CN103875670B - 丁子香酚和蛇床子素的复配组合物及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了蛇床子素和丁子香酚的复配组合物在农业领域中的应用，特别是针对苹果轮纹病及斑点落叶病防治的应用研究。本发明提供了丁子香酚及其与蛇床子素的复配组合物在防治苹果轮纹病、斑点落叶病的应用，复配组合物中丁子香酚和蛇床子素两种成分的重量比为10:1～1:60，增效比例为5:1～1:40，最佳比例为1:20。它在应用防治苹果轮纹病及斑点落叶病方面表现突出。

Description

丁子香酚和蛇床子素的复配组合物及其应用

技术领域

本发明涉及的是一种含有丁子香酚的复配组合物，属于农用杀菌剂技术领域。

背景技术

苹果是我国主栽的果树品种之一，随着其栽培面积的不断扩大，苹果生产中的病虫害问题日益突出，特别是近年来苹果轮纹病、斑点落叶病在我国各苹果产区的发生程度日益加重且极为普遍。苹果轮纹病主要危害枝干和果实，严重时可造成大量烂果，烂果率一般在20～50％，重者可达70～90％；苹果斑点落叶病主要危害叶片，也可危害嫩梢和果实，严重时常造成苹果早期落叶和树势衰弱，影响产量和花芽形成。上述两种病害属于目前我国各苹果产区的主要病害，直接影响果农经济收入。

施用化学杀菌剂是防治上述病害的主要手段，大量化学农药的施用带来残留风险、环境污染、有害生物产生抗药性、伤害非靶标生物甚至破坏生态平衡等一系列严重的问题，因此开发和利用与环境具有相容性、对人类无害的生物农药资源日益受到各国的青睐。生物源农药亦称“生物农药”，是指利用生物资源开发的农药，其有效成分是自然存在的，具有低毒、无污染、专一性强、易于降解、在生态环境中积累毒性可能性小、具有环境相容性等特性。对需求不断增长的有机食品、绿色食品具有保证作用，避免或减轻了应用化学农药造成的负面影响，且具有使病原菌难以产生抗药性等优点，是理想的农药类型。

丁子香酚存在于丁香油、肉桂叶油、肉桂皮油、樟脑油、肉豆蔻油等中，可由丁香油中分出。丁子香酚由植物的叶、茎、根部吸收，并有向上传导功能且安全、环保无残留，药效治疗迅速，持效期长。已发病的作物喷药后，菌孢子马上变型，被溶解消失。近年来丁子香酚备受临床医生、科研界和患者的关注，同时也被科研单位和厂家用作农药推广应用。

香豆素化合物蛇床子素为植物源农药，化学名称为7-甲氧基-8-异戊烯基 香豆素，是一种来源于伞形科植物蛇床（Cnidium monnieri（L.）Cuss）的植物提取物，也存在于欧前胡、圆当归、毛当归、栓翅芹的根、根茎中，有多种成熟的提取方法。起初应用在医学上，后研究发现在农业上可作为杀虫剂及杀菌剂使用（专利授权公开号:CN1119930C、CN1332603C、CN1244275C、CN1586198A、CN100409747C、CN100356851C等）。

目前农药面临着巨大困境，新农药开发成本高、周期长，并且永远赶上病菌抗药性产生的速度，解决抗药性迫在眉睫。在农业生产实际操作过程中，不同农药轮换等措施很难真正起到明显的效果；作物轮作对于多年生的苹果是不现实的。施用植物源农药及不同农药品种进行复配可一定程度上预防或解决抗药性的产生和发展。植物源农药丁子香酚、蛇床子素在生产上的关注度日渐增高，但丁子香酚及其与蛇床子素的复配组合物在防治苹果轮纹病、斑点落叶病方面还未见报道。

发明内容

本发明是在已有技术的基础上，通过深入研究丁子香酚和蛇床子素的复配组合物在农业领域中的应用，尤其是针对苹果轮纹病、斑点落叶病防治应用的研究而完成的，目的在于提供用于防治苹果轮纹病、斑点落叶病的丁子香酚和蛇床子素的复配组合物。

本发明是通过以下技术方案实现的：

丁子香酚和蛇床子素的复配组合物，特殊之处在于，其有效成分丁子香酚和蛇床子素的重量配比为10：1～1：60；

丁子香酚和蛇床子素的复配组合物，进一步的改进在于，其有效成分丁子香酚和蛇床子素的增效重量配比为5:1～1:40；

丁子香酚和蛇床子素的复配组合物，更进一步的改进在于，其有效成分丁子香酚和蛇床子素的最佳比例为1:20。

丁子香酚和蛇床子素的复配组合物，其有效成分丁子香酚和蛇床子素在整个复配组合物中的重量百分含量分别为0.1%和2.0%，余量为常规辅料添加物。

本发明的丁子香酚和蛇床子素的复配组合物应用于防治苹果轮纹病和苹果斑点落叶病。

本发明丁子香酚和蛇床子素的复配组合物在稀释400倍、500倍下应用防 治苹果轮纹病、斑点落叶病具有较好的防效。

本发明丁子香酚和蛇床子素复配组合物具有以下优点：

1、具有增效作用。

丁子香酚和蛇床子素以5:1～1:40配比范围内具有增效作用，其中配比1:20增效最大，增效系数为2.19；

2、高安全性。 

蛇床子素、丁子香酚为植物提取物，具有环境相容性，因此本发明复配组合物对作物、环境和鲜果食用者更为安全；

3、防效显著。 

我们制成2.1％丁子香酚·蛇床子素在防治苹果轮纹病田间药效试验中表现突出，稀释400倍、500倍的处理在采收期的防效均在90％以上，皆高于2％蛇床子素乳油300倍和0.3％丁子香酚可溶液剂800倍的防效。同时其400倍、500倍对苹果斑点落叶病亦有较好效果，防效在88%以上；

4、复配杀菌剂减少了药剂的投入量。

复配后不仅提高了防治苹果轮纹病、苹果斑点落叶病的田间效果，与两单剂桶混相比，其400、500倍液分别减少了27.27%和41.82%的农药制剂用量；

5、降低了病菌产生抗药性风险。

如优点4所述，复配组合物丁子香酚、蛇床子素含量降低，这减轻了苹果轮纹病菌、苹果斑点落叶病菌对丁子香酚、蛇床子素的选择压力；同时复配组合物中含有的蛇床子素具有多个作用位点，可避免病菌对其产生抗药性。

具体实施方式

本发明用以下具体实例进行详细说明，但绝非对本发明的限制。所有配比中百分比均为重量百分比。

实施例1

室内毒力测定与复配比例筛选

1.1供试药剂

94.7％蛇床子素，江苏省农科院食品质量安全研究所提供。溶于95％酒精，配成10000mg/L母液备用。

0.3％丁子香酚可溶液剂，山东省亿嘉农化有限公司产品,溶于水配成1000 mg/L母液备用。

1.2供试菌株及寄主植物

苹果轮纹病菌（Bsotryophaeria dothidea）自田间病果上分离获得，单孢培养纯化得到的第一代菌株，4℃冰箱内保存备用。

1.3实验方法

采用FAO推荐的菌体生长速率法（Mycelium growth rate test）。

1.3.1含药平板的制备

1.3.1.1药剂复配方案 

表1蛇床子素和丁子香酚复配比例

表2各药剂系列稀释浓度梯度

1.3.1.2含药平板的制备

按照1.3.1.1设定的药剂浓度梯度，将药剂加入定量溶化的PDA培养基中，制成含药平板，以不含药平板为空白对照，每浓度重复3次。

1.3.2接菌培养

用直径0.6㎝打孔器沿培养好的菌落边缘打取菌盘，用消毒接种针将菌盘反转移植到平板上，置于25℃条件下恒温培养7天。

1.3.3结果检查

以直尺交叉测量法测量菌落扩展直径，与不施药对照菌盘扩展直径相比，求出药剂抑制生长率。

1.3.4统计分析

根据各药剂浓度对数值及对应的菌丝生长抑制率几率值作回归分析，计 算各药剂毒力回归方程、相关系数（r）和EC₅₀。

进行药剂联合毒力测定时，根据Wadley法计算复配组合物的增效系数（SR），评价复配组合物的联合作用类型。根据增效系数（SR）来评价药剂复配的增效作用，即SR<0.5为拮抗作用，0.5≤SR≤1.5为相加作用，SR>1.5为增效作用。增效系数（SR）按式（1）、（2）计算:

$X_1=\frac{P_A+P_B}{P_A/A+P_B/B}\&times;100---\left(1\right)$

式中:

X₁----复配组合物EC₅₀理论值，单位为mg/L；

P_A----复配组合物中A的百分含量，单位为百分率（％）；

P_B----复配组合物中B的百分含量，单位为百分率（％）；

A----复配组合物EC₅₀理论值，单位为mg/L；

B----复配组合物EC₅₀理论值，单位为mg/L。

$\mathrm{SR}=\frac{X_1}{X_2}\&times;100---\left(2\right)$

式中:

SR----复配组合物的增效系数；

X₁----复配组合物EC₅₀理论值，单位为mg/L；

X₂----复配组合物EC₅₀实测值，单位为mg/L。

1.4实验结果

通过室内毒力实验，可得出丁子香酚和蛇床子素重量比10:1及1:60具有相加作用，5:1～1:40范围内均有增效作用，1:20为最佳复配比例。

表3蛇床子素和丁子香酚最佳复配比例筛选

实施例2

田间小区试验 

根据室内复配比例筛选实验筛选出丁子香酚:蛇床子素＝1:20为最佳配比，我们配置了2.1％丁子香酚·蛇床子素复配组合物。

2.1试验药剂与小区安排

按照农业部农药检定所主编的“《农药田间药效试验准则（二）》第118部分:杀菌剂防治苹果轮纹病及第124部分：杀菌剂防治苹果斑点落叶病”设计2.1％丁子香酚·蛇床子素对苹果轮纹病、苹果斑点落叶病的田间药效试验。2.1.1供试药剂

2％蛇床子素水乳油300倍，武汉天惠生物工程有限公司产品。

0.3％丁子香酚可溶液剂800倍，山东省亿嘉农化有限公司产品。

2.1％丁子香酚·蛇床子素400、500、600倍，烟台市农科院配制。

2.1.2对照药剂

10％苯醚甲环唑水分散粒剂2000倍，先正达（中国）投资公司产品。

2％蛇床子素水乳油300倍与0.3％丁子香酚可溶液剂800倍桶混，烟台市农科院配制。

2.1.3小区设计

试验共设7个药剂处理，每处理4个重复，共设28个小区，每小区4棵成株树。各小区随机排列。施药器械采用工农26型高压机动喷雾器，以树冠内全部枝梢叶片均匀着药，滴水为止。

2.2调查时间和药效计算方法

2.2.1苹果轮纹病 

2.2.1.1调查时间与方法

采收期每小区选中央2株，调查全部果实，记录总果数、病果数，以病果率计算防效。

2.2.1.2药效计算方法 

2.2.2苹果斑点落叶病

2.2.2.1调查时间与方法

在秋梢停止抽生期调查一次药效。

每小区调查2株，每株按东、南、西、北、中5个方位固定5个枝条，调查全部叶片的发病情况，记录各级病叶数。

附叶片分级标准:

0级:无病斑；

1级:病斑面积占整个叶面积的10%以下；

3级:病斑面积占整个叶面积的11～25%；

5级:病斑面积占整个叶面积的26～40%；

7级:病斑面积占整个叶面积的41～65%；

9级:病斑面积占整个叶面积的66%以上。

2.2.2.2药效计算方法 

2.3试验结果

在室内筛选的基础上制成的2.1％丁子香酚·蛇床子素在田间试验防治苹果轮纹病中表现突出，400倍、500倍在采收期的防效均在90％以上，皆高于2％蛇床子素300倍和0.3％丁子香酚800倍的防效；尤其是2.1％丁子香酚·蛇床子素400倍防效与10％苯醚甲环唑水分散粒剂（常规防治化学药剂）2000倍、0.3％丁子香酚和2%蛇床子素田间推荐浓度桶混防效相当（表4）。同时，2.1％丁子香酚·蛇床子素400倍、500倍对苹果斑点落叶病亦有较好效果，防 效均在88%以上（表4）。

表42.1％丁子香酚·蛇床子素防治苹果轮纹病、斑点落叶病田间药效

实施例3

安全性试验 

复配组合物对人畜的毒性与对作物的安全性是符合要求的；复配组合物中蛇床子素含量为2%，丁子香酚含量为0.1%，经认定机构毒性实验结果表明2%蛇床子素乳油、0.3%丁子香酚水溶剂属于微毒类农药：

大鼠急性经口毒性♀>5000mg/kg；

大鼠急性经皮毒性♀>5000mg/kg；

兔眼刺激积分为0（1h），48h后为0（1:100）稀释，对眼无刺激性；

兔眼刺激积分为0（4h），对皮肤无刺激性。

以上实施例通过室内毒力测定和田间试验生物源农药丁子香酚和蛇床子素单独使用和复配后对苹果轮纹及斑点落叶病的效果，确立了两生物源农药的最优配比，供生产使用，以达到减少农药环境污染、控制病菌抗药性发生发展的目的。

Claims (4)

1.丁子香酚和蛇床子素的复配组合物，特征在于，其有效成分丁子香酚和蛇床子素的比例为1:20。

2.如权利要求1所述的丁子香酚和蛇床子素的复配组合物，特征在于，其有效成分丁子香酚和蛇床子素在整个复配组合物中的重量百分含量为0.1％和2％，余量为常规辅料添加物。

3.权利要求2所述的丁子香酚和蛇床子素的复配组合物应用于防治苹果轮纹病和苹果斑点落叶病的用途。

4.如权利要求3所述的丁子香酚和蛇床子素的复配组合物应用于防治苹果轮纹病和苹果斑点落叶病的用途，其特征在于制成的2.1％丁子香酚·蛇床子素田间稀释400～500倍防治苹果轮纹病及斑点落叶病。