CN107201356A - 支撑p450脂肪酸脱羧酶活性的还原伴侣蛋白组合及其应用 - Google Patents

支撑p450脂肪酸脱羧酶活性的还原伴侣蛋白组合及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN107201356A
CN107201356A CN201610151612.XA CN201610151612A CN107201356A CN 107201356 A CN107201356 A CN 107201356A CN 201610151612 A CN201610151612 A CN 201610151612A CN 107201356 A CN107201356 A CN 107201356A
Authority
CN
China
Prior art keywords
fdx
decarboxylation
fatty acids
ferredoxin
reduction
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201610151612.XA
Other languages
English (en)
Inventor
李盛英
房博
齐凤霞
张伟
杜磊
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Boeing China Co Ltd
Qingdao Institute of Bioenergy and Bioprocess Technology of CAS
Original Assignee
Boeing China Co Ltd
Qingdao Institute of Bioenergy and Bioprocess Technology of CAS
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Boeing China Co Ltd, Qingdao Institute of Bioenergy and Bioprocess Technology of CAS filed Critical Boeing China Co Ltd
Priority to CN201610151612.XA priority Critical patent/CN107201356A/zh
Publication of CN107201356A publication Critical patent/CN107201356A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/96—Stabilising an enzyme by forming an adduct or a composition; Forming enzyme conjugates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/88—Lyases (4.)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P5/00—Preparation of hydrocarbons or halogenated hydrocarbons
    • C12P5/02—Preparation of hydrocarbons or halogenated hydrocarbons acyclic
    • C12P5/026—Unsaturated compounds, i.e. alkenes, alkynes or allenes

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明涉及生物能源和酶工程领域，具体涉及一种能够支撑P450脂肪酸脱羧酶OleTJE催化脂肪酸脱羧产生α烯烃活性的还原伴侣蛋白组合及其应用。支撑P450脂肪酸脱羧酶OleTJE催化脂肪酸脱羧产生α烯烃活性的还原伴侣蛋白组合为铁氧还蛋白(ferredoxin)和铁氧还蛋白还原酶(ferredoxin reductase)。本发明还原伴侣蛋白组合与P450脂肪酸脱羧酶OleTJE构成的脂肪酸生物脱羧系统催化效率高、稳定性好，在运用生物催化系统生产α烯烃方面具有良好的应用前景。

Description

支撑P450脂肪酸脱羧酶活性的还原伴侣蛋白组合及其应用
技术领域
本发明涉及生物能源和酶工程领域，具体涉及一种能够支撑P450脂肪酸脱羧酶OleTJE催化脂肪酸脱羧产生α烯烃活性的还原伴侣蛋白组合及其应用。
背景技术
当今，能源问题已经成为世界各国涉及社会经济发展、国家安全、国际地缘政治以及环境保护的重要问题(Shafiee&Topal,2009；Steen et al.,2010)。在我国能源需求高速增长的同时，化石燃料资源(石油、天然气、煤等)迅速消耗；水利资源的过度开发对生态环境造成了巨大压力；核能利用中的安全问题仍有争论；风能、太阳能等洁净能源的能量密度较低。因此，生物燃料因其可再生性、环保及低碳排放等特点受到了世界各国的高度重视(Liao et al.,2012)。由生物储能物质脂肪酸衍生而来的脂肪烃类生物燃料因其所具有的高能量密度、低吸湿性、与现有发动机系统和运输设施相兼容等特性被认为是最理想的石油类燃料替代品(Keasling&Chou,2008；Li et al.,2010；Rude&Schirmer,2009)。
来源于咸海鲜球菌(Jeotgalicoccus sp.ATCC 8456)的P450脂肪酸脱羧酶OleTJE不仅能以H2O2作为氧供体和电子供体催化不同链长的脂肪酸发生脱羧反应生成相应链长的α烯烃(Rude et al.,2011)，而且也能够分别以O2，NAD(P)H作为氧供体和电子供体，在还原伴侣蛋白的支撑下，催化脂肪酸脱羧反应(Liu et al.,2014)。研究发现来源于红球菌(Rhodococcus sp.NCIMB 9784)的还原伴侣RhFRED可支撑OleTJE催化豆蔻酸(myristicacid)脱羧生成相应的α十三烯(1-tridecene)(Liu et al.,2014)。利用来源于恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)的铁氧还蛋白Pdx和铁氧还蛋白还原酶PdR亦可支撑OleTJE脱羧短链脂肪酸(C4-C9)生成相应α烯烃(Dennig et al.,2015)。
从催化机理来看，依赖于还原伴侣蛋白的P450脂肪酸脱羧系统需要还原伴侣蛋白从还原型辅酶NAD(P)H依次输送两个电子到P450亚铁血红素(heme iron)反应中心，协同两个来源于酸性氨基酸的质子活化分子氧(O2)，以产生具有高反应性氧高铁酰自由基复合物(Fe4+＝O+.)以氧化底物(Sono et al.,1996)。
相较于依赖于H2O2的系统来说，还原伴侣系统避开了H2O2对于生物系统(细胞和酶)的毒性，在利用工程微生物高效合成α烯烃的实际应用中非常重要。此外，由于H2O2本身所具有的不稳定性和易分解性，还原伴侣系统支撑的P450脱羧系统在催化效率和稳定性方面具备明显优势。具体而言，对于P450脂肪酸脱羧酶OleTJE，目前尚不清楚何种还原伴侣蛋白能够高效支撑其催化活性，而优化的还原伴侣蛋白组合无疑将对未来利用OleTJE催化生产α烯烃中具有重要意义。
发明内容
本发明的目的在于提供支撑P450脂肪酸脱羧酶OleTJE活性的还原伴侣蛋白组合及其应用。
为实现上述目的，本发明采用技术方案为：
一种支撑P450脂肪酸脱羧酶活性的还原伴侣蛋白组合，支撑P450脂肪酸脱羧酶OleTJE催化脂肪酸脱羧产生α烯烃活性的还原伴侣蛋白组合为铁氧还蛋白(ferredoxin)、铁氧还蛋白还原酶(ferredoxin reductase)和辅酶。
所述辅酶为NADH或NADPH。
所述铁氧还蛋白和铁氧还蛋白还原酶组合按摩尔浓度比为(1-10):1的比例混合。
所述组合中铁氧还蛋白和铁氧还蛋白还原酶分别源于聚球藻(Synechococcuselongatus PCC 7942)或谷棒杆菌(Corynebacterium glutamicum ATCC 13032)。
所述来源于聚球藻(Synechococcus elongatus PCC 7942)的铁氧还蛋白分别为Fdx_0338(SEQ ID NO.1)，Fdx_0698(SEQ ID NO.2)，Fdx_0814(SEQ ID NO.3)，Fdx_0898(SEQ ID NO.4)，Fdx_1499(SEQ ID NO.5)，Fdx_1749(SEQ ID NO.6)，Fdx_2581(SEQ IDNO.7)或其功能等同体；
所述来源于谷棒杆菌(Corynebacterium glutamicum ATCC 13032)的铁氧还蛋白分别为Fdx_2856(SEQ ID NO.8)，Fdx_0526(SEQ ID NO.9)，Fdx_1057(SEQ ID NO.10)或其功能等同体。
所述来源于聚球藻(Synechococcus elongatus PCC 7942)的铁氧还蛋白还原酶FdR_0978(SEQ ID NO.11)或其功能等同体；
所述来源于谷棒杆菌(Corynebacterium glutamicum ATCC 13032)的铁氧还蛋白还原酶FdR_2658(SEQ ID NO.12)，FdR_2719(SEQ ID NO.13)或其功能等同体。
所述组合为Fdx_0338，Fdx_0698，Fdx_0814，Fdx_0898，Fdx_1499，Fdx_1749或Fdx_2581铁氧还蛋白分别与同源的铁氧还蛋白还原酶FdR_0978组合；
或，Fdx_0338，Fdx_0698，Fdx_0814，Fdx_0898，Fdx_1499，Fdx_1749或Fdx_2581铁氧还蛋白分别与异源的铁氧还蛋白还原酶FdR_2658或FdR_2719组合；
或，Fdx_2856，Fdx_0526或Fdx_1057铁氧还蛋白分别与同源的铁氧还蛋白还原酶FdR_2658或FdR_2719组合；
或，Fdx_2856，Fdx_0526或Fdx_1057铁氧还蛋白分别与异源的铁氧还蛋白还原酶FdR_0978组合。
所述的P450脂肪酸脱羧酶OleTJE来源于咸海鲜球菌(Jeotgalicoccus sp.ATCC8456)菌株的P450脂肪酸脱羧酶。
一种支撑P450脂肪酸脱羧酶活性的还原伴侣蛋白组合在支撑P450脂肪酸脱羧酶OleTJE催化脂肪酸脱羧产生α烯烃反应中的应用；所述支撑P450脂肪酸脱羧酶OleTJE催化脂肪酸脱羧产生α烯烃活性的还原伴侣蛋白组合为铁氧还蛋白(ferredoxin)、铁氧还蛋白还原酶(ferredoxin reductase)和辅酶。其中，辅酶的摩尔浓度和底物的摩尔浓度有着密切关系，辅酶浓度一般大于等于底物的浓度。
所述P450脂肪酸脱羧酶OleTJE与还原伴侣蛋白组合中各成分的摩尔浓度比为1:(10-50):(5-20)。
本发明的原理：
本发明涉及的还原伴侣系统用于协助P450脂肪酸脱羧酶OleTJE催化的脱羧反应，其催化活性依赖于还原伴侣蛋白从还原型辅酶NAD(P)H依次输送两个电子到P450亚铁血红素(heme iron)反应中心，协同两个来源于酸性氨基酸的质子活化分子氧(O2)，以产生具有很高反应性的氧高铁酰自由基复合物(Fe4+＝O+.)来脱羧脂肪酸底物，合成相应的α烯烃。
本发明的有益效果在于：相较于P450脂肪酸脱羧酶OleTJE一般采用的H2O2系统，还原伴侣系统对OleTJE催化活性的支撑作用要更为高效和稳定，且不存在生物毒性作用，因此在利用微生物合成α烯烃的实际应用中独具优势。相较于已知的还原伴侣系统，本发明披露的若干还原伴侣组合更加高效，同时提供了多种不同的选择，有利于在不同宿主系统中的应用，具有广阔的工业价值和应用前景。
附图说明
图1为本发明实施例提供的还原伴侣蛋白元件的不同组合在体外支撑P450脂肪酸脱羧酶OleTJE对底物豆蔻酸(myristic acid)脱羧产生α烯烃的转化率效果图。
具体实施方式
本发明将来源于聚球藻(Synechococcus elongatus PCC 7942)和谷棒杆菌(Corynebacterium glutamicum ATCC 13032)的10种铁氧还蛋白(ferredoxin)和3种铁氧还蛋白还原酶(ferredoxin reductase)进行组合，获得若干种能在体外高效支撑P450脂肪酸脱羧酶OleTJE催化豆蔻酸(myristic acid)脱羧生成α十三烯(1-tridecene)的还原伴侣组合。由这些还原伴侣蛋白组合与P450脂肪酸脱羧酶OleTJE构成的脂肪酸生物脱羧系统催化效率高、稳定性好，在运用生物催化系统生产α烯烃方面具有良好的应用前景。
下面将结合附图和实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将理解，下列附图和实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。根据附图和优选方法的下列详细描述，本发明的各种目的和有利方面对于本领域技术人员来说将变得显然。
实施例中所采用的分子生物学实验技术，如无特殊说明，通常按照常规方法操作，具体可参见《分子克隆实验指南》(第三版)(Sambrook J,Russell DW，Janssen K,Argentine J.黄培堂等译，2002，北京：科学出版社)，或按照相关产品说明书执行。
表达恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)的Pdx和PdR的质粒为pET28b-pdx和pET19b-pdr以及表达P450酶OleTJE和RhFRED的质粒为pET28b-oleTJE和pET28b-RhFRED(Liuet al.,2014)。其中质粒pET28b-pdx和pET19b-pdr分别由质粒pET28b和pET19b以及基因pdx(GenBank Accession No.BAN13287.1)和pdr(GenBank Accession No.BAA00414.1)按照常规克隆方法构建完成。
所用试剂未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。本领域技术人员知晓，实施例以举例方式描述本发明，且不意欲限制本发明所要求保护的范围。
实施例中用到的引物如表1所示：
表1 引物列表
实施例
1.铁氧还蛋白序列的获得：
1)从NCBI网站上搜索聚球藻(Synechococcus elongatus PCC 7942)的铁氧还蛋白Fdx_0338的序列SEQ ID NO.1(GenBank Accession No.SYNPCC7942_0338)，Fdx_0698的序列SEQ ID NO.2(GenBank Accession No.SYNPCC7942_0698)，Fdx_0814的序列SEQ IDNO.3(GenBank Accession No.SYNPCC7942_0814)，Fdx_0898的序列SEQ ID NO.4(GenBankAccession No.SYNPCC7942_0898)，Fdx_1499的序列SEQ ID NO.5(GenBank AccessionNo.SYNPCC7942_1499)，Fdx_1749的序列SEQ ID NO.6(GenBank AccessionNo.SYNPCC7942_1749)和Fdx_2581的序列SEQ ID NO.7(GenBank AccessionNo.SYNPCC7942_2581)；
2)从NCBI网站上搜索谷棒杆菌(Corynebacterium glutamicum ATCC 13032)的铁氧还蛋白Fdx_2856的序列SEQ ID NO.8(GenBank Accession No.NCgl2856)，Fdx_0526的序列SEQ ID NO.9(GenBank Accession No.NCgl0526)和Fdx_1057的序列SEQ ID NO.10(GenBank Accession No.NCgl1057)。
2.铁氧还蛋白还原酶序列的获得：
1)从NCBI网站上搜索聚球藻(Synechococcus elongatus PCC 7942)的铁氧还蛋白还原酶FdR_0978的序列SEQ ID NO.11(GenBank Accession No.ABB57008)；
2)从NCBI网站上搜索谷棒杆菌(Corynebacterium glutamicum ATCC 13032)的铁氧还蛋白还原酶FdR_2658的序列SEQ ID NO.12(GenBank Accession No.NCgl2658)和FdR_2719的序列SEQ ID NO.13(GenBank Accession No.NCgl2719)。
3.表达铁氧还蛋白质粒的构建
1)来自于聚球藻的铁氧还蛋白基因表达铁氧还蛋白质粒的构建：
将上述获得自聚球藻的所有铁氧还蛋白基因序列分别经金唯智公司进行密码子优化，得到优化的DNA序列(SEQ ID NO.1-7)。在基因5’端和3’端分别加入NdeI和XhoI酶切位点，而后按照现有克隆方式将优化后并带有酶切位点的基因直接克隆到pET28b表达载体上。
2)来自于谷棒杆菌的铁氧还蛋白基因表达铁氧还蛋白质粒的构建：
以Corynebacterium glutamicum ATCC 13032菌株作为模板，分别以引物2856-NdeI和2856-XhoI，引物0526-NdeI和0526-XhoI或引物1057-NdeI和1057-XhoI(参见表1)分别进行PCR扩增(PCR条件为：98℃2min；98℃10s；55℃15s；68℃30s；循环30次；68℃10min)，扩增获得产物两端均分别带有NdeI和XhoI酶切位点，将扩增后带有酶切位点的基因片段分别克隆到pET28b载体中用于表达。
4.表达铁氧还蛋白还原酶质粒的构建
1)来自于聚球藻的铁氧还蛋白还原酶基因表达铁氧还蛋白还原酶质粒的构建：
将上述获得自聚球藻的所有铁氧还蛋白还原酶基因序列在基因5’端和3’端分别加入NdeI和XhoI酶切位点，而后按照现有克隆方式将带有酶切位点的基因直接克隆到pET28b载体上。
2)来自于谷棒杆菌的铁氧还蛋白还原酶基因序列表达铁氧还蛋白还原酶质粒的构建：
以Corynebacterium glutamicum ATCC 13032菌株作为模板，分别以引物2658-NdeI和2658-XhoI或引物2719-NdeI和2719-XhoI(参见表1)分别进行PCR扩增(PCR条件为：98℃2min；98℃10s；55℃15s；68℃1.5min；循环30次；68℃10min)，扩增获得产物两端均分别带有NdeI和XhoI酶切位点，将扩增后带有酶切位点的基因片段分别克隆到pET28b载体中用于表达。
5.按照现有技术方式将上述获得的表达铁氧还蛋白质粒、铁氧还蛋白还原酶的质粒分别转化至E.coli BL21(DE3)获得转化子。
6.将铁氧还蛋白、铁氧还蛋白还原酶以及P450脂肪酸脱羧酶OleTJE分别在E.coliBL21(DE3)中的表达，具体步骤如下：
1)取以上分别获得的转化子，接种到含有20ml LB种子培养基(含有50mg/l卡那霉素)中，37℃，220rpm过夜培养，分别获得种子液；
2)将上述获得的种子液分别按1:50体积比的接种量接种到含有800ml TB培养基(酵母提取物24g，胰蛋白胨12g，磷酸氢二钾12.54g，磷酸二氢钾2.31g，甘油40g，50mg/l卡那霉素，1mM VB1)的2L三角瓶中，在37℃，220rpm的条件下培养至OD600＝0.6-0.8；而后分别向上述培养液中加入0.2mM的IPTG，18℃，220rpm诱导20h。
7.将铁氧还蛋白、铁氧还蛋白还原酶以及P450脂肪酸脱羧酶OleTJE分别纯化，具体步骤如下：
1)将上述获得诱导20h的菌液分别6000rpm，4℃离心10min，倒掉上清，分别收 集菌体；
2)将上述获得菌体分别用大约50ml的裂解缓冲液(NaH2PO4﹒2H2O 50mM，NaCl300mM，甘油10％，咪唑10mM)进行重悬，超声破碎(5s，5s，30％功率)30min；
3)将上述分别获得破碎菌液12000rpm，4℃离心30min，收集上清分别加入1ml Ni-NTA，混匀，缓慢摇晃孵育1h；
4)将上述加入Ni-NTA的上清液分别置于蛋白分离柱中，加入约200ml洗涤缓冲液(NaH2PO4﹒2H2O 50mM，NaCl 300mM，甘油10％，咪唑20mM)进行洗脱，直至无蛋白流出；
5)而后再采用10ml洗脱缓冲液(NaH2PO4﹒2H2O 50mM，NaCl 300mM，甘油10％，咪唑250mM)将目的蛋白从镍柱中置换出来，进而对目的蛋白进行洗脱，收集含有目的蛋白的洗脱液；
6)将5)中所收集的洗脱液采用超滤管进行浓缩，而后分别采用脱盐柱PD-10，用脱盐缓冲液(NaH2PO4﹒2H2O 50mM，甘油10％)进行脱盐；
7)而后分别将获得的纯化蛋白分装，液氮冷冻，-80℃保存。
8.将铁氧还蛋白和铁氧还蛋白还原酶进行蛋白浓度的测定，具体步骤如下：
1)取标准小牛血清蛋白稀释不同浓度：0、0.025mg/ml、0.05mg/ml、0.1mg/ml、0.2mg/ml、0.3mg/ml、0.4mg/ml和0.5mg/ml，每个浓度梯度取20μl与200μl G250显色液混合于96孔板中，显色5min；
2)取纯化得到的各蛋白分别稀释不同倍数：5倍、20倍、100倍、200倍、500倍和1000倍。每个蛋白的浓度梯度取20μl与200μl G250显色液混合于96孔板中，显色5min；
3)用Synergy HT SIAFRTD酶标仪进行595nm波长下扫描检测；
4)根据不同浓度的小牛血清标准液在595nm波长下的吸光值绘制标准曲线。将所检测的目标蛋白在595nm波长下的吸光值，根据标准曲线计算各自的浓度，具体浓度见表2。
9.将P450脂肪酸脱羧酶OleTJE进行活性浓度测定，具体步骤如下：
1)取P450脂肪酸脱羧酶OleTJE，采用脱盐缓冲液稀释3-4倍；
2)用CO气体缓慢吹打P450酶溶液1-2min；
3)采用Beckman DU800UV/Vis分光光度计在400-600nm进行全波长扫描，随后加入适量硫代硫酸钠还原后，再次在此波长范围内进行全波长扫描；
4)对两次P450酶液在400-600nm的全波长扫描结果进行差减，并按照在450nm和490nm之间的吸光度之差和摩尔吸光系数(εA450-A490＝91000L﹒mol-1﹒cm-1)计算P450的活性浓度，具体浓度见表2。
10.不同还原伴侣组合作用P450脂肪酸脱羧酶OleTJE体外催化豆蔻酸(myristicacid)进行脱羧反应，具体以铁氧还蛋白Fdx_0338和铁氧还蛋白还原酶FdR_0978为例，步骤如下：
1)由铁氧还蛋白Fdx_0338和铁氧还蛋白还原酶FdR_0978体外支撑脂肪酸脱羧酶OleTJE脱羧的酶反应体系为：0.5μM OleTJE，400μM豆蔻酸(myristic acid)，10μM铁氧还蛋白Fdx_0338，10μM铁氧还蛋白还原酶FdR_0978，1mM NADPH，用脱盐缓冲液补全反应体系至100μl，充分混匀，30℃过夜反应；
2)加入20μl 10M HCl终止反应。然后加入5μl十七酸(heptadecanoic acid)作为内标，内标用于对脂肪烃和剩余脂肪酸进行定量。最后用150μl乙酸乙酯(色谱用)进行抽提；
3)将步骤2)获得样品进行14000rpm，10min高速离心，离心完后吸取上层有机 相于色谱瓶中，进行下一步的检测；
4)采用安捷伦7890A气相色谱进行检测。所使用的气相色谱柱为HP-INNOWax(30m×0.25mm×0.25μm)，载气为氮气，流速为1ml/min，进样量为1μl，进样口温度为250℃，分流比为20:1。柱箱升温程序为：50℃维持4min，10℃/min升至250℃，250℃维持15min。气相测试结束后使用与仪器相连的分析软件进行相关定性与定量分析；
5)以铁氧还蛋白Fdx_0338和铁氧还蛋白还原酶FdR_0978组合的还原伴侣蛋白组合支撑OleTJE体外活性进行定量分析，由该组还原伴侣支撑0.5μM脂肪酸脱羧酶OleTJE体外脱羧400μM豆蔻酸的转化率达到82.5％。
而后按照上述步骤10的记载采用不同还原伴侣组合作用P450脂肪酸脱羧酶OleTJE体外催化豆蔻酸(myristic acid)进行脱羧反应结果参见表3，由表3及图1可见来源于聚球藻(Synechococcus elongatus PCC 7942)的铁氧还蛋白还原酶FdR_0978与10种铁氧还蛋白构成的还原伴侣组合支撑OleTJE催化豆蔻酸脱羧的转化率介于40-80％之间；来源于谷棒杆菌(Corynebacterium glutamicum ATCC 13032)的铁氧还蛋白还原酶FdR_2658和FdR_2719与10种铁氧还蛋白构成的还原伴侣组合支撑OleTJE催化豆蔻酸脱羧的转化率大部分在73-95％的范围之内。这些组合，尤其是来源于谷棒杆菌的铁氧还蛋白还原酶FdR_2658和FdR_2719与10种铁氧还蛋白构成的还原伴侣组合对OleTJE的活性支撑大部分都优于已知的来源于恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)的Pdx/PdR组合(转化率48.02％)，以及来源于红球菌(Rhodococcus sp.NCIMB 9784)的还原伴侣RhFRED(转化率71.26％)，尤其远高于依赖于H2O2的催化系统(转化率49.49％)的催化活性。
表2 测定的铁氧还蛋白、铁氧还蛋白还原酶以及P450脂肪酸脱羧酶OleTJE的浓度
表3 不同还原伴侣组合以及H2O2体外支撑P450脂肪酸脱羧酶OleTJE催化豆蔻酸(myristic acid)脱羧产生α烯烃的产率
参考文献：
Dennig,A.,Kuhn,M.,Tassoti,S.,Thiessenhusen,A.,Gilch,S.,Buelter,T.,Haas,T.,Hall,M.,Faber,K.2015.Oxidative Decarboxylation of Short-Chain FattyAcids to 1-Alkenes.Angewandte Chemie-International Edition,54(30),8819-8822.
Keasling,J.D.,Chou,H.2008.Metabolic engineering delivers next-generation biofuels.Nature Biotechnology,26(3),298-299.
Li,H.,Cann,A.F.,Liao,J.C.2010.Biofuels:Biomolecular EngineeringFundamentals and Advances.in:Annual Review of Chemical and BiomolecularEngineering,Vol 1,(Eds.)J.M.Prausnitz,M.F.Doherty,R.A.Segalman,Vol.1,pp.19-36.
Liao,W.,Heijungs,R.,Huppes,G.2012.Natural resource demand of globalbiofuels in the Anthropocene:A review.Renewable&Sustainable Energy Reviews,16(1),996-1003.
Liu,Y.,Wang,C.,Yan,J.Y.,Zhang,W.,Guan,W.N.,Lu,X.F.,Li,S.Y.2014.Hydrogen peroxide-independent production of alpha-alkenes by OleT(JE)P450fatty acid decarboxylase.Biotechnology for Biofuels,7,12.
Rude,M.A.,Baron,T.S.,Brubaker,S.,Alibhai,M.,Del Cardayre,S.B.,Schirmer,A.2011.Terminal Olefin(1-Alkene)Biosynthesis by a Novel P450FattyAcid Decarboxylase from Jeotgalicoccus Species.Applied and EnvironmentalMicrobiology,77(5),1718-1727.
Rude,M.A.,Schirmer,A.2009.New microbial fuels:a biotechperspective.Current Opinion in Microbiology,12(3),274-281.
Shafiee,S.,Topal,E.2009.When will fossil fuel reserves be diminished？Energy Policy,37(1),181-189.
Sono,M.,Roach,M.P.,Coulter,E.D.,Dawson,J.H.1996.Heme-ContainingOxygenases.Chemical Reviews,96(7),2841-2888.
Steen,E.J.,Kang,Y.S.,Bokinsky,G.,Hu,Z.H.,Schirmer,A.,McClure,A.,delCardayre,S.B.,Keasling,J.D.2010.Microbial production of fatty-acid-derivedfuels and chemicals from plant biomass.Nature,463(7280),559-U182.
SEQ ID NO.1：
优化的DNA序列:
ATGGCCACCTATCAGGTGGAAGTGATTTACCAGGGCCAGAGCCAGACCTTTACCGCCGATAGCGATCAGAGCGTGCTGGATAGCGCACAGGCCGCAGGTGTTGATCTGCCGGCCAGCTGCCTGACCGGTGTGTGCACCACCTGTGCCGCACGCATTCTGAGCGGCGAAGTGGATCAGCCGGATGCCATGGGTGTGGGTCCGGAACCGGCCAAACAGGGTTATACCCTGCTGTGCGTGGCATATCCGCGCAGCGACCTGAAAATCGAGACCCACAAAGAAGATGAGCTGTATGCCCTGCAGTTTGGTCAGCCGGGTTAA
a)序列特征：
●长度：318bp
●类型：碱基序列
●链型：单链
●拓扑结构：线性
(b)分子类型：DNA
(c)假设：否
(d)反义：否
(e)最初来源：聚球藻(Synechococcus elongatus PCC 7942)
蛋白序列(GenBank Accession No.SYNPCC7942_0338)：
MATYQVEVIYQGQSQTFTADSDQSVLDSAQAAGVDLPASCLTGVCTTCAARILSGEVDQPDAMGVGPEPAKQGYTLLCVAYPRSDLKIETHKEDELYALQFGQPG
(a)序列特征：
●长度：105AA
●类型：蛋白序列
(b)分子类型：蛋白质
(c)假设：否
(d)反义：否
(e)最初来源：聚球藻(Synechococcus elongatus PCC 7942)
SEQ ID NO.2：
优化的DNA序列:
ATGCCGAGCATTCGCTTCATTCGCGAGGATAAAGAAGTTTTTGCCGCCGATGGCGCAAACCTGCGCTTTAAAGCCGTGGAAAACCAGGTGGACCTGTATACCTTCGGCGGCAAGATGATGAACTGCGGCGGTTATGGTCAGTGCGGTACCTGCATTGTGGAGATTGTGCAGGGCGCCGAAAATCTGAGCCCGCGCACCAGCTTCGAAGAACGCAAGCTGAAACGTAAGCCGGATAGCTATCGCCTGGCCTGTCAGGCCACCGTGAATGGTCCGGTGACCGTTCTGACCAAACCGAACCCGAAAGAAGCCCAGCGCGAAACCCTGATTGCACAGGATCTGGCCCGCCCGATTCCGGTTACCGCACCCCCTGCCCTGCCGCAGACCGAAACCGAGGTGGCAGGTGATCCGCCGAGCATTGCCACCGCCGAAACCTAA
a)序列特征：
●长度：435bp
●类型：碱基序列
●链型：单链
●拓扑结构：线性
(b)分子类型：DNA
(c)假设：否
(d)反义：否
(e)最初来源：聚球藻(Synechococcus elongatus PCC 7942)
蛋白序列(GenBank Accession No.SYNPCC7942_0698)：
MPSIRFIREDKEVFAADGANLRFKAVENQVDLYTFGGKMMNCGGYGQCGTCIVEIVQGAENLSPRTSFEERKLKRKPDSYRLACQATVNGPVTVLTKPNPKEAQRETLIAQDLARPIPVTAPPALPQTETEVAGDPPSIATAET
(a)序列特征：
●长度：144AA
●类型：蛋白序列
(b)分子类型：蛋白质
(c)假设：否
(d)反义：否
(e)最初来源：聚球藻(Synechococcus elongatus PCC 7942)
SEQ ID NO.3：
优化的DNA序列:
ATGGCCCATACCATTGTGACCAACACCTGCGAAGGTGTGGCAGATTGCGTGGATGCCTGCCCGGTGGCCTGCATTCAGGAAGGTCCGGGTCGCAATCAGAAAGGCACCACCTGGTACTGGATCGATTTCAGCACCTGCATCGATTGCGGCATTTGCCTGCAGGTGTGCCCGGTGGAAGGTGCCATTCTGCCGGAAGAACGCCCGGAACTGCAGCAGACCCCGTAA
a)序列特征：
●长度：225bp
●类型：碱基序列
●链型：单链
●拓扑结构：线性
(b)分子类型：DNA
(c)假设：否
(d)反义：否
(e)最初来源：聚球藻(Synechococcus elongatus PCC 7942)
蛋白序列(GenBank Accession No.SYNPCC7942_0814)：
MAHTIVTNTCEGVADCVDACPVACIQEGPGRNQKGTTWYWIDFSTCIDCGICLQVCPVEGAILPEERPELQQTP
(a)序列特征：
●长度：74AA
●类型：蛋白序列
(b)分子类型：蛋白质
(c)假设：否
(d)反义：否
(e)最初来源：聚球藻(Synechococcus elongatus PCC 7942)
SEQ ID NO.4：
优化的DNA序列:
ATGACCCTGGCCGAAACCCTGAGCGTTCGTGTTCGCAGCCTGGGCCTGGACCAGATTGACCGTCATCTGTTTCTGTGCGCCGATCAGACCAAACCGCTGTGCTGCGATCGCGATCGCAGCCTGGAAAGCTGGGAGTATCTGAAACGCCGCCTGCGTGAACTGGATCTGGATCGCCCGGATACCGGTAAACCGCTGGTGTTTCGCACCAAAGCCAATTGCCTGCGCGTGTGCCAGGAAGGTCCGATTCTGCTGGTGTATCCGGAAGGCATTTGGTATGGTCGCGTGACCCCGGAAGCCATTGAACGCATTCTGCAGGAACACCTGCTGGGTGGTCAGCCGGTGCAGGAACTGATTCTGCATCAGCATGCCCTGCCGGCAGTGGATCCGCTGTAA
a)序列特征：
●长度：393bp
●类型：碱基序列
●链型：单链
●拓扑结构：线性
(b)分子类型：DNA
(c)假设：否
(d)反义：否
(e)最初来源：聚球藻(Synechococcus elongatus PCC 7942)
蛋白序列(GenBank Accession No.SYNPCC7942_0898)：
MTLAETLSVRVRSLGLDQIDRHLFLCADQTKPLCCDRDRSLESWEYLKRRLRELDLDRPDTGKPLVFRTKANCLRVCQEGPILLVYPEGIWYGRVTPEAIERILQEHLLGGQPVQELILHQHALPAVDPL
(a)序列特征：
●长度：130AA
●类型：蛋白序列
(b)分子类型：蛋白质
(c)假设：否
(d)反义：否
(e)最初来源：聚球藻(Synechococcus elongatus PCC 7942)
SEQ ID NO.5：
优化的DNA序列:
ATGGCCACCTATAAAGTGACCCTGGTGAACGCCGCCGAAGGCCTGAATACCACCATTGATGTGGCCGACGACACCTATATTCTGGATGCCGCCGAAGAACAGGGCATTGATCTGCCGTATAGCTGCCGCGCAGGTGCCTGTAGTACCTGCGCAGGTAAAGTGGTGAGCGGTACCGTGGATCAGAGCGATCAGAGCTTCCTGGATGATGATCAGATTGCCGCCGGTTTTGTGCTGACCTGCGTGGCCTATCCGACCAGCGATGTGACCATCGAAACCCACAAAGAAGAAGATCTGTATTAA
(a)序列特征：
●长度：300bp
●类型：碱基序列
●链型：单链
●拓扑结构：线性
(b)分子类型：DNA
(c)假设：否
(d)反义：否
(e)最初来源：聚球藻(Synechococcus elongatus PCC 7942)
蛋白序列(GenBank Accession No.SYNPCC7942_1499)：
MATYKVTLVNAAEGLNTTIDVADDTYILDAAEEQGIDLPYSCRAGACSTCAGKVVSGTVDQSDQSFLDDDQIAAGFVLTCVAYPTSDVTIETHKEEDLY
(a)序列特征：
●长度：99AA
●类型：蛋白序列
(b)分子类型：蛋白质
(c)假设：否
(d)反义：否
(e)最初来源：聚球藻(Synechococcus elongatus PCC 7942)
SEQ ID NO.6：
优化的DNA序列:
ATGACCACCCCGGATCGTAGCGGTCTGGAGCCGGAACTGGGCGGTAGTCTGCGTCATGGTCAGGCACGCAGTGGTCTGGAACCGGAGCTGGGTGGCGAACTGCGTCAGAAACTGGTGTGGGTGGATGAGGTGACCTGCATTGGCTGCCGTTATTGCAGCCATGTGGCCACCAACACCTTCTACATCGAGCCGGATTATGGCCGTAGCCGCGTGGTGCGCCAGAATGGTGATCCGGAAGAACTGGTGCAGGAAGCCATTGATACCTGCCCGGTGGATTGCATCCATTGGGTGAATCCGAGCGAACTGCGCCAGCTGGAAGCCGAACGCCGCAATCAGGTGATTATGCCGCTGGGTTTTCCGCAGGAACGCAGCAAACAGCGCCGCCGTACCTAA
(a)序列特征：
●长度：393bp
●类型：碱基序列
●链型：单链
●拓扑结构：线性
(b)分子类型：DNA
(c)假设：否
(d)反义：否
(e)最初来源：聚球藻(Synechococcus elongatus PCC 7942)
蛋白序列(GenBank Accession No.SYNPCC7942_1749)：
MTTPDRSGLEPELGGSLRHGQARSGLEPELGGELRQKLVWVDEVTCIGCRYCSHVATNTFYIEPDYGRSRVVRQNGDPEELVQEAIDTCPVDCIHWVNPSELRQLEAERRNQVIMPLGFPQERSKQRRRT
(a)序列特征：
●长度：130AA
●类型：蛋白序列
(b)分子类型：蛋白质
(c)假设：否
(d)反义：否
(e)最初来源：聚球藻(Synechococcus elongatus PCC 7942)
SEQ ID NO.7：
优化的DNA序列:
ATGAGCGATACCTATACCGTTCGCATTCGCGATCGCCGCACCGATGAAGAATTTACCGTGCAGGTGCCGCCGGATCGCTATATTCTGCAGACCGCCGAAGAACAGGGCTATGAACTGCCGTTTAGCTGCCGTAATGGCGCCTGCACCGCATGTGCCGTTCGTGTGCTGGGTGGTGCCATTGAACAGACCGAAGCAATGGGTCTGAGTGCACCGCTGCGTCAGCGTGGTTATGCCCTGCTGTGTGTGAGCTATCCGCGCAGTGATGTGATTGTGGAGACCCAGGACGAAGATGAGGTGTACATGCTGCAGTTCGGTCGCTACTTTGGTCAGGGCAAGGTGAGCTTTGGTCTGCCGCTGGATGAAGAATAA
(a)序列特征：
●长度：369bp
●类型：碱基序列
●链型：单链
●拓扑结构：线性
(b)分子类型：DNA
(c)假设：否
(d)反义：否
(e)最初来源：聚球藻(Synechococcus elongatus PCC 7942)
蛋白序列(GenBank Accession No.SYNPCC7942_2581)：
MSDTYTVRIRDRRTDEEFTVQVPPDRYILQTAEEQGYELPFSCRNGACTACAVRVLGGAIEQTEAMGLSAPLRQRGYALLCVSYPRSDVIVETQDEDEVYMLQFGRYFGQGKVSFGLPLDEE
(a)序列特征：
●长度：122AA
●类型：蛋白序列
(b)分子类型：蛋白质
(c)假设：否
(d)反义：否
(e)最初来源：聚球藻(Synechococcus elongatus PCC 7942)
SEQ ID NO.8：
DNA序列:
CTAGTTCTGGTTCTGTGGCGGCAGCACCGCGACGAGCTGGGCGTCGAAGTCCTGCGGACCCAGGCTGGCGGCACCGCCTGGCGAACCGAGGTCGTCGAAAAAGGCGGCGTTAGCGCCGGTGTAGTCCCACCATTCGTGGGGAACATCATCTTCGTAGAAGATGGCTTCAACCGGGCAGACGGGCTCGCAGGCACCGCAGTCGACGCACTCATCGGGGTGGATGTAGAGCATCCGTTTGCCCTCGTAGATGCAGTCCACGGGACATTCCTCGACGCAGGCTCGATCCAGGACATCAACGCAGGGCTGGGCGATTGTGTAGGTCAT
(a)序列特征：
●长度：324bp
●类型：碱基序列
●链型：单链
●拓扑结构：线性
(b)分子类型：DNA
(c)假设：否
(d)反义：是
(e)最初来源：谷棒杆菌(Corynebacterium glutamicum ATCC 13032)
蛋白序列(GenBank Accession No.NCgl2856)：
MTYTIAQPCVDVLDRACVEECPVDCIYEGKRMLYIHPDECVDCGACEPVCPVEAIFYEDDVPHEWWDYTGANAAFFDDLGSPGGAASLGPQDFDAQLVAVLPPQNQN
(a)序列特征：
●长度：107AA
●类型：蛋白序列
(b)分子类型：蛋白质
(c)假设：否
(d)反义：否
(e)最初来源：谷棒杆菌(Corynebacterium glutamicum ATCC 13032)
SEQ ID NO.9：
DNA序列：
TCACACTTGCGTTTCTGGCGTGGTCAACGAAAGATCCATGCCTTCGGTGACCTTGATTTGGCAAGACAAACGGGAGCAATCCTCACGGTCCACGGCAGCACCCCACAGCATTTCATCTTCCATCTCCTCCATTGGGGGAAGCGCATCATACTGTGCAGGGTCAACAAACACATGGCAGGTTGCACACGATAAGGAACCGCCGCATTCAGCAACAATTCCAGGCACTCCGTTTCGGACTGCGGTCTCCATTACTGAATCACCAACAGTCGCCTCGATGGTGCGGGTTTTGCCAGCATGATCAATGAAATGAATAGTAGACAT
(a)序列特征：
●长度：321bp
●类型：碱基序列
●链型：单链
●拓扑结构：线性
(b)分子类型：DNA
(c)假设：否
(d)反义：是
(e)最初来源：谷棒杆菌(Corynebacterium glutamicum ATCC 13032)
蛋白序列(GenBank Accession No.NCgl0526)：
MSTIHFIDHAGKTRTIEATVGDSVMETAVRNGVPGIVAECGGSLSCATCHVFVDPAQYDALPPMEEMEDEMLWGAAVDREDCSRLSCQIKVTEGMDLSLTTPETQV
(a)序列特征：
●长度：106AA
●类型：蛋白序列
(b)分子类型：蛋白质
(c)假设：否
(d)反义：否
(e)最初来源：谷棒杆菌(Corynebacterium glutamicum ATCC 13032)
SEQ ID NO.10：
DNA序列：
ATGACATACACAATCGCACAGCCCTGCGTTGACGTCTTGGATCGTGCCTGCGTTGAAGAATGCCCAGTAGATTGCATCTACGAAGGTAAGCGCATGCTGTACATCCACCCGGATGAGTGCGTTGACTGTGGTGCATGTGAGCCTGCTTGCCCAGTTGAGGCAATCTTCTACGAGGACGATGTCCCAGACGAATGGCTTGACTACAACGATGCCAACGCTGCATTCTTCGATGATCTGGGCTCCCCAGGTGGTGCGGCTAAGCTTGGACCACAAGATTTTGATCACCCAATGATCGCTGCGCTGCCGCCTCAGGCATAA
(a)序列特征：
●长度：318bp
●类型：碱基序列
●链型：单链
●拓扑结构：线性
(b)分子类型：DNA
(c)假设：否
(d)反义：否
(e)最初来源：谷棒杆菌(Corynebacterium glutamicum ATCC 13032)
蛋白序列(GenBank Accession No.NCgl1057)：
MTYTIAQPCVDVLDRACVEECPVDCIYEGKRMLYIHPDECVDCGACEPACPVEAIFYEDDVPDEWLDYNDANAAFFDDLGSPGGAAKLGPQDFDHPMIAALPPQA
(a)序列特征：
●长度：105AA
●类型：蛋白序列
(b)分子类型：蛋白质
(c)假设：否
(d)反义：否
(e)最初来源：谷棒杆菌(Corynebacterium glutamicum ATCC 13032)
SEQ ID NO.11：
DNA序列：
ATGTTGAATGCGAGTGTGGCTGGCGGAGCAGCTACCACCACCTATGGCAACCGGCTCTTTATCTATGAAGTGATCGGTCTGCGCCAAGCCGAGGGCGAACCGTCCGACAGCTCAATCCGCCGTAGTGGCAGCACCTTCTTCAAGGTGCCTTACAGCCGGATGAATCAAGAAATGCAACGGATTTTGCGCCTTGGCGGCAAAATCGTTAGCATCCGGCCTGCGGAGGAAGCAGCCGCGAATAATGGTGCGGCTCCTCTACAGGCAGCAGCTGAAGAACCTGCTGCAGCACCAACCCCCGCTCCGGCTGCCAAAAAACATTCAGCCGAAGACGTGCCTGTCAATATCTACCGGCCTAACAAGCCTTTCGTAGGCAAGGTGCTCTCGAACGAGCCCTTGGTTCAAGAAGGCGGGATTGGTGTTGTGCAGCACCTCACCTTCGATATTTCGGAAGGCGATCTGCGCTACATCGAAGGTCAAAGTATCGGGATTATCCCGGATGGCACCGATGACAAAGGCAAGCCGCACAAGCTCCGTCTTTACTCGATCGCATCCACTCGCCACGGCGACCACGTGGATGACAAAACCGTCTCGCTGTGCGTGCGCCAGCTGCAGTACCAGAACGAAGCCGGCGAAACGATTAATGGCGTCTGCTCGACTTTCCTCTGTGGTCTGAAGCCAGGCGATGACGTCAAGATCACCGGTCCTGTGGGCAAAGAAATGCTCCTACCGGCGGACACAGACGCCAACGTGATCATGATGGGTACTGGCACCGGGATTGCTCCGTTCCGAGCCTACCTATGGCGGATGTTTAAAGACAACGAGCGAGCCATCAACAGCGAGTATCAATTCAACGGCAAGGCTTGGTTGATCTTCGGGATTCCGACGACCGCCAACATCCTCTACAAAGAGGAGCTGGAAGCGCTGCAGGCTCAGTATCCAGATAACTTCCGCCTGACCTACGCGATCAGCCGCGAGCAGAAAAATGAAGCGGGCGGCCGGATGTACATCCAAGACCGCGTCGCTGAACATGCTGACGAGATCTGGAACCTACTCAAGGACGAAAAAACCCACGTCTATATCTGTGGTTTGCGTGGCATGGAAGATGGGATCGATCAAGCCATGACCGTCGCAGCTGCCAAGGAAGATGTGGTTTGGTCTGACTACCAACGCACCCTCAAGAAAGCGGGTCGTTGGCATGTTGAAACCTACTAG
(a)序列特征：
●长度：1212bp
●类型：碱基序列
●链型：单链
●拓扑结构：线性
(b)分子类型：DNA
(c)假设：否
(d)反义：否
(e)最初来源：聚球藻(Synechococcus elongatus PCC 7942)
蛋白序列：
MLNASVAGGAATTTYGNRLFIYEVIGLRQAEGEPSDSSIRRSGSTFFKVPYSRMNQEMQRILRLGGKIVSIRPAEEAAANNGAAPLQAAAEEPAAAPTPAPAAKKHSAEDVPVNIYRPNKPFVGKVLSNEPLVQEGGIGVVQHLTFDISEGDLRYIEGQSIGIIPDGTDDKGKPHKLRLYSIASTRHGDHVDDKTVSLCVRQLQYQNEAGETINGVCSTFLCGLKPGDDVKITGPVGKEMLLPADTDANVIMMGTGTGIAPFRAYLWRMFKDNERAINSEYQFNGKAWLIFGIPTTANILYKEELEALQAQYPDNFRLTYAISREQKNEAGGRMYIQDRVAEHADEIWNLLKDEKTHVYICGLRGMEDGIDQAMTVAAAKEDVVWSDYQRTLKKAGRWHVETY
(a)序列特征：
●长度：403AA
●类型：蛋白序列
(b)分子类型：蛋白质
(c)假设：否
(d)反义：否
(e)最初来源：聚球藻(Synechococcus elongatus PCC 7942)
SEQ ID NO.12：
DNA序列：
ATGTCTCGCCCTTTGCGTGTTGCCGTTGTCGGTGCAGGTCCAGCAGGAATCTACGCGTCTGATTTGTTGATGAAATCCGACACGGACGTGCAGATTGATCTTTTTGAACGTATGCCAGCGCCTTTCGGTTTGATCCGTTATGGTGTTGCGCCTGATCACCCTCGCATCAAGGGCATCGTGAAGTCCCTGCACAATGTGATGGACAAGGAGCAGCTGCGTTTCTTGGGCAACATTGAGGTCGGCAAGGACATCACTGTTGAGGAGTTGCGTGAGTTTTATGACGCGATCGTGTTCTCCACTGGCGCTACTGGCGACCAGGATCTTCGGGTTCCAGGTTCTGATCTGGAAGGTTCGTGGGGCGCTGGCGAGTTCGTTGGTTTCTATGATGGCAACCCGAACTTTGAACGCAACTGGGATCTTTCTGCTGAGAAGGTAGCGGTTGTTGGTGTCGGTAACGTGGCGTTGGACGTTGCTCGTATTTTGGCGAAGACTGGCGATGAGCTGCTAGTTACTGAAATCCCTGACAATGTCTATGAGAGCTTGGCTAAGAATCAGGCTAAGGAAGTGCACGTTTTTGGTCGTCGTGGACCTGCTCAGGCGAAGTTCACTCCGTTGGAGCTGAAGGAACTTGACCATTCCGACACCATCGAGGTGATCGTGAACCCTGAGGACATTGATTACGATGCAGCTTCGGAGCAGGCTCGTCGTGATTCCAAGTCTCAGGACCTCGTGTGCCAGACTTTGGAAAGCTACGCGATGCGCGATCCTAAGGGCGCTCCTCACAAGCTGTTCATTCACTTCTTTGAGTCCCCAGTGGAGATCCTCGGTGAGGACGGCAAGGTTGTTGGCCTCAAGACTGAGCGTACTCAGCTGGACGGCAACGGTGGCGTGACTGGCACCGGCGAGTTCAAGACCTGGGATATGCAGTCAGTTTACCGCGCGGTAGGTTACCGTTCTGATGCGATCGAGGGTGTTCCTTTTGACGATGAGCGCGCGGTTGTCCCCAACGACGGCGGCCACATCATCGATCCTGAGGTCGGCTCCCCCATCACTGGCCTGTACGCCACTGGCTGGATCAAGCGTGGCCCAATTGGACTGATCGGCAACACCAAGTCCGACGCCAAGGAAACCACTGAGATGCTGCTTGCTGATCACGCTGCTGGTTCTTTGCCTGCGCCTGCAAAGCCTGAGTTGGAGTCCATCATTGAGTTCCTCGATGAGCGCAAGGTTGCGTTCACCACATGGGATGGCTGGCACCTGCTGGATGCTGCGGAGCGCGCGCTGGGTGAGCCTGAGGGCCGCGAGCGCAAGAAGATCGTTGAGTGGAATGACATGGTGCGCCATGCTCGTCCAGAATACGACATCTAA
(a)序列特征：
●长度：1368bp
●类型：碱基序列
●链型：单链
●拓扑结构：线性
(b)分子类型：DNA
(c)假设：否
(d)反义：否
(e)最初来源：谷棒杆菌(Corynebacterium glutamicum ATCC 13032)
蛋白序列：
MSRPLRVAVVGAGPAGIYASDLLMKSDTDVQIDLFERMPAPFGLIRYGVAPDHPRIKGIVKSLHNVMDKEQLRFLGNIEVGKDITVEELREFYDAIVFSTGATGDQDLRVPGSDLEGSWGAGEFVGFYDGNPNFERNWDLSAEKVAVVGVGNVALDVARILAKTGDELLVTEIPDNVYESLAKNQAKEVHVFGRRGPAQAKFTPLELKELDHSDTIEVIVNPEDIDYDAASEQARRDSKSQDLVCQTLESYAMRDPKGAPHKLFIHFFESPVEILGEDGKVVGLKTERTQLDGNGGVTGTGEFKTWDMQSVYRAVGYRSDAIEGVPFDDERAVVPNDGGHIIDPEVGSPITGLYATGWIKRGPIGLIGNTKSDAKETTEMLLADHAAGSLPAPAKPELESIIEFLDERKVAFTTWDGWHLLDAAERALGEPEGRERKKIVEWNDMVRHARPEYDI
(a)序列特征：
●长度：455AA
●类型：蛋白序列
(b)分子类型：蛋白质
(c)假设：否
(d)反义：否
(e)最初来源：谷棒杆菌(Corynebacterium glutamicum ATCC 13032)
SEQ ID NO.13：
DNA序列：
ATGACAACTCCCCTGCGCGTAGCCGTCATCGGAGCTGGCCCTGCTGGCATTTACGCATCCGACCTCCTCATCCGCAATGAAGAGCGCGAAGTGTTCGTTGACCTTTTCGAGCAAATGCCTGCACCGTTCGGACTCATCCGTTACGGCGTTGCTCCAGACCACCCACGCATCAAGGGCATCGTTAAGTCCCTGCACAACGTGTTGGACAAGCCACGCCTGCGCCTGCTCGGTAACATTGAAATCGGCAAAGACATCACCGTCGAAGAACTCCGCGACTACTACGATGCAGTCGTGTTCTCCACCGGCGCAGTTGCAGACCGCGACCTCAACATCCCCGGAATTGAAGCAGAAGGCTCCTTCGGTGCCGGCGAGTTCGTTGGCTTCTACGACGGCAACCCACGCTTCGAGCGCTCCTGGGATCTGTCTGCACAGTCCGTCGCTGTTATCGGCGTTGGTAACGTCGGCCTCGACGTAGCCCGCATCCTGGCTAAGACAGGCGACGAGCTCAAAGTCACCGAAATTTCCGACAACGTCTACGACTCCCTCAAAGAAAACAAGGCCACTGAAGTGCACGTTTTCGGACGTCGTGGCCCAGCACAGGTCAAGTTCACCCCACAGGAACTCAAAGAACTCGACCACTCCCCCACCATCAACGTGGTTGTTGATCCAGAAGACATCGACTACGACGGCGCCTCTGAAGAAGCCCGCCGCGCATCCAAGTCCCAGGACCTGGTCTGCCAGATCCTGGAACAGTACGCAATCCGCGAGCCAAAGGACGCTCCGCACACCCTGCAGATCCACCTCTTTGAAAACCCAGTTGAGGTTCTTCAAAAGGACGGCAAGGTTGTTGGCCTGCGCACCGAACGCACCTCACTTGATGGCAACGGCGGCGTAAACGGAACCGGCGAATTCAAGGACTGGCCAGTCCAGGCTGTCTACCGCGCAGTCGGCTACAAGTCCGACCCCATCGACGGCGTCCCATTCGATGAGAACAAGCACGTCATCCCTAATGACGGCGGACATGTCCTCACCGCTCCAGGCGCAGAACCAGTACCAGGCCTCTATGCAACCGGCTGGATCAAGCGTGGACCAATCGGTCTAATCGGCAACACCAAGTCCGACGCCAAGGAAACCACCGACATCCTCATCAAGGATGCCGTCGCCGGTGTACTTGAAGCTCCAAAGCACCAGGGCGAAGAAGCCATCATCGAGCTTCTCGATTCCCGCAACATCCCATTCACCACCTGGGAAGGCTGGTACAAACTCGACGCAGCAGAGCGCGCACTCGGTGAAGCCGAAGGCCGCGAGCGCAAGAAGATTGTTGATTGGGAAGAAATGGTCCGCCAGGCCCGCGAAGCTCCAGCAATTGTCTAA
(a)序列特征：
●长度：1374bp
●类型：碱基序列
●链型：单链
●拓扑结构：线性
(b)分子类型：DNA
(c)假设：否
(d)反义：否
(e)最初来源：谷棒杆菌(Corynebacterium glutamicum ATCC 13032)
蛋白序列：
MTTPLRVAVIGAGPAGIYASDLLIRNEEREVFVDLFEQMPAPFGLIRYGVAPDHPRIKGIVKSLHNVLDKPRLRLLGNIEIGKDITVEELRDYYDAVVFSTGAVADRDLNIPGIEAEGSFGAGEFVGFYDGNPRFERSWDLSAQSVAVIGVGNVGLDVARILAKTGDELKVTEISDNVYDSLKENKATEVHVFGRRGPAQVKFTPQELKELDHSPTINVVVDPEDIDYDGASEEARRASKSQDLVCQILEQYAIREPKDAPHTLQIHLFENPVEVLQKDGKVVGLRTERTSLDGNGGVNGTGEFKDWPVQAVYRAVGYKSDPIDGVPFDENKHVIPNDGGHVLTAPGAEPVPGLYATGWIKRGPIGLIGNTKSDAKETTDILIKDAVAGVLEAPKHQGEEAIIELLDSRNIPFTTWEGWYKLDAAERALGEAEGRERKKIVDWEEMVRQAREAPAIV
(a)序列特征：
●长度：457AA
●类型：蛋白序列
(b)分子类型：蛋白质
(c)假设：否
(d)反义：否
(e)最初来源：谷棒杆菌(Corynebacterium glutamicum ATCC 13032)
SEQ ID NO.14：
DNA序列：
ATGGCAACACTTAAGAGGGATAAGGGCTTAGATAATACTTTGAAAGTATTAAAGCAAGGTTATCTTTACACAACAAATCAGAGAAATCGTCTAAACACATCAGTTTTCCAAACTAAAGCACTCGGTGGTAAACCATTCGTAGTTGTGACTGGTAAGGAAGGCGCTGAAATGTTCTACAACAATGATGTTGTTCAACGTGAAGGCATGTTACCAAAACGTATCGTTAATACGCTTTTTGGTAAAGGTGCAATCCATACGGTAGATGGTAAAAAACACGTAGACAGAAAAGCATTGTTCATGAGCTTGATGACTGAAGGTAACTTGAATTATGTACGAGAATTAACGCGTACATTATGGCATGCGAACACACAACGTATGGAAAGTATGGATGAGGTAAATATTTACCGTGAATCTATCGTACTACTTACAAAAGTAGGAACACGTTGGGCAGGCGTTCAAGCACCACCTGAAGATATCGAAAGAATCGCAACAGACATGGACATCATGATCGATTCATTTAGAGCACTTGGTGGTGCCTTTAAAGGTTACAAGGCATCAAAAGAAGCACGTCGTCGTGTTGAAGATTGGTTAGAAGAACAAATTATTGAGACTCGTAAAGGGAATATTCATCCACCAGAAGGTACAGCACTTTACGAATTTGCACATTGGGAAGACTACTTAGGTAACCCAATGGACTCAAGAACTTGTGCGATTGACTTAATGAACACATTCCGCCCATTAATCGCAATCAACAGATTCGTTTCATTCGGTTTACACGCGATGAACGAAAACCCAATCACACGTGAAAAAATTAAATCAGAACCTGACTATGCATATAAATTCGCTCAAGAAGTTCGTCGTTACTATCCATTCGTTCCATTCCTTCCAGGTAAAGCGAAAGTAGACATCGACTTCCAAGGCGTTACAATTCCTGCAGGTGTAGGTCTTGCATTAGATGTTTATGGTACAACGCATGATGAATCACTTTGGGACGATCCAAATGAATTCCGCCCAGAAAGATTCGAAACTTGGGACGGATCACCATTTGACCTTATTCCACAAGGTGGTGGAGATTACTGGACAAATCACCGTTGTGCAGGTGAATGGATCACAGTAATCATCATGGAAGAAACAATGAAATACTTTGCAGAAAAAATAACTTATGATGTTCCAGAACAAGATTTAGAAGTGGACTTAAACAGTATCCCAGGATACGTTAAGAGTGGCTTTGTAATCAAAAATGTTCGCGAAGTTGTAGACAGAACATAA
(a)序列特征：
●长度：1269bp
●类型：碱基序列
●链型：单链
●拓扑结构：线性
(b)分子类型：DNA
(c)假设：否
(d)反义：否
(e)最初来源：咸海鲜球菌(Jeotgalicoccus sp ATCC 8456)
蛋白序列：
MATLKRDKGLDNTLKVLKQGYLYTTNQRNRLNTSVFQTKALGGKPFVVVTGKEGAEMFYNNDVVQREGMLPKRIVNTLFGKGAIHTVDGKKHVDRKALFMSLMTEGNLNYVRELTRTLWHANTQRMESMDEVNIYRESIVLLTKVGTRWAGVQAPPEDIERIATDMDIMIDSFRALGGAFKGYKASKEARRRVEDWLEEQIIETRKGNIHPPEGTALYEFAHWEDYLGNPMDSRTCAIDLMNTFRPLIAINRFVSFGLHAMNENPITREKIKSEPDYAYKFAQEVRRYYPFVPFLPGKAKVDIDFQGVTIPAGVGLALDVYGTTHDESLWDDPNEFRPERFETWDGSPFDLIPQGGGDYWTNHRCAGEWITVIIMEETMKYFAEKITYDVPEQDLEVDLNSIPGYVKSGFVIKNVREVVDRT
(a)序列特征：
●长度：422AA
●类型：蛋白序列
(b)分子类型：蛋白质
(c)假设：否
(d)反义：否
(e)最初来源：咸海鲜球菌(Jeotgalicoccus sp ATCC 8456) 。

Claims (10)

1.一种支撑P450脂肪酸脱羧酶活性的还原伴侣蛋白组合，其特征在于：支撑P450脂肪酸脱羧酶OleTJE催化脂肪酸脱羧产生α烯烃活性的还原伴侣蛋白组合为铁氧还蛋白(ferredoxin)和铁氧还蛋白还原酶(ferredoxin reductase)和辅酶。
2.按权利要求1所述的还原伴侣蛋白组合，其特征在于：所述辅酶为NADH或NADPH。
3.按权利要求1所述支撑P450脂肪酸脱羧酶活性的还原伴侣蛋白组合，其特征在于：所述铁氧还蛋白和铁氧还蛋白还原酶组合按摩尔浓度比为(1-10):1的比例混合。
4.按权利要求1所述支撑P450脂肪酸脱羧酶活性的还原伴侣蛋白组合，其特征在于：所述组合中铁氧还蛋白和铁氧还蛋白还原酶分别源于聚球藻(Synechococcus elongatusPCC 7942)或谷棒杆菌(Corynebacterium glutamicum ATCC 13032)。
5.按权利要求1或3所述支撑P450脂肪酸脱羧酶活性的还原伴侣蛋白组合，其特征在于：所述来源于聚球藻(Synechococcus elongatus PCC 7942)的铁氧还蛋白分别为Fdx_0338(SEQ ID NO.1)，Fdx_0698(SEQ ID NO.2)，Fdx_0814(SEQ ID NO.3)，Fdx_0898(SEQ IDNO.4)，Fdx_1499(SEQ ID NO.5)，Fdx_1749(SEQ ID NO.6)，Fdx_2581(SEQ ID NO.7)或其功能等同体；
所述来源于谷棒杆菌(Corynebacterium glutamicum ATCC 13032)的铁氧还蛋白分别为Fdx_2856(SEQ ID NO.8)，Fdx_0526(SEQ ID NO.9)，Fdx_1057(SEQ ID NO.10)或其功能等同体。
6.按权利要求1或3所述支撑P450脂肪酸脱羧酶活性的还原伴侣蛋白组合，其特征在于：所述来源于聚球藻(Synechococcus elongatus PCC 7942)的铁氧还蛋白还原酶为FdR_0978(SEQ ID NO.11)或其功能等同体；
所述来源于谷棒杆菌(Corynebacterium glutamicum ATCC 13032)的铁氧还蛋白还原酶分别为FdR_2658(SEQ ID NO.12)，FdR_2719(SEQ ID NO.13)或其功能等同体。
7.按权利要求1、4或5所述支撑P450脂肪酸脱羧酶活性的还原伴侣蛋白组合，其特征在于：
所述组合为Fdx_0338，Fdx_0698，Fdx_0814，Fdx_0898，Fdx_1499，Fdx_1749或Fdx_2581铁氧还蛋白分别与同源的铁氧还蛋白还原酶FdR_0978组合；
或，Fdx_0338，Fdx_0698，Fdx_0814，Fdx_0898，Fdx_1499，Fdx_1749或Fdx_2581铁氧还蛋白分别与异源的铁氧还蛋白还原酶FdR_2658或FdR_2719组合；
或，Fdx_2856，Fdx_0526或Fdx_1057铁氧还蛋白分别与同源的铁氧还蛋白还原酶FdR_2658或FdR_2719组合；
或，Fdx_2856，Fdx_0526或Fdx_1057铁氧还蛋白分别与异源的铁氧还蛋白还原酶FdR_0978组合。
8.按权利要求1所述支撑P450脂肪酸脱羧酶活性的还原伴侣蛋白组合，其特征在于：所述的P450脂肪酸脱羧酶OleTJE来源于咸海鲜球菌(Jeotgalicoccus sp.ATCC 8456)菌株的P450脂肪酸脱羧酶。
9.一种权利要求1所述的支撑P450脂肪酸脱羧酶活性的还原伴侣蛋白组合在支撑P450脂肪酸脱羧酶OleTJE催化脂肪酸脱羧产生α烯烃反应中的应用。
10.按权利要求9所述的权利要求1所述的支撑P450脂肪酸脱羧酶活性的还原伴侣蛋白组合在支撑P450脂肪酸脱羧酶OleTJE催化脂肪酸脱羧产生α烯烃反应中的应用，其特征在于：所述P450脂肪酸脱羧酶OleTJE与还原伴侣蛋白组合中各成分的摩尔浓度比为1:(10-50):(5-20)。
CN201610151612.XA 2016-03-17 2016-03-17 支撑p450脂肪酸脱羧酶活性的还原伴侣蛋白组合及其应用 Pending CN107201356A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610151612.XA CN107201356A (zh) 2016-03-17 2016-03-17 支撑p450脂肪酸脱羧酶活性的还原伴侣蛋白组合及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610151612.XA CN107201356A (zh) 2016-03-17 2016-03-17 支撑p450脂肪酸脱羧酶活性的还原伴侣蛋白组合及其应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN107201356A true CN107201356A (zh) 2017-09-26

Family

ID=59903580

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201610151612.XA Pending CN107201356A (zh) 2016-03-17 2016-03-17 支撑p450脂肪酸脱羧酶活性的还原伴侣蛋白组合及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN107201356A (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105624179A (zh) * 2014-11-18 2016-06-01 中国科学院青岛生物能源与过程研究所 一种生产脂肪端烯的系统及其应用
WO2021091748A1 (en) * 2019-10-31 2021-05-14 The Procter & Gamble Company Consumer product compositions comprising p450 fatty acid decarboxylases

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103881933A (zh) * 2012-12-21 2014-06-25 赢创工业集团股份有限公司 ω-氨基脂肪酸的生产
CN104561152A (zh) * 2015-01-05 2015-04-29 中国科学院青岛生物能源与过程研究所 一种基于脂肪酶与p450脂肪酸脱羧酶偶联催化的脂肪烯烃催化合成的方法
CN105378486A (zh) * 2013-06-14 2016-03-02 Reg生命科学有限责任公司 生产omega-羟基化的脂肪酸衍生物的方法
CN105624179A (zh) * 2014-11-18 2016-06-01 中国科学院青岛生物能源与过程研究所 一种生产脂肪端烯的系统及其应用

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103881933A (zh) * 2012-12-21 2014-06-25 赢创工业集团股份有限公司 ω-氨基脂肪酸的生产
CN105378486A (zh) * 2013-06-14 2016-03-02 Reg生命科学有限责任公司 生产omega-羟基化的脂肪酸衍生物的方法
CN105624179A (zh) * 2014-11-18 2016-06-01 中国科学院青岛生物能源与过程研究所 一种生产脂肪端烯的系统及其应用
CN104561152A (zh) * 2015-01-05 2015-04-29 中国科学院青岛生物能源与过程研究所 一种基于脂肪酶与p450脂肪酸脱羧酶偶联催化的脂肪烯烃催化合成的方法

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
DENNING等，: "Oxidative Decarboxylation of Short-Chain Fatty Acids to 1-Alkenes", 《ANGEW.CHEM》 *
LI MA等: "Reconstitution of the In Vitro Activity of the Cyclosporine-Specific P450 Hydroxylase from Sebekia benihana and Development of a Heterologous Whole-Cell Biotransformation System", 《APPLIED AND ENVIRONMENTAL MICROBIOLOGY》 *
LIU Y等: "Hydrogen peroxide-independent production of α-alkenes by OleTJE P450 fatty acid decarboxylase", 《BIOTECHNOL BIOFUELS》 *
蒋媛媛等: "细胞色素P450酶在生物合成及有机合成中的催化功能及其应用", 《有机化学》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105624179A (zh) * 2014-11-18 2016-06-01 中国科学院青岛生物能源与过程研究所 一种生产脂肪端烯的系统及其应用
WO2021091748A1 (en) * 2019-10-31 2021-05-14 The Procter & Gamble Company Consumer product compositions comprising p450 fatty acid decarboxylases

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Mock et al. Evidence for a hexaheteromeric methylenetetrahydrofolate reductase in Moorella thermoacetica
Wang et al. A reversible electron-bifurcating ferredoxin-and NAD-dependent [FeFe]-hydrogenase (HydABC) in Moorella thermoacetica
Müller New horizons in acetogenic conversion of one-carbon substrates and biological hydrogen storage
Huang et al. Electron bifurcation involved in the energy metabolism of the acetogenic bacterium Moorella thermoacetica growing on glucose or H2 plus CO2
Papanek et al. Elimination of metabolic pathways to all traditional fermentation products increases ethanol yields in Clostridium thermocellum
Köpke et al. Reconstruction of an acetogenic 2, 3-butanediol pathway involving a novel NADPH-dependent primary-secondary alcohol dehydrogenase
Noth et al. Pyruvate: ferredoxin oxidoreductase is coupled to light-independent hydrogen production in Chlamydomonas reinhardtii
Shaw et al. Identification of the [FeFe]-hydrogenase responsible for hydrogen generation in Thermoanaerobacterium saccharolyticum and demonstration of increased ethanol yield via hydrogenase knockout
Niederholtmeyer et al. Engineering cyanobacteria to synthesize and export hydrophilic products
Deng et al. Metabolic engineering of Thermobifida fusca for direct aerobic bioconversion of untreated lignocellulosic biomass to 1-propanol
Wang et al. Electron transport in acetate-grown Methanosarcina acetivorans
Avilan et al. Phototrophic hydrogen production from a clostridial [FeFe] hydrogenase expressed in the heterocysts of the cyanobacterium Nostoc PCC 7120
Waks et al. Engineering a synthetic dual-organism system for hydrogen production
McCarver et al. Molecular characterization of the thioredoxin system from M ethanosarcina acetivorans
Wen et al. Combined evolutionary engineering and genetic manipulation improve low pH tolerance and butanol production in a synthetic microbial Clostridium community
Watanabe et al. Identification and characterization of D-hydroxyproline dehydrogenase and Δ1-pyrroline-4-hydroxy-2-carboxylate deaminase involved in novel L-hydroxyproline metabolism of bacteria: metabolic convergent evolution
Kim et al. 2‐Hydroxyisocaproyl‐CoA dehydratase and its activator from Clostridium difficile
CN112313332A (zh) 烃的生产
Tian et al. Ferredoxin: NAD+ oxidoreductase of Thermoanaerobacterium saccharolyticum and its role in ethanol formation
Lee et al. Metabolic rewiring of synthetic pyruvate dehydrogenase bypasses for acetone production in cyanobacteria
Jasso-Chávez et al. MrpA functions in energy conversion during acetate-dependent growth of Methanosarcina acetivorans
Zhang et al. Cloning, expression and characterization of glycerol dehydrogenase involved in 2, 3-butanediol formation in Serratia marcescens H30
Song et al. A recombinant 12‐His tagged Pyrococcus furiosus soluble [NiFe]‐hydrogenase I overexpressed in Thermococcus kodakarensis KOD1 facilitates hydrogen‐powered in vitro NADH regeneration
CN107201356A (zh) 支撑p450脂肪酸脱羧酶活性的还原伴侣蛋白组合及其应用
Yi et al. A heterodimeric reduced-ferredoxin-dependent methylenetetrahydrofolate reductase from syngas-fermenting Clostridium ljungdahlii

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20170926