CN103875675B - 蛇床子素和抑霉唑的复配组合物及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了蛇床子素和抑霉唑的复配组合物在农业领域中的应用，特别是针对苹果轮纹病防治的应用研究。本发明提供了蛇床子素及其与抑霉唑的复配组合物在防治苹果轮纹病的应用，复配组合物中蛇床子素和抑霉唑两种成分的重量比为8:1～1:32，增效比例为1:1～16，最佳比例为1:4。它在应用防治苹果轮纹病方面表现突出。

Description

蛇床子素和抑霉唑的复配组合物及其应用

技术领域

本发明涉及的是一种含有蛇床子素的复配组合物，尤其是蛇床子素与抑霉唑复配后作为杀菌剂应用于防治苹果轮纹病，属于杀菌剂的复配组合物技术领域。

背景技术

苹果轮纹病在我国各苹果产区的发生程度日益加重且极为普遍，苹果轮纹病主要危害枝干和果实，严重时可造成大量烂果。该病害危害果实从8月开始发生，至采收前持续增加，烂果率一般在20～50％，重者可达70～90％，直接影响果农经济收入。

化学防治仍是目前苹果轮纹病害的主要技术措施之一，但化学农药的长期单一大量盲目施用使得苹果有害生物处于高的农药选择压力下，致使产生了抗药性的有害生物个体或种群。我单位研究表明苹果轮纹病菌对多菌灵、戊唑醇、甲基硫菌灵等杀菌剂已产生低水平抗药性。同时新农药开发成本高、周期长，并且永远都不会赶上病菌抗药性产生的速度，解决抗药性迫在眉睫。在农业生产实际操作过程中，不同农药轮换等措施很难真正起到明显的效果；作物轮作对于多年生的苹果是不现实的。不同类别的农药品种进行复配，是预防或解决抗药性的常见方法，同时可以充分利用现有的杀菌剂资源。

香豆素化合物蛇床子素为植物源农药，化学名称为7-甲氧基-8-异戊烯基香豆素，是一种来源于伞形科植物蛇床（Cnidiummonnieri（L.）Cuss）植物提取物，也存在于欧前胡、圆当归、毛当归、栓翅芹的根、根茎中，有多种成熟的提取方法。起初应用在医学上，后来在农业上可作为杀虫杀菌剂应用（专利授权公开号：CN1119930C、CN1332603C、CN1244275C、CN1586198A、CN100409747C、CN100356851C等）。但蛇床子素及其与抑霉唑的复配组合物在防治苹果轮纹病方面还未见报道。

抑霉唑又叫烯菌灵，对人畜毒性低，是优良的果蔬防腐保鲜剂，防治谱广，是广泛应用于农业生产中的一种高效、低毒、内吸性杀菌剂，解决了其他杀菌剂的环境毒性问题。同时对苯并咪唑类杀菌剂产生抗性的病菌具有较高的活性。但由于抑霉唑在生产中长期单一使用，致使抗药性群体不断出现，容易诱导病菌产生抗药性。

发明内容

本发明是在已有技术的基础上，通过深入研究蛇床子素和抑霉唑的复配组合物在农业领域中的应用，尤其是针对苹果轮纹病防治应用的研究而完成的，目的在于提供专用于防治苹果轮纹病的蛇床子素和抑霉唑的复配组合物。

本发明是通过以下技术方案实现的：

蛇床子素和抑霉唑的复配组合物，特殊之处在于，其有效成分蛇床子素和抑霉唑的重量配比为8：1～1：32；

蛇床子素和抑霉唑的复配组合物，进一步的改进在于，其有效成分蛇床子素和抑霉唑的增效重量配比为1:1～16；

蛇床子素和抑霉唑的复配组合物，更进一步的改进在于，其有效成分蛇床子素和抑霉唑的最佳比例为1:4。

蛇床子素和抑霉唑的复配组合物，其有效成分蛇床子素和抑霉唑在整个复配组合物中的重量百分含量分别为1.0%和4.0%，余量为常规辅料添加物。

本发明的蛇床子素和抑霉唑的复配组合物应用于防治苹果轮纹病。

本发明蛇床子素和抑霉唑的复配组合物在稀释400倍、500倍下应用防治苹果轮纹病具有较好的防效。

本发明蛇床子素和抑霉唑复配组合物具有以下优点：

1、具有增效作用。蛇床子素和抑霉唑以1:1～16配比范围内具有增效作用，其中配比1:4增效最大，增效系数为1.94；

2、高安全性。蛇床子素为植物提取物，具有环境相容性；我们制得的5％蛇床子素·抑霉唑含4％抑霉唑，比抑霉唑含量为10％的市销产品减少了6个百分点，从而更进一步地降低了抑霉唑的药剂毒性，因此本发明复配组合物对作物、环境和鲜果食用者更为安全；

3、防效显著。我们制成5％蛇床子素·抑霉唑在田间药效试验中表现突出，稀释400倍、500倍的处理在采收期的防效均在88％以上，其中5％蛇床子素·抑霉唑400倍防效显著高于1％蛇床子素200倍和10％抑霉唑水剂800倍的防效；

4、降低了病菌产生抗药性风险。如优点2所述，复配组合物抑霉唑含量比市场销售的减少6个百分点，这大幅减轻了苹果轮纹病菌对抑霉唑的选择压力；复配组合物中含有的蛇床子素具有多个作用位点，可避免病菌对其产生抗药性；

5、复配杀菌剂减少了药剂的投入量。复配后不仅提高了防治苹果轮纹病的田间效果，与两单剂桶混相比，其400、500倍液分别减少了44%和55.2%的农药制剂用量。

具体实施方式

本发明用以下具体实例进行详细说明，但绝非对本发明的限制。所有配比中百分比均为重量百分比。

实施例1

室内毒力测定与复配比例筛选

1.1供试药剂

94.7％蛇床子素，江苏省农科院食品质量安全研究所提供。溶于95％酒精，配成10000mg/L母液备用。

98％抑霉唑原药，一帆生物科技集团有限公司提供。先溶于丙酮解，后定容配成10000mg/L母液备用。

我国远城科技发展有限公司、陕西禾博天然产物有限公司、西安三维生物技术有限公司等厂家的含量为10～90％的蛇床子素产品均符合本发明中复配组合物所用蛇床子素的要求；而与蛇床子素复配的抑霉唑为市售农药产品，只要其符合本发明中的复配比例及应用条件即可。

1.2供试菌株及寄主植物

苹果轮纹病菌（Botryosphaeriadothidea）自田间病果上分离获得，单孢培养纯化得到的第一代菌株，4℃冰箱内保存备用。

1.3实验方法

采用FAO推荐的菌体生长速率法（Myceliumgrowthratetest）。

1.3.1含药平板的制备

1.3.1.1药剂复配方案

表1蛇床子素和抑霉唑复配比例

表2各药剂系列稀释浓度梯度

1.3.1.2含药平板的制备

按照1.3.1.1设定的药剂浓度梯度，将药剂加入定量溶化的PDA培养基中，制成含药平板，以不含药平板为空白对照，每浓度重复3次。

1.3.2接菌培养

用直径0.6㎝打孔器沿培养好的菌落边缘打取菌盘，用消毒接种针将菌盘反转移植到平板上，置于25℃条件下恒温培养7天。

1.3.3结果检查

以直尺交叉测量法测量菌落扩展直径，与不施药对照菌盘扩展直径相比，求出药剂抑制生长率。

1.3.4统计分析

根据各药剂浓度对数值及对应的菌丝生长抑制率几率值作回归分析，计算各药剂毒力回归方程、相关系数（r）和EC₅₀。

进行药剂联合毒力测定时，根据Wadley法计算复配组合物的增效系数（SR），评价复配组合物的联合作用类型。根据增效系数（SR）来评价药剂复配的增效作用，即SR<0.5为拮抗作用，0.5≤SR≤1.5为相加作用，SR>1.5为增效作用。增效系数（SR）按式（1）、（2）计算：

$X_1=\frac{P_A+P_B}{P_A/A+P_B/B}\&times;100---\left(1\right)$

式中：

X₁----复配组合物EC₅₀理论值，单位为mg/L；

P_A----复配组合物中A的百分含量，单位为百分率（％）；

P_B----复配组合物中B的百分含量，单位为百分率（％）；

A----复配组合物EC₅₀理论值，单位为mg/L；

B----复配组合物EC₅₀理论值，单位为mg/L。

$\mathrm{SR}=\frac{X_1}{X_2}\&times;100---\left(2\right)$

式中：

SR----复配组合物的增效系数；

X₁----复配组合物EC₅₀理论值，单位为mg/L；

X₂----复配组合物EC₅₀实测值，单位为mg/L。

1.4实验结果

通过室内毒力实验，可得出蛇床子素和抑霉唑重量比8:1～1:32具有相加作用，1:1～16范围内均有增效作用，其中1:4为最佳复配比例，增效系数为1.94。

表3蛇床子素和抑霉唑最佳复配比例筛选

实施例2

田间小区试验

根据室内复配比例筛选实验筛选出蛇床子素:抑霉唑＝1:4为最佳配比，我们配制了5％蛇床子素·抑霉唑组合物。

2.1试验药剂与小区安排

按照农业部农药检定所主编的“《农药田间药效试验准则（二）》第118部分：杀菌剂防治苹果轮纹病”设计5％蛇床子素·抑霉唑对苹果轮纹病的田间药效试验。

2.1.1供试药剂

1％蛇床子素水乳剂200倍，江苏省农科院提供。

10％抑霉唑水剂800倍，比利时杨森制药公司提供。

5％蛇床子素·抑霉唑400、500、600倍，烟台市农科院配制。

2.1.2对照药剂

10％苯醚甲环唑水分散粒剂2000倍，先正达（中国）投资公司产品。

1％蛇床子素水乳油200倍与10％抑霉唑水剂800倍桶混，烟台市农科院配制。

2.1.3小区设计

试验共设7个药剂处理，每处理4个重复，共设28个小区，每小区4棵成株树。各小区随机排列。施药器械采用工农26型高压机动喷雾器，以树冠内全部枝梢叶片均匀着药，滴水为止。

2.2调查时间和药效计算方法

2.2.1调查时间与方法

采收期每小区选中央2株，调查全部果实，记录总果数、病果数，以病果率计算防效。

2.2.2药效计算方法

2.3试验结果

在室内筛选的基础上制成的5％蛇床子素·抑霉唑在田间试验中表现突出，400倍、500倍在采收期的防效均在88％以上，其中5％蛇床子素·抑霉唑400倍防效显著高于1％蛇床子素200倍和10％抑霉唑水剂800倍的防效，其防效与10％苯醚甲环唑水分散粒剂（常规化学防治药剂）2000倍、1％蛇床子素200倍和10％抑霉唑水剂800倍田间推荐浓度桶混相当（表4）。

表45%蛇床子素·抑霉唑防治苹果轮纹病田间药效

实施例3

安全性试验

复配组合物中抑霉唑含量比市售产品的减少了6百分点，因此其对人畜的毒性与对作物的安全性是符合要求的；复配组合物中蛇床子素含量为1%，经认定机构毒性实验结果表明1%蛇床子素水乳剂属于微毒类农药：

大鼠急性经口毒性LD50♂>5000mg/kg，♀>5000mg/kg；

大鼠急性经皮毒性LD50♂>5000mg/kg，♀>5000mg/kg；

兔眼刺激积分为0（1h），48h后为0（1:100）稀释，对眼无刺激性；

兔眼刺激积分为0（4h），对皮肤无刺激性。

本发明通过室内毒力测定和田间试验生物源农药蛇床子素和抑霉唑单独使用和复配后对苹果轮纹的效果，确立了两农药的最优配比，供生产使用，以达到减少农药环境污染、控制病菌抗药性发生发展的目的。

Claims (6)

1.蛇床子素和抑霉唑的复配组合物，特征在于，其有效成分蛇床子素和抑霉唑的重量配比为8：1～1：32。

2.如权利要求1所述的蛇床子素和抑霉唑的复配组合物，特征在于，其有效成分蛇床子素和抑霉唑的增效重量配比为1：1～16。

3.如权利要求1或2所述的蛇床子素和抑霉唑的复配组合物，特征在于，其有效成分蛇床子素和抑霉唑的最佳比例为1:4。

4.如权利要求3所述的蛇床子素和抑霉唑的复配组合物，特征在于，其有效成分蛇床子素和抑霉唑在整个复配组合物中的重量百分含量为1.0％和4.0％，余量为常规辅料添加物。

5.权利要求3或4所述的蛇床子素和抑霉唑的复配组合物应用于防治苹果轮纹病的用途。

6.如权利要求5所述的用途，其特征在于将所述复配组合物制成的5％蛇床子素·抑霉唑田间稀释400～500倍防治苹果轮纹病。