CN103857383B - 含有枸杞和松叶的混合提取物作为有效成分的活化视黄酸受体的抗老化用组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种含有枸杞和松叶的混合提取物作为有效成分的抗老化用组合物，更具体地说，涉及一种含有天然原料枸杞以及松叶的混合提取物，活化视黄酸受体，从而具有优异的抗老化或者改善皱纹的效果的皮肤外用剂组合物。

Description

含有枸杞和松叶的混合提取物作为有效成分的活化视黄酸受 体的抗老化用组合物
技术领域
本发明涉及一种含有枸杞和松叶的混合提取物作为有效成分的抗老化用组合物，更具体地说，涉及一种含有枸杞和松叶的混合物提取物作为有效成分的活化视黄酸受体的抗老化用组合物。
背景技术
随着年龄的增大，人的老化也逐渐严重。特别是皮肤的变化特别明显，这种皮肤变化的主要现象为皱纹增加，皮肤变厚，失去弹性，并且由于干燥变得粗糙，以及产生斑点等。而这些现象的主要原因被认为是受到太阳光的长期照射。太阳光对于皮肤的这种影响被称为光老化，其主要是由于太阳光照射引起表皮和真皮组织的变化而导致的。有报道称，在皮肤上涂抹含有维甲酸（全反式维甲酸）、视黄醇以及其衍生物、果酸（AHAs）等面霜时，可改善皮肤的光老化。然而，由于维甲酸为脂溶性，因此其吸收力低，在生物体内不稳定，且对皮肤有刺激性，并且在潜伏期间内还可发生皮肤干燥、伤口和疤痕的脱落等副作用，故将其用做医药以及化妆品的主原料仍存在很大的困难（USP4,677,120）。而视黄醇（维生素A）具有在光、氧气、热、脂类过氧化物等的条件下不稳定的缺点，因此也不易使用，由于这些原因必需使用丁基羟基甲苯（BHT）、D-α-生育酚、丁基羟基茴香醚（BHA）、抗坏血酸、生育酚亚油酸酯等抗氧化剂提升其稳定性；或者为了与外部隔离，使用脂质体或者胶囊等方法，使其稳定，而这些均需要投资额外的费用（USP6,221,927，USP5,744,148）。
对于通过活化视黄酸受体（RAR）预防或者改善皮肤老化的同时，对皮肤没有副作用以及具有稳定性的原料的研究大量地进行着。本发明正是这种研究的结果，发明人发现使用天然原料枸杞和松叶的混合提取物作为皮肤外用剂组合物，具有优异的防止皮肤老化的效果。而目前为止，对于枸杞和松叶的上述效果没有被研究过。
枸杞是枸杞树（Lycium chinense Miller）的果实，性状为一边较尖的纺锤状，果皮为红色或者深红色。外表有皱褶，而里面有呈黄色的白色籽。籽为扁椭圆形，直径约为2mm。基本无味，味道微甜，具有收敛性。已知的主要功能为肝细胞保护作用、降压作用，此外已知还具有促进以及调节免疫功能的作用、抗老化作用、抗动脉硬化作用、雌激素类似作用、抗肿瘤作用、促进造血功能的作用。
松叶为松树（Pinus sylvestris）的叶子和新芽。新鲜的松叶中含有大量的抗坏血酸和维生素A、维生素B、维生素K；具有苦味的苦味物质、黄酮类、花青素、约7至12%的树脂（松脂）、约5%左右的鞣质碳水化合物、精油（叶子中的含量为0.13至1.3%，新叶（芽）中的含量为0.36%，一年生树枝中的含量为0.2至0.9%）等。此外，确认了整个松树中含有醇、酯等可排除体内排泄物，并促进新陈代谢的成分；以苯酚化合物、激肽、松脂（terpentine）、维生素A、维生素C、叶绿素为主要成分的成分；还含有格里高基宁（glycokinin，）、松香酸（），还具有丰富的铁，而赤松的叶子中含有24种氨基酸，还确认了有19种蛋白质构成的氨基酸。松叶是维生素C的原料和供给源。由于松叶呈现很深的绿色，故可摄取到丰富的胡萝卜素。松叶的药用价值可例举萜烯、苯酚化合物、鞣质等具有的一般效果，而营养价值可为由各种营养素以及无机成分，即脂肪、蛋白质、碳水化合物、维生素以及矿物质组成的独特的成分体现。还有报道发现松叶中具有丰富的叶绿素、维生素A、维生素C、特殊维生素P、蛋白质、脂肪、磷、铁、酶、精油等各种矿物成分，因此对于去除胆固醇具有优异的效果，其中含有0.00355%的钙、0.043%的钾、0.2%的油酸0.3198%的甘氨酸、0.3467%的丝氨酸、0.00376%的维生素P（芦丁）、0.0015%的维生素A、0.1301%的维生素C。此外，其有益于高血压、中风、糖尿病、老年痴呆，还具有防止老化、抗癌的效果，还有助于肝和胃、便秘和贫血、慢性酒精中毒以及消除宿醉、去除尼古丁、皮肤美容和改善体质、减肥、男性精力、各种压力、由过度的吸烟和饮酒引起的头重、眼胀等，尤其是具有提神醒脑的作用，而对于应试考生非常有好处。每100g的松叶含有的成分为：水分（42.9%）、天然蛋白质（0.07%）、葡萄糖（30.6%）、矿物质（K、Ca、Fe、Mg、P）、维生素等，其是很好的储存了上述天然营养成分的宝库。叶绿素作为食品营养成分，其具有造血作用（增加血红蛋白）、肉芽组织的生长（破损皮肤的再生）、提升脑细胞活力、降低胆固醇、促进组织细胞生长的作用。
发明内容
本发明要解决的技术问题
本发明人为了提供对于皮肤具有防止老化效果的组合物，利用对皮肤没有副作用，且还具有稳定性的天然原料进行了反复多样的实验。结果，发现将天然原料枸杞和松叶的混合提取物作为皮肤外用剂组合物使用时，具有优异的防止皮肤老化的效果，从而完成了本发明。
因此，本发明的目的在于，提供一种具有优异的抗老化效果的皮肤外用剂组合物，其含有枸杞和松叶的混合提取物作为有效成分。
技术方案
为解决上述技术问题，本发明提供一种含有枸杞和松叶的混合提取物作为有效成分的抗老化用皮肤外用剂组合物。
有益效果
根据本发明的组合物，通过混合使用枸杞和松叶的提取物，活化视黄酸受体，抑制胶原酶的表达，从而发挥改善皱纹以及抗老化的作用。并且，包含其的组合物副作用较小且安全，可广泛应用于化妆品或者医药领域。
最佳实施方式
本发明涉及一种含有枸杞和松叶的混合提取物作为有效成分的组合物，更具体地说，本发明涉及一种含有枸杞和松叶的混合物提取物作为有效成分的，活化视黄酸受体的抗老化用组合物。
对于所述枸杞及松叶的混合提取物的制备方法没有特别的限制，可利用本领域已知的通常的方法实施。例如，清洗枸杞后进行干燥，研成粉末后添加水或者有机溶剂进行提取，之后用滤布进行过滤获得滤液，使上述滤液熟化后，用滤纸过滤，然后用分液漏斗进行提取，再对分离出的提取物进行减压浓缩和干燥，从而可获得枸杞提取物。松叶提取物也可用相同的方法制备，并混合上述两种提取物制备混合提取物。其中，优选将以相同的比例混合枸杞提取物和松叶提取物。
本发明中可使用的有机溶剂可选自乙醇、甲醇、丁醇、醚、乙酸乙酯、氯仿或者这些有机溶剂和水的混合溶剂，优选使用70%的乙醇。此时，优选的提取温度为25-30℃，优选的提取时间为24-26小时。如脱离上述提取温度以及提取时间时，可导致提取效率降低或者发生成分的变化。并且，对滤液进行熟化的温度优选为4-15℃，熟化时间优选为5-7天。如脱离上述熟化温度及熟化时间时，可导致成分的变化。
本发明的组合物中，对于枸杞及松叶混合提取物的含量没有特别的限制。更具体地说，本发明枸杞及松叶混合提取物中，相对于组合物总重量，可含有40-60重量%，优选含有45-55重量%的枸杞提取物。其中，如果含量小于40重量%时，皮肤抗老化效果甚微，而超过60重量%时，相比于增加的提取物，其效果的增加甚微。并且，相对于组合物总重量，可含有40-60重量%，优选含有45-55重量%的松叶提取物。其中，如果含量小于40重量%时，皮肤抗老化效果甚微，而超过60重量%时，相比于增加的提取物，其效果的增加甚微。
本发明含有枸杞及松叶的混合提取物作为有效成分，从而提供抗老化效果。更具体地说，通过活化视黄酸受体，抑制胶原酶的表达，促进胶原的生成，由此缓解由于人体皮肤老化引起的胶原减少现象，从而提供抑制皮肤老化或者改善皱纹的效果。
本发明的组合物可为皮肤外用剂组合物，更具体地说，可为抗老化用组合物或者改善皱纹用组合物。
将根据本发明的皮肤外用剂组合物，以化妆品形态进行制剂化时，可以以柔润化妆水、营养化妆水、按摩霜、营养霜、保湿霜、手霜、粉底、精华液、营养精华液、霜、香皂、洁面泡沫、洁面乳液、洁面霜、身体乳液、身体霜或者面膜等形态制剂化，但并不仅限于此。并且，本发明的组合物还可以是具有混悬液、软膏、乳液或者喷雾剂等剂型的药物组合物。在各种剂型中，对于其它成分本领域技术人员可根据其它外用剂的种类或者使用目的，适当地进行选择和组合。
具体实施方式
以下，将通过本发明的下述实施例以及试验例详述本发明。但下述实施例以及试验例仅是为了帮助理解本发明，并不限定本发明。
[实施例1]枸杞提取物的制备
用纯净水洗涤枸杞后干燥，将200g研成粉末的枸杞粉放入1升的70%乙醇水溶液中，在带有冷凝器的提取机中煮12小时进行提取，然后用300网目的滤布过滤后，将上述滤液在4-15℃条件下放置7天进行熟化，之后再用沃特曼2号滤纸进行过滤。
将上述提取液放入3升装分液漏斗中，在此加入1升乙酸乙酯后摇晃搅匀，待完全分离成两层后，取上层（乙酸乙酯层）。再用分液漏斗对下层（水层）进行两次提取。
将分离出的上层合并，利用带有冷凝器的蒸馏装置，在50℃条件下进行减压浓缩，并进行干燥，获得干重为35.8g的物质。
[实施例2]松叶提取物的制备
用纯净水洗涤松叶后干燥，将200g研成粉末的松叶粉放入1升的70%乙醇水溶液中，在带有冷凝器的提取机中煮12小时进行提取，然后用300网目的滤布过滤后，将上述滤液在4-15℃条件下放置7天进行熟化，之后再用沃特曼2号滤纸进行过滤。
将上述提取液放入3升装分液漏斗中，在此加入1升乙酸乙酯后摇晃搅匀，待完全分离成两层后，取上层（乙酸乙酯层）。再用分液漏斗对下层（水层）进行两次提取。
将分离出的上层合并，利用带有冷凝器的蒸馏装置，在50℃条件下进行减压浓缩，并进行干燥，获得干重为24.9g的物质。
[试验例1]改善皱纹效果
对通过上述实施例1获得的枸杞提取物、通过上述实施例2获得的松叶提取物，以及等量混合用100g枸杞通过上述实施例1的方法获得的枸杞提取物和用100g松叶通过上述实施例2的方法获得的松叶提取物得到的提取物（实施例3），进行胶原酶表达抑制功能（生成抑制活性）的测定。其中，将已知能抑制胶原酶表达的视黄酸作为阳性对照组，并以下述方法进行测定。
首先，在装有含2.5%胎牛血清的DMEM（Dulbecco’s Modified Eagle’s Media）培养基的96孔平板培养器（96-well microtiter plate）中，接种5000细胞/孔（well）的人成纤维细胞进行培养，使其长满至90%。在无血清DMEM培养基中培养24小时之后，分别利用溶解于无血清DMEM培养基中的100μg/ml的上述实施例1和上述实施例2、分别混合100μg/ml浓度的上述实施例1与上述实施例2的混合提取物（实施例3），以及1μM视黄酸作为试验物质，处理24小时后获得细胞培养液。
之后，利用胶原酶测定装置（美国法玛西亚试剂盒公司，Amersham Pharmacia），测定获得的细胞培养液的胶原酶生成程度。
首先，在均匀涂布有胶原酶1抗的96孔平板（96-well plate）中，加入获取的上述细胞培养液，在恒温槽中，进行3小时的抗原-抗体反应。3小时后再将结合有发色基团的胶原II型胶原抗体添加至96孔平板中，再次反应15分钟。15分钟后，添加诱发显色的物质，在室温进行15分钟的显色，之后再加入1M的硫酸，终止反应（显色）。反应液呈黄色，且随着反应进行程度的不同，其黄色的显色程度也不同。
利用吸光测定计，在405nm的波长下测定呈黄色的96孔平板的吸光度，根据下述数学式1计算胶原酶表达程度，其结果表示在下述表1中，其是以非处理组的胶原酶表达程度作为100进行比较的结果。此时，从未用试验物质进行处理的组获取的细胞培养液作为对照组。
数学式1
胶原酶表达程度（%）=A/B×100
A：用上述试验物质处理的细胞组吸光度
B：对照组的吸光度
表1
试验物质 胶原酶表达程度（%）
非处理组 100
视黄酸（阳性对照组） 51.3
实施例1 81.3
实施例2 75.7
实施例3 52.9
其结果如上述表1所示，上述实施例3的枸杞和松叶的混合提取物，相比于实施例1的枸杞提取物和实施例2的松叶提取物的胶原酶表达抑制功能高2.1倍。因此，可确认与单独使用枸杞提取物和松叶提取物相比，通过混合两种提取物能够有效抑制胶原酶的表达。
[试验例2]视黄酸受体α、γ（RAR-α/γ）转录活性效果
将已知能活化视黄酸受体的视黄酸作为阳性对照组，以下述方法，对通过上述实施例1获得的枸杞提取物、通过上述实施例2获得的松叶提取物、以及等量混合上述实施例1获得的枸杞提取物和上述实施例2获得的松叶提取物得到的提取物（实施例3）的视黄酸受体α/γ转录活性效果进行测定。
首先，将猴肾脏（Monkey Kidney）细胞上皮细胞系CV-1细胞,以4×104细胞/孔的浓度接种于24孔板后，培养12-16小时。为了进行转染，用磷酸盐缓冲液（PBS）进行洗涤后，更换培养液。将报告质粒（Reporter Plasmid）、受体质粒（receptor plasmid）、β-半乳糖苷酶（β-galactosidase）表达载体（expression vector）和载体DNA pBluscript（pBS）制备成总和0.5μg的体系后，添加至CV-1细胞的各孔。之后分别利用溶解的100μg/ml的上述实施例1和上述实施例2、分别混合100μg/ml浓度的上述实施例1与上述实施例2的混合提取物（实施例3），以及1μM视黄酸处理20小时后，加入0.25M的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐（Tris-HCl，pH8.0），制备细胞裂解液，并转移至用于96孔光度计（Luminometer）的细胞培养板（Costar），之后通过生产商的说明，利用半乳糖苷酶分析系统（Luciferase Assay System）TM试剂盒（美国普洛麦格公司，Promega Corporation）测定半乳糖苷酶活性。
为测定β-半乳糖苷酶的活性，将上述细胞裂解液以每孔20μg转移至96孔分析用板（猎鹰（Falcon），Cat.NO.353911）后，在每个孔加入100μl的ONPG（邻硝基苯β-D-半乳吡喃糖苷，Onitrophenylβ-galacti-pyranoside）溶液，然后在37℃的培养器中静置2小时。
之后，在每个孔中加入50μl的1M碳酸钠（Na2O3）溶液，在415nm波长下测定吸光度。用上述方法测定出的β-半乳糖苷酶活性对细胞裂解液中转化效率进行校准，从而测定荧光素梅的相对活性，对各个实施例的活性能进行比较，其结果如下述表2所示。
表2
其结果如上述表2所示，确认了上述枸杞和松叶的混合提取物的实施例3，与实施例1的枸杞提取物和实施例2的松叶提取物各自的视黄酸受体α、γ（RAR-α/γ）转录活性效果相比，表现出了高2.6倍、2.45倍的视黄酸受体α、γ转录活性效果。
根据本发明的组合物可制备成下述剂型例，但并不仅限于此。
[剂型例1]营养化妆水
可根据下述表3记载的组成，采用通常的方法制备营养化妆水。
表3
原料名称 含量（重量%）
甘油 8.0
丁二醇 4.0
透明质酸提取物 5.0
β-葡聚糖 7.0
卡波姆 0.1
枸杞和松叶的混合提取物 1.0
辛酸/癸酸三酸甘油酯 8.0
角鲨烷 5.0
鲸蜡硬脂基葡糖苷 1.5
山梨醇硬脂酸酯 0.4
鲸蜡硬脂醇 1.0
防腐剂 适量
香料 适量
色素 适量
三乙醇胺 0.1
纯净水 余量
[剂型例2]营养乳液
可根据下述表4记载的组成，采用通常的方法制备营养乳液。
表4
原料名称 含量（重量%）
纯净水 余量
甘油 3.0
丁二醇 3.0
液体石蜡 5.0
β-葡聚糖 7.0
卡波姆 0.1
枸杞和松叶的混合提取物 1.0
辛酸/癸酸三酸甘油酯 3.0
角鲨烷 5.0
鲸蜡硬脂基葡糖苷 1.5
山梨醇硬脂酸酯 0.4
聚山梨醇酯60 1.5
防腐剂 适量
香料 适量
色素 适量
三乙醇胺 0.1
[剂型例3]营养霜
可根据下述表5记载的组成，采用通常的方法制备营养霜。
表5
原料名称 含量（重量%）
甘油 3.0
丁二醇 3.0
液体石蜡 7.0
β-葡聚糖 7.0
卡波姆 0.1
枸杞和松叶的混合提取物 1.0
辛酸/癸酸三酸甘油酯 3.0
角鲨烷 5.0
鲸蜡硬脂基葡糖苷 1.5
山梨醇硬脂酸酯 0.4
聚山梨醇酯60 1.2
防腐剂 适量
香料 适量
色素 适量
三乙醇胺 0.1
纯净水 余量
[剂型例4]按摩霜
可根据下述表6记载的组成，采用通常的方法制备按摩霜。
表6
原料名称 含量（重量%）
甘油 8.0
丁二醇 4.0
液体石蜡 45.0
β-葡聚糖 7.0
卡波姆 0.1
枸杞和松叶的混合提取物 1.0
辛酸/癸酸三酸甘油酯 3.0
蜜蜡 4.0
鲸蜡硬脂基葡糖苷 1.5
山梨坦倍半油酸酯 0.9
凡士林 3.0
防腐剂 适量
香料 适量
色素 适量
石蜡 1.5
纯净水 余量
[剂型例5]面膜
可根据下述表7记载的组成，采用通常的方法制备面膜。
表7
[剂型例6]软膏
可根据下述表8记载的组成，采用通常的方法制备软膏。
表8
原料名称 含量（重量%）
甘油 8.0
丁二醇 4.0
液体石蜡 15.0
β-葡聚糖 7.0
卡波姆 0.1
枸杞和松叶的混合提取物 1.0
辛酸/癸酸三酸甘油酯 3.0
角鲨烷 1.0
鲸蜡硬脂基葡糖苷 1.5
山梨醇硬脂酸酯 0.4
鲸蜡硬脂醇 1.0
防腐剂 适量
香料 适量
色素 适量
蜜蜡 4.0
纯净水 余量
工业实用性
根据本发明的组合物，通过混合使用枸杞和松叶的提取物，活化视黄酸受体，抑制胶原酶表达，从而表现出改善皱纹，以及抗老化的效果。并且，含有其的组合物副作用少且安全，因此可用于化妆品或者医药品等多种领域。

Claims (9)

1.一种抗老化用化妆品组合物，其特征在于，其含有枸杞提取物和松叶提取物的混合物作为有效成分，
其中所述枸杞提取物为枸杞乙醇提取物或乙醇水溶液提取物的乙酸乙酯部分，在所述混合物中，相对于所述混合物的总重量，含有40-60重量％的枸杞提取物；以及
其中所述松叶提取物为松叶乙醇提取物或乙醇水溶液提取物的乙酸乙酯部分，在所述混合物中，相对于所述混合物的总重量，含有40-60重量％的松叶提取物。
2.根据权利要求1所述的抗老化用化妆品组合物，其特征在于，所述组合物活化视黄酸受体。
3.根据权利要求1所述的抗老化用化妆品组合物，其特征在于，所述组合物通过抑制胶原酶的表达，从而用于改善皱纹。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的抗老化用化妆品组合物，其特征在于，所述组合物为选自柔润化妆水、营养化妆水、粉底、精华液、面霜、香皂、洁面泡沫、洁面乳液、身体乳液和面膜中的任意一种剂型。
5.根据权利要求4所述的抗老化用化妆品组合物，其特征在于，所述精华液为营养精华液。
6.一种抗老化用皮肤外用剂药物组合物，其特征在于，其含有枸杞提取物和松叶提取物的混合物作为有效成分，
其中所述枸杞提取物为枸杞乙醇提取物或乙醇水溶液提取物的乙酸乙酯部分，在所述混合物中，相对于所述混合物的总重量，含有40-60重量％的枸杞提取物；以及
其中所述松叶提取物为松叶乙醇提取物或乙醇水溶液提取物的乙酸乙酯部分，在所述混合物中，相对于所述混合物的总重量，含有40-60重量％的松叶提取物。
7.根据权利要求6所述的抗老化用皮肤外用剂药物组合物，其特征在于，所述组合物活化视黄酸受体。
8.根据权利要求6所述的抗老化用皮肤外用剂药物组合物，其特征在于，所述组合物通过抑制胶原酶的表达，从而用于改善皱纹。
9.根据权利要求6至8中任一项所述的抗老化用皮肤外用剂药物组合物，其特征在于，所述组合物为选自混悬液、软膏、乳液和喷雾剂中的任意一种剂型。
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