CN116035975B - 一种牡丹花水在护肤品中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明属于化妆品技术领域，具体涉及一种牡丹花水在护肤品中的应用。所述的牡丹花水是利用复合微生物发酵工艺制备获得的，所述复合微生物为约氏乳杆菌、红酵母、双歧杆菌，其添加配比为3‑5:2‑6:0.5‑1；此外，牡丹花水的制备过程中还添加了苹果汁、洋甘菊提取物、马兰头提取物3种组分，其中，苹果汁添加量是牡丹浆液体积的30‑40%，且苹果汁温度为2‑6℃；洋甘菊提取物的添加量是牡丹浆液体积的2‑8%、马兰头提取物是牡丹浆液体积的10‑20%。本发明制备的牡丹花水具有很好的抗氧化、美白、保湿功，同时还能够具促进受紫外线辐射损伤的皮肤屏障修复，能够很好的应用到具有相关功效的护肤品中。

Description

一种牡丹花水在护肤品中的应用
技术领域
本发明属于化妆品技术领域，具体涉及一种牡丹花水在护肤品中的应用。
背景技术
牡丹，毛莨科，芍药属植物，素有“国色天香”“花中之王”美称，牡丹不仅具有很高的观赏价值，而且还有很高的养生、药用价值。《神农本草经》中记载到，牡丹列为“中品”，具有“除症结淤血，安五脏”作用；而在《华佗神医秘方》中也记载了关于牡丹的方剂，多达22种之多；同时，牡丹还具有很好的美容价值，关于其美容养生价值在清代著作《群芳谱》、《养颜录》中均有详细记载。
在现有技术中，相关技术人员利用牡丹的不同部位制备油、膏、乳等多种形态应用到化妆品中，如将牡丹根皮应用到化妆品中以期能够改善肤色，使面色更加红润白皙；或是将牡丹籽制备成牡丹籽油也要用到化妆品中用作抗氧化剂，具有抗衰、抗炎的作用；或是将牡丹籽油配合其它鲜花精油，例如玫瑰精油、菊花精油、花香精油，并添加些功能性成分例如维生素、熊果苷等制备成护肤精油；等等；传统护肤品中，“水”相较于“油”、“乳”类护肤品，功效性相对会弱，大部分都是仅具有简单的保湿作用。即使是具有美白等功效性的“水”类护肤品，其原料组分较多，在发挥护肤功效的同时某些组分可能会对部分消费者面部产生刺激作用或者不耐受现象，而具体是那种组分作用导致的，往往难以探究；或是部分产品中较多添加剂的使用会导致敏感肌顾客产生泛红，甚至红肿现象。而经查阅，目前没有关于牡丹花水类产品应用于护肤品中的相关研究，鉴于此，本发明人旨在发明一种制备工艺简单、原料组分少且安全，同时具有美白、抗氧化、修复等多功效的牡丹花水应用在护肤品中。
发明内容
为了解决上述问题，本发明提供了一种牡丹花水应用在护肤品中。该牡丹花水是通过优化制备工艺和辅料组分的添加制的。具体是利用特定复合微生物发酵，并添加植物提取物等辅料制得具有美白(抑制酪氨酸酶活性)、抗氧化(降低ROS水平、清除自由基)、屏障修复、保湿等功效的牡丹花水，并将其应用在护肤品中。
本发明具体的技术方案如下：
一种牡丹花水在护肤品中的应用，所述的牡丹花水是利用复合微生物发酵工艺制备获得的；所述复合微生物为约氏乳杆菌、红酵母、双歧杆菌，其添加配比为3-5:2-6:0.5-1；
其中，在所述的牡丹花水的制备过程中还添加了苹果汁、洋甘菊提取物、马兰头提取物3种组分。
一种牡丹花水在护肤品中的应用，所述的牡丹花水是由如下方法制备获得的：
(1)以新鲜的牡丹鲜花为原料，洗净去杂后于-80～-60℃进行保存3-4小时；
(2)取出后再研磨成浆，并进行超声处理；
(3)向(2)超声处理后的浆液中依次加入苹果汁、洋甘菊提取物、马兰头提取物，低速搅拌10-15min，获得混合物；
(4)将(3)中的混合物进行高压均质，并加入复合微生物菌剂进行发酵，获得发酵液；
(5)将(4)中发酵液进行过滤、离心获得牡丹花水。
优选的，步骤(2)中，所述的超声处理的条件为：在25-45℃、频率80-200KHz下超声处理60-150s。
优选的，步骤(3)中，所述的苹果汁添加量是牡丹浆液体积的3-15％，且苹果汁温度为2-6℃。
优选的，步骤(3)中，所述的苹果汁添加量是牡丹浆液体积的3-10％，且苹果汁温度为2-4℃。
优选的，步骤(3)中，所述的洋甘菊提取物的添加量是牡丹浆液体积的2-6％、马兰头提取物是牡丹浆液体积的5-10％。
优选的，步骤(3)中，所述的洋甘菊提取物的添加量是牡丹浆液体积的2-4％、马兰头提取物是牡丹浆液体积的5-6％。
优选的，步骤(4)中，所述的高压均质的条件为：均质压力500-650bar，时间5-20min。
优选的，步骤(4)中，所述的复合微生物菌剂为，约氏乳杆菌、红酵母、双歧杆菌，其添加配比为3-5:2-6:0.5-1；所述的发酵条件为在36-40℃下发酵12-24h。
优选的，步骤(4)中，所述的复合微生物菌剂添加配比为4-5:2-5:0.5-1。
优选的，步骤(5)中，离心条件为：4000-8000rmp转速下离心30-60min。
优选的，所述牡丹花水在制备具有抗氧化、美白、保湿功效化妆品中的应用。
优选的，所述牡丹花水在制备具有促进受紫外线辐射损伤的皮肤屏障修复功效化妆品中的应用。
植物提取物，是以植物为原料，经过物理化学提取分离过程，定向获取和浓集植物中的某一种或多种有效成分，近年来也广泛应用在化妆及护肤品领域，但由于其品类多样，很多植物提取物在护肤领域处于待开发状态，本发明人尝试用多种提取物应用在本发明牡丹花水的制备过程中，试图寻找到效果较佳的一种或几种。
马兰头提取物，马兰头是一种野菜，属于一种多年生草本植物，常常生长在路边、田野间、山坡上；马兰头没有毒性，富含有丰富的维生素，即可作为食用，又可以作为药用；且采购价格较低。
洋甘菊提取物，其含挥发油、黄酮类化合物、氨基酸、绿原酸和微量元素等。基于洋甘菊提取物具有抗菌、抗氧化、抗炎、舒缓抗敏等生物活性，广泛应用于化妆品中，可起到预防过敏、保湿、防治粉刺和抗衰老等功效。
迷迭香提取物，主要成分为迷迭香酚、鼠尾草酚和鼠尾草酸；迷迭香提取物中的几种主要成分都具有较强的抗氧化活性。
上述提取物为本发明实验前期所采用的部分提取物，全部供试提取物材料本发明在此不进行一一列举。
本发明有益效果在于：
1.具有很好的抗氧化效果，对紫外线辐射引起的皮肤细胞氧化损伤具有防护作用；
经检测，本发明经特定微生物菌发酵后制得的牡丹花水清除DPPH的清除率能够达到93.6％，显著高于实施例4、5的80％左右的DPPH清除率，本发明发酵菌添加使得牡丹花水具有更为显著的直接清除氧自由基的能力；此外，该牡丹花水还能够显著降低UVB辐射的HaCaT角质形成细胞内的活性氧自由基(ROS)水平，表明该牡丹花水能够有效抑制UVB诱导的表皮细胞内ROS的生成，缓解细胞氧化应激反应。
2.对酪氨酸酶活性的抑制作用，进而减少黑色素生成的活性，具有美白功效。当添加苹果汁配合洋甘菊提取物、马兰头提取物制备牡丹水时，对酪氨酸酶活性的抑制作用很显著，以苹果汁温度在2-6℃范围时的效果做好，牡丹花水在1.5625-100μl/mL剂量范围内时，其抑制酪氨酸酶活性的半数抑制浓度(IC50)能够达到4.66‰。
3.牡丹花水具有皮肤保湿功效。本发明选取特定的辅料，即苹果汁、马兰头提取物、洋甘菊提取物，康志愿者测试结果显示：该辅料制备下的牡丹花水可使皮肤角质层水分含量域在使用产品后的1h、3h、6h中，均比空白对照区皮肤保湿率高4-5％左右。
4.本发明牡丹花水对于受紫外线辐射损伤的皮肤屏障的修复可能具有促进作用。经检测，本发明发酵菌的选择能显著提高UVB辐射损伤的HaCaT角质形成细胞上述分化标志基因的表达水平，能够有效促进受到紫外线辐射损伤的表皮细胞的分化；本发明牡丹花水孵育后的HaCaT细胞活力能够达到99.8％；优于其他发酵菌制备产品的孵育效果(80％左右)。
5.采用复合微生物菌发酵后的牡丹花水较为温和、无刺激作用；通过动物实验测试了对鸡胚毛细血管的刺激作用、对豚鼠皮肤的刺激性作用及人体试验，发现并没有引起相关的刺激性反应。
附图说明
图1是微生物菌对HaCaT细胞活力的影响检测；
图2分别是加样前鸡胚绒毛尿囊膜眼刺激试验图(左)和加样后鸡胚绒毛尿囊膜眼刺激试验图(右)；
图3是牡丹花水对于UVB辐射的HaCaT角质形成细胞内的活性氧自由基(ROS)水平的影响；
图4是牡丹花水对UVB辐射损伤的HaCaT细胞分化标志基因的调控作用；
图5是实施例1质层水分含量变化趋势；
图6是实施例7质层水分含量变化趋势；
图7是实施例8质层水分含量变化趋势；
图8是实施例1牡丹花水对酪氨酸酶活性的抑制作用。
具体实施方式
为了能使本领域技术人员更好的理解本发明，现结合具体实施方式对本发明进行更进一步的阐述。
1.1实施例
实施例1
(1)以新鲜的牡丹鲜花为原料，洗净去杂后于-80℃进行保存3小时；
(2)取出后再研磨成浆，在28℃、频率100KHz下超声处理60s；
(3)向(2)超声处理后的浆液中依次加入4℃左右苹果汁，及洋甘菊提取物、马兰头提取物，低速搅拌10min，获得混合物；
其中，苹果汁添加量是牡丹浆液体积的6％、洋甘菊提取物的添加量是牡丹浆液体积的2％、马兰头提取物是牡丹浆液体积的5％；
(4)将(3)中的混合物在650bar压力下均质10min，并加入复合微生物菌剂(约氏乳杆菌：红酵母：双歧杆菌＝5:3:0.5)在在37℃下发酵16h获得发酵液；
(5)将(4)中发酵液进行过滤、6000rmp转速下离心40min，获得牡丹花水。
实施例2
(1)以新鲜的牡丹鲜花为原料，洗净去杂后于-60℃进行保存4小时；
(2)取出后再研磨成浆，在35℃、频率120KHz下超声处理60s；
(3)向(2)超声处理后的浆液中依次加入2℃左右苹果汁，及洋甘菊提取物、马兰头提取物，低速搅拌10min，获得混合物；
其中，苹果汁添加量是牡丹浆液体积的9％、洋甘菊提取物的添加量是牡丹浆液体积的3％、马兰头提取物是牡丹浆液体积的5％；
(4)将(3)中的混合物在650bar压力下均质10min，并加入复合微生物菌剂(约氏乳杆菌：红酵母：双歧杆菌＝4:3:1)在在37℃下发酵16h获得发酵液；
(5)将(4)中发酵液进行过滤、6000rmp转速下离心40min，获得牡丹花水。
实施例3
(1)以新鲜的牡丹鲜花为原料，洗净去杂后于-60℃进行保存4小时；
(2)取出后再研磨成浆，在38℃、频率120KHz下超声处理60s；
(3)向(2)超声处理后的浆液中依次加入6℃左右苹果汁，及洋甘菊提取物、马兰头提取物，低速搅拌10min，获得混合物；
其中，苹果汁添加量是牡丹浆液体积的7％、洋甘菊提取物的添加量是牡丹浆液体积的3％、马兰头提取物是牡丹浆液体积的7％；
(4)将(3)中的混合物在500bar压力下均质10min，并加入复合微生物菌剂(约氏乳杆菌：红酵母：双歧杆菌＝5:4:1)在在37℃下发酵16h获得发酵液；
(5)将(4)中发酵液进行过滤、6000rmp转速下离心40min，获得牡丹花水。
实施例4发酵菌不同
(1)以新鲜的牡丹鲜花为原料，洗净去杂后于-60℃进行保存4小时；
(2)取出后再研磨成浆，在35℃、频率120KHz下超声处理60s；
(3)向(2)超声处理后的浆液中依次加入2℃左右苹果汁，及洋甘菊提取物、马兰头提取物，低速搅拌10min，获得混合物；
其中，苹果汁添加量是牡丹浆液体积的9％、洋甘菊提取物的添加量是牡丹浆液体积的3％、马兰头提取物是牡丹浆液体积的5％；
(4)将(3)中的混合物在650bar压力下均质10min，并加入复合微生物菌剂(植物乳杆菌：酿酒酵母：双歧杆菌＝4:3:1)在在37℃下发酵16h获得发酵液；
(5)将(4)中发酵液进行过滤、6000rmp转速下离心40min，获得牡丹花水。
实施例5发酵菌不同
(1)以新鲜的牡丹鲜花为原料，洗净去杂后于-60℃进行保存4小时；
(2)取出后再研磨成浆，在35℃、频率120KHz下超声处理60s；
(3)向(2)超声处理后的浆液中依次加入2℃左右苹果汁，及洋甘菊提取物、马兰头提取物，低速搅拌10min，获得混合物；
其中，苹果汁添加量是牡丹浆液体积的9％、洋甘菊提取物的添加量是牡丹浆液体积的3％、马兰头提取物是牡丹浆液体积的5％；
(4)将(3)中的混合物在650bar压力下均质10min，并加入复合微生物菌剂(植物乳杆菌：红酵母：嗜酸乳杆菌＝4:3:1)在在37℃下发酵16h获得发酵液；
(5)将(4)中发酵液进行过滤、6000rmp转速下离心40min，获得牡丹花水。
1.2功效评价方法和试验结果
检测A：微生物菌对HaCaT细胞活力的影响检测；具体检测步骤为将HaCaT细胞以5000个/孔的密度接种于96孔细胞培养板，待细胞生长至50-60％左右的单细胞层融合密度时，加入各实施例中牡丹花水孵育24h。用细胞培养基按10：1稀释CCK-8原液，配成CCK-8工作液。吸走96孔板中旧培养基，每孔加入100μl CCK-8工作液，在细胞培养箱内继续孵育0.5h，使用酶标仪在450nm测定吸光度OD值，计算生存率(％)＝(OD处理组/OD对照组)×100％。具体结果见表1和图1。
表1细胞活力
结果发现本发明实施例1-3牡丹花水具有显著得促进HaCaT细胞增殖的作用；从上表可以看出，本发明实施例细胞活力能达到99.8％；而与实施例1-3发酵菌不同的实施例4-5仅表现出80％左右的细胞活力，与本发明实施例1-3存在较为显著的差距。
检测B：斑贴试验
斑贴试验是诊断接触性皮炎的经典方法，也是化妆品规范规定的评价化妆品安全性的重要方法之一，适用于检测化妆品对人体皮肤潜在的不良反应，包括刺激性反应和过敏性反应。本试验依据《化妆品安全技术规范》(2015年版)第七章“人体安全性检验方法”中“人体皮肤斑贴试验”所描述的试验流程，采用48h人体皮肤单次封闭型斑贴试验，测试了实施例1和实施例4牡丹花水液的皮肤刺激性。试验共招募了32名健康志愿受试者，其中男性4人，女性28人，年龄27-60岁，平均年龄47.1±10.9岁。采用封闭性斑贴试验方法，将受试物0.020-0.025g置于斑试器内，用低致敏胶带贴敷于受试者背部，24h后去除受试物，分别于去除后0.5、24、48h观察皮肤反应，按现行技术规范中皮肤反应分级标准(表2)记录结果。
表2皮肤封闭型斑贴试验皮肤反应分级标准
牡丹花水液斑贴试验结果如表3所示。
表3牡丹花水斑贴试验结果汇总
注：对照为空白滤纸片；受试物1为实施例1产品；受试物2为实施例4产品。
经上表数据可以发现，实施例1中32受试者中仅有1例出现1级皮肤不良反应，而实施例4中有5人出现1级皮肤不良反应，2人出现1级皮肤不良反应。
实验结论：
本次试验通过对32名志愿受试者的皮肤斑贴试验，研究实施例牡丹花水液皮肤刺激作用，结果发现，实施例1牡丹花水液除导致1名受试者表现出可疑反应，有微弱红斑者外，其他均无不良反应；而实施例4导致5名受试者表现出可疑反应，有微弱红斑者；2名受试者呈弱阳性反应。根据《化妆品卫生规范》中皮肤斑贴试验“结果解释”部分：30例受试者中出现1级皮肤不良反应人数多于5例(反应率为16.7％)，判定受试物对人体有皮肤不良反应，据此判定本发明牡丹花水没有皮肤刺激性。
检测C：鸡胚毛细血管的刺激作用检测；进一步的，本发明对实施例1通过鸡胚绒毛尿囊膜(HET-CAM)眼刺激替代试验评价牡丹花水的刺激性/腐蚀性。试验时将受精鸡蛋室温静置24h，孵化9天进行试验，试验采用反应时间法，用移液枪取0.3ml受试物直接滴加在尿囊膜上，尽量覆盖CAM表面并开始计时，观察膜反应情况并记录作用5min内每种毒性效应出现的时间。根据IS分值按表4对牡丹花水的刺激性进行分类，试验结果表明牡丹花水IS均为0，无眼刺激性。
表4 反应时间法刺激评分标准
刺激评分 刺激性分类
IS＜1 无刺激性
1≤IS＜5 轻刺激性
5≤IS＜9 中度刺激性
9≤IS 强刺激性/腐蚀性
表5 牡丹花水的鸡胚绒毛尿囊膜眼刺激试验结果
检测D：对豚鼠的刺激性试验检测
按照《化妆品安全技术规范》(2015版)，进行多次(急性)皮肤刺激试验，测试牡丹花水对豚鼠皮肤的刺激性，具体结果见下表。
表6牡丹花水的皮肤刺激性试验结果
注：实验动物为豚鼠，雌雄各半，体重250～300g。
根据上表结果，发现本发明实施例中的牡丹花水没有引起刺激性反应，涂抹七天后未出现出红斑、水肿等不良反应。
检测E：1.抗氧化作用
(1)自由基清除能力：通过测定牡丹花水的DPPH自由基清除能力来评价其抗氧化活性。DPPH(二苯代苦味肼基自由基)是一种稳定的自由基，在有机溶剂中呈紫色，于517nm处有强吸收。自由基清除剂可使DPPH的单电子重新分配而使其颜色变浅，在最大吸收波长处的吸光度变小，利用比色法可以检测自由基清除情况，从而评价样品的抗氧化能力。
为测定牡丹花水的DPPH自由基清除能力，将待测的牡丹花水样品(实施例1跟实施例4、5)，分别取30μl加入96孔板，对照孔加入等体积的阳性参照物维生素E溶液或去离子水，每个实施例的样品/阳性参照品设置3复孔，再加入150μlDPPH工作液，避光反应30min后迅速用MD酶标仪测定517nm处的吸光度，带入公式中计算按下面下公式计算清除率，具体结果见下表。
清除率(％)＝[1-(Ai/A0)]×100％
式中Ai：30μl样品+150μlDPPH溶液
A0：30μl去离子水+150μlDPPH溶液
表7 自由基清除能力
项目 DPPH自由基清除率
实施例1 93.6％
实施例4 82.3％
实施例5 77.00％
由上表数据可知，实施例1其清除DPPH的清除率能够达到93.6％，而实施例4、5清除DPPH的清除率相对较弱，为80％左右，表明本发明实施例1牡丹花水具有更为显著的直接清除氧自由基的能力。
(2)抗氧化应激活性：以UVB辐射的HaCaT角质形成细胞作为皮肤氧化应激的细胞模型评价牡丹花水的抗氧化作用。
该测试是为了验证牡丹花水抗氧化应激作用，具体步骤：将HaCaT细胞以接种于6孔细胞培养板中，待细胞生长至50％-60％左右的单细胞层融合密度时，分别加入牡丹花水(实施例1、实施例4)预处理24h，之后将细胞培养基更换为PBS缓冲液，放入紫外线辐射仪中进行细胞照射，设置UVB辐射剂量为1J/cm2。紫外线照射完毕后，每孔加入1mL含有按3000：1稀释的DCFH-DA氧自由基荧光探针工作液，置细胞培养箱孵育20min，进行荧光标记，之后收集细胞，使用流式细胞仪检测各实验组细胞的荧光强度。发现实施例1牡丹花水能够显著降低UVB辐射的HaCaT角质形成细胞内的活性氧自由基(ROS)水平，具体见图3，各实验组细胞的荧光强度，反映细胞内的ROS水平，图中数据为Mean±SD(n＝3)，*p<0.05vs.UVB alone组。
根据图3显示，UVB照射能够诱导HaCaT细胞中ROS水平明显升高，而实施例中牡丹花水能不同程度的降低细胞内的ROS水平，其中，以实施例1更为显著。图3结果说明，实施例1牡丹花水能够最为显著得抑制UVB诱导的ROS的生成，缓解皮肤细胞的氧化应激反应，具有很好的抗氧化作用，对紫外线辐射引起的皮肤细胞氧化损伤具有防护作用，效果远优于实施例4。
2.屏障修复作用
为检测牡丹花水对紫外线辐射损伤的角质形成细胞分化的调控作用，将HaCaT角质形成细胞接种于6孔板中培养，待细胞生长至40％左右的单细胞层融合密度时，加入提前配好的氯化钙溶液，使Ca2+浓度达到10mM，细胞在该条件下继续培养24h，然后牡丹花水继续培养12h后，放入紫外线辐射仪中，设置UVB辐射剂量为200mJ/cm2，进行细胞照射，紫外线辐射完毕后继续培养12h，然后收集细胞，采用western blotting法检测了HaCaT细胞内分化标志基因Filaggrin和Involucrin的表达水平，结果如图4所示，实施例牡丹花水能有效提高UVB辐射损伤的HaCaT角质形成细胞分化标志基因Filaggrin和Involucrin的表达水平，其中，以实施例1表现最为显著(图4)，表明实施例1牡丹花水能够有效促进受到紫外线辐射损伤的表皮细胞的分化，这提示牡丹花水对于受紫外线辐射损伤的皮肤屏障的修复具有一定程度的促进作用；也表明发酵菌是一个影响牡丹花水在皮肤屏障修复上表现的重要影响因素。
1.3实施例6提取物不同
(1)以新鲜的牡丹鲜花为原料，洗净去杂后于-80℃进行保存3小时；
(2)取出后再研磨成浆，在28℃、频率100KHz下超声处理60s；
(3)向(2)超声处理后的浆液中依次加入4℃左右苹果汁，及西洋参提取物、积雪草提取物、甘草提取物、维生素C，低速搅拌10min，获得混合物；
其中，苹果汁添加量是牡丹浆液体积的6％、西洋参提取物的添加量是牡丹浆液体积的2％、积雪草提取物是牡丹浆液体积的4％、甘草提取物是牡丹浆液体积的1％、维生素C是牡丹浆液体积的1％；
(4)将(3)中的混合物在650bar压力下均质10min，并加入复合微生物菌剂(约氏乳杆菌：红酵母：双歧杆菌＝5:3:0.5)在在37℃下发酵16h获得发酵液；
(5)将(4)中发酵液进行过滤、6000rmp转速下离心40min，获得牡丹花水。
实施例7提取物不同
(1)以新鲜的牡丹鲜花为原料，洗净去杂后于-80℃进行保存3小时；
(2)取出后再研磨成浆，在28℃、频率100KHz下超声处理60s；
(3)向(2)超声处理后的浆液中依次加入4℃左右柠檬汁，及洋甘菊提取物、迷迭香提取物，低速搅拌10min，获得混合物；
其中，柠檬汁添加量是牡丹浆液体积的6％、洋甘菊提取物的添加量是牡丹浆液体积的2％、迷迭香提取物是牡丹浆液体积的5％；
(4)将(3)中的混合物在650bar压力下均质10min，并加入复合微生物菌剂(约氏乳杆菌：红酵母：双歧杆菌＝5:3:0.5)在在37℃下发酵16h获得发酵液；
(5)将(4)中发酵液进行过滤、6000rmp转速下离心40min，获得牡丹花水。
1.4保湿功效检测
为测试提取物对于牡丹花水保湿功效作用，对“1.3实施例”进行了相关评价；具体是通过测试受试人群使用化妆品前后皮肤角质层水分含量的变化，以评价化妆品的保湿功效。
本试验共招募了32位健康志愿受试者，其中2位男性，30位女性，平均年龄为40.9±12.6周岁。采用德国CK公司多功能皮肤测试仪MPA580的皮肤水分含量测试探头(Corneometer CM 825)进行角质层水分含量的测试，测试部位为手臂，在温度20-22℃、湿度40-60％的环境中平衡20分钟后进行皮肤测量，分别于使用样品前、使用样品后1h、3h、6h测量测试部位的皮肤角质层水分含量。受试者使用牡丹花水液后测试区域皮肤角质层水分含量变化趋势见图5-7(依次是实施例1、实施例7、实施例8)。
由图可知，实施例1牡丹花水使用后1小时、3小时、6小时的皮肤保湿率分别达40.96％、17.02％、18.94％；实施例7牡丹花水使用后1小时、3小时、6小时的皮肤保湿率分别达34.55％、14.83％、15.39％；实施例8牡丹花水使用后1小时、3小时、6小时的皮肤保湿率分别达37.68％、15.28％、17.93％；实施例1得保湿率在3个时间点上均明显高于实施例7、8保湿率，表明实施例1牡丹花水具有更优的；进一步的，也说明了实施例1中，“苹果汁、洋甘菊提取物、马兰头提取物”相互搭配作为添加辅料时，达到的整体保湿效果更佳；优于其他提取物搭配时保湿效果。
1.5美白功效检测
本发明进一步的对实施例1进行了酪氨酸酶活性测试，检测牡丹花水对酪氨酸酶活性的抑制作用，结果发现牡丹花水在1.5625-100μl/mL剂量范围内能够以剂量依赖的方式抑制酪氨酸酶活性，具体见图8；半数抑制浓度(IC50)为4.66‰，表明牡丹花水具有抑制酪氨酸酶和进而抑制黑色素生成的活性，因而具有很好的美白功效。

Claims (7)

1.牡丹花水在制备护肤品中的应用，其特征在于，所述的牡丹花水是利用复合微生物发酵工艺制备获得的；
所述牡丹花水是由如下方法制备获得的：
（1）以新鲜的牡丹鲜花为原料，洗净去杂后于-80~-60℃进行保存3-4小时；
（2）取出后再研磨成浆，并进行超声处理；
（3）向（2）超声处理后的浆液中依次加入牡丹浆液体积3-15%且温度为2-6℃的苹果汁、牡丹浆液体积2-6%的洋甘菊提取物、牡丹浆液体积5-10%的马兰头提取物，低速搅拌10-15min，获得混合物；
（4）将（3）中的混合物进行高压均质，并加入复合微生物菌剂进行发酵，获得发酵液；
（5）将（4）中发酵液进行过滤、离心获得牡丹花水；
所述复合微生物为：约氏乳杆菌、红酵母、双歧杆菌，其添加配比为3-5:2-6:0.5-1。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，步骤（2）中，所述的超声处理的条件为：在25-45℃、频率80-200KHz下超声处理60-150s。
3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，步骤（4）中，所述的高压均质的条件为：均质压力500-650bar，时间5-20min。
4.如权利要求1所述的应用，其特征在于，步骤（4）中，所述的发酵条件为：在36-40℃下发酵12-24h。
5.如权利要求1所述的应用，其特征在于，步骤（5）中，离心条件为：4000-8000rmp转速下离心30-60min。
6.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述牡丹花水在制备具有抗氧化、美白、保湿功效化妆品中的应用。
7.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述牡丹花水在制备具有促进受紫外线辐射损伤的皮肤屏障修复功效化妆品中的应用。
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KR20210060801A (ko) * 2019-11-19 2021-05-27 주식회사 사임당화장품 식물 복합 발효물을 유효성분으로 포함하는 항노화 화장료 조성물
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