CN103849600A - 一种适用于培养nk细胞的无血清培养基 - Google Patents
一种适用于培养nk细胞的无血清培养基 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103849600A CN103849600A CN201410118900.6A CN201410118900A CN103849600A CN 103849600 A CN103849600 A CN 103849600A CN 201410118900 A CN201410118900 A CN 201410118900A CN 103849600 A CN103849600 A CN 103849600A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- cell
- component
- serum
- hydrochloride
- cells
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000012258 culturing Methods 0.000 title abstract description 6
- 239000004017 serum-free culture medium Substances 0.000 title abstract 5
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 claims abstract description 72
- 239000000306 component Substances 0.000 claims abstract description 20
- 101000623895 Bos taurus Mucin-15 Proteins 0.000 claims abstract description 14
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 claims description 23
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 8
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 claims description 8
- AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N Riboflavin Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2N=C2C1=NC(=O)NC2=O AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N 0.000 claims description 8
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 8
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000012533 medium component Substances 0.000 claims description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 6
- ZUFQODAHGAHPFQ-UHFFFAOYSA-N pyridoxine hydrochloride Chemical compound Cl.CC1=NC=C(CO)C(CO)=C1O ZUFQODAHGAHPFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims description 6
- VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N uroanthelone Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N 0.000 claims description 6
- 101000917858 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-A Proteins 0.000 claims description 5
- 101000917839 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Proteins 0.000 claims description 5
- 102100029185 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Human genes 0.000 claims description 5
- 108010025020 Nerve Growth Factor Proteins 0.000 claims description 5
- 102000015336 Nerve Growth Factor Human genes 0.000 claims description 5
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 claims description 5
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 claims description 5
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 claims description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 5
- 210000002394 ovarian follicle Anatomy 0.000 claims description 5
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 claims description 5
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 claims description 4
- QZNNVYOVQUKYSC-JEDNCBNOSA-N (2s)-2-amino-3-(1h-imidazol-5-yl)propanoic acid;hydron;chloride Chemical compound Cl.OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 QZNNVYOVQUKYSC-JEDNCBNOSA-N 0.000 claims description 4
- AGBQKNBQESQNJD-SSDOTTSWSA-N (R)-lipoic acid Chemical compound OC(=O)CCCC[C@@H]1CCSS1 AGBQKNBQESQNJD-SSDOTTSWSA-N 0.000 claims description 4
- KWTQSFXGGICVPE-UHFFFAOYSA-N 2-amino-5-(diaminomethylideneamino)pentanoic acid;hydron;chloride Chemical compound Cl.OC(=O)C(N)CCCN=C(N)N KWTQSFXGGICVPE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000001763 2-hydroxyethyl(trimethyl)azanium Substances 0.000 claims description 4
- ODHCTXKNWHHXJC-VKHMYHEASA-N 5-oxo-L-proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-VKHMYHEASA-N 0.000 claims description 4
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 4
- 235000019743 Choline chloride Nutrition 0.000 claims description 4
- AUNGANRZJHBGPY-UHFFFAOYSA-N D-Lyxoflavin Natural products OCC(O)C(O)C(O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2N=C2C1=NC(=O)NC2=O AUNGANRZJHBGPY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 4
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims description 4
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 claims description 4
- FFEARJCKVFRZRR-UHFFFAOYSA-N L-Methionine Natural products CSCCC(N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 4
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 4
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 claims description 4
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 4
- BVHLGVCQOALMSV-JEDNCBNOSA-N L-lysine hydrochloride Chemical compound Cl.NCCCC[C@H](N)C(O)=O BVHLGVCQOALMSV-JEDNCBNOSA-N 0.000 claims description 4
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 4
- 229930195722 L-methionine Natural products 0.000 claims description 4
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims description 4
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 4
- OYHQOLUKZRVURQ-HZJYTTRNSA-N Linoleic acid Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/CCCCCCCC(O)=O OYHQOLUKZRVURQ-HZJYTTRNSA-N 0.000 claims description 4
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 claims description 4
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229930003756 Vitamin B7 Natural products 0.000 claims description 4
- DPDMMXDBJGCCQC-UHFFFAOYSA-N [Na].[Cl] Chemical compound [Na].[Cl] DPDMMXDBJGCCQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- AGBQKNBQESQNJD-UHFFFAOYSA-N alpha-Lipoic acid Natural products OC(=O)CCCCC1CCSS1 AGBQKNBQESQNJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 claims description 4
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 claims description 4
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- XXWCODXIQWIHQN-UHFFFAOYSA-N butane-1,4-diamine;hydron;dichloride Chemical compound Cl.Cl.NCCCCN XXWCODXIQWIHQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 claims description 4
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 229960003178 choline chloride Drugs 0.000 claims description 4
- SGMZJAMFUVOLNK-UHFFFAOYSA-M choline chloride Chemical compound [Cl-].C[N+](C)(C)CCO SGMZJAMFUVOLNK-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 4
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 4
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 claims description 4
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 claims description 4
- 229960004232 linoleic acid Drugs 0.000 claims description 4
- 235000019136 lipoic acid Nutrition 0.000 claims description 4
- 229960004452 methionine Drugs 0.000 claims description 4
- 235000019171 pyridoxine hydrochloride Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000011764 pyridoxine hydrochloride Substances 0.000 claims description 4
- 229960004172 pyridoxine hydrochloride Drugs 0.000 claims description 4
- 229960002477 riboflavin Drugs 0.000 claims description 4
- 235000019192 riboflavin Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000002151 riboflavin Substances 0.000 claims description 4
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000011734 sodium Substances 0.000 claims description 4
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 4
- DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M thiamine hydrochloride Chemical compound Cl.[Cl-].CC1=C(CCO)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 4
- 229960000344 thiamine hydrochloride Drugs 0.000 claims description 4
- 235000019190 thiamine hydrochloride Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000011747 thiamine hydrochloride Substances 0.000 claims description 4
- 229960002663 thioctic acid Drugs 0.000 claims description 4
- 229960002898 threonine Drugs 0.000 claims description 4
- 239000004474 valine Substances 0.000 claims description 4
- 235000011912 vitamin B7 Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000011735 vitamin B7 Substances 0.000 claims description 4
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 claims description 3
- 238000005374 membrane filtration Methods 0.000 claims description 3
- 229940053128 nerve growth factor Drugs 0.000 claims description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 3
- LXNHXLLTXMVWPM-UHFFFAOYSA-N Vitamin B6 Natural products CC1=NC=C(CO)C(CO)=C1O LXNHXLLTXMVWPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 claims description 2
- RADKZDMFGJYCBB-UHFFFAOYSA-N pyridoxal hydrochloride Natural products CC1=NC=C(CO)C(C=O)=C1O RADKZDMFGJYCBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 235000019158 vitamin B6 Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000011726 vitamin B6 Substances 0.000 claims description 2
- 229940011671 vitamin b6 Drugs 0.000 claims description 2
- 210000004475 gamma-delta t lymphocyte Anatomy 0.000 claims 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 abstract description 24
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 abstract description 23
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 abstract description 18
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 abstract description 9
- 238000002659 cell therapy Methods 0.000 abstract description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 abstract description 3
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 abstract description 3
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 abstract description 2
- 238000000034 method Methods 0.000 description 12
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 11
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 8
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 5
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 4
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- PFNFFQXMRSDOHW-UHFFFAOYSA-N spermine Chemical compound NCCCNCCCCNCCCN PFNFFQXMRSDOHW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N Progesterone Chemical compound C1CC2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H](C(=O)C)[C@@]1(C)CC2 RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N 0.000 description 2
- MUMGGOZAMZWBJJ-DYKIIFRCSA-N Testostosterone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 MUMGGOZAMZWBJJ-DYKIIFRCSA-N 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N hydrocortisone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000001915 nurse cell Anatomy 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 2
- ATHGHQPFGPMSJY-UHFFFAOYSA-N spermidine Chemical compound NCCCCNCCCN ATHGHQPFGPMSJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940063675 spermine Drugs 0.000 description 2
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 2
- VOXZDWNPVJITMN-ZBRFXRBCSA-N 17β-estradiol Chemical compound OC1=CC=C2[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 VOXZDWNPVJITMN-ZBRFXRBCSA-N 0.000 description 1
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 108010039471 Fas Ligand Protein Proteins 0.000 description 1
- 108050007372 Fibroblast Growth Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000018233 Fibroblast Growth Factor Human genes 0.000 description 1
- 102000001398 Granzyme Human genes 0.000 description 1
- 108060005986 Granzyme Proteins 0.000 description 1
- 101100369992 Homo sapiens TNFSF10 gene Proteins 0.000 description 1
- 101000611183 Homo sapiens Tumor necrosis factor Proteins 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 108090000723 Insulin-Like Growth Factor I Proteins 0.000 description 1
- 241000204031 Mycoplasma Species 0.000 description 1
- 102100037209 Peroxisomal N(1)-acetyl-spermine/spermidine oxidase Human genes 0.000 description 1
- 102000013275 Somatomedins Human genes 0.000 description 1
- 108700012411 TNFSF10 Proteins 0.000 description 1
- 102100040247 Tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 1
- 102100024598 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 10 Human genes 0.000 description 1
- 102100031988 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 6 Human genes 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000003470 adrenal cortex hormone Substances 0.000 description 1
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002924 anti-infective effect Effects 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000001772 blood platelet Anatomy 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 229960003957 dexamethasone Drugs 0.000 description 1
- UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N dexamethasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N 0.000 description 1
- 238000007599 discharging Methods 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 229930182833 estradiol Natural products 0.000 description 1
- 229960005309 estradiol Drugs 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 229940126864 fibroblast growth factor Drugs 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 1
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229960000890 hydrocortisone Drugs 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- -1 inorganics Chemical class 0.000 description 1
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 102000006240 membrane receptors Human genes 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 1
- 229920000768 polyamine Polymers 0.000 description 1
- 108010089000 polyamine oxidase Proteins 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 239000000186 progesterone Substances 0.000 description 1
- 229960003387 progesterone Drugs 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 229940063673 spermidine Drugs 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000003270 steroid hormone Substances 0.000 description 1
- 229960003604 testosterone Drugs 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明公开了一种适用于培养NK细胞的无血清培养基，由基础培养基组份I、NK细胞特异性培养组份II以及水组成。经实验证明，采用本发明的适用于培养NK细胞的无血清培养基培养NK细胞，能够得到数量更多，纯度更高且杀伤效果更好的NK细胞。本发明的适用于培养NK细胞的无血清培养基，具有以下优点：1）避免了由在细胞培养过程中使用的动物血清中动物成分对接受细胞治疗患者带来的风险以及动物血清中不确定的成分对细胞培养的结果造成的不确定影响；2）大大提高了NK细胞得率；3）增加了NK细胞培养的终密度，从而降低了细胞培养的成本。
Description
技术领域
本发明涉及一种适用于培养NK细胞的无血清培养基。
背景技术
自然杀伤细胞（NK细胞）是机体天然免疫的主要细胞。无需抗原预先作用就可直接杀伤肿瘤和病毒感染的靶细胞，在机体免疫监视和早期抗感染免疫过程中起重要作用。NK细胞与肿瘤靶细胞密切接触后，可通过释放穿孔素颗粒酶，表达TRAIL、FasL和分泌TNF-α产生细胞杀伤作用。目前，NK细胞已经广泛运用于临床进行肿瘤患者的治疗。
目前临床上获得NK细胞的方法一般从外周血单个核细胞进行扩增，培养过程中一般需要加入动物血清来提高细胞培养的效果，动物血清能够提供细胞生长所需的基本营养物质：氨基酸、维生素、无机物、脂类物质、核酸衍生物等，还可以提供激素和各种生长因子：胰岛素、肾上腺皮质激素（氢化可的松、地塞米松）、类固醇激素（雌二醇、睾酮、孕酮）、成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、血小板生长因子等。动物血清中这些物质的存在为临床上获得安全有效的细胞产品提供了坚强的保证。然而，由于动物血清中含有动物成分，若其用于临床细胞治疗体系中，可能会导致一些潜在的风险。主要由于动物血清成分复杂，虽含许多对细胞有利成分，也含有对细胞有害的成分：1）动物血清含一些对细胞产生毒性的物质，如多胺氧化酶，能与来自高度繁殖细胞的多胺反应（如精胺、亚精胺）形成有细胞毒性作用的聚精胺，补体、抗体、细菌毒素等都会影响细胞生长，甚至造成细胞死亡；2）动物个体不同，血清产地、批号不同，每批质量差异甚大，其成分不能保持一致；3）取材中可能带入支原体、病毒，对细胞产生潜在影响，可能导致实验失败或实验结果不可靠性；4）大规模生产中，血清来源越来越困难，价格昂贵，是构成动物细胞培养对生产成本的主要部分之一。
除安全性因素外，NK细胞由于较难在体外大量的增殖，目前在临床上应用的NK细胞培养的方案主要有使用滋养细胞系方法（如使用K562细胞作为滋养细胞系），该方法得到NK细胞纯度较高，但是因为其使用了转基因的方法且K562细胞本身作为一个肿瘤细胞，在临床安全性方面存在质疑。而不使用滋养层细胞其细胞扩增效果及细胞得率均不甚理想，在此背景下，急需一种安全，有效的NK细胞培养的方法来提高临床NK细胞培养的安全性及有效性。发明内容
针对上述现有技术，本发明提供了一种适用于培养NK细胞的无血清培养基，所含成分均为化学限定成分，不含任何动物血清成分，从而避免了使用动物血清可能导致的安全性的问题，且成本较低。
本发明是通过以下技术方案实现的：
一种适用于培养NK细胞的无血清培养基，由基础培养基组份I、NK细胞特异性培养组份II以及水组成，其中，所述基础培养基组份I是由以下浓度的组分组成的：
无水氯化钙28～33.82mg/L，i-肌醇13～19mg/L，L-酪氨酸4～5.9mg/L，L-蛋氨酸3～5mg/L，L-缬氨酸6～13.7mg/L，L-苯丙氨酸4～7mg/L，D-葡萄糖1789～1802mg/L，盐酸吡哆醇（维生素B6）0.055～0.066mg/L，次黄嘌呤3～5mg/L，L-丝氨酸7～15mg/L，氯化钠7200～7599mg/L，核黄素0.022～0.048mg/L，亚油酸0.077～0.094mg/L，L-苏氨酸10～13.9mg/L，磷酸氢二钠120～149mg/L，盐酸硫胺0.22～0.34mg/L，硫辛酸0.12～0.29mg/L，L-天门冬酰胺7～18.01mg/L，L-精氨酸盐酸盐198～213mg/L，L-天门冬氨酸6～19.3mg/L，1，4－丁二胺二盐酸盐0.11～0.19mg/L，L-半胱氨酸盐酸盐22～39.12mg/L，L-谷氨酰胺113～149mg/L，L-谷氨酸2～17.7mg/L，丙酮酸钠100～110mg/L，氯化胆碱12～13.99mg/L，甘氨酸6～8mg/L，L-亮氨酸11～13.4mg/L，维生素H0.004～0.008mg/L，L-赖氨酸盐酸盐34～39.5mg/L，L-组氨酸盐酸盐9～25mg/L，L-脯氨酸25～34.5mg/L；如表1所示。
所述NK细胞特异性培养组份II是由以下浓度的组分组成的：
表皮生长因子1～100mg/L，神经生长因子1～10mg/L，IL-2120～100mg/L，成纤维素细胞生长因子1～100mg/L，IL-1850～150mg/L，卵泡刺激因子50～500mg/L，IL-1250～500mg/L，CD16单抗20～100mg/L，CD3单抗50～500mg/L，CD125单抗50～500mg/L。本发明所用表皮生长因子、神经生长因子、IL-21、成纤维素细胞生长因子、IL-18、卵泡刺激因子、IL-12均采购自R&D公司，CD16单抗以及CD3单抗采购自德国美天妮公司，CD125单抗采购自Prepotech公司。
表1
表2
优选的，所述基础培养基组份I是由以下浓度的组分组成的：无水氯化钙29mg/L，i-肌醇15mg/L，L-酪氨酸4.5mg/L，L-蛋氨酸4mg/L，L-缬氨酸13.5mg/L，L-苯丙氨酸6mg/L，D-葡萄糖1800mg/L，盐酸吡哆醇0.055mg/L，次黄嘌呤5mg/L，L-丝氨酸8mg/L，氯化钠7500mg/L，核黄素0.028mg/L，亚油酸0.079mg/L，L-苏氨酸13mg/L，磷酸氢二钠135mg/L，盐酸硫胺0.25mg/L，硫辛酸0.19mg/L，L-天门冬酰胺14.4mg/L，L-精氨酸盐酸盐200mg/L，L-天门冬氨酸13.5mg/L，1，4－丁二胺二盐酸盐0.18mg/L，L-半胱氨酸盐酸盐29mg/L，L-谷氨酰胺124mg/L，L-谷氨酸13.9mg/L，丙酮酸钠105mg/L，氯化胆碱12.9mg/L，甘氨酸7mg/L，L-亮氨酸13.4mg/L，维生素H0.005mg/L，L-赖氨酸盐酸盐37.5mg/L，L-组氨酸盐酸盐14mg/L，L-脯氨酸25.6mg/L；
所述NK细胞特异性培养组份II是由以下浓度的组分组成的：
表皮生长因子50mg/L，CD16单抗70mg/L，神经生长因子10mg/L，IL-2160mg/L，成纤维素细胞生长因子50mg/L，IL-1850mg/L，卵泡刺激因子150mg/L，IL-12100mg/L，CD3单抗100mg/L，CD125单抗100mg/L，如表3所示。
表3
所述适用于培养NK细胞的无血清培养基的制备方法，步骤如下：
（1）取组份I的各原料，混合混匀，在60℃真空下干燥15小时，备用；取组份II的各原料，在30℃真空下干燥18小时，混合混匀，备用；
（2）将上述干燥后的组份I和组份II混合，针磨3个小时，过30目筛，得固态粉末，生产过程温度控制在20～25℃，湿度控制在15～20%，氮气压力控制在150～300psi；使用时，加水，混匀，0.22μm滤膜过滤，即得适用于培养NK细胞的无血清培养基。
本发明的适用于培养NK细胞的无血清培养基，组份II中包含了一些能够与NK细胞表面受体特异性结合且能够促进NK细胞增殖与分化的细胞因子如IL-12，IL-18及IL-21等，经实验证明，采用本发明的适用于培养NK细胞的无血清培养基培养NK细胞，能够得到数量更多，纯度更高且杀伤效果更好的NK细胞。本发明的适用于培养NK细胞的无血清培养基，具有以下优点：1）避免了由在细胞培养过程中使用的动物血清中动物成分对接受细胞治疗患者带来的风险以及动物血清中不确定的成分对细胞培养的结果造成的不确定影响；2）大大提高了NK细胞得率；3）增加了NK细胞培养的终密度，从而降低了细胞培养的成本。
附图说明
图1：使用本发明的无血清培养基培养NK细胞瑞姬氏染色图。
图2：使用本发明的无血清培养基与其他培养基NK细胞增殖倍数对比，其中，2为本发明的无血清培养基，1、3、4为对照培养基，1为X-VIVO15培养基（Lonza公司），3为AIM-V培养基（lifeTechnology公司），4号为cellgro培养基（Cellgenix公司）。
图3：使用本发明的无血清培养基与其他培养基NK细胞培养密度对比，其中，M1为本发明的无血清培养基，M2、M3、M4为对照培养基。
图4：使用本发明的无血清培养基NK细胞培养流式结果，其中，左上象限反应是CD3-CD56+NK细胞含量。
图5：使用本发明的无血清培养基与其他培养基NK细胞培养杀瘤实验结果对比，其中，M1为本发明的无血清培养基，M2、M3、M4为对照培养基。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的说明。
实施例1配制适用于培养NK细胞的无血清培养基
配制培养基100L，按照表3计算得出，配置100L NK细胞无血清培养液所需要的各组分的质量见表4。
表4
制备方法为：
（1）取组份I的各原料，混合混匀，在60℃真空下干燥15小时，备用；取组份II的各原料，在30℃真空下干燥18小时，混合混匀，备用；
（2）将上述干燥后的组份I和组份II混合，针磨3个小时，过30目筛，得固态粉末，生产过程温度控制在20～25℃，湿度控制在15～20%，氮气压力控制在150～300psi；向固态粉末中加水，混匀，0.2μm滤膜过滤，即得适用于培养NK细胞的无血清培养基。
实施例2使用NK细胞无血清培养基培养NK细胞并与其他3种培养基比较培养效果
步骤如下：
（1）机采至少1×109个患者的单个核细胞（PBMC）（血细胞分离机型号COM.TEC，厂家Fresenius Kabi，设定程序为Leukocyte-Aphersis中的autoMNC）；
（2）将采集的血样转入50ml离心管，离心400g，10min；取上清血浆冻存，余下血液用PBS稀释；
（3）将30ml稀释血液缓慢加在15ml的Ficoll-Hypaque上，减速过程设定为brake off后，离心900g，20min；
（4）离心结束后，将平口巴氏滴管轻轻插入到单个核细胞层，沿着管壁小心准确的吸取该层细胞并转移到另一支新的50ml离心管中，每管加生理盐水50ml，轻轻吹匀细胞，离心洗涤2次（第一次，室温1300r/min，7min；第二次，室温1200r/min，10min），除去血小板和分离介质，最后一次离心前计数；
（5）弃去上清，用4种不同NK培养基（这4种不同的培养基，其中一种是本发明的培养基，其它3种培养基见上述对图2的说明）以1×106/ml的浓度重悬，并铺入T175培养瓶，50ml/瓶，置于37℃，5%CO2培养箱中；
（6）隔天补液，加入IL-21000U/L；
（7）第0、10、15、20天对NK细胞计数，染色分析。
结果：由NK细胞无血清培养液获得的NK细胞，胞浆丰富，含有较多颗粒样物质，核仁较大，符合NK细胞细胞形态学特征（图1），与其他三种培养基对比结果，可以得知本发明NK细胞无血清培养基培养NK细胞增殖倍数明显高于其他三种培养基（图2），此外，使用本发明NK细胞无血清培养基获得NK细胞终密度可以达到3.3*106/ml明显高于另外3种方法所获得NK细胞终密度（图3）。
综上，使用本发明NK细胞无血清培养基能够在同等条件下获得更多的细胞增殖倍数，更高的细胞培养终密度，故使用本发明NK细胞无血清培养基能够降低细胞培养成本。
实施例3NK细胞流式检测
步骤如下：
（1）将约含1x106待检细胞悬液加入对应编号的流式管，1500rpm，5min，弃去上清。
（2）加入2mL流式染色buffer，重悬细胞，1500rpm，5min，弃去上清（注意：残留的液体用纸巾吸干）。
（3）加入300μL流式染色buffer，重悬细胞，均分成三份，一份设为阴性对照（不加抗体），另外两份管分别加入荧光标记的单克隆抗体（注意根据说明书加入相应的量）。
（4）常温避光孵育30min；加入1mL流式染色buffer，1500rpm，5min，弃去上清；重复洗一遍.
（5）用300μL流式染色buffer重悬细胞，等待分析。
结果：对4种不同培养基在培养第20天获得NK细胞进行流式检测，使用本发明NK细胞无血清培养基获得NK细胞比率可以达到85.2%（图4），而使用其他3种培养方法获得NK细胞比率在27%-47%（表5），具有明显统计学差异。
表5
| 培养基类型 | 培养20天NK细胞百分比(%) |
| M1 | 85 |
| M2 | 47 |
| M3 | 35 |
| M4 | 27 |
实施例4NK细胞杀瘤活性检测
取培养的NK细胞作为效应细胞，肿瘤细胞为靶细胞，效靶比为10：1，20：1加入96孔板，另设单独效应细胞孔和单独靶细胞孔作为对照，每组设3个复孔。37℃，5%CO2孵育24小时，用MTT四甲基偶氮唑盐显色法在酶标仪上570nm处测OD值。
4种不同培养方法获得NK细胞在效靶比（E/T）为10:1或20:1情况下均有明显的杀瘤活性（图5），其杀瘤活性位于75%～90%之间，使用本发明NK细胞无血清培养基培养获得NK细胞能够作为一个有效的效应细胞用于临床。
Claims (4)
1.一种适用于培养NK细胞的无血清培养基，其特征在于：由基础培养基组份I、NK细胞特异性培养组份II以及水组成，其中，所述基础培养基组份I是由以下浓度的组分组成的：
无水氯化钙28～33.82mg/L，i-肌醇13～19mg/L，L-酪氨酸4～5.9mg/L，L-蛋氨酸3～5mg/L，L-缬氨酸6～13.7mg/L，L-苯丙氨酸4～7mg/L，D-葡萄糖1789～1802mg/L，盐酸吡哆醇（维生素B6）0.055～0.066mg/L，次黄嘌呤3～5mg/L，L-丝氨酸7～15mg/L，氯化钠7200～7599mg/L，核黄素0.022～0.048mg/L，亚油酸0.077～0.094mg/L，L-苏氨酸10～13.9mg/L，磷酸氢二钠120～149mg/L，盐酸硫胺0.22～0.34mg/L，硫辛酸0.12～0.29mg/L，L-天门冬酰胺7～18.01mg/L，L-精氨酸盐酸盐198～213mg/L，L-天门冬氨酸6～19.3mg/L，1，4－丁二胺二盐酸盐0.11～0.19mg/L，L-半胱氨酸盐酸盐22～39.12mg/L，L-谷氨酰胺113～149mg/L，L-谷氨酸2～17.7mg/L，丙酮酸钠100～110mg/L，氯化胆碱12～13.99mg/L，甘氨酸6～8mg/L，L-亮氨酸11～13.4mg/L，维生素H0.004～0.008mg/L，L-赖氨酸盐酸盐34～39.5mg/L，L-组氨酸盐酸盐9～25mg/L，L-脯氨酸25～34.5mg/L；
所述NK细胞特异性培养组份II是由以下浓度的组分组成的：
表皮生长因子1～100mg/L，CD16单抗20～100mg/L，神经生长因子1～10mg/L，IL-2120～100mg/L，成纤维素细胞生长因子1～100mg/L，IL-1850～150mg/L，卵泡刺激因子50～500mg/L，IL-1250～500mg/L，CD3单抗50～500mg/L，CD125单抗50～500mg/L。
2.根据权利要求1所述的适用于培养NK细胞的无血清培养基，其特征在于：所述基础培养基组份I是由以下浓度的组分组成的：无水氯化钙29mg/L，i-肌醇15mg/L，L-酪氨酸4.5mg/L，L-蛋氨酸4mg/L，L-缬氨酸13.5mg/L，L-苯丙氨酸6mg/L，D-葡萄糖1800mg/L，盐酸吡哆醇0.055mg/L，次黄嘌呤5mg/L，L-丝氨酸8mg/L，氯化钠7500mg/L，核黄素0.028mg/L，亚油酸0.079mg/L，L-苏氨酸13mg/L，磷酸氢二钠135mg/L，盐酸硫胺0.25mg/L，硫辛酸0.19mg/L，L-天门冬酰胺14.4mg/L，L-精氨酸盐酸盐200mg/L，L-天门冬氨酸13.5mg/L，1，4－丁二胺二盐酸盐0.18mg/L，L-半胱氨酸盐酸盐29mg/L，L-谷氨酰胺124mg/L，L-谷氨酸13.9mg/L，丙酮酸钠105mg/L，氯化胆碱12.9mg/L，甘氨酸7mg/L，L-亮氨酸13.4mg/L，维生素H0.005mg/L，L-赖氨酸盐酸盐37.5mg/L，L-组氨酸盐酸盐14mg/L，L-脯氨酸25.6mg/L；
所述NK细胞特异性培养组份II是由以下浓度的组分组成的：
表皮生长因子50mg/L，CD16单抗70mg/L，神经生长因子10mg/L，IL-2160mg/L，成纤维素细胞生长因子50mg/L，IL-1850mg/L，卵泡刺激因子150mg/L，IL-12100mg/L，CD3单抗100mg/L，CD125单抗100mg/L。
3.权利要求1或2所述的适用于培养NK细胞的无血清培养基的制备方法，其特征在于：步骤如下：
（1）取组份I的各原料，混合混匀，在60℃真空下干燥15小时，备用；取组份II的各原料，在30℃真空下干燥18小时，混合混匀，备用；
（2）将上述干燥后的组份I和组份II混合，针磨3个小时，过30目筛，得固态粉末，加水，混匀，0.2μm滤膜过滤，即得适用于培养γδT细胞的无血清培养基。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：所述步骤（2）中，针磨生产过程中，温度控制在20～25℃，湿度控制在15～20%，氮气压力控制在150～300psi。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410118900.6A CN103849600A (zh) | 2014-03-27 | 2014-03-27 | 一种适用于培养nk细胞的无血清培养基 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410118900.6A CN103849600A (zh) | 2014-03-27 | 2014-03-27 | 一种适用于培养nk细胞的无血清培养基 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN103849600A true CN103849600A (zh) | 2014-06-11 |
Family
ID=50857725
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201410118900.6A Pending CN103849600A (zh) | 2014-03-27 | 2014-03-27 | 一种适用于培养nk细胞的无血清培养基 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN103849600A (zh) |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104152412A (zh) * | 2014-08-13 | 2014-11-19 | 赛业（苏州）生物科技有限公司 | 一种适用于临床的高效扩增nk细胞的培养体系 |
| CN104152413A (zh) * | 2014-08-13 | 2014-11-19 | 赛业（苏州）生物科技有限公司 | 一种适用于临床的高效扩增nk细胞的培养体系的应用 |
| CN104450614A (zh) * | 2014-12-05 | 2015-03-25 | 上海安集协康生物技术有限公司 | 一种无动物蛋白源的免疫细胞无血清培养基及其使用方法 |
| CN104593324A (zh) * | 2014-11-28 | 2015-05-06 | 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 | 一种自然杀伤细胞的培养基及自然杀伤细胞的扩增培养方法 |
| CN104818248A (zh) * | 2015-03-25 | 2015-08-05 | 苏州佰通生物科技有限公司 | 一种免疫细胞培养基、培养方法及应用 |
| CN105462924A (zh) * | 2015-12-04 | 2016-04-06 | 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 | Nk细胞的培养方法及无血清培养基组合 |
| CN113564119A (zh) * | 2021-09-03 | 2021-10-29 | 东莞再立健生物科技有限公司 | 一种nk细胞培养基及nk细胞培养方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102978160A (zh) * | 2012-12-13 | 2013-03-20 | 上海柯莱逊生物技术有限公司 | 一种体外诱导扩增nkt细胞的方法 |
| CN102994449A (zh) * | 2012-12-13 | 2013-03-27 | 上海柯莱逊生物技术有限公司 | 一种体外扩增nk细胞的方法 |
-
2014
- 2014-03-27 CN CN201410118900.6A patent/CN103849600A/zh active Pending
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102978160A (zh) * | 2012-12-13 | 2013-03-20 | 上海柯莱逊生物技术有限公司 | 一种体外诱导扩增nkt细胞的方法 |
| CN102994449A (zh) * | 2012-12-13 | 2013-03-27 | 上海柯莱逊生物技术有限公司 | 一种体外扩增nk细胞的方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| MAILLIARD,ET AL.: "IL-18-induced CD83+CCR7+NK helper cell", 《JEM》 * |
Cited By (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104152412A (zh) * | 2014-08-13 | 2014-11-19 | 赛业（苏州）生物科技有限公司 | 一种适用于临床的高效扩增nk细胞的培养体系 |
| CN104152413A (zh) * | 2014-08-13 | 2014-11-19 | 赛业（苏州）生物科技有限公司 | 一种适用于临床的高效扩增nk细胞的培养体系的应用 |
| CN104593324A (zh) * | 2014-11-28 | 2015-05-06 | 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 | 一种自然杀伤细胞的培养基及自然杀伤细胞的扩增培养方法 |
| CN104593324B (zh) * | 2014-11-28 | 2018-04-13 | 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 | 一种自然杀伤细胞的培养基及自然杀伤细胞的扩增培养方法 |
| CN104450614A (zh) * | 2014-12-05 | 2015-03-25 | 上海安集协康生物技术有限公司 | 一种无动物蛋白源的免疫细胞无血清培养基及其使用方法 |
| CN104450614B (zh) * | 2014-12-05 | 2017-07-07 | 上海安集协康生物技术股份有限公司 | 一种无动物蛋白源的免疫细胞无血清培养基及其使用方法 |
| CN104818248A (zh) * | 2015-03-25 | 2015-08-05 | 苏州佰通生物科技有限公司 | 一种免疫细胞培养基、培养方法及应用 |
| CN105462924A (zh) * | 2015-12-04 | 2016-04-06 | 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 | Nk细胞的培养方法及无血清培养基组合 |
| CN105462924B (zh) * | 2015-12-04 | 2019-01-18 | 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 | Nk细胞的培养方法及无血清培养基组合 |
| CN113564119A (zh) * | 2021-09-03 | 2021-10-29 | 东莞再立健生物科技有限公司 | 一种nk细胞培养基及nk细胞培养方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN103849600A (zh) | 一种适用于培养nk细胞的无血清培养基 | |
| CN107922925B (zh) | 用于自然杀伤细胞扩增的方法 | |
| CN105462924B (zh) | Nk细胞的培养方法及无血清培养基组合 | |
| Sadeghi et al. | Large-scale bioreactor expansion of tumor-infiltrating lymphocytes | |
| CN101519646B (zh) | 一种cik细胞及其制备方法和细胞制剂 | |
| CN104371974B (zh) | 一种自体外周血淋巴细胞cik的培养方法 | |
| CN104357390A (zh) | 同时高效扩增cd3+cd56+cik细胞和cd3-cd56+nk细胞的方法 | |
| CN103834615A (zh) | 一种适用于培养γδT细胞的无血清培养基 | |
| CN108699529A (zh) | 用于培养含癌症干细胞(csc)的细胞群的化学成分确定的培养基 | |
| CN104894065A (zh) | 一种nk细胞培养基及nk细胞的培养方法 | |
| CN109422815A (zh) | 双特异性嵌合抗原受体c-Met/PD-1 scFv-CAR-T及其构建方法和应用 | |
| CN103436583B (zh) | 一种生产治疗性犬瘟热病毒单克隆抗体的方法、其制品及杂交瘤细胞 | |
| CN104073463A (zh) | 一种支持cho高密度悬浮培养的无血清无蛋白培养基 | |
| CN104087558A (zh) | 一种杂交瘤细胞无血清培养基 | |
| CN104152412A (zh) | 一种适用于临床的高效扩增nk细胞的培养体系 | |
| Jones et al. | Emerging challenges in cell therapy manufacturing | |
| CN103160458A (zh) | 一种适合Vero细胞生长的低血清培养基 | |
| CN107904175B (zh) | 用于免疫细胞的诱导扩增的培养箱 | |
| CN108085342A (zh) | 一种嵌合抗原受体基因修饰的t淋巴细胞的制备方法、制得的car-t细胞及其用途 | |
| CN104152413A (zh) | 一种适用于临床的高效扩增nk细胞的培养体系的应用 | |
| CN106085957A (zh) | 一种微载体三维扩增并激活自然杀伤细胞的方法 | |
| CN105779375A (zh) | 一种新型无血清培养基 | |
| CN104726400A (zh) | 人多能干细胞向生殖细胞分化的无动物源组分培养方法 | |
| CN102268407B (zh) | 一种rhIL-12工程细胞大规模无血清培养方法 | |
| CN102327609B (zh) | 一种乙型脑炎疫苗的生产方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| ASS | Succession or assignment of patent right |
Owner name: SHANGHAI CLAISON BIOTECHNOLOGY CO., LTD. Free format text: FORMER OWNER: YE YONGQING Effective date: 20140902 |
|
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| C41 | Transfer of patent application or patent right or utility model | ||
| C53 | Correction of patent of invention or patent application | ||
| CB03 | Change of inventor or designer information |
Inventor after: Ye Yongqing Inventor after: Chen Xinxi Inventor before: Ye Yongqing |
|
| COR | Change of bibliographic data |
Free format text: CORRECT: INVENTOR; FROM: YE YONGQING TO: YE YONGQING CHEN XINXI Free format text: CORRECT: ADDRESS; FROM: 350000 FUZHOU, FUJIAN PROVINCE TO: 200120 PUDONG NEW AREA, SHANGHAI |
|
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| TA01 | Transfer of patent application right |
Effective date of registration: 20140902 Address after: 200120 Shanghai city Pudong New Area college town right Li No. 1628 building 4 room 3072 Applicant after: SHANGHAI CLAISON BIOTECHNOLOGY CO.,LTD. Address before: 350000, 338 Fu Cheng garden, Hualin Road, Fujian, Fuzhou, 13 71D Applicant before: Ye Yongqing |
|
| C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20140611 |