CN103880946B - 卡培立肽的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种采用Fmoc路线固液结合片段法合成卡培立肽的方法，该方法中多个片段合成同时进行，合成周期减少了2/3，中间体易纯化，成本低，最终产品纯度高，副产物少，产品收率高，利于卡培立肽的大规模生产。
Description
技术领域
本发明涉及一种多肽的制备方法，具体地涉及卡培立肽的制备方法。
背景技术
卡培立肽（Carperitide），别名基因重组心房肽、卡哌利丁、Hamp、人脑利钠肽，它的适应症是急性心功能衰竭(包括慢性心功能衰竭加重)。卡培立肽药理学作用是通过刺激心肌伸展，由心室内颗粒合成的，然后通过冠状动脉分布全身，作用于血管平滑肌和肾脏等组织，调节血压和体内电解质平衡。卡培立肽为28个氨基酸组成的一种循环调节激素，起血管扩张和利尿作用。卡培立肽引起的血管舒张是由于与血管平滑肌的ANP(心房利钠多肽)受体结合，通过提高鸟苷酸环化酶的活性而实现的，提示可减轻心脏前、后负荷。
目前卡培立肽的合成方法分为两大类：一是基因重组，二是采用Boc路线液相或固相合成。ZL200510012425.5公开了采用基因重组技术生产卡培立肽的方法，CN102382188报道了一种采用固相Fmoc路线逐个偶联制备卡培立肽的方法，CA1245635A1报道的为采用Boc路线固相合成卡培立肽最后通过HF树脂切割、液相氧化、HPLC（高压液相色谱）纯化等步骤得到精肽，CA1245637A1报道的为采用基因重组技术生产卡培立肽，其它的专利文献如EP0440311A1、JP3004169A、US4673732A等都是或者采用基因重组技术生产卡培立肽或者采用Boc路线固相或液相方法合成得到精肽。采用基因重组技术，操作繁琐，投资大，药物纯度不高，存在较高的技术壁垒。采用Boc路线液相或固相合成，需要使用HF及大量使用TFA，由此带来对环境的严重污染。同时液相法存在操作周期长、操作繁琐等缺点，不利于大规模工业化生产。而采用固相Fmoc路线逐个偶联制备卡培立肽具有合成周期长、产率低的缺点。
为了克服上述缺点，本发明采用Fmoc路线固液结合片段法合成卡培立肽，具有操作简单、合成周期短、对环境友好的特点。
发明内容
本发明提出了一种采用Fmoc路线固液结合片段法合成卡培立肽的方法，申请人发现，采用该方法，多个片段合成同时进行，合成周期减少了2/3，中间体易纯化，成本低，最终产品纯度高，副产物少，产品收率高，利于卡培立肽的大规模生产。在一个实施方案中实验得到的粗肽纯度为70%以上，总收率达到20%以上。
本发明所述卡培立肽的序列为：
H-Ser1-Leu2-Arg3-Arg4-Ser5-Ser6-Cys7-Phe8-Gly9-Gly10-Arg11-Met12–Asp13-Arg14-IIe15-Gly16-Ala17-Gln18-Ser19-Gly20-Leu21-Gly22-Cys23-Asn2 4-Ser25-Phe26-Arg27-Tyr28-OH(S-S:7-23)
具体地，本发明所述方法包括如下步骤：
1）在固相载体上采用固相Fmoc路线分别合成3个侧链全保护肽树脂A’、B’和C’，然后将其裂解得到3个侧链全保护肽片段A、B和C，其氨基酸序列分别为，
片段A（1-9）：
Boc-Ser(tBu)-Leu-Arg(pbf)-Arg(pbf)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-Phe-Gly，
片段B（10-16）：
Fmoc-Gly-Arg(pbf)-Met-Asp(OtBu)-Arg(pbf)-Ile-Gly-OH，
片段C（17-22）：Fmoc-Ala-Gln(Trt)-Ser(tBu)-Gly-Leu-Gly-OH，和在固相载体上采用固相Fmoc路线合成肽树脂片段D，其氨基酸序列为D（23-28）：
Fmoc-Cys(trt)-Asn(Trt)-Ser(tBu)-Phe-Arg(pbf)-Tyr(tBu)-Resin；
2）将所述步骤1）得到的侧链全保护肽片段C与肽树脂片段D偶联得到肽树脂Ⅰ；
3）将所述步骤1）得到的侧链全保护肽片段B与所述步骤2）得到的肽树脂Ⅰ偶联得到肽树脂Ⅱ；
4）将所述步骤1）得到的侧链全保护肽片段A与所述步骤3）得到的肽树脂Ⅱ偶联得到卡培立肽肽树脂III；
5）将所述步骤4）得到的卡培立肽肽树脂III裂解得到卡培立肽线性肽粗品；
6）将所述步骤5）得到的卡培立肽线性肽粗品液相氧化，得到环化的卡培立肽粗品；
7）所述步骤6）得到的卡培立肽粗品经纯化得到产品卡培立肽。
在一个实施方案中，所述方法的步骤1）中合成所述侧链全保护肽树脂A’、B’和C’所采用的固相载体为2-CTC树脂，所述树脂替代度范围为0.3-1.1mmol/g，优选0.5~1.0mmol/g，合成所述肽树脂A’、B’和C’所采用的偶联剂为HOBT/DIC、PyBOP/HOBt/DIEA或TBTU/HOBt/DIEA，优选为TBTU/HOBt/DIEA，裂解所述侧链全保护肽树脂A’、B’和C’所采用的裂解液为TFE：DCM=1:4（V:V），裂解后减压蒸干溶剂，加入适量DCM溶解，再滴加到适量乙醚中析出白色固体，离心抽干得到所述侧链全保护肽片段A、B、C。
在一个实施方案中，所述步骤1）中，合成肽树脂片段D所用的固相载体为wang树脂或2-CTC树脂，所述树脂替代度范围为0.3-0.6mmol/g，在所述树脂上连接第一个氨基酸所使用的偶联剂为a)所用树脂为wang树脂时所用偶联剂为HOBt/DIC/DMAP；b)所用树脂为2-CTC树脂时所用偶联剂为DIEA，第二个氨基酸及之后氨基酸的偶联所用的偶联剂为HOBT/DIC、PyBOP/HOBt/DIEA或TBTU/HOBt/DIEA，优选为HOBT/DIC。
在一个实施方案中，所述方法的步骤2）中将侧链全保护肽片段C和肽树脂片段D偶联，得到肽树脂I，其中所用的偶联剂为HOBT/DIC、PyBOP/HOBt/DIEA或HBTU/HOBt/DIEA，优选为HBTU/HOBt/DIEA，所采用的溶剂为DMF、DCM、NMP、DMSO或其任意两者或两者以上的混合物，优选为NMP：DMF=1：1（V:V）。
在一个实施方案中，所述方法的步骤3）中将侧链全保护肽片段B和所述肽树脂I偶联，得到肽树脂II，其中所用的偶联剂为HOBT/DIC、PyBOP/HOBt/DIEA或HBTU/HOBt/DIEA,优选为HBTU/HOBt/DIEA，所采用的溶剂为DMF、DCM、NMP、DMSO或其任意两者或两者以上的混合物，优选为NMP：DMF=1：1（V:V）。
在一个实施方案中，所述方法的步骤4）中将侧链全保护肽片段A和肽树脂II偶联，得到肽树脂III，其中所用的偶联剂为HOBT/DIC、PyBOP/HOBt/DIEA或HBTU/HOBt/DIEA,优选为HBTU/HOBt/DIEA，所采用的溶剂为DMF、DCM、NMP、DMSO或其任意两者或两者以上的混合物，优选为NMP：DMSO=1：1（V:V）。
在一个实施方案中，所述方法的步骤5）中用于裂解卡培立肽肽树脂III的裂解液选自TFA:H2O=95:5(V:V)、TFA:EDT:PHOH:H2O=(90-95):(1-5):(1-3):(1-2)(V:V)或TFA:PhSMe:TIS:PHOH:H2O=(80-85):(1-5):(1-5):15:(1-5)(V:V)，优选为TFA:PhSMe:TIS:PHOH:H2O=80:5:5:5:5(V:V)，裂解时间为2-3.5小时，优选为2.5小时。
在一个实施方案中，所述方法的步骤6）中用于氧化卡培立肽线性肽的物质选自DMSO、碘或H2O2，优选H2O2。
在一个实施方案中，所述方法的步骤7）中将卡培立肽粗肽纯化所采用的纯化方法为反向高压液相色谱（RP-HPLC）法，色谱柱为50×250mm反相C8柱，常规0.1%TFA/乙腈流动相纯化，收集目的峰馏分后，经蒸发浓缩、冻干得到卡培立肽精肽。
附图说明
图1(A)为线性卡培立肽粗肽的HPLC谱图，图1(B)为线性卡培立肽粗肽经H2O2氧化得到的环化卡培立肽粗肽HPLC谱图。
图2为使用HPLC检测卡培立肽醋酸盐精肽纯度的数据。
具体实施方式
提供以下实施例，以方便本领域技术人员更好地理解本发明，所述实施例仅出于示例性目的，并非意在限制本发明的范围。
本发明中所用缩写及其含义列于下表：
| 缩写及英文 | 含义 |
| Fmoc | 9-芴甲氧羰基 |
| Boc | 叔丁氧羰基 |
| tBu | 叔丁基 |
| Trt | 三苯甲基 |
| NMP | N-甲基吡咯烷酮 |
| DMSO | 二甲基亚砜 |
| DMF | N,N-二甲基甲酰胺 |
| DCM | 二氯甲烷 |
| DBLK | 20%六氢吡啶/DMF溶液 |
| DIC | N,N-二异丙基碳二亚胺 |
| DIPEA | N,N-二异丙基乙胺 |
| DMAP | 4-二甲胺基吡啶 |
| PYBOP | 六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基 |
| TBTU | O-苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸 |
| HOBT | 1-羟基苯并三唑 |
| TFE | 三氟乙醇 |
| TFA | 三氟乙酸 |
| PhSMe | 苯甲硫醚 |
| EDT | 1,2-乙二硫醇 |
| PHOH | 苯酚 |
| TIS | 三异丙基硅烷 |
所使用的原料氨基酸：
Fmoc-Tyr(tBu)-OH代表：N-芴甲氧羰基-侧链叔丁基保护酪氨酸
Fmoc-Arg(R)-OH代表：N-芴甲氧羰基-侧链R基保护精氨酸
Fmoc-Phe-OH代表：N-芴甲氧羰基苯丙氨酸
Fmoc-Ser(R)-OH代表：N-芴甲氧羰基-侧链R基保护丝氨酸
Fmoc-Asn(R)-OH代表：N-芴甲氧羰基-侧链R基保护天冬酰胺
Fmoc-Cys(R)-OH代表：N-芴甲氧羰基-侧链R基保护半胱氨酸
Fmoc-Gly-OH代表：N-芴甲氧羰基甘氨酸
Fmoc-Leu-OH代表：N-芴甲氧羰基亮氨酸
Fmoc-Gln(R)-OH代表：N-芴甲氧羰基-侧链R基保护谷氨酰胺
Fmoc-Ala-OH代表：N-芴甲氧羰基丙氨酸
Fmoc-Ile-OH代表：N-芴甲氧羰基异亮氨酸
Fmoc-Asp(R)-OH代表：N-芴甲氧羰基-侧链R基保护天冬氨酸
Fmoc-Met-OH代表：N-芴甲氧羰基-甲硫氨酸
Boc-Ser(tBu)-OH代表：N-叔丁氧羰基-侧链叔丁基保护丝氨酸
当氨基酸为Arg（精氨酸）时，侧链R=pbf(2,2,4,6,7-五甲基苯并呋喃-5-磺酰基)；当氨基酸为Ser（丝氨酸）、Asp（天冬氨酸）时，侧链R=tBu（叔丁基）；当氨基酸为Cys（半胱氨酸）、Gln（谷氨酰胺）、Asn（天冬酰胺）时，侧链R=Trt（三苯甲基）。
实施例：
实施例1：片段A肽树脂的合成
称取替代度为0.65mmol/g的2-CTC树脂15.38g，加入到固相反应柱中，用DMF洗涤2次，用DMF溶胀树脂30分钟后，取5.94gFmoc-Gly-OH（此处及后文所用氨基酸购自成都凯泰新技术有限公司）用DMF溶解，冰水浴下加入6.97mlDIEA活化后，加入上述装有树脂的反应柱中，反应2小时后，加入20ml无水甲醇封闭1小时,用DMF洗涤6次。用DBLK脱除Fmoc保护3分钟，换用新的DBLK继续脱除Fmoc保护7分钟，然后用DMF洗涤6次。
将11.62gFmoc-Phe-OH，4.46gHOBt，5.13mlDIC溶于体积比为1:1的DCM和DMF混合溶液60ml，加入固相反应柱中，室温反应2h（反应终点以茚三酮法检测为准，如果树脂无色透明，则反应完全，树脂显色，表示反应不完全，需再偶联反应1h）。重复上述脱除Fmoc保护和加入相应氨基酸偶联的步骤，按照肽片段A（序列（1-9））的顺序，依次完成Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Arg(pbf)-OH、Fmoc-Arg(pbf)-OH、Fmoc-Leu-OH和Boc-Ser(tBu)-OH的偶联。反应结束后用甲醇收缩，树脂真空干燥过夜，得到肽片段A（序列（1-9））肽树脂。
实施例2：片段A肽树脂的合成
称取替代度为1.09mmol/g的2-CTC树脂9.17g，加入到固相反应柱中，用DMF洗涤2次，用DMF溶胀树脂30分钟后，取5.94gFmoc-Gly-OH用DMF溶解，冰水浴下加入6.97mlDIEA活化后，加入上述装有树脂的反应柱中，反应2小时后，加入20ml无水甲醇封闭1小时,用DMF洗涤6次。用DBLK脱除Fmoc保护3分钟，换用新的DBLK继续脱除Fmoc保护7分钟，然后用DMF洗涤6次。
将11.62gFmoc-Phe-OH，4.46gHOBt，9.63gTBTU，10.45mlDIEA溶于60mlDMF，冰水浴下活化3分钟加入固相反应柱中，室温反应2h（反应终点以茚三酮法检测为准，如果树脂无色透明，则反应完全，树脂显色，表示反应不完全，需再偶联反应1h）。重复上述脱除Fmoc保护和加入相应氨基酸偶联的步骤，按照肽片段A（序列（1-9））的顺序，依次完成Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Arg(pbf)-OH、Fmoc-Arg(pbf)-OH、Fmoc-Leu-OH和Boc-Ser(tBu)-OH的偶联。反应结束后用甲醇收缩，树脂真空干燥过夜，得到肽片段A（序列（1-9））肽树脂。
实施例3：片段A的合成
将实施例2得到的肽树脂，加入圆底烧瓶中。按1克树脂10ml裂解液的比例配制裂解液（裂解液配比：TFE：DCM=1:4，V:V），将裂解液倒入烧瓶中，室温反应2.5h。反应结束，过滤树脂，收集滤液。将滤液用旋转蒸发仪蒸干后，加入20mlDCM，将混合液滴加至200ml乙醚中，析出白色固体，离心，无水乙醚洗涤，并且真空干燥，得到侧链全保护肽片段A（序列（1-9））18.65g，纯度95.2%，收率92.1%。
实施例4：片段B的合成
参照实施例2和实施例3的方法，合成10mmol的片段B，得到侧链全保护肽片段B（序列（10-16））14.74g，纯度96.3%，收率93.0%。
实施例5：片段C的合成
参照实施例2和实施例3的方法，合成10mmol的片段C，得到侧链全保护肽片段C（序列（17-22））9.21g，纯度95.7%，收率92.5%。
实施例6：肽树脂片段D的合成
称取替代度为0.5mmol/g的WangResin（Wang树脂）20g，加入到固相反应柱中，用DMF洗涤2次，用DMF溶胀树脂30分钟后，称取8.59gFmoc-Tyr(tBu)-OH、2.97gHOBT和0.21gDMAP用DMF溶解，冰水浴下加入3.42mlDIC活化后，加入上述装有树脂的反应柱中，反应1.2小时后，加入20ml吡啶和22ml乙酸酐封闭12小时。用DMF洗涤6次，得到Fmoc-Tyr(tBu)-WangResin21.1g，检测替代度为0.38mmol/g。
用DBLK脱除Fmoc保护5分钟，换用新的DBLK继续脱除Fmoc保护7分钟，DMF洗涤6次，称取Fmoc-Arg(Pbf)-OH9.73g，HOBt2.23g，用30mlDMF溶解，冰水浴下加入DIC2.57ml活化3分钟，加入到反应柱中反应2小时，按照片段D的肽序，逐个偶联Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH；偶联完Fmoc-Cys(Trt)-OH后脱除Fmoc，备用。
实施例7：肽树脂I的合成
称取片段C15.94g，HBTU7.21g，HOBt2.70g，用30mlNMP/DMF(体积比1:1)溶解，冰水浴下加入5.29mlDIEA，活化3分钟，加入到装有实施例6得到的肽树脂片段D反应柱中，室温反应2.5小时，用茚三酮监测反应终点，反应结束抽掉反应液，树脂用DMF洗涤3次，用DBLK脱除Fmoc保护，然后用DMF洗涤6次，得到肽树脂I。
实施例8：肽树脂II的合成
称取片段B25.38g，HBTU7.21g，HOBt2.70g，用30mlNMP/DMF(体积比1:1)溶解，冰水浴下加入5.29mlDIEA，活化3分钟，加入到实施例7得到的肽树脂I反应柱中，室温反应3.5小时，用茚三酮监测反应终点，反应结束抽掉反应液，树脂用DMF洗涤3次，用DBLK脱除Fmoc保护，然后用DMF洗涤6次，得到肽树脂II。
实施例9：肽树脂III的合成
称取片段A32.4g，HBTU7.21g，HOBt2.70g，用30mlNMP/DMSO(体积比1:1)溶解，冰水浴下加入5.29mlDIEA，活化3分钟，加入到装有实施例8得到的肽树脂II反应柱中，室温反应3.5小时，用茚三酮监测反应终点，反应结束抽掉反应液，树脂用DMF洗涤3次，用DBLK脱除Fmoc保护，然后用DMF洗涤6次，得到肽树脂III，甲醇收缩并真空干燥12h得到卡培立肽线性肽树脂59.9g，增重率92.0%。
实施例10：卡培立肽线性肽树脂的裂解
将实施例9得到的线性肽树脂59.9g，加入到1000ml烧瓶中，配制600ml裂解液TFA:PhSMe:TIS:PHOH:H2O=80:5:5:5:5，将裂解液加入到烧瓶中，室温反应2.5小时，反应结束，过滤树脂，收集滤液。用少量TFA洗涤树脂，合并滤液，将滤液加入到6000ml无水乙醚中沉淀，离心，无水乙醚洗涤，并且真空干燥，得到卡培立肽线性粗肽27.12g，粗肽收率110%（与酸成盐使分子量增大，致使收率超过100%），经质谱检测分子量为3082.4。
实施例11：卡培立肽线性肽树脂的裂解
将实施例9得到的线性肽树脂59.9g，加入到1000ml烧瓶中，配制600ml裂解液TFA:EDT:PHOH:H2O=92:3:3:2，将裂解液加入到烧瓶中，室温反应2.5小时，反应结束，过滤树脂，收集滤液。用少量TFA洗涤树脂，合并滤液，将滤液加入到6000ml无水乙醚中沉淀，离心，无水乙醚洗涤，并且真空干燥，得到卡培立肽线性粗肽25.89g，粗肽收率105%，经质谱检测分子量为3082.4。
实施例12：卡培立肽线性粗肽的氧化（二硫键环化）
将实施例10得到的线性粗肽10.0g，加入到5L烧瓶中，用4L纯水将粗肽溶解完全，并用稀氨水将溶液pH调为4.2-4.5，加入5mlH2O2反应2h，HPLC跟踪监测反应基本完全后，加入稀醋酸至溶液pH=2.5-3.0终止反应，得到卡培立肽粗肽（图1）。
实施例13：卡培立肽粗肽的纯化
将实施例12得到的粗肽溶液减压过滤除去不溶物后，采用RP-HPLC系统，波长214nm，色谱柱为50×250mm反相C8柱，常规0.1%TFA/乙腈流动相纯化，收集目的峰馏分，得到纯度大于98.5%精肽。旋转蒸发浓缩，冻干得到卡培立肽醋酸盐精肽2.02g，HPLC检测纯度为99.48%（图2），总收率21.3%。
Claims (14)
1.一种制备卡培立肽的方法，包括以下步骤：
1)在固相载体上采用固相Fmoc路线分别合成3个侧链全保护肽树脂A’、B’和C’，然后将其裂解得到3个侧链全保护肽片段A、B和C，其氨基酸序列分别为，
片段A：
Boc-Ser(tBu)-Leu-Arg(pbf)-Arg(pbf)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-Phe-Gly，
片段B：Fmoc-Gly-Arg(pbf)-Met-Asp(OtBu)-Arg(pbf)-Ile-Gly-OH，
片段C：Fmoc-Ala-Gln(Trt)-Ser(tBu)-Gly-Leu-Gly-OH，和
在固相载体上采用固相Fmoc路线合成肽树脂片段D，其氨基酸序列为D：Fmoc-Cys(trt)-Asn(Trt)-Ser(tBu)-Phe-Arg(pbf)-Tyr(tBu)-Resin；
2)将所述步骤1)得到的侧链全保护肽片段C与肽树脂片段D偶联得到肽树脂Ⅰ；
3)将所述步骤1)得到的侧链全保护肽片段B与所述步骤2)得到的肽树脂Ⅰ偶联得到肽树脂Ⅱ；
4)将所述步骤1)得到的侧链全保护肽片段A与所述步骤3)得到的肽树脂Ⅱ偶联得到卡培立肽肽树脂III；
5)将所述步骤4)得到的卡培立肽肽树脂III裂解得到卡培立肽线性肽粗品；
6)将所述步骤5)得到的卡培立肽线性肽粗品液相氧化，得到环化的卡培立肽粗品；
7)所述步骤6)得到的卡培立肽粗品经纯化得到产品卡培立肽；
其中，所述步骤1)中合成所述肽树脂A’、B’和C’所采用的固相载体为2-CTC树脂，所述树脂替代度范围为0.3-1.1mmol/g；合成所述肽树脂A’、B’和C’所采用的偶联剂为HOBT/DIC、PyBOP/HOBt/DIEA或TBTU/HOBt/DIEA；裂解所述侧链全保护肽树脂A’、B’和C’所采用的裂解液为TFE：DCM＝1:4(V:V)；
所述步骤1)中合成所述肽树脂片段D所用的固相载体为wang树脂或者2-CTC树脂，所述树脂替代度范围为0.3-0.6mmol/g，在所述树脂上连接第一个氨基酸所使用的偶联剂为a)所用树脂为wang树脂时所用偶联剂为HOBt/DIC/DMAP；b)所用树脂为2-CTC树脂时所用偶联剂为DIEA，第二个氨基酸及之后氨基酸的偶联所用的偶联剂为HOBT/DIC、PyBOP/HOBt/DIEA或TBTU/HOBt/DIEA；
所述步骤2)中将侧链全保护肽片段C和肽树脂片段D偶联，得到肽树脂I，其中所用的偶联剂为HOBT/DIC、PyBOP/HOBt/DIEA或HBTU/HOBt/DIEA，所采用的溶剂为DMF、DCM、NMP、DMSO或其任意两者或两者以上的混合物；
所述步骤3)中将侧链全保护肽片段B和所述肽树脂I偶联，得到肽树脂II，其中所用的偶联剂为HOBT/DIC、PyBOP/HOBt/DIEA或HBTU/HOBt/DIEA，所采用的溶剂为DMF、DCM、NMP、DMSO或其任意两者或两者以上的混合物；
所述步骤4)中将侧链全保护肽片段A和肽树脂II偶联，得到肽树脂III，其中所用的偶联剂为HOBT/DIC、PyBOP/HOBt/DIEA或HBTU/HOBt/DIEA，所采用的溶剂为DMF、DCM、NMP、DMSO或其任意两者或两者以上的混合物；
所述步骤5)中用于裂解卡培立肽肽树脂III的裂解液选自TFA:H2O＝95:5(V:V)、TFA:EDT:PHOH:H2O＝(90-95):(1-5):(1-3):(1-2)(V:V)或TFA:PhSMe:TIS:PHOH:H2O＝(80-85):(1-5):(1-5):15:(1-5)(V:V)，裂解时间为2-3.5小时；并且
所述步骤6)中用于氧化卡培立肽线性肽的物质选自DMSO、碘或H2O2。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤1)中合成所述肽树脂A’、B’和C’所采用的所述树脂替代度范围为0.5～1.0mmol/g。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤1)中合成所述肽树脂A’、B’和C’所采用的偶联剂为TBTU/HOBt/DIEA。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤1)中合成所述肽树脂片段D时第二个氨基酸及之后氨基酸的偶联所用的偶联剂为HOBT/DIC。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤2)中使用的偶联剂为HBTU/HOBt/DIEA。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤2)中采用的溶剂为NMP：DMF＝1：1(V:V)。
7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤3)中使用的偶联剂为HBTU/HOBt/DIEA。
8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤3)中采用的溶剂为NMP：DMF＝1：1(V:V)。
9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤4)中使用的偶联剂为HBTU/HOBt/DIEA。
10.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤4)中采用的溶剂为NMP：DMSO＝1：1(V:V)。
11.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤5)中用于裂解卡培立肽肽树脂III的裂解液为TFA:PhSMe:TIS:PHOH:H2O＝80:5:5:5:5(V:V)。
12.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤5)中的裂解时间时2.5小时。
13.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤6)中用于氧化卡培立肽线性肽的物质为H2O2。
14.如权利要求1-13任一项所述的方法，其特征在于，所述步骤7)中所采用的纯化方法为反向高压液相色谱纯化，收集目的峰馏分后，经蒸发浓缩、冻干得到卡培立肽精肽。
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