CN103874769B - 用于检测染色体畸变的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种基于直接或间接标记的核酸片段（探针）用于检测细胞中的多个不同的染色体区域或DNA区域以检测结构上的染色体畸变的方法，其中染色体畸变在一个染色体之内具有至少两个断点区域，其中—将用标签A标记的第一探针（探针A）和用标签B标记的第二探针（探针B）置于断点区域1的两侧，且形成融合信号A‑B；并且—将两个各自用标签C标记的第三和第四探针（探针C）置于断点区域2的两侧，且形成融合信号C‑C，其中上述融合信号在染色体畸变事件中改变成融合信号A‑C和融合信号B‑C。

Description

用于检测染色体畸变的方法
技术领域
本发明涉及一种基于直接或间接标记的核酸片段（探针）用于检测细胞中的多个不同的染色体区域或DNA区域以检测结构上的染色体畸变的方法，其中染色体畸变在一个染色体之内具有至少两个断点区域，还涉及一种适合于该方法的制剂。
背景技术
多种恶性肿瘤以结构性染色体突变、例如易位、倒置（转化，反转，Inversionen）和部分（分段，segmentelle）复制为基础。这种改变作为预测、预后或鉴别诊断的标记物通常通过利用荧光素标记的原位杂交（ISH）（荧光素ISH（FISH））核酸片段、所谓的探针或者半抗原标记的探针来检测，所述利用荧光素标记的原位杂交（ISH）（荧光素ISH（FISH））核酸片段、所谓的探针或者半抗原标记的探针接下来借助抗体来检测并且通过光学显微镜下的颜色反应（明视野ISH（BrISH）—还包括生色ISH（Chromogene ISH）（CISH）和银增强ISH（SISH））而变得可视化（可见）。
在此，FISH的优点是，在没有更大耗费的情况下，在实施该方法时能够同时地、但是彼此明显区分地检测多重基因组区域。为此，针对不同的基因组区域的核酸片段利用其吸收光谱和/或发射光谱彼此不同的不同荧光染料标记，即偶联。当例如针对中期染色体标本或针对间期细胞核标本应用这种多色探针，则能够通过利用特殊的显微镜滤波器组彼此分开地显示各个颜色（所谓的单带通滤波器组）或者同时地显示多个片段的不同的荧光信号（在两种不同的荧光染料在此称为双带通滤波器组的情况下），其中所述显微镜滤波器组会将准确限定波长范围的光引导至标本上以用于激发染料以及允许将准确限定波长范围的由染料发射的光通过分析器。
然而，存在明显的边界以同时地可视化（显示），因为染料的吸收范围和发射范围通常彼此非常接近，使得其不能够通过显微镜滤波器组彼此分开。此外，不同颜色的两个叠加的信号导致感知到混合色（例如得到红色（或橙色）和绿色和由此的黄色），所述混合色不能够与相同颜色的信号区分开，所述相同颜色的信号是另外的荧光染料的产物并且不通过叠加形成。出于这些原因，在常规FISH中大多同时仅观测两种颜色（橙色/红色和绿色）或者三种颜色（橙色/红色和绿色同时与蓝色的核复染（DAPI））。大致上，作为能够针对FISH可视化的相同的限制也适用于BrISH。在此，现有技术应用两种半抗原，其通常选自生物素、二硝基苯基（DNP）和地谷新配基，和两种偶联抗体的酶，其通常为碱性磷酸酶和氧化物酶（Carbone et al.,2008;Hopman et al.,1997;Laakso et al.,2006;Mayr et al.,2009;Tanner et al.,2000）。
在同时可视化的情况下的这些限制对于用于检测易位和倒置的探针的组成具有影响。在此，原则上存在两种起主要作用的技术和基础的探针组成：形成融合信号（Fusionssignalen）的原理（所谓的双色双融合方案（Dual-Color-Dual-Fusion-））（WO02093130,Dewald et al.,1998;Dewald et al.,2000;Wan et al.,2003）和/或分离融合信号的原理（所谓的双色分裂方案（Dual-Color-Break-Apart-）或双色分离方案（Dual-Color-Split-）（van der Burg et al.,1999;Boomer et al.,2001;van der Burg et al.,2004）。在这两种原理和推导的信号模式（信号图案）的后续讨论中，应当注意的是：正常细胞通常是二倍体，这就是说，每个等位基因以双份的形式存在。因为畸变通常仅影响两个等位基因中的一个，所以除畸变信号之外通常也还可见不被畸变影响的等位基因的正常信号。为了更好地理解，下面并不总是明确地描述正常信号的信号模式。
在双色双融合方案中，断点1的区域置于在相同颜色（例如橙色）的核酸片段的近端和远端两侧，而断点2、即相互易位配偶体（Reziproken Translokationspartner）的区域置于在第二颜色（例如绿色）的核酸片段的近端和远端两侧。正常情况、即在两个易位配偶体的区域中没有染色体中断的情况，在此通过绿色信号和通过空间上分离的橙色信号来表征。
在相互易位的情况下，在两个易位配偶体的断点之内存在中断，并且一个易位配偶体的近端区域与另一配偶体的远端区域融合，并且反之亦然。这因此形成两个绿色/橙色信号对，也称作融合信号（Fusionssignale），因为不同着色的信号通常叠加使得可见混合的颜色信号。这些探针技术的缺点是，仅当两个易位配偶体的断点位于相应标记的核酸片段的区域中时，才形成融合信号。在易位仅影响两个配偶体中的一个时不形成融合信号。这仅引起形成具有标识由于易位而影响的配偶体的信号的颜色的附加信号。换句话说，例如当易位的断点位于由用绿色的荧光染料标记的核酸覆盖的区域中时，形成附加的绿色信号。然而，这种附加信号通常可以通过另外的细胞核覆盖，其可以与其他相同颜色的信号中的一个很接近，进而不能够被感知为附加信号，或者由于组织切片伪像（Gewebsschnittartefakte）而损失。在这种情况下，能够造成错误诊断（误诊），因为没有感知到仅影响一个易位配偶体的易位。
在双色分裂方案（Dual-Color-Break-Apart- ）中，断点的区域置于在不同着色的或彩色标记的核酸片段的近端和远端两侧（例如远端橙色、近端绿色）。正常情况、即在该区域中没有染色体中断的情况，通过融合信号来表征。在畸变情况下，即当存在探针片段之间的染色体中断时，信号彼此在空间上分离。正常情况和畸变情况之间的距离因此通过不同着色信号之间的距离来表征。
这些探针组成的缺点是，不可以预测（得到）关于所参与的易位配偶体（的信息）。此外，例如由于观察者观察间期细胞核的观察轴（Sichtachse）可以引起：将两个相对于观察轴一个位于另一个之上的空间上分离的信号也感知为融合信号。
除上述双色应用之外，在FISH分析中还应用三色-、四色-和五色探针。在此，除橙色/红色和绿色的显著更强的标准荧光颜色之外，也应用可供使用的更弱的另外的颜色，例如金色或红色或蓝色。因此，在常规应用中，例如使用多色FISH探针仅用于检测缺失或扩增（EP1035215B1、WO2007/028031、EP0549709B1），因为在此通常可以以用于扩增（放大）例如蓝色和金色的颜色强度的标记而获取重复的序列。
由Finkel等人（2009）描述的三重FISH方案，致力于不同易位事件的检测，所述易位事件在染色体区域中可以彼此相邻成簇（nebeneinander clustern）（即影响位于附近的不同的基因）。在此，对于信号模式的相应分析，仅使用检测单一畸变的两种颜色，其中第三种颜色则不起作用。
关于利用多于两种颜色的BrISH，Hopman等人（1997）描述了如何实施生色的三重原位杂交，所述三重原位杂交通常针对检测三个重复的染色体区域。根据当前的现有技术的状态，易位借助于仅利用两种半抗原进而利用两种染料的BrISH而检测。
同样未知的是，利用BrISH方法以用于检测倒置（转化，Inversionen）和插入。
不能够借助在专利申请WO02093130A3和WO2005/111235A2中描述的技术和方法来检测倒置，尤其是小的倒置。WO2005/111235A2描述了涉及应用三颜色探针的方法。然而，由探针的第三种标签标记的染色体区域并不直接地由改变而影响，使得在染色体结构改变时消除第一融合信号，从而形成新的分离信号和新的融合信号。该事件在倒置，尤其是小的倒置的情况下，很难或者不能与正常情况区分开。
WO02093130A3公开一种用于利用两种或四种标签/染料检测染色体易位的方法，其中探针针对不同的染色体杂交。该方法仅有条件地适用于检测倒置。此外，由于能够由四种标签/染料衍生出多个信号，分析方法明显更复杂。
目前可用的针对BrISH和FISH与倒置，尤其是但不限制于肿瘤的，结合的全部方法和探针组成都具有缺陷。并不存在任何情况下允许可靠地检测倒置的探针组成和方法以及其形成的信号模式（信号图案）。尤其在小的倒置、即短基因组区段（例如小于20Mb的范围）的倒置的情况下，通常无法检测这种畸变事件。
因此，本发明的目的是提供一种方法，借助该方法可以实现可靠地检测结构性染色体畸变，其中染色体畸变在一个染色体之内具有至少两个断点区域。
发明内容
为了实现该目的，提出所述类型的方法，其中
-将用标签A标记的第一探针（探针A）和用标签B标记的第二探针（探针B）置于断点区域1的两侧，形成融合信号A-B，并且
-将两个各自用标签C标记的第三和第四探针（探针C）置于断点区域2的两侧，形成融合信号C-C，其中
上述的融合信号在染色体畸变事件中改变成融合信号A-C和融合信号B-C。
断点区域1和断点区域2描述一个染色体之内的可能的断点。
术语“置于……两侧（flankieren）”在此理解为是指将探针A和探针B各自杂交到断点区域1的一侧上并且类似地将探针C各自杂交到断点区域2的一侧上。
同样能够提出，单一探针C可以跨过断点区域2，以便获得相同的效果、即形成融合信号C-C。
探针理解为用某个标签标记的核酸片段。
相对于以上描述的方法和组成，根据本发明的方法第一次允许明确地和/或第一次完全可行地检测倒置，尤其还是较小的基因组倒置，以及还有明确地区分易位。
优选地，标记的核酸片段（探针）为多核苷酸、修饰的多核苷酸或修饰的核酸片段或寡核苷酸或修饰的寡核苷酸。
例如，对于本领域技术人员已知的是，用于修饰的多核苷酸的PNA和LNA。
优选地，核酸片段具有不同的标签A、B和C，因此，也形成不同的探针A、B和C。
因此，FISH中使用的三种不同的荧光染料和BrISH中使用的三种不同的报告分子的组合用于标记核酸片段（或者通常为多核苷酸或者也为寡核苷酸）。
优选地，标签选自以下的组中：染料，染料基质，化学发光染料（例如吖啶鎓（Acridinium）），放射性同位素，自旋标记物，酶（例如碱性磷酸酶、辣根过氧化物酶、大豆过氧化物酶、β-半乳糖苷酶），半抗原（例如地谷新配基、生物素、5(6)-羧基荧光素、若丹明、溴化去氧尿苷、乙酰氨基芴、苦味酸、苦味酸衍生物、雌二醇、和/或DNP），量子点，珠粒（Beads）、氨基己基，芘类（Pyrenes）和荧光染料（例如荧光素、荧光素衍生物、5(6)-羧基荧光素、香豆素、香豆素衍生物、若丹明、若丹明衍生物、四甲基若丹明、丽丝胺、德克萨斯红、AMCA、TRITC、IR染料、Alexa染料、Dyomics染料、藻红蛋白、级联蓝（Cascade Blue）、俄勒冈绿488（Oregon Green488）、太平洋蓝（Pacific Blue）和/或若丹明绿）。
根据本发明的方法可以优选地借助于利用针对绿色、橙色/红色和蓝色的发射范围的三种直接嵌入的荧光染料的FISH法来实施。
也能够借助于利用针对绿色、红色和金色的发射范围的三种直接嵌入的荧光染料的FISH法实施所述方法。
优选通过分析荧光信号来进行评估。
优选地，借助于利用生物素、地谷新配基和DNP的BrISH法来实施根据本发明的方法，所述生物素、地谷新配基和DNP结合至偶联抗体的碱性磷酸酶、偶联抗体的氧化物酶和偶联抗体的β-半乳糖苷酶。
已经令人惊奇地发现：在根据本发明的方法中，形成新的融合信号A-C和B-C，其中融合信号A-C和/或B-C经由融合信号A-B的双色分离事件和经由融合信号C-C的单色分离事件来形成。在此，可以考虑将两种新的融合信号作为由此形成的信号模式（在同时应用/观察/分析第三种颜色/第三种标签的情况下）。因此，根据本发明的方法第一次且令人惊奇地允许以上描述的畸变的上述检测，所述检测借助现有技术是不可行的或者仅达到极其不充分的程度。在此，对除两种其他颜色/标签之外的第三种颜色/第三种标签进行同时评估实现第一次或明确地识别畸变。
此外，也在小于20Mb的具有受倒置影响的基因组区段的基因组倒置、尤其但是不限制于小的倒置的情况下，空间上分离的信号可以切断成为仍被感知为融合信号的那样小。在这些情况下，这可以引起错误诊断（误诊），因为没有感知到易位本身。
根据本发明的方法优选适合于检测倒置和/或插入和/或复制。
优选地适合于检测短基因组区段的倒置、插入和/或复制。
尤其优选地，倒置的、插入的和/或复制的基因组区段位于小于20Mb、尤其小于15Mb、尤其优选小于10Mb并且更优选小于5Mb的范围内。
对于短基因组区段的倒置，形成两个新的组装的融合信号，所述融合信号在FISH分析中在间期中能够明显地借助于通常合适的滤波器组来识别。然而不能够排除的可能性是，在较大的中断区域的情况下，可以将融合信号A-C或B-C在空间上分离，使得不再能够被清楚地识别为融合信号。因此，至少在该情况下分离地存在信号C。
同样可行的是，借助于根据本发明的方法区分易位与倒置。
优选地，使用根据本发明的方法用于检测倒置，其中倒置inv(2)(p22-p21p23)和/或ALK和/或EML4基因受影响。
在此，在FISH中原则上能够通过合适的滤波器组同时地感知荧光颜色中的至少两种，这允许以类似于上述的双色探针方案进行快速且简单的扫描，但是这还提供了额外的诊断确定性。
下面，借助于新的探针组成和新的ISH技术更详细地描述基因组倒置检测的优点。
短基因组区段的（小于20Mb的区域）倒置的可靠且明确的检测借助于常规的探针组成是不可行的。此外，较大基因组区段的（大于20Mb的区域）倒置的检测通常也仅是极其困难才可行的。在此，存在现有技术状态的不同探针设计（概念）。在最简单的情况下，借助双色分裂方案考虑两个断点区域中的仅一个。在此，在倒置的情况下具有荧光信号的空间上分离。然而，这种信号分离也在常规的包含断点区域的相互易位的情况下出现，使用这种探针设计不可能区分所述相互易位。
另一缺点是，在双色分裂分离探针和技术中通常也在非重排的状态下实现彼此紧邻的、但是可彼此分开感知的荧光信号的融合信号的信号分离。如果倒置的基因组区段本身仅为极其短的（例如小于20Mb），那么这能够引起期待的空间上的信号分离仅是不显著更大的，因而其能够被忽略。因此，借助该方案不可能进行倒置和相互易位之间的区分，此外畸变情况也能够被错误表述为非重排的。
在双色双融合方案的情况下，跨过具有例如用绿色标记的核酸片段的近端的断点区域和具有例如用橙色标记的核酸片段的远端的断点区域。在例如小于20Mb的短基因组区段的情况下，存在两个彼此极其紧邻的绿色信号和同样两个彼此极其紧邻的橙色信号。因此，在信号上定位（叠加）的情况下，会形成两个彼此极其紧邻的融合信号，但是所述融合信号由于其极其紧邻例如甚至借助相应的双带通滤波器组通常也不能够可靠地被感知为两个分离的融合信号。在此，对于这种情况的补救也能够例如通过使用专门针对两种信号颜色的单信号带通滤波器组而实现。然而这会使评估过程复杂化并使之变慢。此外，在去压缩（脱浓，Dekondensierten）的染色质甚至具有正常的等位基因的区段中通常形成串珠状的、长形的信号，这些信号中的两个由于倒置而空间上分离，而不能够必然地被区分开。两个彼此邻近的融合信号被错误解释为仅一个融合信号会导致错误的阴性诊断结果。
本发明的探针组成还将用于检测在两个断点区域中的一个中的中断的双色分裂方案与利用第三标签的、例如FISH中的荧光染料，如蓝色的标签的用于检测第二断点区域中的中断的单色分裂方案组合，所述第三标签能够与两个第一标签，例如染料（如绿色和橙色）被分开检测。在倒置的情况下，存在通常引起将融合信号以例如在FISH应用中在双带通滤波器组中通常以可感知的方式分离成空间上分离的绿色和橙色信号。同时，例如以在第二滤波器组中可感知的方式专门针对蓝色由于第二断点区域中的中断将蓝色信号分离成两个空间上分离的信号。因此，与常规的方法相反，倒置由此通过两个可彼此感知为不同的事件来表征，这刚好在不清晰的信号模式中引起明显更可靠的诊断结果。因此，在不清晰的绿色-橙色信号分离的情况下，可以通过对于蓝色信号的信号带通滤波器组中的评估进行确认。如果在此产生附加的蓝色信号并且蓝色信号分别与绿色信号和橙色信号共同定位，那么所涉及的绿色橙色信号同样考虑作为非畸变的。在将信号清楚地分离成绿色和橙色信号的情况下，蓝色信号模式的评估用于（在该情况下存在附加的蓝色信号的）倒置和（在该情况下存在正常的蓝色信号模式的）具有未知的易位配偶体的易位之间进行区分。
本发明的另一主题是：基于直接或间接标记的核酸片段（探针）用于检测细胞中的多个不同染色体区域或DNA区域以检测结构上的染色体畸变的根据本发明的制剂，其中染色体畸变在染色体上具有至少两个断点区域，所述制剂包括
-用标签A标记的第一探针（探针A）和用标签B标记的第二探针（探针B）被置于断点区域1的两侧，形成融合信号A-B，并且
-各自用标签C标记的第三和第四探针（探针C）被置于断点区域2的两侧，形成融合信号C-C，其中
上述融合信号在染色体畸变事件中改变成融合信号A-C和融合信号B-C。
优选地，根据本发明的制剂具有用上述标签标记的探针。
附图说明
根据下面的附图和实施例详细地描述本发明。其示出：
图1：示出用于检测倒置的根据本发明的方法的示意图
图2：示出在使用ZytoVision GmbH的“ZytoLight SPEC ALK/EML4TriCheckTMProbe（探针）”的三重FISH探针的情况下的信号模式的简图
图3：示出利用“ZytoLight SPEC ALK/EML4TriCheckTM Probe（探针）”的三重FISH探针用于检测倒置inv(2)(p22-p21p23)的FISH分析
图4：示出利用ZytoVision GmbH的“ZytoDot2C SPEC ALK/EML4TriCheckTM Probe（探针）”的三重CISH探针用于检测倒置inv(2)(p22-p21p23)的CISH分析
具体实施方式
图1示出用于利用三种标签检测倒置的根据本发明的方法的示意图。其示出在倒置inv(2)(p22-p21p23)中的信号模式，所述倒置inv(2)(p22-p21p23)涉及ALK和EML4基因。将三重ISH探针的标签A和B各自置于断点区域1（ALK）的一侧上，并且将标签C置于断点区域2（EML4）的一侧上。
在正常细胞（没有畸变，图中的上部分）的间期中，可识别由标签A和标签B构成的两个融合信号和标签C的两个信号。在被倒置影响的间期中（图中的下部分）出现由标签A和标签C构成的新的融合信号A-C以及由标签B和标签C构成的新的融合信号B-C。此外，存在融合信号和正常染色体的单个信号。
图2示出在应用ZytoVision GmbH的“ZytoLight SPEC ALK/EML4TriCheckTM Probe（探针）”的三重FISH探针的情况下的信号模式的简图。探针由绿色标记的多核苷酸（在503nm处吸收和在528nm处发射）和用橙色标记的多核苷酸（在547nm处吸收和在572nm处发射）以及蓝色标记的多核苷酸（在426nm处吸收和在480nm处发射）构成，所述绿色标记的多核苷酸在2p23中针对位于ALK断点区域近端的序列，所述橙色标记的多核苷酸在2p23中针对位于ALK断点区域远端的序列，所述蓝色标记的多核苷酸在区域2p21中针对位于EML4断点区域近端的序列。
在应用适当的滤波器组时，针对ALK基因（2p23）的混合信号显示为绿色和橙色的荧光信号，而针对EML4基因（2p21）的混合信号显示为蓝色的荧光信号。
在正常细胞和/或没有ALK-EML4重排的细胞中，在间期中在使用适当的双带通滤波器组的情况下，出现两个绿色/橙色融合信号并且在使用适当的单带通滤波器组的情况下出现两个蓝色的信号（参见图1）。
受ALK-EML4倒置影响的2p21-23基因座（2p21-23-Lokus）通过单独的绿色信号和单独的橙色信号以及附加的蓝色信号来标识（表征）。在此，单独的绿色信号和橙色信号分别位于蓝色信号的旁边（参见图2）。
具有缺失（删除）5’ALK序列的受ALK-EML4倒置影响的2p21-23基因座通过单独的绿色信号的损失并通过附加的蓝色信号的损失来标识（表征）。在此，橙色信号位于蓝色信号的旁边（参见图3）。
单独的绿色信号和单独的橙色信号结合正常数量的蓝色信号（参见图4）或者代表没有包括EML4的ALK易位或者当单独的绿色信号和橙色信号彼此极其接近时代表没有重排的2p21-23基因座。
图3示出利用“ZytoLight SPEC ALK/EML4TriCheckTM Probe（探针）”的三重FISH探针用于检测倒置inv(2)(p22-p21p23)的FISH分析。探针由绿色标记的多核苷酸（在503nm处吸收和在528nm处发射），用橙色标记的多核苷酸（在547nm处吸收和在572nm处发射）以及蓝色标记的多核苷酸（在426nm处吸收和在480nm处发射）构成，所述绿色标记的多核苷酸在2p23中针对位于ALK断点区域近端的序列，所述橙色标记的多核苷酸在2p23中针对位于ALK断点区域远端的序列，所述蓝色标记的多核苷酸在区域2p21中针对位于EML4断点区域远端和近端的序列。使用适当的滤波器组能够良好地可视化（可见）信号模式（信号图案）。
图4示出利用“ZytoDot2C SPEC ALK/EML4TriCheckTM Probe（探针）”的三重CISH探针用于检测倒置inv(2)(p22-p21p23)的CISH分析。该探针由地谷新配基标记的多核苷酸和DNP标记的多核苷酸以及生物素标记的多核苷酸构成，所述地谷新配基标记的多核苷酸在2p23中针对位于ALK断点区域近端的序列，所述DNP标记的多核苷酸在2p23中对准位于ALK断点区域远端的序列，所述生物素标记的多核苷酸在区域2p21中对准位于EML4断点区域远端和近端的序列。标记的检测经由一级（未标记的）抗体（抗-DIG/抗-DNP/抗-BIO）以及底物（基质）（AP-RED/HRP-GREEN/beta-GAL-BLUE）的酶转化来进行，所述一级抗体由聚合的酶结合的二级抗体（HRP聚合物/AP聚合物/β-GAL）来检测，所述底物的酶转化引起形成强烈的、永久的红色、绿色、蓝色信号的产生，所述信号能够通过例如借助40倍干式透镜的光显微术的方式来可视化（显示）。

Claims (33)

1.用标签A标记的探针A、用标签B标记的探针B以及两个各自用标签C标记的探针C在制备基于直接或间接标记的核酸片段用于检测细胞中的多个不同的染色体区域或DNA区域以检测结构上的染色体畸变的制剂中的用途，其中所述染色体畸变在一个染色体之内具有至少两个断点区域，其特征在于，
—将所述用标签A标记的探针A和所述用标签B标记的探针B置于断点区域1的两侧，且形成融合信号A-B，并且
—将所述两个各自用标签C标记的探针C置于断点区域2的两侧，且形成融合信号C-C，其中
上述的融合信号在染色体畸变事件中改变成融合信号A-C和融合信号B-C
其中，所述探针A、B和C具有不同的标签。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述探针为多核苷酸、修饰的核酸片段或寡核苷酸。
3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述标签选自以下的组中：染料，放射性同位素，自旋标记物，酶，半抗原，和芘类。
4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于，所述标签选自以下的组中：化学发光染料和荧光染料。
5.根据权利要求3所述的用途，其特征在于，所述酶是碱性磷酸酶、辣根过氧化物酶、大豆过氧化物酶、和/或β-半乳糖苷酶；并且所述半抗原是地谷新配基、生物素、5(6)-羧基荧光素、若丹明、溴化去氧尿苷、乙酰氨基芴、苦味酸、苦味酸衍生物、雌二醇、和/或DNP。
6.根据权利要求4所述的用途，其特征在于，所述化学发光染料是吖啶鎓，并且所述荧光染料是荧光素、荧光素衍生物、香豆素、香豆素衍生物、若丹明、若丹明衍生物、丽丝胺、德克萨斯红、AMCA、TRITC、IR染料、Alexa染料、Dyomics染料、藻红蛋白、级联蓝、俄勒冈绿488和/或太平洋蓝。
7.根据权利要求4所述的用途，其特征在于，所述荧光染料是四甲基若丹明和/或若丹明绿。
8.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述检测借助于利用针对绿色、红色和蓝色的发射范围的三种直接嵌入的荧光染料的FISH法来实施。
9.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述检测借助于利用针对绿色、橙色或红色和金色的发射范围的三种直接嵌入的荧光染料的FISH法来实施。
10.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述检测借助于利用生物素、地谷新配基和DNP的BrISH法来实施，所述生物素、地谷新配基和DNP结合至偶联抗体的碱性磷酸酶、偶联抗体的氧化物酶和偶联抗体的β-半乳糖苷酶。
11.根据权利要求1-10中任一项所述的用途，其中所述检测用于检测倒置、插入和/或复制。
12.根据权利要求1-10中任一项所述的用途，其中所述检测用于检测短基因组区段的倒置、插入和/或复制。
13.根据权利要求12所述的用途，其特征在于，检测到在小于20Mb范围内的倒置的、插入的和/或复制的基因组区段。
14.根据权利要求12所述的用途，其特征在于，检测到在小于15Mb范围内的倒置的、插入的和/或复制的基因组区段。
15.根据权利要求12所述的用途，其特征在于，检测到在小于10Mb范围内的倒置的、插入的和/或复制的基因组区段。
16.根据权利要求12所述的用途，其特征在于，检测到在小于5Mb范围内的倒置的、插入的和/或复制的基因组区段。
17.根据权利要求11所述的用途，其特征在于，在大的中断区域中，将改变的所述融合信号A-C或B-C在信号模式中可观察为融合信号A-C和信号C和/或信号B或者为融合信号B-C和信号C和/或信号A。
18.根据权利要求12所述的用途，其中所述检测用于检测倒置和易位的区别。
19.根据权利要求11所述的用途，其中所述检测用于检测倒置，其中所述倒置受inv(2)(p22-p21p23)和/或基因ALK和/或EML4的影响。
20.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述探针为修饰的多核苷酸或修饰的寡核苷酸。
21.根据权利要求4所述的用途，其特征在于，所述化学发光染料是吖啶鎓，并且所述荧光染料是5(6)-羧基荧光素。
22.一种基于直接或间接标记的核酸片段用于检测细胞中的多个不同的染色体区域或DNA区域以检测结构上的染色体畸变的制剂，其中所述染色体畸变在一个染色体之内具有至少两个断点区域，所述制剂包括
—用标签A标记的探针A和用标签B标记的探针B被置于断点区域1的两侧，且形成融合信号A-B，并且
—两个各自用标签C标记的探针C被置于断点区域2的两侧，且形成融合信号C-C，其中
上述的融合信号在染色体畸变事件中被改变成融合信号A-C和融合信号B-C
其中，所述探针A、B和C具有不同的标签。
23.根据权利要求22所述的制剂，其特征在于，所述探针为多核苷酸、修饰的核酸片段或寡核苷酸。
24.根据权利要求22所述的制剂，其特征在于，所述标签选自以下的组中：染料，放射性同位素，自旋标记物，酶，半抗原和芘类。
25.根据权利要求24所述的制剂，其特征在于，所述标签选自以下的组中：化学发光染料和荧光染料。
26.根据权利要求24所述的制剂，其特征在于，所述酶是碱性磷酸酶、辣根过氧化物酶、大豆过氧化物酶、和/或β-半乳糖苷酶；并且所述半抗原是地谷新配基、生物素、5(6)-羧基荧光素、若丹明、溴化去氧尿苷、乙酰氨基芴、苦味酸、苦味酸衍生物、雌二醇、和/或DNP。
27.根据权利要求25所述的制剂，其特征在于，所述化学发光染料是吖啶鎓，并且所述荧光染料是荧光素、荧光素衍生物、香豆素、香豆素衍生物、若丹明、若丹明衍生物、丽丝胺、德克萨斯红、AMCA、TRITC、IR染料、Alexa染料、Dyomics染料、藻红蛋白、级联蓝、俄勒冈绿488和/或太平洋蓝。
28.根据权利要求25所述的制剂，其特征在于，所述荧光染料是四甲基若丹明和/或若丹明绿。
29.根据权利要求22所述的制剂，其特征在于，所述检测借助于利用针对绿色、红色和蓝色的发射范围的三种直接嵌入的荧光染料的FISH法来实施。
30.根据权利要求22所述的制剂，其特征在于，所述检测借助于利用针对绿色、橙色或红色和金色的发射范围的三种直接嵌入的荧光染料的FISH法来实施。
31.根据权利要求22所述的制剂，其特征在于，所述检测借助于利用生物素、地谷新配基和DNP的BrISH法来实施，所述生物素、地谷新配基和DNP结合至偶联抗体的碱性磷酸酶、偶联抗体的氧化物酶和偶联抗体的β-半乳糖苷酶。
32.根据权利要求22所述的制剂，其特征在于，所述探针为修饰的多核苷酸或修饰的寡核苷酸。
33.根据权利要求25所述的制剂，其特征在于，所述化学发光染料是吖啶鎓，并且所述荧光染料是5(6)-羧基荧光素。
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