta caccagtgtc agtaagcggg caaagtcggt taatgtcagt ttcaaaacgt 7320
ccacccgggg tgaaatcgca cacctggtga ttgattccac cgggctgaag gtctttggtg 7380
aaggcgaatg gaaagtcaga aagcacggca aagagcgccg tcgtatctgg cgaaagttgc 7440
atcttgctgt tgacagcaac acacatgaag ttgtctgtgc agacctgtcg ctgaataacg 7500
tcacggactc agaagccttc ccgggcctta tccggcagac tcacagaaaa atcagggcag 7560
ccgcggcaga cggggcttac gatacccggc tctgtcacga tgaactgcgc cgcaaaaaaa 7620
tcagcgcgct tattcctccc cgaaaaggtg cgggttactg gcccggtgaa tatgcagacc 7680
gtaaccgtgc agtggctaat cagcgaatga ccgggagtaa tgcgcggtgg aaatggacaa 7740
cagattacaa ccgtcgctcg atagcggaaa cggcgatgta ccgggtaaaa cagctgttcg 7800
ggggttcact gacgctgcgt gactacgatg gtcaggttgc ggaggctatg gccctggtac 7860
gagcgctgaa caaaatgacg aaagcaggta tgcctgaaag cgtgcgtatt gcctgaaaac 7920
acaacccgct acgggggaga cttacccgaa atctgattta ttcaacaaag ccgggtgtgg 7980
tgaactacaa agcagacccg ttgaggttat cagttcgatg cacaatcagc agcgcataaa 8040
atatgcacaa gaacaggagc acccttcgca ttaagctgtg gtggtaacaa gtagtgccgg 8100
gctaccatca gcgagcatga tgcgctccca cagcattcgc cttggcagta tggaagttcc 8160
tcgctccagt tcgggccggt atccaccgca cctggtgttt aaacggattt aaattgcagg 8220
ggcagtgagc gcaacgcaat taatgtaagt tagctcactc attaggcacc ccaggcttga 8280
cactttatgc ttccggctcg tataatgtgt ggaattgtga gcggataaca ataacaattt 8340
aaatcaggat ctaggaacca aggagagtgg catatgtttg cagaggatga acaagtgaag 8400
gcggcggtac cagatcagga agttgtggaa gcgatccgcg caccgggtct gcgcctggct 8460
caaatcatgg cgacggtgat ggagcgctac gccgaccgtc cggccgttgg tcaacgtgct 8520
tctgagccgg ttaccgagag cggccgtacg acgtttcgtc tgctgccgga gtttgagacg 8580
ttgacctacc gtgaactgtg ggcgcgtgtc cgtgcagtcg ccgcagcttg gcacggtgac 8640
gctgagcgtc cactgcgcgc aggtgacttc gtcgcgctgc tgggctttgc cggtatcgac 8700
tacggcaccc tggacttggc gaacatccac ctgggcttgg ttaccgtccc gctgcagtct 8760
ggcgcgaccg ctccgcaact ggcggcgatc ctggccgaaa cgaccccgcg tgtcttggcg 8820
gcgacgccgg atcatctgga tattgcggtt gagttgctga ctggtggcgc gagcccggaa 8880
cgcttggttg tgttcgacta ccgtccggca gatgatgacc accgtgcagc attggagagc 8940
gcacgtcgcc gtttgagcga tgcaggcagc gcggtcgttg ttgaaacctt ggacgcggtg 9000
cgtgctcgtg gttccgaact gccggcagca ccgctgttcg tcccggctgc ggatgaagat 9060
ccgttggcgc tgctgattta cacgagcggt agcaccggca ccccgaaagg cgcaatgtat 9120
accgagcgcc tgaatcgtac gacctggctg agcggtgcga agggcgtggg cctgacgttg 9180
ggttatatgc cgatgagcca tatcgcgggt cgtgcgagct tcgcgggtgt gctggcgcgt 9240
ggtggtaccg tctactttac cgcccgtagc gatatgagca ctctgtttga ggatttggcg 9300
ctggtccgtc cgacggagat gttcttcgtt ccgcgcgtgt gcgacatgat ctttcagcgt 9360
tatcaagcgg agttgtcgcg tcgtgcgcca gccgcagcgg caagccctga actggaacag 9420
gaactgaaaa ccgagctgcg tctgtccgcg gttggcgacc gcctgctggg tgcgattgcg 9480
ggttctgcac cgctgagcgc ggagatgcgt gagtttatgg agtccttgct ggatctggag 9540
ttgcatgacg gctacggttc caccgaggcc ggcatcggtg tcctgcaaga caatatcgtt 9600
caacgtccgc cggttattga ttacaagctg gtggacgttc cggagttggg ctatttccgt 9660
accgaccagc cgcaccctcg cggtgaactg ctgctgaaaa cggaaggtat gattccgggt 9720
tatttccgtc gcccggaagt taccgcggag attttcgatg aggacggctt ctatcgtacg 9780
ggtgatatcg ttgcggaact ggagccagac cgcctgatct atctggaccg tcgcaataac 9840
gtactgaagc tggcgcaagg cgagtttgtc acggtggccc atctggaagc agtgttcgcg 9900
acgtctccgc tgatccgtca gatctacatc tatggtaaca gcgagcgtag ctttttgctg 9960
gcagtcattg tgccgaccgc ggacgcgctg gcggacggtg tgaccgatgc cctgaacacc 10020
gctctgactg agtcgctgcg ccagttggcg aaagaagccg gtctgcagag ctatgaactg 10080
ccgcgtgagt tcctggtcga gacggagccg ttcaccgttg agaatggtct gctgagcggt 10140
attgcgaaac tgctgcgtcc gaagctgaaa gaacactacg gtgaacgcct ggagcagttg 10200
tatcgcgaca ttgaagccaa tcgcaacgat gaactgatcg agctgcgccg taccgcagcg 10260
gagttgccgg ttctggaaac tgtgacgcgt gcggcacgca gcatgctggg tctggccgcg 10320
agcgaactgc gtccagacgc gcattttacc gacctgggtg gtgactctct gtcggcgctg 10380
tcctttagca ccctgctgca agatatgttg gaagttgagg tgccggtggg cgttattgtg 10440
tctccggcaa acagcctggc tgacctggcc aagtatattg aggcggaacg tcactccggt 10500
gtccgccgtc cgagcctgat cagcgtgcac ggcccaggta ccgagattcg cgctgcagat 10560
ctgacgctgg acaaattcat tgacgagcgc accctggcag cggcgaaggc agttccggct 10620
gcacctgccc aagcacagac cgtgctgctg accggtgcaa atggttacct gggtcgtttc 10680
ttgtgcctgg aatggctgca gcgtctggat caaaccggcg gtacgctggt ctgtattgtg 10740
cgcggcaccg atgcggcagc agcgcgtaag cgcctggatg cggttttcga cagcggtgat 10800
cctgagctgc tggatcacta ccgtaagctg gcagccgagc acctggaagt tctggcgggt 10860
gacatcggtg acccgaacct gggtctggat gaggccacgt ggcagcgcct ggccgcgacc 10920
gtggatctga ttgtgcatcc ggctgctttg gttaatcacg tgctgccgta cagccagctg 10980
ttcggtccga acgtcgtcgg caccgcagag attattcgcc tggcgattac cgagcgtcgt 11040
aaaccggtga cctacctgag cactgtcgcg gttgccgccc aagtggaccc tgcgggcttc 11100
gatgaagaac gtgacatccg cgagatgagc gcggtccgta gcattgacgc gggctacgcg 11160
aacggctatg gtaatagcaa atgggctggt gaggttctgc tgcgcgaggc acacgatctg 11220
tgtggtctgc cggtggccgt attccgcagc gatatgattc tggcacactc caaatacgtt 11280
ggccagctga acgtgccgga cgtttttacg cgtctgattc tgagcctggc cctgacgggc 11340
atcgctccgt atagctttta cggtactgac agcgccggtc aacgtcgtcg tgcacactat 11400
gacggcctgc cggcagattt cgtcgccgaa gctattacca cgctgggcgc tcgcgcagaa 11460
agcggctttc acacctacga cgtttggaac ccgtacgacg acggtatttc cctggacgaa 11520
tttgtggact ggctgggcga ttttggcgtt ccgattcaac gtatcgatga ttatgacgag 11580
tggttccgcc gtttcgaaac cgcgatccgt gcgctgccgg agaaacagcg cgacgcgagc 11640
ctgctgccgc tgctggatgc ccatcgtcgt ccattgcgtg cagtgcgtgg tagcctgttg 11700
ccggcgaaga attttcaggc tgcggtccag tcggcacgca tcggtccgga ccaggatatc 11760
ccgcatctga gcccgcaact gatcgataag tacgtcaccg atttgcgtca tttgggcctg 11820
ctgtaataag tttaaacgag aaggagttct atcatgattg aaaccatctt accagccggc 11880
gtcgaatcag cagagttact tgagtaccct gaagatctga aggcgcatcc ggctgaagag 11940
catctgatcg caaagagcgt agagaagcgt cgtcgcgact tcattggcgc acgtcattgc 12000
gcccgtctgg cactggcgga gctgggtgaa ccgccggttg cgattggcaa gggtgaacgt 12060
ggtgcgccga tttggccgcg tggtgtcgtg ggctctctga cccattgcga tggctatcgc 12120
gcagcggcgg ttgctcacaa aatgcgtttt cgcagcatcg gcatcgacgc cgaaccgcac 12180
gcgaccctgc cggaaggtgt cctggattcg gttagcctgc cgcctgagcg tgagtggctg 12240
aaaaccaccg acagcgcact gcacctggac cgtttgctgt tttgtgcgaa agaagcaact 12300
tacaaagcgt ggtggccgct gacggcacgt tggctgggtt tcgaagaagc gcacattacc 12360
ttcgaaatcg aggatggtag cgccgactct ggtaatggca cgtttcacag cgaactgctg 12420
gtgccgggtc agaccaatga cggtggtacc ccgctgctgt ctttcgacgg tcgctggctg 12480
atcgctgatg gcttcatcct gacggcgatt gcatacgcat gataaattaa cctaggctgc 12540
tgccaccgct gagcaataac tagcataacc ccttggggcc tctaaacggg tcttgagggg 12600
ttttttgctg agctcgagtg accccagccg cccctcatgc caaccgagcc cattaagcgc 12660
agagtcggcc gcaactatct cggggacgca taaacacgca gcgatttacc aaggagttcg 12720
gctaggtcaa tccgcaattc cctttgcctg gccggagatg ccgcgagcaa acaatgtgtc 12780
cggtcgctac cagatggact ttgtgggcgg aggattgcac cagacgcttc agcgcagcgt 12840
cgtacgatga atcggaaggc ccggtaagca attgaagaac cgctgaccac ctcccatccg 12900
acaatgcaag ggtgccccgc tcccagcgcg acacggttgc ctgatccaca cccattaatt 12960
cagctaggtg actttgcttc atatgacgaa gcaaccgcgc cctccgcacc tgccgccccc 13020
tgtcattcgt caacattctt cagcacctca atgtcgttcg tagtgagcct cattttttca 13080
agaccgccga tgatgagagc caggcctcgc tcgaatgccg cgtccggacc gccttcgtag 13140
acgattttca tcgcgctctg taggcgcgcc ggcatcgtag acgctgaggt ggtcaactga 13200
tcttcgcccc gctcctcggc gtctgcctcg ctagcttgct gctcaagaac agcgccgacg 13260
gtgaagtagc tgattgccat caacgcatag gtcgcgtcac ctgccgaaaa gccagcatcg 13320
caaaggaagc gaagctgcgc gtcggctttt tccatctgcg gcgcggctgg ccgcgtcccg 13380
gcatgaatac gcgcgccatc gcgataagcg agcaacgccc gtcgaaaact gcatgcattg 13440
cccttcagga acgaacgcca gtcgtcgtca tcccttggcg tcgaatgcgt gtgatttatc 13500
gtcagcatgg cttcggcaag tgcgtcgagc aacgcacgct tgttcttgaa atgccagtag 13560
agcgctggct gttgcacccc gaggcgctca gccagtcggc gcgtcgttag accttccatg 13620
cccacgtcgt taagcagttc gagcgcggtt cggatcacgg cctcgcgttg gagcttgttc 13680
attcgcgaa 13689
<210> 25
<211> 13803
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 载体
<400> 25
ttctcatgtt tgacagctta tcatcgataa gctttaatgc ggtagtttat cacagttaaa 60
ttgctaacgc agtcaggcac cgtgtatgaa atctaacaat gcgctcatcg tcatcctcgg 120
caccgtcacc ctggatgctg taggcatagg cttggttatg ccggtactgc cgggcctctt 180
gcgggatatc gtccattccg acagcatcgc cagtcactat ggcgtgctgc tagcgctata 240
tgcgttgatg caatttctat gcgcacccgt tctcggagca ctgtccgacc gctttggccg 300
ccgcccagtc ctgctcgctt cgctacttgg agccactatc gactacgcga tcatggcgac 360
cacacccgtc ctgtggatcc tctacgccgg acgcatcgtg gccggcatca ccggcgccac 420
aggtgcggtt gctggcgcct atatcgccga catcaccgat ggggaagatc gggctcgcca 480
cttcgggctc atgagcgctt gtttcggcgt gggtatggtg gcaggccccg tggccggggg 540
actgttgggc gccatctcct tgcatgcacc attccttgcg gcggcggtgc tcaacggcct 600
caacctacta ctgggctgct tcctaatgca ggagtcgcat aagggagagc gtcgaccgat 660
gcccttgaga gccttcaacc cagtcagctc cttccggtgg gcgcggggca tgactatcgt 720
cgccgcactt atgactgtct tctttatcat gcaactcgta ggacaggtgc cggcagcgct 780
ctgggtcatt ttcggcgagg accgctttcg ctggagcgcg acgatgatcg gcctgtcgct 840
tgcggtattc ggaatcttgc acgccctcgc tcaagccttc gtcactggtc ccgccaccaa 900
acgtttcggc gagaagcagg ccattatcgc cggcatggcg gccgacgcgc tgggctacgt 960
cttgctggcg ttcgcgacgc gaggctggat ggccttcccc attatgattc ttctcgcttc 1020
cggcggcatc gggatgcccg cgttgcaggc catgctgtcc aggcaggtag atgacgacca 1080
tcagggacag cttcaaggat cgctcgcggc tcttaccagc ctaacttcga tcactggacc 1140
gctgatcgtc acggcgattt atgccgcctc ggcgagcaca tggaacgggt tggcatggat 1200
tgtaggcgcc gccctatacc ttgtctgcct ccccgcgttg cgtcgcggtg catggagccg 1260
ggccacctcg acctgaatgg aagccggcgg cacctcgcta acggattcac cactccaaga 1320
attggagcca atcaattctt gcggagaact gtgaatgcgc aaaccaaccc ttggcagaac 1380
atatccatcg cgtccgccat ctccagcagc cgcacgcggc gcatctcggg cagcgttggg 1440
tcctggccac gggtgcgcat gatcgtgctc ctgtcgttga ggacccggct aggctggcgg 1500
ggttgcctta ctggttagca gaatgaatca ccgatacgcg agcgaacgtg aagcgactgc 1560
tgctgcaaaa cgtctgcgac ctgagcaaca acatgaatgg tcttcggttt ccgtgtttcg 1620
taaagtctgg aaacgcggaa gtcccctacg tgctgctgaa gttgcccgca acagagagtg 1680
gaaccaaccg gtgataccac gatactatga ctgagagtca acgccatgag cggcctcatt 1740
tcttattctg agttacaaca gtccgcaccg ctgccggtag ctacttgact atccggctgc 1800
actagccctg cgtcagatgg ctctgatcca aggcaaactg ccaaaatatc tgctggcacc 1860
ggaagtcagc gccctgcacc attatgttcc ggatctgcat cgcaggatgc tgctggctac 1920
cctgtggaac acctacatct gtattaacga agcgctggca ttgaccctga gtgatttttc 1980
tctggtgccg ccctatccct ttgtgcagct tgccacgctc aaaggggttt gaggtccaac 2040
cgtacgaaaa cgtacggtaa gaggaaaatt atcgtctgaa aaatcgatta gtagacaaga 2100
aagtccgtta agtgccaatt ttcgattaaa aagacaccgt tttgatggcg ttttccaatg 2160
tacattatgt ttcgatatat cagacagtta cttcactaac gtacgttttc gttctattgg 2220
ccttcagacc ccatatcctt aatgtccttt atttgctggg gttatcagat ccccccgaca 2280
cgtttaatta atgctttctc cgccggagat cgacgcacag gcttctgtgt ctatgatgtt 2340
atttcttaat aatcatccag gtattctctt tatcaccata cgtagtgcga gtgtccacct 2400
taacgcaggg ctttccgtca cagcgcgata tgtcagccag cggggctttc ttttgccaga 2460
ccgcttccat cctctgcatt tcagcaatct ggctataccc gtcattcata aaccacgtaa 2520
atgccgtcac gcaggaagcc aggacgaaga atatcgtcag tacaagataa atcgcggatt 2580
tccacgtata gcgtgacatc tcacgacgca tttcatggat catcgctttc gccgtatcgg 2640
cagcctgatt cagcgcttct gtcgccggtt tctgctgtgc taatccggct tgtttcagtt 2700
ctttctcaac ctgagtgagc gcggaactca ccgatttcct gacggtgtca gtcatattac 2760
cggacgcgct gtccagctca cgaatgaccc tgctcagcgt ttcactttgc tgctgtaatt 2820
gtgatgaggc ggcctgaaac tgttctgtca gagaagtaac acgcttttcc agcgcctgat 2880
gatgcccgat aagggcggca atttgtttaa tttcgtcgct catacaaaat cctgcctatc 2940
gtgagaatga ccagccttta tccggcttct gtcgtatctg ttcggcgagt cgctgtcgtt 3000
ctttctcctg ctgacgctgt ttttccgcca gacgttcgcg ctctctctgc ctttccatct 3060
cctgatgtat cccctggaac tccgccatcg catcgttaac aagggactga agatcgattt 3120
cttcctgtat atccttcatg gcatcactga ccagtgcgtt cagcttgtca ggctcttttt 3180
caaaatcaaa cgttctgccg gaatgggatt cctgctcagg ctctgacttc agctcctgtt 3240
ttagcgtcag agtatccctc tcgctgaggg cttcccgtaa cgaggtagtc acgtcaatta 3300
cgctgtcacg ttcatcacgg gactgctgca cctgcctttc agcctccctg cgctcaagaa 3360
tggcctgtag ctgctcagta tcgaatcgct gaacctgacc cgcgcccaga tgccgctcag 3420
gctcacggtc aatgccctgc gccttcaggg aacgggaatc aacccggtca gcgtgctgat 3480
accgttcaag gtgcttattc tggaggtcag cccagcgtct ccctctgggc aacaaggtat 3540
tctttgcgtt cggtcggtgt ttccccgaaa cgtgcctttt ttgcgccacc gcgtccggct 3600
ctttggtgtt agcccgttta aaatactgct cagggtcacg gtgaataccg tcattaatgc 3660
gttcagagaa catgatatgg gcgtggggct gctcgccacc ggctatcgct gctttcggat 3720
tatggatagc gaactgatag gcatggcggt cgccaatttc ctgttggaca aaatcgcgga 3780
caagctcaag acgttgttcg ggttttaact cacgcggcag ggcaatctcg atttcacggt 3840
aggtacagcc gttggcacgt tcagacgtgt cagcggcttt ccagaactcg gacggtttat 3900
gcgctgccca cgccggcata ttgccggact ccttgtgctc aaggtcggag tctttttcac 3960
gggcatactt tccctcacgc gcaatataat cggcatgagg agaggcactg ccttttccgc 4020
cggtttttac gctgagatga taggatgcca tcgtgtttta tcccgctgaa gggcgcacgt 4080
ttctgaacga agtgaagaaa gtctaagtgc gccctgataa ataaaagagt tatcagggat 4140
tgtagtggga tttgacctcc tctgccatca tgagcgtaat cattccgtta gcattcagga 4200
ggtaaacagc atgaataaaa gcgaaaaaac aggaacaatg ggcagcagaa agagtgcagt 4260
atattcgcgg cttaaagtcg ccgaatgagc aacagaaact tatgctgata ctgacggata 4320
aagcagataa aacagcacag gatatcaaaa cgctgtccct gctgatgaag gctgaacagg 4380
cagcagagaa agcgcaggaa gccagagcga aagtcatgaa cctgatacag gcagaaaagc 4440
gagccgaagc cagagccgcc cgtaaagccc gtgaccatgc tctgtaccag tctgccggat 4500
tgcttatcct ggcgggtctg gttgacagta agacgggtaa gcctgttgat gataccgctg 4560
ccttactggg tgcattagcc agtctgaatg acctgtcacg ggataatccg aagtggtcag 4620
actggaaaat cagagggcag gaactgctga acagcaaaaa gtcagatagc accacatagc 4680
agacccgcca taaaacgccc tgagaagccc gtgacgggct tttcttgtat tatgggtagt 4740
ttccttgcat gaatccataa aaggcgcctg tagtgccatt tacccccatt cactgccaga 4800
gccgtgagcg cagcgaactg aatgtcacga aaaagacagc gactcaggtg cctgatggtc 4860
ggagacaaaa ggaatattca gcgatttgcc cgagcttgcg agggtgctac ttaagccttt 4920
agggttttaa ggtctgtttt gtagaggagc aaacagcgtt tgcgacatcc ttttgtaata 4980
ctgcggaact gactaaagta gtgagttata cacagggctg ggatctattc tttttatctt 5040
tttttattct ttctttattc tataaattat aaccacttga atataaacaa aaaaaacaca 5100
caaaggtcta gcggaattta cagagggtct agcagaattt acaagttttc cagcaaaggt 5160
ctagcagaat ttacagatac ccacaactca aaggaaaagg actagtaatt atcattgact 5220
agcccatctc aattggtata gtgattaaaa tcacctagac caattgagat gtatgtctga 5280
attagttgtt ttcaaagcaa atgaactagc gattagtcgc tatgacttaa cggagcatga 5340
aaccaagcta attttatgct gtgtggcact actcaacccc acgattgaaa accctacaag 5400
gaaagaacgg acggtatcgt tcacttataa ccaatacgct cagatgatga acatcagtag 5460
ggaaaatgct tatggtgtat tagctaaagc aaccagagag ctgatgacga gaactgtgga 5520
aatcaggaat cctttggtta aaggctttga gattttccag tggacaaact atgccaagtt 5580
ctcaagcgaa aaattagaat tagtttttag tgaagagata ttgccttatc ttttccagtt 5640
aaaaaaattc ataaaatata atctggaaca tgttaagtct tttgaaaaca aatactctat 5700
gaggatttat gagtggttat taaaagaact aacacaaaag aaaactcaca aggcaaatat 5760
agagattagc cttgatgaat ttaagttcat gttaatgctt gaaaataact accatgagtt 5820
taaaaggctt aaccaatggg ttttgaaacc aataagtaaa gatttaaaca cttacagcaa 5880
tatgaaattg gtggttgata agcgaggccg cccgactgat acgttgattt tccaagttga 5940
actagataga caaatggatc tcgtaaccga acttgagaac aaccagataa aaatgaatgg 6000
tgacaaaata ccaacaacca ttacatcaga ttcctaccta cgtaacggac taagaaaaac 6060
actacacgat gctttaactg caaaaattca gctcaccagt tttgaggcaa aatttttgag 6120
tgacatgcaa agtaagcatg atctcaatgg ttcgttctca tggctcacgc aaaaacaacg 6180
aaccacacta gagaacatac tggctaaata cggaaggatc tgaggttctt atggctcttg 6240
tatctatcag tgaagcatca agactaacaa acaaaagtag aacaactgtt caccgttaga 6300
tatcaaaggg aaaactgtcc atatgcacag atgaaaacgg tgtaaaaaag atagatacat 6360
cagagctttt acgagttttt ggtgcattta aagctgttca ccatgaacag atcgacaatg 6420
taacagatga acagcatgta acacctaata gaacaggtga aaccagtaaa acaaagcaac 6480
tagaacatga aattgaacac ctgagacaac ttgttacagc tcaacagtca cacatagaca 6540
gcctgaaaca ggcgatgctg cttatcgaat caaagctgcc gacaacacgg gagccagtga 6600
cgcctcccgt ggggaaaaaa tcatggcaat tctggaagaa atagcgcttt cagccggcaa 6660
acctgaagcc ggatctgcga ttctgataac aaactagcaa caccagaaca gcccgtttgc 6720
gggcagcaaa acccgtactt ttggacgttc cggcggtttt ttgtggcgag tggtgttcgg 6780
gcggtgcgcg caagatccat tatgttaaac gggcgagttt acatctcaaa accgcccgct 6840
taacaccatc agaaatcctc agcgcgattt taagcaccaa cccccccccg taacacccaa 6900
atccatactg aaagtggctt tgttgaataa atcgaacttt tgctgagttg aaggatcaga 6960
tcacgcatcc tcccgacaac acagaccatt ccgtggcaaa gcaaaagttc agaatcacca 7020
actggtccac ctacaacaaa gctctcatca accgtggctc cctcactttc tggctggatg 7080
atgaggcgat tcaggcctgg tatgagtcgg caacaccttc atcacgagga aggccccagc 7140
gctattctga tctcgccatc accaccgttc tggtgattaa acgcgtattc cggctgaccc 7200
tgcgggctgc gcagggtttt attgattcca tttttgccct gatgaacgtt ccgttgcgct 7260
gcccggatta caccagtgtc agtaagcggg caaagtcggt taatgtcagt ttcaaaacgt 7320
ccacccgggg tgaaatcgca cacctggtga ttgattccac cgggctgaag gtctttggtg 7380
aaggcgaatg gaaagtcaga aagcacggca aagagcgccg tcgtatctgg cgaaagttgc 7440
atcttgctgt tgacagcaac acacatgaag ttgtctgtgc agacctgtcg ctgaataacg 7500
tcacggactc agaagccttc ccgggcctta tccggcagac tcacagaaaa atcagggcag 7560
ccgcggcaga cggggcttac gatacccggc tctgtcacga tgaactgcgc cgcaaaaaaa 7620
tcagcgcgct tattcctccc cgaaaaggtg cgggttactg gcccggtgaa tatgcagacc 7680
gtaaccgtgc agtggctaat cagcgaatga ccgggagtaa tgcgcggtgg aaatggacaa 7740
cagattacaa ccgtcgctcg atagcggaaa cggcgatgta ccgggtaaaa cagctgttcg 7800
ggggttcact gacgctgcgt gactacgatg gtcaggttgc ggaggctatg gccctggtac 7860
gagcgctgaa caaaatgacg aaagcaggta tgcctgaaag cgtgcgtatt gcctgaaaac 7920
acaacccgct acgggggaga cttacccgaa atctgattta ttcaacaaag ccgggtgtgg 7980
tgaactacaa agcagacccg ttgaggttat cagttcgatg cacaatcagc agcgcataaa 8040
atatgcacaa gaacaggagc acccttcgca ttaagctgtg gtggtaacaa gtagtgccgg 8100
gctaccatca gcgagcatga tgcgctccca cagcattcgc cttggcagta tggaagttcc 8160
tcgctccagt tcgggccggt atccaccgca cctggtgttt aaacggattt aaattgcagg 8220
ggcagtgagc gcaacgcaat taatgtaagt tagctcactc attaggcacc ccaggcttga 8280
cactttatgc ttccggctcg tataatgtgt ggaattgtga gcggataaca ataacaattt 8340
aaatcaggat ctaggaacca aggagagtgg catatgacgg atacggttac ggacagcggt 8400
cgcgagcaga gactgacgga aagagttgaa cagctgtatg cgaatgaccc gcagtttcgt 8460
gcagccgctc cgagccctga ggttaccgag gcagcgcacc gtgccggtct gcgtctggca 8520
gaggttgtgg acatttacct gtccggttat gcggaccgtc cggcgctggg ccaacgtgcg 8580
tgcgaagtgg cacgcgatcc ggcgacgggt cgtgctgcca ccagcctgtt gagcggtttt 8640
gagactatca cctaccgcga actgggtgat cgtgtcgccg ccttggcggc tgcgtggcgt 8700
tccggcctgc cgggtggttt gcgtccgggt gatttcgtcg gtgttctggg ctttacgtcc 8760
atcgattatg tcgtgcacta cctggcttgc atccgtctgg gtgcggtgtt tgtgccgctg 8820
caaacgagca gcaccgccgc acaactggcg ccgattgtgg cggagacggc gcctcgcatc 8880
ctggcggtat ctgtggagtc cctggcgacc gcagttgacg tcgttctgga agcgccgagc 8940
gttcagcgtc tggtggtctt tgattacacc tctgatgacg atgagcagcg cggtcgttac 9000
gatgatgcac gcgctcgtct gcgcgacgca ggtcacggtg cggagatggt ggcgttggct 9060
gctgagttgg caagcggccg tgaacgtcct gcgccggaag cgcacgtccc aggtcagggt 9120
gaaaacccgc tggcaactct gatctatacc agcggtagca ccggcacccc aaagggtgca 9180
atgtacaccg cggacatgat gacgcgtatc tggcaacgtc ctcactcccc gagcgtcgac 9240
atcggtcgtg tcattccggc gatccacctg cagtatatgc cgctgtccca cgtctacggt 9300
ctggagtggc tgatcgcgac cctgagctcc ggtggcattg gttatttcgc agccaaaagc 9360
gacatgagca ccctgttcga cgacattggt ctggtccgtc cgacggcgct gaacctggtt 9420
ccgcgcgtgt gtgatatgtt tttccgtcgc taccgtaaag agctggacca acgtgcaggt 9480
gacggtctga ccgcagagca gcgcgatgaa gccgttaaag ccgaactgcg ccaggatttc 9540
attggtggcc gtgtcattag cgcgatgtgc ggtagcgcac cgttgagcaa gcagatgcat 9600
gcgttcatgg agagcctgct ggatgtgacc gttgcggatg gctatggcgc caccgaaacg 9660
ggtggcggca ttatgcgttc gggtcgcatc cgtcgtccgc cggtcactga ttacaagctg 9720
gtggacgtgc cggaactggg ttacctgacg accgacaagc cgtacccgcg tggcgagttg 9780
cacctgaagg cgagcaacgt tatcccgggt tactttaagc atccggaact gagcgcgcag 9840
atttttgatg atgaaggttt ctacaaaacg ggtgacatta tggcggaact gggccctgac 9900
catctgatgt acctggaccg tagcaacaac gtgatcaagc tgagccaggg cgagtttgtg 9960
gcggtgagcc agctggaagc cacgttttcg accagcccgt acattcgtca gattttcctg 10020
tatggcagct ctgaacaacc gtttctgctg gcggttatcg tcccgaatgt tgatgcagtc 10080
ggtggtggcg atgcgcgtgc gttgatcgcc gagagcctgc agcagattgc ggcggacagc 10140
tacctgcacc cgtatgaggt gccacgcgac ttcctgctgg agccgcaacg ttttacccgc 10200
gataacggct tgctgtctgg tgttggtaaa ctgctgcgtc cggcactgaa agcgcgttac 10260
ggcgaacgtt tggacgcaat gtatgatgag attgaggcat ctcacggtaa tcaactggac 10320
gaattgcgta gcgcgagccg cgagttgccg acgattgaca ccgttcgccg tgccgctgcc 10380
gcgaccttgg gcctgccggc tgatgccgcc ctgcgtggcg acgcgaagtt tattgagctg 10440
ggtggcgatt ccctgagcgc attcagcttt gcgaccctgc tgtcggaaat ctttcacatc 10500
gacgtgccgg tgcaaactat cgttagcccg accgccacct tggcgaccat cgcgaattat 10560
gttgacggtg aacgcactag cgaatcgacg cgtccgacct tcgctagcgt gcatggtcgt 10620
ggtgcaaccg tggcacgtgc cgctgacttg acgctggcga agttcatcga tgacgatacg 10680
ctggcagcag cgccgcacct gccggctcca acgggtgcgg tcaacactgt gctgctgacc 10740
ggcgcaaatg gctacctggg ccgcttcctg tgcttggact ggctggaacg cctggccccg 10800
accggtggca ccgtaatttg tctggcgcgt ggcgccgatc cgacggcagg tcgccaacgt 10860
attgaggccg ctatcgacag cggcgatgcg gaattgagcc gtcgtttctg tcagctggcg 10920
gacaaacacc tgcaagttct ggtgggtgat gtgggtgctg cgaacctggg cctggacacc 10980
ccgacgtatc aacgcctggc gcgcagcgtt gatttggtcg tccacagcgc agccctggtt 11040
aatcatgtgc tgccgtatag ccaattgttc ggtccgaacg tggttggtac cgcagagatc 11100
gtcaagctgg cgatttccga acgcctgaaa ccgattaact acatttccac ggttgcggtc 11160
accaccctgc cggacggcag cttcatcggc gaggacgcgg acgtccgttc tgcatctccg 11220
agccgtagcc tggacgagag ctacgctagc ggttatgcga ccagcaaatg ggcaggcgag 11280
gttctgctgc gcgaggcgca cgacctgtgc ggtgtgccgg ttgcagtttt tcgtagcgac 11340
atgattctgg cccatagcga cttcgcgggt cagttgaacg tgccggatat gttcacccgc 11400
ctgatcttga gcctggttgc gacgggtatc gcaccacgta gcttctatca gctggacgcg 11460
agcggtaatc gtcagcgtgc gcattacgac ggcctgccag cggatttcac tgctgaggca 11520
atcacgacgc tgggtgcacg tacccgccaa ggctaccata cctataatgt gctgaatacc 11580
cacgatgatg gcgtctccct ggacaccttt gttgattggc tgattgccga tggccacaaa 11640
atcgagcgcg tggacgacta cgacgagtgg ctggcgcgtt ttaccgctgc gatgaaatct 11700
ctgccggata atcagcgcaa aagcagcctg ctgccactga tgagcgcgta cgcgaaaccg 11760
ggccaaccta cccatggcac cggtatgccg gctgagaagt tccgcgcagc ggtccaaagc 11820
gctggtattg gtgccactcg tgatgtcccg catgttaccc aggccctgat tgacaagtat 11880
gttgcggatc tgcaacgttt gggcctgctg cgtacccgcg ctggtgccca tgcaggctaa 11940
taagtttaaa cgagaaggag ttctatcatg attgaaacca tcttaccagc cggcgtcgaa 12000
tcagcagagt tacttgagta ccctgaagat ctgaaggcgc atccggctga agagcatctg 12060
atcgcaaaga gcgtagagaa gcgtcgtcgc gacttcattg gcgcacgtca ttgcgcccgt 12120
ctggcactgg cggagctggg tgaaccgccg gttgcgattg gcaagggtga acgtggtgcg 12180
ccgatttggc cgcgtggtgt cgtgggctct ctgacccatt gcgatggcta tcgcgcagcg 12240
gcggttgctc acaaaatgcg ttttcgcagc atcggcatcg acgccgaacc gcacgcgacc 12300
ctgccggaag gtgtcctgga ttcggttagc ctgccgcctg agcgtgagtg gctgaaaacc 12360
accgacagcg cactgcacct ggaccgtttg ctgttttgtg cgaaagaagc aacttacaaa 12420
gcgtggtggc cgctgacggc acgttggctg ggtttcgaag aagcgcacat taccttcgaa 12480
atcgaggatg gtagcgccga ctctggtaat ggcacgtttc acagcgaact gctggtgccg 12540
ggtcagacca atgacggtgg taccccgctg ctgtctttcg acggtcgctg gctgatcgct 12600
gatggcttca tcctgacggc gattgcatac gcatgataaa ttaacctagg ctgctgccac 12660
cgctgagcaa taactagcat aaccccttgg ggcctctaaa cgggtcttga ggggtttttt 12720
gctgagctcg agtgacccca gccgcccctc atgccaaccg agcccattaa gcgcagagtc 12780
ggccgcaact atctcgggga cgcataaaca cgcagcgatt taccaaggag ttcggctagg 12840
tcaatccgca attccctttg cctggccgga gatgccgcga gcaaacaatg tgtccggtcg 12900
ctaccagatg gactttgtgg gcggaggatt gcaccagacg cttcagcgca gcgtcgtacg 12960
atgaatcgga aggcccggta agcaattgaa gaaccgctga ccacctccca tccgacaatg 13020
caagggtgcc ccgctcccag cgcgacacgg ttgcctgatc cacacccatt aattcagcta 13080
ggtgactttg cttcatatga cgaagcaacc gcgccctccg cacctgccgc cccctgtcat 13140
tcgtcaacat tcttcagcac ctcaatgtcg ttcgtagtga gcctcatttt ttcaagaccg 13200
ccgatgatga gagccaggcc tcgctcgaat gccgcgtccg gaccgccttc gtagacgatt 13260
ttcatcgcgc tctgtaggcg cgccggcatc gtagacgctg aggtggtcaa ctgatcttcg 13320
ccccgctcct cggcgtctgc ctcgctagct tgctgctcaa gaacagcgcc gacggtgaag 13380
tagctgattg ccatcaacgc ataggtcgcg tcacctgccg aaaagccagc atcgcaaagg 13440
aagcgaagct gcgcgtcggc tttttccatc tgcggcgcgg ctggccgcgt cccggcatga 13500
atacgcgcgc catcgcgata agcgagcaac gcccgtcgaa aactgcatgc attgcccttc 13560
aggaacgaac gccagtcgtc gtcatccctt ggcgtcgaat gcgtgtgatt tatcgtcagc 13620
atggcttcgg caagtgcgtc gagcaacgca cgcttgttct tgaaatgcca gtagagcgct 13680
ggctgttgca ccccgaggcg ctcagccagt cggcgcgtcg ttagaccttc catgcccacg 13740
tcgttaagca gttcgagcgc ggttcggatc acggcctcgc gttggagctt gttcattcgc 13800
gaa 13803
<210> 26
<211> 13704
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 载体
<400> 26
ttctcatgtt tgacagctta tcatcgataa gctttaatgc ggtagtttat cacagttaaa 60
ttgctaacgc agtcaggcac cgtgtatgaa atctaacaat gcgctcatcg tcatcctcgg 120
caccgtcacc ctggatgctg taggcatagg cttggttatg ccggtactgc cgggcctctt 180
gcgggatatc gtccattccg acagcatcgc cagtcactat ggcgtgctgc tagcgctata 240
tgcgttgatg caatttctat gcgcacccgt tctcggagca ctgtccgacc gctttggccg 300
ccgcccagtc ctgctcgctt cgctacttgg agccactatc gactacgcga tcatggcgac 360
cacacccgtc ctgtggatcc tctacgccgg acgcatcgtg gccggcatca ccggcgccac 420
aggtgcggtt gctggcgcct atatcgccga catcaccgat ggggaagatc gggctcgcca 480
cttcgggctc atgagcgctt gtttcggcgt gggtatggtg gcaggccccg tggccggggg 540
actgttgggc gccatctcct tgcatgcacc attccttgcg gcggcggtgc tcaacggcct 600
caacctacta ctgggctgct tcctaatgca ggagtcgcat aagggagagc gtcgaccgat 660
gcccttgaga gccttcaacc cagtcagctc cttccggtgg gcgcggggca tgactatcgt 720
cgccgcactt atgactgtct tctttatcat gcaactcgta ggacaggtgc cggcagcgct 780
ctgggtcatt ttcggcgagg accgctttcg ctggagcgcg acgatgatcg gcctgtcgct 840
tgcggtattc ggaatcttgc acgccctcgc tcaagccttc gtcactggtc ccgccaccaa 900
acgtttcggc gagaagcagg ccattatcgc cggcatggcg gccgacgcgc tgggctacgt 960
cttgctggcg ttcgcgacgc gaggctggat ggccttcccc attatgattc ttctcgcttc 1020
cggcggcatc gggatgcccg cgttgcaggc catgctgtcc aggcaggtag atgacgacca 1080
tcagggacag cttcaaggat cgctcgcggc tcttaccagc ctaacttcga tcactggacc 1140
gctgatcgtc acggcgattt atgccgcctc ggcgagcaca tggaacgggt tggcatggat 1200
tgtaggcgcc gccctatacc ttgtctgcct ccccgcgttg cgtcgcggtg catggagccg 1260
ggccacctcg acctgaatgg aagccggcgg cacctcgcta acggattcac cactccaaga 1320
attggagcca atcaattctt gcggagaact gtgaatgcgc aaaccaaccc ttggcagaac 1380
atatccatcg cgtccgccat ctccagcagc cgcacgcggc gcatctcggg cagcgttggg 1440
tcctggccac gggtgcgcat gatcgtgctc ctgtcgttga ggacccggct aggctggcgg 1500
ggttgcctta ctggttagca gaatgaatca ccgatacgcg agcgaacgtg aagcgactgc 1560
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taaagtctgg aaacgcggaa gtcccctacg tgctgctgaa gttgcccgca acagagagtg 1680
gaaccaaccg gtgataccac gatactatga ctgagagtca acgccatgag cggcctcatt 1740
tcttattctg agttacaaca gtccgcaccg ctgccggtag ctacttgact atccggctgc 1800
actagccctg cgtcagatgg ctctgatcca aggcaaactg ccaaaatatc tgctggcacc 1860
ggaagtcagc gccctgcacc attatgttcc ggatctgcat cgcaggatgc tgctggctac 1920
cctgtggaac acctacatct gtattaacga agcgctggca ttgaccctga gtgatttttc 1980
tctggtgccg ccctatccct ttgtgcagct tgccacgctc aaaggggttt gaggtccaac 2040
cgtacgaaaa cgtacggtaa gaggaaaatt atcgtctgaa aaatcgatta gtagacaaga 2100
aagtccgtta agtgccaatt ttcgattaaa aagacaccgt tttgatggcg ttttccaatg 2160
tacattatgt ttcgatatat cagacagtta cttcactaac gtacgttttc gttctattgg 2220
ccttcagacc ccatatcctt aatgtccttt atttgctggg gttatcagat ccccccgaca 2280
cgtttaatta atgctttctc cgccggagat cgacgcacag gcttctgtgt ctatgatgtt 2340
atttcttaat aatcatccag gtattctctt tatcaccata cgtagtgcga gtgtccacct 2400
taacgcaggg ctttccgtca cagcgcgata tgtcagccag cggggctttc ttttgccaga 2460
ccgcttccat cctctgcatt tcagcaatct ggctataccc gtcattcata aaccacgtaa 2520
atgccgtcac gcaggaagcc aggacgaaga atatcgtcag tacaagataa atcgcggatt 2580
tccacgtata gcgtgacatc tcacgacgca tttcatggat catcgctttc gccgtatcgg 2640
cagcctgatt cagcgcttct gtcgccggtt tctgctgtgc taatccggct tgtttcagtt 2700
ctttctcaac ctgagtgagc gcggaactca ccgatttcct gacggtgtca gtcatattac 2760
cggacgcgct gtccagctca cgaatgaccc tgctcagcgt ttcactttgc tgctgtaatt 2820
gtgatgaggc ggcctgaaac tgttctgtca gagaagtaac acgcttttcc agcgcctgat 2880
gatgcccgat aagggcggca atttgtttaa tttcgtcgct catacaaaat cctgcctatc 2940
gtgagaatga ccagccttta tccggcttct gtcgtatctg ttcggcgagt cgctgtcgtt 3000
ctttctcctg ctgacgctgt ttttccgcca gacgttcgcg ctctctctgc ctttccatct 3060
cctgatgtat cccctggaac tccgccatcg catcgttaac aagggactga agatcgattt 3120
cttcctgtat atccttcatg gcatcactga ccagtgcgtt cagcttgtca ggctcttttt 3180
caaaatcaaa cgttctgccg gaatgggatt cctgctcagg ctctgacttc agctcctgtt 3240
ttagcgtcag agtatccctc tcgctgaggg cttcccgtaa cgaggtagtc acgtcaatta 3300
cgctgtcacg ttcatcacgg gactgctgca cctgcctttc agcctccctg cgctcaagaa 3360
tggcctgtag ctgctcagta tcgaatcgct gaacctgacc cgcgcccaga tgccgctcag 3420
gctcacggtc aatgccctgc gccttcaggg aacgggaatc aacccggtca gcgtgctgat 3480
accgttcaag gtgcttattc tggaggtcag cccagcgtct ccctctgggc aacaaggtat 3540
tctttgcgtt cggtcggtgt ttccccgaaa cgtgcctttt ttgcgccacc gcgtccggct 3600
ctttggtgtt agcccgttta aaatactgct cagggtcacg gtgaataccg tcattaatgc 3660
gttcagagaa catgatatgg gcgtggggct gctcgccacc ggctatcgct gctttcggat 3720
tatggatagc gaactgatag gcatggcggt cgccaatttc ctgttggaca aaatcgcgga 3780
caagctcaag acgttgttcg ggttttaact cacgcggcag ggcaatctcg atttcacggt 3840
aggtacagcc gttggcacgt tcagacgtgt cagcggcttt ccagaactcg gacggtttat 3900
gcgctgccca cgccggcata ttgccggact ccttgtgctc aaggtcggag tctttttcac 3960
gggcatactt tccctcacgc gcaatataat cggcatgagg agaggcactg ccttttccgc 4020
cggtttttac gctgagatga taggatgcca tcgtgtttta tcccgctgaa gggcgcacgt 4080
ttctgaacga agtgaagaaa gtctaagtgc gccctgataa ataaaagagt tatcagggat 4140
tgtagtggga tttgacctcc tctgccatca tgagcgtaat cattccgtta gcattcagga 4200
ggtaaacagc atgaataaaa gcgaaaaaac aggaacaatg ggcagcagaa agagtgcagt 4260
atattcgcgg cttaaagtcg ccgaatgagc aacagaaact tatgctgata ctgacggata 4320
aagcagataa aacagcacag gatatcaaaa cgctgtccct gctgatgaag gctgaacagg 4380
cagcagagaa agcgcaggaa gccagagcga aagtcatgaa cctgatacag gcagaaaagc 4440
gagccgaagc cagagccgcc cgtaaagccc gtgaccatgc tctgtaccag tctgccggat 4500
tgcttatcct ggcgggtctg gttgacagta agacgggtaa gcctgttgat gataccgctg 4560
ccttactggg tgcattagcc agtctgaatg acctgtcacg ggataatccg aagtggtcag 4620
actggaaaat cagagggcag gaactgctga acagcaaaaa gtcagatagc accacatagc 4680
agacccgcca taaaacgccc tgagaagccc gtgacgggct tttcttgtat tatgggtagt 4740
ttccttgcat gaatccataa aaggcgcctg tagtgccatt tacccccatt cactgccaga 4800
gccgtgagcg cagcgaactg aatgtcacga aaaagacagc gactcaggtg cctgatggtc 4860
ggagacaaaa ggaatattca gcgatttgcc cgagcttgcg agggtgctac ttaagccttt 4920
agggttttaa ggtctgtttt gtagaggagc aaacagcgtt tgcgacatcc ttttgtaata 4980
ctgcggaact gactaaagta gtgagttata cacagggctg ggatctattc tttttatctt 5040
tttttattct ttctttattc tataaattat aaccacttga atataaacaa aaaaaacaca 5100
caaaggtcta gcggaattta cagagggtct agcagaattt acaagttttc cagcaaaggt 5160
ctagcagaat ttacagatac ccacaactca aaggaaaagg actagtaatt atcattgact 5220
agcccatctc aattggtata gtgattaaaa tcacctagac caattgagat gtatgtctga 5280
attagttgtt ttcaaagcaa atgaactagc gattagtcgc tatgacttaa cggagcatga 5340
aaccaagcta attttatgct gtgtggcact actcaacccc acgattgaaa accctacaag 5400
gaaagaacgg acggtatcgt tcacttataa ccaatacgct cagatgatga acatcagtag 5460
ggaaaatgct tatggtgtat tagctaaagc aaccagagag ctgatgacga gaactgtgga 5520
aatcaggaat cctttggtta aaggctttga gattttccag tggacaaact atgccaagtt 5580
ctcaagcgaa aaattagaat tagtttttag tgaagagata ttgccttatc ttttccagtt 5640
aaaaaaattc ataaaatata atctggaaca tgttaagtct tttgaaaaca aatactctat 5700
gaggatttat gagtggttat taaaagaact aacacaaaag aaaactcaca aggcaaatat 5760
agagattagc cttgatgaat ttaagttcat gttaatgctt gaaaataact accatgagtt 5820
taaaaggctt aaccaatggg ttttgaaacc aataagtaaa gatttaaaca cttacagcaa 5880
tatgaaattg gtggttgata agcgaggccg cccgactgat acgttgattt tccaagttga 5940
actagataga caaatggatc tcgtaaccga acttgagaac aaccagataa aaatgaatgg 6000
tgacaaaata ccaacaacca ttacatcaga ttcctaccta cgtaacggac taagaaaaac 6060
actacacgat gctttaactg caaaaattca gctcaccagt tttgaggcaa aatttttgag 6120
tgacatgcaa agtaagcatg atctcaatgg ttcgttctca tggctcacgc aaaaacaacg 6180
aaccacacta gagaacatac tggctaaata cggaaggatc tgaggttctt atggctcttg 6240
tatctatcag tgaagcatca agactaacaa acaaaagtag aacaactgtt caccgttaga 6300
tatcaaaggg aaaactgtcc atatgcacag atgaaaacgg tgtaaaaaag atagatacat 6360
cagagctttt acgagttttt ggtgcattta aagctgttca ccatgaacag atcgacaatg 6420
taacagatga acagcatgta acacctaata gaacaggtga aaccagtaaa acaaagcaac 6480
tagaacatga aattgaacac ctgagacaac ttgttacagc tcaacagtca cacatagaca 6540
gcctgaaaca ggcgatgctg cttatcgaat caaagctgcc gacaacacgg gagccagtga 6600
cgcctcccgt ggggaaaaaa tcatggcaat tctggaagaa atagcgcttt cagccggcaa 6660
acctgaagcc ggatctgcga ttctgataac aaactagcaa caccagaaca gcccgtttgc 6720
gggcagcaaa acccgtactt ttggacgttc cggcggtttt ttgtggcgag tggtgttcgg 6780
gcggtgcgcg caagatccat tatgttaaac gggcgagttt acatctcaaa accgcccgct 6840
taacaccatc agaaatcctc agcgcgattt taagcaccaa cccccccccg taacacccaa 6900
atccatactg aaagtggctt tgttgaataa atcgaacttt tgctgagttg aaggatcaga 6960
tcacgcatcc tcccgacaac acagaccatt ccgtggcaaa gcaaaagttc agaatcacca 7020
actggtccac ctacaacaaa gctctcatca accgtggctc cctcactttc tggctggatg 7080
atgaggcgat tcaggcctgg tatgagtcgg caacaccttc atcacgagga aggccccagc 7140
gctattctga tctcgccatc accaccgttc tggtgattaa acgcgtattc cggctgaccc 7200
tgcgggctgc gcagggtttt attgattcca tttttgccct gatgaacgtt ccgttgcgct 7260
gcccggatta caccagtgtc agtaagcggg caaagtcggt taatgtcagt ttcaaaacgt 7320
ccacccgggg tgaaatcgca cacctggtga ttgattccac cgggctgaag gtctttggtg 7380
aaggcgaatg gaaagtcaga aagcacggca aagagcgccg tcgtatctgg cgaaagttgc 7440
atcttgctgt tgacagcaac acacatgaag ttgtctgtgc agacctgtcg ctgaataacg 7500
tcacggactc agaagccttc ccgggcctta tccggcagac tcacagaaaa atcagggcag 7560
ccgcggcaga cggggcttac gatacccggc tctgtcacga tgaactgcgc cgcaaaaaaa 7620
tcagcgcgct tattcctccc cgaaaaggtg cgggttactg gcccggtgaa tatgcagacc 7680
gtaaccgtgc agtggctaat cagcgaatga ccgggagtaa tgcgcggtgg aaatggacaa 7740
cagattacaa ccgtcgctcg atagcggaaa cggcgatgta ccgggtaaaa cagctgttcg 7800
ggggttcact gacgctgcgt gactacgatg gtcaggttgc ggaggctatg gccctggtac 7860
gagcgctgaa caaaatgacg aaagcaggta tgcctgaaag cgtgcgtatt gcctgaaaac 7920
acaacccgct acgggggaga cttacccgaa atctgattta ttcaacaaag ccgggtgtgg 7980
tgaactacaa agcagacccg ttgaggttat cagttcgatg cacaatcagc agcgcataaa 8040
atatgcacaa gaacaggagc acccttcgca ttaagctgtg gtggtaacaa gtagtgccgg 8100
gctaccatca gcgagcatga tgcgctccca cagcattcgc cttggcagta tggaagttcc 8160
tcgctccagt tcgggccggt atccaccgca cctggtgttt aaacggattt aaattgcagg 8220
ggcagtgagc gcaacgcaat taatgtaagt tagctcactc attaggcacc ccaggcttga 8280
cactttatgc ttccggctcg tataatgtgt ggaattgtga gcggataaca ataacaattt 8340
aaatcaggat ctaggaacca aggagagtgg catatggaga gcactagagc aacccgcctg 8400
agacagagaa tcgcagccct gtacgcagat gacgcgcagg tccgtgacgc acgtccagac 8460
gaagctatct ctaccgcgct gcgcgaaccg ggcttgcgtt tgcgcgagct ggtcgcgacc 8520
gtcgttgatg gttatcgtga ccgtccggct ttggcggcac gtagcgtcca accggctgtc 8580
gacgcggcga ccggtgcgtg cgtggcgcgt ctgttgccgg agtacaccac gatgagctac 8640
ggtgagctgg gcctgcgcct gcgtgccgtt gcggcagcgt ggcagcacga cgatgagacg 8700
cgcttgcgtc caggcgaatt tgttgcgacg ttgggtttta cgtccccgga ttacgcagtg 8760
gtggacctgg cgtgcgtgtg ggcgggtgcg gttgcagtac cgttgcaagc gagcgccagc 8820
gtgacccagc tgacggcaat tctggcagaa accgcaccag cgatcctggc caccggtctg 8880
gataccctgc cgcatgccgt ggattgtgtc ctggcgggtg caacgccgcg tgcgctgcac 8940
gtgttcgact tcgatccggc aattgatgcg cagcgcaccg tttacgaagc agcatgcgca 9000
cgcttggcgg gcaccggcgt ccgcgttcgc acgttggcgg aagttgagga ccgtggtcgt 9060
gccctgccac cggcggttat tgatgatggt ccgggtgacg accgcctggc gttgctgatc 9120
tatacgagcg gtagcaccgg tacgccgaag ggcgcaatgt atactgagcg cttggttgct 9180
ctgatgtggc tgggccagcc gcaagttgca gcgctgacgg tcaattatct gccgctgagc 9240
cacgtcgcag gccgtctggc gctgttcggc ctgctggcgc gtggcggcac cgcgtatttc 9300
accgcccgtg cagacatgtc caccctgttt gaggatctgg ctctggcgcg tccgaccgag 9360
ctgtttgtcg taccgcgtgt gtgcgaaatg gttctgcaac gtttccaaac tgagcgtctg 9420
cgtcgccaag cggacgatga tcgcgtgaag gcagatctgc gcctggagct gttcggtgac 9480
cgcctgttga gcgttgtttg tggtagcgca ccactggctc ctgaactgaa agcgttcatg 9540
gagagcgtgc tggacctgac cttgcacgac ggttatggct ccaccgaagc aggtggtagc 9600
gtcgtcatcg acaccaccgt gcgtcgtccg ccggttctgg actatcgtct ggcggacgtg 9660
ccggagctgg gttactttcg tacggataaa ccgcatccgc gtggcgagct gctgctgaaa 9720
acgaccacca tgatcccggg ctactaccgt cgcccggagc tgaatgctca aatctttgat 9780
gaggacggtt tttaccgcac cggcgacgtg gttgcggagc tggcaccgga tcgcctggtg 9840
tacgttgacc gtcgcaataa cgttctgaag ctggcgcagg gtgaattcgt gacgattgca 9900
cgtttggaag cgattttcgc gaacagcccg ttggtccgcc aaatctttgt ttacggtaac 9960
agcgaacgtg cctatctgct ggccgtgatt gttccgtctc gtcaagcaat ggctggcgac 10020
ccggcgaccc tgaaaacccg tatcgcggag agcctgcagc tgattggtcg cgacgcggag 10080
ctggaagcgt acgagatccc tcgcgatttc ctgatcgaga cggagccgtt caccacggaa 10140
tccggcctgc tgtccggtat tggtaaaatc ctgcgtccgg cggtcgaagc acgctatcgc 10200
gatcgtctgg agcagctgta cgcggacctg gcagcagcgc agcaagacga gttggcagcc 10260
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attctgggcg gtaccgctag cgacctgtcc cctgcggccc actttaccga tttgggtggt 10380
gatagcctgg cggcgttggc gctgtcgaat ctgctgcgcg agattttcgc cgtagaggtt 10440
ccggtcggtg tgattaccgg tccggcgacc gatctgcgtg gcctggccgc acatatcgcg 10500
gcagaacgtg aaaaccgtac ggaaacgccg ctgttcgatc gtgtccatcc ggatcagatt 10560
ttgatccgtg cgaccgacct ggcgctggaa aagtttttcg atgcggaaga gctggcggca 10620
gccgcgaccg cagcaccgcc ggtagccgag ccgcgtgtgg ttttgctgac gggtgcgaac 10680
ggttacctgg gtcgcttcct gtgcctggag tggctggagc gtctggaccg tgtcgacggc 10740
cgtctgattt gtctggttcg tggcgcggac gaagcagcgg cactggctcg tctggaagcg 10800
gcgttcgaca gcggcgatcc tgagttggtg cgtcgcttta aagaactggc ccaacgtcgt 10860
ctgaccgtgg tggcgggtga tatcggcgag cctggcctgg gtctggcaac cgccacctgg 10920
cgccgtctgg ccgctgaggt tgaacatatc gttcaccctg ctgccctggt gaaccatgtc 10980
ctgccgtatc gccagctgtt tggcccgaac gttgcgggca cggcggagat cctgcgtctg 11040
gccctgacgg agcgccgcaa accgatcgat ttcttgagca cggttgccgt cgctgcgcag 11100
atcccggcag accgcttcgc cgaagatggt gacattcgtg tgatcagccc tactcgcact 11160
gtcgatcgtg gctatgcaaa tggttacggc aatagcaagt gggcggcaga agttctgctg 11220
cgtgcggcgc atgaccgctt cgatctgccg gtggcggtgt tccgtagcga tatgattctg 11280
gcccatggca gctttgccgg tcaattgaat attccggatg tctttacccg tctgttgctg 11340
tctctgttgg tgaccggcat tgccccagca tcttttcacg ccgctacggt cactggtgaa 11400
cgtccgcgtg ctcactatga tggtctgccg gctgatttca cggctgccgc gatcaccgcc 11460
ctgggtgccc gtacggctgg ctttcacacg tacgacgttc tgaacccgca cgatgacggt 11520
atcagcctgg acaccttcgt ggactggctg attgaagcgg gtcacccgat cgaacgtatt 11580
ccggagcaca gcgaatgggt cacccgcttt gagacggccc tgcacgcgct gccggagcgt 11640
cagcgtaagc attcgctgct gccgctgctg cacgcgtatc gtcgtccggt tccggccctg 11700
cgtggtagcg cgttgccagc tgcagagttt cgtgcagcgg tgcgtgctgc tggtattacc 11760
gcggacggtg acattccgca cctgacccgc gctctgattg aaaagtacgt cgccgacctg 11820
cgcttgcatg gtctgctgta ataagtttaa acgagaagga gttctatcat gattgaaacc 11880
atcttaccag ccggcgtcga atcagcagag ttacttgagt accctgaaga tctgaaggcg 11940
catccggctg aagagcatct gatcgcaaag agcgtagaga agcgtcgtcg cgacttcatt 12000
ggcgcacgtc attgcgcccg tctggcactg gcggagctgg gtgaaccgcc ggttgcgatt 12060
ggcaagggtg aacgtggtgc gccgatttgg ccgcgtggtg tcgtgggctc tctgacccat 12120
tgcgatggct atcgcgcagc ggcggttgct cacaaaatgc gttttcgcag catcggcatc 12180
gacgccgaac cgcacgcgac cctgccggaa ggtgtcctgg attcggttag cctgccgcct 12240
gagcgtgagt ggctgaaaac caccgacagc gcactgcacc tggaccgttt gctgttttgt 12300
gcgaaagaag caacttacaa agcgtggtgg ccgctgacgg cacgttggct gggtttcgaa 12360
gaagcgcaca ttaccttcga aatcgaggat ggtagcgccg actctggtaa tggcacgttt 12420
cacagcgaac tgctggtgcc gggtcagacc aatgacggtg gtaccccgct gctgtctttc 12480
gacggtcgct ggctgatcgc tgatggcttc atcctgacgg cgattgcata cgcatgataa 12540
attaacctag gctgctgcca ccgctgagca ataactagca taaccccttg gggcctctaa 12600
acgggtcttg aggggttttt tgctgagctc gagtgacccc agccgcccct catgccaacc 12660
gagcccatta agcgcagagt cggccgcaac tatctcgggg acgcataaac acgcagcgat 12720
ttaccaagga gttcggctag gtcaatccgc aattcccttt gcctggccgg agatgccgcg 12780
agcaaacaat gtgtccggtc gctaccagat ggactttgtg ggcggaggat tgcaccagac 12840
gcttcagcgc agcgtcgtac gatgaatcgg aaggcccggt aagcaattga agaaccgctg 12900
accacctccc atccgacaat gcaagggtgc cccgctccca gcgcgacacg gttgcctgat 12960
ccacacccat taattcagct aggtgacttt gcttcatatg acgaagcaac cgcgccctcc 13020
gcacctgccg ccccctgtca ttcgtcaaca ttcttcagca cctcaatgtc gttcgtagtg 13080
agcctcattt tttcaagacc gccgatgatg agagccaggc ctcgctcgaa tgccgcgtcc 13140
ggaccgcctt cgtagacgat tttcatcgcg ctctgtaggc gcgccggcat cgtagacgct 13200
gaggtggtca actgatcttc gccccgctcc tcggcgtctg cctcgctagc ttgctgctca 13260
agaacagcgc cgacggtgaa gtagctgatt gccatcaacg cataggtcgc gtcacctgcc 13320
gaaaagccag catcgcaaag gaagcgaagc tgcgcgtcgg ctttttccat ctgcggcgcg 13380
gctggccgcg tcccggcatg aatacgcgcg ccatcgcgat aagcgagcaa cgcccgtcga 13440
aaactgcatg cattgccctt caggaacgaa cgccagtcgt cgtcatccct tggcgtcgaa 13500
tgcgtgtgat ttatcgtcag catggcttcg gcaagtgcgt cgagcaacgc acgcttgttc 13560
ttgaaatgcc agtagagcgc tggctgttgc accccgaggc gctcagccag tcggcgcgtc 13620
gttagacctt ccatgcccac gtcgttaagc agttcgagcg cggttcggat cacggcctcg 13680
cgttggagct tgttcattcg cgaa 13704
<210> 27
<211> 13761
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 载体
<400> 27
ttctcatgtt tgacagctta tcatcgataa gctttaatgc ggtagtttat cacagttaaa 60
ttgctaacgc agtcaggcac cgtgtatgaa atctaacaat gcgctcatcg tcatcctcgg 120
caccgtcacc ctggatgctg taggcatagg cttggttatg ccggtactgc cgggcctctt 180
gcgggatatc gtccattccg acagcatcgc cagtcactat ggcgtgctgc tagcgctata 240
tgcgttgatg caatttctat gcgcacccgt tctcggagca ctgtccgacc gctttggccg 300
ccgcccagtc ctgctcgctt cgctacttgg agccactatc gactacgcga tcatggcgac 360
cacacccgtc ctgtggatcc tctacgccgg acgcatcgtg gccggcatca ccggcgccac 420
aggtgcggtt gctggcgcct atatcgccga catcaccgat ggggaagatc gggctcgcca 480
cttcgggctc atgagcgctt gtttcggcgt gggtatggtg gcaggccccg tggccggggg 540
actgttgggc gccatctcct tgcatgcacc attccttgcg gcggcggtgc tcaacggcct 600
caacctacta ctgggctgct tcctaatgca ggagtcgcat aagggagagc gtcgaccgat 660
gcccttgaga gccttcaacc cagtcagctc cttccggtgg gcgcggggca tgactatcgt 720
cgccgcactt atgactgtct tctttatcat gcaactcgta ggacaggtgc cggcagcgct 780
ctgggtcatt ttcggcgagg accgctttcg ctggagcgcg acgatgatcg gcctgtcgct 840
tgcggtattc ggaatcttgc acgccctcgc tcaagccttc gtcactggtc ccgccaccaa 900
acgtttcggc gagaagcagg ccattatcgc cggcatggcg gccgacgcgc tgggctacgt 960
cttgctggcg ttcgcgacgc gaggctggat ggccttcccc attatgattc ttctcgcttc 1020
cggcggcatc gggatgcccg cgttgcaggc catgctgtcc aggcaggtag atgacgacca 1080
tcagggacag cttcaaggat cgctcgcggc tcttaccagc ctaacttcga tcactggacc 1140
gctgatcgtc acggcgattt atgccgcctc ggcgagcaca tggaacgggt tggcatggat 1200
tgtaggcgcc gccctatacc ttgtctgcct ccccgcgttg cgtcgcggtg catggagccg 1260
ggccacctcg acctgaatgg aagccggcgg cacctcgcta acggattcac cactccaaga 1320
attggagcca atcaattctt gcggagaact gtgaatgcgc aaaccaaccc ttggcagaac 1380
atatccatcg cgtccgccat ctccagcagc cgcacgcggc gcatctcggg cagcgttggg 1440
tcctggccac gggtgcgcat gatcgtgctc ctgtcgttga ggacccggct aggctggcgg 1500
ggttgcctta ctggttagca gaatgaatca ccgatacgcg agcgaacgtg aagcgactgc 1560
tgctgcaaaa cgtctgcgac ctgagcaaca acatgaatgg tcttcggttt ccgtgtttcg 1620
taaagtctgg aaacgcggaa gtcccctacg tgctgctgaa gttgcccgca acagagagtg 1680
gaaccaaccg gtgataccac gatactatga ctgagagtca acgccatgag cggcctcatt 1740
tcttattctg agttacaaca gtccgcaccg ctgccggtag ctacttgact atccggctgc 1800
actagccctg cgtcagatgg ctctgatcca aggcaaactg ccaaaatatc tgctggcacc 1860
ggaagtcagc gccctgcacc attatgttcc ggatctgcat cgcaggatgc tgctggctac 1920
cctgtggaac acctacatct gtattaacga agcgctggca ttgaccctga gtgatttttc 1980
tctggtgccg ccctatccct ttgtgcagct tgccacgctc aaaggggttt gaggtccaac 2040
cgtacgaaaa cgtacggtaa gaggaaaatt atcgtctgaa aaatcgatta gtagacaaga 2100
aagtccgtta agtgccaatt ttcgattaaa aagacaccgt tttgatggcg ttttccaatg 2160
tacattatgt ttcgatatat cagacagtta cttcactaac gtacgttttc gttctattgg 2220
ccttcagacc ccatatcctt aatgtccttt atttgctggg gttatcagat ccccccgaca 2280
cgtttaatta atgctttctc cgccggagat cgacgcacag gcttctgtgt ctatgatgtt 2340
atttcttaat aatcatccag gtattctctt tatcaccata cgtagtgcga gtgtccacct 2400
taacgcaggg ctttccgtca cagcgcgata tgtcagccag cggggctttc ttttgccaga 2460
ccgcttccat cctctgcatt tcagcaatct ggctataccc gtcattcata aaccacgtaa 2520
atgccgtcac gcaggaagcc aggacgaaga atatcgtcag tacaagataa atcgcggatt 2580
tccacgtata gcgtgacatc tcacgacgca tttcatggat catcgctttc gccgtatcgg 2640
cagcctgatt cagcgcttct gtcgccggtt tctgctgtgc taatccggct tgtttcagtt 2700
ctttctcaac ctgagtgagc gcggaactca ccgatttcct gacggtgtca gtcatattac 2760
cggacgcgct gtccagctca cgaatgaccc tgctcagcgt ttcactttgc tgctgtaatt 2820
gtgatgaggc ggcctgaaac tgttctgtca gagaagtaac acgcttttcc agcgcctgat 2880
gatgcccgat aagggcggca atttgtttaa tttcgtcgct catacaaaat cctgcctatc 2940
gtgagaatga ccagccttta tccggcttct gtcgtatctg ttcggcgagt cgctgtcgtt 3000
ctttctcctg ctgacgctgt ttttccgcca gacgttcgcg ctctctctgc ctttccatct 3060
cctgatgtat cccctggaac tccgccatcg catcgttaac aagggactga agatcgattt 3120
cttcctgtat atccttcatg gcatcactga ccagtgcgtt cagcttgtca ggctcttttt 3180
caaaatcaaa cgttctgccg gaatgggatt cctgctcagg ctctgacttc agctcctgtt 3240
ttagcgtcag agtatccctc tcgctgaggg cttcccgtaa cgaggtagtc acgtcaatta 3300
cgctgtcacg ttcatcacgg gactgctgca cctgcctttc agcctccctg cgctcaagaa 3360
tggcctgtag ctgctcagta tcgaatcgct gaacctgacc cgcgcccaga tgccgctcag 3420
gctcacggtc aatgccctgc gccttcaggg aacgggaatc aacccggtca gcgtgctgat 3480
accgttcaag gtgcttattc tggaggtcag cccagcgtct ccctctgggc aacaaggtat 3540
tctttgcgtt cggtcggtgt ttccccgaaa cgtgcctttt ttgcgccacc gcgtccggct 3600
ctttggtgtt agcccgttta aaatactgct cagggtcacg gtgaataccg tcattaatgc 3660
gttcagagaa catgatatgg gcgtggggct gctcgccacc ggctatcgct gctttcggat 3720
tatggatagc gaactgatag gcatggcggt cgccaatttc ctgttggaca aaatcgcgga 3780
caagctcaag acgttgttcg ggttttaact cacgcggcag ggcaatctcg atttcacggt 3840
aggtacagcc gttggcacgt tcagacgtgt cagcggcttt ccagaactcg gacggtttat 3900
gcgctgccca cgccggcata ttgccggact ccttgtgctc aaggtcggag tctttttcac 3960
gggcatactt tccctcacgc gcaatataat cggcatgagg agaggcactg ccttttccgc 4020
cggtttttac gctgagatga taggatgcca tcgtgtttta tcccgctgaa gggcgcacgt 4080
ttctgaacga agtgaagaaa gtctaagtgc gccctgataa ataaaagagt tatcagggat 4140
tgtagtggga tttgacctcc tctgccatca tgagcgtaat cattccgtta gcattcagga 4200
ggtaaacagc atgaataaaa gcgaaaaaac aggaacaatg ggcagcagaa agagtgcagt 4260
atattcgcgg cttaaagtcg ccgaatgagc aacagaaact tatgctgata ctgacggata 4320
aagcagataa aacagcacag gatatcaaaa cgctgtccct gctgatgaag gctgaacagg 4380
cagcagagaa agcgcaggaa gccagagcga aagtcatgaa cctgatacag gcagaaaagc 4440
gagccgaagc cagagccgcc cgtaaagccc gtgaccatgc tctgtaccag tctgccggat 4500
tgcttatcct ggcgggtctg gttgacagta agacgggtaa gcctgttgat gataccgctg 4560
ccttactggg tgcattagcc agtctgaatg acctgtcacg ggataatccg aagtggtcag 4620
actggaaaat cagagggcag gaactgctga acagcaaaaa gtcagatagc accacatagc 4680
agacccgcca taaaacgccc tgagaagccc gtgacgggct tttcttgtat tatgggtagt 4740
ttccttgcat gaatccataa aaggcgcctg tagtgccatt tacccccatt cactgccaga 4800
gccgtgagcg cagcgaactg aatgtcacga aaaagacagc gactcaggtg cctgatggtc 4860
ggagacaaaa ggaatattca gcgatttgcc cgagcttgcg agggtgctac ttaagccttt 4920
agggttttaa ggtctgtttt gtagaggagc aaacagcgtt tgcgacatcc ttttgtaata 4980
ctgcggaact gactaaagta gtgagttata cacagggctg ggatctattc tttttatctt 5040
tttttattct ttctttattc tataaattat aaccacttga atataaacaa aaaaaacaca 5100
caaaggtcta gcggaattta cagagggtct agcagaattt acaagttttc cagcaaaggt 5160
ctagcagaat ttacagatac ccacaactca aaggaaaagg actagtaatt atcattgact 5220
agcccatctc aattggtata gtgattaaaa tcacctagac caattgagat gtatgtctga 5280
attagttgtt ttcaaagcaa atgaactagc gattagtcgc tatgacttaa cggagcatga 5340
aaccaagcta attttatgct gtgtggcact actcaacccc acgattgaaa accctacaag 5400
gaaagaacgg acggtatcgt tcacttataa ccaatacgct cagatgatga acatcagtag 5460
ggaaaatgct tatggtgtat tagctaaagc aaccagagag ctgatgacga gaactgtgga 5520
aatcaggaat cctttggtta aaggctttga gattttccag tggacaaact atgccaagtt 5580
ctcaagcgaa aaattagaat tagtttttag tgaagagata ttgccttatc ttttccagtt 5640
aaaaaaattc ataaaatata atctggaaca tgttaagtct tttgaaaaca aatactctat 5700
gaggatttat gagtggttat taaaagaact aacacaaaag aaaactcaca aggcaaatat 5760
agagattagc cttgatgaat ttaagttcat gttaatgctt gaaaataact accatgagtt 5820
taaaaggctt aaccaatggg ttttgaaacc aataagtaaa gatttaaaca cttacagcaa 5880
tatgaaattg gtggttgata agcgaggccg cccgactgat acgttgattt tccaagttga 5940
actagataga caaatggatc tcgtaaccga acttgagaac aaccagataa aaatgaatgg 6000
tgacaaaata ccaacaacca ttacatcaga ttcctaccta cgtaacggac taagaaaaac 6060
actacacgat gctttaactg caaaaattca gctcaccagt tttgaggcaa aatttttgag 6120
tgacatgcaa agtaagcatg atctcaatgg ttcgttctca tggctcacgc aaaaacaacg 6180
aaccacacta gagaacatac tggctaaata cggaaggatc tgaggttctt atggctcttg 6240
tatctatcag tgaagcatca agactaacaa acaaaagtag aacaactgtt caccgttaga 6300
tatcaaaggg aaaactgtcc atatgcacag atgaaaacgg tgtaaaaaag atagatacat 6360
cagagctttt acgagttttt ggtgcattta aagctgttca ccatgaacag atcgacaatg 6420
taacagatga acagcatgta acacctaata gaacaggtga aaccagtaaa acaaagcaac 6480
tagaacatga aattgaacac ctgagacaac ttgttacagc tcaacagtca cacatagaca 6540
gcctgaaaca ggcgatgctg cttatcgaat caaagctgcc gacaacacgg gagccagtga 6600
cgcctcccgt ggggaaaaaa tcatggcaat tctggaagaa atagcgcttt cagccggcaa 6660
acctgaagcc ggatctgcga ttctgataac aaactagcaa caccagaaca gcccgtttgc 6720
gggcagcaaa acccgtactt ttggacgttc cggcggtttt ttgtggcgag tggtgttcgg 6780
gcggtgcgcg caagatccat tatgttaaac gggcgagttt acatctcaaa accgcccgct 6840
taacaccatc agaaatcctc agcgcgattt taagcaccaa cccccccccg taacacccaa 6900
atccatactg aaagtggctt tgttgaataa atcgaacttt tgctgagttg aaggatcaga 6960
tcacgcatcc tcccgacaac acagaccatt ccgtggcaaa gcaaaagttc agaatcacca 7020
actggtccac ctacaacaaa gctctcatca accgtggctc cctcactttc tggctggatg 7080
atgaggcgat tcaggcctgg tatgagtcgg caacaccttc atcacgagga aggccccagc 7140
gctattctga tctcgccatc accaccgttc tggtgattaa acgcgtattc cggctgaccc 7200
tgcgggctgc gcagggtttt attgattcca tttttgccct gatgaacgtt ccgttgcgct 7260
gcccggatta caccagtgtc agtaagcggg caaagtcggt taatgtcagt ttcaaaacgt 7320
ccacccgggg tgaaatcgca cacctggtga ttgattccac cgggctgaag gtctttggtg 7380
aaggcgaatg gaaagtcaga aagcacggca aagagcgccg tcgtatctgg cgaaagttgc 7440
atcttgctgt tgacagcaac acacatgaag ttgtctgtgc agacctgtcg ctgaataacg 7500
tcacggactc agaagccttc ccgggcctta tccggcagac tcacagaaaa atcagggcag 7560
ccgcggcaga cggggcttac gatacccggc tctgtcacga tgaactgcgc cgcaaaaaaa 7620
tcagcgcgct tattcctccc cgaaaaggtg cgggttactg gcccggtgaa tatgcagacc 7680
gtaaccgtgc agtggctaat cagcgaatga ccgggagtaa tgcgcggtgg aaatggacaa 7740
cagattacaa ccgtcgctcg atagcggaaa cggcgatgta ccgggtaaaa cagctgttcg 7800
ggggttcact gacgctgcgt gactacgatg gtcaggttgc ggaggctatg gccctggtac 7860
gagcgctgaa caaaatgacg aaagcaggta tgcctgaaag cgtgcgtatt gcctgaaaac 7920
acaacccgct acgggggaga cttacccgaa atctgattta ttcaacaaag ccgggtgtgg 7980
tgaactacaa agcagacccg ttgaggttat cagttcgatg cacaatcagc agcgcataaa 8040
atatgcacaa gaacaggagc acccttcgca ttaagctgtg gtggtaacaa gtagtgccgg 8100
gctaccatca gcgagcatga tgcgctccca cagcattcgc cttggcagta tggaagttcc 8160
tcgctccagt tcgggccggt atccaccgca cctggtgttt aaacggattt aaattgcagg 8220
ggcagtgagc gcaacgcaat taatgtaagt tagctcactc attaggcacc ccaggcttga 8280
cactttatgc ttccggctcg tataatgtgt ggaattgtga gcggataaca ataacaattt 8340
aaatcaggat ctaggaacca aggagagtgg catatgtccc caattacccg tgaagaacgc 8400
ctggagcgcc gtattcaaga cctgtacgcg aatgacccgc agttcgctgc ggcgaagccg 8460
gtgactgcga ttacggcagc aattgagcgc ccaggtctgc cgctgccgca gattatcgaa 8520
accgtgatga ccggctacgc agatcgccca gcgttggcgc agcgctccgt cgagttcgtt 8580
accgacgcgg gtaccggtca cacgactctg cgtctgctgc cgcactttga gacgattagc 8640
tatggcgagc tgtgggatcg tattagcgct ttggcagacg tgctgagcac ggagcaaacc 8700
gttaaaccgt cggatcgtgt ctgcctgctg ggtttcaaca gcgtcgatta cgccacgatc 8760
gacatgacct tggcgcgctt gggtgcggtc gccgtgccgc tgcaaacgtc cgcagcgatc 8820
acgcaactgc agccgatcgt ggctgagacg cagcctacca tgattgccgc gagcgtggac 8880
gcattggcag atgcaaccga gctggcactg agcggtcaaa ccgcgacgcg tgtcctggtt 8940
tttgaccacc accgtcaggt ggacgcgcat cgtgccgcgg tcgagtcggc ccgtgaacgc 9000
ctggcgggca gcgcagtggt tgagactctg gcggaagcaa ttgcacgtgg cgacgttccg 9060
cgtggcgcga gcgcgggttc tgcacctggc acggatgtta gcgatgacag cctggcactg 9120
ctgatctaca cgagcggttc taccggtgct ccgaaaggtg cgatgtatcc gcgtcgcaac 9180
gttgccactt tctggcgtaa acgtacgtgg tttgaaggcg gttatgagcc gagcattacc 9240
ctgaatttca tgccgatgag ccacgttatg ggccgtcaga tcctgtatgg taccctgtgt 9300
aatggcggta cggcgtattt cgttgttaag agcgacctga gcacgctgtt tgaagatctg 9360
gccctggttc gcccgaccga gctgaccttt gttccgcgcg tctgggatat ggtgttcgac 9420
gagtttcaga gcgaggtgga tcgtcgtttg gtggatggtg ctgaccgtgt ggcactggaa 9480
gcgcaggtta aggcagagat ccgcaatgat gtcctgggtg gccgttacac cagcgcgctg 9540
accggtagcg cgcctatttc cgacgagatg aaagcgtggg ttgaagaact gctggatatg 9600
cacctggtgg aaggctacgg tagcaccgaa gcgggcatga ttttgatcga tggtgcgatt 9660
cgtcgcccag ccgttctgga ctacaaactg gttgacgtcc cagacttggg ttacttcctg 9720
acggatcgtc cgcacccgcg tggtgagctg ctggttaaga cggacagcct gttcccgggc 9780
tactaccaac gcgctgaagt caccgcagac gtctttgacg cggatggttt ctaccgcacc 9840
ggtgacatca tggccgaggt tggcccggag caattcgtgt atttggaccg ccgtaataac 9900
gtcctgaaac tgagccaggg cgaattcgtg accgtttcca agctggaagc ggtctttggc 9960
gacagcccgc tggttcgcca aatctatatc tacggtaact ccgcgcgtgc gtatctgctg 10020
gcggtgattg tgccgaccca agaggccctg gacgccgtcc cggtggaaga gctgaaagca 10080
cgtctgggcg acagcttgca ggaagtggcc aaggctgcgg gcctgcaatc ctacgagatc 10140
ccgcgtgact tcatcattga gacgaccccg tggactctgc agaatggtct gctgacgggt 10200
attcgcaagc tggcgcgtcc gcagctgaag aagcactatg gtgaattgct ggagcagatc 10260
tacacggacc tggcgcacgg ccaagcggac gagctgcgta gcctgcgtca gagcggtgca 10320
gacgcgcctg ttctggtcac cgtctgccgc gctgctgcag cgttgctggg tggcagcgca 10380
agcgacgtgc agccggatgc gcattttacc gacctgggcg gtgatagcct gtctgcgctg 10440
agctttacca atttgttgca cgagattttt gatatcgatg ttccggtggg cgtcatcgtg 10500
tccccggcaa acgacttgca ggcgctggca gactacgtag aggccgcacg caaaccgggt 10560
agcagccgtc cgaccttcgc ttctgtgcat ggtgccagca atgagcaggt caccgaagtc 10620
catgcgggtg atctgagcct ggacaaattc atcgatgccg ctaccctggc agaagctccg 10680
cgtttgccgg cagcaaacac ccaagtgcgc acggtgctgt tgaccggtgc aaccggtttt 10740
ctgggtcgtt atttggcgct ggagtggctg gagcgtatgg acctggtgga tggcaaattg 10800
atctgcctgg tgcgcgccaa gtccgacact gaagcgcgtg cgcgtctgga gaaaaccttc 10860
gacagcggtg cgccggaact gttggcgcat tatcgcgccc tggctggcga tcacctggaa 10920
gttctggcgg gtgacaaggg cgaggcggac ctgggcctgg atcgtcaaac gtggcagcgt 10980
ctggccgaca ccgttgatct gattgttgat ccggcagcgc tggtcaacca tgtcctgccg 11040
tacagccagc tgtttggtcc gaatgcgctg ggcaccgcgg agctgttgcg tctggccctg 11100
accagcaaga tcaaaccgta cagctatacg agcaccattg gtgttgctga ccagatcccg 11160
cctagcgcgt tcaccgaaga tgcagacatc cgtgttatca gcgccacccg tgccgtcgac 11220
gatagctatg ccaacggcta cagcaactct aagtgggcag gtgaagtact gctgcgtgaa 11280
gctcatgtgc tgtgtggtct gccggttgcc gtttttcgct gtgacatgat cttggctgat 11340
accacctggg cgggtcaact gaacgtgccg gatatgttca cgcgcatgat tctgagcttg 11400
gcggcgacgg gcattgcacc gggttcgttc tatgagctgg ctgcggacgg tgcccgtcaa 11460
cgtgcgcatt acgatggcct gccggtcgag tttattgcag aagccatctc taccctgggt 11520
gcgcagagcc aggatggttt ccacacgtat cacgtgatga acccgtacga tgatggtatc 11580
ggtctggatg agttcgtgga ttggctgaac gagtctggct gccctattca acgcattgcg 11640
gattatggtg attggttgca gcgctttgag actgcgctgc gtgccctgcc ggatcgtcaa 11700
cgtcatagct cgctgctgcc gctgctgcac aattaccgcc aaccggaacg tccggtgcgt 11760
ggttccattg ctccgaccga ccgttttcgt gcggcggttc aagaagccaa gatcggccca 11820
gacaaagata tcccgcacgt tggtgcgccg attatcgtca aatacgtcag cgacctgcgc 11880
ctgctgggct tgctgtaata agtttaaacg agaaggagtt ctatcatgat tgaaaccatc 11940
ttaccagccg gcgtcgaatc agcagagtta cttgagtacc ctgaagatct gaaggcgcat 12000
ccggctgaag agcatctgat cgcaaagagc gtagagaagc gtcgtcgcga cttcattggc 12060
gcacgtcatt gcgcccgtct ggcactggcg gagctgggtg aaccgccggt tgcgattggc 12120
aagggtgaac gtggtgcgcc gatttggccg cgtggtgtcg tgggctctct gacccattgc 12180
gatggctatc gcgcagcggc ggttgctcac aaaatgcgtt ttcgcagcat cggcatcgac 12240
gccgaaccgc acgcgaccct gccggaaggt gtcctggatt cggttagcct gccgcctgag 12300
cgtgagtggc tgaaaaccac cgacagcgca ctgcacctgg accgtttgct gttttgtgcg 12360
aaagaagcaa cttacaaagc gtggtggccg ctgacggcac gttggctggg tttcgaagaa 12420
gcgcacatta ccttcgaaat cgaggatggt agcgccgact ctggtaatgg cacgtttcac 12480
agcgaactgc tggtgccggg tcagaccaat gacggtggta ccccgctgct gtctttcgac 12540
ggtcgctggc tgatcgctga tggcttcatc ctgacggcga ttgcatacgc atgataaatt 12600
aacctaggct gctgccaccg ctgagcaata actagcataa ccccttgggg cctctaaacg 12660
ggtcttgagg ggttttttgc tgagctcgag tgaccccagc cgcccctcat gccaaccgag 12720
cccattaagc gcagagtcgg ccgcaactat ctcggggacg cataaacacg cagcgattta 12780
ccaaggagtt cggctaggtc aatccgcaat tccctttgcc tggccggaga tgccgcgagc 12840
aaacaatgtg tccggtcgct accagatgga ctttgtgggc ggaggattgc accagacgct 12900
tcagcgcagc gtcgtacgat gaatcggaag gcccggtaag caattgaaga accgctgacc 12960
acctcccatc cgacaatgca agggtgcccc gctcccagcg cgacacggtt gcctgatcca 13020
cacccattaa ttcagctagg tgactttgct tcatatgacg aagcaaccgc gccctccgca 13080
cctgccgccc cctgtcattc gtcaacattc ttcagcacct caatgtcgtt cgtagtgagc 13140
ctcatttttt caagaccgcc gatgatgaga gccaggcctc gctcgaatgc cgcgtccgga 13200
ccgccttcgt agacgatttt catcgcgctc tgtaggcgcg ccggcatcgt agacgctgag 13260
gtggtcaact gatcttcgcc ccgctcctcg gcgtctgcct cgctagcttg ctgctcaaga 13320
acagcgccga cggtgaagta gctgattgcc atcaacgcat aggtcgcgtc acctgccgaa 13380
aagccagcat cgcaaaggaa gcgaagctgc gcgtcggctt tttccatctg cggcgcggct 13440
ggccgcgtcc cggcatgaat acgcgcgcca tcgcgataag cgagcaacgc ccgtcgaaaa 13500
ctgcatgcat tgcccttcag gaacgaacgc cagtcgtcgt catcccttgg cgtcgaatgc 13560
gtgtgattta tcgtcagcat ggcttcggca agtgcgtcga gcaacgcacg cttgttcttg 13620
aaatgccagt agagcgctgg ctgttgcacc ccgaggcgct cagccagtcg gcgcgtcgtt 13680
agaccttcca tgcccacgtc gttaagcagt tcgagcgcgg ttcggatcac ggcctcgcgt 13740
tggagcttgt tcattcgcga a 13761
<210> 28
<211> 13719
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 载体
<400> 28
ttctcatgtt tgacagctta tcatcgataa gctttaatgc ggtagtttat cacagttaaa 60
ttgctaacgc agtcaggcac cgtgtatgaa atctaacaat gcgctcatcg tcatcctcgg 120
caccgtcacc ctggatgctg taggcatagg cttggttatg ccggtactgc cgggcctctt 180
gcgggatatc gtccattccg acagcatcgc cagtcactat ggcgtgctgc tagcgctata 240
tgcgttgatg caatttctat gcgcacccgt tctcggagca ctgtccgacc gctttggccg 300
ccgcccagtc ctgctcgctt cgctacttgg agccactatc gactacgcga tcatggcgac 360
cacacccgtc ctgtggatcc tctacgccgg acgcatcgtg gccggcatca ccggcgccac 420
aggtgcggtt gctggcgcct atatcgccga catcaccgat ggggaagatc gggctcgcca 480
cttcgggctc atgagcgctt gtttcggcgt gggtatggtg gcaggccccg tggccggggg 540
actgttgggc gccatctcct tgcatgcacc attccttgcg gcggcggtgc tcaacggcct 600
caacctacta ctgggctgct tcctaatgca ggagtcgcat aagggagagc gtcgaccgat 660
gcccttgaga gccttcaacc cagtcagctc cttccggtgg gcgcggggca tgactatcgt 720
cgccgcactt atgactgtct tctttatcat gcaactcgta ggacaggtgc cggcagcgct 780
ctgggtcatt ttcggcgagg accgctttcg ctggagcgcg acgatgatcg gcctgtcgct 840
tgcggtattc ggaatcttgc acgccctcgc tcaagccttc gtcactggtc ccgccaccaa 900
acgtttcggc gagaagcagg ccattatcgc cggcatggcg gccgacgcgc tgggctacgt 960
cttgctggcg ttcgcgacgc gaggctggat ggccttcccc attatgattc ttctcgcttc 1020
cggcggcatc gggatgcccg cgttgcaggc catgctgtcc aggcaggtag atgacgacca 1080
tcagggacag cttcaaggat cgctcgcggc tcttaccagc ctaacttcga tcactggacc 1140
gctgatcgtc acggcgattt atgccgcctc ggcgagcaca tggaacgggt tggcatggat 1200
tgtaggcgcc gccctatacc ttgtctgcct ccccgcgttg cgtcgcggtg catggagccg 1260
ggccacctcg acctgaatgg aagccggcgg cacctcgcta acggattcac cactccaaga 1320
attggagcca atcaattctt gcggagaact gtgaatgcgc aaaccaaccc ttggcagaac 1380
atatccatcg cgtccgccat ctccagcagc cgcacgcggc gcatctcggg cagcgttggg 1440
tcctggccac gggtgcgcat gatcgtgctc ctgtcgttga ggacccggct aggctggcgg 1500
ggttgcctta ctggttagca gaatgaatca ccgatacgcg agcgaacgtg aagcgactgc 1560
tgctgcaaaa cgtctgcgac ctgagcaaca acatgaatgg tcttcggttt ccgtgtttcg 1620
taaagtctgg aaacgcggaa gtcccctacg tgctgctgaa gttgcccgca acagagagtg 1680
gaaccaaccg gtgataccac gatactatga ctgagagtca acgccatgag cggcctcatt 1740
tcttattctg agttacaaca gtccgcaccg ctgccggtag ctacttgact atccggctgc 1800
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cctgtggaac acctacatct gtattaacga agcgctggca ttgaccctga gtgatttttc 1980
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tacattatgt ttcgatatat cagacagtta cttcactaac gtacgttttc gttctattgg 2220
ccttcagacc ccatatcctt aatgtccttt atttgctggg gttatcagat ccccccgaca 2280
cgtttaatta atgctttctc cgccggagat cgacgcacag gcttctgtgt ctatgatgtt 2340
atttcttaat aatcatccag gtattctctt tatcaccata cgtagtgcga gtgtccacct 2400
taacgcaggg ctttccgtca cagcgcgata tgtcagccag cggggctttc ttttgccaga 2460
ccgcttccat cctctgcatt tcagcaatct ggctataccc gtcattcata aaccacgtaa 2520
atgccgtcac gcaggaagcc aggacgaaga atatcgtcag tacaagataa atcgcggatt 2580
tccacgtata gcgtgacatc tcacgacgca tttcatggat catcgctttc gccgtatcgg 2640
cagcctgatt cagcgcttct gtcgccggtt tctgctgtgc taatccggct tgtttcagtt 2700
ctttctcaac ctgagtgagc gcggaactca ccgatttcct gacggtgtca gtcatattac 2760
cggacgcgct gtccagctca cgaatgaccc tgctcagcgt ttcactttgc tgctgtaatt 2820
gtgatgaggc ggcctgaaac tgttctgtca gagaagtaac acgcttttcc agcgcctgat 2880
gatgcccgat aagggcggca atttgtttaa tttcgtcgct catacaaaat cctgcctatc 2940
gtgagaatga ccagccttta tccggcttct gtcgtatctg ttcggcgagt cgctgtcgtt 3000
ctttctcctg ctgacgctgt ttttccgcca gacgttcgcg ctctctctgc ctttccatct 3060
cctgatgtat cccctggaac tccgccatcg catcgttaac aagggactga agatcgattt 3120
cttcctgtat atccttcatg gcatcactga ccagtgcgtt cagcttgtca ggctcttttt 3180
caaaatcaaa cgttctgccg gaatgggatt cctgctcagg ctctgacttc agctcctgtt 3240
ttagcgtcag agtatccctc tcgctgaggg cttcccgtaa cgaggtagtc acgtcaatta 3300
cgctgtcacg ttcatcacgg gactgctgca cctgcctttc agcctccctg cgctcaagaa 3360
tggcctgtag ctgctcagta tcgaatcgct gaacctgacc cgcgcccaga tgccgctcag 3420
gctcacggtc aatgccctgc gccttcaggg aacgggaatc aacccggtca gcgtgctgat 3480
accgttcaag gtgcttattc tggaggtcag cccagcgtct ccctctgggc aacaaggtat 3540
tctttgcgtt cggtcggtgt ttccccgaaa cgtgcctttt ttgcgccacc gcgtccggct 3600
ctttggtgtt agcccgttta aaatactgct cagggtcacg gtgaataccg tcattaatgc 3660
gttcagagaa catgatatgg gcgtggggct gctcgccacc ggctatcgct gctttcggat 3720
tatggatagc gaactgatag gcatggcggt cgccaatttc ctgttggaca aaatcgcgga 3780
caagctcaag acgttgttcg ggttttaact cacgcggcag ggcaatctcg atttcacggt 3840
aggtacagcc gttggcacgt tcagacgtgt cagcggcttt ccagaactcg gacggtttat 3900
gcgctgccca cgccggcata ttgccggact ccttgtgctc aaggtcggag tctttttcac 3960
gggcatactt tccctcacgc gcaatataat cggcatgagg agaggcactg ccttttccgc 4020
cggtttttac gctgagatga taggatgcca tcgtgtttta tcccgctgaa gggcgcacgt 4080
ttctgaacga agtgaagaaa gtctaagtgc gccctgataa ataaaagagt tatcagggat 4140
tgtagtggga tttgacctcc tctgccatca tgagcgtaat cattccgtta gcattcagga 4200
ggtaaacagc atgaataaaa gcgaaaaaac aggaacaatg ggcagcagaa agagtgcagt 4260
atattcgcgg cttaaagtcg ccgaatgagc aacagaaact tatgctgata ctgacggata 4320
aagcagataa aacagcacag gatatcaaaa cgctgtccct gctgatgaag gctgaacagg 4380
cagcagagaa agcgcaggaa gccagagcga aagtcatgaa cctgatacag gcagaaaagc 4440
gagccgaagc cagagccgcc cgtaaagccc gtgaccatgc tctgtaccag tctgccggat 4500
tgcttatcct ggcgggtctg gttgacagta agacgggtaa gcctgttgat gataccgctg 4560
ccttactggg tgcattagcc agtctgaatg acctgtcacg ggataatccg aagtggtcag 4620
actggaaaat cagagggcag gaactgctga acagcaaaaa gtcagatagc accacatagc 4680
agacccgcca taaaacgccc tgagaagccc gtgacgggct tttcttgtat tatgggtagt 4740
ttccttgcat gaatccataa aaggcgcctg tagtgccatt tacccccatt cactgccaga 4800
gccgtgagcg cagcgaactg aatgtcacga aaaagacagc gactcaggtg cctgatggtc 4860
ggagacaaaa ggaatattca gcgatttgcc cgagcttgcg agggtgctac ttaagccttt 4920
agggttttaa ggtctgtttt gtagaggagc aaacagcgtt tgcgacatcc ttttgtaata 4980
ctgcggaact gactaaagta gtgagttata cacagggctg ggatctattc tttttatctt 5040
tttttattct ttctttattc tataaattat aaccacttga atataaacaa aaaaaacaca 5100
caaaggtcta gcggaattta cagagggtct agcagaattt acaagttttc cagcaaaggt 5160
ctagcagaat ttacagatac ccacaactca aaggaaaagg actagtaatt atcattgact 5220
agcccatctc aattggtata gtgattaaaa tcacctagac caattgagat gtatgtctga 5280
attagttgtt ttcaaagcaa atgaactagc gattagtcgc tatgacttaa cggagcatga 5340
aaccaagcta attttatgct gtgtggcact actcaacccc acgattgaaa accctacaag 5400
gaaagaacgg acggtatcgt tcacttataa ccaatacgct cagatgatga acatcagtag 5460
ggaaaatgct tatggtgtat tagctaaagc aaccagagag ctgatgacga gaactgtgga 5520
aatcaggaat cctttggtta aaggctttga gattttccag tggacaaact atgccaagtt 5580
ctcaagcgaa aaattagaat tagtttttag tgaagagata ttgccttatc ttttccagtt 5640
aaaaaaattc ataaaatata atctggaaca tgttaagtct tttgaaaaca aatactctat 5700
gaggatttat gagtggttat taaaagaact aacacaaaag aaaactcaca aggcaaatat 5760
agagattagc cttgatgaat ttaagttcat gttaatgctt gaaaataact accatgagtt 5820
taaaaggctt aaccaatggg ttttgaaacc aataagtaaa gatttaaaca cttacagcaa 5880
tatgaaattg gtggttgata agcgaggccg cccgactgat acgttgattt tccaagttga 5940
actagataga caaatggatc tcgtaaccga acttgagaac aaccagataa aaatgaatgg 6000
tgacaaaata ccaacaacca ttacatcaga ttcctaccta cgtaacggac taagaaaaac 6060
actacacgat gctttaactg caaaaattca gctcaccagt tttgaggcaa aatttttgag 6120
tgacatgcaa agtaagcatg atctcaatgg ttcgttctca tggctcacgc aaaaacaacg 6180
aaccacacta gagaacatac tggctaaata cggaaggatc tgaggttctt atggctcttg 6240
tatctatcag tgaagcatca agactaacaa acaaaagtag aacaactgtt caccgttaga 6300
tatcaaaggg aaaactgtcc atatgcacag atgaaaacgg tgtaaaaaag atagatacat 6360
cagagctttt acgagttttt ggtgcattta aagctgttca ccatgaacag atcgacaatg 6420
taacagatga acagcatgta acacctaata gaacaggtga aaccagtaaa acaaagcaac 6480
tagaacatga aattgaacac ctgagacaac ttgttacagc tcaacagtca cacatagaca 6540
gcctgaaaca ggcgatgctg cttatcgaat caaagctgcc gacaacacgg gagccagtga 6600
cgcctcccgt ggggaaaaaa tcatggcaat tctggaagaa atagcgcttt cagccggcaa 6660
acctgaagcc ggatctgcga ttctgataac aaactagcaa caccagaaca gcccgtttgc 6720
gggcagcaaa acccgtactt ttggacgttc cggcggtttt ttgtggcgag tggtgttcgg 6780
gcggtgcgcg caagatccat tatgttaaac gggcgagttt acatctcaaa accgcccgct 6840
taacaccatc agaaatcctc agcgcgattt taagcaccaa cccccccccg taacacccaa 6900
atccatactg aaagtggctt tgttgaataa atcgaacttt tgctgagttg aaggatcaga 6960
tcacgcatcc tcccgacaac acagaccatt ccgtggcaaa gcaaaagttc agaatcacca 7020
actggtccac ctacaacaaa gctctcatca accgtggctc cctcactttc tggctggatg 7080
atgaggcgat tcaggcctgg tatgagtcgg caacaccttc atcacgagga aggccccagc 7140
gctattctga tctcgccatc accaccgttc tggtgattaa acgcgtattc cggctgaccc 7200
tgcgggctgc gcagggtttt attgattcca tttttgccct gatgaacgtt ccgttgcgct 7260
gcccggatta caccagtgtc agtaagcggg caaagtcggt taatgtcagt ttcaaaacgt 7320
ccacccgggg tgaaatcgca cacctggtga ttgattccac cgggctgaag gtctttggtg 7380
aaggcgaatg gaaagtcaga aagcacggca aagagcgccg tcgtatctgg cgaaagttgc 7440
atcttgctgt tgacagcaac acacatgaag ttgtctgtgc agacctgtcg ctgaataacg 7500
tcacggactc agaagccttc ccgggcctta tccggcagac tcacagaaaa atcagggcag 7560
ccgcggcaga cggggcttac gatacccggc tctgtcacga tgaactgcgc cgcaaaaaaa 7620
tcagcgcgct tattcctccc cgaaaaggtg cgggttactg gcccggtgaa tatgcagacc 7680
gtaaccgtgc agtggctaat cagcgaatga ccgggagtaa tgcgcggtgg aaatggacaa 7740
cagattacaa ccgtcgctcg atagcggaaa cggcgatgta ccgggtaaaa cagctgttcg 7800
ggggttcact gacgctgcgt gactacgatg gtcaggttgc ggaggctatg gccctggtac 7860
gagcgctgaa caaaatgacg aaagcaggta tgcctgaaag cgtgcgtatt gcctgaaaac 7920
acaacccgct acgggggaga cttacccgaa atctgattta ttcaacaaag ccgggtgtgg 7980
tgaactacaa agcagacccg ttgaggttat cagttcgatg cacaatcagc agcgcataaa 8040
atatgcacaa gaacaggagc acccttcgca ttaagctgtg gtggtaacaa gtagtgccgg 8100
gctaccatca gcgagcatga tgcgctccca cagcattcgc cttggcagta tggaagttcc 8160
tcgctccagt tcgggccggt atccaccgca cctggtgttt aaacggattt aaattgcagg 8220
ggcagtgagc gcaacgcaat taatgtaagt tagctcactc attaggcacc ccaggcttga 8280
cactttatgc ttccggctcg tataatgtgt ggaattgtga gcggataaca ataacaattt 8340
aaatcaggat ctaggaacca aggagagtgg catatgactg taatgcctgc aaaaccacca 8400
gccgatgtat ccccacttag ccgcgcagca cgtctggtcg ccgagttgag cgcgcacgat 8460
ccgcagtatc gtgccgcaat gccgctgccg gcagttcgtg aagcggttcg cgaggccgca 8520
cgcgaccaag ttctgagccg caccgttgca accgtcatgg caggttatgc ggaccgtccg 8580
gcgctggcac gccgtgccac cgagccggtg accgatccgg ttagcggccg tactagcttg 8640
cgtcgtctgc cggagtttac gacggtcacg tacggtgaac tgtgggcgcg tgcaggtgcg 8700
gtgagcgcgg agtgggcagc cgacacccgc ctgccgctga gcccaggcga ctttgttgcc 8760
atctacggtt tcacgagcgg cgactatgtt actgtcgatt tggcctgtct gcgccatggt 8820
gcggttagcg tcccgctgca gtcgggtgcg ccggttgccg gcctggcccc gattctggcg 8880
aaaacgggtc cgaaagtcct ggcggtgtcc ttggaattgc tggaccgtgg tgttgaactg 8940
gcgttgagcg ccgaggttgc tccgcgtctg gtggtctttg acttccacgc cggtgacgac 9000
gctcagcgcg aggcctttga agcggcaagc gcacgcctga ccgcggcagg ccatgcggct 9060
ccgctgccgc tggaagcggt gattgaacgc ggtcgtgcac tgccgccagc gccactgttc 9120
gttccgggtc cggacgaaga tccggttcgt ctgctgattt acaccagcgg tagcaccggt 9180
accccgaaag gcgccattca aacggagcgc atgctgcatc gcgcatgggc aggcgcggtg 9240
ccgattccgg acgacgtcgc gtccatcgtc gtgaattacc tgccgctgtc ccacgtcgct 9300
ggtcgtagct ctctggttga gacgctgcgt cgtggcggca ttagctattt cacggcacat 9360
agcgacctgt ctgatctgtt cgaggacatc gccctggcgc gtcctaccgc gctgttgttt 9420
gttccgcgtg tgtgcgattt gctgttccaa gaatatcagg ctgaattggc acgtcgcgca 9480
ggtgagtttg cggacgcggg tgcgctggac gcggctgtta aggcagatct gcgtgaacgt 9540
ttcgttggtg gccgcctgat tcaagcgctg tacggcagcg caccgctgtc cgccgaactg 9600
cgtgagttta tgcacacctg tctggacctg cctgtgctgg acggttatgg tagcaccgaa 9660
acgggttccg tgttgttgaa cacccgcgtg caacgtccgc cggtcaccga tatcaagctg 9720
gtggatgtcc cggaactggg ttacttcgcc accgattccc cgtacccacg cggcgaattg 9780
gtgctgaaaa gcgcgaccct gacgcctggc tattaccgtc gcccagaggt caccgcagct 9840
gctttcgacg cggatggctt ttaccgtacg ggcgacatta tggcggaagt tggcccggac 9900
cagtacgtgt acgttgatcg tcgtaataac gttgtgaagc tggcccaggg tgagttcgtt 9960
gcgctgtctc gtctggaagg tgtgtatgtg actcacccgc tgattcgcca gatttacgtg 10020
tacggcaata gcgagcgtgc acacttgctg gctgtgatcg tgccgacgcg cgagaattgt 10080
acgcacgagg atctggcagc cgcgctgcag caggcagccc gtgagagcga gttgaactct 10140
tacgagatcc cgcgtgcgtt cctggttgaa accgagccgt tctccctggc caacggtttg 10200
ctgagcgaca cccgtaagaa tctgccgcca cgtctgaagg cgcgctatgg cgagcgtctg 10260
gaagcgctgt atgaagagct ggcacgtgaa caagaggatg cggttcgtgt gctgcgcgat 10320
gaaggtacgg gtcgccctgt ttcggaaacg gtcgagcgtg cagcgcgtgc gctgctgggt 10380
agcagcgcag cggacgcgcg ttttaccgac ttgggcggtg attctctgtc ggcgttgtcc 10440
ttcagcaccc tgctggcaga gatcttcggt gtcgaggtgc cggtgggtac tgtcctgagc 10500
ccggcaaacg acctgcgtgc attggcagcg cacatcgaag ctcgtcgtgc gtctggtgcg 10560
agccgtccga ccttcgctag cgttcatggc gtgggccgta cggtcgtgcg tgcgggcgac 10620
ctggcactgg agaagtttct ggatgccggt gcgctggcgg aagcggcgca gctgccggca 10680
ccgggtcgtg aaacgccgcg tacggtcctg ctgaccggtg cgaacggtta tctgggtcgt 10740
ttcatgtgcc tggactggct ggaacgtctg gcttcgggcg gtggccgtct ggtgtgcgtg 10800
gttcgcggta aagacgacgc cgatgcccgt gcacgtctgg atgcggcgtt cgacagcggt 10860
gatccggagc tgctgcgtcg ctaccgcgaa ctggcagcgg gtcgcctgga tgtcttggct 10920
ggcgatatcg gtgcggagcg tctgggtctg gcgggtgaga cgtggcgtcg cctggccgag 10980
gatgtggatc tgatcgccca cccggctgcc ctggtcaacc acgtcttgcc gtacgagcaa 11040
ctgtttggtc cgaacgttgt aggcaccgct gaactgattc gcctggcact gaccgcgcgt 11100
gttaaaccgt tcgtgtatgt tagcaccacc gcgattagca ccacgctgga cgagacgagc 11160
gatattcgtg agagcatccc ggaacgcgcc ctgaccgatg catatgcagc gggctacggt 11220
accagcaaat gggcgggtga ggtgctgctg cgcgaggcgc acgctcgcct ggcgctgccg 11280
gttgcggtct ttcgcagcga cttgattctg gcgcacccgc atcacaccgg ccaactgaat 11340
ccggccgacg tactgacccg tctgctgttt agcatcctga gcactggctt ggcgccgact 11400
agcttttact ctgaagaggg tcgcgcgcac ttcgacggtc tgccggtgga ttttaccgct 11460
gaggctatca acaccctggg cgcacagccg attagcgcgc accgtaccta taatgcggta 11520
aatccgcatg acgacggcgt gagcctggat accttcatca cttggctgga agaggctggt 11580
cacccgctgc gccgtttgcc gcatacgacc tggagcccgc gtctggaaac cgccttgcgc 11640
agcctgccgg aacatcaccg tccgcacacg ttgctgcctc tgctgcatgc gtttgcaacc 11700
cctcagccgc cgaccccgac cagcccggtt ccggccaccc attttcatga ggcagtgcgt 11760
gaggctggca tcggcccaga taatgatatc ccgcacatca cgcaaaactt gattaccaag 11820
tacgcgacgg atctgcgcca actgggtctg cgctaataag tttaaacgag aaggagttct 11880
atcatgattg aaaccatctt accagccggc gtcgaatcag cagagttact tgagtaccct 11940
gaagatctga aggcgcatcc ggctgaagag catctgatcg caaagagcgt agagaagcgt 12000
cgtcgcgact tcattggcgc acgtcattgc gcccgtctgg cactggcgga gctgggtgaa 12060
ccgccggttg cgattggcaa gggtgaacgt ggtgcgccga tttggccgcg tggtgtcgtg 12120
ggctctctga cccattgcga tggctatcgc gcagcggcgg ttgctcacaa aatgcgtttt 12180
cgcagcatcg gcatcgacgc cgaaccgcac gcgaccctgc cggaaggtgt cctggattcg 12240
gttagcctgc cgcctgagcg tgagtggctg aaaaccaccg acagcgcact gcacctggac 12300
cgtttgctgt tttgtgcgaa agaagcaact tacaaagcgt ggtggccgct gacggcacgt 12360
tggctgggtt tcgaagaagc gcacattacc ttcgaaatcg aggatggtag cgccgactct 12420
ggtaatggca cgtttcacag cgaactgctg gtgccgggtc agaccaatga cggtggtacc 12480
ccgctgctgt ctttcgacgg tcgctggctg atcgctgatg gcttcatcct gacggcgatt 12540
gcatacgcat gataaattaa cctaggctgc tgccaccgct gagcaataac tagcataacc 12600
ccttggggcc tctaaacggg tcttgagggg ttttttgctg agctcgagtg accccagccg 12660
cccctcatgc caaccgagcc cattaagcgc agagtcggcc gcaactatct cggggacgca 12720
taaacacgca gcgatttacc aaggagttcg gctaggtcaa tccgcaattc cctttgcctg 12780
gccggagatg ccgcgagcaa acaatgtgtc cggtcgctac cagatggact ttgtgggcgg 12840
aggattgcac cagacgcttc agcgcagcgt cgtacgatga atcggaaggc ccggtaagca 12900
attgaagaac cgctgaccac ctcccatccg acaatgcaag ggtgccccgc tcccagcgcg 12960
acacggttgc ctgatccaca cccattaatt cagctaggtg actttgcttc atatgacgaa 13020
gcaaccgcgc cctccgcacc tgccgccccc tgtcattcgt caacattctt cagcacctca 13080
atgtcgttcg tagtgagcct cattttttca agaccgccga tgatgagagc caggcctcgc 13140
tcgaatgccg cgtccggacc gccttcgtag acgattttca tcgcgctctg taggcgcgcc 13200
ggcatcgtag acgctgaggt ggtcaactga tcttcgcccc gctcctcggc gtctgcctcg 13260
ctagcttgct gctcaagaac agcgccgacg gtgaagtagc tgattgccat caacgcatag 13320
gtcgcgtcac ctgccgaaaa gccagcatcg caaaggaagc gaagctgcgc gtcggctttt 13380
tccatctgcg gcgcggctgg ccgcgtcccg gcatgaatac gcgcgccatc gcgataagcg 13440
agcaacgccc gtcgaaaact gcatgcattg cccttcagga acgaacgcca gtcgtcgtca 13500
tcccttggcg tcgaatgcgt gtgatttatc gtcagcatgg cttcggcaag tgcgtcgagc 13560
aacgcacgct tgttcttgaa atgccagtag agcgctggct gttgcacccc gaggcgctca 13620
gccagtcggc gcgtcgttag accttccatg cccacgtcgt taagcagttc gagcgcggtt 13680
cggatcacgg cctcgcgttg gagcttgttc attcgcgaa 13719
<210> 29
<211> 13842
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 载体
<400> 29
ttctcatgtt tgacagctta tcatcgataa gctttaatgc ggtagtttat cacagttaaa 60
ttgctaacgc agtcaggcac cgtgtatgaa atctaacaat gcgctcatcg tcatcctcgg 120
caccgtcacc ctggatgctg taggcatagg cttggttatg ccggtactgc cgggcctctt 180
gcgggatatc gtccattccg acagcatcgc cagtcactat ggcgtgctgc tagcgctata 240
tgcgttgatg caatttctat gcgcacccgt tctcggagca ctgtccgacc gctttggccg 300
ccgcccagtc ctgctcgctt cgctacttgg agccactatc gactacgcga tcatggcgac 360
cacacccgtc ctgtggatcc tctacgccgg acgcatcgtg gccggcatca ccggcgccac 420
aggtgcggtt gctggcgcct atatcgccga catcaccgat ggggaagatc gggctcgcca 480
cttcgggctc atgagcgctt gtttcggcgt gggtatggtg gcaggccccg tggccggggg 540
actgttgggc gccatctcct tgcatgcacc attccttgcg gcggcggtgc tcaacggcct 600
caacctacta ctgggctgct tcctaatgca ggagtcgcat aagggagagc gtcgaccgat 660
gcccttgaga gccttcaacc cagtcagctc cttccggtgg gcgcggggca tgactatcgt 720
cgccgcactt atgactgtct tctttatcat gcaactcgta ggacaggtgc cggcagcgct 780
ctgggtcatt ttcggcgagg accgctttcg ctggagcgcg acgatgatcg gcctgtcgct 840
tgcggtattc ggaatcttgc acgccctcgc tcaagccttc gtcactggtc ccgccaccaa 900
acgtttcggc gagaagcagg ccattatcgc cggcatggcg gccgacgcgc tgggctacgt 960
cttgctggcg ttcgcgacgc gaggctggat ggccttcccc attatgattc ttctcgcttc 1020
cggcggcatc gggatgcccg cgttgcaggc catgctgtcc aggcaggtag atgacgacca 1080
tcagggacag cttcaaggat cgctcgcggc tcttaccagc ctaacttcga tcactggacc 1140
gctgatcgtc acggcgattt atgccgcctc ggcgagcaca tggaacgggt tggcatggat 1200
tgtaggcgcc gccctatacc ttgtctgcct ccccgcgttg cgtcgcggtg catggagccg 1260
ggccacctcg acctgaatgg aagccggcgg cacctcgcta acggattcac cactccaaga 1320
attggagcca atcaattctt gcggagaact gtgaatgcgc aaaccaaccc ttggcagaac 1380
atatccatcg cgtccgccat ctccagcagc cgcacgcggc gcatctcggg cagcgttggg 1440
tcctggccac gggtgcgcat gatcgtgctc ctgtcgttga ggacccggct aggctggcgg 1500
ggttgcctta ctggttagca gaatgaatca ccgatacgcg agcgaacgtg aagcgactgc 1560
tgctgcaaaa cgtctgcgac ctgagcaaca acatgaatgg tcttcggttt ccgtgtttcg 1620
taaagtctgg aaacgcggaa gtcccctacg tgctgctgaa gttgcccgca acagagagtg 1680
gaaccaaccg gtgataccac gatactatga ctgagagtca acgccatgag cggcctcatt 1740
tcttattctg agttacaaca gtccgcaccg ctgccggtag ctacttgact atccggctgc 1800
actagccctg cgtcagatgg ctctgatcca aggcaaactg ccaaaatatc tgctggcacc 1860
ggaagtcagc gccctgcacc attatgttcc ggatctgcat cgcaggatgc tgctggctac 1920
cctgtggaac acctacatct gtattaacga agcgctggca ttgaccctga gtgatttttc 1980
tctggtgccg ccctatccct ttgtgcagct tgccacgctc aaaggggttt gaggtccaac 2040
cgtacgaaaa cgtacggtaa gaggaaaatt atcgtctgaa aaatcgatta gtagacaaga 2100
aagtccgtta agtgccaatt ttcgattaaa aagacaccgt tttgatggcg ttttccaatg 2160
tacattatgt ttcgatatat cagacagtta cttcactaac gtacgttttc gttctattgg 2220
ccttcagacc ccatatcctt aatgtccttt atttgctggg gttatcagat ccccccgaca 2280
cgtttaatta atgctttctc cgccggagat cgacgcacag gcttctgtgt ctatgatgtt 2340
atttcttaat aatcatccag gtattctctt tatcaccata cgtagtgcga gtgtccacct 2400
taacgcaggg ctttccgtca cagcgcgata tgtcagccag cggggctttc ttttgccaga 2460
ccgcttccat cctctgcatt tcagcaatct ggctataccc gtcattcata aaccacgtaa 2520
atgccgtcac gcaggaagcc aggacgaaga atatcgtcag tacaagataa atcgcggatt 2580
tccacgtata gcgtgacatc tcacgacgca tttcatggat catcgctttc gccgtatcgg 2640
cagcctgatt cagcgcttct gtcgccggtt tctgctgtgc taatccggct tgtttcagtt 2700
ctttctcaac ctgagtgagc gcggaactca ccgatttcct gacggtgtca gtcatattac 2760
cggacgcgct gtccagctca cgaatgaccc tgctcagcgt ttcactttgc tgctgtaatt 2820
gtgatgaggc ggcctgaaac tgttctgtca gagaagtaac acgcttttcc agcgcctgat 2880
gatgcccgat aagggcggca atttgtttaa tttcgtcgct catacaaaat cctgcctatc 2940
gtgagaatga ccagccttta tccggcttct gtcgtatctg ttcggcgagt cgctgtcgtt 3000
ctttctcctg ctgacgctgt ttttccgcca gacgttcgcg ctctctctgc ctttccatct 3060
cctgatgtat cccctggaac tccgccatcg catcgttaac aagggactga agatcgattt 3120
cttcctgtat atccttcatg gcatcactga ccagtgcgtt cagcttgtca ggctcttttt 3180
caaaatcaaa cgttctgccg gaatgggatt cctgctcagg ctctgacttc agctcctgtt 3240
ttagcgtcag agtatccctc tcgctgaggg cttcccgtaa cgaggtagtc acgtcaatta 3300
cgctgtcacg ttcatcacgg gactgctgca cctgcctttc agcctccctg cgctcaagaa 3360
tggcctgtag ctgctcagta tcgaatcgct gaacctgacc cgcgcccaga tgccgctcag 3420
gctcacggtc aatgccctgc gccttcaggg aacgggaatc aacccggtca gcgtgctgat 3480
accgttcaag gtgcttattc tggaggtcag cccagcgtct ccctctgggc aacaaggtat 3540
tctttgcgtt cggtcggtgt ttccccgaaa cgtgcctttt ttgcgccacc gcgtccggct 3600
ctttggtgtt agcccgttta aaatactgct cagggtcacg gtgaataccg tcattaatgc 3660
gttcagagaa catgatatgg gcgtggggct gctcgccacc ggctatcgct gctttcggat 3720
tatggatagc gaactgatag gcatggcggt cgccaatttc ctgttggaca aaatcgcgga 3780
caagctcaag acgttgttcg ggttttaact cacgcggcag ggcaatctcg atttcacggt 3840
aggtacagcc gttggcacgt tcagacgtgt cagcggcttt ccagaactcg gacggtttat 3900
gcgctgccca cgccggcata ttgccggact ccttgtgctc aaggtcggag tctttttcac 3960
gggcatactt tccctcacgc gcaatataat cggcatgagg agaggcactg ccttttccgc 4020
cggtttttac gctgagatga taggatgcca tcgtgtttta tcccgctgaa gggcgcacgt 4080
ttctgaacga agtgaagaaa gtctaagtgc gccctgataa ataaaagagt tatcagggat 4140
tgtagtggga tttgacctcc tctgccatca tgagcgtaat cattccgtta gcattcagga 4200
ggtaaacagc atgaataaaa gcgaaaaaac aggaacaatg ggcagcagaa agagtgcagt 4260
atattcgcgg cttaaagtcg ccgaatgagc aacagaaact tatgctgata ctgacggata 4320
aagcagataa aacagcacag gatatcaaaa cgctgtccct gctgatgaag gctgaacagg 4380
cagcagagaa agcgcaggaa gccagagcga aagtcatgaa cctgatacag gcagaaaagc 4440
gagccgaagc cagagccgcc cgtaaagccc gtgaccatgc tctgtaccag tctgccggat 4500
tgcttatcct ggcgggtctg gttgacagta agacgggtaa gcctgttgat gataccgctg 4560
ccttactggg tgcattagcc agtctgaatg acctgtcacg ggataatccg aagtggtcag 4620
actggaaaat cagagggcag gaactgctga acagcaaaaa gtcagatagc accacatagc 4680
agacccgcca taaaacgccc tgagaagccc gtgacgggct tttcttgtat tatgggtagt 4740
ttccttgcat gaatccataa aaggcgcctg tagtgccatt tacccccatt cactgccaga 4800
gccgtgagcg cagcgaactg aatgtcacga aaaagacagc gactcaggtg cctgatggtc 4860
ggagacaaaa ggaatattca gcgatttgcc cgagcttgcg agggtgctac ttaagccttt 4920
agggttttaa ggtctgtttt gtagaggagc aaacagcgtt tgcgacatcc ttttgtaata 4980
ctgcggaact gactaaagta gtgagttata cacagggctg ggatctattc tttttatctt 5040
tttttattct ttctttattc tataaattat aaccacttga atataaacaa aaaaaacaca 5100
caaaggtcta gcggaattta cagagggtct agcagaattt acaagttttc cagcaaaggt 5160
ctagcagaat ttacagatac ccacaactca aaggaaaagg actagtaatt atcattgact 5220
agcccatctc aattggtata gtgattaaaa tcacctagac caattgagat gtatgtctga 5280
attagttgtt ttcaaagcaa atgaactagc gattagtcgc tatgacttaa cggagcatga 5340
aaccaagcta attttatgct gtgtggcact actcaacccc acgattgaaa accctacaag 5400
gaaagaacgg acggtatcgt tcacttataa ccaatacgct cagatgatga acatcagtag 5460
ggaaaatgct tatggtgtat tagctaaagc aaccagagag ctgatgacga gaactgtgga 5520
aatcaggaat cctttggtta aaggctttga gattttccag tggacaaact atgccaagtt 5580
ctcaagcgaa aaattagaat tagtttttag tgaagagata ttgccttatc ttttccagtt 5640
aaaaaaattc ataaaatata atctggaaca tgttaagtct tttgaaaaca aatactctat 5700
gaggatttat gagtggttat taaaagaact aacacaaaag aaaactcaca aggcaaatat 5760
agagattagc cttgatgaat ttaagttcat gttaatgctt gaaaataact accatgagtt 5820
taaaaggctt aaccaatggg ttttgaaacc aataagtaaa gatttaaaca cttacagcaa 5880
tatgaaattg gtggttgata agcgaggccg cccgactgat acgttgattt tccaagttga 5940
actagataga caaatggatc tcgtaaccga acttgagaac aaccagataa aaatgaatgg 6000
tgacaaaata ccaacaacca ttacatcaga ttcctaccta cgtaacggac taagaaaaac 6060
actacacgat gctttaactg caaaaattca gctcaccagt tttgaggcaa aatttttgag 6120
tgacatgcaa agtaagcatg atctcaatgg ttcgttctca tggctcacgc aaaaacaacg 6180
aaccacacta gagaacatac tggctaaata cggaaggatc tgaggttctt atggctcttg 6240
tatctatcag tgaagcatca agactaacaa acaaaagtag aacaactgtt caccgttaga 6300
tatcaaaggg aaaactgtcc atatgcacag atgaaaacgg tgtaaaaaag atagatacat 6360
cagagctttt acgagttttt ggtgcattta aagctgttca ccatgaacag atcgacaatg 6420
taacagatga acagcatgta acacctaata gaacaggtga aaccagtaaa acaaagcaac 6480
tagaacatga aattgaacac ctgagacaac ttgttacagc tcaacagtca cacatagaca 6540
gcctgaaaca ggcgatgctg cttatcgaat caaagctgcc gacaacacgg gagccagtga 6600
cgcctcccgt ggggaaaaaa tcatggcaat tctggaagaa atagcgcttt cagccggcaa 6660
acctgaagcc ggatctgcga ttctgataac aaactagcaa caccagaaca gcccgtttgc 6720
gggcagcaaa acccgtactt ttggacgttc cggcggtttt ttgtggcgag tggtgttcgg 6780
gcggtgcgcg caagatccat tatgttaaac gggcgagttt acatctcaaa accgcccgct 6840
taacaccatc agaaatcctc agcgcgattt taagcaccaa cccccccccg taacacccaa 6900
atccatactg aaagtggctt tgttgaataa atcgaacttt tgctgagttg aaggatcaga 6960
tcacgcatcc tcccgacaac acagaccatt ccgtggcaaa gcaaaagttc agaatcacca 7020
actggtccac ctacaacaaa gctctcatca accgtggctc cctcactttc tggctggatg 7080
atgaggcgat tcaggcctgg tatgagtcgg caacaccttc atcacgagga aggccccagc 7140
gctattctga tctcgccatc accaccgttc tggtgattaa acgcgtattc cggctgaccc 7200
tgcgggctgc gcagggtttt attgattcca tttttgccct gatgaacgtt ccgttgcgct 7260
gcccggatta caccagtgtc agtaagcggg caaagtcggt taatgtcagt ttcaaaacgt 7320
ccacccgggg tgaaatcgca cacctggtga ttgattccac cgggctgaag gtctttggtg 7380
aaggcgaatg gaaagtcaga aagcacggca aagagcgccg tcgtatctgg cgaaagttgc 7440
atcttgctgt tgacagcaac acacatgaag ttgtctgtgc agacctgtcg ctgaataacg 7500
tcacggactc agaagccttc ccgggcctta tccggcagac tcacagaaaa atcagggcag 7560
ccgcggcaga cggggcttac gatacccggc tctgtcacga tgaactgcgc cgcaaaaaaa 7620
tcagcgcgct tattcctccc cgaaaaggtg cgggttactg gcccggtgaa tatgcagacc 7680
gtaaccgtgc agtggctaat cagcgaatga ccgggagtaa tgcgcggtgg aaatggacaa 7740
cagattacaa ccgtcgctcg atagcggaaa cggcgatgta ccgggtaaaa cagctgttcg 7800
ggggttcact gacgctgcgt gactacgatg gtcaggttgc ggaggctatg gccctggtac 7860
gagcgctgaa caaaatgacg aaagcaggta tgcctgaaag cgtgcgtatt gcctgaaaac 7920
acaacccgct acgggggaga cttacccgaa atctgattta ttcaacaaag ccgggtgtgg 7980
tgaactacaa agcagacccg ttgaggttat cagttcgatg cacaatcagc agcgcataaa 8040
atatgcacaa gaacaggagc acccttcgca ttaagctgtg gtggtaacaa gtagtgccgg 8100
gctaccatca gcgagcatga tgcgctccca cagcattcgc cttggcagta tggaagttcc 8160
tcgctccagt tcgggccggt atccacctcg cacctggtgt ttaaacggat ttaaattgca 8220
ggggcagtga gcgcaacgca attaatgtaa gttagctcac tcattaggca ccccaggctt 8280
gacactttat gcttccggct cgtataatgt gtggaattgt gagcggataa caataacaat 8340
ttaaatcagg atctaggaac caaggagagt ggcatatgac tgacgacgca aagagagcaa 8400
aagtatccag caccggtccg atttctgcag cacgtcagca agttgcggac cgcattcgcg 8460
atctggacgc gcgtgacgaa gaatttcgca cgaccaaacc ggactctgcg ctgcagctgg 8520
cggcacgtga accgggtctg cgtctgccgc aaatcctgga aatctttgcc gaaggttacg 8580
cggatcgtcc ggcgctgggc tggcgtgcgc gcagcctgac caccgatgcg gcgactggcc 8640
gtaccagcgc tcagttgctg ccgcgcttcg acacgatgac gtaccgtgaa ctgtgggcga 8700
atgtccgcgc aatcgccggt gcttggcgcc acgatgctac caacccggtg gcaccgggtg 8760
atgttgtggc aactgttggt ttcgcgagcg cagaatacct gaccatcgat ctggtctgtg 8820
cgtatctggg cctggttgcc gtgccgctgc aacataacgc gaccgcatcc cgtctgcgtc 8880
cgatcgtcga agaggttgag ccgtcgacgt tggcggctgg cgtgggctac ctggacttgg 8940
ccgtcgaggc ggccttgggc agctccagcc tgcgccgtgt ggttgtgttt gattatcgtc 9000
cggaagttga cgaacagcgc gaggcggttg accgtgcgcg tagcaaactg gcgggtgcag 9060
gtatcgcggt caccgttgag acgctgggtg acgtcattga gcgtggccgt accctgccgc 9120
ctgagccgat gtttaccggc gatacggacg agcgtctggc aatgattatg tataccagcg 9180
gttccaccgg tttgccgaaa ggcgccatgt ataccgagcg tatgctgtgc cgtctgtgga 9240
ccactgaact gatgccggat ttcgccgaca ccccggttat caatgtcaac ttcatgccgc 9300
tgaatcacct gggtggtcgt atcccgctga gcaccgcgtt ccaggccggt ggtacctctt 9360
atttcgttcc ggagagcgat ctgagcaccc tgttcgatga ttggaatctg gtccgtccga 9420
ccgagatggg cctggtgccg cgtgtggcag aaatgttgta ccagcgttac cagagcgcgg 9480
tcgatcgctt tgaagttgct ggcacggaca cggcgacggc acaagcgcgt gctcaggccg 9540
aactgcgtga gcaggtgctg ggcggtcgca ttgttactgc cttctgtggc accgcaccgc 9600
tggctgccga gatgcgcagc ttcattgaga cgtgcctgag cgtgcatgtg ctggacggtt 9660
acggtctgac ggaagttggt atggtcacca aggatggttt gattacgcaa ccgccggttt 9720
tggactataa gctgatcgat gttccggagc tgggttactt cctgaccgac aaaccgtatc 9780
cgcgtggcga gctgctggtt aaatccctga ccgcaacccc gggttacttc aagcgtccag 9840
atgtcaccgc caatgcattc gacccagaag gctattaccg tacgggcgac gtgatggcgg 9900
agctggaacc tagccgtctg gcctacgtgg atcgtcgcaa taacgtcctg aagctggcac 9960
aaggtgagtt cgttgccgtc gctcgtctgg aagccgtttt tagcagcgcc gcactggtgc 10020
gtcaaatctt tgtgtacggc aacagcgagc gcccgtactt gctggcggtc gtggtaccga 10080
cggatgacgc agcccaaaag tatgcgggtg acccgggtgg tctgaaaagc gcgttgggtg 10140
agagcctgcg ccaagcggct aagctggcag aactgcaaag ctacgaagtt ccggttgatt 10200
ttgttgtgga aaccgagccg tttagcgagg ataatggctt gctgagcggt gtcggcaaac 10260
tgctgcgtcc aaaactgaaa gagcactacg gcgcacgcct ggaacagctg tatgcagacc 10320
tggctgaaag ccgcgttacg gagctgcgtg ccctgcgtga gggtgctgct gatcaccctg 10380
tgatcttcac gttgacccgt gcggcggaag cgctgctggg tttggccggt ggtccgcctg 10440
cgccggatgc gttgttcatt gaactgggtg gtgatagctt gagcgcgctg acgtttagca 10500
atctgttgcg tgacatcttc gacgttgagg tgccggtcgg tatgattacc ggtccggcga 10560
ccgacctggg tcagctggca gagtatgtgg aatccgaacg tgcgtccggc agccgtcgtc 10620
cgacctttgc gaccgtccac ggtcgcggtg ccacgcaggt gcgcgctgca gacttgacgt 10680
tggataagtt catcgacgca accaccctgg cagaagcacc ggcattgccg cgtgcgaccg 10740
gtaccccgca cactgtgctg ctgaccggtg cgaacggcta cctgggccgt ttcttgattc 10800
tggagtggtt ggaacgtctg gcggagacgg gtggcaagct gattagcatt attcgtgcag 10860
cggacgctgc ggcagcagcg aaacgcctgg agagcgtgtt cgacagcggc gatccgcaac 10920
tgctggagcg tttccgcacg ctggcagcgg atcatctgga agttatcgtc ggtgatattg 10980
gtgagccaaa cctgggtctg caacagggca cctgggagcg cctggcgcag tcggtcgatt 11040
tgattgtcca tccagcagca ctggtcaacc atgtgctgcc gtacgaccag ctgttcggtc 11100
cgaatgtcgt cggcactgcg gagctgattc gtttggccat caccactcgc attaaacctg 11160
tcacgtacat gtccaccgtg gctgtcgcgc tgagcgttga cccggctgcc ttcgccgagg 11220
acggcgacat ccgcacggtt tcggctctgc gtccggttga tggtggctat gcgaatggtt 11280
acgcaaactc gaagtgggcg ggtgaagtac tgctgcgcga ggcacacgat ctgtgcggcc 11340
tgccggttgc ggtttttcgc agcgacatga tcctggcaca tagccgttac gcaggccaac 11400
tgaacgtgcc ggacgcgttt acgcgtctga tctttagcct gctgacgacc ggcatcgcac 11460
cgggtagctt ttatcaaacc gaccctcgcg gcaaccgtgc tattgcgcac tacgacggtc 11520
tgccagcgga ttttgtcgct gaagcggtta ccacgctggg cgagcagatc gcgactgccg 11580
cgcaggattc tggtgcatat cgcagctttg atgttatgaa cccgcacgac gatggcatct 11640
ctctggacgt gttcgtggat tggctgattg cgggtggtca cgatattcgc cgtatcgatg 11700
actatgacga gtggctgagc cgctttacca ccgccctgcg cgcactgccg gacaaacaac 11760
gtcagcactc cgtcctgccg ctgctggacg cttatcgtaa gccggaaacc ccgctgcgtg 11820
gtgcgcctgc gcctaccgat gtgtttcgta gcgcggttcg tgaggcgaag attggtgcgg 11880
ccgaggatat cccacatctg agcgcggcac tgattgacaa atacgtggcc gacttgcgtt 11940
tgctgggtct ggtgtaataa gtttaaacag agaaggagtt ctatcatgat tgaaaccatc 12000
ttaccagccg gcgtcgaatc agcagagtta cttgagtacc ctgaagatct gaaggcgcat 12060
ccggctgaag agcatctgat cgcaaagagc gtagagaagc gtcgtcgcga cttcattggc 12120
gcacgtcatt gcgcccgtct ggcactggcg gagctgggtg aaccgccggt tgcgattggc 12180
aagggtgaac gtggtgcgcc gatttggccg cgtggtgtcg tgggctctct gacccattgc 12240
gatggctatc gcgcagcggc ggttgctcac aaaatgcgtt ttcgcagcat cggcatcgac 12300
gccgaaccgc acgcgaccct gccggaaggt gtcctggatt cggttagcct gccgcctgag 12360
cgtgagtggc tgaaaaccac cgacagcgca ctgcacctgg accgtttgct gttttgtgcg 12420
aaagaagcaa cttacaaagc gtggtggccg ctgacggcac gttggctggg tttcgaagaa 12480
gcgcacatta ccttcgaaat cgaggatggt agcgccgact ctggtaatgg cacgtttcac 12540
agcgaactgc tggtgccggg tcagaccaat gacggtggta ccccgctgct gtctttcgac 12600
ggtcgctggc tgatcgctga tggcttcatc ctgacggcga ttgcatacgc atgataaatt 12660
aacctaggct gctgccaccg ctgagcaata actagcataa ccccttgggg cctctaaacg 12720
ggtcttgagg ggttttttgc tgaaacctca ggcatttgag aagccctcga gtgaccccag 12780
ccgcccctca tgccaaccga gcccattaag cgcagagtcg gccgcaacta tctcggggac 12840
gcataaacac gcagcgattt accaaggagt tcggctaggt caatccgcaa ttccctttgc 12900
ctggccggag atgccgcgag caaacaatgt gtccggtcgc taccagatgg actttgtggg 12960
cggaggattg caccagacgc ttcagcgcag cgtcgtacga tgaatcggaa ggcccggtaa 13020
gcaattgaag aaccgctgac cacctcccat ccgacaatgc aagggtgccc cgctcccagc 13080
gcgacacggt tgcctgatcc acacccatta attcagctag gtgactttgc ttcatatgac 13140
gaagcaaccg cgccctccgc acctgccgcc ccctgtcatt cgtcaacatt cttcagcacc 13200
tcaatgtcgt tcgtagtgag cctcattttt tcaagaccgc cgatgatgag agccaggcct 13260
cgctcgaatg ccgcgtccgg accgccttcg tagacgattt tcatcgcgct ctgtaggcgc 13320
gccggcatcg tagacgctga ggtggtcaac tgatcttcgc cccgctcctc ggcgtctgcc 13380
tcgctagctt gctgctcaag aacagcgccg acggtgaagt agctgattgc catcaacgca 13440
taggtcgcgt cacctgccga aaagccagca tcgcaaagga agcgaagctg cgcgtcggct 13500
ttttccatct gcggcgcggc tggccgcgtc ccggcatgaa tacgcgcgcc atcgcgataa 13560
gcgagcaacg cccgtcgaaa actgcatgca ttgcccttca ggaacgaacg ccagtcgtcg 13620
tcatcccttg gcgtcgaatg cgtgtgattt atcgtcagca tggcttcggc aagtgcgtcg 13680
agcaacgcac gcttgttctt gaaatgccag tagagcgctg gctgttgcac cccgaggcgc 13740
tcagccagtc ggcgcgtcgt tagaccttcc atgcccacgt cgttaagcag ttcgagcgcg 13800
gttcggatca cggcctcgcg ttggagcttg ttcattcgcg aa 13842

Claims (15)

1.全细胞催化剂,其表达重组α-双加氧酶、或重组脂肪酸还原酶和将所述脂肪酸还原酶进行磷酸泛酰巯基乙胺化的磷酸泛酰巯基乙胺基转移酶的组合,且其另外表达转氨酶,其中,所述磷酸泛酰巯基乙胺基转移酶和/或转氨酶优选地为重组体。
2.根据权利要求2所述的全细胞催化剂,其中,所述全细胞催化剂另外表达优选地为重组体的氨基酸脱氢酶。
3.根据权利要求1-2中任一项所述的全细胞催化剂,其中,所述全细胞催化剂另外表达优选地为重组体的烷烃羟化酶。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的全细胞催化剂,其中,所述全细胞催化剂另外表达优选地为重组体的AlkL家族的多肽。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的全细胞催化剂,其中,它另外表达优选地为重组体的醇脱氢酶。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的全细胞催化剂,其中,与全细胞催化剂的野生型相比,在β-氧化中参与的至少一种酶的活性降低。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的全细胞催化剂,其中,与全细胞催化剂的野生型相比,BioH或其变体的活性降低。
8.根据权利要求1-6中任一项所述的全细胞催化剂,其中,与全细胞催化剂的野生型相比,FadL或其变体的活性增加。
9.用于将脂肪酸、ω-羟基脂肪酸、ω-氧代脂肪酸或其单酯转化成胺的方法,所述方法包括下述步骤
a) 通过与烷烃羟化酶和/或醇脱氢酶接触,将脂肪酸、ω-羟基脂肪酸、ω-氧代脂肪酸或其单酯氧化成氧化产物,
b) 使所述氧化产物与磷酸泛酰巯基乙胺基化的脂肪酸还原酶或α-双加氧酶接触以产生醛,和
c) 使所述醛与转氨酶接触。
10.根据权利要求9所述的方法,其中,在步骤c)中,存在氨基酸脱氢酶。
11.根据权利要求9-10中任一项所述的方法,其中,以根据权利要求1-8中任一项所述的全细胞催化剂的形式,提供选自磷酸泛酰巯基乙胺基化的脂肪酸还原酶、α-双加氧酶、转氨酶、氨基酸脱氢酶和烷烃羟化酶的至少一种酶,优选得自该组的使用的所有酶。
12.根据权利要求9-11中任一项所述的方法,其中,所述脂肪酸、ω-羟基脂肪酸、ω-氧代脂肪酸或其单酯是式(I)的化合物
R1 - A - COOR2 (I)
其中R1选自-H、-CHO、-OH和COOR3
其中R2和R3各自且彼此独立地选自H、甲基、乙基和丙基,
前提条件是,残基R2和R3中的至少一个是H,且
其中A代表无分支的、支链、直链、环状、被取代的或未被取代的、具有至少4个碳原子的烃基。
13.根据权利要求9-12中任一项所述的方法,其中,A具有式- (CH2)n -,其中n是至少4,优选至少10。
14.根据权利要求1-8中任一项所述的全细胞催化剂或根据权利要求8-12中任一项所述的方法用于将脂肪酸、ω-羟基脂肪酸、ω-氧代脂肪酸或其单酯胺化的用途。
15.反应混合物,其包含在水溶液中的根据权利要求1-8中任一项所述的全细胞催化剂和式(I)的脂肪酸、ω-羟基脂肪酸、ω-氧代脂肪酸或其单酯
R1 - A - COOR2 (I),
其中R1选自-H、-CHO、-OH和COOR3
其中R2和R3各自且彼此独立地选自H、甲基、乙基和丙基,
前提条件是,残基R2和R3中的至少一个是H,
其中A代表无分支的、支链、直链、环状、被取代的或未被取代的、具有至少4个碳原子的烃基,优选式- (CH2)n -,且其中n是至少4,特别优选至少10。
CN201310707410.5A 2012-12-21 2013-12-20 ω-氨基脂肪酸的生产 Active CN103881933B (zh)

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