CN103849633A

CN103849633A - 一种莱茵衣藻中改变油脂含量的调控基因及其编码蛋白与应用

Info

Publication number: CN103849633A
Application number: CN201410112849.8A
Authority: CN
Inventors: 邓晓东; 费小雯; 李兴涵
Original assignee: Institute of Tropical Bioscience and Biotechnology Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences
Current assignee: Institute of Tropical Bioscience and Biotechnology Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences
Priority date: 2014-03-25
Filing date: 2014-03-25
Publication date: 2014-06-11

Abstract

本发明公开了一种莱茵衣藻三酰甘油代谢调控基因及其编码蛋白与应用，所述调控基因为下列核苷酸序列中的任意一种：1）序列表中SEQIDNO:1DNA序列；2）序列表中SEQIDNO:2蛋白质序列的多核苷酸；3）与序列表中SEQIDNO:1限定的DNA序列具有90%以上同源性且编码相同功能蛋白质的DNA序列。该编码蛋白为具有序列表中SEQIDNO:2氨基酸残基序列的蛋白质。用该调控基因来调控莱茵衣藻的中性脂含量，或者用该调控基因来培育高油脂含量藻株。对其研究发现该基因过量表达可以提高莱茵衣藻中性油脂含量，而通过RNAi干涉将该基因敲除可显著减低莱茵衣藻中性脂含量。

Description

一种莱茵衣藻中改变油脂含量的调控基因及其编码蛋白与应用

技术领域

本发明涉及一种能改变微藻中性脂含量的基因，具体是一种莱茵衣藻中改变油脂含量的调控基因及其编码蛋白与应用。

背景技术

生物柴油属于可再生能源,是优质的石油柴油代用品。许多微藻具备大量生产中性脂(三酰甘油)的能力,是很好的生物柴油来源,但目前人类对于多数微藻的生长方式、代谢途径等相关的研究并不多。

发明内容

本发明的目的在于提供一种莱茵衣藻中改变油脂含量的调控基因及其编码蛋白与应用。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种莱茵衣藻中改变油脂含量的调控基因，该调控基因为下列核苷酸序列中的任意一种：

1）序列表中SEQ ID NO:1 DNA序列；

2）序列表中SEQ ID NO:2蛋白质序列的多核苷酸；

3）与序列表中SEQ ID NO:1限定的DNA序列具有90%以上同源性且编码相同功能蛋白质的DNA序列。

该调控基因来源于莱茵衣藻，命名为CrUBC2。

所述的莱茵衣藻中改变油脂含量的调控基因的编码蛋白，该编码蛋白为具有序列表中SEQ ID NO:2氨基酸残基序列的蛋白质。

该编码蛋白在phytozome莱茵衣藻数据库名称为Cre05.g247600，是由139个氨基酸残基组成的蛋白质。

所述的编码蛋白的衍生蛋白质，其特征在于，将序列表中SEQ ID NO:2的氨基酸残基序列经过一个或多个氨基酸残基的取代、缺失或添加，且具有与SEQ ID NO:2的氨基酸残基序列相同活性的由SEQ ID NO:2衍生的蛋白质。

所述的莱茵衣藻中改变油脂含量的调控基因的应用，用该调控基因来调控莱茵衣藻的中性脂含量，或者用该调控基因来培育高油脂含量藻株。

采用植物表达的载体，将该调控基因转入莱茵衣藻，莱茵衣藻内的中性脂含量升高；采用RNAi干涉的方法，将调控基因片段转入莱茵衣藻，莱茵衣藻内的中性脂含量降低。所述中性脂包括三酰甘油。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明所提供的能提高藻类三酰甘油含量的基因名称为CrUBC2（Chlamydomonas reinhardtii ubiquitin-conjugating enzyme E2），该基因在phytozome莱茵衣藻数据库的名称为Cre05.g247600，位于chromosome_5:876169-878182区域，含5个外显子。编码ubiquitin-conjugating enzyme E2，是根据phytozome莱茵衣藻数据库上公布的 CrUBC2基因为模板设计特异性引物，扩增cDNA获得全长序列，根据该碱基序列分析，推测编码CrUBC2蛋白的序列。对其研究发现该基因过量表达可以提高莱茵衣藻中性油脂含量，而通过RNAi干涉将该基因敲除可显著减低莱茵衣藻中性脂含量。

附图说明

图1为CrUBC2的RT-PCR扩增结果（1 ：DL2000 DNA 分子量标准；M:CrUBC2扩增结果）；

图2为CrUBC2过量表达转基因藻株生物量的变化情况；

图3为CrUBC2过量表达转基因藻株中性脂含量的变化情况；

图4a为pAMBIA1302空载体转化子第六天时尼罗红染色前荧光观察图；

图4b为pAMBIA1302空载体转化子第六天时尼罗红染色后荧光观察图；

图4c为pCAMBIA-CrUBC2基因藻株第六天时尼罗红染色前荧光观察图；

图4d为pCAMBIA-CrUBC2基因藻株第六天时尼罗红染色后荧光观察图；

图5为pAMBIA1302空载体转化子、CC425和pCAMBIA-CrUBC2基因藻株 RNA表达分析图；

图6为CrUBC2 RNAi干涉转基因藻株的生物量含量变化图；

图7为CrUBC2 RNAi干涉转基因藻株的油脂含量变化图；

图8a为Maa7/XIR空载体转化子尼罗红染色前荧光观察图；

图8b为Maa7/XIR空载体转化子尼罗红染色后荧光观察图；

图8c为CrUBC2 RNAi干涉转基因藻株尼罗红染色前荧光观察图；

图8d为CrUBC2 RNAi干涉转基因藻株尼罗红染色后荧光观察图；

图9为Maa7/XIR空载体转化子、CC425及CrUBC2 RNAi干涉转基因藻株RNA表达分析图。

具体实施方式

以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。Marker均购自大连宝生物公司。下述实施例中的%，如无特殊说明，均为质量百分含量。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。

实施例1

CrUBC2的克隆，包括以下步骤：

1)莱茵衣藻总RNA的提取

莱茵衣藻（ Chlamydomonas reinhardtii ）藻株CC425，培养于24℃光照培养箱，100μmol m^-2sec^-1白光，全光照条件下，待生长至对数生长期，取藻液50mL，10000 r/min 离心1min收集藻体，液氮速冻后碾磨成粉末，按照Trizol的方法提取总RNA；

2)引物设计

根据phytozome莱茵衣藻数据库中公布的CrUBC2基因为模板设计特异性引物，设计如下特异性引物：

CrUBC2全长扩增引物	引物序列(5’→3’)
		正向引物	AGAAAGGCCCAGAATGTCG
反向引物	GCTCAGAACATGGTGCCT

3)cDNA的合成

按照宝生物工程(大连)有限公司提供的Takara的试剂盒，使RNA反转录成cDNA；

4）制备PCR Master混合物

试剂	每管加入量（μL）
		cDNA第一链	1
10×PCR缓冲液	5
		dNTP Mix（10mM）	1
正向引物	1
		反向引物	1
PCR级水	40.5
		LA Taq酶	0.5

5)进行PCR扩增：

94℃ 5min；

35个循环：94℃ 1min，55℃ 1min，72℃ 1min；

72℃ 10min；

取8μL进行1%琼脂糖凝胶电泳分析，结果如图1所示，-20℃保存；

6)PCR产物的纯化和胶回收

按照上海华舜生物工程有限公司的小量胶回收试剂盒回收DNA片断，PCR产物连接到pGEM-T Vector(promega公司)，转化大肠杆菌DH5α，挑选阳性克隆测序。

实施例2

过量表达CrUBC2基因的转化子获得，包括以下步骤：

1)植物表达载体的构建

设计带有NcoI和SpeI酶切位点的引物：

正向引物：5’- CATGCCATGGTGTCGGTGCCTGTGCCGC-3’；

反向引物：5’- GGACTAGTCTACGAAATAGCTCAGAACATGGTGCCT -3’；

PCR扩增CrUBC2基因全长；然后和双酶切修饰后的CrUBC2产物和pCAMBIA1302的NcoI和SpeI双酶切载体大片段进行连接；连接产物转化大肠杆菌DH5α，PCR 鉴定阳性克隆，提取质粒进行双酶切鉴定；提取正确的重组表达质粒pCAMBIA1302-CrUBC2，用于转化；

2)过量表达CrUBC2莱茵衣藻转化子的获得（玻璃珠法）

莱茵衣藻（藻株CC425，购自中国科学院水生生物研究所），培养于24℃光照培养箱，100μmol m^-2sec^-1白光，全光照条件下，待生长至藻细胞数为2×107个/mL；2000rpm离心5min，收集藻细胞；用500ul TAP 液体培养基轻轻重悬沉淀，使细胞浓度达到2×10⁸cell/mL；速转到15mL离心管中，加入400mg 高温干燥灭菌的玻璃珠，然后加入100μl 20%PEG8000和1μg表达载体；在涡旋振荡器上直立精确振荡20秒；将藻细胞转移至盛有5mL TAP 液体培养基的50mL 无菌离心管中；22℃，150rpm，昏暗光线复苏8h；2000rpm，离心5min，收集藻细胞，调节藻细胞数目到1×106个/mL；转移藻液至含1.5mM L-色氨酸、5μg/mL L-paromomycin 的TAP固体选择培养基上，缓慢倾斜旋转，使藻液分布均匀；关闭光源，吹干，24℃光照培养箱，100μmol m-2sec-1白光，全光照条件下培养至形成单个藻落；实时荧光定量PCR确定CrUBC2基因的过量表达：RNA提取参照实施例1，实时荧光定量PCR参照TaKaRa公司的SYBR? Premix Ex Taq?试剂操作说明进行，结果如图5所示；

3)对照莱茵衣藻的获得

用pCMBIA1302代替pCMBIA1302-CrUBC2，用玻璃珠法转化莱茵衣藻（藻株CC425，购自中国科学院水生研究所），方法同步骤2），得到转空载体的藻株。

实施例3

CrUBC2过量表达藻株的生理表型观察，包括以下步骤：

1）转pCMBIA1302空载体组、CrUBC2过量表达组、原始藻株CC425，各选100个藻株，培养于24℃ 光照培养箱，100μmol m^-2sec^-1白光，全光照条件下，待生长至对数生长期，2000rpm，离心5min，双蒸水重悬，按10％接种量接种到不含抗生素的HSM-N液体培养基（2g/LNaAc·3H₂O +1.44g/L K₂HPO₄+0.72g/L KH₂PO₄+0.5467g/L NaCl +20 mg/LMgSO₄·7H₂O +10mg/LCaCl₂·2H₂O+1ml/L Trace-N），连续震荡培养6天，每24h测量以下生理值；

2）生物量统计：按照 Harris于1989年描述的方法使用血球计数板计数，并计算出生物量。结果显示过量表达CrUBC2基因的藻株与非转基因藻株CC425和转空载体藻株生物量无明显差异，如图2所示；

3）中性脂含量测定：使用酸水解法测定中性脂含量：藻液低温冷冻干燥成藻粉，各取0.1g藻粉，加入无菌蒸馏水，混匀后加入10ml盐酸，80 ℃水浴25 min，加入10ml 95%乙醇，混匀；冷却后加入10ml乙醚，加盖振摇1min，之后开盖放出气体。4 000 rpm离心3 min，取上清液移至恒重的锥形瓶中，重复洗涤离心管中的残渣，然后将上清液转移至原先的锥形瓶中。将锥形瓶置于水浴上蒸干，再转移至100 ℃烘箱中干燥2 h，取出冷却后称重。另取藻液，经终浓度为10μg/mL 尼罗红染色10min后，使用荧光显微镜在激发光为480nm，发散光为560nm-600nm下进行观察及拍照，也可见过量表达CrUBC2基因中性脂含量明显下降，如图3所示。

实施例4

Cr UBC2基因RNAi干涉表达载体构建及转基因藻株的获得，包括以下步骤：

1）RNAi干涉表达载体的构建

设计特异性引物：

正向引物：5’-AGAAAGGCCCAGAATGTCG-3’；反向引物：5’-GCTCAGAACATGGTGCCTTC-3’；

扩增CrUBC2基因435bp片段用于干涉研究；正义片段分别用HindIII和BamHII双酶切扩增的PCR产物和RNAi中间载体T282，连接，转化，鉴定，测序确定正确的阳性克隆；反义片段分别用XbaI和SalI双酶切PCR产物和已连接正义片段的T282载体连接，转化，鉴定获得CrUBC2反向重复序列插入的中间载体T282-CrUBC2；EcoRI酶切Maa7/XIR载体并去磷酸化与同样经EcoRI酶切的T282-CrUBC2载体连接，转化，鉴定得到用于RNA干涉的最终载体Maa7/XIR- CrUBC2；

2) CrUBC2 RNAi干涉表达转基因藻株的获得

采用玻璃珠法转化莱茵衣藻（藻株CC425，购自中国科学院水生研究所），具体步骤参见实施例2中步骤2）；

3)对照莱茵衣藻的获得

用Maa7/XIR代替Maa7/XIR-CrBbox用电转化法转化莱茵衣藻（藻株CC425，购自中国科学院水生研究所），方法同步骤2），得到转空载体的藻株。

实施例5

CrUBC2 RNAi干涉表达转基因藻株的生理表型观察，包括以下步骤：

CrUBC2 RNAi干涉表达组，待长出单个藻落后，接种到含1.5mM L-色氨酸、5μM 5-FI的TAP固体选择培养基上，转Maa7/XIR空载体组直接接种到含1.5mM L-色氨酸、5μg/mL paromomycin的TAP固体选择培养基上，培养于24℃ 光照培养箱，100μmol m^-2sec^-1白光，全光照条件下，待第三次长出单个藻落，挑取阳性转化子，接种到HSM液体培养基（2g/LNaAc·3H₂O +1.44g/L K₂HPO₄+0.72g/L KH₂PO₄+0.5g/L NH₄Cl +20 mg/LMgSO₄·7H₂O +10mg/LCaCl₂·2H₂O+1ml/L Trace）中，连续震荡培养9天；每24h测量以下生理值。

生物量和中性脂含量的测定参照实施例3，结果CrUBC2 RNAi干涉表达的藻株生物量明显降低，如图6所示；中性脂含量呈升高趋势，如图7所示；RNAi-CrUBC2干涉表达组的中性脂含量下降也可以通过尼罗红染色后照相明显可见，如图8a-8d所示；其mRNA表达水平参照实施例2，CrUBC2基因的RNA表达明显被抑制，如图9所示。

对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。不应将权利要求中的任何附图标记视为限制所涉及的权利要求。

此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。

序列表

<110>中国热带农业科学院热带生物技术研究所

<120>莱茵衣藻中改变油脂含量的调控基因及其编码蛋白与应用

<160> 3

<170> PatentIn Version 2.1

<210> 1

<211>1273

<212> mRNA

<213>莱茵衣藻（Chlamydomonas reinhardtii）

<220>

<221> CDS

<222> (351)...(771)

<400> 1

1 GC

3 TAA TCA AAA TAG CTA AGC CCG TGC GCG CGG TGG CAC GTC AAA GGG AGC CTT CGG CCC AGA

63 ATT CAC GAG ACG CGC GCG CGG CGA AGC GCT CTG GTT GAG GAG TGG TAA GCT CGC TGC CCG

123 GTA TGA GCC TTT GTA TGT TTG GTG CAT TAA TGC TTT GGT TTC GCT GCG TGG CGC GGC TGA

183 ACG TTG GAT TGA AGC GTG CAG GGA TGG ACT TCG CGC TCG ACT CTC CTT CTG CTC GCA GCT

243 AGC TTT GTT TCG ACG TTA CTC GCA CAC TGC GCC ATA TAC AAA GGC GTA GCC CTG TGA TTT

303 ATC GCG CGA GAA GCA ATC TAG GCG TAG CAG CTT TAA GAA AGG CCC AGA ATG TCG GTG CCT

1 M S V P

363 GTG CCG CGC AGC TTC AGG CTG CTG GAG GAG CTG GAT CGC GGC GAG AAG GGC TTT GGT GAT

5 V P R S F R L L E E L D R G E K G F G D

423 GGA ACT GTT TCC TAC GGC ATG GAG GAC CCA GAC GAC ATT CAT ATG CGC AAC TGG ACG GGG

25 G T V S Y G M E D P D D I H M R N W T G

483 ACA ATT ATT GGG CCC GCC AAC ACC GTC CAC GAC CAG CGC ATT TAC TCG CTC AAG ATC CAC

45 T I I G P A N T V H D Q R I Y S L K I H

443 TGC GAC CTC AGC TAC CCT GAG CAG GCC CCG AAG CTT TGG TTC AAG TCT CGT GTG AAT ATG

65 C D L S Y P E Q A P K L W F K S R V N M

503 GGC TGC GTC GAT CAG CGG GAC GGA CGC ATT GAC CCC ACC AAG TTC CCC ATG CTG GGC AAC

85 G C V D Q R D G R I D P T K F P M L G N

563 TGG AAG CGT GAA TAT ACG CTG GAG CAG CTG CTG ACG GAG ATC CGC CGG GAC ATG TCC TCG

105 W K R E Y T L E Q L L T E I R R D M S S

623 CCG CTG AAC CGG AAG GCC CCG CAG CCG CCC GAA GGC ACC ATG TTC TGA GCT ATT TCG TAG

125 P L N R K A P Q P P E G T M F

683 CTC CCT GGC GCG TCA GCG GCG GCT ACA TAG CAT AAC AGC TGG ATA ATC AGG TCG CAG ACG

743 GTG AGA GGG GCG TTG CCT GGG GCG GCC AAG CTC GCG GGG GTC ACG AGG CCC AGG CTC GGG

803 GCC ACG GGC AGA GCA CAC GCG GCG TTG GAA CGT CGG CAG CTT GGA TAG GCT TTT GTG GGG

863 GCC CGT ATC TAG GTG GCC TCA TCG CAA TGA GTG TGT GAA GCA TTA GAG GCG GGC AAA TGC

923 GAA CGG ACA GGG GGG CAG CGG GCA GCG CAA GGT GTG TAC CGG AAG GCA AGC CGT AGG CAG

1083 GAT TAG CTT GGA AGG CCA GTC AGT GAC TCC TGG ACC ATT AGG CAA CAT ATA CAC AAC CAC

1143 GAT GAC GAT ATG TTA GGG GGC TAA CGC CTC GGA CAC ACG TGA CTG GAC CCT GAC TGA TCT

1203 GAC TGA TGA GAG GAC ACA CGC AAA CCT GTC ACT GTG GCA TCA AGG TAC TCT GTA ACA GTA

1063 TGA ATG CCC TG

<210> 2

<211> 410

<212> PRT

<213>莱茵衣藻（Chlamydomonas reinhardtii）

<400> 2

1 MSVVRSRDRG KGGDGTVSYG MDDDIHMRNW TGTIIGANTV HDRIYSKIHC DSYAKWKSRV NMGCVDRDGR

71 IDTKMGNWKR YTTIRRDMSS NRKAGTM

<210> 3

<211> 3421

<212> DNA

<213>莱茵衣藻（Chlamydomonas reinhardtii）

<220>

<400> 3

1 GACGTTACTC GCACACTGCG CCATATACAA AGGCGTAGCC CTGTGATTTA TCGCGCGAGA

61 GCAATCTAGG CGTAGCAGCT TTAAGAAAGG CCCAGAATGT CGGTGCCTGT GCCGCGCAGC

121 TTCAGGCTGC TGGAGGAGCT GGATCGCGGC GAGAAGGGCT TTGGTGATGG AACTGTTTCC

181 TACGGCATGG AGGACCCAGA CGACATTCATA TGCGCAACTG GACGGGGACA ATTATTGGGC

241 CCGCCAACAC CGTCCACGAC CAGCGCATTT ACTCGCTCAA GATCCACTGC GACCTCAGCT

301 ACCCTGAGCA GGCCCCGAAG CTTTGGTTCA AGTCTCGTGT GAATATGGGC TGCGTCGATC

361 AGCGGGACGG ACGCATTGAC CCCACCAAGT TCCCCATGCT GGGCAACTGG AAGCGTGAAT

421 ATACGCTGGA GCAGCTGCTG ACGGAGATCC GCCGGGACAT GTCCTCGCCG CTGAACCGGA

481 AGGCCCCGCA GCCGCCCGAA GGCACCATGT TCTGAGCTAT TTCGTAGCTCC CTGGCGCGTC

541 AGCGGCGGCT ACATAGCATA ACAGCTGGAT AATCAGGTCG CAGACGGTGA GAGGGGCGTT

601 GCCTGGGGCG GCCAAGCTCG CGGGGGTCAC GAGGCCCAGG CTCGGGGCCA CGGGCAGAGC

661 ACACGCGGCG TTGGAACGTC GGCAGCTTGG ATAGGCTTTTG TGGGGGCCCG TATCTAGGTG

721 GCCTCATCGC AATGAGTGTG TGAAGCATTA GAGGCGGGCA AATGCGAACG GACAGGGGGG

781 CAGCGGGCAG CGCAAGGTGT GTACCGGAAG GCAAGCCGTA GGCAGGATTA GCTTGGAAGG

841 CCAGTCAGTG ACTCCTGGAC CATTAGGCAA CATATACACA ACCACGATGA CGATATGTTAG

901 GGGGCTAACG CCTCGGACAC ACGTGACTGG ACCCTGACTG ATCTGACTGA TGAGAGGACA

961 CACGCAAACC TGTCACTGTG GCATCAAGGT ACTCTGTAAC AGTATGAATG CCCTGCGTGC

1021 CTGTGCACTC GTCAGCGGGA CGGGTGGAAC CTGATTTGCGT AGGCAGAATG ACCAGCAATG

1061 CGGTGCACCT CGGGGGCGGA TGGAGGCTTT TGTGTGCAGC TGGTGGTGCG AGAGGCGGAT

1121 GCCGGTGATG GCGGTTTGGT GTAGCCCGGG CGGTAGTGTG GTGGTGGCGC GATATTGCGC

1181 ATGACCGGGT GAGAGGGCTG TCGTGTTCACA GGGGAAAGGA CATGTGCTGT CTCGCAGTGC

1241 TGGTGGTGGC GAGCGCTGCG TGTGGGGGGA CGGGCTCGAG GGTGGGCTAC GTGGCGGAAG 1301 GTGTGTGAGA TGCGATCTGG GCCGGGTGTT GGCATGAGTG GCGGTTGCGC CTGTTTGTGT

1361 GCCGCGTTTA TGATGTTACT TGGCAGTGCG CGGCGCCAGG ACTGCGGATG CTTGTGCGGG 1421 TGCGGGTGCT TGTGGCTGTG GCCGTGCGGG GTCGCGGTGG AGAAAGTACG GCAAGTGCGCG

1481 AGTAAGAGAG GGAGGCAGGT GTGTGTGTGTA TGCTCTCAAG TCGGACTCTG GTGGAGTTTG

1541 GCTGCCAGGG GGTGAAGCGC GCGGATGCCT AGGCGATGGC GATAGGCAAT GGCATCAGGC

1601 AGCAGGACGT GAAACAGCAA ACCCCGTCAG GCGTCAGCAG AGGGTGGGCC GCGTGGGTGG

1661 ATCGGGACCA GCAGCTGAAC CCGCTGCAGG ACAGCGGACA GACACGCAGC CTCTCCGACT

1721 AGGAACGCTG TGACATGCAG CAAGTCCTTG ACCGCAAATG GGCCAAGCAC GCCCGGGCCC

1781 TTTGTCGGGA ACAGAGCCCA CCGGCCTTCC TTGGAACGGT TATGGACAGG CTGCGTAAGC

1821 CGCAAGGCAG CGCCAGGCGC CAGTACAGGT GCGTGGGGCC TTGGCTGGGG CGCGCAGCCG

1881 GACCCGTCGC AGAGCAGCAT AAAGCATCAC CGGTAACGGC AGCCCTGAGC AGCCTCTCCA

1941 TGATGGAGTG TAACAGTCAG GACTA

Claims

1.一种莱茵衣藻中改变油脂含量的调控基因，其特征在于，该调控基因为下列核苷酸序列中的任意一种：

序列表中SEQ ID NO:1 DNA序列；

序列表中SEQ ID NO:2蛋白质序列的多核苷酸；

与序列表中SEQ ID NO:1限定的DNA序列具有90%以上同源性且编码相同功能蛋白质的DNA序列。

2.根据权利要求1所述的莱茵衣藻中改变油脂含量的调控基因，其特征在于，该调控基因来源于莱茵衣藻，命名为CrUBC2。

3.一种如权利要求1或2所述的莱茵衣藻中改变油脂含量的调控基因的编码蛋白，其特征在于，该编码蛋白为具有序列表中SEQ ID NO:2氨基酸残基序列的蛋白质。

4.根据权利要求3所述的编码蛋白，其特征在于，该编码蛋白在phytozome莱茵衣藻数据库名称为Cre05.g247600，是由139个氨基酸残基组成的蛋白质。

5.根据权利要求3所述的编码蛋白的衍生蛋白质，其特征在于，将序列表中SEQ ID NO:2的氨基酸残基序列经过一个或多个氨基酸残基的取代、缺失或添加，且具有与SEQ ID NO:2的氨基酸残基序列相同活性的由SEQ ID NO:2衍生的蛋白质。

6.一种如权利要求1-2任一所述的莱茵衣藻中改变油脂含量的调控基因的应用，其特征在于，用该调控基因来调控莱茵衣藻的中性脂含量，或者用该调控基因来培育高油脂含量藻株。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，采用植物表达的载体，将该调控基因转入莱茵衣藻，莱茵衣藻内的中性脂含量升高；采用RNAi干涉的方法，将调控基因片段转入莱茵衣藻，莱茵衣藻内的中性脂含量降低。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述中性脂包括三酰甘油。